CN102100692A

CN102100692A - 异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途

Info

Publication number: CN102100692A
Application number: CN2009102013645A
Authority: CN
Inventors: 陈道峰; 何常明; 李国雄
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Fudan University
Priority date: 2009-12-17
Filing date: 2009-12-17
Publication date: 2011-06-22
Anticipated expiration: 2029-12-17
Also published as: CN102100692B

Abstract

本发明属中药制药领域，涉及式1的异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的新用途。本发明从豆科槐属植物山豆根Sophora tonkinensis乙酸乙酯部位提取黄酮类化合物并通过体外细胞毒活性筛选试验证实其对肺癌、前列腺癌、鼻咽癌或大肠癌肿瘤细胞株具有较强的抑制作用。其中所述化合物对鼻咽癌细胞抑制作用的GI₅₀为5.41～7.19μg/mL，对肺癌细胞抑制作用的GI₅₀为6.48～7.21μg/mL，对前列腺癌细胞抑制作用的GI₅₀为5.10～5.15μg/mL，对大肠癌细胞抑制作用的GI₅₀为7.52～14.81μg/mL。本发明所述的化合物可进一步制备抗肿瘤药物，用于临床治疗肺癌、前列腺癌、鼻咽癌或大肠癌。

Description

异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途

技术领域

本发明属中药制药领域，涉及药物新用途，具体涉及中药山豆根中异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的新用途。

背景技术

临床实践显示，在多种疾病中，癌症一直是威胁人类生命最可怕的疾病之一。据世界卫生组织(WHO)公布的数据，仅2005年全球就有760万人死于癌症。相关专家预言，到2020年全球每年的癌症死亡人数将增加一倍左右，未来10年中约有8400万人死于癌症。因此，寻找有效的抗癌药物已成为当务之急。在抗癌药物研究中，化疗药物的研究和临床应用已取得很大进展。化学合成的抗癌药如金属配合物铂络合物、鎵盐、有机锗化合物、锡配合物等，虽然具有抗癌性强，抗瘤广谱等特点，但也存在毒副作用大，造价高，水溶性差等缺陷。近几年来，研究者们逐渐将目光投向资源丰富、纯天然的中草药，希望从中草药中寻找新的抗癌药物。现有技术公开了从中草药中分离得到的天然产物如紫杉醇、喜树碱、长春新碱、鬼臼毒素等均表现了良好的抗癌活性并在临床上得到了广泛的应用，日益证明从天然产物中筛选抗肿瘤药物是一个很有前景的方向。

山豆根为豆科(Leguminosae)槐属(Sophora)植物山豆根(S.tonkinensis)的干燥根及根茎，味苦性寒；有毒，有清热解毒，消肿利咽的功效，用于火毒蕴结，咽喉肿痛，齿龈肿痛。山豆根主要化学成分为生物碱、黄酮和三萜等，其中黄酮类成分有一定的抗肿瘤活性。邓银华等从山豆根中分离得到一个新的黄酮成分，命名为Tonkinensisol，该化合物显示了体外抗HL-60肿瘤细胞活性，IC₅₀值为36.48μg/mL。

本发明试图对山豆根中异戊烯基二氢黄酮类化合物的抗肿瘤作用做进一步深入研究，以期发现其中的对细胞毒活性良好的天然产物，为筛选高效、低毒的抗肿瘤药物提供依据。

发明内容

本发明的目的是提供新的具有抗肿瘤活性的物质，为筛选高效、低毒的抗肿瘤药物提供依据。具体涉及山豆根中提取的活性物质异戊烯基二氢黄酮类化合物，包括山豆根色烯素(1)、2-(3-hydroxy-2，2-dimethyl-8-prenyl-6-chromanyl)-7-hydroxy-8-prenyl-4-chromanone(2)。

本发明的进一步目的是提供上述山豆根中异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

本发明采用现代药理筛选方法，对植物药中抗肿瘤活性物质进行研究，从豆科槐属植物山豆根(Sophora tonkinensis)中乙酸乙酯部位提取活性物质异戊烯基二氢黄酮类成分并证实其有抗肿瘤活性。

本发明所述的异戊烯基二氢黄酮类化合物具有如下式的化学结构：

其中，R＝H，Δ¹¹”^，12”时，为化合物山豆根色烯素(1)；

R＝OH时，为化合物2-(3-hydroxy-2，2-dimethyl-8-prenyl-6-chromanyl)-7-hydroxy-8-prenyl-4-chromanone。

本发明所述的化合物通过下述方法制备：

山豆根药材(25kg)，以95％乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩得浸膏4.8kg。取浸膏1.0kg，悬浮于水中，依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并分别浓缩至干。取乙酸乙酯部位浸膏200g，进行硅胶柱色谱(柱规格：11x85cm，硅胶：200-300目，2.0kg)，以石油醚-丙酮梯度洗脱，所得流份再以不同洗脱剂进行硅胶柱色谱，分离得到化合物山豆根色烯素(1)、2-(3-hydroxy-2，2-dimethyl-8-prenyl-6-chromanyl)-7-hydroxy-8-prenyl-4-chromanone(2)。

其中，山豆根色烯素(1)C₃₀H₃₄O₄，淡黄色无定型粉末。¹H NMR(CDCl₃，400MHz)8ppm 7.78(1H，d，J＝8.9Hz，H-5)、7.08(1H，d，J＝2.0Hz，H-6’)、6.84(1H，d，J＝2.0Hz，H-2’)、6.56(1H，d，J＝8.9Hz，H-6)、6.56(1H，d，J＝8.5Hz，H-12”)、5.62(1H，d，J＝8.5Hz，H-11”)、5.32(1H，dd，J＝13.6Hz，3.2Hz，H-2)、5.28(1H，br t，J＝7.0Hz，H-7”)、5.26(1H，br t，J＝7.0Hz，H-2”)、3.42(2H，d，J＝7.0Hz)、3.22(2H，d，J＝7.0Hz)、3.02(1H，dd，J＝13.6，17.4Hz，H-3β)、2.82(1H，dd，J＝17.4，3.2Hz，H-3α)、1.76(6H，s，H-5”，10”)、1.74(6H，s，H-4”，9”)、1.41(6H，s，H-14”，H-15”)；¹³C NMR(CDCl₃，100MHz)δppm191.8(C-4)、161.3(C-7)、160.2(C-8a)、150.7(C-4’)、135.2(C-3’)、132.4(C-3”)、131.0(C-8”)、130.6(C-1’)、129.4(C-12”)、127.2(C-5)、126.5(C-2”)、122.3(C-6”)、122.3(C-2’)、121.9(C-5’)、121.1(C-6’)、120.9(C-11”)、115.0(C-4a)、114.5(C-8)、110.4(C-6)、80.4(C-2)、79.6(C-13”)、44.0(C-3)、29.7(C-6”)、28.2(C-14”)、28.1(C-15”)、25.8(C-5”，10”)、22.3(C-1”)、17.9(C-9”)、17.8(C-4”)。

其中，2-(3-hydroxy-2，2-dimethyl-8-prenyl-6-chromanyl)-7-hydroxy-8-prenyl-4-chromanone(2)，白色针晶。¹H NMR(Acetone-d₆，400MHz)δppm 7.60(1H，d，J＝8.6Hz，H-5)、7.18(1H，br s，H-6’)、7.04(1H，br s，H-2’)、6.62(1H，d，J＝8.6Hz，H-6)、5.42(1H，dd，J＝13.2Hz，3.0Hz，H-2)、5.24(1H，br t，J＝6.8Hz，H-7”)、5.22(1H，br t，J＝6.8Hz，H-2”)、4.12(1H，J＝5.3Hz，OH-12”)、3.80(1H，m，H-12”)、3.12(1H，dd，J＝13.2，17.4Hz，H-3β)、2.80(1H，dd，J＝17.4，3.0Hz，H-3α)、2.70～3.00(2H，m，H-1”，H-6”)、1.72(3H，s，H-10”)1.70(3H，s，H-5”)、1.64(3H，s，H-9”)、1.62(3H，s，H-4”)、1.40(3H，s，H-15”)、1.22(3H，s，H-14”)；¹³C NMR(Acetone-d₆，100MHz)δppm 190.9(C-4)、162.2(C-7)、161.9(C-8a)、151.7(C-4’)、135.4(C-3’)、132.1(C-)、131.6(C-8”)、131.5(C-3”)、130.1(C-1’)、127.6(C-5)、126.4(C-6’)、126.2(C-2’)、123.7(C-7”)、123.2(C-2”)、120.9(C-5’)、116.5(C-4a)、115.4(C-8)、110.4(C-6)、80.4(C-2)、78.0(C-13”)、69.9(C-12”)、44.6(C-3)、32.5(C-11”)、29.2(C-6”、)26.2(C-10”)、25.8(C-5”)、22.8(C-1”)、20.6(C-14”)、20.5(C-15”)、17.9(C-4”)、17.9(C-9”)。

本发明经体外实验证实，所述的山豆根中异戊烯基二氢黄酮类成分对肺癌细胞(A549)、前列腺癌细胞(DU145)、鼻咽癌细胞(KB)及大肠癌细胞(HCT-8)均有明显的细胞毒活性。其中，山豆根色烯素活性较强，对KB、A549、DU145及HCT-8的GI₅₀分别为5.41μg/mL、6.48μg/mL、5.10μg/mL和7.52μg/mL。

本发明所述的山豆根中异戊烯基二氢黄酮类化合物可进一步制备抗肿瘤药物，用于临床治疗肺癌、前列腺癌、鼻咽癌或大肠癌。

表1是山豆根中黄酮类化合物对A549、DU145、KB及HCT-8等4种肿瘤细胞株体外细胞毒性试验结果(GI₅₀ in μg/mL)。

表1

附图说明：

图1是山豆根乙酸乙酯部位所得异戊烯基二氢黄酮类化合物的提取分离流程图。

具体实施方式

实施例1制备山豆根黄酮类成分

取山豆根药材(25kg)以95％乙醇渗漉提取，提取液减压浓缩得浸膏4.8kg。取浸膏1.0kg，悬浮于水中，依次以石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，并分别浓缩至干。取乙酸乙酯部位浸膏200g，进行硅胶柱色谱(柱规格：11x85cm，硅胶：200-300目，2.0kg)，以石油醚-丙酮梯度洗脱，所得流份再以不同洗脱剂进行硅胶柱色谱，具体步骤如下：

1、石油醚-丙酮(10∶1)洗脱所得的流份以石油醚-乙酸乙酯(5∶1，2∶1)硅胶柱色谱得4个流份1A～1D。流份1A以石油醚-丙酮(5∶1)硅胶柱色谱得山豆根色烯素(1，100mg)。

2、石油醚-丙酮(5∶1)洗脱所得的流份以石油醚-乙酸乙酯(4∶1，2∶1)硅胶柱色谱得到6个流份：2A～2F。流份2E以石油醚-乙酸乙酯(3∶1)硅胶柱色谱，重结晶得化合物2-(3-hydroxy-2，2-dimethyl-8-prenyl-6-chromanyl)-7-hydroxy-8-prenyl-4-chromanone(2，18mg)。

实施例2体外细胞毒试验

4种肿瘤细胞株A549、DU145、KB及HCT-8在含25mM HEPES、0.2％(w/v)碳酸氢钠和100μg/mL卡那霉素的10％小牛血清RPMI1640培养液4mL的T-25烧瓶中，37℃，5％CO₂的条件下培养。经胰蛋白酶消化后的细胞悬浮液加入96孔板中，细胞浓度为0.25-1×10⁴/孔。肿瘤细胞加入不同浓度的待测组分在37℃培养72小时后，用冰冷的50％三氯乙酸固定并用0.4％的(SRB)染色，待染料溶解后，562nm下测定吸收值。细胞半数生长抑制时的药物浓度(GI₅₀)按照量效数据进行换算。每个实验重复三次，吸收值差异小于5％，GI₅₀差异小于30％。

本发明实验采用的试剂均为本领域公知技术，可市购。

Claims

1.式I结构的异戊烯基二氢黄酮类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途，

其中，R＝H，Δ¹¹”^，12”；或，R＝OH。

2.按权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤是肺癌。

3.按权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤是前列腺癌。

4.按权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤是鼻咽癌。

5.按权利要求1所述的用途，其中所述的肿瘤是大肠癌。