CN102040667B

CN102040667B - 海参多糖中蛋白的生物脱除方法

Info

Publication number: CN102040667B
Application number: CN2010105372981A
Authority: CN
Inventors: 常耀光; 薛长湖; 薛勇; 宿玮; 徐杰; 李兆杰; 王玉明; 唐庆娟
Original assignee: Ocean University of China
Current assignee: Ocean University of China
Priority date: 2010-10-30
Filing date: 2010-10-30
Publication date: 2012-08-22
Anticipated expiration: 2030-10-30
Also published as: CN102040667A

Abstract

一种海参多糖中蛋白的生物脱除方法，其特征是将一种微生物接入含有海参多糖的液体培养基，培养后去除所得菌体培养液中的菌体，收集该菌体培养液的上清液，对该上清液进行超滤处理，所得截留液经干燥得到海参多糖的脱蛋白产物。所述的海参多糖，为海参多糖粗提物、海参硫酸软骨素、海参岩藻聚糖硫酸酯、海参硫酸软骨素与海参岩藻聚糖硫酸酯的混合物。与现有的其它蛋白脱除方法相比，本发明的方法优势在于有效脱除蛋白的同时不影响多糖原始结构，且使多糖得到很好的保留。

Description

海参多糖中蛋白的生物脱除方法

技术领域

本发明涉及一种多糖中蛋白的脱除方法，具体的说涉及一种海参多糖中蛋白的生物脱除方法。

背景技术

海参多糖是海参体壁的重要组成部分，其占海参体壁干重的5％-10％(质量百分比，下同)。海参多糖包括海参硫酸软骨素及海参岩藻聚糖硫酸酯两种，其中海参硫酸软骨素被证实具有抗凝血、抗肿瘤、提高免疫力、降血脂及抗病毒等生理活性，海参岩藻聚糖硫酸酯亦具有保护神经干细胞、预防胃溃疡等多种功效。海参多糖在功能性食品及药物开发等方面已展现出良好的应用前景。

海参多糖在海参体壁中与蛋白相连，属于糖胺聚糖类化合物。如同硫酸软骨素、肝素等其他糖胺聚糖，提取海参多糖时首先需要通过碱处理或蛋白酶酶解处理切断蛋白链，然后以醇沉等方式将多糖与蛋白分离，最终得到多糖产物。而由于糖链上蛋白难以完全切除，或切下的蛋白链未能与糖链充分分离，多糖产物往往仍含有一定量的蛋白，从而影响海参多糖的纯度。因此，如何有效脱除蛋白是制备高品质海参多糖的关键之一。

目前，脱除多糖中蛋白的方法有三氯乙酸沉淀法及savage法等。利用三氯乙酸沉淀蛋白，多糖收率较高，但常伴有糖链降解。savage法采用氯仿及戊醇等有机试剂使蛋白变性、沉淀，其处理条件温和，能较好的避免多糖降解，但处理效率低，多糖损失严重。现有方法均存在不足，这在一定程度上制约了海参多糖的精深加工与应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种海参多糖中蛋白的生物脱除方法，能够克服现有技术的上述缺陷。

一种海参多糖中蛋白的生物脱除方法，其特征在于有以下步骤：(1)将一种微生物接入含有海参多糖的液体培养基，并进行培养；(2)去除所得菌体培养液中的菌体后，收集该菌体培养液的上清液；(3)对该上清液进行超滤处理，所得截留液经干燥得到海参多糖的脱蛋白产物。

本法优点在于：(1)蛋白脱除率高；(2)多糖保留率高；(3)对多糖原始结构无显著影响。

具体实施方式

本发明的海参多糖中蛋白的生物脱除方法，其实质是利用一种微生物在培养过程中对海参多糖蛋白的特异性消耗，实现多糖中蛋白的有效脱除。该方法有以下步骤：(1)将一种微生物接入含有海参多糖的液体培养基，并进行培养；(2)去除所得菌体培养液中的菌体，收集该菌体培养液的上清液；(3)对该上清液进行超滤处理，所得截留液经干燥得到海参多糖的脱蛋白产物，最终完成对多糖中蛋白的有效脱除。该方法的处理对象为海参多糖，包括海参多糖粗提物、海参硫酸软骨素、海参岩藻聚糖硫酸酯、海参硫酸软骨素与海参岩藻聚糖硫酸酯的混合物。与现有的蛋白脱除方法如三氯乙酸沉淀法及savage法等相比，本发明的方法优势在于有效脱除蛋白的同时不影响多糖原始结构，且使多糖得到很好的保留。

实施例一

配制含有海地瓜参硫酸软骨素的培养基，其中含有0.2％海地瓜参硫酸软骨素、0.01％磷酸氢二钾、0.3％硝酸钠、0.05％硫酸镁、0.01％氯化钙及0.001％磷酸铁，其余为过膜海水，pH值为7.5；培养基灭菌后接入细菌Alteromonas macleodii，25℃下振荡培养48小时。所得菌体培养液经硅藻土过滤去除菌体，收集该菌体培养液的上清液。所得上清液以截留分子量50kDa的超滤膜进行超滤处理，截留液经冷冻干燥得到脱蛋白多糖产物。经上述处理，海地瓜参硫酸软骨素的蛋白含量由2.09±0.10％降至0.33±0.06％，单糖组成、硫酸根含量及分子量均无显著变化，脱蛋白多糖产物得率为93.8％。

实施例二

配制含有海地瓜参岩藻聚糖硫酸酯的培养基，其配方为0.2％海地瓜参岩藻聚糖硫酸酯、0.01％磷酸氢二钾、0.3％硝酸钠、0.05％硫酸镁、0.01％氯化钙及0.001％磷酸铁，其余为过膜海水，pH值为7.5；培养基灭菌后接入细菌Alteromonas macleodii，在25℃条件下培养48小时。所得菌体培养液经硅藻土过滤去除菌体，收集该菌体培养液的上清液。所得上清液以截留分子量50kDa的超滤膜进行超滤处理，截留液经冷冻干燥得到脱蛋白多糖产物。经上述处理，海地瓜参岩藻聚糖硫酸酯的蛋白含量由3.58±0.28％降至0.77±0.03％，单糖组成、硫酸根含量及分子量均无显著变化，脱蛋白多糖产物得率为92.7％。

除了实施例中说明的海地瓜参的海参多糖外，本法同样适用于日本刺参、仿刺参、梅花参、黑海参、白乳参、冰岛刺参的海参多糖；去除菌体的手段可为过滤或离心；培养温度可为20-40℃，培养时间可为2-120h；超滤处理的截留分子量可为1-100kDa；干燥可为热风干燥、喷雾干燥。

Claims

1.一种海参多糖中蛋白的生物脱除方法，其特征在于有以下步骤：(1)将一种微生物Alteromonas macleodii接入含有海参多糖的液体培养基，在25℃条件下培养48小时；(2)去除所得菌体培养液中的菌体，收集该菌体培养液的上清液；(3)对该上清液以截留分子量50kDa的超滤膜进行超滤处理，所得截留液经干燥得到海参多糖的脱蛋白产物；其中含有海参多糖的液体培养基的配方如下：0.2％的海参多糖、0.01％磷酸氢二钾、0.3％硝酸钠、0.05％硫酸镁、0.01％氯化钙及0.001％磷酸铁，其余为过膜海水，pH值为7.5；所述的海参多糖为海地瓜参硫酸软骨素或海地瓜参岩藻聚糖硫酸酯。