CN102085293A - 具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物,该提取物用以下方法制得:以短葶山麦冬根为原料以乙醇提取,提取液用正丁醇萃取得粗提物;取粗提物加水溶解,使该粗提物溶液通过非极性大孔树脂柱,先以水洗脱至洗脱液无色,再以乙醇的水溶液洗脱,收集洗脱液至洗脱液无色,得所述的短葶山麦冬提取物;本发明还提供了上述短葶山麦冬提取物的制备方法。
Description
技术领域
本发明提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制备方法,尤其是含有甾体皂苷类和倍半萜葡萄糖苷类成分的短葶山麦冬提取物,以及该提取物的制备提纯方法。
背景技术
短葶山麦冬(Liriope musacarli(Decne.)Bailey)属于百合科山麦冬属植物,其块根历来一直作为麦冬药材的替代品使用;《中国药典(一部)》收载短葶山麦冬作为山麦冬的药材来源之一。
短葶山麦冬皂苷C是从短葶山麦冬中提取的一种单体化合物,已有研究表明,其具有良好的抗S180实体瘤和艾氏腹水癌的活性。
短葶山麦冬皂苷C的提取方法是将短葶山麦冬药材粗粉先用甲醇提取,再依次经乙醚、正丁醇萃取,正丁醇萃取物经Sephadex LH-20和硅胶柱层析后得到的单体化合物。
技术人员发现,短葶山麦冬皂苷C的出率低,制备成本高,应用到医药领域的市场直接导致患者的治疗成本大幅增加,因此降低应用成本是药品进入市场流通的必然。但是最可行的降低成本的有效路径就是不提纯单体,将其改为提取有效部位是业内公知的并且通用的技术手段。有效部位,主要指的是提取物相对于单体出率高,制备成本低,适合临床使用,并能有效降低治疗成本,患者顺应性也很好。但是医药用途的有效部位并非简单的有效成分等的混合,而是必须针对特定的目的(治疗效果)经过特殊工艺手段去芜存菁的、精制后的混合物,这是需要大量的工作以及娴熟的技艺才能胜任的。
目前,医学发现并研究的肿瘤是人体中正在发育的或成熟的正常细胞,在某些不良因素的长期作用下,某部的细胞群,出现的过度增生或异常分化而生成的新生物,在局部形成肿块。但它与正常的组织和细胞不同,不按正常细胞的新陈代谢规律生长,而变得不受约束和控制,导致了细胞呈现异常的形态、功能和代谢,以致可以破坏正常的组织器官的结构并影响其功能。恶性肿瘤细胞还能向周围浸润蔓延,甚至扩散转移到其他器官组织,继续成倍增生,造成对人体或生命极大的威胁。人体在生长的过程中虽常有肿块形成,但肿块不一定都是肿瘤。因此,必须鉴别肿块的性质,才能做到正确诊断、正确治疗。肿瘤在临床上有实体瘤和非实体瘤之分,实体瘤及有形瘤可通过临床检查如x线摄片、CT扫描、B超或触诊扪及到的有形肿块称实体瘤。而X线、CT扫描、B超及触诊无法看到或扪及到的肿瘤如血液病中的白血病就属于非实体瘤。
癌症的分类:血癌(白血病)、骨癌、淋巴癌(包括淋巴细胞瘤)、肠癌、肝癌、胃癌、盆腔癌(包括子宫癌,宫颈癌)、肺癌(包括纵隔癌)、脑癌、神经癌、乳腺癌、食道癌、肾癌。
由此可见,简单地用S180的实验结果不能在临床上定位于人体的任何准确位置的癌症/肿瘤,况且单体对某种肿瘤的瘤株有效并不能证明有效部位同样有效,本发明将用详实的数据证明这一论点,而医学治疗癌症/肿瘤是严格按照肿瘤在人体的生长部位或器官进行医治的,因此,现有技术中关于短葶山麦冬皂苷C以及关于短葶山麦冬的文献对癌症治疗的临床研究仅仅起到引路的作用,而很难认为其作为临床依据或者起到教导的作用。
因此,本领域急需发明一种可以分离出包括短葶山麦冬皂苷C单体在内(但不一定是主要的有效成分)的提取物及其制备方法,目的是可以得到具有确实成分的、治疗效果明确的短葶山麦冬提取物,使得到的提取物可以直接用于医药领域的治疗目的明确的各种制剂,明确规范该植物提取物的医学用途,降低含有短葶山麦冬提取物的产品的副作用以及降低其医药用途风险。
发明内容
本发明经过大量的实验,研制出一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物及其制备方法,该方法简单、高效,分离度高,使得提取物的活性更加有效、准确和针对性强。
本发明目的在于提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物,该提取物具有抗肿瘤、抗癌方面的活性,该效果更正了现有技术中公认的短葶山麦冬皂苷具有治疗实体瘤的医学疗效方面的偏差和误区,颠覆了现有的部分理论,对短葶山麦冬的进一步研究以及短葶山麦冬提取物对肿瘤的治疗具有可贵的指导意义。所述的具有抗肿瘤作用既包括抗肿瘤作用也包括辅助抗肿瘤作用。
本发明的目的在于提供上述短葶山麦冬提取物抗肿瘤,如:肺癌、肝癌和宫颈癌等恶性肿瘤方面的治疗作用。
本发明目的还在于提供一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物的制备方法,其在现有的常规技术得到的短葶山麦冬粗提物,进一步经过精制,从而提纯了活性成分,使其有益的活性效果更加明确。
本发明还提供了一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物,该提取物是按照以下方法制得:以短葶山麦冬根(块根或须根)为原料,以乙醇提取,提取液用正丁醇萃取,得粗提物;取粗提物加水溶解后,使其通过非极性大孔树脂柱,先以水洗脱至洗脱液无色,再以体积浓度51~95%的乙醇溶液洗脱,收集洗脱液至洗脱液无色,得所述的短葶山麦冬提取物。以上述方法得到的短葶山麦冬提取物的重量为100%作为基准进行计算,其中,甾体皂苷类成分含量为2~30%wt,优选5~15%wt,该甾体皂苷类成分包括短葶山麦冬皂苷C。
本发明的短葶山麦冬提取物中,标识性成分为短葶山麦冬皂苷C,其为单体化合物,中文名:鲁斯考皂甙元-1-O-[β-D-吡喃葡萄糖苷(1→2)][β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃岩藻糖苷,简称Lm-3;该单体的色谱峰的保留时间为10~55分钟。经过验证,本发明所述的短葶山麦冬提取物中还含有短葶山麦冬皂苷A、短葶山麦冬皂苷B等同样属于皂苷类的成分。
经过进一步的验证,惊奇的发现本发明的短葶山麦冬提取物中还含有含量为2~20%wt,优选为2~10%的倍半萜葡萄糖苷类成分,特别是除了Liriopeoside A(山麦冬糖苷A)外的4个倍半萜葡萄糖苷类成分是首次在短葶山麦冬中发现,他们分别是:Liriopeoside B(山麦冬糖苷B)、liriopeoside C(山麦冬糖苷C)、Liriopeoside D(山麦冬糖苷D)、liriopeoside E(山麦冬糖苷E),色谱峰的保留时间在5~30分钟。
本发明提取物中的倍半萜葡萄糖苷类成分多为新化合物,本领域内尚没有统一、公认的中文名称,因此参照结构相似且国际公认的Liriopeoside A(在本文中将其中文名称暂译为:山麦冬糖苷A或山麦冬属糖苷A成分名称来命名其他几个倍半萜葡萄糖苷类新成分,其名称分别为:Liriopeoside B(暂译为:山麦冬糖苷B或山麦冬属糖苷B)、liriopeoside C(山麦冬糖苷C或山麦冬属糖苷C)、Liriopeoside D(山麦冬糖苷D或山麦冬属糖苷D)、liriopeoside E(山麦冬糖苷E或山麦冬属糖苷E)。
短葶山麦冬皂苷A:β-sitosterol β-D-glucopyranoside(β-谷甾醇β-D-吡喃葡萄糖苷,简称Lm-1)、短葶山麦冬皂苷B:ruscogenin 1-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-β-D-fucopyranoside(罗斯考皂甙元O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1→2)-β-D-吡喃岩藻糖苷,简称Lm-2)和短葶山麦冬皂苷C:ruscogenin 1-O-[β-D-glucopyranosyl(1→2)][β-D-xylopyranosyl(1→3)]-β-D-fucopyranoside(鲁斯考皂甙元1-O-[β-D-吡喃葡萄糖苷(1→2)][β-D-吡喃木糖基(1→3)]-β-D-吡喃岩藻糖苷,简称Lm-3)结构和分析具体参见Yu B Y,Hirai Y,Shoji J,et al.Comparative studies on the constituents of ophiopogonis tuber and itscongeners.VI.Studies on the constituents of the subterranean part of Liriope spicata var.prolifera andL.muscari.(1).Chem Pharm Bull.1990;38(7):1931-1935。上述短葶山麦冬皂苷C的结构式如下:
本发明提取物中的倍半萜葡萄糖苷类成分,根据化合物的光谱数据、并结合文献报道,进行了化学结构鉴定,结果化合物分别为:
Liriopeoside A:6β-dihydroxy-cis-eudesm-3-ene-6-O-β-D-glucopy-ranoside、
中文译文:山麦冬糖苷A或山麦冬属糖苷A:6β-二羟基-顺-桉叶-3-烯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;
liriopeoside B:1β,4β,6α-trihydroxy-cis-eudesmane-6-O-β-D-glucopyranoside、
中文译文:山麦冬糖苷B或山麦冬属糖苷B:1β,4β,6α-三羟基-顺-桉叶烷-6-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;
liriopeoside C:1α,4β,6β-trihydroxy-cis-eudesmane-6-O-β-D-glucopyranoside、
中文译文:山麦冬糖苷C或山麦冬属糖苷C:1α,4β,6β-三羟基-顺-桉叶烷-6-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;
liriopeoside D:1β,6α-dihydroxy-cis-eudesm-3-ene-6-O-β-D-glucopyranoside、
中文译文:山麦冬糖苷D或山麦冬属糖苷D:1β,6α-二羟基-顺-桉叶-3-烯-6-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;
liriopeoside E:1β,4β,6β-trihydroxy-cis-eudesmane-6-O-β-D-glucopyranoside;
中文译文:山麦冬糖苷E或山麦冬属糖苷E:1β,4β,6β三羟基-顺-桉叶烷-6-O-β-D-吡喃葡萄糖甙;
其结构式依次为:
上述提取物中的皂苷及倍半萜葡萄糖苷类成分的含量测定,本发明采用高效液相色谱法(HPLC)进行检测,一般采用C 18色谱柱,洗脱相为甲醇(10-60%v/v)-水(90-40%v/v)或乙腈(5-50%v/v)-水(95-50%v/v)的混合溶液,更优选乙腈-水梯度洗脱,经紫外检测器或蒸发光散射检测器检测,优选蒸发光散射检测器,以所述的短葶山麦冬提取物的重量为100%计,短葶山麦冬皂苷C含量为:5~15%,保留时间28分钟左右;倍半萜葡萄糖苷类成分含量为:2~10%wt,保留时间分别为7、11、14、16分钟左右。
本发明提供了一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物的制备方法,该方法包括:以短葶山麦冬根(块根或须根)为原料,以乙醇提取,回收溶剂至无醇味,得到的提取液用正丁醇萃取,得粗提物;取粗提物加水溶解,使该粗提物溶液通过非极性大孔树脂柱(如AB-8型,D-101型等大孔树脂柱),以水洗脱,至洗脱液无色,弃去该水洗脱液,目的是去除糖类成分,再以乙醇的水溶液洗脱,收集洗脱液至洗脱液无色,优选再回收溶剂,得到短葶山麦冬提取物。该提取物为精制后的短葶山麦冬提取物。
上述洗脱用乙醇溶液的浓度很重要,经对洗脱用乙醇的浓度的大量筛选试验,结果证明,51~95%的乙醇,尤其85%~95%的乙醇洗脱,才能得到本发明的预期效果。因此,本发明优选体积浓度51~95%的乙醇进行洗脱。
需要说明的是:在本文中,本发明为了规范技术术语,消除歧义,将短葶山麦冬的常规提取方法得到的提取物称之为短葶山麦冬粗提物。
上述提取得到粗提物所采用的提取溶剂是乙醇,该乙醇是药学意义上的相对于稀乙醇而言的体积浓度≥51%的乙醇,一般指的是体积浓度51%~95%的乙醇。本发明上述的稀乙醇指的是乙醇的体积浓度≤50.5%的乙醇溶液。对稀乙醇的界定参见中国药典附录“试液”,95%的乙醇529ml加水至1000毫升得到的乙醇的浓度即为稀乙醇的浓度的上限,经过测算,乙醇浓度20度时就是稀乙醇,即,稀乙醇的最大体积浓度是49.5~50.5%。
所述的短葶山麦冬根以乙醇提取,提取液用正丁醇萃取,该正丁醇的量为短葶山麦冬根重量的0.5~5倍,更优选与短葶山麦冬根的重量相等。
上述在上柱之前还包括将粗提物加水溶解,再过滤,弃去不溶物,滤液上柱,以乙醇的水溶液洗脱的步骤,洗脱时收集洗脱液一般为收集至少4倍柱体积的洗脱液,例如收集4~40倍柱体积的洗脱液,在本发明的优选实施例中,可以收集8~15倍柱体积的洗脱液即可达到本发明的目的和效果。上述柱体积指的是非极性大孔树脂柱的填料填充的体积。
目前也有技术披露提取短葶山麦冬粗提物的方法采用稀乙醇提取,再采用正丁醇或者树脂吸附的方法进行初步除杂。本发明人按照常规方法重复再现提取得到的粗提物经过检测证明纯度不高,含有大量的糖类成分等对肿瘤细胞没有或者少有活性的成分,且呈现出一定抑制活性的目标瘤株所针对的肿瘤部位不明确,缺乏对临床的实际指导意义等缺陷。
本发明的目的在于在现有对短葶山麦冬研究的基础上进一步精制,得到基本上去除糖类成分等杂质的、对有明确分类的瘤株有强活性的短葶山麦冬提取物。
本发明所述的短葶山麦冬粗提物优选通过下述方法制得:以短葶山麦冬根为原料,以相对短葶山麦冬根原料重量的至少4倍量的体积浓度51~95%的乙醇提取,提取液回收乙醇至无味(或者浓缩至稠膏),再用水分散,然后再用正丁醇萃取,取正丁醇层萃取液,回收溶剂,得到即为所述的粗提物。
本发明所述的“稠膏”为本领域公知,其相对密度约在1.3或以上,例如1.35。
上述以短葶山麦冬根为原料的乙醇提取的过程中,乙醇的体积浓度为51~95%,乙醇的量一般优选为短葶山麦冬根原料重量的10~20倍,更优选12~18倍,例如用15倍量的51%以上体积浓度(优选大约85%)的乙醇提取;提取的方法可以任何可行的方法,例如是浸渍、回流等都可以,为了更好地得到有效的短葶山麦冬提取物,本发明优选采用回流的方法,更优选在回流前先浸泡。
上述乙醇提取液回收溶剂后,加水分散的过程中,加水量为短葶山麦冬根原料重量的0.1~10倍,优选0.5~5倍,在本发明的优选实施例中,加等倍量(短葶山麦冬根重量的等倍量)的水分散,再用正丁醇萃取,正丁醇的量为上述加水分散中的水量的0.5~5倍,更优选加入的正丁醇和加入的水大约等量,萃取液回收溶剂,得粗提物。
本发明的原料可为短葶山麦冬或其中间产物短葶山麦冬粗提物,后者可通过市售购得,也可参照《天然药物化学》(第4版,人民卫生出版社)记载的方法得到。
经过反复的、精确的测试实验,上述方法所收集的含短葶山麦冬提取物的流份,即短葶山麦冬提取物中,属于单体化合物的短葶山麦冬皂苷C含量为所得到的该短葶山麦冬提取物的量的2~30%wt,优选5~15%;倍半萜葡萄糖苷含量为所得到的该短葶山麦冬提取物的量的2~20%wt,优选2~10%。
综上所述,可以看出,采用传统的短葶山麦冬提取方法,一般产物为皂苷和糖类及少量其他小分子化合物的混合物,杂质较多。
本发明制得的产物为精制的短葶山麦冬提取物,尽可能去除糖类和小分子及低极性化合物等杂质,得到纯度较高的具有抗肿瘤作用的提取物,包括对在肝脏、肺、胃肠、宫颈等部位的肿瘤和癌症具治疗效果的几乎所有活性成分。
1、短葶山麦冬提取物对H22(肝癌)移植小鼠的作用
实验动物:KM小鼠;瘤原:H22(肝癌);
剂量设计:以200mg/kg为高剂量组剂量,100mg/kg为低剂量组剂量。
方法和结果:
60只KM小鼠分6组,空白对照组、环磷酰胺对照组、提取物高剂量组、提取物低剂量组。常规接种H22。接种后24h给药,每天1次连续给7天,最末次给药24h,处死小鼠,取出瘤块,称重,组间做t检验并计算抑瘤率。试验重复1次。结果见附表:
2、短葶山麦冬提取物对U-14宫颈癌移植小鼠的作用
样品:短葶山麦冬提取物;瘤原:U14;动物:昆明鼠,II级,北京大学医学部实验动物科学部提供,许可证号SCXK(京)2006-0008
3、短葶山麦冬提取物对Lewis肺癌移植小鼠的作用
样品:短葶山麦冬提取物;
瘤原:Lewis肺癌;
动物:C57,II级,北京大学医学部实验动物科学部提供,许可证号SCXK(京)2006-0008;
4、短葶山麦冬提取物对S-180肉瘤移植小鼠的作用
样品:短葶山麦冬提取物;瘤原:S180;小鼠,昆明鼠,雌性,体重18-22g。
上述经过药理药效实验验证,通过建立小鼠移植肿瘤的动物模型,结果验证,本发明制得的短葶山麦冬提取物的抗肺癌、肝癌和宫颈癌的效果与文献记载不尽相同,现有文献记载的是短葶山麦冬皂苷C具有抗腹水癌和S-180肉瘤的作用,本发明经过反复实验,验证了本发明的短葶山麦冬提取物具有lewis肺癌、H-22肝癌和U-14宫颈癌的效果,但抗S-180肉瘤的作用不明显,为研究和应用短葶山麦冬提取物纠正了现有理论可能存在的偏差,提供了准确可信的依据。
本发明中所述的“具有抗肿瘤作用”包括了抗肿瘤的治疗作用和对肿瘤治疗起到的辅助作用。
本发明的优势还在于:服用本发明的提取物后(按照临床指导用量),临川实验数据可见,放化疗患者的副作用和痛苦明显减轻,因此,本发明的短葶山麦冬提取物的有益效果还包括提高肿瘤病人经放化疗治疗后的生活质量。
经急性毒性实验及长期毒性实验证实,短葶山麦冬提取物安全范围广;急性毒性实验显示,提取物的LD50可达1600mg/kg,治疗指数高,临床应用于治疗肿瘤或作为肿瘤治疗辅助用药,在具有有效活性的同时还具有安全性。
附图说明
图1:本发明的短葶山麦冬提取物的色谱图,其中横坐标是时间(分钟),纵坐标是吸收度。
具体实施方式
实施例1:
取短葶山麦冬药材,加大约15倍量95%乙醇回流提取;提取液回收溶剂至稠膏状,加等生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取2次,合并萃取液,回收溶剂得粗提物。将粗提物再加生药量的等重量倍的水溶解,上AB-8型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以8倍柱体积的浓度60%的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
经采用高效液相色谱分析的方法(HPLC)进行检测,色谱柱C18,流动相为乙腈-水的混合溶液,梯度洗脱,经蒸发光检测器检测,得到图谱参见图1。
在该提取物中,皂苷类除了短葶山麦冬皂苷A、短葶山麦冬皂苷B和短葶山麦冬皂苷C(保留时间28分钟左右)之外,还含有短葶山麦冬皂苷D(Lm-4):ruscogenin 1-β-D-fucopyranoside及短葶山麦冬皂苷E(Lm-5):pennogenin3-O-[4’-O-rhamnopyranosyl(1→3)-β-D-xylopyranosyl(1→4)]-β-D-fucopyranoside,具体参见Yu B Y,Hirai Y,Shoji J,et al.Comparative studies on the constituents ofophiopogonis tuber and its congeners.VI.Studies on the constituents of the subterraneanpart of Liriope spicata var.prolifera and L.muscari.(1).Chem PharmBull.1990;38(7):1931-1935;倍半萜葡萄糖苷类除了Liriopeoside A外,还含有首次在短葶山麦冬中发现的:Liriopeoside B(保留时间在7分钟左右)、liriopeoside C(保留时间在11分钟左右)、Liriopeoside D(保留时间在14分钟左右)及liriopeoside E(保留时间在16分钟左右)
实施例2:
取短葶山麦冬药材,加大约8倍量75%乙醇浸渍提取2次;提取液回收溶剂至稠膏状,加0.5倍生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取3次,合并萃取液,回收溶剂得山麦冬粗提物。将粗提物再加生药量的0.5重量倍的水溶解,上D-101型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以10倍柱体积的体积浓度80%的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
经过采用高效液相色谱分析的方法(HPLC)进行检测,色谱柱是C18,流动相为甲醇-水梯度洗脱的溶液,紫外检测器检测,得到的图谱确定本实施例得到的提取物含有大量的皂苷及倍半萜苷类,而且杂质少。
实施例3:
取短葶山麦冬药材,加大约4倍量80%乙醇浸泡过夜后加热提取;提取液回收溶剂至稠膏状,加1.5倍生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取4次,合并萃取液,回收溶剂得山麦冬粗提物。将粗提物再加生药量的1.5重量倍的水溶解,上D-101型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以15倍柱体积的50%浓度的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
实施例4:
取短葶山麦冬药材,加大约20倍量90%乙醇加热提取;提取液回收溶剂至稠膏状,加1.5倍生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取4次,合并萃取液,回收溶剂得山麦冬粗提物。将粗提物再加生药量的1.5重量倍的水溶解,上D-101型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以4倍柱体积的90%浓度的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
实施例5:
取短葶山麦冬药材,加大约15倍量85%乙醇回流提取;提取液回收溶剂至稠膏状,加等生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取2次,合并萃取液,回收溶剂得粗提物;将粗提物再加生药量的等重量倍的水溶解,上AB-8型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以8倍柱体积的75%浓度的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
实施例6:
取短葶山麦冬药材,加大约6倍量95%乙醇浸泡过夜后回流提取2次,每次2小时,合并提取液;提取液回收溶剂至无醇味,加2倍生药量(重量)水分散,以正丁醇萃取4次,合并萃取液,回收溶剂得粗提物;将粗提物再加生药量的等重量倍的水溶解,上AB-8型大孔树脂柱,先以水洗脱,至洗脱液molish反应呈阴性,再以3倍柱体积的60%浓度的乙醇洗脱,洗脱液回收溶剂,得短葶山麦冬提取物。
Claims (12)
1.一种具有抗肿瘤作用的短葶山麦冬提取物,该提取物以下述方法制得:以短葶山麦冬根为原料,用乙醇提取,得到的提取液用正丁醇萃取,得粗提物;该粗提物加水溶解后,使其通过非极性大孔树脂柱,先以水洗脱至洗脱液无色,再以体积浓度51~95%的乙醇溶液洗脱至洗脱液无色,收集乙醇洗脱液,得所述的短葶山麦冬提取物。
2.如权利要求1所述的短葶山麦冬提取物,其中,所述的短葶山麦冬提取物中含有2~30%wt的甾体皂苷类成分和2~20%wt的倍半萜葡萄糖苷类成分,以该短葶山麦冬提取物的重量100%wt为基准计。
4.如权利要求2所述的短葶山麦冬提取物,该倍半萜葡萄糖苷类成分中含有以下成分,其结构式为:
5.如权利要求1所述的短葶山麦冬提取物,其中,所述的粗提物通过下述方法制得:以短葶山麦冬根为原料,以短葶山麦冬根重量至少4倍量的体积浓度51~95%的乙醇提取,得到的提取液回收溶剂至无醇味,再加水分散,用正丁醇萃取,得粗提物;取该粗提物加水溶解,过滤,滤液通过非极性大孔树脂柱,先以水洗脱至洗脱液无色,再以乙醇的水溶液洗脱,收集洗脱液至洗脱液无色,得所述短葶山麦冬提取物。
6.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物的制备方法,包括:短葶山麦冬根为原料,以乙醇提取,得到的提取液用正丁醇萃取,得粗提物;该粗提物加水溶解后,使其通过非极性大孔树脂柱,以水洗脱至洗脱液无色,再以体积浓度51~95%的乙醇溶液洗脱,收集洗脱液至洗脱液无色,得所述短葶山麦冬提取物。
7.如权利要求6所述的制备方法,其中,在所述的以乙醇提取的步骤中,乙醇的用量为所述短葶山麦冬根重量的4~20倍。
8.如权利要求6所述的制备方法,其中,所述的收集洗脱液至洗脱液无色后,得到的短葶山麦冬提取物中短葶山麦冬皂苷C的含量为2~30%,倍半萜葡萄糖苷含量为2~20%,以所述的短葶山麦冬提取物的重量为100%计。
9.如权利要求6所述的制备方法,其中,所述的粗提物通过下述方法制得:以短葶山麦冬根为原料,以相对于短葶山麦冬根的原料重量的至少4倍量的体积浓度51~95%的乙醇提取,得到的提取液回收溶剂至无醇味,再用水分散,用正丁醇萃取,取正丁醇层萃取液,干燥,得所述的粗提物。
10.如权利要求9所述的制备方法,其中,在所述提取液回收溶剂至无醇味,再用水分散,用正丁醇萃取的步骤中,水的用量为短葶山麦冬根重量的0.1~10倍,正丁醇的用量为水的重量的0.5~5倍。
11.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。
12.权利要求1所述的短葶山麦冬提取物在制备肿瘤治疗辅助用药物中的用途。
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