CN102065877B - 用于维持骨健康或减少骨质流失的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
用于维持或改善骨健康或骨强度以及治疗或预防骨病症的玫瑰果水溶性提取物的用途,所述骨病症以削弱或脆弱的骨为特征。本发明也涉及包含玫瑰果水溶性提取物的组合物,其用于维持或改善骨健康或骨强度以及治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨病症。
Description
发明领域
本发明涉及用于维持或改善骨健康或骨强度以及治疗或预防骨病症的玫瑰果水溶性提取物的用途,所述骨病症以削弱或脆弱的骨为特征。本发明也涉及包含玫瑰果水溶性提取物的组合物,其用于维持或改善骨健康或骨强度以及治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨病症。
发明背景
随着世界人口的老龄化,骨病症变得越来越普遍。这些病症,诸如骨质减少和骨质疏松症,在财政方面和这一疾病对患者生活质量造成损失的方面都是昂贵的。
骨包含细胞外蛋白基质(类骨质),其中散布着骨细胞(骨细胞)且由钙盐和其它矿物质组成的矿物质成分位于细胞外基质内。骨经历重吸收过程的重塑,在这种情况下骨通过破骨细胞降解然后被成骨细胞所取代(再形成)。重塑的发生调节钙体内平衡、修复日常应力损伤的骨以及生长或机械应力模式变化时使骨成形。
破骨细胞使特定区域内的骨降解然后经历细胞凋亡。成骨细胞重建新骨而且介导它的再矿化作用。在再矿化作用期间,一些成骨细胞被包在钙化物质内然后变成骨细胞。
一旦在成年早期已达到骨含量峰值,重吸收过程就几乎完全伴随着再形成。然而,随着人老龄化,重塑系统的有效调节变弱。随着女性更年期的开始,这两个过程就可能变得失去同步性,其中重吸收占主导地位。此外,随着老龄化会有骨矿物质密度流失、骨微结构破坏和其他的变化,这些都导致了骨折风险增加。骨质流失的过程经常是逐渐的,在疾病适当进展之前并没有明显的症状呈现。
因此随着时间的推移维持骨质量和密度是重要的,这样使骨不会随着老龄化而变得脆弱。
骨质减少是一种其中骨矿物质密度低于正常的疾病状态而且已被一些人认为是骨质疏松症的前兆。然而并不是每一个被诊断为骨质减少的人都将发展为骨质疏松症。骨质减少被定义为如双能X射线吸收测量仪(DXA)所测量的骨矿物质密度T评分低于峰值骨含量(20岁健康女性的平均值)1-2.5个标准差。
骨质疏松症以骨逐渐变稀少和削弱为特征,这种情况没有治疗能够导致骨骼削弱和骨折风险增加。骨质疏松症被定义为如双能X射线吸收测量仪所测量的骨矿物质密度低于峰值骨含量(20岁健康女性的平均值)2.5个标准差。
骨质减少和骨质疏松症的病理学为通过破骨细胞和成骨细胞降解骨(重吸收)和构建骨(再形成)过程间的失衡。在健康个体中,骨重吸收和骨再形成这一过程是几乎完全平衡的。如果这一平衡由于各种原因即更年期、药物等等被破坏,最终骨降解超过骨构建而且可能发展为骨质减少或更为严重的骨质疏松症。
通常女性发展为骨质减少和骨质疏松症的风险性更高,因为更年期后雌激素产生减少。然而,老年男性和患特定激素失调症的人群或特定药物的长期使用者也易于发生骨质减少和骨质疏松症。
骨病症,像骨质疏松症的治疗通常是不令人满意的,其导致患者遭受来自治疗骨病症的处方治疗方法的副作用。
骨质减少不经常诊断,而且如果被诊断,由于费用和治疗时间的长度,它通常不被进行医学上的治疗。因为骨质减少患者通常比被诊断为骨质疏松症的人们年轻,他们需要治疗多年。这样长期治疗的成本/效益比是未知的,因此骨质减少通常不进行医学上的治疗。
当前有多种药物用于骨质疏松症的处方治疗。在患者被确认患有骨质疏松症的情况下经常开二磷酸盐类处方药。然而,口服二磷酸盐类吸收不佳而且必须空腹服用。此外,它们在一些人中耐受不良而且与食管炎有关。
其他用于骨质疏松症的处方药诸如特立帕肽(teriparatide)和雷尼酸锶(strontium ranelate)也不能被一些人良好耐受。特立帕肽必须通过注射给予而且不适用于年轻患者,以前已有放射治疗或患有佩吉特氏病(Paget′s disease)的患者。雷尼酸锶具有比二磷酸盐类少的副作用但是与增加静脉血栓栓塞的风险有关。此外,雷尼酸锶被摄入骨基质取代钙,这导致了被双能量X射线吸收仪扫描所测量到的骨矿物质密度中不成比例的增加。
因此需要提供维持或改善骨健康的疗法,该疗法克服或改进至少一个与已知治疗有关的问题,或者至少提供给公众一个有用的选择。
发明概述
因此,在第一方面,本发明涉及玫瑰果水溶性提取物在制备用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态的组合物中的用途。
在另一方面,本发明涉及包含玫瑰果水溶性提取物的组合物,其用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态。
在一实施方案中,这一组合物还包含一种或多种选自钙、镁、锌、维生素D、维生素K、叶酸或叶酸盐、维生素B6和维生素B12的制剂。
在另一方面,本发明涉及用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态的方法,该方法包括将包含有效量的玫瑰果水溶性提取物的组合物给予需要该组合物的个体。
在另一方面,本发明涉及用于治疗或预防骨质疏松症的方法,该方法包括将包含有效量的玫瑰果水溶性提取物的组合物给予需要该组合物的个体。
在另一方面,本发明涉及用于治疗或预防骨质减少的方法,该方法包括将包含有效量的玫瑰果水溶性提取物的组合物给予需要该组合物的个体。
在一实施方案中,个体需要维持或增加的骨形成、维持或增加的骨矿物质密度、维持或增加的骨含量(包括峰值骨含量)、骨折愈合期间的骨再生、减少的骨重吸收、减少的骨质流失或者维持或增加的骨强度。
下列的实施方案可能涉及任一上述的方面。
在一实施方案中,组合物不包括下述的任一种:蓝莓、黑莓、接骨木、蔓越莓、迷迭香、丁香、野柑橘、荨麻根、洋蓟、灵芝、橄榄提取物、绿茶提取物、葡萄籽提取物、白藜芦醇、葡萄素、非洲豆蔻、齿叶乳香提取物、boswellia forte、依普黄酮、生育三烯酚、月见草油、INM-176、琉璃苣油、磷虾油、叶黄素中的至少一种类型(例如虾青素)、生咖啡提取物或阿魏酸。
在一实施方案中,待被治疗的疾病状态为骨质疏松症或骨质减少。
在一实施方案中,组合物维持或增加骨形成、维持或增加骨密度、维持或增加骨含量、刺激骨折愈合期间的骨再生、减少骨重吸收、减少骨质流失或者维持或增加骨强度。
在一实施方案中,组合物为食品、糖果、奶、乳制品、奶粉、复原乳、发酵奶、饮用酸奶、凝固型酸奶、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、膳食补充剂、营养产品、医疗食品、营养药品(nutraceutical)或药物。
在一实施方案中,用于本发明的组合物还包含一种或多种乳品成分。这一乳品成分可以选自包含以下的组:调配的、粉末状的或新鲜的脱脂奶、复原全脂或脱脂奶粉、脱脂奶浓缩物、脱脂奶滞留物、炼乳、超滤奶滞留物、乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物、脱钙的乳蛋白浓缩物、低脂奶、低脂乳蛋白浓缩物、酪蛋白、酪蛋白酸盐、乳脂、高CLA乳脂、奶油、黄油、无水乳脂、酪乳、奶酪乳清、硬乳脂部分、软乳脂部分、鞘脂部分、乳脂球状膜部分、磷脂部分、复合脂质部分、初乳、初乳部分、初乳蛋白浓缩物、初乳乳清、来源于初乳的免疫球蛋白部分、乳清、乳铁蛋白、一种或多种乳铁蛋白片段、乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、甜乳清、乳酸乳清、矿物酸乳清、复原乳清粉、乳矿物质、衍生于任一乳或初乳处理流的组分、衍生于通过任一乳或初乳处理流的超滤作用或微滤作用而获取的滞留物或渗透物的组分、衍生于通过任一乳或初乳处理流的色谱(包括但不限于离子和凝胶渗透色谱法)分离而获取的突破或吸附部分的组分、这些成分任一种的提取物包括通过多级分馏、差异结晶、溶剂分馏、超临界分馏、近超临界分馏、蒸馏、离心分馏、利用改性剂(例如肥皂或乳化剂)的分馏制备的提取物、这些成分任一种的水解产物、水解产物的部分以及这些成分的任两种或更多种的任意组合,包括水解部分的组合、非水解部分的组合以及水解与非水解部分的组合。
在一实施方案中,玫瑰果水溶性提取物的给药量为约1mg至约2000mg/kg体重/天,约100mg至约1000mg/kg体重/天,约50mg至约500mg/kg体重/天,或约0.05mg至约300mg/kg体重/天。
在一实施方案中,钙为钙或钙盐。在一实施方案中,镁为镁或镁盐。在一实施方案中,锌为锌或锌盐。在一实施方案中,维生素D为维生素D或维生素D衍生物(包括但不限于维生素D1[光甾醇(lamisterol)],维生素D2[麦角骨化醇],维生素D3[胆钙化醇,1,25-二羟胆钙化醇],维生素D4[双氢速甾醇],维生素D5[7-脱氢谷甾醇]或维生素D类似物。在一实施方案中,叶酸为叶酸或或叶酸盐,即叶酸盐或其衍生物。在一实施方案中,维生素B12为维生素B12或其衍生物。
本文有用的盐包括但不限于铵(NH4 +)、硼、钙、铜、铁(亚铁的,Fe2+和三价铁的,Fe3+)、镁、锰、磷、钾、吡啶(C5H5NH+)、季铵(NR4 +)、硅、钠、锶和锌盐或其组合物。
在一实施方案中,本文有用的组合物还包含药学上可接受的载体。在另一实施方案中,这一组合物为或被制备成食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、饮食补充剂、营养产品、医疗食品、营养药品(nutraceutical)、药剂、药物、肠内或胃肠外给养产品或正餐代用品。在一实施方案中,这一组合物呈现药片、囊片、药丸、硬或软胶囊或锭剂的形式。在一实施方案中,这一组合物呈现扁囊剂、非必需粉末、颗粒剂、悬浮液、酏剂、液体形式或其他任何能够添加到食品或饮料的形式,包括例如水、奶或果汁。在一实施方案中,这一组合物还包含一种或多种预防或减少存储期间或给药后组合物降解的成分(诸如抗氧化剂)。这些组合物可以包括任一能够运载玫瑰果水溶性提取物的可食用的消费产品。合适的可食用的消费产品的实例包括含水的产品、烘焙货物、包括巧克力、凝胶、冰激凌的糖果产品、复原水果产品、小吃棒、食品棒、穆兹利棒(mueslibars)、涂抹食品、调味酱、调味汁、包括酸奶和奶酪的乳制品、包括基于乳制品和非乳制品饮料的饮料、奶、奶粉、包括基于乳制品和非乳制品的运动补充剂的运动补充剂、果汁、诸如蛋白屑(protein sprinkles)的食品添加剂和包括每日补充片剂的饮食补充产品。本文有用的合适营养药品组合物可以类似的形式被提供。
在一实施方案中,这一组合物包含或者这一方法包含给予诸如玫瑰果、钙、镁、锌、维生素D、维生素K、叶酸或叶酸盐、维生素B6、维生素B12、乳品成分或药剂的制剂。在一实施方案中,本文有用的组合物包含、基本上由或由至少约0.01%,0.02%,0.05%,0.07%,0.1%,0.2%,0.5%,1%,5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,99%,99.5%,99.8%或99.9%重量比的一种或多种这些制剂组成,以及有用的范围可以选自任一上述这些值间(例如约0.1%至约50%,约0.2%至约50%,约0.5%至约50%,约1%至约50%,约5%至约50%,约10%至约50%,约15%至约50%,约20%至约50%,约25%至约50%,约30%至约50%,约35%至约50%,约40%至约50%,约45%至约50%,约0.1%至约60%,约0.2%至约60%,约0.5%至约60%,约1%至约60%,约5%至约60%,约10%至约60%,约15%至约60%,约20%至约60%,约25%至约60%,约30%至约60%,约35%至约60%,约40%至约60%,约45%至约60%,约0.1%至约70%,约0.2%至约70%,约0.5%至约70%,约1%至约70%,约0.5%至约70%,约10%至约70%,约15%约70%,约20%至约70%,约25%至约70%,约30%至约70%,约5%至约70%,约40%至约70%,约45%至约70%,约0.1%至约80%,约0.2%至约80%,约0.5%至约80%,约1%至约80%,约5%至约80%,约10%至约80%,约15%至约80%,约20%至约80%,约25%至约80%,约30%至约80%,约35%至约80%,约40%至约80%,约45%至约80%,约0.1%至约90%,约0.2%至约90%,约0.5%至约90%,约1%至约90%,约5%至约90%,约10%至约90%,约15%至约90%,约20%至约90%,约25%至约90%,约30%至约90%,约35%至约90%,约40%至约90%,约45%至约90%,约0.1%至约99%,约0.2%至约99%,约0.5%至约99%,约1%至约99%,约5%至约99%,约10%至约99%,约15%至约99%,约20%至约99%,约25%至约99%,约30%至约99%,约35%至约99%,约40%至约99%,和约45%至约99%)。
本文有用的组合物用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态。在一实施方案中,待被治疗的疾病状态为需要维持或增加骨含量或骨强度或维持或增加骨含量和骨强度这两方面的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要减少骨质流失的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要骨细胞增殖、骨细胞分化、骨细胞介导的矿化作用或骨细胞增殖、骨细胞分化和骨细胞介导的矿化作用的任两种或多种的组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要抑制骨重吸收、增加骨形成、减少骨质流失或者抑制骨重吸收,增加骨形成和减少骨质流失的任两种或更多种的组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要改善或维持骨密度、骨含量、骨强度或骨健康或改善或维持骨密度、骨含量、骨强度和骨健康的任两种或更多种的组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为骨质疏松症。在一实施方案中,这一疾病状态为骨质减少。
在一实施方案中,治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态包括维持或增加骨形成、维持或增加骨矿物质密度、维持或增加骨含量(包括峰值骨含量)、治疗或预防骨质疏松症、治疗或预防骨质减少、刺激骨折愈合期间的骨再生、减少骨重吸收或增加骨质量(例如,如通过断裂应力或骨强度所测量的)的一种或多种。
本文有用的组合物用于给予需要该组合物的个体以治疗骨疾病状态。在一实施方案中,个体需要增加骨含量。在一实施方案中,个体需要治疗需要减少骨质流失的疾病状态。在一实施方案中,个体需要治疗需要骨细胞增殖、骨细胞分化或者骨细胞介导的矿化作用或者骨细胞增殖、骨细胞分化和骨细胞介导的矿化作用的任两种或更多种组合的疾病状态。在一实施方案中,个体需要治疗需要抑制骨重吸收、增加骨形成或减少骨质流失或者抑制骨重吸收、增加骨形成和减少骨质流失的组合的疾病状态。在一实施方案中,个体需要治疗需要改善或维持骨密度、改善或维持骨含量、改善或维持骨强度或改善或维持骨健康或这些效应的任两种或多种组合的疾病状态。
在一实施方案中,个体需要减少骨重吸收或减少破骨细胞形成或需要减少骨重吸收和破骨细胞形成这两方面。因此,在一实施方案中,本发明涉及改善、治疗或预防与净骨重吸收或增加的破骨细胞形成有关的疾病状态。
在另一实施方案中,个体需要增加骨形成或增加成骨细胞增殖、增加成骨细胞分化,增加矿化作用或其组合。因此,在这一实施方案中,本发明涉及改善、治疗或预防与骨形成不良或成骨细胞增殖减少、分化减少和矿化作用减少或其组合有关的疾病状态。
在一实施方案中,治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态包括减少骨质流失,尤其是与个体年龄增长有关的骨质流失。
在一实施方案中,组合物包含、基本上由或由约0.1%,0.5%,1%,5%,10%,15%,20%,25%,30%,35%,40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,95%,99%,99.5%,99.8%或99.9%重量比的一种或多种乳品成分组成,这些乳品成分选自新鲜的全脂奶、调配的全脂奶或全脂奶粉或奶衍生物,而且有用的范围可以选自任一这些上述数值间(例如,约0.1%至约50%,约0.2%至约50%,约0.5%至约50%,约1%至约50%,约5%至约50%,约10%至约50%,约15%至约50%,约20%至约50%,约25%至约50%,约30%至约50%,约35%至约50%,约40%至约50%和约45%至约50%)。奶衍生物优选选自调配的、粉末状的或新鲜的脱脂奶、复原全脂或脱脂奶粉、脱脂奶浓缩物、脱脂奶滞留物、炼乳、超滤奶滞留物、乳蛋白浓缩物(MPC)、乳蛋白分离物(MPI)、脱钙的乳蛋白浓缩物(MPC)、低脂奶、低脂乳蛋白浓缩物(MPC)、酪蛋白、酪蛋白酸盐、乳脂、高CLA乳脂、奶油、黄油、无水乳脂(AMF)、酪乳、奶酪乳清、硬乳脂部分、软乳脂部分、鞘脂部分、乳脂球状膜部分、磷脂部分、复合脂质部分、初乳、初乳部分、初乳蛋白浓缩物(CPC)、初乳乳清、来源于初乳的免疫球蛋白部分、乳清、乳铁蛋白、一种或多种乳铁蛋白片段、乳清蛋白分离物(WPI)、乳清蛋白浓缩物(WPC)、甜乳清、乳酸乳清、矿物酸乳清、复原乳清粉、乳矿物质、衍生自任一乳或初乳处理流的组分、衍生自通过任一乳或初乳处理流的超滤作用或微滤作用而获取的滞留物或渗透物的组分、衍生自通过任一乳或初乳处理流的色谱(包括但不限于离子和凝胶渗透色谱法)分离而获取的突破或吸附部分的组分、这些奶衍生物的任一种的提取物包括通过多级分馏、差异结晶、溶剂分馏、超临界分馏、近超临界分馏、蒸馏、离心分馏、利用改性剂(例如肥皂或乳化剂)的分馏制备的提取物、这些衍生物任一种的水解产物、水解产物的部分以及这些衍生物的任两种或更多种的任意组合,包括水解部分的组合、非水解部分的组合以及水解与非水解部分的组合。
提到的本文所公开的一系列数字(例如1至10)意在还包括了提到的那一范围内所有有理数(例如1,1.1,2,3,3.9,4,5,6,6.5,7,8,9和10)以及还包括在那一范围内所有有理数的任一范围(例如,2至8,1.5至5.5,和3.1至4.7)。因此,本文所明确公开的所有范围的所有亚范围都在此被明确公开。这些仅是特别意图保护的那些的实例,在所列举的最小值和最大值间的数值的所有可能组合被认为在本专利申请中是以类似的方式明确陈述的。
在本说明书中,如果引用了专利发明书、其他外部资料或其他信息来源,这通常都是出于为讨论本发明特征提供背景的目的。除非另有具体表述,并不将对这种外部资料的引用理解为承认这种文件或这种信息来源在任何权限内都是现有技术构成了本领域公知常识的一部分。分。
本发明还可以被广泛地表述为在于本申请说明书中所提及的或指示的部分、成分和特征,单独或共同地存在于两种或多种上述的部分、成分和特征的任一或所有组合,而且如果本文所提及的具体整数具有本发明所属领域中已知的等价值,此类已知的等价值被视为并入本文中,如果单独指明并入一样。
附图简述
图1是显示通过碱性磷酸酶的产生所表示的与对照组比较的玫瑰果对成骨细胞分化影响的(p=0.0093)的图。
图2为显示玫瑰果提取物对破骨细胞生成的影响的图。玫瑰果剂量依赖性抑制破骨细胞形成。结果与对照相比较p<0.05。
图3为显示右股骨三点弯曲试验的断裂应力结果的图。一组大鼠行假手术(假手术组(Sham);n=15)并饲喂对照饮食28周。另一组为切除卵巢的且饲喂对照饮食(OVX组;n=15)或包含玫瑰果提取物的治疗饮食(玫瑰果组(Rosehip);n=15)28周。结果显示为平均值±SEM。结果显示了假手术组和去卵巢组(OVX)间的显著性差异(p=0.0105),而假手术组和玫瑰果组间(p=0.8450)或去卵巢组(OVX)和玫瑰果组间(p=0.5754)间没有显著性差异。
图4为显示右股骨最大载荷(maximum load)的图。最大载荷被定义为在三点弯曲试验期间股骨能够经受的最大力。45只大鼠饲喂对照饮食3周。3周后,一组大鼠行假手术(假手术组;n=15)并且继续饲喂对照饮食。其他的30只大鼠为切除卵巢的。一组切除卵巢的大鼠饲喂对照饮食(OVX;n=15)而另一组饲喂添加了玫瑰果的饮食(玫瑰果组;n=15)。结果显示为平均值±SEM。结果显示了去卵巢组(OVX)和玫瑰果组间的显著性差异(p=0.035)。
图5为显示断裂载荷(break load)的图。断裂载荷为使股骨骨折的力,通常小于最大力。45只大鼠饲喂对照饮食3周。3周后,一组大鼠行假手术(假手术组;n=15)并且继续饲喂对照饮食。其他的30只大鼠为切除卵巢的。一组切除卵巢的大鼠饲喂对照饮食(OVX;n=15),而另一组饲喂添加了玫瑰果的饮食(玫瑰果组;n=15)。结果显示为平均值±SEM。结果显示了去卵巢组(OVX)和玫瑰果组间的显著性差异(p=0.030)。
图6为显示使大鼠右股骨断裂所消耗的能量的图。45只大鼠饲喂对照饮食3周。3周后,一组大鼠行假手术(假手术组;n=15)并且继续饲喂对照饮食。其他的30只大鼠为卵巢切除的。一组卵巢切除的大鼠饲喂对照饮食(OVX;n=15),而另一组饲喂添加了玫瑰果的饮食(玫瑰果组;n=15)。结果显示为平均值±SEM。结果显示了去卵巢组(OVX)和玫瑰果组间的显著性差异(p=0.030)。
发明详述
本发明基于以下发现:玫瑰果水溶性提取物具有维持骨健康和治疗诸如骨质疏松症或骨质减少的骨疾病的积极效果。
1.定义
本说明书和权利要求书中所使用的术语“包含(comprising)”指“至少部分地由...组成”。当解释本说明书和权利要求书中包括该术语的陈述时,每一陈述中的该术语后的特征全部都需要存在,但其他的特征也能够存在。相关的术语,诸如“包含(comprise)”和“包含(comprised)”也以相同的方式被解释。
术语“玫瑰果水溶性提取物”指通过以下方法所产生的提取物:任何食品级极性溶剂诸如水、乙酸和醇类(例如诸如甲醇、乙醇、丙醇或丁醇)被用于从玫瑰果提取水溶性成分。溶剂优选为水。
术语“维持骨健康”指维持个体的骨处于健康密度,例如,该健康密度如由世界卫生组织(WHO)对双能X射线吸收测量法(DEXA)的标准所定义的,在20岁人的骨密度的±1标准偏差(SD)范围内。
术语“削弱或脆弱的骨”指个体具有低于健康密度的骨密度,例如该健康密度如由WHO对DEXA的标准所定义的,在20岁人的骨密度的±1SD范围内。
“有效量”为需要赋予治疗效果的量。Freireich等(1966)描述了对动物和人类(基于毫克/体表平方米)剂量的相互关系。能够从个体的高度和重量来大致确定体表面积。例如见Scientific Tables,GeigyPharmaceuticals,Ardley,New York,1970,537。如本领域中技术人员所认识到的,有效剂量也是不同的,取决于给药途径、载体使用、物种和个体遗传变异等等。
术语“口服给药”包括口服、含服、肠内给予和胃内给予。
术语“药学上可接受的载体”意指包括但不限于赋形剂、稀释剂、辅助剂或其组合的载体,它能够作为本发明组合物的一种成分给予个体而不会降低这一组合物的活性,而且当以足以递送有效量的玫瑰果提取物的剂量给药时没有毒性。这一制剂能够口服、经鼻和局部给药。
与本发明有关的“个体”为动物,优选哺乳动物,更优选哺乳类动物的伴侣动物或人类。优选地伴侣动物包括猫、狗和马。
术语“治疗”和它的衍生物应该在它们最广泛性的可能语境下进行解释。不应该认为这一术语意指个体被治疗至完全恢复。因此,“治疗”广义地包括改善或预防或者改善和预防症状发作或特定疾病状态的严重程度;例如预防或改善骨密度的减少,预防或是降低发展为骨质疏松症的风险,预防或是降低发展为骨质减少的风险,或预防或改善其他的疾病症状。术语“治疗”也广义地包括维持良好的骨健康和构建骨质量以预防疾病或病症。
2.玫瑰果
玫瑰果,有时被叫作玫瑰山楂果(rosehaw),是一种在玫瑰植物(蔷薇属(Rosa spp.))上发现的果实,它包含几种包括高水平维生素C在内的维生素。在玫瑰果中发现的其他维生素为维生素A、D和E。玫瑰果也包含高水平的铁和一些必需脂肪酸和抗氧化剂。
几种玫瑰种类的果实能够用于制备对本发明有用的玫瑰果水溶性提取物。这些种类包括但不限于犬蔷薇(Rosa canina)、Rosa dumalissubsp.boissieri、Rosa dumalis subsp.antalyensis、莘果蔷薇(Rosavillosa)、Rosa pulverulenta、Rosa moyesii Rosa gallica,Rosa condita、玫瑰(Rosa rugosa)和豆状蔷薇(Rosa pisiformis)。
可能的玫瑰果提取过程如下:新鲜的玫瑰果被浸软或干燥的玫瑰果被弄成粉末状。浸软的或粉末状的玫瑰果与蒸馏水或其他的水溶液(例如缓冲液)以1∶5(w/w)的比率混合,以允许水溶性组分自玫瑰果提取出来。水溶剂可以更换一次或多次,优选三次,而且允许每一溶剂量保持与植物材料接触几个小时,优选12、24或48小时,优选伴随着连续的搅拌。总提取物过滤或离心后,然后将水溶液冷冻或喷雾干燥以形成粉末,它们能够被用作本文所使用的水提取物。
这一提取物能够通过离子交换色谱法或薄膜分离或本领域中已知的其他此类的分离技术的标准方法进一步地被分离。例如见IonExchange Chromatography&Chromatofocusing(离子交换色谱法&色谱聚焦法),Principles and Methods(原理和方法),安玛西亚生物科学有限责任公司2004(Amersham Biosciences Limited 2004),目录号11-0004-21,版本AA,http://www.amersham.com。
3.治疗或预防方法
本文所述的组合物和组合物的用途被用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态,诸如骨质疏松症或骨质减少。
在一实施方案中,待被治疗的疾病状态为需要增加骨含量的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要减少骨质流失的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要骨细胞增殖、骨细胞分化或骨细胞介导的矿化作用或其两种或多种组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要抑制骨重吸收、增加骨形成或减少骨质流失或者其两种或多种组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为需要改善或维持骨强度、骨密度或骨质或者其两种或多种组合的疾病状态。在一实施方案中,这一疾病状态为骨质疏松症。在一实施方案中,这一疾病状态为骨质减少。
4.本发明有用的组合物
本文描述了一种组合物,其包含、基本上由或由玫瑰果水溶性提取物和一种或多种选自钙、镁、锌、维生素D、维生素K、叶酸或叶酸盐、维生素B6和维生素B12的成分组成。
本文还描述了一种组合物,其基本上由玫瑰果水溶性提取物和一种或多种选自钙、镁、锌、维生素D、叶酸、叶酸盐和维生素B 12的成分组成,其中这一组合物被配制成用于同时、单独或连续给予的玫瑰果水溶性提取物和一种或多种成分。
本文还描述了一种组合物,其包含玫瑰果水溶性提取物和一种或多种乳品成分。
本文有用的组合物包括任一能够运载玫瑰果水溶性提取物的组合物,其包括能够运载玫瑰果水溶性提取物的任一消费产品和任一药物产品。这一组合物可被配制为食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、膳食补充剂、营养产品、医疗食品、营养药品、药剂或药物。本发明组合物优选被配制为粉末、液体、食品棒、涂抹食品、调味汁、药膏、片剂或胶囊。合适的食品和饮料包括乳品和非乳品食品和饮料。在一实施方案中,这一组合物为奶粉、乳饮料、酸奶、酸奶粉、酸奶饮料、豆奶、酸化饮料、超高温灭菌奶(UHT)、巴氏灭菌奶、黄油或奶酪。根据这一说明书的技术和教导,本领域技术人员可以制备适当的制剂。
用于本发明的营养药品组合物可以为膳食补充剂(例如胶囊、迷你包或片剂)或食物产品(例如奶、果汁、软饮料、草药茶包或糖果)。这一组合物还能够包括其他的营养物,诸如蛋白、碳水化合物、脂质、维生素、矿物质或氨基酸。这一组合物能够以适用于口服的形式存在,诸如片剂、硬或软胶囊、水状或油状悬浮液、或糖浆;或以适用于胃肠外使用的形式存在,诸如丙二醇水溶液或缓冲水溶液。营养药品组合物中活性成分的数量在很大程度上取决于个体的具体需要。这一数量也是不同的,如本领域中技术人员所认识到的,取决于给药途径、种类、遗传/生理倾向以及与其他骨增强剂的可能共使用。
用于本发明的包含玫瑰果提取物的食品、食品添加剂或食品补充剂包括任一能够运载水溶性植物提取物的可食用的消费产品。合适的可食用的消费产品的实例包括糖果产品、复原水果产品、小吃棒、穆兹利棒、烘焙产品、涂抹食品、浇汁、包括酸奶和奶酪的乳制产品、包括基于乳品和基于非乳品饮料的饮料、奶粉、包括基于乳品和基于非乳品运动补充剂的运动补充剂、食品添加剂诸如蛋白屑(sprinkles)和包括每日补充片剂的饮食补充产品。本文有用的合适的营养药品组合物可以以相似的方式被提供。
本文有用的组合物可以配制成允许通过任一选择的途径,其包括但不限于口服或经鼻腔给予个体。
优选地,本文有用的组合物为口服给予。
所能理解的是,组合物的给药剂量、给药时间段和常规给药方案在个体间可能不同,其取决于如个体症状严重程度、待被治疗病症的类型、所选择给药的模式和个体的年龄、性别和一般健康状况此类的变量。然而,举例来说,发明人预期给予约1mg/kg体重/天至约2000mg/kg体重/天的玫瑰果,优选约100mg/kg体重/天至1000mg/kg体重/天的玫瑰果或约50mg/kg体重/天至约500mg/kg体重/天的玫瑰果。在一实施方案中,发明人预期给予约0.05mg/kg体重/天至约300mg/kg体重/天的玫瑰果。
优选地,本文有用的组合物以至少每天一次给予。优选地本文有用的组合物以每天2-3次给予。可选地,本文有用的组合物可以每周一次给予。
优选地,本文有用的组合物作为更年期开始前的预防给药。可选地,本文有用的组合物在更年期开始后给予以维持或增加骨健康或用于治疗或预防骨疾病状态。
应当理解的是,本领域技术人员能够不经过大量实验,根据本领域技术和本公开内容来确定给定疾病状态的有效剂量方案(包括每日剂量和给药时机)。
本发明有用的组合物的功效能在体外和体内被评估。例如见下述的实施例。简而言之,在体外能够测试组合物促进成骨细胞发育和活性或者抑制破骨细胞生成、限制破骨细胞活性或减少破骨细胞数目的能力。对体内研究而言,能够给予动物(例如大鼠)这一组合物,然后评价它对骨组织的影响。基于这些结果,能够确定适当的剂量范围和给药途径。
本文有用的组合物可单独使用或与一种或多种其他的治疗剂联用。治疗剂可以为食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、食品成分、饮料成分、饮食补充剂、营养产品、医疗食品、营养药品、药剂或药物。治疗剂优选有效促进成骨细胞发育和活性、抑制破骨细胞生成、减少破骨细胞数目或限制破骨细胞活性。
当与其他的治疗剂组合使用时,可以同时或连续给予用于本文的组合物和其他治疗剂。
同时给予包括给予包含所有组分的单一剂型或基本上在同一时间给予单独的剂型。连续给予包括根据不同时间表给予,因此优选在本文有用的组合物和其他治疗剂在被提供的时间段存在重叠。
在一实施方案中,本文有用的组合物包括下述或与下述同时或连续给药:乳成分诸如乳清蛋白、乳清蛋白部分(包括酸性或碱性乳清蛋白部分或其组合)、糖巨肽、乳铁蛋白或功能性乳铁蛋白变体或乳铁蛋白片段、维生素D、维生素D衍生物、维生素D类似物或钙和它的盐、或者其组合。有用的包含乳成分的组合物包括诸如食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、膳食补充剂、营养产品、医疗食品或营养药品。富含这些成分的乳部分也可以使用。
应该理解的是,额外的上述治疗剂(基于食品的治疗剂和药剂这两部分)也可以在本发明的方法中使用,其中可单独、同时或连续给予它们与本文有用的组合物。
本文有用的组合物还可以包括其他的骨健康剂,诸如钙、氟化物、镁、锌、钙盐、氟化盐、镁盐、锌盐、维生素A、叶酸盐或叶酸、或维生素B12、维生素B6、维生素C、维生素D、维生素D衍生物(其包括但不限于维生素D(包括维生素D1[光甾醇],维生素D2[麦角骨化醇],维生素D3[胆钙化醇,1,25-二羟胆钙化醇],维生素D4[双氢速甾醇]和维生素D5[7-脱氢谷甾醇],和维生素D类似物)、维生素E、维生素E衍生物、维生素E类似物、维生素K、维生素K衍生物、维生素K类似物、维生素K2、乳清蛋白、乳清蛋白部分(其包括酸性或碱性乳清蛋白部分或其组合)、糖巨肽、乳铁蛋白、功能性乳铁蛋白变体、功能性乳铁蛋白片段、大豆异黄酮、植物雌激素、益生元或益生菌、或这些成分任两种或多种的组合,它们可以影响矿物质重吸收、多元不饱和脂肪酸和其组合。
包含玫瑰果或其组分的药物组合物的使用也在本发明范围内。这一药物组合物能够用于预防和治疗上文所述的骨有关病症。这一药物组合物还能够包括有效量的其他骨增强剂。药学上可接受的载体包括溶剂、分散介质、涂层、抗菌剂和抗真菌剂、和等渗剂和延缓吸收剂。
本发明有用的药物组合物可以与根据预期给药途径和标准药学实践所选择的适当的药学上可接受的载体一起配制。例如,本发明的组合物能够作为粉末、脂质、片剂、发泡剂或胶囊口服给予。合适的制剂可包含所需要的额外剂,其包括乳化剂、抗氧化剂、调味剂或着色剂,而且可适于即时释放、延迟释放、缓和释放、持续释放、脉冲释放或缓释释放。
在一优选地实施方案中,将本发明所使用的组合物配制为用于摄入。
胶囊能包含任何标准的药学上可接受的物质诸如明胶或纤维素。按照常规程序通过压缩活性成分与固体载体和润滑剂的混合物配制片剂。固体载体的实例包括但不限于淀粉和糖膨润土。活性成分也能够以硬壳片剂或胶囊的形式给予,所述片剂或胶囊包含粘合剂例如乳糖或甘露醇、常规充填剂和压片剂的。
发泡片能够使用任何常规程序来配制,而且可包括任一合适的药学上可接受的发泡物质。发泡物质的实例包括但不限于柠檬酸、苹果酸、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钠和碳酸钾。
能够利用常规方法将本发明的组合物配制成用于不同给药途径的剂型。例如,它能够配制成用于口服给药的胶囊、凝胶封或片剂。
合适的药物组合物可以与根据预期剂型和标准药物制备实践所选择的适当的药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体一起配制。本文有用的剂型能够作为粉末、液体、片剂或胶囊口服给药。合适的剂型可包含所需要的额外剂,其包括乳化剂、抗氧化剂、调味剂或着色剂。本文有用的剂型可适于活性成分的即时释放、延迟释放、缓和释放、持续释放、脉冲释放或缓释释放。
包含玫瑰果的组合物可用于治疗或预防骨骼病症。此类病症的实施包括但不限于骨质疏松症、肝性骨营养不良、骨软化、佝偻病、囊性纤维性骨炎、肾性骨营养不良、骨硬化、骨质减少、骨纤维生成不良、继发性甲状旁腺功能亢进、甲状旁腺功能减退、甲状旁腺功能亢进、慢性肾病、结节病、糖皮质激素诱导的骨质疏松症、特发性高钙血症、佩吉特氏病和成骨不全症。
玫瑰果提取物可单独使用或与一种或多种其他的治疗剂(例如营养药品、药物或医疗食品)组合使用。当与其他的治疗剂组合使用时,这两种制剂的给药可以是单独、同时或连续的。同时给药包括包含这两种制剂的单一剂型的给药以及这两种制剂在单独的剂型中基本上在同一时间的给药。连续给药包括根据不同时间表给药,这样优选在这两种制剂被提供的时间段存在重叠。能够与本发明组合物一起给药的合适的制剂包括骨生长剂或骨疾病治疗剂和其他本领域中已知的合适制剂。此类制剂优选胃肠外给药,优选通过静脉内、皮下、肌肉内、腹膜内、髓内、硬膜外、皮内、经皮(局部)、跨粘膜、关节内和胸膜内给药,及口服、吸入和直肠给药。
能够与本文有用的组合物一起给药的合适制剂包括αvβ3整合素受体拮抗剂、抗雌激素或SERMs(选择性雌激素受体调节剂)(其包括但不限于他莫昔芬(tamoxifen)、雷洛昔芬(raloxifene)、拉索普芬(lasofoxifene)、托瑞米芬(toremifene)、阿佐昔芬(azorxifene)、克罗米芬(clomiphene)、屈洛昔芬(droloxifene)、艾多昔芬(idoxifene)、左美洛昔芬(levormeloxifene)、珠氯米芬(zuclomiphene)、恩氯米芬(enclomiphene)、萘福昔定(nafoxidene)和其盐)、抗重吸收剂、二膦酸盐(其包括但不限于阿伦膦酸盐(alendronate)、氯膦酸盐(clodronate)、依替膦酸盐(etidronate)、伊班膦酸盐(ibandronate)、伊卡膦酸盐(incadronate)、米诺膦酸盐(minodronate)、奈立膦酸盐(neridronate)、奥帕膦酸盐(olpadronate)、帕米膦酸盐(pamidronate)、帕立膦酸盐(pilidronate)、利塞膦酸盐(risedronate)、替鲁膦酸盐(tiludronate)、唑来膦酸盐(zoledronate)和其药学上可接受的盐)、钙受体拮抗剂、钙补充剂、组织蛋白酶K抑制剂、双效结合剂(DABAs)(其包括但不限于雷尼酸锶)、雌激素和雌激素衍生物(其包括但不限于17β-雌二醇、雌酮、共轭雌激素、马雌激素和17β-乙炔雌二醇)、黄酮类、叶酸、叶酸盐、维生素B12、促骨合成剂、骨保护素、孕酮和孕酮衍生物(其包括但不限于炔诺酮和醋酸甲羟孕酮)、空泡ATP酶抑制剂、血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂、噻唑烷二酮类、降钙素、蛋白激酶抑制剂、甲状旁腺激素(PTH)、甲状旁腺激素(PTH)类似物、重组甲状旁腺激素、生长激素促分泌素、生长激素释放激素、高同型半胱氨酸血症类胰岛素生长因子抑制剂、骨形态发生蛋白(BMP)、BMP拮抗抑制剂、前列腺素衍生物、成纤维细胞生长因子、他汀类药物(其包括但不限于洛伐他汀(lovastatin)、辛伐他汀(simvastatin)、普伐他汀(pravastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)、阿托伐他汀(atorvastatin)、西立伐他汀(cerivastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)和普伐他汀(pravastatin))、钙、氟化物、镁、锌、钙盐、氟化盐、镁盐、锌盐、维生素A、维生素A衍生物、维生素A类似物、维生素B6、维生素C、维生素C衍生物、维生素C类似物、维生素D、维生素D衍生物(其包括但不限于维生素D(其包括维生素D1[光甾醇],维生素D2[麦角骨化醇],维生素D3[胆钙化醇,1,25-二羟胆钙化醇],维生素D4[双氢速甾醇]和维生素D5[7-脱氢谷甾醇],和维生素D类似物)、维生素E、维生素E衍生物、维生素E类似物、维生素K、维生素K衍生物、维生素K类似物、维生素K2、乳清蛋白、乳清蛋白部分(其包括酸性或碱性乳清蛋白部分或其组合)、糖巨肽、乳铁蛋白、功能性乳铁蛋白变体、功能性乳铁蛋白部分、乳脂、高CLA乳脂、乳脂部分、大豆异黄酮、植物雌激素、益生元或益生菌或这些制剂任两种或多种的组合,它们可以影响矿物质吸收、多元不饱和脂肪酸和其组合,和其他本领域中已知的合适的制剂。
已公布的国际专利申请WO 03/082921和WO 2007/043900描述了有用的乳铁蛋白和乳铁蛋白片段及水解产物而且通过引用并入本文。
已公布的国际专利申请WO 2008/147228描述了脂肪酸、脂肪酸衍生物和包括高CLA乳脂和乳脂部分的乳脂组合物,该乳脂组合物能够治疗或预防得益于骨重吸收减少的骨疾病状态,而且该国际专利申请WO 2008/147228通过引用并入本文。
另外,涵盖了本发明组合物可与额外的活性成分一起配制,这可对特定情境中的个体有好处。例如可以使用靶向于相同或不同疾病过程的治疗剂。
现将通过下述的实施例以非限制性方式示例本发明的不同方面。
实施例
细胞培养,测定材料
所有的细胞培养材料都购于Invitrogen。MC3T3-E1前成骨细胞获取自美国典型微生物菌种保藏中心(ATCC),马纳萨斯,维吉尼亚州,美国(Manassas,VA,USA)。玫瑰果提取物购自Paninkret,德国(Germany)。
实施例1:成骨细胞分化
MC3T3-E1/4细胞以0.55x 105细胞/ml接种于48孔板中,每孔0.3ml。在每次实验中的每一处理有一式四份的孔,并且重复实验三次以确保结果的一致性。培养基为含有10%FCS的α-MEM。最初平板接种后24小时加入治疗剂以允许细胞粘附到孔。培养3天后,将培养基换为含有10%FCS、10mM的β-甘油磷酸盐和50μg/ml的抗坏血酸的α-MEM,加入或不加入治疗剂。每2-3天换一次培养基。培养10天后,自孔中移除培养基并且用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤细胞。37℃下用200μl的碱性磷酸酶检测试剂(TBS中含有0.05M对硝基苯磷酸,PH 9.5)孵育细胞1小时。将来自每一孔的检测试剂的两份样品(100μl)转移到96孔板,且使用ELx808Ultra微板读数仪(Bio-Tek Instruments Inc.,Vermont,USA)在405nm处读取吸光度。再次用PBS洗涤细胞,用1%甲醛固定15分钟并通过结晶紫测定来确定细胞数目。用300μl1%结晶紫(溶于PBS中)孵育细胞2小时,然后在流动水下洗涤细胞15分钟以除去过量的染料并使其风干。500μl/孔的Triton-X 100(0.2%,溶于双蒸水中)添加到干燥的板上,然后在室温下孵育该板2小时以溶解吸收的染料。自每孔取出二等份100μl转移到96孔板。使用ELx808Ultra微板读数仪(Bio-Tek Instruments Inc.,Vermont,USA)在550nm处读取吸光度并利用0.2%Triton-X 100作为空白。通过将405nm处的吸光度测量值(对硝基苯基产生或碱性磷酸酶活性的测量)除以550nm处的吸光度测量值(来自结晶紫测定,细胞数目的测量)来确定基于每一细胞的碱性磷酸酶活性。产生的指数图用于表示基于每一细胞的碱性磷酸酶活性。结果显示于图1中。玫瑰果给药与对照相比增加了分化17%。
实施例2:破骨细胞形成
破骨细胞能够产生自鼠科巨噬细胞RAW 264.7细胞株。RAW264.7细胞接种于包含盖玻片的24孔板并用鼠科RANK-L处理。通过将不同浓度的化合物添加到包含RANK-L的细胞培养基来检测化合物对破骨细胞形成的影响。将这些细胞孵育5天,其中在第3天更换培养基。然后固定盖玻片并进行TRAP染色,然后用苏木精复染。定量大的多核破骨细胞。破骨细胞表现为染有紫红色的大的多核细胞,并且可以形成甚至更大的巨细胞。通过拍摄每一盖玻片上三个随机区域的显微照片,然后计算具有多于3个细胞核的TRAP(+)细胞的数目并将其表示为“每单位面积具有多于3个细胞核的TRAP(+)细胞的数目”来定量制剂对破骨细胞形成的影响。TRAP染色剂也被溶解并通过比色测量。这些结果显示为图表。在体外测定确认的第一步骤中,进行细胞密度滴定。
为确定接种细胞的最佳细胞密度,在含有35ng/ml RANK-L的细胞培养基中以2x103-6x104细胞/ml接种细胞。从这里选择1.5x104细胞/ml的密度用于进一步铺板。然后使用所选择的细胞密度进行RANK-L滴定(1ng/ml-35ng/ml)。从这两种结果,选择1.5x104细胞/ml的细胞接种密度和15ng/ml的RANK-L浓度作为最佳条件,在该条件下观察在所有以后体外测定中的破骨细胞生成。结果显示于图2中。给予玫瑰果导致破骨细胞数目与对照相比减少了29%。在10ug/ml时,与对照相比没有观察到破骨细胞样细胞。细胞活力不受影响。
实施例3:骨重吸收
这一研究设计为评估在OVX大鼠模型中添加了玫瑰果的饮食是否能够影响骨质量。
动物
44只5.5月龄的雌性大鼠以基于酪蛋白的饮食饲喂2周(第2周至第0周)。在第2周,大鼠在麻醉状态下进行体内DEXA扫描。在第0周,大鼠或行假手术(假手术组;n=15)或切除卵巢(n=30)。假手术大鼠通过吸入异氟烷进行麻醉并作一个切口但是保持卵巢完整。从切除卵巢的动物体内移除卵巢。将切除卵巢的大鼠随机分配为对照组(OVX),饲喂酪蛋白对照饮食,或分配为治疗组(玫瑰果组),饲喂为对照饮食的0.5%w/w的玫瑰果提取物28周。
通过测量子宫重量来确定成功的卵巢切除术的确认。OVX组(0.14g;p<0.0001)和玫瑰果组(0.13g;p<0.0001)这两组具有比假手术组(0.86g)显著低的子宫重量。
在第28周,大鼠禁食过夜,然后通过放血(麻醉下心脏穿刺)使其安乐死。心脏穿刺后,动物暴露于100%CO2。解剖尸体,收集各种骨并固定以用于进一步的分析。
饮食
饲喂动物的平衡半合成饮食由15%(w/w)酪蛋白(如同酪蛋白酸盐)、5%(w/w)纤维素、5%(w/w)玉米油、0.5%(w/w)钙、62%(w/w)淀粉和添加的维生素、矿物质和氨基酸以满足AIN93M(国家研究委员会National Research Council,1995)的要求。
骨的机械特性
将右股骨刮除干净附着其上的肉,并且储存在-20℃的磷酸盐缓冲液中。在生物力学测试前,将骨解冻。使用电子卡尺测量股骨的长度。用防水笔标记出中点,而且股骨的宽度和厚度在中点处也进行记录。然后使股骨在测试前和测试期间保持在23℃以处于室温。将股骨置于构建用于三点弯曲试验的测试夹具。支撑杆间的距离为12mm的固定长度。以恒定的50mm min-1的变形率施用载荷,使用Shimadzu Ezi-测试质地分析仪(Shimadzu Ezi-test texture analyzer,Kyoto,Japan)测量最大载荷(N)、刚度(N mm-2)和能量(J)。结果显示于图3中。在三点弯曲试验中所需要断裂右股骨的能量数对假手术组、OVX和玫瑰果组分别为118N/mm2、96N/mm2和101N/mm2。假手术组和OVX有显著性差异(p=0.0105)。玫瑰果组与假手术组或OVX没有显著性差异,而是在它使骨断裂时更有弹性的效应中处于中间。
实施例4:骨重吸收和机械特性
这一研究设计为评估在OVX大鼠模型中添加了玫瑰果的饮食是否能够抑制骨重吸收或影响骨生物化学和机械特性。
动物
45只约5月龄的雌性Sprague Dawley大鼠单独饲养于鞋盒样的笼中,自由饮用Milli-Q水。用3周时间使它们适应这种饮食和它们的环境,它们全部饲喂营养充足的基于酪蛋白的饮食,该饮食由14%(w/w)酪蛋白酸盐、5%(w/w)纤维素、5%(w/w)维生素、5%(w/w)矿物质、1.3%(w/w)碳酸钙、4%(w/w)玉米油、5.7%(w/w)蔗糖和60%(w/w)小麦淀粉组成。
任一饮食中都没有添加维生素C,而且维生素混合物没有包含任何维生素C。它们饮食中添加的玫瑰果提供了大约0.08%(w/w)的维生素C。
3周后,30只动物被切除卵巢,且另外15只进行假手术以模拟卵巢切除术而没有实际移除卵巢。此后,将随机挑选的15只切除卵巢的大鼠和15只行假手术的动物饲喂标准的基于酪蛋白的饮食,同时另外15只切除卵巢的动物接受添加了2%玫瑰果提取物的基础饮食。24周后,如实施例3中所述的使动物安乐死,移除它们的右股骨并且为使用如实施例3中所述的三点断裂试验方案进行骨生物力学测试做好准备。结果通过单因素方差分析(1-way ANOVA)进行比较。
生物化学分析
在OVX、假手术和玫瑰果组动物的右股骨上进行生物力学分析。最大载荷、断裂载荷和能量都使用Shimadzu Ezi-测试质地分析仪(Shimadzu Ezi-test texture analyzer)(Kyoto,Japan)来计算。最大载荷被定义为三点弯曲试验期间应用到股骨上所记录下的最大力。断裂载荷被定义为三点弯曲试验期间使骨骨折的力。通过测力传感器来测量这一力。该装置使骨断裂,并收集和记录力及位移。将其作图产生了力-位移曲线,该曲线清楚地鉴定出最大和断裂载荷。软件自动鉴定这些点。
能量是使骨断裂所消耗的能量的测量,而且也使用Shimadzu Ezi-测试质地分析仪(Kyoto,Japan)、利用所记录的力以及在断裂和最大力测量值处的已知点来计算。
这些结果显示,来自饲喂2%玫瑰果提取物的动物的骨的断裂比OVX动物需要更大的力/能量,需要与假手术组动物相当的力/能量。最大载荷显示于图4中,断裂载荷显示于图5中以及能量显示于图6中。
工业应用
本发明在维持骨健康或改善骨重塑中导致骨质流失的不平衡中具有效用。
所述的组合物可以用作食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、膳食补充剂、营养产品、医疗食品、营养药品、药剂或药物。
本领域技术人员应理解,上文提供的描述只作为示例并不限制本发明。
参考文献
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Claims (17)
1.玫瑰果水溶性提取物在制备用于治疗或预防以削弱或脆弱的骨为特征的骨疾病状态的组合物中的用途,其中所述骨疾病状态能通过减少骨重吸收、减少破骨细胞形成、增加骨形成、增加成骨细胞增殖、增加成骨细胞分化或增加矿化作用或以上的组合实现治疗或预防。
2.如权利要求1所述的用途,其中所述组合物维持或增加骨形成、维持或增加骨矿物质密度、维持或增加骨含量、刺激骨折愈合期间骨再生、减少骨重吸收、减少骨质流失、或维持或增加骨强度。
3.如权利要求1所述的用途,其中所述疾病状态为骨质疏松症或骨质减少。
4.如权利要求3所述的用途,其中所述疾病状态为骨质疏松症。
5.如权利要求3所述的用途,其中所述疾病状态为骨质减少。
6.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物提供1mg至2000mg/kg体重/天的玫瑰果。
7.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物提供100mg至1000mg/kg体重/天的玫瑰果。
8.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物提供50mg至500mg/kg体重/天的玫瑰果。
9.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物提供0.05mg至300mg/kg体重/天的玫瑰果。
10.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物还包含一种或多种乳品成分。
11.如权利要求10所述的用途,其中所述乳品成分选自包含以下的组:调配的、粉末状的或新鲜的脱脂奶、复原全脂或脱脂奶粉、脱脂奶浓缩物、脱脂奶滞留物、炼乳、超滤奶滞留物、乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物、脱钙的乳蛋白浓缩物、低脂奶、低脂乳蛋白浓缩物、酪蛋白、酪蛋白酸盐、乳脂、高CLA乳脂、奶油、黄油、无水乳脂、酪乳、奶酪乳清、硬乳脂部分、软乳脂部分、鞘脂部分、乳脂球状膜部分、磷脂部分、复合脂质部分、初乳、初乳部分、初乳蛋白浓缩物、初乳乳清、来源于初乳的免疫球蛋白部分、乳清、乳铁蛋白、一种或多种乳铁蛋白片段、乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、甜乳清、乳酸乳清、矿物酸乳清、复原乳清粉、乳矿物质、衍生自任一乳或初乳处理流的组分、衍生自通过任一乳或初乳处理流的超滤作用或微滤作用而获取的滞留物或渗透物的组分、衍生自通过任一乳或初乳处理流的色谱分离而获取的突破或吸附部分的组分、这些成分任一种的提取物包括通过多级分馏、差异结晶、溶剂分馏、超临界分馏、近超临界分馏、蒸馏、离心分馏、利用改性剂的分馏制备的提取物、这些成分任一种的水解产物、水解产物的部分以及这些成分的任两种或更多种的任意组合,包括水解部分的组合、非水解部分的组合以及水解与非水解部分的组合。
12.如权利要求11所述的用途,其中所述色谱包括离子或凝胶渗透色谱法。
13.如权利要求11所述的用途,其中所述改性剂包括肥皂或乳化剂。
14.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物还包含一种或多种选自钙、镁、锌、维生素D、维生素K、叶酸或叶酸盐、维生素B6和维生素B12的制剂。
15.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物为食品或食品添加剂。
16.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物为饮料或饮料添加剂。
17.如权利要求1至5中任一项所述的用途,其中所述组合物为膳食补充剂、营养产品、医疗食品或药物。
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