CN102169120B

CN102169120B - 检测装置

Info

Publication number: CN102169120B
Application number: CN201010114412.XA
Authority: CN
Inventors: 黄富强; 余双; 金忠其; 赵月海; 吴银飞
Original assignee: ABON Biopharm Hangzhou Co Ltd
Current assignee: ABON Biopharm Hangzhou Co Ltd
Priority date: 2010-02-25
Filing date: 2010-02-25
Publication date: 2014-09-17
Anticipated expiration: 2030-02-25
Also published as: CN102169120A

Abstract

本发明提供一种检测装置，包括：支持液体流动的载体，在载体上包括：检测区；位于检测区域上游的标记区；所述的检测区上固定一种特异性结合分子；所述的标记区上包括特异结合被分析物的第一种特异结合分子；检测区域上的特异结合分子与样品中的被分析物竞争结合第一种特异结合分子；其中，在所述的检测区域的上游还包括一种结合被分析物质的第二种结合分子。

Description

检测装置

技术领域

本发明是关于检测装置，更具体的讲，是关于一种分析液体样品中是否存分析物质的检测装置。

背景技术

基于免疫结合原理来检测样品中被分析物的装置越来越普及，例如一些横向流动试剂条，他通常包括一个检测区域，在检测区域上包括一种特异结合分子；和一个反应试剂区域，在试剂区域上包括一种特异结合被分析物质的分子。获得检测结果，一种是通过肉眼观察检测区域上的颜色的有无或深浅来定性或定量判断样品中被分析物质的有无或数量；另一个就是通过读取设备自动读取检测区上的反应结果自动输出样品中被分析物存在是否或存在的数量。基于免疫原理的检测一般为三明志法或竞争法。在竞争法中，通常需要调节试剂条上各个区上试剂的量或选取合适的特异结合分子对等方法来满足产品性能的要求。在众多的产品设计要求中，样品中的被分析物质大于检测阀值(CUT-OFF)的时候，获得的检测结果为准确阳性；相反，获得的检测结果为准确阴性也是一个重要设计要求之一。一个常规的做法就是选取检测阀值附近的两个值来检验产品是否很好的符合要求；例如，选取(1+50％)和(1-50％)的检测阀值作为参考标准浓度。希望在(1+50％)的检测阀值的时候获得的检测结果为准确阳性，在(1-50％)的检测阀值的时候获得的检测结果为准确阴性。通常，在这两个参考标准浓度下，希望检测装置获得检测结果的值之间的差异越大越好。特别地，当用机器读取设备来自动读取检测区上的反应结果的时候，这样的检测试剂条显得更为重要。这就需要地现有的基于免疫竞争法原理的试剂条进行提高和改进。

发明内容

本发明提供一种检测装置，包括：支持液体流动的载体，在载体上包括：检测区；位于检测区域上游的标记区；所述的检测区上固定一种特异性结合分子；所述的标记区上包括特异结合被分析物的第一种特异结合分子；检测区域上的结合分子与样品中的被分析物竞争结合第一种特异结合分子；其中，在所述的检测区域的上游包括一种结合被分析物质的第二种结合分子。

在一些优选的方式中，第一种特异结合分子和第二种特异结合分子能被液体移动。更优选的，所述的第一种特异结合分子和第二种特异结合分子为被分析物的抗体或抗体片段。或者，第一种特异结合分子和第二种特异结合分子为相同的抗体或相同的抗体片段。

在另一些优选的方式中，载体还可以包括一个样品区域，该样品区域位于标记区域的上游；同时，第二种特异结合分子位于样品区域上。

在一些具体的实施方式中，第二种结合被分析物质的分子可以位于标记区域的上游，例如在样品应用区上；或者，也可以与标记区域处于同一个位置；或者，还可以在检测区域上游的其他位置。

另外，载体还可以包括硝酸纤维素膜，检测区域位于该膜上。

另外，所述的标记区域上还可以包括标记物质，该标记物质与第一种特异结合分子连接。

另外，所述的标记物质还可以包括颜色颗粒或水溶性染料。

另外，所述检测区上的特异性结合分子还可以包括被分析物质的类似物质。

另外，所述的被分析物还可以包括滥用药物。

另外，在所有的实施方式中，当被分析物质处于的数量为a的时候，被第二种结合分子结合的被分析物质的数量为b，当被分析物质的数量为c的时候，被第二种结合分子结合的被分析物质的数量为d，其中，让(c-d)与(a-b)的比值大于c与a的比值，其中a小于d。

另外，在所有的实施方式中，当被分析物质在样品中的浓度为A的时候，被第二种结合抗体结合的被分析物质数量为B，剩余的被分析物质为A-B；当被分析物质为浓度C的时候，被第二种结合抗体结合的被分析物质数量为D，剩余的被分析物质为C-D；其中(C-D)÷(A-B)＞C÷A，其中，C＞A。

另外，在所有的实施方式中，当被分析物质在样品中的浓度为A的时候，被第二种结合抗体结合后的被分析物质的浓度为B；当被分析物质为浓度C的时候，被第二种结合抗体结合后的被分析物质的浓度为D，其中(D-C)与(A-B)的比值大于＞C与A的比值，其中，C＞A

有益效果

可以明显提高检测结果的准确性，在检测不同浓度的被分析物质的时候，可以加大检测的范围，让检测的梯度增加，提高检测的准确性。特别的，当用机器读取设备来自动读取检测区上的反应结果的时候，这样的检测装置获得检测结果更加准确和可靠。

附图说明

图1为本发明的一个具体实施方式。在检测装置中，包括一个单一的载体100，在100上包括检测区域105，在检测区域105上包括一种固定地特异性的结合分子101，和一个标记区域106，在106上包括带有标记物质126的特异结合被分析物的第一种特异结合分子116；在标记区域的上游包括一种结合被分析物的第二种特异结合分子102，其中被分析物质与检测区域上的特异结合分子竞争结合标记区域上的第一种特异结合分子。在进行检测的时候，把液体样品施加到载体100上，让其从标记区域的上游流过，并经过标记区域然后到达检测区域，如果液体样品中存在被分析物质，一部分被分析物质被第二种特异结合分子结合，然后剩余的被分析物质与标记区域上的第一中特异结合分子结合，并一同到达检测区域。在检测区域上，被分析物质与检测区域上的特异结合分子竞争结合标记区域上的第一种特异结合分子。

图2为标记区域上第一种被分析物质的特异结合分子116被标记物质126标记后的结构示意图。标记物质可以为颜色颗粒，例如金颗粒或乳胶颗粒，也可以为磁性粒子，标记物质还可以为水溶解的染料。当标记物质为颗粒物质的时候，在这些颗粒物质上可以标记上特异结合被分析物质的分子116，该分子可以是抗体或抗体片段，也可以是单克隆抗体或多克隆抗体。

图3描绘了本发明的另一个优选的具体实施方式。图3A为试剂条结构的立体结构示意图，图3B为试剂条结构的俯视结构示意图。在检测装置中，构成载体的材料不是单一的材料。构成样品接受垫12的载体材料为玻璃纤维，在样品垫上处理有特异结合样品中药物滥用物质的第二抗体；构成标记垫的材料为聚脂膜16，在标记垫上处理有被乳胶颗粒标记的第一抗体，该第一抗体可以特异结合被样品中的药物滥用物质；构成检测垫15的材料为硝酸纤维素膜，在该膜上固定了药物滥用物质的类似物质，在膜上的形状为线条状检测线条11，和构成吸水垫17的滤纸，他们首尾相连，让液体样品能够从样品垫18流到吸水垫17上。

附图标记说明：

载体100；特异结合分子101，标记区106，样品施加垫18；标记垫16；检测垫15；检测线条11，吸水垫17；第一种特异结合被分析物质的分子116，标记物质126；第二种结合被分析物质的分子102。

具体实施方式

下面对本发明涉及的结构或这些所使用的技术术语做进一步的说明。

检测

检测表示化验或测试一种物质或材料是否存在，比如，但并不限于此，化学物质、有机化合物、无机化合物、新陈代谢产物、药物或者药物代谢物、有机组织或有机组织的代谢物、核酸、蛋白质或聚合物。另外，检测表示测试物质或材料的数量。进一步说，化验还表示免疫检测，化学检测、酶检测等。

检测装置

本发明的检测装置可以被用来测试样品中的被分析物质。特别地，本发明的装置可以利用竞争法来测试样品中是否存在被分析物质，或者存在的数量，例如，横向流动试剂条。样品或被分析物质都可以是本发明描述的任何被分析物质和样品。在一些具体实施方式中，样品为唾液或尿液，被分析物质为药物滥用。

各种分析技术都可以被用来测试样品中是否存在被分析物质或存在的数量，例如被分析物质可以通过标记物质的结合，与被分析物质发生化学反应，光与被分析物质之间的反应，电化学测试，或者他们任意组合。特别的，在竞争结合分析中，可以利用一个既特异结合被分析物质的特异结合分子，有可以特异结合被分析物质的类似物质的特异结合分子，同时被分析物质的类似物质和被分析物质竞争结合该特异结合分子。该特异结合分子可以为抗体或抗体片段。

载体

在一些具体方式中，检测装置包括支持液体流动的载体。支持液体流动的载体是指液体可以在载体上从一个区流动到另一个区。在一个具体的方式中，液体可以从标记区域流到检测区，处理在标记区域上的试剂可以被液体移动到检测区域上。一方面，这种液体的流动可以是载体本身材质的不同而让液体主动的被移动。在一个具体方案中，装置包含一种吸水材料，提供了支持液体流动的载体材料。“载体材料”是指支持液体流动和运输的一种材料。在一个具体方案中，载体材料是一种吸水材料。液体流过本装置是借助于毛细管运动作用实现的。在不同的具体方案中，载体材料可以是单一材料构成的条状物(图1)，也可以是由多种在液体中相互作用的吸水材料组成，如图3所示，载体包括玻璃纤维组成的样品应用垫12、聚脂材料组成的标记垫16、硝酸纤维膜组成的检测垫15和滤纸组成的吸水垫17，在检测垫15上固定一种特异结合分子116。”吸水的”材料是指那些可以稳定地吸收水分并使水分在其中通过毛细管运动作用运输的物质。吸水材料的例子包括硝化纤维，滤纸，玻璃纤维，聚酯和其它合适的物质。同时，这种载体材料还包括只提供一个或几个单独的毛细管的载体，液体通过这些单独的毛细管作用进行移动。另一个方面，这种液体的流动也包括通过机械或外力的作用进行被动移动，例如当液体被施加在载体上时，例如由塑料，玻璃等非吸水材料组成的载体，让载体通过外力倾斜，液体在重力的作用下从一个区移动到另一个区。在一个优选的方式中，处理在载体上的试剂以干的状态存在，当液体被施加到在载体上的时候，载体被液体湿润。

“上游”、“下游”指的是沿着液体流动方向来划分的，上游是位于液体流动方向之上，下游位于液体流动方向之下，上游和下游是一个相对的概念，液体可以从上游位置流到下游位置。

第二种结合被分析物质的分子

只要把样品中被分析物质的数量在样品到达检测区域前可以减少到一定水平的任何结合被分析物质的分子都可以被运用到本发明中。

在一些优选的方式中，为了让测试装置检测含有不同浓度的被分析物质的样品的时候获得比较大的差异，特别是在检测阀值的附近或上下获得更大的检测差异，这样更容易区分真阳性或真阴性标本。例如当某种被分析物质在样品中的检测阀值100纳克/毫升，希望检测装置在被分析物浓度大于100纳克/毫升的时候为阳性或者强阳性，而小于100纳克/毫升的时候为阴性或强阴性。这样可以很好的区分被分析物质在样品中的浓度，获得更为准确的检测结果。特别的，在利用竞争法进行免疫检测一些药物滥用物质的时候，利用本发明的装置可以让检测结果更为准确。

在一些具体的实施方式中，被分析物质为药物滥用物质，检测区域上固定一种和药物滥用物质类似的物质，标记区上处理结合被分析物质的第一种抗体，在检测区的上游处理第二种结合被分析物质的抗体。这样，在用该装置进行检测的时候，当被分析物质在样品中的含量为低数值A的时候，被第二种结合抗体结合的被分析物质数量为B，剩余的被分析物质为A-B；当被分析物质的含量为高数值C的时候，被第二种结合抗体结合的被分析物质数量为D，剩余的被分析物质为C-D；其中让C-D与A-B的比值大于C与A的比值，即(C-D)÷(A-B)＞C÷A。这样可以让检测装置检测两种不同浓度的被分析物质的检测结果之间差的绝对值增加。当然，还可以是，让A-B的值为零或者无限靠近零；同时/或者让C-D的值始终不等于零。

例如，假定施加在检测装置的样品都为1毫升的时候，当被分析物质的浓度为150毫克/毫升的时候，被分析物质被第二种结合抗体结合的数量为120毫克/毫升；当被分析物质为450毫克/毫升的时候，被分析物质被第二种结合抗体结合的数量至少大于或等于120毫克/毫升，可以为120，150，250或者300毫克/毫升。如果结合的数量为120，高浓度的样品中被分析物质就剩余为330毫克/毫升；这样，间接让被检测的被分析物质的浓度区间范围增加(开始的浓度比值为450/150＝3；施加了第二抗体的时候，被分析物质的浓度的比值就为330/30＝11)，这样获得的检测结果的差异也就更加显著，从而更好的体现了检测的准确性。这在我们本发明附上的实验中得到具体的证明，下面进行详细的阐述。

在另外一些具体的实施方式中，低浓度的被分析物质的浓度A小于被分析物质的检测阀值，高浓度的被分析物质的浓度C大于被分析物质的检测阀值。

在一些具体的实施方式中，第二种结合被分析物质的分子可以位于标记区域的上游，例如在样品应用区上；也可以与标记区域处于同一个位置，还可以在检测区域上游的其他位置。

第二种结合被分析物质的分子可以为特异结合被分析物质的分子102。特异结合被分析物质的分子102可以为抗体或抗体片段，他们可以特异结合样品中的被分析物质。除了以上方式外，第二种结合被分析物质的分子可以不是那些特异结合被分析物质的分子，而是一些非特异结合被分析物质的分子。另外，处理在标记区域上上游的第二种结合被分析物质的分子可以直接结合被分析物质，也可以间接结合被分析物质。

在一个具体的方式中，检测装置还可以包括一个样品应用区，该区可能包括一种缓冲液以溶解样品，也可能仅仅是一个载体上的加入样品的部位，但是也可能包含进行试验的其它试剂。因此样品应用区也成了反应试剂区。进行试验时液体样品使用较方便，但是它也可能在试验条上变干，只能加水、缓冲液和其它试剂以溶解样品开始试验。样品本身可能是液体样品，也可能是被溶解的或者被制备成液体状的固体样品。样品应用区也可以包括样品应用垫18，在检测的时候，把液体样品施加到样品应用垫18上，液体样品从样品垫流到标记垫上，然后和标记垫上的试剂，例如被标记的第一种结合被分析物质的抗体，一起流到检测垫上，最后可以达到吸水垫上。

在一个具体的实施方式中，样品垫上包括第二种特异结合被分析物质的结合分子102，该结合分子被处理在样品垫上，当液体样品被施加在样品应用区上的后，样品溶液可以带动结合分子102向下游的标记区域移动。把第二结合分子处理在样品垫上的具体方式为本领域一般技术人员所知晓。通常可以把该结合分子配置成溶液，然后把溶液喷洒，或把样品垫浸在溶液中；然后在一定温度下烘干样品垫备用。

另外，把没有被标记的结合被分析物质的分子(第二结合分子)与带有标记物质的特异结合被分析物质的分子(第一特异结合分子)可以处理在同一个标记区域上。例如，可以先准备好被标记有标记物质的特异结合被分析物质的第一抗体或抗体片段；然后再把标记好的溶液与含有一定数量的“自由”(不被标记物质标记的第二结合分子)第一特异结合被分析物质抗体或抗体片段混合，最后把混合溶液处理在标记区域上或标记垫上。在这种处理方式中，第二结合被分析物质的分子不一定位于标记区域的上游，而是与标记区域处于同一个位置。

另外，第二结合分子和第一特异结合分子可以为相同的特异结合被分析物质的分子，也可以是不相同的特异结合被分析物质的分子，只是不相同的是，第一种特异结合分子被标记物质标记，而第二中特异结合分子不被标记物质标记而为“自由”状态。

标记区域

包含在标记区域中的试剂是可以移动的。在一个具体的实施例子中，一些试剂能够附带在标记物质上，并与样品中的目标被分析物结合，形成带标记的被分析物。样品应用区和/或标记区域也可能包含特殊试验中需要的溶解样品和调节PH值的缓冲液。在一个具体方案中，标记区域包含第一种特异性的结合分子(例如：一种抗体或抗体片断)和标记物质相连接。标记物质可以是任何合适的标记，例如金溶胶、荧光染料或者水溶性染料。特异性的结合分子能够特异性地结合目标被分析物的一个或者多个抗原决定基，从而标记被分析物。

检测区域上包括一种特异结合分子，当样品中含有被分析物时，被分析物质与检测区域上的特异结合分子竞争结合标记区域上的特异结合分子，如果被分析物质的含量超过预先设置的检测最低标准(Cut-off)，检测区域上的特异性结合分子不携带有标记区的标记物质，则在检测区域上不出现标记物质，表示阳性结果。当样品中不含有被分析物质的时候，标记区域上的特异结合分子被检测区域上的特异结合分子结合，在检测区域上就积累出现标记物质，表示阴性结果。被分析物的特异性的结合分子是指和被分析物相结合并且不能和样品中的其它任何分子牢固结合的结合分子。被分析物的特异性的结合分子也可以和表明样品中被分析物的存在或者与被分析物的存在相关联的分子相结合。牢固结合是指结合达到改变试验结果或者使试验结果不明显的程度。在一些具体方案中，特异性的结合分子可能是一种抗体或者一种抗体片段(例如，一种抗体的Fab区)，一种抗原，一种结合配体的受体或者受体的片段，或者生物素-链霉菌抗生物素蛋白结合对的一个成分或者其它类型的结合对。

“标记垫”是指载体上含有可以结合样品中可能存在的被分析物的物质的部位。因此一个标记区就是一个标记垫。“标记”可以是产生可检测信号的任何合适的标记物质。例如，标记可以是可溶性颗粒，荧光颗粒，化学发光颗粒，金属或者合金(例如，胶体金)，或者囊，特别是包含可见染料的脂质体。疏水溶胶也是有用的，疏水的有机染料或者色素在水中不可溶或者只有很有限的一小部分可溶。标记物质还可以是聚合体颗粒，例如有色的聚苯乙烯颗粒(例如，球状的)。其它有用的颗粒状的标记包括铁蛋白，藻红蛋白，藻胆素-蛋白，沉淀的或者可溶性的金属或者合金，真菌，海藻，或者细菌的色素或衍生物，例如细菌的叶绿素或者其它的植物原料。在某些具体方案中，标记是有色颗粒，例如右旋糖苷颗粒。

在其它的具体方案中，标记可能是被分析物的一种带有标记物质的的特异性结合分子(例如，一种抗体)。例如，在一个具体方案中，目标被分析物是尿液样品中的COC，结合COC的是带有金溶胶标记的第一抗体，在检测区域上固定有COC的类似物质，即有带有BSA的COC复合物质：BSA-COC，在标记区域的上游处理有特异结合COC的第二抗体。当样品被施加在载体上后，样品中的COC被第二抗体结合，让样品中的自由COC含量下降，随着液体流动到标记区域，剩余的自由COC与带有金溶胶标记的第一抗体结合；随着液体流动到检测区域，检测区域上的COC类似物质与被分析物质竞争结合标记的第一抗体。除此之外，第一特异结合分子可以结合被分析物的一个部分或者一个抗体表位，而第二特异结合分子可以结合被分析物的另一个部分或另一个抗体表位。第一特异结合分子和第二特异结合分子分别结合被分析物质上的两个部门或两个抗体表位不相同。当然，第二结合分子和第一特异结合分子可以为相同的特异结合被分析物质的抗体，也可以是不相同的特异结合被分析物质的抗体，只是不相同的是，第一种特异结合被分析物质的抗体被标记物质标记，而第二中特异结合抗体不被标记物质标记。

在一个具体方案中，位于标记区域上的特异性的第一结合分子和位于标记区域上游的第二结合分子都为抗体或者抗体片段，而检测区域上的特异结合分子为被分析物质的类似物质。第一抗体和第二抗体都可以结合被分析物质的相同的结合位点，也可以是他们结合被分析物质上不相同的结合位点。

“抗体”是指免疫球蛋白，无论是天然的还是部分或者全部合成的。这个术语还包括其中保持结合能力的抗体的衍生物，也包括任何含有与免疫球蛋白的结合域同源的或者很大程度上同源的结合域的蛋白质。这些蛋白质可能是源自天然物质，也可能是部分或者全部合成的。一种抗体可能是单克隆的或者是多克隆的。一种抗体可能是任何免疫球蛋白类型中的一员，包括任何人类的免疫球蛋白类型：IgG，IgM，IgA，IgD，IgG和IgE。“抗体片段”是抗体的衍生物或者抗体的小于全长的一个部分。抗体片段能够保留至少一个全长抗体的结合能力的显著位点。抗体片断的例子包括Fab，Fab’，F(ab’)₂，scFv，Fv，dsFv二聚体，和Fd碎片，但是不仅仅包括以上这些。

抗体片段可以由任何方式生成。例如，抗体片段可以通过酶解或者化学裂解一个完整的抗体来生成，或者也可以通过从编码部分抗体序列的基因重组。换句话说，抗体片段可以部分地或者全部地重组产生。抗体片段可以是任意的单链抗体片段。换句话说，抗体片段可以包含多条相互联结的肽链，例如，通过二硫键相联结。抗体片段也可以是任意的一种多分子复合物。一个有功能的抗体片段通常包含至少大约50个氨基酸，而更多的抗体片段通常包含至少大约200个氨基酸。

单链Fvs(scFvs)是重组的抗体片段，它仅由可变轻链(V_L)和可变重链(V_H)相互以多肽链共价结合。V_L和V_H中一方具有胺基端区域。多肽链长度和组成是可变的，其长度可以使两个可变域相互桥联并且对原子的排列没有严重影响。多肽链通常主要由甘氨酸和丝氨酸残基延伸构成，其中有一些谷氨酸和赖氨酸残基散在分布以增加其溶解度。“二聚体”是指单链Fvs的二聚物。二聚体的单体包含的肽链通常比大多数单链Fvs的短，并且它们显示出形成二聚物的倾向。

“Fv”片段由一个V_H和一个V_L域以非共价相互连接组成。术语“dsFv”在这里是指包含一个稳定V_H-V_L对的分子间二硫键的Fv。“F(ab’)₂”片段是抗体的一个片段，本质上和用胃蛋白酶在pH 4.0-4.5时消化免疫球蛋白(通常是IgG) 得到的片段相同。这个片段也可以重组合成。“Fab’”片段是一种抗体片段，本质上和通过减少F(ab’)₂片段上的两条重链相互连接的双硫键得到的片段相同。Fab’片段也可以重组合成。“Fab”片段是一种本质上和用木瓜蛋白酶消化免疫球蛋白(通常IgG)得到的片段相同的抗体片段。Fab片段也可以重组合成。Fab片段上的重链片段是Fd碎片。

被分析物的类似物质

被分析物质的类似物质可以与被分析物质相似的物质，但是它可以和第一抗体或第二抗体形成联合体，第一抗体或第二抗体同时也可以和被分析物质形成联合体。在一些实施方式中，被分析物质的类似物质与被分析物质表现出竞争结合标记区域上第一抗体的能力，或者表现出相同的结合抗体的能力或者两者与抗体的结合能力不同。被分析物质的类似物质与抗体之间的结合能力可以强于或者弱于被分析物质和抗体之间的结合力。被分析物质的类似物质与抗体之间的结合能力可以大于或者低于被分析物质和抗体之间的结合力。这种结合能力可以根据测试的需要按照现有已经知道的技术来选择。例如，结合分子，例如结合位点或者结合对分子中的成员，可以通过任意地或非任意的进行变异而获得。

被分析物的类似物质可以为被分析物质的一个片段，该片段保留有被分析物质的一些位点。标记物质可以通过连接子连接在这些类似物之上，这些连接子包括一个结合位点，这个结合位点不存在于被分析物质，被分析物质的类似物质和标记物质上。例如，这些位点可以被一些抗体识别，但是不能被被分析物质，被分析物质的类似物质和标记物质所识别。可选的，这些连接子可以被抗体识别，同时也不被其他的连接子上的位点识别。这些连接子包括，但不局限于此，蛋白，自然或者合成的多肽或者一些糖类，例如血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin，KLH)、牛血红蛋白(Bovine gamma globulin，BGG)、牛血清蛋白(Bovine SerumAlbumin，BSA)、牛甲状腺蛋白(Bovine Thyroglobulin，BTG)、卵清蛋白(Ovalbumin，OVA)、抹香鲸肌球素(Sperm Whale Myoglobin，SWM)、破伤风类毒素(Tetanus Toxoid，TT)、甲基化的牛血清蛋白(Methylated Bovine SerumAlbumin，mBSA)、兔血清蛋白(Rabit Serum Albumin，RSA)。

载体上可以包括检测区域。该检测区域可以包括一个或多个检测线11和一个或多个控制线。检测线可以被用于检测样品中是否存在被分析物质或被分析物质的浓度。在一些实施方式中，控制线可以包括阳性控制线和阴性控制线。

样品的类型

任何类型的样品都能够用本发明的装置进行试验，包括体液(例如，尿液和其它体液，以及临床样品)。液体样品可能源自固体的或者半固体的样品，包括粪，生物组织和食物样品。这些固体的和半固体的样品可以通过任何适合的方法转变成液体样品，例如在一种适当的液体中混合，跺碎，浸软，孵育，溶解或者酶解固体样品(例如，水，磷酸盐缓冲液或者其它缓冲液)。“生物样品”包括源自活的动物、植物和食物的样品，也包括尿液、唾液、血液和血液成分、脑脊液、阴道拭子，精液、粪便、汗液、分泌物、组织、器官、肿瘤、组织和器官的培养物，细胞培养物和那里的条件介质，不管是人的还是动物的。食物样品包括加工过的食物成分和最后的产品，肉，奶酪，酒，牛奶和饮用水。植物样品包括源自任何植物、植物组织、植物细胞培养物和那里的条件介质的样品。“环境样品”是那些源自环境的样品(例如，湖水样品或者其它水体的样品，污水样品，土壤样品，地下水样品，海水样品，废物废水的样品)。污水和相关的废物也可以包含在环境样品中。

被分析物的类型

用本发明可以分析任何被分析物质。被分析物还可以是有传染性物质或可指示感染期的物质。被分析物可以是药品(如滥用药物)，激素，蛋白，核酸分子，病原体。“滥用药物”(DOA)是指非医学目的地使用药品(通常起麻痹神经的作用)。滥用这些药物会导致身体和精神受到损害，产生依赖性、上瘾并且/或者死亡。药物滥用的例子包括可卡因；安非他明(例如，黑美人、白色安非他命药片、右旋安非他命、右旋苯异丙胺药片、Beans)；甲基苯丙胺(crank、甲安菲他明、crystal，speed)；巴比妥酸盐(如 Roche Pharmaceuticals，Nutley，New Jersey)；镇静剂(即睡觉辅助药品)；麦角酸酰二乙胺(LSD)；抑制剂(downers，goofballs，barbs，blue devils，yellow jackets，安眠酮)；三环类抗抗抑郁剂(TCA，即丙咪嗪、阿密曲替林和多虑平)；苯环己哌啶(PCP)；四氢大麻醇(THC、pot，dope，hash，weed，等。)；鸦片制剂(即吗啡、鸦片、可待因、海洛因，羟二氢可待因酮)。使用该检测试纸条也可以用于属于医学用途但又容易服药过量的检测，如三环类抗抑郁药(丙米嗪或类似物)和乙酰氨基酚。这些药品被人体吸收后会分解成不同的小分子物质，这些小分子物质存在于血液、尿液、唾液、汗水等体液中或部分体液存在上述小分子物质。

实验

下面的实施例将进一步说明本发明，但无论如何不应理解为对本发明范围的限制。

实验1 尿液可卡因(COC)检测试剂条的比较分析

结合附图3来说明本发明中一些实验装置的准备。用于本实验的装置为一横向流动试剂条。

检测垫15的准备：检测区位于硝酸纤维素薄膜(长*宽＝25.4MM*4MM)上，购买于satorius公司(CN140)；在薄膜上的检测线条11的位置用自动点膜机器喷COC抗原，浓度为1.0mg/ml；喷量参数为：1.0ul/cm，处理后在45℃下烘干2小时待用。

金标垫(长*宽＝8mm*4mm)16的准备：抗COC的抗体(单克窿抗体)购买自BiostreamTechnologies，通过常规方法标记上金颗粒，并用自动点金标机器喷洒在聚脂膜上，喷洒的参数为0D80*1.5ul/cm。处理后在45℃下烘干2小时待用。吸水垫17为一般材料的滤纸(长*宽＝17mm*4mm))。

样品施加垫(长*宽＝18mm*4mm)12的准备：在样品垫上处理抗COC的抗体溶液(购买自Biostream Technologies)，浓度为2mg/ml；喷洒的参数为5ul/cm。按照图3所示意的结构把样品垫12叠加在金标垫16上；把金标垫16叠加在硝酸纤维薄膜上15上、吸水垫叠加在硝酸纤维薄膜上形成试剂条。

对照试剂条的准备。与以上材料相比，除了样品施加垫12上没有用含COC的抗体溶液处理过外，其他的材料和试剂、处理条件和浓度都一样。

标准品的准备。阳性样品分别为COC检测阀值300ng/ml(1+50％)和(1-50％) 的标准品溶液(溶剂为确认检测过的阴性尿液)。检测阀值300ng/ml表示希望检测装置在样品溶液中当COC的浓度大于300ng/ml的时候获得阳性结果，小于300ng/ml的时候获得准确的阴性结果。

操作步骤：把两种不同的标准品溶液200微升分别加入到不同的酶标孔中，将产品样品垫浸入酶标孔的溶液中，然后进行反应5分钟后在机器上(Biosite)读取检测垫上检测线条的结果。当读取的数值大于3为阴性结果；小于3为阳性结果。

结果如下表1：

由上表可以明显看出，对照的试剂条无论在-50％的标准品下或+50％的标准品下都获得阳性结果，检测结果的准确性不高，不能很好的区分阴性和阳性结果；特别是在检测阀值附近。相反，本发明的试剂条在-50％的标准品(150ng/ml)下获得阴性结果，而在+50％的标准品(450ng/ml)的时候获得准确的阳性结果，可以更好的区分阳性和阴性样品，让检测结果更加准确和可靠。

实验2 唾液羟二氢可待因酮(OXY)检测试剂条的比较分析

结合附图3来说明本发明中一些实验装置的准备。用于本发明的装置为一横向流动试剂条。检测垫15的准备：检测区位于硝酸纤维素薄膜(长*宽＝25mm*4mm)上，购买于Sartorius公司，批号为0908 11301 0802873；在薄膜上检测线条11的位置用自动点膜机器喷OXY抗原，浓度为0.12mg/ml；喷量参数为：1.Oul/cm。处理后在45℃下烘干2小时待用。金标垫(长*宽＝8mm*4cmm)16的准备：抗OXY的抗体(单克窿抗体)购买自英科隆(浙江杭州天目山路198号)，批号为MO080313-08-0619，通过常规方法标记上金颗粒，将标记后的金颗粒溶液(OD＝13)再与抗体浓度为0.3mg/ml的抗OXY的抗体溶液混合均匀，并用自动点金标机器喷洒在聚脂膜上，喷洒的参数为1.1ul/cm。处理后在45℃下烘干2小时待用。吸水垫17为一般材料的滤纸(长*宽＝17mm*4mm)。样品施加垫为玻璃纤维(长*宽＝17mm*4mm)12。按照图3所示意的结构把样品垫12叠加在金标垫16上；把金标垫16叠加在硝酸纤维薄膜上15上、吸水垫叠加在硝酸纤维薄膜上。

对照试剂条的准备。与以上材料相比，除了金标垫16上不含OXY的抗体溶液外，其他的材料和试剂、处理条件和浓度都一样。

标准品的准备。阳性样品分别为OXY检测阀值(10ng/ml)的(1+50％)，即15ng/ml，(1-50％)，即5ng/ml和3倍检测阀值(30ng/ml)的标准品溶液(溶剂为PBS)。其中不含任何OXY的PBS(PH＝7.2)磷酸缓冲溶液为阴性对照溶液。

操作步骤：把不同的标准品溶液滴加到样品施加垫上，每个试剂条滴加100ul，然后进行反应5分钟后，用肉眼观察检测线条11(T)上的颜色深浅，并与标准的色卡进行比较来判读检测结果(“+”表示阳性，“-”表示阴性)。每个处理检测10个，重复3次。

表2 标准色卡与检测结果

实验结果如下表3

	阴性样品(PBS)	5ng/ml	15ng/ml	30ng/ml
					对照	G8.5	G4	G3	G1
本发明	G8.5	G7.5	G3	G1

注：以上结果为每个处理30检测结果的平均值。

从以上结果可以看出，本发明在标记垫上处理有自由的特异结合OXY的抗体，可以很好的增加检测的梯度，在5ng/ml的浓度下可以获得明显的阴性结果，而在15ng/ml的浓度下仍然获得阳性结果，在两种不同的情况可以获得差异显著的结果，让检测结果更加清楚，准确。但是对照的装置在两个浓度下线条的颜色接近，在5ng/ml的浓度下为G4，而在15ng/ml的浓度下仍然获得G3的阳性结果，虽然可以区分检测的结果，但是很难准确的区分阳性或阴性结果。这是因为，在实际用肉眼读数的过程中，由于线条颜色差异不明显，容易得出模糊的检测结果，甚至不同的人用肉眼来判读结果的时候获得相反的检测结果。而本发明的装置克服了现有类似产品的不足，增加了检测结果的准确性；另外用机器自动读取检测线条的颜色的时候，也容易区分是真阳性还是真阴性结果。

Claims

1.一种检测装置,包括：支持液体流动的载体,在载体上包括：检测区；位于检测区域上游的标记区；所述的检测区上固定一种特异性结合分子；所述的标记区上包括特异结合样品中被分析物的第一种特异结合分子；检测区域上的特异结合分子与样品中的被分析物竞争结合第一种特异结合分子；其中，在所述的检测区域的上游还包括一种结合被分析物质的第二种结合分子。

2.如权利要求1所述的装置，其中，当被分析物质的数量为a的时候，被第二种结合分子结合的被分析物质的数量为b，当被分析物质的数量为c的时候，被第二种结合分子结合的被分析物质的数量为d，其中，让(c-d)与(a-b)的比值大于c与a的比值,其中a小于c。

3.如权利要求2所述的装置，其中，所述的第二种结合分子位于标记区的上游或者在标记区域上。

4.如权利要求2所述的装置，其中，所述的第一种特异结合分子和第二种结合分子能被液体移动，并且第二种结合分子包括特异结合被分析物质的特异结合分子。

5.如权利要求2所述的装置，其中，所述的第一种特异结合分子和第二种结合分子为被分析物的抗体或抗体片段。

6.如权利要求4所述的装置，其中，第一种特异结合分子和第二种特异结合分子为相同的抗体或相同的抗体片段。

7.如权利要求4所述的装置，其中，第一种特异结合分子和第二种特异结合分子分别结合被分析物质上不同的位点。

8.如权利要求4所述的装置，其中，所述的载体还包括一个样品应用区，该样品应用区位于标记区域的上游；同时,第二种特异结合分子位于样品应用区上。

9.如权利要求1-8之一所述的装置，其中，载体包括硝酸纤维素膜，检测区域位于该膜上。

10.如权利要求1-8之一所述的装置，其中，所述的标记区域上包括标记物质,第一种特异结合分子被该标记物质标记。

11.如权利要求1-8之一所述的装置，其中，所述检测区上的固定的特异性结合分子包括被分析物质的类似物质。

12.如权利要求11所述的装置，其中，所述的被分析物包括滥用药物。

13.如权利要求10所述的装置，其中，所述的第二种结合分子不被标记物质标记。

14.如权利要求5所述的装置，其中，当被分析物质在样品中的浓度为A的时候，被第二种结合抗体结合后的被分析物质的浓度为B；当被分析物质为浓度C的时候，被第二种结合抗体结合后的被分析物质的浓度为D，其中(C-D)与(A-B)的比值大于>C与A的比值，其中，C>A。

15.如权利要求2所述的装置，其中，d大于或等于b。