CN1020615C - 表鬼臼毒葡糖苷4′-磷酸酯衍生物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及新的抗肿瘤剂4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯衍生物及其盐，它们的制备方法。这类新抗肿瘤药具有高水溶性。

Description

本申请是1987年8月4日向美国专利商标局递交的美国专利申请系列号081，493的部分继续申请。

本申请涉及表鬼臼毒葡糖苷4′-磷酸酯衍生物，它们的抗肿瘤应用及含这些新药剂的药物组合物。表鬼臼毒甲醛糖苷（Etoposide，Vp-16，Ⅰ）和表鬼臼毒噻吩醛糖苷（teniposide，VM-26，Ⅱ）是临床使用的抗癌剂，是由天然存在的木脂素表鬼臼毒（Ⅲ）制成的，包括表鬼臼毒甲醛糖苷和表鬼臼毒噻吩醛糖苷的这类化合物有时叫做4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷。表鬼臼毒甲醛糖苷和表鬼臼毒噻吩醛糖苷在治疗包括睾丸癌，小细胞肺癌，卵巢癌，乳腺癌，甲状腺癌，膀胱癌，脑瘤，非淋巴细胞性白血病，何杰金氏病等各种癌症方面是有效的。

化合物Ⅰ和Ⅱ及其生产方法被Wartbury等揭示于美国专利3，408，441和Kellev-Juslen等揭示于美国专利3，524，844。其中的化合物特别是表鬼臼毒甲醛糖苷和表鬼臼毒噻吩醛糖苷用作本发明制备表鬼臼毒葡糖苷4′-磷酸酯衍生物的原料。

含羟基治疗剂的磷酸化已用作药物潜伏化的一种手段;磷酸化衍生物在体内经磷酸酯酶裂解而释放出活性母体分子。作为潜在的前药的简短讨论包括在题目为“生物可逆性药物衍生物的设计原理：前药”（Sinkula和Yalkowsky，Jphavm.Sci1975，64，181-210）的评论文章中。已知的抗肿瘤药的磷酸酯的例子有喜树碱（日本专利公开21-95，394和21-95，393;Derwent    Abst。№87-281016和 87-281015）和正定霉素（美国专利4，185，111）。

鬼臼毒磷酸酯二钠盐Ⅳ由Seligman等制得。但是，此磷酸酯不能经前列腺酸性磷酸酶水解且毒性不比母体表鬼臼毒低（Cancerchemotherapy    Reports，Ⅰ，1975，5∶233-242）。

Ⅳ

本发明提供了具有抗肿瘤活性的4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷的磷酸酯。特别是，4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷的二氢磷酸酯及其盐水溶性强，于是提供了一种比现有这类治疗剂表鬼臼毒甲醛糖苷和表鬼臼毒噻吩醛糖苷（水溶性小）更优良的药剂。

本发明提供了通式Ⅴ的4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷的4′-磷酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，

通式中R⁶是H;R¹是选自（C_1-12）烷基，（C_2-10）链烯基，（C_5-6）环烷基，2-呋喃基，2-噻吩基，（C_6-10）芳基，（C_1-14）芳烷基和（C_8-14）芳烯基，这些芳环可以不取代或取代有一个或多个选自卤素，（C_1-8）烷基，（C_1-8）烷氧烷，羟基，硝基和氨基的基团;或R¹和R⁶各自为（C_5-6）烷基;或R⁷和R⁸与其相连的碳原子一起形成（C_5-6）环烷基;X是氧或硫;R⁷和R⁸各自独立地选自H，（C_1-5）烷基，A-取代（C_1-5）烷基，（C_3-6）环烷基，A-取代（C_3-6）环烷基，（C_6-10）芳基，A-取代芳基，烷基取代的芳基， （C_7-14）芳烷基，A-取代的芳烷基和烷基取代的芳烷基;这里所说的A-取代基是选自羟基，烷氧基，烷酰氧基，氰基，氨基，烷氨基，二烷氨基，羧基，烷硫基，巯基，巯硫基，硝基吡啶基二硫醚基，烷酰氨基，烷酰基，氨基甲酰基，硝基和卤素的一个或多个基团。

化合物Ⅴ的盐包括单阳离子盐和二阳离子盐。阳离子可以是金属离子例如碱金属或碱土金属离子或其它普通金属离子;或有机含氮基例如铵，一、二或三烷铵或吡啶嗡。阳离子最好选自钠、钾、锂、铯、镁、钙、铝、铵和一、二和三烷铵。较佳方案提供了R⁷和R⁸都是H的通式Ⅴ化合物及其药物学上可接受的盐。最佳方案提供了表鬼臼毒甲醛糖苷4′-二氢磷酸酯和硫代磷酸酯及其相应的二钠盐Ⅵa和Ⅵb。

Ⅵ

a：X＝O

b：X＝S

另一较佳方案提供了R⁷和R⁸相同并选自2，2，2-三卤乙基，2-氰基乙基，（C_1-5）烷基，苯基和苯基烷基的通式Ⅴ化合物，这里的苯环任意取代有烷基，卤素或硝基。

本发明的另一方面是提供了通式Ⅶ的抗肿瘤氨基磷酸酯衍生物及其药学上可接受的盐，

Ⅶ

通式中R¹，R⁶和X的定义如上;Y是Cl、H或NR⁵R⁶;R²，R³，R⁴和R⁵各自独立地选自H，（C_1-5）烷基，（C_2-5）烯基， （C_3-6）环烷基;A-取代的（_1-5）烷基，A-取代的（C_3-5）烯基，A-取代的（C_3-6）环烷基;或R²，R³和与之相连的氮一起联成3-6元环;或R⁴，R⁵和与之相连的氮一起成为3-6元环;这里所说的A-取代基定义如上。

本发明的又一方面提供了通式Ⅷ的二氯磷酸酯中间体，其中R¹，R⁶和X的定义如上;这些中间体在制备通式Ⅴ化合物中是有用的。

Ⅷ

本发明再一方面是提供了制备R⁷和R⁸都是H的通式Ⅴ化合物及其药学上可接受的盐的方法，该方法包括（a）将通式Ⅸ的化合物转化为通式Ⅹ的化合物，其中R¹，R⁶和Ⅹ的定义如上，G是磷酸酯保护基，

（b）除去磷酸酯保护基，（c）任意地将（b）步的产物转化为药学上可接受的盐。磷酸酯保护基包括上面R⁷定义的那些基团（H除外），但并不限于此。

除非另有说明，这里所用的术语“烷基”指直链或支链烷基;“卤素”指溴，氯、氟和碘;“etopofos”是指表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯二钠盐（即化合物Ⅵa）。

4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷的酚基可被磷酰氯和硫代磷酰氯磷酰 化为相应的二氯磷酸酯和二氯硫代磷酸酯（通式Ⅷ）。此磷酰化反应在适宜的无水有机溶剂如乙腈中，最好在和叔胺碱如N，N-二异丙基乙胺存在下进行。反应过程可以用薄层色谱（TLC）监测，即通过产物的出现和原料的消失或两者一起来判断最佳反应时间。依我们的经验反应周期可以从大约4小时到72小时。所需反应时间的长短似乎与所用磷试剂的质量有关。

通式Ⅷ的4′-二氯磷酸酯是多用途的中间体，可以后来与亲核试剂反应得到各种磷酸酯和硫代磷酸酯衍生物。该中间体可水解为磷酸酯，和在碱存在下得到磷酸盐。例如，通式Ⅷ化合物用过量碳酸氢钠水溶液处理得到相应的4′-磷酸酯二钠和4′-硫代磷酸酯二钠盐。其它阳离子如钾和铵的碳酸氢盐也可用于提供相应的盐。二氯磷酸酯中间体Ⅷ可与胺反应生成相应的磷酸二酰胺酯或氯磷酸单酰胺酯。适宜的胺包括氨，伯胺如乙胺、氯乙胺、烯丙胺、二甲氨基丙胺、羟乙胺、环己胺和氨基环己醇，仲胺如二乙胺、哌啶、乙基甲基胺，甲氨基乙醇、乙基丁基胺等，但不只限于这些。相对于表鬼臼毒二氯磷酸酯所用的胺量可以调节以便有利于一种或另一种反应产物的生成。例如，当相对于表鬼臼毒而使用较多过量的胺时，得到对称的磷酸二酰胺酯即通式Ⅶ中Y也是NR²R³的化合物;当使用控制量的胺时，得到氯磷酸单酰胺酯，即通式Ⅶ中Y是氯的化合物。氯磷酸单酰胺酯可水解为通式Ⅶ中Y是OH的化合物或其盐，或者它可以进一步与仲胺反应而得到不对称的磷酸二酰胺酯，即通式Ⅶ中Y是NR⁴R⁵而不是NR²R³的化合物。

上述反应过程可用下面的反应式说明。

磷酸三酯是通式Ⅴ中R⁷和R⁸不是氢的化合物，这些化合物可通过卤磷酸二酯（即卤素-P（X）（OR⁷）（OR⁸））处理4′-脱甲基表鬼臼毒葡糖苷制备。业已发现，此反应在乙腈中在有机三烷胺碱存在下进行最有效。最合适的碱是二异丙基乙基胺。卤磷酸酯和胺的用量至少是一当量，但与表鬼臼毒警糖苷的用量相比，这两种反应试剂最好用略过量的摩尔当量。此反应可以在任何有利于产物形成的温度下进行，不过，稍高的温度如30～40℃似乎可加速此本来要在数天内完成的反应。对称的卤磷酸二酯[即R⁷＝R⁸]可从醇和例如磷酰氯方便地制备，不对称的卤磷酸酸酯[即R⁷＝R⁸]可从醇和二卤磷酸酯制备。通过其它路线制备磷酸三酯也是可能的，例如酚通过与（C₆H-CH₂O）₂）PN（i-C₃H₇）₂这样的试剂反应先变成亚磷酸酯，接着用例如间氯过苯甲酸氧化此亚磷酸酯为磷酸三酯。

磷酸三酯还可用作制备通式Ⅴ化合物及其盐类的中间体。例如，当磷酸二苯酯（Ⅴ式中，R⁷＝R⁸＝苯基）催化氢化时得到二羟基磷酸酯（式Ⅴ中，R⁷＝R⁸＝H）。其它适宜的磷酸酯保护基包括（但不限于2，2，2-三氯乙基，苄基，氰乙基，对-硝基取代的苯基，苄基，苯乙基和对-溴苯基。二羟基磷酸酯（式Ⅴ中R⁷＝R⁸＝H）与适宜的碱例如碳酸氢钠，碳酸氢铵或有机胺反应转化为盐。另外，使此二羟基磷酸酯通过含所要阳离子的离子交换树脂柱也可以产生这种盐。

虽然本发明用磷酰氯，卤磷酸二酯及其相应的硫类似物作为磷酰化试剂，但也可以应用可对苯酚磷酰化的其它磷试剂，适合的反应条件和介质可根据所选用的磷酰化试剂来先择。题目为“生物分子磷酰化的现代方法”（Synthesis，1977，737-52）的述评文章包括了磷酰 化试剂的另外一些例子，因此，收在这里作参考。

本发明的代表性化合物用小鼠移植性P388白血病评价抗肿瘤活性。在所有试验中，将P388鼠白血病的10⁶腹水癌细胞接种到雌性CDF小鼠中。试验中使用表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯，其二钠盐和4′-硫代磷酸酯二钠盐时，肿瘤接种和药物治疗都是经静脉注射。在所有其它试验中，肿瘤接种和药物治疗是经腹腔注射。而在所有试验中，以腹腔注射表鬼臼毒甲醛糖苷作阳性对照。试验持续28-48天，记录终末期存活的小鼠数。抗肿瘤活性以%T/C表示，此为药物治疗组的平均存活时间（MST）对盐水处理对照组的平均有活时间的比值。

一般认为，在P388试验中，%T/C值为125或更大的化合物，具有显著的抗肿瘤活性。表1列出了上述评价的结果。表中报告了最大%T/C值和达到这样效果的剂量。

表1

对小鼠P388白血病的抗肿瘤活性

化合物    剂量＊    途径    MST（d）%    T/C

（mg/kg/注射）

静脉内植入肿瘤    细胞

实施例1    140    静脉    29.0    363

表鬼臼毒甲醛糖苷    50    腹腔    20.5    256

实施例4    200    腹腔    18.0    225

表鬼臼毒甲醛糖苷    100    腹腔    21.5    269

实施例8    125    静脉    24.5    306

表鬼臼毒甲醛糖苷    100    腹腔    29.5    369

表1-续-

化合物    剂量＊    途径    T/C

MST（d）%

（mg/kg/注射）

腹腔内接种肿瘤    细胞

实施例2    240    腹腔    16.5    165

表鬼臼毒甲醛糖苷    60    腹腔    25.0    250

实施例3    200    腹腔    15.5    155

表鬼臼毒甲醛糖苷    100    腹腔    27.0    270

实施例7    240    腹腔    25.0    250

表鬼臼毒甲醛糖苷    100    腹腔    26.0    260

实施例9    150    腹腔    19.5    217

表鬼臼毒甲醛糖苷    100    腹腔    24.0    267

＊如没有另外说明，是在第5天和第8天给药（第1天是肿瘤接种的当天）。

业已证实，本发明的抗肿瘤化合物在实验动物中具有抗移植性肿瘤的活性。特别是通式Ⅵa（“etopofos”）代表的化合物，在P388试验中具有比表鬼臼毒甲醛糖苷高得多的抗肿瘤活性。这种选择性药剂代表了一类高水溶性的表鬼臼毒甲醛糖苷的前药（离体抗肿瘤活性低），经碱性磷酸酯酶迅速分解而释出表鬼臼毒甲醛糖苷。释出的表鬼臼毒甲醛糖苷呈现与母体药有同样的细胞毒性。

因此，本发明提供了一种抑制哺乳动物肿瘤的方法，该方法是给肿瘤宿主以有效的抑制肿瘤剂量的通式Ⅴ或Ⅷ的抗肿瘤化合物。为此，可以以常规方法给药包括但不限于静脉注射，肌内注射，瘤内注射，动脉注射，淋巴内注射和口服。

本发明的另一方面是提供了一种药物组合物，该组合物包括通式Ⅴ和Ⅷ的化合物和药学上可接受的载体。该抗肿瘤组合物可以以合适于所要求的给药途经的任何药物剂型所构成。这样的组合物的例子包括口服给药的固体剂型如片剂、胶囊剂、丸剂、粉剂和颗粒剂，口服给药的液体剂型如溶液、悬浮液、糖浆剂或剂和胃肠外给药的制剂如无菌的溶液、悬浮液或乳液;也可以制成无菌固体组合物形式，这种固体组合物可在使用前溶于无菌水、生理盐水或其它注射用无菌介质。

关于哺乳类宿主给药的最佳剂量和用法，熟悉该技术的人很容易确定。当然，实际用量将根据特定的处方剂型、所用的特定化合物、用药方式和给药部位，以要接受治疗的宿主和疾病而改变。改变药物作用的许多因素必须考虑进去，如年令、体重、性别、食物、给药时间、给药途径、排泄速度、患者状态、药物组合、对药物反应的敏感性和病情。

下面一些实施例仅仅为了说明本发明而不限制本发明的范围，发明范围只由附属于本申请的权利要求限定。

在下面实施例中，质子和碳核磁共振谱（NMR）（用CDCl₃或D₂O作内标物）和磷NMR谱（用85%H₃PO₄水溶液作内标物）在Bruker WM360光谱仪上进行。红外光谱（IR）用Perkin-Elmer1800傅里叶变换光谱仪测定。“快速色谱”是指Still的方法（Still，W.C.;Kahn，M.;Mitra，A;J.Org.Chem.，1978，43，2923）用E.Merck硅胶（230-400目）进行。反相色谱在正氮气压下用键合于硅胶上的C18（十八烷基硅烷，40-μm粒径，J.T.Baker厂商）进行。

实施例1

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯二钠盐（化合物Ⅵa）

2.30g（3.91mmol）表鬼臼毒甲醛糖苷于210ml干燥乙腈中的悬浮液电磁搅拌并温热生成近完全的溶液。将此溶液冷至室温，加入2.36ml（13.5mmol）N，N-二异丙基乙基胺。然后，将此混合物冷至0℃并于30秒钟内用注射器加入666mg（4.34mmol）POCl₃。于2-3小时内此混合物慢慢升至室温并于室温下继续搅拌63小时。然后，移出20%（体积）内容物并象实施例2那样用二乙胺处理。其余部分用6.0g（71.4mmol）碳酸氢钠于110ml无离子水（110ml）的溶液处理，此混合物在室温下搅拌80分钟，然后，用20ml饱和碳酸氢钠水溶液，125ml无离子水和350ml乙酸乙酯分配。有机层用50ml无离子水提取，合并水层并用250ml乙酸乙酯洗涤，然后于室温下0.5mm真空处理1小时以除去溶剂。水溶液部分用装有15cm键合于硅胶上的十八烷基硅烷的4cm内径的柱子处理（用甲醇装填后，用水平衡）。所有水溶液部分上柱后，用175ml水洗脱以便除去无机盐，然后用4∶1H₂O∶CH₃OH洗脱产物。在0.5乇下浓缩，得到744mg（36%）纯的标题化合物，为无色固体。或用冷冻干燥，得到纯的标题化合物，为非常松散的低密度固体。

IR（KBr）3426，1775，1593，1505，1486，1337，1239，1191，1122，1078，1034，983，927，888，876，851，840，697， 684，664，547cm^-1

360MHz¹HNMR（D₂O）δ6.93（s，1H），6.59（s，1H），6.27（s，2H）5.93（d，2H），5.09（d，1H，J＝2.8Hz），4.83（q，1H，J＝5.0Hz），4.68（d，1H，J＝7.9Hz），4.62（d，1H，J＝5.7Hz），4.47-4.35（m，2H），4.24（dd，1H，J＝4.4和10.4Hz），3.64（s，6H），3.68-3.52（m，3H），3.44-3.30（m，3H），3.17-3.07（m，1H），1.31（d，3H，J＝5.0Hz）。

90MHz¹³CNMR（D₂O）δ178.5，151.8，148.1，146.1，135.0，132.6，130.9，127.4，109.9，109.5，107.4，101.3，100.4，99.6，79.2，73.7，72.7，72.2，69.1，67.1，65.4，55.6，42.8，40.3，37.5，18.8。

146MHz³¹PNMR（D₂O）δ3.79。

质谱（FAB），m/e，713（M⁺+H），C₂₉H₃₁Na₂O₁₆P要求M⁺，712。

分析 计算C₂₉H₃₁Na₂O₁₆P：C，48.89;H，4.39;Na，6.45。

实测^＊：C，48.72;H，4.56;Na，6.56。

＊用Karl Fischer分析法测定8.16%H₂O加以校正。

实施例2

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-（双-[N，N-二乙基]磷酰胺）（Ⅶ，X＝0，R¹＝甲基，R⁶＝H，Y＝N（C₂H₅）₂，R²＝R³＝乙基）

如同实施例1，20%（体积）表鬼臼毒甲醛糖苷和POCl₃的反应产物混合物，加到4ml二乙胺中并于室温下搅拌3小时。真空蒸除溶剂，浅橙色残留物在硅胶上经快速色谱提纯。用含4%甲醇的二氯甲烷洗脱，得到271.3mg（46.9%）纯的标题化合物，为浅黄色固体。

IR（KBr）3408，2974，2936，2877，1774，1598，1508，1486，1467，1421，1383，1339，1234，1191，1162，1130，1098，1079，1037，902，858，795，713，700，544cm^-1。

360MHz¹HNMR（CDCl₃）δ6.79，（s，1H），6.50（s，1H）， 6.20（s，2H），5.96（ABq，2H），4.87（d，1H，J＝3.2Hz），4.71（q，1H，J＝5.1Hz），4.61（d，1H，J＝7.6Hz），4.57（d，1H，J＝5.2Hz），4.39（dd，1H，J＝9.1and10.2Hz），4.22-4.13（m，2H），3.74（m，1H），3.65（s，6H），3.55（m，1H），3.40（m，1H），3.32-3.10（m，11H），2.94-2.83（m，1H），1.37（d，3H，J＝5.1Hz），1.10（m，12H）。

146MHz³¹PNMR（CDCl₃）δ16.49。

质谱（FAB），m/e，779（M^＊+H），573（M⁺-蔗糖）。C₃₇H₅₁N₂O₁₄P要求M⁺，778。

实施例3

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-（N，N[2-氯乙基]磷酰氯）（Ⅶ，R′＝甲基，R⁶＝H，X＝0，Y＝Cl，R²＝R³＝CH₂CH₂Cl）。

2.00g（3.40mmol）表鬼臼毒甲醛糖苷于220ml干燥乙腈的悬浮液在电磁搅拌下，温热至近完全溶液。将此混合物冷至室温并用2.05ml（11.8mmol）N，N-二异丙基乙基胺处理。再在氮气氛下将此混合物冷至0℃并于30秒内用注射器加入624mg（4.01mmol）磷酰氯。于0℃下磁搅拌混合物2.5小时，再于室温下搅拌1.5小时。迅速加入1.82（10.2mmol）双-（2-氯乙胺）盐酸盐，再加入2.10ml（12.0mmol）N，N-二异丙基乙基胺。于室温下搅拌此混合物84分钟，真空浓缩至5ml后，溶解于400ml乙酸乙酯和5ml甲醇中。用pH5的缓冲液（2×200ml），水（150ml）和盐水（150ml）洗涤所得的溶液并用Na₂SO₄/MgSO₄干燥。蒸发掉溶剂得到橙黄色固体，用硅胶快速色谱和3～4%甲醇的二氯甲烷溶液洗脱此固体，得到1.25g（45.4%）纯的标题化合物，为无色固体。

360MHz¹HNMR（CDCl₃）δ6.82（s，1H），6.52（s，1H），6.27（S，2H），5.99（d，2H），4.90（d，1H，J＝3.4Hz），4.73（q，1H，J＝5.0Hz），4.65-4.60（m，2H），4.41（m，1H），4.25-4.15（m，2H），3.75-3.65（m，5H），3.72（s，6H）， 3.60-3.23（m，9H），2.91-2.80（m，1H），1.38（d，3H，J＝5.0Hz）。

146MHz³¹PNMR（CDCl₃）δ11.16和10.96（由于手征性磷有两个峰）

质谱（FAB），m/e，812，810，808

C₃₃H₃₉Cl₃NO₁₄P要求M⁺（³⁵Cl）809。

实施例4

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-硫代磷酸酯二钠盐（化合物Ⅵb）

2.04g（3.47mmol）表鬼臼毒甲醛糖苷于175ml乙腈的悬浮液电磁搅拌下温热至近完全溶液。将此溶液冷至室温后加2.00ml（11.5mmol）N，N-二异丙基乙基胺。再将此混合物冷至0℃并于30秒钟内用注射器加入0.720g（4.17mmol）硫代磷酰氯。于2～3小时内将此混合物慢漫温热至室温并在室温下继续搅拌16小时。然后，将此混合物温热至30～35℃并在此温度下保持4小时。经TLC（50%甲醇的二氯甲烷溶液）观察，主要的新斑点的Rf值比表鬼臼毒甲醛糖苷高。反应混合物用7.4g固体碳酸氢钠处理，然后加100ml无离子水。此混合物在28～25℃下搅拌1.5小时，然后在室温下搅拌1.5小时。混合物以200ml无离子水，30ml饱和碳酸氢钠和300ml乙酸乙酯分配。进一步的操作和快速色谱按照实施例1的方法是进行，得到1.03g（40.8%）纯的标题化合物，为无色固体。

360MHz¹H NMR（D₂O）δ6.93（s，1H，6.60（s，1H），6.27（s，2H），5.93（d，2H），5.09（d，1H，J＝2.8Hz），4.83（q，1H，J＝5.0Hz），4.68（d，1H，J＝7.8Hz），4.63（d，1H，J＝5.7Hz），4.47-4.35（m，2H），4.24（dd，1H，J＝4.3和10.5Hz），3.64（s，6H），3.67-3.52（m，3H），3.47-3.29（m，3H），3.17-3.07（m，1H），1.31（d，3H，J＝5.0Hz）。

质谱（FAB），m/e728（M⁺），706（M⁺+H-Na）。C₂₉H₃₁Na₂O₁₅PS要求M⁺，728。

实施例5

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-[[N，N-双（2-氯乙基）氨基][N-（3-羟丙基）氨基]]磷酸酯（Ⅶ，X＝0，R¹＝甲基，R⁶＝H，R²＝R³＝2-氯乙基，Y＝-NH（CH₂）₃OH）

280mg（0.346mmol）实施例3化合物与3ml二氯甲烷的溶液磁搅拌下用33.5mg（0.446mmol）3-氨基-1-丙醇与1ml二氯甲烷溶液处理。5分钟后，再加入31.0mg（0.413mmol）3-氨基-1-丙醇与0.5ml绝对无水甲醇的溶液。用4个制备型TLC板（1mm，E.Merck硅胶）提纯此反应混合物，用5～8%甲醇的二氯甲烷溶液展开。所要产物的谱带用5%甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱，然后，真空蒸发，再在0.1乇下干燥，得到185mg（63%）纯的标题化合物，为无色固体（磷的非对映体混合物）。

360MHz¹H NMR（CDCl₃）δ7.20（br s，1H），6.80（s，1H），6.50and6.48（2s，1H），6.26和6.25（2s，2H），5.97（d，2H），4.88（m，1H），4.73（q，1H），4.64-4.57（m，2H），4.40（m，1H），4.21-4.13（m，2H），3.71，3.70（2s，6H），3.71-3.06（m，18H），2.90-2.80（m，1H），1.37（d，3H）。

质谱（FAB），m/e，849，851（M⁺+H，³⁵Cl，³⁷Cl）。C₃₆H₄₇Cl₂N₂O₁₅P要求M⁺848（³⁵Cl）和850（³⁷Cl）。

实施例6

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-[[N，N-双（2-氯乙基）氨基]-[（N-[3-硝基吡啶-2-基）二硫]乙基]氨基]磷酸酯（Ⅶ，X＝0，R¹＝甲基，R⁶＝H，R²＝R³＝2-氯乙基，Y＝-NH（CH₂）₂-SS-（3-硝基吡啶-2-基）

248mg（0.306mmol）实施例3化合物和105mg（0.393mmol）2-（3-硝基吡啶基）-1-（2-氨基乙基）二硫化物盐酸盐的混合物用7ml二氯甲烷处理，再加入100μl（0.570mmol）二异丙基乙基胺和0.5ml干燥甲醇。所得溶液于室温下搅拌1.5小时，然后，用4个 制备型TLC板（1mm，E.Merck硅胶）直接提纯，用4-5%甲醇的乙酸乙酯溶液展开。用5%甲醇的乙酸乙酯溶液洗脱得到要求产物谱带的洗脱液，真空蒸发，然后，在0.1乇下干燥，得到231.7mg（75.3%）纯的标题化合物，为黄-棕色固体（磷的非对映体混合物）。

IR（KBr）1774，1598，1584，1559，1509，1486，1456，1421，1397，1342，1236，1160，1128，1096，1038，1004，926，857，747，699cm^-1。

360MHz¹HNMR（CDCl₃）δ8.81 and 8.77（2m，1H），8.48（m，1H），7.33（m，1H），6.81（s，1H），6.51和6.50（2s，1H），6.26（br s，2H），5.97（d，2H），4.89（m，1H），4.73（q，1H），4.65-4.52（m，3H），4.41（m，1H），4.24-4.14（m，2H），3.71，3.70（2s，6H），3.71-2.85（m，19H），2.68（brs，1H，OH），2.37（brs，1H，OH），1.37（d，3H）。

质谱（FAB），m/e，1005，1007（M⁺+H，³⁵Cl，³⁷Cl，C₄₀H₄₇Cl₂N₄O₁₆PS₂要求M⁺，1004（³⁵Cl）和1006（³⁷Cl）。

实施例7

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-二苯基磷酸酯（R′＝甲基，R⁶＝H，R⁷＝R⁸＝苯基）

10.50g（17.84mmol）表鬼臼毒甲醛糖苷（在80℃/0.5乇压力下，用P₂O₅干燥过）在450ml干燥乙腈中的悬浮液，磁搅拌下用4.20ml（24.1mmol）二异丙基乙基胺处理，然后，用注射器加入2.00ml（9.65mmol）氯磷酸二苯酯。在氮气氛下，于50℃搅拌混合物2小时，表鬼臼毒甲醛糖苷全部溶剂解。再加1.80ml（8.68mmol）氯磷酸二苯酯并于45℃保持72小时。另外加0.75ml（4.3mmol）二异丙基乙基胺和0.80ml（3.86mmol）氯磷酸二苯酯后，此混合物于40～45℃再搅拌72小时。再用0.40ml（1.93mmol）氯磷酸二苯酯处理并于40～45℃下保持22小时。加20ml异丙醇，真空蒸发，将固 体残余物溶解于500ml二氯甲烷中并用400ml水分配。水层用100ml二氯甲烷提取，合并有机层，用250ml盐水洗涤，硫酸钠/硫酸镁干燥。旋转蒸发后用2-3%甲醇的二氯甲烷做硅胶快速色谱，得到12.50g（85%）纯的标题化合物，为无色固体。

FAB MS m/e（相对密度）820（M+H）⁺

IR（KBr）3460，2925，1775，1601，1490cm^-1。

¹H NMR（CDCl₃）δ7.28（m，8H），7.15（m，2H），6.78（s，1H），6.47，（s，1H），5.95（m，2H），4.85（d，J＝3.5Hz，1H），4.71（m，1H），4.60（d，J＝7.6Hz，1H），4.56（d，J＝5.1Hz，1H），4.38（m，1H），4.22-4.13（m，2H），3.72-3.60（m，1H），3.48（s，6H），3.54-3.28（m，3H），3.23（dd，J＝14.2，5.3Hz，1H），2.78m，1H），1.35（d，J＝5.1Hz，3H）。

分析要求C₄₁H₄₁O₁₆P：C，60.00，H，5.04。实测C，60.20;H，5.1.6。

实施例8

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯（V;R¹＝CH₃;R⁶＝H，R⁷＝R⁸＝H）

将新开瓶中取出的0.198g（0.87mmol）氧化铂（Aldrich化学公司产品）如到0.79g（0.962mmol）实施例7制备的表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸二苯酯与95ml绝对无水乙醇的溶液中。于室温和45～50PSl压力下在Parr氢化器中氢化此溶液4小时。经硅藻土垫过滤反应混合物并用乙醇洗脱。真空浓缩并在真空中用五氧化磷干燥14小时，得到所需的产物0.627g（94%），为白色固体。

FAB MS m/e（相对密度）669（M+H）⁺

IR（KBr）3440，2930，1778，1604，1498cm^-1。

¹H NMR（DMSO-d₆）δ6.93（s，1H），6.46（s，1H），6.12（s，2H），5.94（m，2H），5.17（bs，1H），4.86（d，J＝3.93Hz，1H），4.64（q，J＝7.5，5.8Hz，1H），4.51-4.42（m，2H），4.20 （d，J＝10.7Hz，1H），4.01（dd，J＝12.1，5.3Hz，1H），3.51（s，6H），3.51-2.75（m，7H），2.83（m，1H），1.16（d，J＝5.1Hz，3H。

¹³C NMR（DMSO-d₆）δ174.5，151.2，151.1，147.7，146.2，126.1，132.3，128.8，109.8，109.7，107.9，101.5，101.2，98.5，80.0，74.3，72.7，71.7，67.6，67.2，65.7，55.8，43.0，37.1，20.2，18.5。

分析计算C₂₉H₃₃O₁₆P.0.85%H₂O;C，50.95;H，5.11.实测C，51.42;H4.97。

实施例9

表鬼臼毒甲醛糖苷4′-双（2，2，2-三氯乙基）磷酸酯（Ⅶ，R′＝甲基，R⁶＝H，R⁷＝R⁸＝CH₂CCl₃）

用双（2，2，2-三氯乙基）氯磷酸酯重复实施例7所述过程，得到100%产率的标题化合物，在硅胶上做快速色谱后，为无色固体。

IR（KBr）1780，1610，1490，1415，1345，1240，1040，960，725cm^-1。

300MHz¹H NMR（CDCl₃）δ6.81（s，1H），6.49（s，1H），6.27（s，2H），5.98（dd，2H），4.88（d，1H，J＝3.4Hz），4.82-4.70（m，5H），4.64（d，1H，J＝7.6Hz），4.61（d，1H，J＝5.3Hz），4.41（dd，1H），4.25-4.13（m，2H），3.75（m，1H），3.73（s，6H），3.56（m，1H），3.43（dd，1H），3.34-3.24（m，3H），2.91-2.82（m，1H），1.38（d，3H，J＝4.9Hz）。

质谱（FAB），m/e＝928.9848（M⁺+H）。C₃₃H₃₆Cl₆O₁₆P要求928.9872。

实施例10

从表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯制备表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯二钠盐

方法A

20g商品Dowex50×8～100氢型阳离子交换树脂（Aldrich化学公司产品）用过量IN氢氧化钠处理。将所得钠型树脂装入2cm柱并以水平衡。将1.25g（1.87mmol）表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯（实施例8制备）溶解于25ml无离子水中并从柱顶加入交换柱。用水洗脱。收集含标题化合物的流分，过滤，冻干，得1.15g标题化合物，为白色松散物质。

方法B

将50ml无离子水和3.00g（35.7mmol）碳酸氢钠加到2.90g（4.34mmol）粗品表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸酯（实施例8制备）中。在室温下搅拌此混合物30分钟，这时二氧代碳停止释放。然后，如实施例1所述做色谱。先用300ml无离子水再用4∶1水/甲醇洗脱，得到1.90g（61%）纯的标题化合物，冻干后为松散的白色固体。

实施例11

重复实施例2所述的通法，但所用的二乙胺用下面所列的胺代替，得到相应的表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸二酰胺酯。

胺    化合物Ⅶ

（X＝O，R¹＝甲基，R⁶＝H，Y＝NR²R³）

R²R³

-    -

丙胺 H CH₂CH₂CH₃

乙醇胺 H CH₂CH₂OH

甲氧基乙胺 H CH₂CH₂OCH₃

N-乙酰基乙二胺 H CH₂CH₂NC（O）CH₃

2-甲基烯丙基胺 H CH₂CH（CH₃）＝CH₂

烯丙基胺 H CH₂CH＝CH₂

二甲氨基丙胺 H （CH₂）N（CH₃）₂

N-甲基乙二胺 H CH₂CH₂NCH₃

三氟乙胺 H CH₂CF₃

2-氨基乙硫醇 H CH₂CH₂SH

环己胺    H    环己基

2-氨基-1-甲氧基 H CH（CH₃）CH₂OCH₃

丙烷

2-（乙硫基）-乙胺 H CH₂CH₂SCH₂CH₃

氯乙胺 H CH₂CH₂Cl

4-氨基环己醇 H

乙基甲基胺 CH₃CH₂CH₃

乙基丁基胺 CH₂CH₃（CH₂）₃CH₃

甲氨基乙醇 CH₃CH₂CH₂O

双（2-氯乙基）胺 CH₂CH₂Cl CH₂CH₂Cl

2-丙氨基乙醇 CH₂CH₂CH₃CH₂CH₂OH

3-甲氨基丙腈 CH₃CH₂CH₂CN

哌啶 R²+R³-（CH₂）₅-

实施例12

重复实施例3所述的通法，但所用的双（2-氯乙基）胺以下面所列的胺代替，得到相应的表鬼臼毒甲醛糖苷氯磷酰胺酯。

胺    化合物Ⅶ

（X＝O，R¹＝甲基，R⁶＝H，Y＝Cl

R²R³

-    -

丙胺 H CH₂CH₂CH₃

乙醇胺 H CH₂CH₂OH

甲氧基乙胺 H CH₂CH₂OCH₃

N-乙酰基乙二胺 H CH₂CH₂NC（O）CH₃

2-甲基烯丙基胺 H CH₂CH（CH₃）＝CH₂

烯丙基胺 H CH₂CH＝CH₂

二甲氨基丙胺 H （CH₂）₃N（CH₃）₂

N-甲基乙二胺 H CH₂CH₂NCH₃

三氟乙胺 H CH₂CF₃

2-氨基乙硫醇 H CH₂CH₂SH

环己胺    H    环己基

2-氨基-1-甲氧基 H CH（CH₃）CH₂OCH₃

丙烷

2-（乙硫基）-乙胺 H CH₂CH₂SCH₂CH₃

氯乙胺 H CH₂CH₂Cl

4-氨基环己醇    H    4-羟基环己基

乙基甲基胺 CH₃CH₂CH₃

乙基丁基胺 CH₂CH₃（CH₂）₃CH₃

甲氨基乙醇 CH₃CH₂CH₂OH

二乙胺 CH₂CH₂CH₂CH₃

2-丙氨基乙醇 CH₂CH₂CH₃CH₂CH₂OH

3-甲氨基丙腈 CH₃CH₂CH₂CN

哌啶 R²+R³-（CH₂）₅-

实施例13

重复实施例5所述的通法，但所用的3-氨基丙醇用下面的胺代替，得到相应的不对称表鬼臼毒甲醛糖苷磷酰二胺醌。

胺    化合物Ⅶ

（X＝O，R¹＝甲基，R⁶＝H，Y＝NR⁴R⁵，

R²＝R³＝CH₂CH₂Cl

R⁴R⁵

-    -

丙胺 H CH₂CH₂CH₃

乙醇胺 H CH₂CH₂OH

甲氧基乙胺 H CH₂CH₂OCH₃

N-乙酰基乙二胺 H CH₂CHNC（O）CH₃

2-甲基烯丙基胺 H CH₂CH（CH₃）＝CH₂

烯丙基胺 H CH₂CH＝CH₂

二甲氨基丙胺 H （CH₂）N（CH₃）₂

N-甲基乙二胺 H CH₂CH₂NCH₃

三氟乙胺 H CH₂CF₃

2-氨基乙硫醇 H CH₂CH₂SH

环己胺    H    环己基

2-氨基-1-甲氧基 H CH（CH₃）CH₂OCH₃

丙烷

2-（乙硫基）-乙胺 H CH₂CH₂SCH₂CH₃

氯乙胺 H CH₂CH₂Cl

4-氨基环己醇    H    4-羟基环己基

乙基甲基胺 CH₃CH₂CH₃

乙基丁基胺 CH₂CH₃（CH₂）₃CH₃

甲氨基乙醇 CH₃CH₂CH₂OH

双（2-氯乙基）胺 CH₂CH₂Cl CH₂CH₂Cl

2-丙氨基乙醇 CH₂CH₂CH₃CH₂CH₂OH

3-甲氨基丙腈 CH₃CH₂CH₂CN

哌啶 R⁴+R⁵-（CH₂）₅-

实施例14

重复实施例7的通法，但所用的氯磷酸二苯酯用下面所列的氯磷酸酯代替，得到相应的表鬼臼毒甲醛糖苷4′-磷酸二酯（X＝O，R¹＝甲基，R⁶＝H，R⁷＝R⁸＝下列R）。

氯磷酸酯[（RO）₂P（O）Cl]

R＝甲基

乙基

苄基

对-硝基苄基

对-硝基苯基

对-溴苄基

对-硝基苯乙基

氰乙基

Claims (11)

1、通式(Ⅴ)化合物或其药学上可接受的盐的制备方法，

通式中R⁶是H；R¹为甲基或2-噻吩基；X是氧或硫；R⁷和R⁸各自选自H，(C_1-5)烷基，A-取代(C_1-5)烷基和苯基，其中所说的A-取代基是1-3个卤原子，

该方法，包括以下步骤：

(a)通式(1)化合物与通式P(X)Cl₃化合物在氢接受体存在下，适宜的无水有机溶剂中，于20-40℃下反应，形成通式(2)的中间体；

(1)

通式中R¹，R⁶和X的定义同上，和

(b)任选地在碱存在下，水解通式(2)化合物成为通式(3)化合物或其药学上可接受的盐，或

(c)通式(2)的化合物与至少一当量的R⁷OH和R⁸OH进行反应得到通式(Ⅴ)的化合物，其中R⁷和R⁸的定义同上，条件是R⁷和R⁸不都是氢并在氢接受体存在下反应；和R⁷或R⁸之一是氢，经碱处理可任选地转化该化合物为药学上可接受的盐。

2、按照权利要求1的方法，其中原料中的R⁷和R⁸为氢，R¹，R⁶和X的定义同权利要求1。

3、按照权利要求2的方法，其中原料中的R¹是甲基。

4、按照权利要求1的方法，其中原料中的X是氧。

5、按照权利要求1的方法，在步骤（C）中，将所得产物转化为其药学上可接受的钠盐。

6、按照权利要求5的方法，其中原料中的R¹是甲基，X是氧。

7、按照权利要求1的方法，其中原料中的R¹是甲基或2-噻吩基，R⁶是氢，X是氧或硫，R⁷和R⁸各自选自（C_1-5）烷基，A-取代的（C_1-5）烷基和苯基;所说的取代基A为1-3个卤原子。

8、按照权利要求7的方法，其中原料中的R¹是甲基。

9、按照权利要求7的方法，其中原料中的X是氧。

10、按照权利要求7的方法，其中R⁷和R⁸各自为苯基。

11、按照权利要求7的方法，其中R⁷和R⁸各自为2，22-三氯乙基。