CN102090989A

CN102090989A - 黄柏多糖抗紫外照射的用途及其抗紫外防晒剂的制备方法

Info

Publication number: CN102090989A
Application number: CN 201110029481
Authority: CN
Inventors: 闫荟; 孙世光; 张卫东; 王苏会; 孙晓迪; 张京; 王瑞
Original assignee: General Hospital Of Beijing Military Command P L A
Current assignee: General Hospital Of Beijing Military Command P L A
Priority date: 2011-01-27
Filing date: 2011-01-27
Publication date: 2011-06-15
Anticipated expiration: 2031-01-27
Also published as: CN102090989B

Abstract

本发明涉及黄柏多糖抗紫外照射的用途及其抗紫外防晒剂的制备方法，包括以下步骤：油相物的制备：白凡士林2-10质量份，液状石蜡1-2份，羊毛脂1-2份，将上述原料混合后，不断搅拌下加热至95℃，得油相物；水相物的制备：甘油2-20份，黄柏多糖0.05-2.0份，水5-80份，将甘油、黄柏多糖加入60℃水中，边搅拌边在60℃水浴加热，得水相物、油相物水相物的混合；将上述油相物和水相物混合，充分搅拌混合均匀，根据水相物的份数制备成相应的霜剂或乳剂。

Description

黄柏多糖抗紫外照射的用途及其抗紫外防晒剂的制备方法

技术领域

本发明涉及黄柏多糖抗紫外照射的新用途及其抗紫外防晒剂的制备方法。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，是人体的第一道防线，它覆盖全身，不仅具有防御保护、调节体温、吸收、分泌、排泄、参与代谢和免疫等生理功能，而且是人体最大的感觉表情器官和最引人注目的美感器官。拥有健康而美丽的皮肤是人们梦寐以求的目标。然而，由于皮肤直接与外环境相接触，受环境因素的影响最为显著，尤其在身体暴露部位(面颈部、上臂等)的皮肤，极易受到各种不良作用的刺激与伤害，引起外观及功能上的异常，在这些不良作用中，紫外线的伤害最为严重。

紫外线(UVR)依据波长的不同生物学效应分为UVC(200～290nm)、UVB(290～320nm)、UVA(320～400nm)，UVC可被大气层滤掉而不能到达地面，因而对人体皮肤几乎没有影响。UVB辐射的主要靶部位在表皮而成为皮肤肿瘤产生的主要因素，小部分可达真皮浅层。UVA主要作用于真皮，其深度可达真皮中部，作用于血管和其他组织，仅对具有光敏感的个体发生作用。相同剂量UVB对皮肤的损伤比UVA约大800-1000倍。UVA尽管能量低，但到达地表的量是UVB的150倍，且有较深的穿透力，可引起真皮变化。事实上，日光中UVA与UVB是不可能分隔的，许多研究表明，UVA有增强UVB的光老化作用。可以说，紫外线是皮肤的第一大杀手，皮肤光老化、皱纹、光敏性皮肤问题、皮肤粗糙、肤色问题、皮肤肿瘤等都与紫外线有直接的关系。特别是随着生态环境的破坏，地球臭氧层变薄，大气层对紫外线的屏障作用减弱，到达地球表面的紫外线增多，对人类的伤害越来越大，紫外线辐射相关性疾病的发病率也逐渐升高。据有关资料统计，当臭氧层减少10％时，到达地面的紫外线辐射可增加2％，皮肤病的发病率将会增加25％-32％。

紫外线辐射引起皮肤的氧化损伤，可诱发各种活性氧(ROS)的产生，包括氢氧根(OH^-)、超氧阴离子(O₂ ^-)、单线态氧(1O₂)和过氧化氢(H₂O₂)等，ROS可引发多种生物学过程，细胞中产生的过量ROS如不及时清除，就会造成细胞内生物大分子的损伤，引起细胞氧化还原状态改变，诱导细胞凋亡。ROS通过引起炎性因子分泌、诱导DNA损伤及诱导细胞凋亡等多条途径造成皮肤急慢性损害。如红斑、水疱、日晒黑、炎症、皮肤皱纹、色素沉着、眼睛损伤、免疫系统抑制等，在临床上引发日晒伤、多形性日光疹、光老化、光致癌等皮肤病。

紫外线对皮肤具有免疫抑制作用。皮肤是紫外线照射后最易遭受损伤的免疫器官，UVA和UVB均能影响皮肤的免疫系统，可以通过直接或间接诱导皮肤细胞释放细胞因子白介素(IL)-1、IL-4、IL-6、IL-10、IL-37，趋化因子IL-8，以及肿瘤坏死因子(TNF)-α等，引起皮肤免疫抑制。

经研究发现，黄柏中含有的小檗碱具有一定的抗紫外性能。但黄柏多糖抗紫外照射的作用未见研究报道。

发明内容

本发明的目的发现了黄柏多糖抗紫外照射的用途及其提供抗紫外防晒剂的制备方法，所述方法包括以下步骤：

a.油相物的制备：白凡士林2-10质量份，液状石蜡1-2份，羊毛脂1-2份，将上述原料混合后，不断搅拌下加热至95℃，得油相物；

b.水相物的制备：甘油2-20份，黄柏多糖0.05-2.0份，水5-80份，将甘油、黄柏多糖加入60℃水中，边搅拌边在60℃水浴加热，得水相物；

c.油相物水相物的混合：将上述油相物和水相物混合，充分搅拌混合均匀。

优选地，所述油相物中加入0.5-5份的维生素E。

优选地，所述水相物中加入0.5-1份的维生素C。

优选地，所述水相物中加入0.02-0.05份的乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na₂)。

优选地，所述水相物中加入0.01-0.03份的增溶乳化剂。

更优选地，所述增溶乳化剂为吐温-80。

小檗碱是黄柏中的主要有效成分，现有的研究往往集中于小檗碱的抗紫外活性，本申请人通过离体实验和动物实验发现，黄柏多糖具有明显的抗紫外照射的用途，相同用量其抗紫外照射的作用明显优于小檗碱。并且黄柏多糖无色，小檗碱为黄色，因此制备的防晒剂带有使人不悦的颜色，申请人根据该用途和黄柏多糖无色的特性制备的抗紫外防晒剂，外观透明美观。其中添加抗氧剂维生素E、维生素C，金属螯合剂EDTA-Na₂，以增强制剂中黄柏多糖的稳定性。添加增溶乳化剂增强制剂的稳定性。

具体实施方式

下面对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

第一实施方式

现有技术中黄柏多糖的提取多采用以下方法首先脱脂处理，热水提取，收集提取液，进行浓缩，得浓缩液a，然后按以下制备方法操作：

(1)将浓缩液a用壳聚糖进行絮凝，收集沉淀，烘干，得黄柏多糖。

(2)将浓缩液a中加入一定量乙醇静置，得沉淀，收集沉淀，烘干，得黄柏多糖。

(3)将浓缩液a用Sevag法、或三氟三氯乙烷法、或三氯醋酸法、或酶法去除蛋白质。对样品进行离心或抽滤除去蛋白质沉淀，得滤液，将滤液中加入一定量乙醇静置，得沉淀收集沉淀，烘干，得黄柏多糖。

本申请人采取以下的制备方法：

a.使用3-15倍黄柏粗粉的无水乙醇回流脱脂；

b.滤渣回流提取，提取液趁热抽滤；

c.提取液加木瓜酶，40℃水浴1-3小时，用氯仿∶正丁醇＝5∶1萃取，弃沉淀和有机层；

d.将95％的乙醇加入提取液，边加边搅拌，至醇浓度至50-80％。

e.冷冻干燥或80℃以下干燥，得黄柏多糖粉末。隔绝空气备用。

第二实施方式

离体实验

1.1黄柏多糖对氧自由基的抑制作用

原理：邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出超氧阴离子，生成的中间产物在紫外区有吸收。经波长扫描，在320nm处有最大吸收。经时间扫描，该反应在4min后趋于平缓。

方法：在具塞试管中依次加入100μg/ml供试液4ml，0.05mol/L pH8.2的Tris-HCl 4ml，37℃水浴预热10min，再加入4mN-1mN邻苯三酚-盐酸溶液1ml，混匀后在37℃水浴中以跑表计时准确反应4min，立即用6mol/L HCl1ml终止反应。抑制率(E)＝(A_Emax-A_样品)/(A_Emax-A_Emin)，式中Emin为以水代替供试液、Tris-HCl，Emax为以水代替供试液。

结果：实验结果表明，黄柏多糖对氧自由基的生成有一定的抑制作用，见表1。

表1黄柏多糖对氧自由基的抑制作用

1.2黄柏多糖对DPPH的清除作用

原理：DPPH(2，2-Diphenyl-1-picrvlhvdrazyl)是一种带有不配对电子的比较稳定的自由基，其N原子上有一个游离电子。DPPH的40％乙醇-水溶液在526nm处有最大的吸收峰。加入抗氧化剂后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，在526nm处的吸收减弱。

方法：在棕色容量瓶中加入100μg/ml供试液6ml，60μg/ml DPPH醇溶液4ml中，混匀后在室温下反应30min。对DPPH自由基的清除率(E)＝(A_Emax-A_样品)/A_Emax，式中Emax为以水代替供试液。

结果：实验结果表明，黄柏多糖对DPPH自由基有较强的清除作用，见表2。

表2黄柏多糖对DPPH的抑制作用

1.3黄柏多糖对羟自由基的抑制作用

原理：采用Fenton体系测定黄柏多糖对羟自由基的抑制作用。羟自由基由EDTA-Fe-H₂O₂产生，由于羟自由基可特异性地使番红花红T褪色，根据褪色程度可以衡量羟自由基生成量。经波长扫描，反应体系在554nm处有最大吸收。

方法：在具塞试管中依次加入100μg/ml番红花红T 2ml，0.2mol/L pH7.4的PBS 2ml 100μg/ml供试液2ml，03％H₂O₂2ml，0.15mmol/L EDTA-Fe²⁺2ml，混匀后37℃水浴30min。抑制率(E)＝(A_样品-A_Emin)/(A_Emax-A_Emin)，式中Emin为以水代替供试液，Emax为以水代替供试液和EDTA-Fe²⁺。

结果：实验表明。黄柏多糖清除羟自由基的能力随剂量的增加而降低。结果见表3。

表3黄柏多糖对羟自由基的抑制作用

第三实施方式

SD大鼠抗紫外辐射实验

2.1实验动物

SD大鼠，雌雄各半，体重180±20g，合格证号SCXK-(军)2007-004。

饲养条件：室内饲养，每日明-暗时间为16:8h。

2.2实验仪器

紫外辐照计，北京师范大学光电仪器厂。

飞利浦Nb-UVB灯，广州朗科光电科技有限公司。

UV-2450紫外分光光度计，日本岛津公司。

2.3实验试剂

GSH-Px测试盒(生产批号20101014)、CAT测试盒(生产批号20101018)、SOD测试盒(生产批号20101014)、T-AOC测试盒(生产批号20101018)，南京建成。

IL-10测试盒(生产批号3R045)、TNF-α测试盒(生产批号3R080)，RB

NaS，国药集团化学试剂北京有限公司。

2.4实验方法

2.4.1照射剂量

紫外线光源为UVB灯管，功率为5-50瓦，波长范围300～320nm。将UVB灯平行设置，光源距大鼠垂直距离为5-60cm，应用UVB紫外辐照计标定其辐照强度为20-200μW/cm²，照射时间10-120min，连续照射5-30天。每只大鼠受到紫外线照射的总辐照强度为0.06-43.20J/cm²。

2.4.2实验步骤

将80只SD大鼠(雌雄各半)用7-9％NaS水溶液(避光)背部脱毛，脱毛面积为3×3cm²。脱毛后，将SD大鼠随机分为5组，每组16只。①正常对照组；②模型对照组；③黄柏多糖高剂量(800μg/kg)组④黄柏多糖中剂量(400μg/kg)组；⑤黄柏多糖低剂量(200μg/kg)组。

适应性饲养一周后，按剂量各组SD大鼠口服灌胃给药并照射，连续5-30天。第5-30天灌药及照射后禁食不禁水12小时，第6-31天，腹主动脉取血，取脏器(肝脏，心脏，脾脏，肾脏)。

血样处理：血液凝固后2000-4000r/min，离心10-15min，取血清，-20℃以下保存。按SOD、CAT、T-AOC、GSH-Px和IL-10、TNF-α测试盒说明书操作，测定血清中的各项指标。

2.5实验结果

表4黄柏多糖抗氧化及免疫指标检测结果(1)

注：^*表示与空白对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001；△表示与模型对照组比较^△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001

表5黄柏多糖抗氧化及免疫指标检测结果(2)

注：^*表示与空白对照组比较^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001；^△表示与模型对照组比较△P＜0.05，^△△P＜0.01，^△△△P＜0.001

结论：选取SD大鼠(雌雄各半)，采用UVB光源照射，功率为5-50瓦，波长范围300～320nm。将UVB灯平行设置，光源距大鼠垂直距离为5-60cm，应用UVB紫外辐照计标定其辐照强度为20-200μW/cm²，照射时间10-120min，连续照射5-30天。每只大鼠受到紫外线照射的总辐照强度为0.06-43.20J/cm²。将SD大鼠按不同剂量分组，按剂量各组SD大鼠口服灌胃给药并照射。连续照射完成预定天数后，取SD大鼠血样检测。测定其超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、血清总抗氧化力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素10(IL-10)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等，结果显示，黄柏多糖不同程度地对上述指标有增强的作用。

第四实施方式

抗紫外防晒霜的制备方法：

油相物的制备：白凡士林6份，液状石蜡1份，羊毛脂1份，将上述原料混合后，不断搅拌下加热至95℃，得油相物；

水相物的制备：甘油10份，黄柏多糖1份，水10份，将甘油、黄柏多糖加入60℃水中，边搅拌边60℃水浴加热，得水相物；

油相物水相物的混合：将上述油相物和水相物混合，充分搅拌混合均匀，根据水相物的份数制备成霜剂。

抗紫外防晒乳剂的制备方法：

油相物的制备：白凡士林2份，液状石蜡1份，羊毛脂1份，维生素E 1份将上述原料混合后，不断搅拌下加热至95℃，得油相物；

水相物的制备：甘油10份，黄柏多糖2.0份，维生素C 1份，EDTA-Na₂0.03份，水60份，将甘油、黄柏多糖加入60℃水中，边搅拌边60℃水浴加热，得水相物；

油相物水相物的混合：将上述油相物和水相物混合，加入吐温800.02份充分搅拌混合均匀，根据水相物的份数制备成乳剂。

尽管本发明的实施方式已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里列出与描述的图例。

Claims

1.黄柏多糖抗紫外照射的用途。

2.一种黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述油相物中加入0.5-5份的维生素E。

4.如权利要求2所述的黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述水相物中加入0.5-1份的维生素C。

5.如权利要求2所述的黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述水相物中加入0.02-0.05份的乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na₂)。

6.如权利要求2所述的黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述水相物中加入0.01-0.03份的增溶乳化剂。

7.如权利要求6所述的黄柏多糖抗紫外防晒剂的制备方法，其特征在于所述增溶乳化剂为吐温-80。