CN102080051B - 一种可可球二孢菌产孢培养基配方 - Google Patents
一种可可球二孢菌产孢培养基配方 Download PDFInfo
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Abstract
一种番石榴可可球二孢菌产孢培养基，由莜麦、蔗糖、氯化铵、琼脂和番石榴枝条与叶片组成。分别以蔗糖为碳源，以氯化铵为氮源，提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生长因子—莜麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴可可球二孢菌产孢培养基，培养14d产孢量为5×103个孢子/25毫升培养基。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物病菌真菌产孢培养基，具体涉及一种可可球二孢菌(Botryodiplodia theohromae (Pat.) Griff. & Maubl)的产孢培养基。
背景技术
番石榴（Psidium guajava Linn.）是我国南方亚热带的名特优水果，主产于福建、广东、台湾等省（区）。由于番石榴果实成熟于高温酷暑季节，采后生理代谢旺盛，鲜果易失水、褐变和腐烂。因此，番石榴果实病害（特别是真菌性病害）是影响番石榴生长及果实货架期的主要原因，而且番石榴黑腐病是番石榴生长及果实货架期最主要的病害之一。可可球二孢菌(Botryodiplodia theohromae (Pat.) Griff. & Maubl)为黑腐病的病原菌，属于半知菌亚门腔孢纲真菌。番石榴黑腐病以田间枝条等病残组织为初侵染源，分生孢子的形式越冬。翌年春产生子囊孢子和分生孢子借风雨溅到果实上在萼片与果皮之间潜伏。因此研究可可球二孢菌的分生孢子对明确可可球二孢菌的生活史或发生规律具有重大的作用，为科学制定控制番石榴可可球二孢菌采前潜伏侵染和采后病害的技术措施提供理论依据。但是目前国内外尚无关于番石榴可可球二孢菌产孢培养基研究的报道，真菌通用的培养基不能很好的满足该菌生长发育产生孢子，这极大地限制了对番石榴可可球二孢菌以及病害发生规律的进一步深入研究。
发明内容
本发明目的在于提供一种番石榴可可球二孢菌产孢培养基，通过综合利用碳源、氮源和维生素，配制成的培养基适合于番石榴可可球二孢菌产孢的培养。
本发明的番石榴可可球二孢菌产孢培养基由莜麦 、蔗糖、氯化铵、琼脂和番石榴叶片与枝条组成，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量份数
莜麦 2.5～5.5份
蔗糖 1.6～3.5份
氯化铵 1.5～2.5份
琼脂 1.5～1.7份
番石榴叶片与枝条 92.9～86.8份
上述原料中除番石榴叶片与枝条外各原料均为干燥化合物，纯度为分析纯。
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5 h，过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解，在121℃高压灭菌20 min即可使用。
病原菌分离自福建番石榴产区龙海、闽侯等地番石榴果园发病植株中（采集时间为2009－2010年），经纯化后观察其形态特征，并用马铃薯琼脂（PDA）培养所得的分生孢子接种在采收后的健康番石榴果实上，观察发病症状。镜检分离的病原菌。经柯氏法则验证，同时将我们测得的Botryodiplodia theohromae (Pat.)DNA-ITS序列（GenBank登录号为GU323602.1）进行比对，同源性为99%，从柯氏法则和分子验证方法，将番石榴黑腐病的病原菌鉴定为Botryodiplodia theohromae (Pat.)。
本发明的显著优点：
本发明各物质性能稳定，分别以蔗糖为碳源，以氯化铵为氮源，提供了该菌产孢所需要的碳元素和氮元素；加入的生长因子—莜麦中的维生素则是调节微生物正常代谢所必需的；满足了该菌的营养需要。本发明的番石榴可可球二孢菌产孢培养基，培养14 d产孢量5×103个孢子/25毫升培养基。
附图说明
图1为在番石榴可可球二孢菌产孢培养基上的产孢；
图2为番石榴可可球二孢菌分生孢子器（×200）；
图3为番石榴可可球二孢菌分生孢子（×500）；
图4为番木瓜蒂腐病菌分生孢子形态（×500）；
图5为在柑橘褐色蒂病菌产孢培养基上的产孢；
图6为在楹树枝枯病菌产孢培养基上的产孢。
具体实施例
可可球二孢菌(Botryodiplodia theohromae (Pat.)为经法国病理学者Patauillard于1892年首次报告危害可可，随后病原菌发生的记载多分布在热带及亚热带地区，分布范围约与北纬与南纬40°间，寄主范围超过280属，将近有500种作物（Punithalingam,1976）,引起果腐、梢枯及溃疡等病征，病原菌可经由风、雨水、土壤、昆虫及种子传播。由于其对植物的根、茎、叶及果实均具致病力，且寄主范围极广，故为农业及园艺作物中常见至病原菌之一。其寄主如番石榴（蔡竹固，1993）、红毛丹（Sivakumar et al，2002）、番荔枝（李惠玲，2001）、柑桔（罗永兰等，1997）、瓜类（Waller，2001）、菠萝蜜（Rawal,1998）、可可（Chandramohanan and Kotireddy，1997）和香蕉（Waller,2001）等。为了更充分地公开本发明的一种番石榴可可球二孢菌培养基，下面结合实例加以说明。以下为本发明的优选实施例，进一步描述本发明，但是本发明不仅限于此。
实施例1：一种番石榴可可球二孢菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量分数
莜麦 5.5份
蔗糖 1.6份
氯化铵 2.5份
琼脂 1.7份
番石榴枝条与叶片 88.7份，
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5 h,过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解后121℃高压灭菌20 min即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的番石榴可可球二孢菌取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的番石榴可可球二孢菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养14 d后，观察产孢培养基上番石榴可可球二孢菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养14 d产孢量5×103个孢子/25毫升培养基。如图1、2、3所示。
实施例2：一种番木瓜蒂腐病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量分数
莜麦 2.5份
蔗糖 3.5份
氯化铵 1.5份
琼脂 1.7份
番石榴枝条与叶片 89.0份
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5 h,过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解后121℃高压灭菌20 min即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的番木瓜蒂腐病菌（刘秀娟等，1994）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的番木瓜蒂腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养14 d后，观察产孢培养基上番木瓜蒂腐病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养14 d产孢量4.72×103个孢子/25毫升培养基，如图4所示。
实施例3：一种柑橘褐色蒂腐病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量份
莜麦 2.6份
蔗糖 2.0份
氯化铵 2.0份
琼脂 1.6份
番石榴枝条与叶片 92.9份，
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5 h,过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解后121℃高压灭菌20 min即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的柑橘褐色蒂腐病菌（罗永兰等，1997）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的柑橘褐色蒂腐病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养14 d后，观察产孢培养基上柑橘褐色蒂腐病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养14 d产孢量4.63×103个孢子/25毫升培养基，如图5所示。
实施例4：一种楹树枝枯病菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量份数
莜麦 4.5份
蔗糖 2.0份
氯化铵 1.8份
琼脂 1.6份
番石榴枝条与叶片 86.8份，
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5h,过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解后121℃高压灭菌20 min即可使用。
具体培养方法如下：
将储存在4℃冰箱的楹树枝枯病菌（叶新峰等，2004）取出，转接CM固体培养基（CM培养基配制：酵母粉6g；酸水解酪蛋白6g；蔗糖10g；琼脂18g）中进行活化。再将活化好的楹树枝枯病菌用直径为5mm打孔器打成菌饼，将菌饼接到产孢培养基中，处理3个重复，置28℃下光照培养14 d后，观察产孢培养基上楹树枝枯病菌的子座数目，水洗研磨子座计算产孢量，培养14 d产孢量4.27×103个孢子/25毫升培养基，如图6所示。
Claims (1)
1.一种番石榴可可球二孢菌产孢培养基，各原料及其含量的关系如下：
原料 原料质量分数
莜麦 5.5份
蔗糖 1.6份
氯化铵 2.5份
琼脂 1.7份
番石榴枝条与叶片 88.7份，
将番石榴枝条与叶片，加水煮沸0.5 h，过滤后将滤汁与上述培养基其它成分混合溶解后121℃高压灭菌20 min即可使用。
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