CN102119942B - 木棉叶总酚提取物、其制备方法和治疗2型糖尿病的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种木棉叶总酚提取物及其制备方法，该提取物可以预防或治疗2型糖尿病。其特征是该提取物是从木棉的叶中用极性溶剂提取，浓缩干燥得到。药效学试验证明木棉叶总酚提取物具有预防或治疗2型糖尿病的功效。

Description

木棉叶总酚提取物、其制备方法和治疗2型糖尿病的应用

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及一种木棉叶总酚提取物，该提取物可以预防或治疗2型糖尿病。

背景技术

糖尿病(diabetes mellitus)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗(InsulinResistance，IR)等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征。目前，我国已经成为全球糖尿病患病率增长最快的国家之一，2002年全国营养与健康状况调查显示，我国约有糖尿病患者2000多万，另有近2000万糖耐量低减者。2007年，我国大陆地区(不包括港、澳、台)糖尿病患者3981万人，患病率4.3％。2010年发布的由中华医学会糖尿病学分会开展的中国14省市糖尿病和代谢综合征调查结果显示，在部分大城市糖尿病患病率水平已经达到10％。糖尿病需要终身监测及治疗，如果不能得到良好的控制，高血糖带来的微血管和大血管并发症，将导致患者继发心血管疾病、血脂异常、失明、卒中、肾功能衰竭和截肢等严重并发症，严重危害人的健康和生命。糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。其中1型糖尿病多发生于青少年，因胰岛素分泌缺乏，依赖外源性胰岛素补充以维持生命。2型糖尿病多见于中、老年人，其胰岛素的分泌量并不低，甚至还偏高，临床表现为机体对胰岛素不够敏感，即胰岛素抵抗(Insulin Resistance，IR)。在糖尿病患者中，2型糖尿病所占的比例约为95％。

目前2型糖尿病治疗药物主要有三大类：生物药类如胰岛素、化学药类如磺酰脲类、双胍类以及中成药类。胰岛素制剂价格昂贵，难以推广；化学药虽降糖作用明显，但对肝、肾等毒副作用较大，还容易导致心血管并发症加重等。中成药虽有一定治疗作用，但目前缺乏药效显著，有效成分和作用机理清楚，质量可控，制剂先进的现代中药。

木棉(Bombax malabaricum DC.)为木棉科木棉属的植物，原产地为中国、越南、缅甸、印度至大洋州等地。我国主要分布于广西、广东、四川、贵州和云南等省区，生于山地阳坡村边、路旁。民间用其花、皮与根入药，用来清热利湿，祛风除湿，活血消肿，散结止痛、治疗慢性胃炎等(齐一萍.木棉的化学成分与药理作用研究.福建医药杂志，2002，24(3)：120-121)。其花、皮与根的化学成分和药理作用已研究，而木棉叶的化学成分仅有报道从中分离到报道从木棉叶分离纯化得到芒果苷、牡荆素、槲皮素等(李明.木棉叶化学成分研究.中国中药杂志，31(11)：934-935)。

发明内容

本发明公开了一种木棉叶总酚提取物。它是从木棉的叶中用极性溶剂提取，浓缩干燥得到。所述的极性溶剂优选水或乙醇的水溶液。乙醇的浓度优选10％-100％，为体积百分比。更优选的乙醇的浓度为40％-80％。

除了上述用极性溶剂提取，更优选提取物进一步包括：将干燥后的提取物用水溶解后，上大孔树脂柱，用含水的乙醇的溶液梯度洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，干燥，即得。

其中大孔树脂优选自D-101、AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-600或HPD-826。

洗脱用乙醇的浓度优选10％-100％。进一步优选的乙醇浓度为10-30％。

用木棉叶提取时，极性溶剂的重量优选木棉叶重量的5-20倍。

本发明的木棉叶总酚提取物，其中木棉叶总酚的含量为50％～95％重量百分比；木棉叶总酚中含芒果苷(mangiferin)的含量为40％～85％重量百分比。

其中所述的芒果苷(mangiferin)，即结构式为C₁₉H₁₈O₁₁，化学式为2-beta-D-Glucopyranosyl-1，3，6，7-tetrahydroxy-9H-xanthen-9-one的化合物。

可采用紫外分光光度法，以芒果苷为对照品，在258nm波长处测定木棉叶总酚提取物中木棉叶总酚的含量。

当色谱条件为：C₁₈柱，规格为4*250nm，柱温30℃，流动相为0.1％冰乙酸和乙腈，梯度洗脱，洗脱程序为0min时，0.4％冰乙酸∶乙腈为90∶10；5min时0.4％冰乙酸∶乙腈为82∶18；20min时0.4％冰乙酸∶乙腈为78∶22；30min时0.4％冰乙酸∶乙腈为50∶50；45min时0.4％冰乙酸∶乙腈为30∶70；，流速1mL/min，紫外检测器，检测波长258nm，可测定芒果苷的含量。

本发明的木棉叶总酚提取物中还含有异芒果苷、牡荆素、异牡荆素的至少一种。

本发明所述的木棉叶优选木棉或长果木棉。进一步优选木棉。

本发明还公开了一种木棉叶总酚提取物的药物组合物，它包括木棉叶总酚提取物及药学上可接受的载体。

本发明所述的药物组合物包括所述木棉叶总酚提取物。本发明的木棉叶总酚提取物为包含多种活性成分的混合物，因此，该提取物本身也应当被视为本发明所述的药物组合物。

上述两种药物组合物均可以进一步包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。例如，一种药物组合物是可以木棉叶总酚和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定比例混合而成；也可以是要木棉叶总酚提取物、其他中药提取物和药学上可接受的载体和/或赋形剂按照一定的比例混合而成。

本发明的木棉叶总酚提取物可与药学上可接受的载体混合，制成各种制剂，如片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、滴丸剂、泡腾片、软膏剂、糖浆剂、注射剂、口服液、合剂、酊剂、缓释剂、控释剂或靶向制剂等。药学上可接受的载体如：填充剂乳糖、蔗糖、玉米淀粉、山梨醇；粘合剂如糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、羟丙基甲基纤维或聚乙烯吡咯烷酮；润滑剂如硬脂酸镁；崩解剂如淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、交聚维酮、微晶纤维素，润湿剂如十二烷基硫酸钠等。

药理试验证明，本发明的木棉叶总酚提取物具有优异的降血糖效果，可用于预防或治疗2型糖尿病。

药效学试验结果表明，木棉叶总酚提取物在正常空腹小鼠灌胃给药后，血糖无变化；对肾上腺性高血糖小鼠空腹血糖低、中、高剂量组与模型组比较都明显降低血糖，有剂量依赖性；提取物能有效的改善STZ致小鼠糖尿病，降低糖尿病小鼠血糖浓度；能有效的改善小鼠糖耐量，并呈剂量依赖性。

急性毒性试验结果表明，木棉叶总酚经灌胃给药途径，ICR小鼠的食量、体重未见异常，LD₅₀＞5.2g/kg，表明毒性低，具有良好的用药安全性。

下面是部分药效学试验及结果：

一、木棉叶总酚提取物对正常小鼠空腹血糖的影响

将48只18-22g雄鼠按体重随机分成五组，禁食不禁水12h后，空白组灌胃给予0.1ml/10g0.9％生理盐水，给药组灌胃给予0.1ml/10g木棉叶总酚提取物(实施例1样品25mg/kg，50mg/kg，100mg/kg)，阳性药组给予0.1ml/10g的20mg/kg格列美脲。两小时后一次性眼眶取血20ul，邻甲苯胺法测血糖，观察血糖的变化。

小鼠灌胃给药后，测其2h空腹血糖。与空白组比较，木棉叶总酚剂量组血糖无变化，格列美脲组血糖明显降低(P＜0.05)。

表1  木棉叶总酚提取物对正常小鼠空腹血糖的影响(x±s，n＝8)

^*P＜0.05

二、木棉叶总酚提取物对肾上腺素引发高血糖小鼠的影响

48只18-22g雄性小鼠按体重随机分成六组，禁食不禁水12h，空白组、模型组灌0.1ml/10g0.9％生理盐水，给药组灌同体积的木棉叶总酚提取物(实施例1样品25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg)，阳性药组灌同体积的20mg/kg格列美脲；1.5h后，空白组皮下注射0.1ml/10g生理盐水，其它组皮下注射同体积的200ug/kg盐酸肾上腺素；30min后，一次性眼眶取血20μl，邻甲苯胺法测血糖。

小鼠禁食12h后，灌胃给药，1.5h后皮下注射盐酸肾上腺素，测0.5h的血糖。与空白组比较，模型组血糖显著升高(p＜0.05)；木棉叶总酚提取物组低、中、高剂量组与模型组比较，都明显降低血糖(p＜0.05)，有剂量依赖性，格列美脲也显著降低血糖浓度(p＜0.05)。

表2木棉叶总酚提取物对肾上腺性高血糖小鼠空腹血糖的影响(x±s，n＝8)

^*p＜0.05

三、STZ所致小鼠糖尿病模型实验

80只18-20g雄性小鼠按体重随机分成两组：空白组(10只)、模型组(70只)，禁食不禁水12h；空白组尾静脉注射0.1ml/10g生理盐水，模型组尾静脉注射同体积的100mg/kg链脲菌素；48h后用邻甲苯胺法测空腹血糖，血糖值＞9.5mmol/L为造模成功，取40只造模成功的小鼠，根据血糖高低将模型组随机分成五组：模型组、低、中、高剂量组和阳性药组；空白组、模型组每日灌胃给予0.1ml/10g生理盐水，低、中、高剂量组灌胃给予同体积的木棉叶总酚提取物(实施例1样品100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg)，阳性药组给予同体积的250mg/kg二甲双胍溶液；连续给药三天，第三天给药2h后测其空腹血糖。

小鼠尾静脉注射STZ(100mg/kg)，造模成功后，随机分成5组，并灌胃给药连续三天。与模型组比较，木棉叶总酚提取物中、高剂量组小鼠血糖值显著降低(p＜0.05)，并成剂量依赖性，二甲双胍也明显降低血糖(p＜0.05)。结果显示木棉叶总酚提取物能有效的改善STZ致小鼠糖尿病，降低糖尿病小鼠血糖浓度。

表3  木棉叶总酚提取物对STZ致糖尿病模型小鼠血糖的影响(x±s，n＝8)

^*p＜0.05

四、木棉叶总酚提取物对急性胰岛素抵抗模型小鼠糖耐量的影响

20-22g的雄鼠按体重随机分成六组，禁食不禁水12h；空白组、模型组灌胃给予0.1ml/10g生理盐水，给药组给予同体积的木棉叶总酚提取物(实施例2样品100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg)，阳性药组给予同体积的二甲双胍(250mg/kg)；30min后，腹腔注射0.2ml巨噬细胞上清(收集的巨噬细胞上清按1∶2用生理盐水稀释3倍)；30min后，灌胃给予0.1ml/10g 4g/kg葡萄糖溶液；灌胃给予葡萄糖后，眼眶取血，用邻甲苯胺法测30min、1h、2h空腹血糖浓度。

小鼠禁食12h后，给小鼠灌药，0.5h后注射上清液，0.5h后灌4g/kg的葡萄糖，0.5h，1h，2h后取血。0.5h时小鼠血糖达到峰值，对照组与空白组比较血糖明显升高(p＜0.05)，木棉叶总酚提取物组(除100mg/kg)与对照组比较血糖明显降低并呈剂量依赖性，二甲双胍也明显降低血糖，在1h时呈现一样的情形，2h时血糖都恢复正常。结果提示木棉叶总酚提取物能有效的改善小鼠糖耐量，并呈剂量依赖性。

表4  木棉叶总酚提取物对急性胰岛素抵抗模型小鼠糖耐量的影响

^*p＜0.05

五、急性毒性试验

本实验观察小鼠单次灌服木棉叶总酚提取物后，由于吸收所产生的毒性反应和死亡情况。结果表明本发明提供的木棉叶总酚提取物5.2g/kg(相当于生药量52g/kg)灌胃给药后，14天内小鼠均无一死亡，且小鼠的饮食、活动、皮毛色泽、粪便、口、眼、鼻分泌物等无异常，14d后处死小鼠，肉眼观察其心、肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官未有异常变化。因此木棉叶总酚灌胃给药的LD₅₀＞5.2g/kg.

实验材料

1.1动物

ICR小鼠，清洁级，18-22g，雌雄兼用。

1.2受试药物

从木棉叶中提取的木棉叶总酚提取物(按实施例1、2工艺方法制备，含量大于50％)

2、实验方法

ICR小鼠20只，体重18～22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水12h。实验时给药组小鼠每只以受试药物的最大可灌胃浓度(提取物0.13g/ml生药量1.3g/ml)和小鼠的最大可灌胃容量(0.4ml/10g)一次给予提取物5.2g/kg(相当于生药量52g/kg)，对照组小鼠给予等体积的0.5％的CMCNa溶液。给药量已达最大体积。实验时室温25±2℃，，观察14d内小鼠的饮食、活动、皮毛、粪便、口、眼、鼻分泌物等反应，14d后用颈椎脱臼法处死小鼠，进行解剖观察其心、肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官。

3、实验结果

在急性毒性试验过程中，给药小鼠均无一死亡，小鼠的饮食、活动、皮毛色泽、粪便、口、眼、鼻分泌物等无异常，14d后处死小鼠，肉眼观察其心、肝、肺、肾、胃、肠等内脏器官未有异常变化。

4、结论

木棉叶总酚提取物灌胃给药的LD₅₀＞5.2g/kg，这个结果提示该提取物在用于临床时毒性不大，这说明经过本发明制备工艺处理后的样品明显无毒

本发明具备以下优点：

1、本发明提供的木棉叶总酚提取物的制备工艺能有效的富集。去除杂质，其木棉叶总酚含量高，质量控制可以通过紫外分光光度法和高效液相色谱法进行含量测定分析，该方法简单易行可控。

2、该木棉叶总酚提取物具有明显的治疗2型糖尿病的作用。

3、急性毒性试验表明木棉叶总酚提取物的毒性低，具有很好的用药安全性。

4、本发明提供的提取物制备方法简单、快捷、重现性好；所选用的溶剂低廉、无毒。

具体实施方式

实施例1

取木棉叶50kg，用药材重量的12倍的60％乙醇，热回流提取三次，每次2小时。提取液浓缩后，静置过夜，滤过，残留物即为木棉叶总酚提取物5.4kg。

实施例2

取木棉叶50kg，用药材重量的15倍的70％乙醇，热回流提取三次，每次1小时。提取液浓缩后上AB-8大孔树脂柱，先用4倍量水洗脱去杂质，再用7倍量30％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩即得木棉叶总酚提取物4.7kg。

实施例3

取实施例2方法制备的提取物400mg和微粉硅胶200mg，过60目筛充分混匀，加入适量硬脂酸镁混合，干法制粒。过40目筛，灌装成胶囊剂。

Claims (6)

1.一种木棉叶总酚提取物，其特征在于该提取物从木棉的叶中用极性溶剂提取，浓缩干燥，干燥后的提取物用水溶解后，上大孔树脂柱，用含水乙醇的溶液梯度洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，干燥，即得，其中洗脱用乙醇的浓度为10％-30％，大孔树脂选自D-101、AB-8、HPD-100、HPD-300、HPD-400、HPD-600或HPD-826；其中极性溶剂是水和/或乙醇。

2.权利要求1的木棉叶总酚提取物，其中乙醇的浓度为10％-100％，为体积百分比。

3.权利要求2的木棉叶总酚提取物，其中乙醇的浓度为40％-80％。

4.权利要求1的木棉叶总酚提取物，其中极性溶剂的重量是木棉叶重量的5-20倍。

5.一种预防或治疗2型糖尿病的药物组合物，由权利要求1至4中任一项的木棉叶总酚提取物及药学上可接受的载体组成。

6.权利要求1至4中任一项的木棉叶总酚提取物在制备预防或治疗2型糖尿病药物中的应用。