CN102146086A

CN102146086A - 一种斑蝥酸钠的制备方法

Info

Publication number: CN102146086A
Application number: CN 201110091547
Authority: CN
Inventors: 张芝庭
Original assignee: GUIZHOU JINQIAO PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: GUIZHOU JUNZHITANG PHARMACEUTICAL Co.,Ltd.
Priority date: 2011-04-12
Filing date: 2011-04-12
Publication date: 2011-08-10
Anticipated expiration: 2031-04-12
Also published as: CN102146086B

Abstract

本发明公开的是一种斑蝥酸钠的制备方法，包括高温炭化斑蝥虫，斑蝥素提取，斑蝥素脱酯沉淀，斑蝥素精制、斑蝥酸钠的合成以及斑蝥酸钠的精制等工艺步骤。本发明大大缩短了斑蝥素的提取时间，并充分除去了斑蝥素粗品及精品中含有的脂类及肽类蛋白质及杂质，从而提高了斑蝥素的收率及纯度，得到了更高纯度和收率的斑蝥酸钠，使斑蝥酸钠的质量及安全性进一步提高，同时也提高了斑蝥酸钠在注射剂中使用的质量可靠性。

Description

一种斑蝥酸钠的制备方法

技术领域

本发明涉及一种斑蝥酸钠的制备工艺，属于药品的技术领域。

背景技术

在中国专利CN1166669C、CN1586500A、CN101633661A及CN101012230A中均公开了斑蝥酸钠的制备工艺。在斑蝥素的提取步骤中，上述四个专利均采用浸泡的方式提取斑蝥虫，这种提取方式的缺点是生产周期比较长，通常需要浸泡24小时以上，而且收率在74％，相对较低。斑蝥素是从斑蝥虫动物体中提取分离而得到的，再通过化学合成成钠盐而得到斑蝥酸钠原料，申请人经研究发现，从斑蝥虫提取分离的斑蝥素中均不同程度的含有各种肽类水溶性蛋白质(酸性，中性，碱性蛋白)。人体对异性蛋白质有非常敏感的过敏性和排异性，甚至会对人体造成生命危险，如不除尽这些异性蛋白质，对用药人体有极大的不良反应和综合并发症，有的导致生命危险，特别该药品是抗肿瘤药物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种斑蝥酸钠的制备方法，该方法提高了斑蝥酸钠产品的纯度和产品质量，使斑蝥酸钠的质量及用药安全性进一步提高。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案：一种斑蝥酸钠的制备方法。该方法的制备过程包括以下步骤：

(1)高温炭化斑蝥虫：将斑蝥虫进行挑拣，除去其中的杂物，然后烘干、研细粉，使斑蝥虫粉末的细度在40～60目，按照体积比为斑蝥虫粉∶水＝1∶0.5～5的比例向斑蝥虫粉中加水搅拌成糊状，放入电烘烤箱内，调温度至180～205℃，逐渐烘烤至斑蝥虫炭化；取出逐渐冷却，至炭化粉末中析出白色结晶，粉碎得斑蝥虫结晶炭化粉末；

(2)斑蝥素提取：将斑蝥虫结晶炭化粉末置于提取罐中，加入浓盐酸和乙酸乙酯，在50～60℃超声提取2次，每次2小时，过滤合并超声提取液，于70～80℃水浴中，减压浓缩出乙酸乙酯，得斑蝥素粗品；

(3)斑蝥素脱酯沉淀：向斑蝥素粗品中加入体积比为石油醚∶乙醇＝1∶1～5的混合液，搅拌30分钟，静置5～8小时，离心沉淀或抽滤，滤饼以体积比为石油醚∶乙醇＝1∶1～5的混合液洗涤，过滤干燥，得白色斑蝥素粗品；

(4)斑蝥素精制：将斑蝥素粗品置于反应釜中，加入丙酮，在50～70℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下，加入0.3％～0.5％的活性炭，加热回流30分钟；趁热抽滤，得无色澄明液体，调pH至4.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出酸性蛋白质，过滤，得澄明液体；滤液再调pH至7.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出中性蛋白质，过滤，滤液浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥素精品；

(5)斑蝥酸钠的合成：将斑蝥素精品置于反应釜中，加入丙酮，在50～70℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下；搅拌下滴加浓度为20％的NaOH溶液，于50～70℃水浴中回流反应2小时，放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出碱性蛋白质，过滤；滤液浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥酸钠粗品；

(6)斑蝥酸钠的精制：将斑蝥酸钠粗品置于反应釜中，加入蒸馏水使其溶解，再加入0.3％～0.5％的活性炭，回流30分钟；冰水浴冷却后抽滤，得无色澄明液，将滤液置于容器中，浓缩至原体积的1/3～1/20，搅拌下滴加乙醇溶液，产生大量白色沉淀，静置6～8小时后抽滤，干燥后，得斑蝥酸钠精品。

上述的斑蝥酸钠的制备方法，所述的步骤(2)中，斑蝥虫结晶炭化粉末与浓盐酸、乙酸乙酯的配比关系为：斑蝥虫结晶炭化粉末∶浓盐酸∶乙酸乙酯＝1kg∶0.1～0.5L∶6～10L。

前述的斑蝥酸钠的制备方法，所述的步骤(4)中，斑蝥素粗品与丙酮的配比关系为：斑蝥素粗品∶丙酮＝10g∶50～500ml。

前述的斑蝥酸钠的制备方法，所述的步骤(5)中，斑蝥素精品与丙酮、20％NaOH溶液的配比关系为：斑蝥素精品∶丙酮∶20％NaOH溶液＝10g∶200～500ml∶20～50ml。

前述的斑蝥酸钠的制备方法，所述的步骤(6)中，斑蝥素酸钠粗品与蒸馏水、乙醇的配比关系为：斑蝥素酸钠粗品∶蒸馏水∶乙醇＝10g∶30～50ml∶50～100ml。

前述的斑蝥酸钠的制备方法，所述的步骤(2)中提取完的斑蝥虫渣作焚烧处理。

本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下特点：(1)本发明改进了斑蝥素的提取工艺。传统是采用冷浸浸泡的方式从斑蝥虫中提取斑蝥素，周期较长，一般在24小时以上，收率在74％；而本发明是将斑蝥虫经烘烤、炭化处理后再采用浓盐酸和乙酸乙酯超声提取斑蝥素，提取时间缩短为4小时，比传统的浸泡法缩短一倍以上，而且收率能达到81.5％。本发明的斑蝥酸钠采用沉淀法(不是采用传统的结晶法)。斑蝥素采用炭化，不但简化了斑蝥素制备工艺，使斑蝥素的生产周期缩短，而且减少了斑蝥素制备过程中的溶剂使用量，降低了成本，同时减少了操作过程中对人体毒素。因斑蝥素的熔点在205-210℃，蛋白质碳化在200-205℃有效的保证了斑蝥素的生物活性。本发明采用超声提取技术，有效地保证了斑蝥素的有效溶出。(2)本发明在斑蝥素的提取分离过程中，专项研究了除去动物蛋白的工艺，运用生物化学手段并根据蛋白质的特性(小分子肽类蛋白的聚合的特性)，采用PH值调节蛋白质的等电点(等电点即蛋白质或两性电解质如氨基酸所带净电荷为零时溶液的pH)，同时结合加热骤冷的工艺方法，通过加热骤冷使蛋白质急速凝固(使小分子肽类蛋白聚合)，并通过过滤的方式对酸性、中性、碱性水溶性蛋白质进行分离处理，充分、彻底、有效地除去斑蝥素中含有的脂类及蛋白质类杂质，保证了有效成分的纯度和生物活性，从而在合成中保证了产品的高纯度，提高了产品质量，使斑蝥酸钠的质量及安全性进一步提高，同时也提高了斑蝥酸钠在注射剂中使用的质量可靠性，从而达到保证了药品纯度和用药安全的目的。而在中国专利CN1166669C、CN1586500A、CN101633661A及CN101012230A中所用的丙酮，石油醚以及乙酸乙酯都是对动物体内的脂肪起分解作用，蛋白质均在制剂中用活性炭吸附处理，有很大的不可靠性和安全隐患。本发明重点解决了异性蛋白质残留的问题，现有技术中不论采用冷浸还是超声提取的工艺，斑蝥酸钠成品中异性蛋白(肽类)含量能达到2.8％，斑蝥酸钠的含量约92％；而采用本发明后，斑蝥酸钠成品中异性蛋白(肽类)含量可以控制在0.05％以下，斑蝥酸钠的含量能达到95.2％，斑蝥酸钠的纯度能达到95％以上(质量标准要求85％以上)。本发明在除去异性蛋白(肽类)的操作中也不同程度的收集了一些沉淀。对于活性炭的使用量，虽然提高活性碳用量可以提高产品质量，但活性炭属于广泛性吸附材料，在吸附杂质成分的同时也会吸附斑蝥素或斑蝥酸钠，所以本发明在研究期间同样做出了对比试验：在斑蝥酸钠的精制中，当活性炭用量达到0.8％时，斑蝥酸钠的含量为96.4％，收率却降到64.3％；当活性炭用量达到0.3％，斑蝥酸钠的含量为95.2％，收率却能达到81.6％。所以本发明并不依赖于活性炭除杂，采用多渠道去除杂质(含蛋白质)，同时解决了杂质问题，也保证了较高的成品收率。(3)本发明在斑蝥酸钠的精制工艺中，由于前段工艺对杂蛋白处理较彻底，所以在通过水溶液浓缩精制、活性炭处理的基础上，再在工艺后期采用了乙醇沉淀法(即滴加乙醇溶液)，进一步提高了斑蝥酸钠的收率及纯度，同时也提高了原料的质量及在注射剂中使用的质量可靠性，得到了更高纯度和收率的斑蝥酸钠成品，使斑蝥酸钠的收率可增加5～8％，降低了成本。(4)本发明将提取完的斑蝥虫渣作焚烧处理，而且对工艺中所使用的有机溶剂均采取回收措施，保证了生产中有机溶剂零排放及回收后的有机溶剂循环使用，环保性好且节省了成本。本发明通过工艺技术和工艺路线的改进，对产品的质量有了很大的提升，大大减少了对人体的不良反应及用药安全性。

附图说明

图1是本发明的制备工艺流程图。

下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步的说明。

具体实施方式

实施例。如图1所示，本发明的制备方法包括以下步骤：(1)高温炭化斑蝥虫：将斑蝥虫进行挑拣，除去其中的杂物，然后烘干、研细粉，使斑蝥虫粉末的细度在40～60目，按照体积比为斑蝥虫粉∶水＝1∶1的比例向斑蝥虫粉中加水搅拌成糊状，放入电烘烤箱内，调温度至205℃，逐渐烘烤至斑蝥虫炭化；取出逐渐冷却，至炭化粉末中析出白色结晶，粉碎得斑蝥虫结晶炭化粉末。

(2)称取斑蝥虫结晶炭化粉末1kg，置于3000ml圆底烧瓶中，加入浓盐酸200ml，再加入乙酸乙酯3L，在60℃超声提取2次，每次2小时，过滤合并超声提取液，于80℃水浴中减压浓缩出乙酸乙酯，得斑蝥素粗品。

(3)向上述斑蝥素粗品中加入石油醚∶乙醇＝1∶1(体积比)的混合溶剂300ml，搅拌30分钟，静置8小时，离心沉淀或抽滤，滤饼以少量石油醚∶乙醇＝1∶1(体积比)的混合溶剂洗涤，过滤干燥，得白色斑蝥素粗品21.6g。

(4)将斑蝥素粗品置于反应釜中，加入300ml丙酮，在60℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下，加入0.3％的活性炭，加热回流30分钟。趁热抽滤，得无色澄明液体，调pH到4.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出酸性蛋白质，过滤(收集沉淀约0.113g)，得澄明液体；滤液再调pH到7.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出中性蛋白质，过滤(收集沉淀约0.085g)，浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥素精品9.7g。

(5)将斑蝥素精品置于反应釜中，加入500ml丙酮，在60℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下，搅拌下滴加浓度为20％的NaOH溶液5倍量，于60℃水浴中回流反应2小时，放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出碱性蛋白质，过滤(收集沉淀约0.016g)，滤液浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥酸钠粗品12.5g。

(6)将斑蝥酸钠粗品置于圆底烧瓶中，加入斑蝥酸钠粗品5倍量的蒸馏水使其溶解，再加入0.3％的活性炭，回流30分钟。冰水浴冷却后抽滤，得无色澄明液，将滤液置于烧杯中，浓缩至原体积的1/3，搅拌下滴加粗品10倍量的乙醇溶液，产生大量白色沉淀，静置8小时后抽滤，干燥后，即得斑蝥酸钠精品10.2g。

本发明的实施方式不限于上述实施例，在不脱离本发明宗旨的前提下做出的各种变化均属于本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)高温炭化斑蝥虫：将斑蝥虫进行挑拣，除去其中的杂物，然后烘干、研细粉，使斑蝥虫粉末的细度在40～60目，按照体积比为斑蝥虫粉∶水＝1∶0.5～5的比例向斑蝥虫粉中加水搅拌成糊状，放入电烘烤箱内，调温度至180～205℃，逐渐烘烤至斑蝥虫炭化；取出逐渐冷却，至炭化粉末中析出白色结晶，粉碎得斑蝥虫结晶炭化粉末；

(4)斑蝥素精制：将斑蝥素粗品置于反应釜中，加入丙酮，在50～70℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下，加入0.3％～0.5％的活性炭，加热回流30分钟，趁热抽滤，得无色澄明液体，调pH至4.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出酸性蛋白质，过滤，得澄明液体；滤液再调pH至7.0，加热至100℃放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出中性蛋白质，过滤，滤液浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥素精品；

(5)斑蝥酸钠的合成：将斑蝥素精品置于反应釜中，加入丙酮，在50～70℃水浴中加热使其溶解，待完全溶解后，冷却至30℃以下；搅拌下滴加20％的NaOH溶液，于50～70℃水浴中回流反应2小时，放出骤冷到0至-5℃，保存24～48小时，析出碱性蛋白质，过滤；滤液浓缩回收丙酮，冷却析晶，抽滤，干燥，得白色斑蝥酸钠粗品；

2.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，斑蝥虫结晶炭化粉末与浓盐酸、乙酸乙酯的配比关系为：斑蝥虫结晶炭化粉末∶浓盐酸∶乙酸乙酯＝1kg∶0.1～0.5L∶6～10L。

3.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，斑蝥素粗品与丙酮的配比关系为：斑蝥素粗品∶丙酮＝10g∶50～500ml。

4.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的步骤(5)中，斑蝥素精品与丙酮、20％NaOH溶液的配比关系为：斑蝥素精品∶丙酮∶20％NaOH溶液＝10g∶200～500ml∶20～50ml。

5.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的步骤(6)中，斑蝥素酸钠粗品与蒸馏水、乙醇的配比关系为：斑蝥素酸钠粗品∶蒸馏水∶乙醇＝10g∶30～50ml∶50～100ml。

6.根据权利要求1所述的斑蝥酸钠的制备方法，其特征在于，所述的步骤(2)中提取完的斑蝥虫渣作焚烧处理。