CN102060848A

CN102060848A - 芳香胺取代的嘧啶衍生物的制备及用途

Info

Publication number: CN102060848A
Application number: CN2010105776970A
Authority: CN
Inventors: 刘冰妮; 刘默; 刘登科; 刘颖; 张士俊; 祁浩飞; 刘巍; 徐为人
Original assignee: Tianjin Institute of Pharmaceutical Research Co Ltd
Current assignee: New Drugs Evaluate Co ltd Tianjin Institute Of Pharmaceutical Research
Priority date: 2010-12-09
Filing date: 2010-12-09
Publication date: 2011-05-18
Anticipated expiration: 2030-12-09
Also published as: CN102060848B

Abstract

本发明属于治疗与血管发生相关疾病的药物领域，提供了具有通式L结构的含芳香胺取代基的嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐，式中R₁为氢、C₁-C₆烷基、单取代或多取代的C₁-C₆烷基；R₂为：苯基、含氮原子的杂芳基；被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、酯基、C₁-C₆烷硫基、C₁-C₆烷氧基、卤素取代的C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆环烷基单或多取代的苯基；被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、酯基、C₁-C₆烷硫基、C₁-C₆烷氧基、卤素取代的C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆环烷基单或多取代的含氮原子的杂芳基。本发明还提供了此类化合物或其药学上可接受的盐作为药物，特别是作为抗肿瘤药物的用途。

Description

芳香胺取代的嘧啶衍生物的制备及用途

技术领域

本发明属于治疗与血管发生相关疾病的药物领域，更具体地是涉及一类含芳香胺取代基的嘧啶衍生物或其药学上可接受的盐、含有它们的药物组合物和作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的抗肿瘤用途。

背景技术

威胁人类健康的重大疾病之一肿瘤的生长和转移与血管密切相关，新生血管是肿瘤赖以生长和生存的物质基础，为迅速生长的肿瘤提供营养及排泄代谢物。因此，抑制肿瘤的新生血管形成可以抑制肿瘤生长。内皮生长因子受体VEGFR在内皮细胞增殖、转移进而生成血管过程中起十分关键的作用。作为血管靶向治疗的理想靶点，VEGFR具有以下优势：在肿瘤新生血管中高表达；血管内皮细胞具有遗传稳定性使VEGFR抑制剂不易产生耐药性。现已上市和处于临床研究的VEGFR小分子抑制剂从结构上分大致有几种：喹啉及喹唑啉类、吲哚及吲唑类、哒嗪类和含脲取代基团化合物等。表皮生长因子受体EGFR与肿瘤的血管生成、增殖、转移及细胞凋亡的抑制也密切相关，EGFR的过表达或突变在恶性肿瘤中起重要作用，乳腺癌、前列腺癌、肾癌、肺癌等组织中都有EGFR的过表达。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种抗肿瘤血管生成、具有通式L的芳香胺取代的嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐。

本发明的另一个目的是提供含有通式L的化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分，与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂的药用组合物和其在治疗与血管发生相关疾病方面的应用。

现结合本发明的目的对本发明内容进行具体描述。

本发明的通式L化合物具有下述结构式：

其中：R₁为氢、C₁-C₆烷基、单取代或多取代的C₁-C₆烷基；

R₂为：

苯基、含氮原子的杂芳基；

被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、酯基、C₁-C₆烷硫基、C₁-C₆烷氧基、卤素取代的C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆环烷基单或多取代的苯基；

被卤素、羟基、羧基、氨基、硝基、腈基、酯基、C₁-C₆烷硫基、C₁-C₆烷氧基、卤素取代的C₁-C₆烷氧基、C₃-C₆环烷基单或多取代的含氮原子的杂芳基。

优选以下通式L化合物或其药学上可接受的盐，其中：

R₁：为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基，或者被氟、氯单取代或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基。

更优选以下通式L化合物或其药学上可接受的盐：

L1：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(间甲苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L2：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(4-甲氧基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L3：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(对氯苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L4：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(对氟苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L5：4-{4-[甲基-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-氨基]-嘧啶-2-基-氨基}-苯甲酸甲酯；

L6：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3-溴苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L7：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3-氟苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L8：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3-甲氧基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L9：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3-氯苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L10：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3，5-二甲基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L11：2-{4-[甲基-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-氨基]-嘧啶-2-基-氨基}-苯甲酸甲酯；

L12：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(4-三氟甲氧基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L13：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(4-甲硫基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L14：2-{4-[甲基-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6基)-氨基]-嘧啶-2-基-氨基}-5-氟基-苯酚；

L15：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(5-甲基-吡啶-2-基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L16：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(6-甲基-吡啶-2-基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺，

L17：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(4-甲硫基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺柠檬酸盐。

本发明中通式L结构的芳香胺取代的嘧啶衍生物的合成采用的原料是市售商品，合成方法是从事化学合成领域技术人员所熟知的：含有离去基团如卤素的嘧啶化合物与亲核试剂发生亲核取代反应、N-烃化反应等，利用公众熟知技术从事该领域技术人员可以合成本发明化合物。

本发明所述式L化合物的药学上可接受的盐系指：不同衍生物含有的胺基与无机酸、有机酸成盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、硝酸盐、甲酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁酸盐、乳酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、萘磺酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、枸橼酸盐、富马酸盐、牛磺酸盐等，但不限于此。

本发明化合物的药物组合物制备如下：使用标准和常规的技术，使本发明化合物与制剂学上可接受的固体或液体载体结合，以及使之任意地与制剂学上可接受的辅助剂和赋形剂结合制备成微粒或微球。固体剂型包括片剂、分散颗粒、胶囊、缓释片、缓释微丸等等。固体载体可以是至少一种物质，其可以充当稀释剂、香味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂、崩解剂以及包裹剂。惰性固体载体包括磷酸镁、硬脂酸镁、滑粉糖、乳糖、果胶、丙二醇、聚山梨酯80、糊精、淀粉、明胶、纤维素类物质例如甲基纤维素、微晶纤维素、低熔点石蜡、聚乙二醇、甘露醇、可可脂等。液体剂型包括溶剂、悬浮液例如注射剂、粉剂等等。

药物组合物以及单元剂型中含有的活性成份(本发明化合物)的量可以根据患者的病情、医生诊断情况特定的加以应用，所用化合物的量或浓度在较宽的一个范围内调节，通常，活性化合物的量范围为组合物的0.5％～99％(重量)。

本发明所述通式L化合物或其盐具有VEGFR、EGFR抑制作用，可作为有效成分用于治疗与血管发生相关的疾病，本发明所述通式L化合物活性通过体外生物活性测定实验验证。

附图说明

图1为芳香胺取代的嘧啶衍生物(L)结构式。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅用来解释本发明，而不是以任何方式限制本发明的范围，文中涉及的专业与科学用语的含义是本领域技术熟练人员所熟知的。发明的化合物经高效液相色谱(HPLC)，薄层色谱(TLC)，熔点(m.p.)进行检测，采用核磁共振(¹H-NMR)确证其结构。

实施例1

L1：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(间甲苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺

1.在50ml的单口反应烧瓶中，室温下加入15ml无水乙醇、0.29g(2mmol)2，3-二甲基-6-氨基-2H-吲唑、0.45g(3mmol)2，4-二氯嘧啶及0.25g(3mmol)碳酸氢钠，搅拌，升温至回流反应5h，TLC检测反应完毕。过滤，滤饼用无水乙醇洗，合并滤液，减压蒸去溶剂，得到灰白色固体为N-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-2-氯嘧啶-4-胺，干燥，称重约0.47g，收率81.6％。mp：211.5-212.0℃，HPLC：98％¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.56(s，3H)，4.0(s，3H)，6.76(d，J＝6.0Hz，1H)，6.97(d，J＝8.8Hz，1H)，7.61(d，J＝8.8Hz)，7.92(s，1H)，8.13(d，J＝5.6Hz，1H)，9.96(s，1H)。

2.在50ml的单口反应烧瓶中，加入0.41g(1.5mmol)N-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-2-氯嘧啶-4-胺，0.14ml(2.25mmol)碘甲烷、0.98g(3mmol)碳酸铯、8mlDMF，室温下反应6h，TLC检测反应完毕。反应液倾入冰水中，有黄色固体析出，过滤、干燥，收集0.38gN-(N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-基)-2-氯嘧啶-4-胺，收率85％。mp：172.3-173.1℃，HPLC：99.3％。¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.62(s，3H)，3.41(s，3H)，4.05(s，3H)，6.23(d，J＝6.0Hz，1H)，6.87(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，7.49(s，1H)，7.80(d，J＝8.8Hz，1H)，7.93(d，J＝6.4Hz，1H)。

3.在50ml的单口反应烧瓶中，加入0.3g(1mmol)N-(N，2，3-三甲基-2H-吲唑-6-基)-2-氯嘧啶-4-胺、0.11g(1mmol)间甲基苯胺及10ml无水乙醇，室温搅拌，滴加2滴浓盐酸，回流反应3-6h，TLC检测反应完毕后降至室温，加入2至3滴饱和NaOH水溶液，将PH值调到9，减压过滤，滤饼用无水乙醇淋洗，干燥，得白色固体0.22g，收率61.4％。mp：202.1-202.5℃，HPLC：99.9％，¹H-NMR(DMSO-d₆，400MHz)δ：2.16(s，3H，CH₃)，2.61(s，3H，CH₃)，3.46(s，3H，CH₃)，4.05(s，3H，CH₃)，5.77-7.84(m，9H，Ar-H，Pyrinidin-H，Indazol-H)，9.01(s，1H，NH)。

实施例2-16

参照实施例1的方法，制备以下式L化合物，区别在于选用了不同取代基的苯胺或氨基取代的吡啶化合物等原料替代实施例1中反应步骤3使用的间甲基苯胺，这些原料易于购买并按照实施例1的方法可以制备如下新化合物。

实施例17

化合物L13成柠檬酸盐：取L13化合物0.3g溶于10ml乙醇中，加入等摩尔的柠檬酸，加热回流1h。降至室温，静置，析出白色固体为其柠檬酸盐L17，过滤，干燥，产物熔点大于220℃。

实施例18

片剂的制备用量/片

L6 100mg

微晶纤维素 80mg

预胶化淀粉 70mg

聚乙烯吡咯烷酮 6mg

羧甲基淀粉钠 5mg

硬脂酸镁 2mg

滑石粉 2mg

工艺：将活性成分、预胶化淀粉和微晶纤维素分别过100目筛，按处方量充分混匀，加入聚乙烯吡咯烷酮溶液，混合，制软材，过20目筛制得湿颗粒于55℃干燥，将羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石粉过筛，加入上述干燥颗粒中压片。

实施例19

口服溶剂的制备用量/瓶

L6 200mg

甘露醇 100mg

柠檬酸 20mg

橙味香精 10mg

阿斯巴甜 10mg

尼泊金 qs

蒸馏水 10ml

工艺：取蒸馏水10ml，称取处方量的柠檬酸、甘露醇、橙味香精、阿斯巴甜及活性成分搅拌使溶解，加入防腐剂，灌瓶。

实施例20

体外生物活性测定：VEGFR、EGFR的HTRF(均相时间分辨荧光法)实验。

实验材料：Cisbio公司试剂盒；双蒸水。

检测仪器：SpectraMax M5(Molecular Devices产品)。

阳性对照药：帕唑帕尼，自制；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：2.53(s，3H)，2.62(s，3H)，3.48(s，3H)，4.05(s，3H)，5.73(s，1H)，6.85(dd，J＝8.8，1.2Hz，1H)，7.13(d，J＝8.4Hz，1H)，7.20(s，2H)，7.43(s，1H)，7.70(dd，J＝8.4，2.0Hz，1H)，7.74(d，J＝8.8Hz，1H)，7.81(d，J＝6.0Hz，1H)，8.57(s，1H)，9.35(s，1H)；MS(m/z)：438.1[M+H]⁺。

厄洛替尼，自制；¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δ：3.02(s，1H)，3.29(s，3H)，3.31(s，3H)，3.66(m，4H)，4.06(m，4H)，7.05(s，1H)，7.15(d，J＝7.6Hz，1H)，7.20(t，J＝7.6Hz，1H)，7.30(s，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，7.80(s，1H)，8.19(s，1H)，8.55(s，1H)；MS(m/z)：394.2[M+H]⁺。

实验方法：以2∶2∶1体积比将10μMATP、200nM TK底物生物素和激酶缓冲液混匀于0.5ml塑料离心管中，然后加入不同浓度的药物溶液(溶剂： DMSO)，2μl/孔，无药对照孔以2μl激酶缓冲液补足体积，混匀。再加入1ng/μl酶，3μl/孔，空白孔用3μl激酶缓冲液补足体积，混匀。将9μl上述反应液转移至384孔板中，置37℃温育30min。温育结束后，将12.5nM Streptavidin-XK665和TK抗体按1∶1体积比混匀，按9μl/孔加至反应体系中，混匀后室温放置30min以终止反应。最后用SpectraMax M5在发射光波长314nm、激发光波长分别为620和665nm处检测荧光强度得到OD值。

计算公式：

比值＝(OD_665nm/OD_620nm)×10⁴；

磷酸化抑制率＝(比值_样品-比值_空白)×％；

根据磷酸化抑制率，以直线回归方法计算IC₅₀值。

通式L化合物抑制VEGFR2、EGFR活性结果：

表1.通式L化合物抑制VEGFR2活性的IC₅₀

表2.通式L化合物抑制EGFR活性的IC₅₀

++：0.01μM＜IC₅₀≤1μM，+：1μM＜IC₅₀＜100μM

从表1的数据看，具有L通式的化合物对激酶VEGFR2磷酸化活性有较强的抑制作用，其中，化合物L3、L4、L5、L6、L7、L11、L12、L13、L14、L16的IC₅₀值均小于阳性药的IC₅₀值35nM。从表2的数据看，L通式的化合物对激酶EGFR具有抑制作用，其中，化合物L5、L6、L7、L11、L12、L13、L15、L16的IC₅₀值均小于或等于1μM。

Claims

1.具有通式L结构的化合物或其药学上可接受的盐：

其中

R₁为氢、C₁-C₆烷基、单取代或多取代的C₁-C₆烷基；

R₂为：

苯基、含氮原子的杂芳基；

2.权利要求1所述的通式L化合物或其药学上可接受的盐，其中，R₁：为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基，或者被氟、氯原子单取代或多取代的甲基、乙基、丙基、异丙基。

3.权利要求1或2所述的通式L化合物或其药学上可接受的盐，代表以下化合物，

L1：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(3-甲基-苯基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

L16：N⁴-(2，3-二甲基-2H-吲唑-6-基)-N²-(6-甲基-吡啶-2-基)-N⁴-甲基-嘧啶-2，4-二胺；

4.权利要求1或2所述通式L化合物在药学上可接受的盐，是指与无机酸或有机酸成盐。

5.一种具有抗肿瘤用途的药物组合物，

它含有权利要求1至4任一所述的式L化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分，以及含有一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，其活性成分含量以重量比例计算在0.5％-99％。

6.权利要求5所述抗肿瘤方面的用途包括：头部及颈部肿瘤、口腔肿瘤、乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、结肠癌、前列癌、骨肉瘤、淋巴瘤、黑色素瘤及白血病。