CN102123720A - 包括酚酸的油棕榈树树叶提取物 - Google Patents

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Abstract

一种包含油棕榈树树叶提取物的组合物，其特征在于：所述提取物包括(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸；一种制备所述提取物的方法，其中的步骤包括：(a)通过一溶剂对干或新鲜的油棕榈树树叶进行提取；(b)过滤步骤(a)所得的提取物；(c)使步骤(b)所得的已过滤提取物与一色谱介质接触，而所述色谱介质选择性地吸附于含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和酚酸的组成部分；(d)使用一溶剂把所述组成部分从所述色谱介质中洗提出来；(e)对步骤(d)所得的已洗提组成部分进行干燥处理。此外，本发明的权利要求也包括使用所述组合物来减少或避免哺乳类动物及家禽身上的氧化应激。

Description

包括酚酸的油棕榈树树叶提取物
技术领域
本发明涉及具有治疗作用以减少或避免人类及低等动物的氧化应激的油棕榈树树叶提取物。具体而言，本发明涉及提出物中富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和酚酸的组成部分，其中例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸具有所述治疗作用。
背景技术
油棕榈树(Elaeis)包括棕榈科植物(Arecaceae)，或棕榈家族，的两个品种。非洲油棕榈树(Elaeis guineensis)原生于西非，美洲油棕榈树(Elaeis oleifera)原生于中美及南美的热带地方。非洲油棕榈树亦广泛种植于马来西亚及印度尼西亚以获取其产油的果实。
成熟的油棕榈树是高达20米的单干植物，其树叶呈羽状，可长达3至5米。一棵幼树一年生出约30块树叶。油棕榈树的花朵簇聚在一起，每一朵都有三块萼片和三块花瓣。
油棕榈树的果实带红色，以一大束生长，每一束可重达10至40公斤不等。果实包括被称为果皮的一层多油和多肉的外层、以及被称为棕榈仁的单种子。油从果皮及棕榈仁中提取出来。
种植油棕榈树主要是为了取其果实；其果实主要用来生产食用油。从油棕榈树果实提取的棕榈油也含有胡萝卜素、生育酚和生育三烯酚。现时已有进行一些关于棕榈叶提取物的有益作用的研究。
Abeywardena M等人(Asia Pac.J.Clin.Nutr.，11：S467-S472)披露了一种从油棕榈树(Elaeis guineensis)树叶提取出来富含多酚的提取物。该提取物可用于通过内皮依赖机制促进血管舒张，但并未披露或研究其中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸、没食子酸和原儿茶酸，也没有披露或研究该提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Suhaila Mohamed等人(WHAT Medicine III Proceedings，2007，页145-148)披露了富含多酚的油棕榈树树叶(非洲油棕榈树)提取物的抗高胆固醇血症和抗高血压的效用，但并未披露或研究其中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸、没食子酸和原儿茶酸，也没有披露或研究该提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Nagendran Balasundram等人(Asia Pac.J.Clin.Nutr.2005；4(4)；319-324)披露了一种从油棕榈树果实分隔出来的富含酚的组成部分。该提取物展示生物活性的特性，特别是抗氧化作用，但没有再披露或研究油棕榈树树叶提取物的化学成分，也没有披露 或研究油棕榈树树叶提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Tan Y.A.等人(The Royal Society of Chemistry 2001；548-551)披露了从油棕榈树果实的中果皮及棕榈仁提取出来的棕榈油中所含有的酚类化合物，该酚类化合物包括没食子酸、氯原酸、原儿茶酸、龙胆酸、香豆酸、阿魏酸和咖啡酸，以及儿茶素、橙皮甙、柚皮芸香甙和四羟基苯，但没有再披露或研究油棕榈树树叶提取物的化学成分，也没有披露或研究油棕榈树树叶提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Run-Cang Sun等人(J.Agric.Food Chem.，49(11)，5122-5129，2001)披露了一种新方法对油棕榈树树叶纤维的羟基肉桂酸作出定量测定，但并未披露或研究其中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯，也没有披露或研究该提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Yew-Ai Tan等人(European Journal of Lipid Sciences and Technology，第109卷，第4号，页380-393，2007)披露了榨取和提炼棕榈油所得的，亦即是从油棕榈树果实所得的副产品中含有的如甾醇，维生素E，类胡萝卜素，磷脂，角鲨烯和酚类物质的植物化学物质，但没有再披露或研究油棕榈树树叶提取物的化学成分，也没有披露或研究油棕榈树树叶提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
Kinnoudo Celestin(WO2007129136)披露了具有抗疟特性的油棕榈树(Elaeisguineensis)树叶提取物，但没有指出提取物的化学成分，没有披露或研究油棕榈树树叶提取物当中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸、没食子酸和原儿茶酸，也没有披露或研究提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
氧化应激
自由活性基、约束活性基以及高活性而因此具破坏性的分子对人类健康和疾病的重要性在过去几十年越来越受重视。很多普遍但致命的人类疾病，包括动脉粥样硬化、癌症及衰老都具有以基为根本的病理反应作为创伤的基础机制。
一基或一自由基通常被理解为一分子，其外轨道层上具有一个或多于一个没有配对的电子。很多具有约束基的分子种类为一氧化碳或其他含有氧的化合物，一般被称之为活性氧簇(ROS)。这些高度不稳定的分子倾向与邻接的分子产生急速反应，并提供、提取或甚至分出其外轨道的电子。此反应有时候以彻底而且有益的方式改变邻接的目标分子，但亦可以把它摧毁，或可使没有配对的电子转移至目标，即一自由基，从而产生第二簇不需要的ROS，而该ROS又会继续建设性地或破坏性地与一新目标产生反应。事实上，ROS的高活性多数是因为ROS产生了上述的分子连锁反应，以至把其自身的影响强而有力地放大很多倍。
所有有生命的需氧生物都使用氧来产生能量。但很多迹象显示使用氧的好处也关系到氧化过程可能对需氧生物造成创伤的风险。多种活性氧代谢物会参与氧化过程，但也 同时攻击不同种类的生物材料。几乎所有种类的化学化合物都会被这些氧化合物氧化损耗。举例说，核酸、蛋白质、自由氨基酸、脂质和烃的化合物会受氧中毒影响。人类有一最精细和分布最广并因此明显地非常重要的系统来平衡氧化和抗氧化作用(见H.Sies，O×idative Stress，页2-4，1985)。但自然存在的抗氧化物库并不能抗衡增多的活性氧簇(ROS)，因此便出现所谓的“氧化应激”。
向氧化作用偏移的失衡可能由以下两种原因造成：
1、由于产生一活性氧代谢物而令抗氧化系统的负荷过重；及/或
2、抗氧化系统的不足。
上述原因的结果被概括为“氧化应激”。现时，此失衡可由很多不同的疾病造成，尤其是如肝炎的炎症、如癫痫症或帕金森氏症的中央神经系统疾病，如哮喘的肺器官疾病、银屑病、抗癌制剂的副作用、如百草枯的化学品、辐射的副作用以及如心肌梗死的冠脉循环疾病。
为免受制于任何理论，氧化应激是指在不同疾病或创伤状态中的一个因素，但不代表氧化应激是那些疾病的成因。不过，正如很多研究证实，氧化应激可以对上述疾病的进展产生负面影响，进一步破坏病者的细胞。
现时，有力的科学证据指出，人类和动物身上很多功能障碍和疾病都和氧化应激有关，当中包括：
衰老：在一正常衰老过程中以比正常更快的速度衰老。
心脏和心血管疾病：动脉粥样硬化和阿霉素心肌毒性。
肾脏：自身免疫性肾病综合症和重金属肾毒。
太阳辐射：皮肤起皱和色素沉着。
眼部：白内障、退行性视网膜损伤和黄斑变性。
肺部：肺癌(香烟烟雾)、肺气肿、氧化剂污染物(O3，NO2)，支气管肺发育异常和石棉致癌。
神经系统紊乱：帕金森氏症、神经元蜡样脂褐质沉积症、老年性痴呆症、肌肉萎缩症和多发性硬化症。
铁质超负荷：特发性血色病、饮食上的铁质超负荷和地中海贫血症。
炎症免疫创伤：肾小球肾炎、自身免疫性疾病和类风湿关节炎。
肝脏：由酒精引致的肝脏创伤、卤代烃和扑热息痛。
抗氧化物能提供保护，因为它们可以打断脂质过氧化作用的基连锁反应，从而在ROS和自由基对不同的生物分子造成破坏前便把它们扫除，或避免氧化创伤扩散。基在体内的反应和对身体产生的负荷而最终导致的病理状态就是氧化应激。
抗氧化物(基扫除者)被视为可以消除上述疾病的氧化应激，而这种作用的研究很早以前已经开始，并早已研发出一种具有基扫除功能的抗炎制剂。所以，明显地，具有抗氧化功能的物质能有效减少氧化应激。
不同的食品和补充品都含有如维生素C和维生素E的维生素，用来帮助身体减轻氧化应激的影响。不过，更有力地对抗自由基和ROS的其实是身体本身的防御系统所自然制造的称为抗氧化物的化学物。抗氧化物通过向自由基或ROS提供一个电子或阻止它们形成，从而终止ROS的自由及约束基的传播。
身体的抗氧化物防御系统包括三种重要的、天然的抗氧化物：超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化酶(G PX)。研究显示这些抗氧化物所催化的反应是代谢顺序的，因此，它们可以协同运作，首先是SOD，然后是CAT和GPX。
但即使身体含有上述SOD、CAT和GPX，身体的抗氧化物防御系统仍然持续受氧化应激影响，其制造SOD、CAT和GPX的能力会被衰老过程抵销，此外，炎症、微生物或病毒感染、癌症及神经障碍恶化以及由氧化应激造成或因氧化应激造成或加剧的其他病理状态也可以损害身体的抗氧化物防御系统。
近年有关自然抗氧化物的寻觅越来越受关注，主要是因为以下三个原因(Dastmalchi，Dorman，Kosar，& Hiltunen，2007)：
1、很多临床和流行病学研究均显示食用水果和蔬菜可减低患上如癌症、心血管疾病和糖尿病等慢性疾病的风险；
2、出于安全考虑，因为长期摄取食品及饮料中的合成抗氧化物对身体潜在不良影响；以及
3、公众认为天然和膳食中的抗氧化物较合成的类似物更安全，结果越加引发公众对从药用植物摄取天然抗氧化物的兴趣。
但至今仍未指明油棕榈树树叶提取物当中带有抗氧化及抗氧化应激作用的化学化合物。
本发明旨在提供一种新颖的油棕榈树树叶提取物，可减少哺乳类动物和家禽的氧化应激。所述的提取物富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸，并具有抗氧化应激作用，而且，油棕榈树树叶提取物中(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的综合作用之前也未曾公开过。
总括而言，油棕榈树树叶提取物中富含多酚的组成部分已在之前披露过，其中所述的组成部分可被用作抗高胆固醇血症和抗高血压制剂，但其中并没有研究或披露过油棕榈树树叶中所提取的含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组成部分，也没有研究或披露过这种提取物作为抗氧化应激制剂的用途。
发明内容
因此，本发明的主要目的是提供一种从油棕榈树树叶提取并对哺乳类动物和家禽具有治疗作用的组合物。
本发明的第二个目的是提供一种含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组合物。
本发明的第三个目的是提供一种制备一种油棕榈树树叶提取物的方法。
本发明的第四个目的是提供一种药物组合物，其包括所述新颖的提取物和最少一药物学上可接受的载体。
本发明的第五个目的是提供一种药物组合物，其包括所述新颖的提取物、稳定剂、载体、赋形剂、增充剂和其他合适的物质。
本发明的第六个目的是提供一种组合物，其包括所述新颖的提取物；所述新颖的提取物混合及联同药物载体以用作减少或避免在哺乳类动物和家禽身上出现的氧化应激。
为实现本发明以上以至其他目的，本发明提供一种包括油棕榈树树叶提取物的组合物，其特征在于其中所述的提取物含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸，并提供一种方法来制备一种含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的油棕榈树树叶提取物，所述方法的步骤包括：
a、通过将干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶与水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂混合，并以25℃至95℃的温度加热0.5至96小时，以从干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶提取草药液；
b、过滤从步骤a所得的草药液提取物；
c、使步骤b所得的已过滤草药液提取物与一吸附色谱介质接触，所述吸附色谱介质选择性地吸附于含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组成部分，所述吸附介质可以是吸附柱或任何其他吸附介质；
d、把步骤c所得的所述组成部分以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂从所述吸附色谱介质洗提出来；
e、以一喷雾干燥机、真空烤箱、传统烤箱、微波炉或冷冻干燥机使步骤d所得的富化草药液提取物变得干燥。
另外，本发明的第七个目的是使用所述组合物减少或避免哺乳类动物及家禽身上的氧化应激，其中包括使需要接受治疗的主体服用一有效剂量的所述组合物。
附图说明
图1显示通过H PLC识别出油棕榈树树叶提取物中含有(-)-儿茶素没食子酸酯。
图2显示通过TLC识别出油棕榈树树叶提取物中含有阿魏酸。
图3显示通过HPLC识别出油棕榈树树叶提取物中含有没食子酸。
图4显示通过HPLC确定油棕榈树树叶提取物中(-)-儿茶素没食子酸酯的含量。
图5显示通过HPLC确定油棕榈树树叶提取物中阿魏酸的含量。
图6显示通过UV确定油棕榈树树叶提取物中总酚酸含量。
具体实施方式
本发明涉及包括油棕榈树树叶提取物的组合物，其特征在于：所述提取物包括(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸。
本发明的所述油棕榈树树叶包括选自包括非洲油棕榈树或美洲油棕榈树的植物属油棕榈树的植物树叶。
本发明新颖的组合物包括重量比为大约0.1％至大约95％的(-)-儿茶素没食子酸酯、重量比为大约0.1％至大约95％的阿魏酸以及重量比为大约0.1％至大约95％的总酚酸，如没食子酸和原儿茶酸。
在本发明的一个优选实施例中，所述组合物包括重量比为大约0.5％至大约10％的(-)-儿茶素没食子酸酯、重量比为大约1％至大约5％的阿魏酸以及重量比为大约5％至大约30％的总酚酸，如没食子酸和原儿茶酸。
在本发明最优选的实施例中，所述组合物包括重量比为大约0.5％的(-)-儿茶素没食子酸酯、重量比为大约1％的阿魏酸以及重量比为大约20％的总酚酸，如没食子酸和原儿茶酸。
本发明亦涉及一种制备所述油棕榈树树叶提取物的方法，其中的步骤包括：
a、通过将干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶与水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂混合，并以25℃至95℃的温度加热0.5至96小时，以从干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶提取草药液；
b、过滤从步骤a所得的草药液提取物；
c、使步骤b所得的已过滤草药液提取物与一吸附色谱介质接触，所述吸附色谱介质选择性地吸附于含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组成部分，所述吸附介质可以是吸附柱或任何其他吸附介质；
d、把步骤c所得的所述组成部分在大约10℃至大约80℃之间的温度和大约0.1巴至大约10巴之间的压力以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂从所述吸附色谱介质洗提出来，以获得一富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的提取物；以及
e、以一喷雾干燥机、真空烤箱、传统烤箱、冷冻干燥机或任何其他干燥设备使步骤4所得的富化草药液提取物变得干燥。
在本发明一个优选的实施例中，通过将大约5份至大约50份而优选为10份至大约30份的溶剂和1份油棕榈树树叶(按干物质计算)在一提取仪器中混合一段优选为大约1小时至96小时而更优选为8小时至24小时的时间，以进行提取。溶剂的温度保持在优选为大约25℃至95℃，更优选为大约50℃至60℃。
在本发明进一步的实施例中，用作提取的溶剂优选包括水、乙醇、异丙醇或这些溶剂的混合物，更优选为水、乙醇或水和乙醇的混合物，最优选则是一种水分重量比为30％而乙醇重量比为70％的混合物。
在本发明一个优选的实施例中，吸附色谱介质包括苯乙烯二乙烯苯共聚物树脂、酚醛树脂、丙烯酸树脂、甲基丙烯酸树脂和聚酰胺树脂。这样的树脂例子有：美国费城的罗门哈斯公司(Rohm & Haas Co.，)的产品Amberlite XAD-I、Amberlite XAD-2、Amberlite XAD-4、Amberlite XAD-7、Amberlite XAD-8、Amberlite XAD-II、AmberliteXAD-12、Amberlite XAD-1180、Amberlite 7HP、Amberlite 761和Duolite S861；日本东京的三菱化工(Mitsubishi Chemical Industries Ltd.)的产品Diaion HP-10、DiaionHP-20、Diaion HP-21、Diaion HP-30、Diaion HP-40和Diaion HP-50以及中国天津南开和成科技有限公司的产品AB-8交联聚苯乙烯树脂和H103交联聚苯乙烯树脂。
在本发明一更优选的实施例中使用的树脂是苯乙烯二乙烯苯共聚物树脂，例如是中国天津南开和成科技有限公司的产品AB-8交联聚苯乙烯树脂、美国费城的罗门哈斯公司(Rohm&Haas Co.，)的产品Amberlite XAD 1180、Amberlite 7HP和Amberlite 761。
在本发明最优选的实施例中使用的树脂是由中国天津南开和成科技有限公司出产，产品名为AB-8交联聚苯乙烯树脂的苯乙烯二乙烯苯共聚物树脂。
用作把富化的组成部分从吸附色谱介质洗提出来的洗提制剂可以是水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或熟悉有关技术的人员所知道的任何其他极性溶剂。优选的溶剂是水和乙醇的混合物，最优选的则是30％乙醇的水溶剂。
在本发明一个优选的实施例中，干燥方法包括使用一喷雾干燥机、真空烤箱或传统烤箱，最优选为使用一喷雾干燥机。
本发明用来制备一油棕榈树树叶提取物的设备：
本发明用来制备非洲油棕榈树和美洲油棕榈树提取物的系统包括：草药提取箱、色谱吸附柱和干燥机。
根据本发明的一方面，草药提取箱设有蒸汽夹套和一高速搅拌机来搅拌草药提取箱的内物。蒸汽经过蒸汽夹套，把草药提取箱的内物加热。
油棕榈树树叶与水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或熟悉有关技术的人员所知道的任何其他极性溶剂混合，然后以优选范围为25℃至95℃的温度在草药提取箱加热1至96小时。加热的过程会产生一草药液提取物，然后再把其过滤以收集滤液。
根据本发明的一方面，色谱吸附柱填入了色谱吸附树脂，优选为包括聚苯乙烯树脂。已过滤的草药液提取物经过色谱吸附柱，其中富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组成部分会吸附于所述树脂的表面，之后，所述含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的富化组成部分便会通过以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂对色谱吸附柱进行洗提而被洗提。最后，得出的富化草药液组成部分通过使用喷雾干燥机、真空烤箱、传统烤箱、微波炉、冷冻干燥机或其他熟悉相关技术的人员所熟知的干燥设备被干燥。
识别本发明的油棕榈树树叶提取物中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和没食子酸的定性试验。
一种通过使用高性能液体色谱法(HPLC)识别一油棕榈树树叶提取物中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯的方法：
1、在1ml的0.1％磷酸溶解1mg的(-)-儿茶素没食子酸酯参照标准，以制备一参照标准溶液；
2、把200mg的本发明提取物溶解于10ml的乙醇中，以制备一测试溶液；
3、把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Sinochrom ODS-BP色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：(i)2％(v/v)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶剂混合物起始为含有92％溶剂(i)和8％的溶剂(ii)，然后在50分钟内以线性梯度增加至含有31％溶剂(ii)；流速：1.0ml/min；检测：UV 280nm
从参照标准溶液和测试溶液得出的色谱在大约28分钟的保留时间显示一与(-)-儿茶素没食子酸酯相应的主高峰。该高峰证实本发明的组合物含有(-)-儿茶素没食子酸酯。
一种通过使用薄层色谱分析法(TLC)识别一油棕榈树树叶提取物中是否含有阿魏酸的方法：
1、于HPLC级甲醇溶解本发明的提取物，以4000rpm离心15分钟，收集上清液，以制备样本；
2、样本首先通过使用包括甲醇/水(比例7∶1)混合物的一溶剂相与一已知份量的阿魏酸参照标准一同散布于一预涂的硅胶60TLC板(E-Merck)上；
3、TLC板被空气干燥，然后于波长为254nm的紫外(UV)灯下显影。
在参照标准和样本溶液均可见到相应于阿魏酸的浅紫色主体区域。该浅紫色主体区域证实本发明的组合物含有阿魏酸。
一种使用HPLC识别一油棕榈树树叶提取物中是否含有没食子酸的方法：
1、在10ml的甲醇中溶解10mg的没食子酸参照标准，以制备一没食子酸的参照标准溶液；
2、在10ml的甲醇中溶解200mg的本发明提取物，以制备一测试溶液；
3、把上述两种溶液根据以下条件分别注入一H PLC系统中：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱(250mm ×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：甲醇/水/正磷酸(20∶79.9∶0.1)混合物；流速：1.0ml/min；检测：UV 270nm
从参照标准溶液和测试溶液得出的色谱在大约6.6分钟的保留时间显示一与没食子酸相应的主高峰。该高峰证实本发明的组合物含有没食子酸。
通过使用HPLC检测法对本发明的油棕榈树树叶提取物中(-)-儿茶素没食子酸酯和阿魏酸的定量确定。
一种通过使用HPLC的方法来对一油棕榈树树叶提取物中(-)-儿茶素没食子酸酯的总含量作出定量确定：
1、在1ml的0.1％磷酸中溶解1mg的(-)-儿茶素没食子酸酯参照标准，以制备一(-)-儿茶素没食子酸酯的参照标准溶液；
2、在10ml的甲醇中溶解200mg的本发明提取物，以制备一测试溶液；
3、把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Sinochrom ODS-BP色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：(i)2％(v/v)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶剂混合物起始为含有92％溶剂(i)和8％溶剂(ii)，在50分钟内以线性梯度改变；流速：1.0ml/min；检测：UV 280nm；进量：20μL
在大约28分钟的保留时间从HPLC数据得到一(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域。
通过与(-)-儿茶素没食子酸酯的参照标准溶液比较便得出在测试溶液中(-)-儿茶素没食子酸酯的含量。
使用下述方程式计算在测试溶液中(-)-儿茶素没食子酸酯含量百分比(％)：
1000Crt/Wrs
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液的(-)-儿茶素没食子酸酯浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)。
rt＝从测试溶液所得的(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域。
rs＝从参照标准溶液所得的(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域。
一种通过使用HPLC的方法来对一油棕榈树树叶提取物中阿魏酸的总含量作出定量确定：
a、在70％的乙醇中溶解阿魏酸参照标准，以制备含有分别为0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.25mg/ml和0.5mg/ml四种已知的阿魏酸参照标准浓度的阿魏酸参照标准溶液；
b、在10ml的70％乙醇中溶解10mg的本发明油棕榈树树叶提取物，以制备一测试溶液；
c、把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中，以实施HPLC检测法：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：甲醇和0.1％磷酸水溶液(30∶70)混合物；流速：1.0ml/min；检测：UV 325nm；进量：20μL
在大约28.8分钟的保留时间从HPLC数据得到一阿魏酸的高峰区域。
通过与阿魏酸的参照标准溶液比较便得出在测试溶液中阿魏酸的含量。
通过使用下述方程式计算在测试溶液中阿魏酸的含量百分比(％)：
1000Crt/Wrs
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液的阿魏酸浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)。
rt＝从测试溶液所得的阿魏酸的高峰区域。
rs＝从参照标准溶液所得的阿魏酸的高峰区域。
使用紫外分光光度测量法对本发明的油棕榈树树叶提取物中总酚酸的定量确定。
一种对本发明一油棕榈树树叶提取物中酚酸总含量作出定量确定的方法，其中包括以下步骤：
a、在100ml的HPLC级甲醇中溶解10.0mg的原儿茶酸参照标准，以制备一参照标准溶液，而10ml的溶液根据1∶9的比例与HPLC级甲醇稀释；
b、在10ml的70％乙醇中溶解10mg的油棕榈树树叶提取物，以制备一测试溶液；
c、在10ml的纯净水中溶解90mg的铁氰化钾，以制备0.9％铁氰化钾水溶液；
d、在10ml的纯净水中溶解90mg的氯化铁，以制备0.9％氯化铁水溶液；
e、把9ml的0.9％铁氰化钾水溶液和10ml的0.9％氯化铁水溶液混合，以制备显色剂。
把所有溶液(标准溶液、测试溶液和空白溶液)放在黑房里等待5分钟，然后使所有溶液的容量中分别带有0.1M HCl水溶液，再把它们充分混合，然后把它们放在黑房里等待另外20分钟，然后对照空白溶液量度标准和测试溶液在679nm之下的吸光率。以标准溶液的浓度作为X轴以及吸光率作为Y轴来绘制标准定标曲线，并从标准定标曲线计算总酚酸的浓度。
通过使用下述方程式计算在测试溶液中总酚酸的含量百分比(％)：
50,000C/W
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液的总酚酸浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)
本发明亦包括一具治疗作用的组合物，其包括根据本发明所制备的提取物，而组合物的形式是茶、片剂、包衣片剂、锭剂、可咀嚼片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、包衣颗粒剂、粉末、包衣粉末、溶液、糖浆、乳液、以及悬浮液，能帮助人类或低等动物减少或避免氧化应激。
另外，本发明亦包括一药物组合物，其包括一所述提取物的有效剂量，例如1mg至800mg，更优选为300mg至500mg，以及一药物学上可接受的载体。
本发明提供一药物组合物，其包括所述新颖的提取物，并且配制成可以吞服给药、含服给药、直肠给药、透皮给药或适合吸入或吹入(通过口或鼻)的给药形式。
所述药物组合物若为口服，便可以通过传统方法加上药物学上可接受的赋形剂如结合剂(例如预胶化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)、填料(例如乳糖、微晶纤维素、淀粉或磷酸三钙)、润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)、崩解剂(例如交联聚乙烯吡咯烷酮、交叉羧甲纤维素钠或羟基乙酸淀粉钠)或润湿剂(例如十二烷基硫酸钠)把其配制成茶、片剂、包衣片剂、锭剂、可咀嚼片剂、胶囊、软胶囊、颗粒剂、包衣颗粒剂、粉末、溶液、糖浆、乳液或悬浮液等形式。片剂的包衣可由相关技术中公知的方法制造。
若为口服液状剂，其形式可以是例如溶液、糖浆、乳液或悬浮液，或配制成在使用前加入水或其他合适媒介体的干料，该液状剂可以通过传统方法加上药物学上可接受的添加剂如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用油脂)、乳化剂(例如卵磷脂或刺槐)、非水媒介体(例如杏仁油、油酯化物、乙醇或分馏植物油)以及防腐剂(例如甲基或丙基-对羟基苯甲酸酯或山梨酸)。液状剂也可以按情况含有缓冲盐、调味料、色 素和甜味剂。
口服药剂可按情况配制成能够控制或延长释出本发明的提出物。
若为含服，组合物便可按传统方法配制成片剂或锭剂。
本发明的药物组合物可以配制成由鼻孔吹入以及口部吸入的方式给药。所述给药方式的制剂种类的例子包括适用于吸入器或吹入器的喷雾和气溶胶。外用透皮制剂可用任何熟知相关技术的人员所公知的合适乳剂、软膏或乳液基础配方辅助制成。
本发明的药物组合物也可以是直肠配方如栓剂或停留灌肠剂，例如包括传统的栓剂基础配方如可可油或其他油脂。
在本发明的一个优选实施例中，所述药物组合物包括胶囊、软胶囊或片剂，当中含有大约1％至大约95％所述提取物以及大约1％至大约95％所述药物学上可接受的载体。
“药物学上可接受的载体”在此处是指一种或超过一种相容的固体或液体填充稀释剂，或任何熟悉相关技术的人员所公知的药物赋形剂。
一些可以作为药物学上可接受的载体的物质的例子包括如乳糖、葡萄糖和蔗糖的糖类、如玉米淀粉和马铃薯淀粉的淀粉质、如羧甲基纤维素钠、醋酸纤维素和微晶纤维素的纤维素衍生物。
本发明的所述组合物供人类(体重约60kg)服用的建议剂量为0.1mg至1g，例如以干提取物的重量计算，每剂含1mg至500mg的活性成分，而每一剂每天可服用1至4次，其中的含量取决于服用方法，但视乎病者的年纪和体重以及其病况的严重性，剂量亦可能需要作出经常性调整，而且，剂量亦会取决于服用方法。病者的医生或兽医决定最终的精确剂量以及服用方法。
本发明所制备的提取物在活体外的测试模型中显示其抗氧化功效和扫除自由基的作用，并在活体内的测试模型中显示其抗氧化应激作用。
根据本发明的另一个实施例，所述提取物用作减少或避免在哺乳类动物及家禽身上出现氧化应激，方法是把一有效剂量的组合物给有需要作出这种治疗的人或动物服用。
以下列举本发明制备的组合物的示例。
对本发明的组合物所作的毒性测试，证实在斯普拉-道来氏(SD)大鼠身上，即使每一公斤体重口服30g油棕榈树树叶提取物，所述提取物仍没有任何毒性。
因此，对人类而言，即使是每公斤体重口服0.03g油棕榈树树叶提取物，仍然是合适而且安全的。
例子1
制备油棕榈树树叶提取物
通过使用500ml的水/乙醇混合物(比例是3∶7，以容量计)在大约60至65℃并以大约60分钟时间把大约50g的干油棕榈树树叶提取出来。所得的浆状物以两层薄纱布过滤，以得到大约502g的提取物原液。
之后，对得出的提取物原液实施柱状吸附色谱法。
把一Amberlite XAD 16HP(由罗门哈斯公司(Rohm&Haas)生产)放入一色谱柱(5.0cm内径×40cm高)中，得出柱容量约780ml，然后使用4至5个柱容量单位的去离子水冲洗所述色谱柱，再把前述提取步骤所得的提取物原液注入所述色谱柱。所述色谱柱首先以1500ml的去离子水被洗提，以移除盐分、糖分和其他无用的亲水物质。
接着，所述色谱柱以1500ml的水/异丙醇(比例3∶7，以容量计)混合物和一不变的流速25ml/min在60℃和0.5巴至1巴的压力下被洗提，得出一富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的纯净洗提液。
得出的洗提液再于旋转蒸发器被浓缩至50ml而浓缩液则于真空烤箱以60℃干燥8小时。
得出的2.52gm米黄色粉末成分如下：
(-)-儿茶素没食子酸酯含量-1.1％(根据HPLC检测法)
阿魏酸含量-1.5％(根据HPLC检测法)
总酚酸含量-10.52％(根据紫外分光光度测量法)
例子2
制备油棕榈树树叶提取物
把100kg的新鲜油棕榈树树叶切成每块长2cm的细块，然后把它们放进一提取箱，加入1000公升的水/异丙基溶液混合物(比例3∶7，以容量计)，再以60℃加热8小时。
通过使用一孔径为10μm的滤芯过滤器过滤，将提取物原液与油棕榈树树叶分离。已过滤的液体以70℃和降低至0.08-0.09MPa的压力被浓缩，以得出约200L的浓缩提取液(密度＝1.10-1.20g/cm3)。
得出的浓缩提取液通过使用一15cm直径和150cm长的不锈钢色谱柱实施柱状吸附色谱法。所述色谱柱放满粒径范围由30至60网孔的聚酰胺树脂。
之后，先以200L的去离子水冲洗所述色谱柱，再以200L的水/异丙基溶液(比例3∶7，以容量计)混合物和一不变的流速1.5L/min在大约20至30℃和大约0.5巴至1巴的压力下洗提，得出一富含(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的纯净洗提液。得出的洗提液再以一喷雾干燥机以喷雾干燥。喷雾干燥机的入口温度设定为大约170℃至大约180℃，其出口温度设定为大约100℃至大约105℃。
得出的12.5kg米黄色粉末成分如下：
(-)-儿茶素没食子酸酯含量-1.15％(根据HPLC检测法)
阿魏酸含量-1.6％(根据HPLC检测法)
总酚酸含量-10.5％(根据紫外分光光度测量法)
通过定性和定量分析对本发明的组合物所作的特征描述
确定本发明的组合物中是否含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和没食子酸的定性分析方法是下述的薄层色谱分析法(TLC)和高性能液体色谱法(HPLC)：
例子3
以HPLC识别油棕榈树树叶提取物中的(-)-儿茶素没食子酸酯
在1ml的0.1％磷酸溶解1mg的(-)-儿茶素没食子酸酯参照标准，以得出一参照标准溶液。
与此同时，把200mg准备进行分析的提取物溶解于0ml的乙醇中，为例子1所得的本发明提取物制备一测试溶液。
把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Sinochrom ODS-BP色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：(i)2％(v/v)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶剂混合物起始为含有92％溶剂(i)和8％的溶剂(ii)，然后在50分钟内以线性梯度增加至含有31％溶剂(ii)；流速：1.0ml/min；检测：UV 280nm
从参照标准溶液和测试溶液得出的色谱在大约28分钟的保留时间显示一与(-)-儿茶素没食子酸酯相应的主高峰。该高峰证实本发明的组合物含有(-)-儿茶素没食子酸酯(见图1)。
例子4
以TLC识别油棕榈树树叶提取物中的阿魏酸
把例子1所得的油棕榈树树叶提取粉溶解于HPLC级甲醇，以4000rpm离心15分钟，收集上清液。样本首先通过使用包括甲醇/水(比例7∶1)混合物的一溶剂相与一已知份量的阿魏酸参照标准一同散布于一预涂的硅胶60TLC板(E-Merck)上。
TLC板被空气干燥，然后于波长为254nm的紫外(UV)灯下显影。在参照标准溶液和测试溶液均可见到相对于阿魏酸的浅紫色主体区域(见图2)。
例子5
以HPLC识别油棕榈树树叶提取物中的没食子酸
在10ml的甲醇中溶解10mg的没食子酸参照标准，以得出参照标准溶液。
与此同时，把200mg准备进行分析的提取物溶解于10ml的甲醇中，为例子1所得的本发明提取物制备一测试溶液。
把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：甲醇/水/正磷酸混合物(20∶79.9∶0.1)；流速：1.0ml/min；检测：UV 270nm
从参照标准溶液和测试溶液得出的色谱在大约6.6分钟的保留时间显示一与没食子酸相应的主高峰。该高峰证实本发明的组合物含有没食子酸(见图3)。
本发明通过以下的HPLC方法对本发明的组合物中所含的(-)-儿茶素没食子酸酯和阿魏酸进行定量分析：
例子6
以HPLC对油棕榈树树叶提取物中的(-)-儿茶素没食子酸酯进行定量检测
通过使用HPLC方法来确定例子1所得的油棕榈树树叶提取物中(-)-儿茶素没食子酸酯的含量。
在1ml的0.1％磷酸中溶解1mg的(-)-儿茶素没食子酸酯参照标准，以得出参照标准溶液。
与此同时，把200mg准备进行分析的提取物溶解于10ml的甲醇中，为例子1所得的本发明提取物制备一测试溶液。
把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中，以实施HPLC检测法：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Sinochrom ODS-BP色谱柱(250mm×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：(i)2％(v/v)醋酸和(ii)乙腈的混合物；溶剂混合物起始为含有92％溶剂(i)和8％溶剂(ii)，在50分钟内以线性梯度改变；流速：1.0ml/min；检测：UV 280nm；进量：20μL
在大约28分钟的保留时间从HPLC数据得到一(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域(见图4)。
通过与(-)-儿茶素没食子酸酯的参照标准溶液比较便得出在测试溶液中(-)-儿茶素没食子酸酯的含量。
通过使用下述方程式便可计算在测试溶液中(-)-儿茶素没食子酸酯的含量百分比(％)：
1000Crt/Wrs
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液的(-)-儿茶素没食子酸酯浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)。
rt＝从测试溶液所得的(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域。
rs＝从参照标准溶液所得的(-)-儿茶素没食子酸酯的高峰区域。
(-)-儿茶素没食子酸酯含量-1.1％(根据HPLC检测法)
HPLC检测法显示从例子1所得的组合物其(-)-儿茶素没食子酸酯含量为1.1％。
例子7
以HPLC对油棕榈树树叶提取物中的阿魏酸进行定量检测
通过使用HPLC方法来确定例子1所得的油棕榈树树叶提取物中阿魏酸的含量。
在70％的乙醇中溶解阿魏酸参照标准，以制备含有分别为0.15mg/ml、0.20mg/ml、0.25mg/ml和0.5mg/ml四种已知的阿魏酸参照标准浓度的阿魏酸参照标准溶液。
与此同时，把10mg准备进行分析的提取物溶解于10ml的70％乙醇中，为例子1所得的本发明提取物制备一测试溶液。
把上述两种溶液根据以下条件分别注入一HPLC系统中，以对两种溶液实施HPLC检测法：
设备：Perkin Elmer系列的200LC；色谱柱：Hypersil BDS C18色谱柱(250mm ×4.6mm内径，5μm粒径)；流动相：甲醇和0.1％磷酸水溶液混合物(30∶70)；流速：1.0ml/min；检测：UV 325nm；进量：20μL
在大约28.8分钟的保留时间从HPLC数据得到一阿魏酸的高峰区域(见图5)。
通过与阿魏酸的参照标准溶液比较便得出在测试溶液中阿魏酸的含量。
通过下述方程式便可以计算在测试溶液中阿魏酸的含量百分比(％)：
1000Crt/Wrs
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液需要的阿魏酸浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)。
rt＝从测试溶液所得的阿魏酸的高峰区域。
rs＝从参照标准溶液所得的阿魏酸的高峰区域。
阿魏酸含量-1.5％(根据HPLC检测法)
HPLC检测法显示从例子1所得的组合物的阿魏酸含量为1.5％。
例子8
以紫外光对油棕榈树树叶提取物中的总酚酸进行定量检测
通过使用紫外分光光度测量法来确定例子1所得的油棕榈树树叶提取物中总酚酸的含量。
在100ml的HPLC级甲醇中溶解10mg的原儿茶酸参照标准，得出参照标准溶液，而10ml的溶液根据1∶9的比例与HPLC级甲醇稀释。
不同含量的标准溶液和1ml的甲醇(作为空白溶液)用移液管分别移至不同的25ml量瓶中，并于每量瓶中加入5.0ml的无水乙醇、2ml的3％十二烷基硫酸钠溶液和1.0ml的显色剂(0.9％铁氰化钾溶液∶0.9％氯化铁溶液(0.9∶1))。
把标准溶液和空白溶液放在黑房里等待5分钟，然后使每一量瓶的容量都分别带有0.1M HCl，再把它们充分混合，然后把它们放在黑房里等待另外20分钟。
之后，对照空白溶液量度标准溶液的在679nm之下吸光率，并以标准溶液的浓度作为X轴以及吸光率作为Y轴来绘制标准定标曲线。
根据紫外分光光度测量法而进行的检测法把组合物溶解于10ml的70％乙醇水溶液中，再把0.05ml的溶液用移液管移至一量瓶，而测试溶液的制备方法和上述的方法相同。
在波长679nm之下得出油棕榈树树叶提取物中总酚酸的吸光率(见图6)。
根据标准定标曲线计算出标准定标曲线中总酚酸的浓度。
通过使用下述方程式计算在测试溶液中总酚酸的含量百分比(％)：
50,000C/W
其中
C＝从标准工作曲线(mg/ml)计算出测试溶液的总酚酸浓度。
W＝制备测试溶液(mg)的样本重量(mg)
紫外分光光度测量法显示从例子1所得的组合物的总酚酸含量为10.2％。
例子9
以活体外和活体内测试模型确定本发明组合物的抗氧化作用
本发明组合物通过以下活体外和活体内测试模型而确定其抗氧化作用：
本发明组合物的DPPH自由基扫除作用
例子1所得的本发明组合物在检测波长517nm下以1，1-二苯基-2-苦基苯肼(DPPH)比色法确定其DPPH自由基扫除作用。当DPPH的颜色从紫色变黄色，吸光率便下降，并藉此评估DPPH自由基扫除作用。
把10mg从上述例子1所得的样本粉末溶解于5ml的无水乙醇以作为样本溶液，并于乙醇内制备0.2mmol/L的DPPH溶液。把1ml的DPPH溶液添加至4ml的样本溶液，然后把样本溶液放于黑房中等待30分钟。样本溶液在波长517nm之下量度其吸光率。反应混合物的吸光率较低则表示较高的自由基扫除作用。二丁基羟基甲苯(BHA)是对照物。样本所使用的浓度越高，自由基扫除作用便越强。结果显示本发明的组合物相比所使用的BHA有更强的抗氧化作用。
Figure BPA00001252522500171
Figure BPA00001252522500181
表1：油棕榈树树叶提取物对比BHA的DPPH自由基扫除百分比(％)
例子10
本发明组合物的还原力
例子1所得的本发明组合物根据铁氰化钾还原法确定其还原力。把10mg从上述例子1所得的样本粉末溶解于10ml的无水乙醇作为样本溶液。把1ml的样本溶液溶解于1ml的蒸馏水中，然后与2.5ml的0.2mol/L的磷酸盐缓冲液和2.5ml的1％铁氰化钾水溶液混合，再把混合物在50℃之下温育20分钟。之后，把2.5ml的10％的三氯乙酸水溶液添加至每一样本溶液，然后把样本溶液以3000rpm离心10分钟，再把2.5ml的上清液与2.5ml的蒸馏水和0.5ml的0.1％氯化铁水溶液混合。溶液(铁氰化钾溶液)由于组合物的还原力从黄色变为浅黄色。组合物所含的还原剂(抗氧化物)使Fe3+(铁氰化钾复合物)还原为铁质，因此可在波长700nm之下通过普鲁士蓝的构成而量度Fe2+复合物(在700nm量度吸光率)。吸光率增加表示还原力增加。二丁基羟基甲苯(BHA)是对照物。结果显示本发明的组合物与BHA一样同样具有还原力。
Figure BPA00001252522500182
表2：油棕榈树树叶提取物以及BHA的还原力
例子11
通过油棕榈树树叶提取物在活体内减少脂质过氧化
油棕榈树树叶提取物可通过丙二醛(MDA)测试确定其脂质过氧化的抑制性，以展示其抗氧化应激的作用。脂质氧化是自由基在一生物身上造成的氧化应激中最具破坏性的影响之一。脂质氧化会产生丙二醛。要评定脂质过氧化的水平，可量度被介导产生脂质 过氧化的动物的血清中硫代巴比妥酸反应物(TBARS)的水平。MDA与硫代巴比妥酸产生反应，得出一种可以热量量度的有色物质。
在腹腔内注射四氯化碳可介导脂质过氧化。
Figure BPA00001252522500191
如下面的表3所示，相对于对照组别的大鼠，被介导产生脂质过氧化的大鼠(阳性对照组别)的血清MDA水平较高，但以例子1所得的组合物治疗的大鼠(治疗组别)的血清MDA水平则下降，显示了油棕榈树树叶提取物的脂质过氧化抑制作用和抗氧化应激作用。
  组别 大鼠数目(n＝6)   平均血清MDA水平(nmol/mL)
  对照 6   1.913
  阳性对照 6   2.851
  治疗 6   1.947
例子12
油棕榈树树叶提取物的安全性
确定最大耐受剂量(MTD)
在动物身上的研究证实服用油棕榈树树叶提取物是安全的。在毒性测试中向斯普拉-道来氏(SD)大鼠喂食例子1所得的油棕榈树树叶提取物，结果显示即使SD大鼠每公斤体重口服2g的油棕榈树树叶提取物，组合物仍然是安全的(不会致命)。
确定MTD的方法如下：
以口服给药方式向不同组别、每组别3只、每只约重150至180g的大鼠分别喂食每公斤体重2g、5g、7g、9g、11g、13g、16g、19g、25g、30g和35g组合物。向每只动物以口服方式喂食一单剂前，先把组合物在纯净水中溶解。同时向对照组别中同一数目的大鼠以口服方式喂食纯净水。
喂食后分别对每只动物进行30分钟观察，并于首24小时进行定期观察，其中要特别注意首4小时，此后每天观察，总共观察14天。观察包括显著的行为变化、一般的活动行为、身体扭动、抽搐、对捏尾巴的反应、咬啮、立毛、瞳孔径、排泄物、摄食行为、死亡等等，亦记录体重变化，其中死亡是主要观察的项目。
每公斤体重服用30g油棕榈树树叶提取物并没有导致死亡或出现中毒反应，因此，最大耐受剂量为每公斤体重30g。
供人类每日服用的正常建议剂量大约为每公斤体重0.03g油棕榈树树叶提取物。
通过比较供人类每日服用的正常建议剂量和大鼠的最大耐受剂量，大鼠的最大耐受剂量的倍数为：
Figure BPA00001252522500202
Figure BPA00001252522500203
结论：大鼠服用例子1得出的油棕榈树树叶提取物的最大耐受剂量为每公斤体重30g，相等于建议的人类口服剂量的1,000倍。这显示本发明组合物的急性毒性很低，人类用于口服是十分安全的。
例子13
制备一软胶胶囊的方法
混合以下的成分得出一均匀性油性悬浮液。
软胶胶囊的配方：
Figure BPA00001252522500204
然后把得出的油性悬浮液状混合物填入一软胶胶囊内。
例子14
制备一片剂的方法
一根据以下配方制备的片剂其制备说明如下：
制备片剂采用了直接压缩法。所有成分均匀地混合，得出的混合物在片剂压缩机被压缩成一圆形片剂(700mg/片)。
片剂配方如下：
Figure BPA00001252522500211
例子15
制备一硬胶胶囊的方法
根据熟悉相关技术的人员所知的标准方法在硬胶囊内制备一种以下配方的组合物。
混合以下的成分得出一均匀性的粉末混合物。
然后把得出的混合物填入一大小为#1的硬胶胶囊内。
硬胶胶囊的配方如下：
例子16
口服悬浮液
一根据以下组合物的液态口服悬浮液的制备如下：
把本发明的油棕榈树树叶提取物粉末填入一琥珀色玻璃瓶。
液态口服悬浮液的配方如下：
Figure BPA00001252522500213
  羧甲基纤维素钠   2.50g   悬浮剂
  尼泊金甲酯   0.09g   防腐剂
  尼泊金丙酯   0.10g   防腐剂
  草莓味油   0.10g   增味剂
  聚山梨醇酯80   0.10g   润湿剂
  适量纯净水   100ml   媒介体

Claims (24)

1.一种包括一油棕榈树树叶提取物的组合物，其特征在于：所述提取物包括(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述油棕榈树树叶选自包括非洲油棕榈树和美洲油棕榈树的植物属油棕榈树。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：其中所含的所述(-)-儿茶素没食子酸酯重量比为0.1％至95％。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：其中所含的所述阿魏酸重量比为0.1％至95％。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于：所述酚酸是没食子酸。
6.根据权利要求1、2或5任何一项所述的组合物，其特征在于：其中所含的酚酸重量比为0.1％至95％。
7.一种制备一油棕榈树树叶提取物的方法，其中所述的提取物含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸和例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸；所述方法包括以下步骤：
a、通过将干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶与水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂混合，并以25℃至95℃的温度加热0.5至96小时，以从干油棕榈树树叶或新鲜油棕榈树树叶提取草药液；
b、过滤从步骤a所得的草药液提取物；
c、使步骤b所得的已过滤草药液提取物与一吸附色谱介质接触，所述吸附色谱介质选择性地吸附于含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸的组成部分，所述吸附介质可以是吸附柱或任何其他吸附介质；
d、把步骤c所得的所述组成部分以水、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、异丙醇或这些溶剂的混合物或任何其他极性溶剂从所述吸附色谱介质洗提出来；
e、以一喷雾干燥机、真空烤箱、传统烤箱、微波炉或冷冻干燥机使步骤d所得的富化草药液提取物变得干燥。
8.根据权利要求7所述的方法所制备的一种油棕榈树树叶提取物，其含有(-)-儿茶素没食子酸酯、阿魏酸以及例如是没食子酸和原儿茶酸的酚酸。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述提取物提取自非洲油棕榈树的树叶。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述溶剂包括水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲类酒精、氯仿以及其混合物中至少一种。
11.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述分离介质包括一聚合物色谱柱。
12.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述分离介质包括一合成聚合物树脂。
13.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：所述聚合物树脂为聚苯乙烯。
14.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：其中所述的干燥步骤包括喷雾干燥。
15.根据权利要求7所述的方法，其特征在于：其中所述的洗提剂包括水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、甲类酒精、氯仿以及其混合物中至少一种。
16.根据权利要求1至6任何一项所述具治疗作用的组合物，其特征在于：所述组合物的形态为茶、片剂、包衣片剂、锭剂、可咀嚼片剂、胶囊、软胶胶囊、颗粒剂、包衣颗粒剂、粉末、溶液、糖浆、乳液或悬浮液。
17.一种药物学组合物，其包括根据权利要求1至6任何一项所述的组合物的有效剂量和一药物学可接受的载体。
18.根据权利要求17所述的药物学组合物，其特征在于：所述药物学可接受的载体可以是稳定剂、载体、增充剂以及其他合适的物质。
19.根据权利要求1至6以及16至18中任何一项所述的药物学组合物，其特征在于：所述提取物的含量为1mg至800mg。
20.根据权利要求1至6以及16至18中任何一项所述的药物学组合物，其特征在于：所述提取物优选的含量为300mg至500mg。
21.权利要求1至6以及16至20所述的组合物用作减少或避免哺乳类动物和家禽身上的氧化应激的用途，其中包括使需要接受这种治疗的主体服用一有效剂量的所述组合物。
22.权利要求1至6以及16至20所述的组合物的用途，其特征在于：所述哺乳类动物为人类。
23.权利要求1至6以及16至20所述的组合物的用途，其特征在于：所述哺乳类动物为母牛、水牛、山羊、绵羊或任何其他哺乳类动物。
24.权利要求1至6以及16至20所述的组合物的用途，其特征在于：所述家禽是鹅、鸡、鸭、火鸡、鸽子或任何其他家禽。
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