CN102053078B - 注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法。包括：保持非离子表面活性剂TritonX-100的浓度为1.5×10-3mol/L，在中性条件下，加入浓度范围为8.0×10-6～8.0×10-5mol/L的头孢匹胺钠供试品，混匀，放置5小时后测定荧光强度；设定激发波长为280nm，发射波长范围为290～450nm，扫描速度为15～3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝宽度均为2.5～20.0nm，测定荧光强度。本发明利用头孢匹胺钠能够对TritonX-100的荧光进行有效猝灭，实现了注射用头孢匹胺钠供试品的检测，操作简便，快捷，灵敏。
Description
技术领域
本发明涉及一种注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法，属于药物分析检测领域。
背景技术
头孢匹胺钠，其化学名为：(6R，7R)-7-[(R)-2-(4-羟基-6-甲基-3-吡啶羰基氨基)-2-(对羟基苯基)乙酰氨基]-3-[[(1-甲基-1H-四唑-5-甲基)硫]甲基]-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4，2，0]辛-2-烯-2-羧酸钠盐。是一种抗菌素类药物，用于葡萄球菌属、消化球菌属、肠杆菌属、变形杆菌属、流感杆菌、链球菌属等敏感菌引起的败血症、烧伤、手术切口等继发性感染、咽喉炎、急慢性支气管炎、扁桃体炎、胆囊炎、胆管炎、腹膜炎、脑膜炎、子宫内感染等。头孢匹胺钠是一种新药，在2005年药典中没有记录其研究方法，在文献中使用高效液相色谱法进行测定。高效液相色谱法具有高效、高灵敏度、应用范围广、等优点，因此在药物检测中普遍使用。但在注射用头孢匹胺的检测中，色谱柱采用C8柱，采用HPLC进行药品检测，一般配备C18柱，C8柱需要另配，而且价格较贵，而且操作比较繁琐。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种分析头孢匹胺钠药物有效成分含量的注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法，本方法简单，实用，高效，适合于投资成本不太高的检测。
技术解决方案：头孢匹胺钠的荧光测定方法，包括以下步骤：
(1)配制非离子表面活性剂TritonX-100贮备液：将非离子表面活性剂TritonX-100溶于水，加水定容，配制成浓度为0.5×10-3～3.0×10-3mol/L的贮备液；
(2)对照品溶液的制备：头孢匹胺钠标准品作为溶质，用浓度为1.5×10-3mol/L的TritonX-100贮备液作为溶剂配制成浓度为8.0×10-5mol/L头孢匹胺钠溶液；
(3)以1.5×10-3mol/L的TritonX-100贮备液作为溶剂，稀释步骤(2)制得对照品溶液，得到浓度为8.0×10-68.0×10-5mol/L待测液，混匀后室温放置5～8h后制得待测液；
(4)将步骤(3)的待测液置于荧光光谱仪的1cm石英比色皿中，设定激发波长为280nm，发射波长范围为290～450nm，扫描速度为15～3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝宽度均为2.5～20.0nm，测定荧光强度；
(5)线性关系的确定：以TritionX-100的荧光强度的对数为纵坐标、头孢匹胺钠浓度为横坐标绘制标准工作曲线，两者呈线性关系，回归方程为lnI＝8.827-19921C，r＝0.9995。
pH的影响：pH＜6.5时，随pH的增大，测试体系的荧光强度增强，当pH＝6.5～7.5时，测试体系的荧光强度达到最大并保持稳定，当pH＞7.5时随pH的增大荧光强度逐渐变弱，因此，本发明选用纯水作为溶剂，可以避免由于缓冲溶液造成的对荧光强度的影响。
TritonX-100浓度的影响：固定头孢匹胺钠的浓度为4.0×10-5mol/L，TritionX-100的浓度分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0×10-3mol/L，分别测其荧光强度，TritonX-100的浓度大于2.0×10-3mol/L时，其自身的荧光强度也开始猝灭，当其浓度为1.5×10-3mol/L时，猝灭前后的荧光强度差ΔI最大，所以选择曲拉通的浓度为1.5×10-3mol/L时，有最佳的猝灭效果。
放置时间的影响：在1.5×10-3mol/L的TritonX-100储备液中加入头孢匹胺钠，使其浓度为4.0×10-5mol/L，每隔2小时测定一次荧光强度，在4～6h时，猝灭的荧光强度基本达到稳定，6h以后荧光强度剧烈的下降，体系的稳定性变差，所以选择5h为最佳的测定条件。
线性关系的确定：取头孢匹胺钠标准品溶于水后配制成11组由浓度由低到高的溶液，加入与供试液组成相同和含量相同的苯甲酸钠，在上述11组试管中加入TritionX-100储备液，使其浓度为1.5×10-3mol/L，并在相同的荧光条件下分别测定荧光强度，绘制标准曲线。
本发明方法检测限的确定：选择不加头孢匹胺钠时，浓度为1.5×10-3mol/L的TritionX-100溶液，在本发明的最佳条件下测定荧光强度，连续测定10次，按3σ/K计算，得到检测限为2.02×10-6mol/L，其中K为工作曲线的斜率为19921，σ为10次测得的荧光强度计算得到的标准偏差为1.34％。
金属离子干扰试验：在头孢匹胺钠和TritonX-100的浓度分别为4.0×10-5mol/L和1.5×10-3mol/L时，添加金属离子，采用本发明方法进行检测，考察多种常见金属离子对体系荧光强度的影响，相对误差不大于±5％时，下列离子或者物质的允许量(×10-6mol/L)：Cl-(50000)、NO3 -(1000)、(500)、
(200)、
(1000)、Al3+(200)、Ca2+(1000)、Mg2+(1000)、Zn2+(50000)、Cu2+、Mn2+(500)、Na2+(50000)、K+(10000)。
相关物质干扰试验：头孢匹胺钠中加入辅料苯甲酸钠作为稳定剂，在荧光分析过程中发现加入苯甲酸钠后，TritonX-100的发射光谱几乎不变，说明对其荧光没有猝灭作用。
本发明所用的试剂均选用分析纯，所用的水均选用纯水或蒸馏水。
本发明具有以下有益效果：
1、加入TritonX-100后，头孢匹胺钠能够有效的猝灭其荧光，检出限达到2.02×10-6mol/L。
2、利用头孢匹胺钠对TritonX-100的荧光猝灭作用，实现了荧光光谱法对头孢匹胺钠药物的测定。
3、本发明方法简单、快速、准确，具有高的灵敏度与好的选择性，应用范围广泛，是头孢匹胺钠注射液测定的理想方法。
附图说明
图1为本发明的荧光光谱图；
图2为本发明的标准工作曲线。
具体实施方式
实施例1
参见图1，图1中：曲线1表示1.5×10-3mol/L的TritionX-100的荧光光谱图，曲线2表示1中加入4.0×10-5mol/L的头孢匹胺钠的荧光光谱图，曲线3为加入4.0×10-5mol/L的苯甲酸钠的荧光光谱图。
1.于一1000ml容量瓶中配置浓度为1.5×10-3mol/L的TritonX-100贮备液，用纯水定容至1000ml后摇匀，制成溶液(1)。
2.于一100ml容量瓶中加入头孢匹胺钠对照品，以上述TritonX-100贮备液为溶剂配制溶液，用溶液(1)定容至100ml后摇匀，配成浓度为8.0×10-5mol/L的头孢匹胺钠母液，制成溶液(2)，其中TritonX-100的浓度也保持为1.5×10-3mol/L。
3.于一50ml的具塞锥形瓶加入5ml溶液(2)和5ml溶液(1)混匀后，配成10ml配成浓度为4.0×10-5mol/L的头孢匹胺钠溶液，其中TritonX-100的浓度也保持为1.5×10-3mol/L，制成溶液(3)。
4.于一50ml容量瓶中加入苯甲酸钠0.0032g，以上述溶液(1)为溶剂配制溶液，定容至100ml后摇匀，配成浓度为4.0×10-4mol/L的苯甲酸钠溶液，其中TritonX-100的浓度也保持为1.5×10-3mol/L。
5.于一50ml的具塞锥形瓶加入1ml溶液(3)和9ml溶液(1)混匀后，配成10ml配成浓度为4.0×10-5mol/L的苯甲酸钠溶液，制成溶液(5)，其中TritonX-100的浓度也保持为1.5×10-3mol/L。
6.将溶液(1)、溶液(3)及溶液(5)分别置于荧光光谱仪的1cm石英比色皿中，设定激发波长为280nm，发射波长范围为290～450nm，扫描速度为1000nm/min，激发狭缝宽度和发射狭缝宽度均为10nm，测定三者的荧光强度，荧光光谱图如图1，说明头孢匹胺钠能够有效猝灭TritionX-100所发射的荧光，而作为头孢匹胺钠注射液稳定剂的苯甲酸钠则对TritionX-100的荧光基本上没有干扰。
7.根据标准工作曲线的绘制方法，取溶液(2)头孢匹胺钠对照品母液，用(1)TritionX-100贮备液作为溶剂将(2)稀释成由低浓度到高浓度的头孢匹胺钠标准溶液：浓度为8.0×10-6mol/L至8.0×10-5mol/L，以8.0×10-6mol/L递增，共19个点，TritionX-100的浓度也保持为1.5×10-3mol/L。并在上述检测条件下分别测定荧光强度，以荧光强度的常用对数值lnI为纵坐标，头孢匹胺钠的浓度为横坐标绘制工作曲线，如图2。
8.除了将4.0×10-5mol/L浓度的头孢匹胺钠标准溶液替换成50.0ml山东罗欣药业股份有限公司(批号：0910283)生产的头孢匹胺钠注射液外，其它操作同标准工作曲线的处理方法，并且测定体系的中TritonX-100的荧光强度，通过图2的标准曲线得出头孢匹胺钠注射液中的头孢匹胺钠的浓度，进一步计算头孢匹胺钠注射液中头孢匹胺钠的含量(以质量浓度计)。测定结果见表1
表1
9.回收试验：取头孢匹胺钠注射液供试品4份，精密称定，按表2所示质量分别加入头孢匹胺钠对照品90.20mg，用浓度为1.5×10-3mol/L的TritionX-100贮备液定容到100mL容量瓶中，按上述方法测定每份的含量，计算回收率，结果见表2。
表2
从表2的加标回收率来看，回收率在98.4％～101.1％，回收率良好，表明该方法可靠，准确度高。
Claims (1)
1.注射用头孢匹胺钠的荧光测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)配制非离子表面活性剂TritonX-100贮备液：将非离子表面活性剂TritonX-100溶于水，加水定容，配制成浓度为0.5×10-3～3.0×10-3mol/L的贮备液；
(2)对照品溶液的制备：头孢匹胺钠标准品作为溶质，用浓度为1.5×10-3mol/L的TritonX-100贮备液作为溶剂配制成浓度为8.0×10-5mol/L头孢匹胺钠溶液；
(3)以1.5×10-3mol/L的TritonX-100贮备液作为溶剂，稀释步骤(2)制得对照品溶液，得到浓度为8.0×10-6～8.0×10-5mol/L待测液，混匀后室温放置5～8h后制得待测液；
(4)将步骤(3)的待测液置于荧光光谱仪的1cm石英比色皿中，设定激发波长为280nm，发射波长范围为290～450nm，扫描速度为15～3000nm/min，激发狭缝和发射狭缝宽度均为2.5～20.0nm，测定荧光强度；
(5)线性关系的确定：以TritionX-100的荧光强度的对数为纵坐标、头孢匹胺钠浓度为横坐标绘制标准工作曲线，两者呈线性关系，回归方程为lnI＝8.827-19921C，r＝0.9995。
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Non-Patent Citations (2)
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