CN102020607B - 具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的6-氨基烟酰胺衍生物、其制备方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的6-氨基烟酰胺衍生物、其制备方法及应用，其结构如通式(I)所示，其中，R¹、R²、R³、R⁴、R⁵和n的定义同说明书。该类化合物具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性，可以用于治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病，包括鲁-泰(Rubinstein-Taybi)二氏综合征、脆性X染色体综合症、白血病、癌症、免疫学疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神经系统疾病和神经退化性疾病。

Description

具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的6-氨基烟酰胺衍生物、其制备方法及应用

技术领域

本发明涉及具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的6-氨基烟酰胺衍生物、其合成及在治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病方面的临床应用。

背景技术

组蛋白去乙酰化酶(HDAC)蛋白在调控体内的基因表达方面起着关键作用，它改变转录因子结合到染色体组DNA的可达性。尤其是HDAC能去除组蛋白中乙酰化赖氨酸残基的乙酰基，从而导致核小体重构(Grunstein，M.，1997，Nature，389：349-352)。由于HDAC蛋白在基因表达中起着关键作用，所以它们与许多细胞功能密切相关，包括细胞周期调控、细胞增殖、分化、基因程序化表达和癌症发生(Ruijter，A-J-M.，2003，Biochem.J.，370：737-749；Grignani，F.，1998，Nature，391：815-818；Lin，R-J.，1998，391：811-814；Marks，P-A.，2001，NatureReviews Cancer，1：194)。由组蛋白去乙酰化酶误调所致的异常去乙酰化与许多临床疾病密切相关，如鲁-泰(Rubinstein-Taybi)二氏综合征、脆性X染色体综合症、白血病和其它各种癌症(Langley B et al.，2005，Current Drug Targets-CNS&Neurological Disorders，4：41-50)。试验表明，HDAC抑制剂能够抑制人类及动物体内的肿瘤的生长，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等(Dokmanovic，M.，2005，J.Cell Biochenm.，96：293-304)。

组蛋白去乙酰化酶活性异常与各种神经系统疾病及神经退化疾病密切相关，包括中风、亨廷顿舞蹈(Huntington)疾病、肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic Lateral Sclerosis)和阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)。抑制组蛋白去乙酰化酶能够诱导抗有丝分裂和抗凋亡基因的表达，如p21和HSP-70，有利于正常细胞的存活。HDAC抑制剂也能够作用于中枢神经系统的其他神经细胞，如反应性星形胶质细胞和小神经胶质细胞，降低在神经损伤或疾病中的炎症和二次伤害。通过HDAC抑制剂增加乙酰化，可以诱导树突发芽(突触数量增加)，重建学习行为，进入长期记忆。HDAC抑制剂可以逆转弗里德赖希共济失调症(Friedreich’s ataxia)的基因沉默。这些数据表明，HDAC抑制是一种极具希望的治疗许多中枢神经系统疾病的方法(Langley B et al.，2005，Current Drug Targets-CNS & Neurological Disorders，4：41-50；FischerA.，et al，2007，Nature 447(10)：178-183；Herman D.，et al.，2006，Nature Chemical Biology 2(10)：551-558)。

依据序列同源性，哺乳动物的HDACs可以分为三类。第一类由酵母Rpd3-类蛋白组成(HDAC 1，2，3，8和11)。第二类由酵母HDA1-类蛋白组成(HDAC 4，5，6，7，9和10)。第三类由酵母SIR2-类蛋白组成(SIRT 1，2，3，4，5，6和7)。

HDAC1的活性和细胞增殖(癌症的标志)相关。哺乳动物细胞通过siRNA降低HDAC1表达，具有抗增殖性(Glaser，K-B.，2003，Biochem.Biophys.Res.Comm.，310：529-536)。HDAC1基因敲除鼠是胚胎致死的，其余细胞表现出不一样的细胞生长(Lagger，G.，2002，EMBO J.，21：2672-2681)。HDAC1过度表达的老鼠细胞显示G2和M期延长及生长速度降低(Bartl.S.，1997，Mol.Cell Biol.，17：5033-5043)。因此，试验数据表明，HDAC1与细胞周期调控及细胞增殖密切相关。

HDAC2调控许多胎心肌蛋白异构体的表达。HDAC2缺乏或是通过化学方法抑制组蛋白去乙酰化酶可以阻止胚胎基因的再表达，减少心室肥大。抗肥大和肌醇多磷酸盐-5-磷酸酶f(Inpp5f)编码基因表达增加有关，这种增加导致胸腺瘤滤过性病毒的原癌基因(Akt)和3-磷酸肌醇-依赖的蛋白激酶-1失活，激活了糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)。相反，HDAC2转基因鼠心室肥大增加，这与失活的Gsk3β有关。通过化学方法抑制活化的Gsk3β使得HDAC2-缺乏的成人对心室肥大的刺激变得敏感。这些结果表明，在心脏中HDAC2是HDAC抑制剂的一个重要的分子靶标。HDAC2和Gsk3β都是调控通路的组成部分，这为治疗心室肥大和心力衰竭提供了极具吸引力的治疗靶标(Trivedi，C-M.，2007，Nat.Med，.13：324-331)。

HDAC3在正常小肠的增殖隐窝细胞中表达最多。在结肠癌细胞系中HDAC3表达沉默导致细胞生长抑制、细胞存活降低和细胞凋亡增加。沉默HDAC2表达可以观察到类似的效果，而对于HDAC1，效果则没有那么显著。HDAC3基因沉默也选择性的引起碱性磷酸酯酶的表达(结肠细胞成熟的标志)。HDAC3的过度表达抑制基础转录及丁酸酯诱导的P21转录，而沉默HDAC3则刺激P21基因启动子的活性和表达。这些发现表明HDAC3是在人体结肠癌中进行下调的基因，是结肠细胞成熟和P21表达的一种新型的调节剂(Wilson，A-J.，2006，J.Biol.Chem.，281：13548-13558)。

HDAC6是HDAC家族的一个亚型，它脱去α-微管蛋白的乙酰基，增加细胞运动性。在九组口腔鳞状细胞癌(OSCC)的细胞系和正常的口腔角化细胞(NOKs)上运用定量实时逆转录聚合酶链反应和Western Blots技术分析，与NOKs相比，HDAC6mRNA和蛋白表达水平在所有的癌细胞中都升高了。通过免疫荧光法分析，在OSCC细胞系的细胞质中检测到了HDAC6蛋白。和OSCC细胞系相似，在早期的人体OSCC肿瘤中HDAC6上调明显，mRNA达74％，蛋白达51％。通过对临床变量的分析，人们发现临床肿瘤的发展阶段和HDAC6的表达状态相关。分析表明，HDAC6的表达水平在肿瘤早期(I和II期)和晚期(III和IV期)存在显著差异(P＝0.014)。这些结果表明HDAC6的表达可能和肿瘤的恶性程度有关，这也为设计新的治疗方法提供了线索(Sakuma，T.，2006，Int.J.Oncol.，29：117-124)。

IIa类HDAC包括HDAC4，5和7。在过去几年中，研究人员确定了IIa类HDAC在活体中的一些重要生理功能。令人吃惊的是，这些看似没有联系的生理过程有着共同的特征，它们都依赖于IIa类HDAC对MEF2转录活动的严密控制。诸如骨骼肌的形成、心肥大、骨发育、T-细胞分化和神经元存活等关键生理过程都被IIa类HDAC所控制，这一事实意味着许多人类病理学的干预疗法是有可能的，包括血管类疾病如动脉硬化、中风和动脉瘤、肿瘤血管生成和转移、侏儒症、骨骼畸形、自身免疫和淋巴增生综合征、神经退化性疾病和心肌肥大(Martin M.et al，2007，Oncogene 26：5450-5467)。

HDAC使功能染色体表观基因沉默是许多病理过程的主要机制之一。其中，功能相关基因被HDAC抑制或重调，导致在终末分化、成熟和生长控制中表型缺失，并且丧失组织功能。例如，肿瘤抑制基因经常在癌症的发展过程中被沉默，HDAC抑制剂能够诱导这些肿瘤抑制基因的表达，从而抑制肿瘤细胞生长和分化(Glaros S et al.，2007，Oncogene June 4Epub aheadof print；Mai，A，et al.，2007，Int J.Biochem Cell Bio.，April 4，Epub ahead of print；Vincent A.et al.，2007，Oncogene，April 30，Epub ahead of print；our unpublished results)。结构基因(如与Friedreich’s运动失调相关的FXN基因和与脊柱肌肉萎缩相关的SMN基因)的抑制可以被HDAC逆转，使得FXN和SMN基因重新表达，并恢复组织功能(Herman D et al.，2006，NatureChemical Biology，2(10)：551-8；Avila AM et al.，2007，J Clinic Investigation，117(3)659-71；deBore J，2006，Tissue Eng.12(10)：2927-37)。HDAC抑制剂在染色体6p21-22重调HDAC“热点”程序，诱导了整个MHC II家族基因表达，进一步延伸了免疫识别和免疫响应的表观基因调控(Gialitakis M et al.，2007，Nucleic Acids Res.，34(1)；765-72)。

目前已经确定了几类HDAC抑制剂，包括：1)短链脂肪酸，如丁酸和苯丁酸；2)有机羟肟酸，如suberoylanilide hydroxamic acid(SAHA)和trichostatin A(TSA)；3)含有2-胺基-8-氧-9，10-环氧癸酰基(AOE)的环四肽，如trapoxin和HC-toxin；4)不含2-氨基-8-氧-9，10-环氧癸酰基的环四肽，如apicidin和FK228；5)苯酰胺类，如MS-275(欧洲专利EP 0847992A1，美国专利2002/0103192A1，世界专利02/26696A1，世界专利01/70675A2，世界专利01/18171A2)。尽管HDAC是一个极具前景的药物靶标，但目前Merck公司研制的SAHA仅仅局限于对皮肤T细胞淋巴瘤的治疗，而对实体瘤疗效并不明显。因此，有必要继续研制新的化合物，使其具有更强的HDAC抑制活性、更强的抗癌活性、更好的HDAC亚型选择性和更低的毒性。

发明内容

本发明目的之一在于公开一类具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的6-氨基烟酰胺衍生物；

本发明目的之二在于公开这一类所述的化合物的制备方法；

本发明目的之三在于公开这一类所述的化合物作为治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病方面的临床应用。

本发明所述的化合物，可以有选择性地抑制组蛋白去乙酰化酶，可用于治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病，如鲁-泰(Rubinstein-Taybi)二氏综合征、脆性X染色体综合症、白血病、癌症、免疫学疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神经系统疾病和神经退化性疾病。

本发明所说的化合物，其化学结构如通式(I)所示：

其中，

R¹，R²，R³和R⁴分别为氢、卤素、烷基、烷氧基或三氟甲基；

R⁵为吡啶环，环上无取代基或有一个或多个取代基，取代基为卤素、烷基、烷氧基或三氟甲基；或R⁵为

X为共价键、-CH₂CH₂-、-CH＝CH-、O或S；

环A和环B分别为苯环，环上无取代基或有一个或多个取代基，取代基为卤素、硝基、烷基或烷氧基；

n为2到6的整数；

包括其游离形式、盐的形式、对映异构体、非对映异构体或水合物。较优地，所述化合物的结构如通式(I)所示，其中，

R¹，R²，R³和R⁴分别为氢或卤素；

R⁵为吡啶环；或R⁵为

X为共价键；

环A和环B分别为苯环；

n为2到6的整数。

更优地，所述化合物的结构如通式(I)所示，其中，

R¹，R²，R³和R⁴分别为氢或氟；

R⁵为吡啶环；或R⁵为

X为共价键；

环A和环B分别为苯环；

n为2到4的整数。

本发明所述的“卤素”，为氟、氯、溴、碘；

本发明所述的“烷基”，包括直链、支链或环状烷基，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、特丁基、正戊基、异戊基、正己基、异己基、环丙基、环丁基、环戊基、环己基等；

本发明所述的“烷氧基”，是指烷基与氧原子相连所形成的基团，其中，氧原子具有自由成键能力，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基、异丙氧基、特丁氧基、环丙氧基、环己基氧基等；

本发明所述的化合物的合成路线如下所示：

(a)将6-氯烟酸与化合物1进行缩合反应得到化合物2；

(b)将化合物2与化合物3进行缩合反应得到化合物4；

(c)将化合物4与化合物5进行缩合反应得到化合物6。

上述缩合反应(a)和(c)以肽缩合剂为催化剂，如1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺(EDC)，N，N’-二环己基碳二亚胺(DCC)，N，N’-碳酰二咪唑(CDI)等。反应温度为0～80℃，反应时间为4～72小时。反应所用溶剂为常用溶剂，如苯、甲苯、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要时，也可以加入碱如氢氧化钠、三乙胺或吡啶。

上述缩合反应(b)，反应温度为40～120℃，反应时间为1～24小时。反应所用溶剂为常用溶剂，如苯、甲苯、四氢呋喃、二氧六环、二氯甲烷、氯仿、N，N-二甲基甲酰胺等。必要时，也可以加入碱如氢氧化钠、三乙胺或吡啶。

上述缩合反应(c)所使用的化合物5，当R⁵为吡啶环时，化合物5可以直接购买；当R⁵为三环时，化合物5可采用如下方法进行制备：

先将磷酰基乙酸三乙酯与NaH在无水四氢呋喃中室温反应1小时，然后加入化合物(7)，回流反应3小时，制得化合物(8)。再将化合物(8)溶于甲醇，加入1MNaOH溶液，回流反应6小时，水解制得化合物(5)。

通式(I)所述的化合物及中间体(2)和中间体(4)，可以采用常见的分离方法进行纯化，如萃取、重结晶、柱层析等。

本发明所述的化合物，具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性，可以用于治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病，尤其对鲁-泰(Rubinstein-Taybi)二氏综合征、脆性X染色体综合症、白血病、癌症、免疫学疾病、心肌肥大、骨骼疾病、神经系统疾病和神经退化性疾病具有优异疗效。

本发明所述的化合物，被加工成常用的药用制剂，如片剂、胶囊、粉剂、糖浆、液剂、悬浮剂、针剂。该制剂含有作为活性组分的通式(I)的化合物，以及药用载体、辅料或稀释剂。该制剂中通常含有0.5～70％的活性成分，较佳含量为1～20％。该药用制剂的剂型规格为0.0001～200mg。

本发明所说的药用载体、辅料或稀释剂，包括《药用赋形剂手册》(美国药学协会，1986年10月)或化学工业出版社出版的《药用辅料手册》(Handbook ofPharmaceutical Excipients，原著第四版)所列的载体填料，但并不局限于这些载体填料。

本发明所述的化合物，在临床上可以通过口服或注射方式对哺乳动物(包括人)进行用药，其中尤以口服方式最佳。用药剂量为每日0.0001～200mg/kg体重，较佳用药剂量为每日0.01～100mg/kg体重，最佳用药剂量为每日0.1～50mg/kg体重，同时，最佳剂量视个体而定，通常开始时剂量较小，然后逐渐增加用量。

本发明所述的代表性化合物如表1所示。化合物编号与实施例部分中的“实施例编号”相一致，即表1中化合物4的合成在“实施例4”中得到描述，表1中化合物52的合成在“实施例52”中得到描述。

表1本发明代表性化合物

具体实施方式

下面结合实例进一步阐明本发明的内容，但本发明的保护范围并不仅仅局限于这些实例。本发明所述的百分比除特别注明外，均为重量百分比。说明书中所描述的数值范围，如计量单位、反应条件、化合物物理状态或百分比，均是为了提供明白无误的书面参考。本领域熟练技术人员在实践本专利时，使用在此范围之外或有别于单个数值的温度、浓度、数量、碳原子数等，仍然可以得到预期的结果。

实施例1

2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸等化合物的制备

在反应瓶中加入10ml无水四氢呋喃和42mg(1.05mmol)60％NaH，于室温下滴加269mg(1.2mmol)磷酰基乙酸三乙酯(购于Aldrich公司)，继续搅拌反应1小时，然后加入206mg(1mmol)二苯并环庚烯酮(购于Aldrich公司)，回流反应3小时。将反应混合物到入100ml水中，用盐酸中和至pH值为4～5，用乙酸乙酯萃取(3×30毫升)，合并有机相，用无水MgSO₄干燥，浓缩得淡黄色粘稠固体2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸乙酯(265mg，产率96％)。

将上述淡黄色粘稠固体2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸乙酯溶于50ml甲醇，加入3ml 1M NaOH溶液，回流反应6小时。将反应混合物浓缩除去甲醇，用盐酸中和至pH值为2～3。真空抽滤，收集固体粗产品。将粗产品用无水乙醇重结晶得白色固体2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸(101mg，产率41％)。LC-MS(m/z)249(M+1)。

以二苯并环庚酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(10，11-二氢-5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)251(M+1)。

以氧杂蒽酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(9H-氧杂蒽-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)239(M+1)。

以9-噻吨酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得6-(2-(9H-噻吨-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)255(M+1)。

以2，7-二氯-9-芴酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(2，7-二氯-9H-芴-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)291(M+1)。

以2，7-二溴-9-芴酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(2，7-二溴-9H-芴-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)381(M+1)。

以2，7-二硝基-9-芴酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(2，7-二硝基-9H-芴-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)313(M+1)。

以2，7-二甲氧基-9-芴酮(Ivoanov A.V.et al，2002，Russian Journal of General Chemistry，Vol.72(9)：1435-1438)为原料，采用类似方法制得2-(2，7-二甲氧基-9H-芴-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)283(M+1)。

以4，5-二甲基-9-芴酮(购于Aldrich公司)为原料，采用类似方法制得2-(4，5-二甲基-9H-芴-9-亚基)乙酸，LC-MS(m/z)251(M+1)。

实施例2N-(2-氨基苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸(购于Aldrich公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和216mg(2mmol)邻苯二胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(138mg，产率56％)。LC-MS(m/z)248(M+1)。

实施例3

N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将248mg(1mmol)N-(2-氨基苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(150mg，产率55％)。LC-MS(m/z)272(M+1)。

实施例4

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸(购于AlfaAesar公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(280mg，产率59％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.48(m，4H，CH₂CH₂)，4.86(s，2H，benzene-NH₂)，6.55(m，2H)，6.75(d，J＝7.6Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.12(d，J＝7.6Hz，1H)，7.28～7.34(m，3H)，7.42(t，J＝7.2Hz，2H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.82(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.68(m，2H)，8.74(d，J＝7.6Hz，1H)，9.39(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)476(M+1)。

实施例5

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(256mg，产率68％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.48(m，4H，CH₂CH₂)，4.86(s，2H，benzene-NH₂)，6.52(d，J＝8.8Hz，2H)，6.57(m，1H)，6.75(dd，J＝1.2&8.0Hz，1H)，6.94(t，J＝8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.50(m，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.69(m，1H)，8.83(m，1H)，9.01(s，1H)，9.39(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)377(M+1)。

实施例6

N-(2-氨基苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺的制备

将248mg(1mmol)N-(2-氨基苯基)-6-氯烟酰胺和6ml1，3-丙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的1，3-丙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(168mg，产率59％)。LC-MS(m/z)286(M+1)。

实施例7

N-(2-氨基苯基)-6-(3-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)丙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和299mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(269mg，产率55％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.82(m，2H，CH₂)，3.38(m，4H，2×CH₂)，4.86(s，2H，benzene-NH₂)，6.51～6.57(m，2H)，6.76(d，J＝7.6Hz，1H)，6.94(t，J＝7.6Hz，1H)，7.10(s，1H)，7.10～7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.29～7.39(m，2H)，7.41(t，J＝7.2Hz，2H)，7.78(d，J＝7.6Hz，1H)，7.83(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.69(s，1H)，8.70(d，J＝7.6Hz，1H)，9.36(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)490(M+1)。

实施例8

N-(2-氨基苯基)-6-(3-(烟酰氨基)丙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和299mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(281mg，产率72％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.81(m，2H，CH₂)，3.38(m，4H，2×CH₂)，4.85(s，2H，benzene-NH₂)，6.50(d，J＝8.0Hz，2H)，6.57(m，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，6.93(t，J＝8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，7.19(t，J＝4.0Hz，1H)，7.50(m，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.63(s，1H)，8.68～8.72(m，2H)，9.00(s，1H)，9.36(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)391(M+1)。

实施例9

N-(2-氨基苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺的制备

将248mg(1mmol)N-(2-氨基苯基)-6-氯烟酰胺和7ml1，4-丁二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的1，4-丁二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(158mg，产率53％)。LC-MS(m/z)300(M+1)。

实施例10

N-(2-氨基苯基)-6-(4-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)丁基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和314mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(307mg，产率61％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.61(m，4H，CH₂CH₂)，3.29(m，4H，2×CH₂)，4.85(s，2H，benzene-NH₂)，6.49(d，J＝8.8Hz，1H)，6.57(t，J＝8.8Hz，1H)，6.76(d，J＝7.6Hz，1H)，6.93(t，J＝7.6Hz，1H)，7.09(s，1H)，7.09～7.13(d，J＝8.0Hz，1H)，7.18(m，1H)，7.28～7.35(m，3H)，7.42(t，J＝7.2Hz，2H)，7.76(d，J＝7.2Hz，1H)，7.82(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.57(s，1H)，8.63(s，1H)，8.69(d，J＝7.6Hz，1H)，9.35(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)504(M+1)。

实施例11

N-(2-氨基苯基)-6-(4-(烟酰氨基)丁基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和314mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(307mg，产率76％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.60(m，4H，CH₂CH₂)，3.30(m，2H，CH₂)，3.36(m，2H，CH₂)，4.85(s，2H，benzene-NH₂)，6.48(d，J＝8.8Hz，2H)，6.57(m，1H)，6.75(d，J＝8.0Hz，1H)，6.93(t，J＝8.0Hz，1H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，7.17(t，J＝4.0Hz，1H)，7.48(m，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.63(s，1H)，8.68(m，2H)，8.99(s，1H)，9.36(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)405(M+1)。

实施例12

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和151mg(1.2mmol)4-氟邻苯二胺(购于AlfaAesar公司)。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(193mg，产率73％)。LC-MS(m/z)266(M+1)。

实施例13

N-(2-氨基4-氟苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将266mg(1mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(176mg，产率61％)。LC-MS(m/z)290(M+1)。

实施例14

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和303mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(261mg，产率53％)。¹HNMR(DMSO-d₆)δ3.48(m，4H，CH₂CH₂)，5.19(s，2H，benzene-NH₂)，6.34(m，1H)，6.53(m，2H)，7.06(m，2H)，7.28～7.38(m，3H)，7.42(t，J＝7.2Hz，2H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.82(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.67(m，2H)，8.74(d，J＝7.6Hz，1H)，9.32(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)494(M+1)。

实施例15

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和303mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(236mg，产率60％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ3.46～3.52(m，4H，CH₂CH₂)，5.18(s，2H，benzene-NH₂)，6.33(m，1H)，6.50～6.53(m，2H)，7.06(m，1H)，7.30(s，1H)，7.49(dd，J＝4.8&8.0Hz，1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，1H)，8.18(d，J＝8.0Hz，1H)，8.64(s，1H)，8.69(dd，J＝1.2&4.8Hz，1H)，8.81(m，1H)，9.00(s，1H)，9.31(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)395(M+1)。

实施例16

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺的制备

将266mg(1mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-氯烟酰胺和6ml 1，3-丙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的1，3-丙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(158mg，产率52％)。LC-MS(m/z)304(M+1)。

实施例17

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(3-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)丙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和318mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(248mg，产率49％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.81(m，2H，CH₂)，3.38(m，4H，2×CH₂)，5.18(s，2H，benzene-NH₂)，6.33(m，1H)，6.51(m，2H)，7.06～7.10(m，2H)，7.20(s，1H)，7.29～7.36(m，2H)，7.42(t，J＝7.2Hz，2H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，7.82(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.64(s，1H)，8.69(d，J＝7.6Hz，1H)，9.29(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)508(M+1)。

实施例18

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(3-(烟酰氨基)丙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和318mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(3-氨基丙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(314mg，产率77％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.81(m，2H，CH₂)，3.38(m，4H，2×CH₂)，5.18(s，2H，benzene-NH₂)，6.33(m，1H)，6.52(m，2H)，7.06(m，1H)，7.18(s，1H)，7.49(dd，J＝4.8&8.0Hz，1H)，7.89(d，J＝8.0Hz，1H)，8.17(d，J＝8.0Hz，1H)，8.63(s，1H)，8.69(m，2H)，9.00(s，1H)，9.29(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)409(M+1)。

实施例19

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺的制备

将266mg(1mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-氯烟酰胺和7ml 1，4-丁二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的1，4-丁二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(149mg，产率47％)。LC-MS(m/z)318(M+1)。

实施例20

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(4-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)丁基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和333mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(344mg，产率66％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.60(m，4H，CH₂CH₂)，3.29(m，4H，2×CH₂)，5.18(s，2H，benzene-NH₂)，6.33(m，1H)，6.49(m，2H)，7.06～7.08(m，2H)，7.18(m，1H)，7.28～7.35(m，3H)，7.41(t，J＝7.2Hz，2H)，7.76(d，J＝7.6Hz，1H)，7.82(m，2H)，7.93(d，J＝7.6Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.63(s，1H)，8.69(d，J＝7.6Hz，1H)，9.27(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)522(M+1)。

实施例21

N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(4-(烟酰氨基)丁基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和333mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氟苯基)-6-(4-氨基丁基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(291mg，产率69％)。¹H NMR(DMSO-d₆)δ1.59(m，4H，CH₂CH₂)，3.33(m，4H，2×CH₂)，5.17(s，2H，benzene-NH₂)，6.33(m，1H)，6.50(m，2H)，7.06(m，1H)，7.15(s，1H)，7.49(m，1H)，7.88(d，J＝8.0Hz，1H)，8.16(d，J＝8.0Hz，1H)，8.61(s，1H)，8.67(m，2H)，9.89(s，1H)，9.27(s，1H，benzene-NH)。LC-MS(m/z)423(M+1)。

实施例22

N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和171mg(1.2mmol)4-氯邻苯二胺(购于AlfaAesar公司)。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(135mg，产率48％)。LC-MS(m/z)282(M+1)。

实施例23

N-(2-氨基4-氯苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将282mg(1mmol)N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(180mg，产率59％)。LC-MS(m/z)306(M+1)。

实施例24

N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和321mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(326mg，产率64％)。LC-MS(m/z)510(M+1)。

实施例25

N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和321mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-氯苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(258mg，产率63％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。

实施例26

N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和146mg(1.2mmol)4-甲基邻苯二胺(购于AlfaAesar公司)。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(164mg，产率63％)。LC-MS(m/z)262(M+1)。

实施例27

N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将261mg(1mmol)N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(145mg，产率51％)。LC-MS(m/z)286(M+1)。

实施例28

N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和299mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(279mg，产率57％)。LC-MS(m/z)490(M+1)。

实施例29

N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和299mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(281mg，产率72％)。LC-MS(m/z)391(M+1)。

实施例30

N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和166mg(1.2mmol)4-甲氧基邻苯二胺(购于AlfaAesar公司)。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(144mg，产率52％)。LC-MS(m/z)278(M+1)。

实施例31

N-(2-氨基4-甲氧基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将277mg(1mmol)N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(144mg，产率48％)。LC-MS(m/z)302(M+1)。

实施例32

N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和316mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(278mg，产率55％)。LC-MS(m/z)506(M+1)。

实施例33

N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和316mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-甲氧基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(244mg，产率60％)。LC-MS(m/z)407(M+1)。

实施例34

N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-氯烟酰胺的制备

将157.5mg(1mmol)6-氯烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和211mg(1.2mmol)4-三氟甲基邻苯二胺(购于Alfa Aesar公司)。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200ml乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯，向残留物中加入5ml无水乙醇。真空抽滤收集固体。固体用少量无水乙醇洗涤，真空干燥得棕色固体(132mg，产率42％)。LC-MS(m/z)316(M+1)。

实施例35

N-(2-氨基4-三氟甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺的制备

将266mg(1mmol)N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-氯烟酰胺和5ml乙二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的乙二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(159mg，产率47％)。LC-MS(m/z)340(M+1)。

实施例36

N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-(2-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和356mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(255mg，产率47％)。LC-MS(m/z)544(M+1)。

实施例37

N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-(2-(烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和356mg(1.05mmol)N-(2-氨基-4-三氟甲基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(275mg，产率62％)。LC-MS(m/z)445(M+1)。

实施例38

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(2，7-二氯-9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将291mg(1mmol)2-(2，7-二氯-9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(358mg，产率66％)。LC-MS(m/z)544(M+1)。

实施例39

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(2，7-二硝基-9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将312mg(1mmol)2-(2，7-二硝基-9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(379mg，产率67％)。LC-MS(m/z)566(M+1)。

实施例40

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(2，7-二甲氧基-9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将282mg(1mmol)2-(2，7-二甲氧基-9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(289mg，产率54％)。LC-MS(m/z)536(M+1)。

实施例41

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(4，5-二甲基-9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将250mg(1mmol)2-(4，5-二甲基-9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(302mg，产率60％)。LC-MS(m/z)504(M+1)。

实施例42

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将248mg(1mmol)2-(5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(255mg，产率51％)。LC-MS(m/z)502(M+1)。

实施例43

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(10，11-二氢-5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将250mg(1mmol)2-(10，11-二氢-5H-二苯并环庚烯基-5-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(211mg，产率42％)。LC-MS(m/z)504(M+1)。

实施例44

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(9H-氧杂蒽-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将238mg(1mmol)2-(9H-氧杂蒽-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(240mg，产率49％)。LC-MS(m/z)492(M+1)。

实施例45

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-(9H-噻吨-9-亚基)乙酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将254mg(1mmol)2-(9H-噻吨-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(289mg，产率57％)。LC-MS(m/z)508(M+1)。

实施例46

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(6-氯烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将158mg(1mmol)6-氯烟酸(购于Aldrich公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(296mg，产率72％)。LC-MS(m/z)411(M+1)。

实施例47

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(6-甲基烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将137mg(1mmol)6-甲基烟酸(购于Aldrich公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(288mg，产率74％)。LC-MS(m/z)391(M+1)。

实施例48

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(2-甲氧基烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将153mg(1mmol)2-甲氧基烟酸(购于Aldrich公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(207mg，产率51％)。LC-MS(m/z)407(M+1)。

实施例49

N-(2-氨基苯基)-6-(2-(6-三氟甲基烟酰氨基)乙基氨基)烟酰胺的制备

将162mg(1mmol)6-三氟甲基烟酸(购于Aldrich公司)溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和284mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(2-氨基乙基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(204mg，产率46％)。LC-MS(m/z)445(M+1)。

实施例50

N-(2-氨基苯基)-6-(6-氨基己基氨基)烟酰胺的制备

将248mg(1mmol)N-(2-氨基苯基)-6-氯烟酰胺和5.8g(50mmol)1，6-己二胺混合，加热至80℃，反应3小时。真空除去过量的1，6-己二胺。向残留物中加入5ml 0.20M的NaOH溶液，然后用100ml乙酸乙酯萃取。减压除去乙酸乙酯得棕色固体(219mg，产率67％)。LC-MS(m/z)328(M+1)。

实施例51

N-(2-氨基苯基)-6-(6-(2-(9H-芴-9-亚基)乙酰氨基)己基氨基)烟酰胺的制备

将222mg(1mmol)2-(9H-芴-9-亚基)乙酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和343mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(6-氨基己基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，真空抽滤收集固体。固体用水洗涤，真空干燥得米色固体(324mg，产率61％)。LC-MS(m/z)532(M+1)。

实施例52

N-(2-氨基苯基)-6-(6-(烟酰氨基)己基氨基)烟酰胺的制备

将123mg(1mmol)烟酸溶于8ml DMF中，然后加入384mg(2mmol)1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、162mg(1.2mmol)1-羟基苯并三唑、404mg(4mmol)三乙胺和343mg(1.05mmol)N-(2-氨基苯基)-6-(6-氨基己基氨基)烟酰胺。混合物在室温下搅拌20小时，然后用400ml盐水稀释，再用200毫升乙酸乙酯萃取。真空除去乙酸乙酯得棕色固体(311mg，产率72％)。LC-MS(m/z)433(M+1)。

实施例53  片剂的制备

处方(1000片)：

化合物4：5g

微晶纤维素：90g

羧甲基淀粉钠：5g

4％聚维酮K30无水乙醇溶液：50g

滑石粉：0.5g

制备工艺：将化合物4过100目筛，将微晶纤维素、羧甲基淀粉钠和滑石粉过80目筛，称取处方量的微晶纤维素和羧甲基淀粉钠，混合均匀，然后将化合物4与其按等量递加法混匀，加入4％聚维酮K30无水乙醇溶液适量制粒，干燥后加入处方量滑石粉混匀，压片即得。

实施例54  胶囊的制备

处方(1000粒)：

化合物4：5g

微晶纤维素：55g

乳糖：35g

羧甲基淀粉钠：5g

硬脂酸镁：0.5g

制备工艺：将化合物4过100目筛，将微晶纤维素、乳糖、羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁过80目筛，称取处方量的微晶纤维素、乳糖和羧甲基淀粉钠，混合均匀，然后将化合物4与其按等量递加法混匀，加入处方量硬脂酸镁混匀，灌装胶囊即得。

实施例55  注射液的制备

处方：

化合物4：1.00mg

药用乙醇：1.00ml

制备工艺：将化合物4溶于药用乙醇即得。

实施例56

化合物4-21体外抑制HDAC总酶活性，体外抑制HDAC

亚型活性的试验

(一)体外HDAC总酶活性的测定

体外HDAC总酶活性的测定是我们采用BIOMOL公司的HDAC Fluorimetric Assay/DrugDiscovery Kit对抑制剂的体外抑制活性进行测试。实验的原理如下：一种特殊的底物Fluor deLys在组蛋白去乙酰化酶(实验中采用HeLa细胞的核提取物，富含多种亚型的HDAC)的作用下会去掉一个乙酰基，暴露出游离的氨基，当加入Developer后会产生一种可诱导的荧光。这种荧光的激发波长为360nm，发射波长为460nm。底物去乙酰化越充分，诱导的荧光值就越高，在无抑制剂情况下的荧光值为对照；而当有抑制剂存在的时候，被诱导的荧光值会降低，而无酶时(相当于酶活性完全被抑制)的荧光值为空白。而一般抑制后的荧光值会介于对照和空白之间。在分析时我们将空白作为0，对照作为1进行计算，值越小则说明抑制活性越高。

(二)报告基因对抑制剂HDAC亚型选择性的测定

HDAC不同亚型可以与不同的转录因子结合，参与不同基因的表达调控中。选择合适转录因子的调控元件构建成报告基因，可以用来评估抑制剂对HDAC亚型的选择性抑制作用。在转染前一天将HeLa细胞种入96孔板使转染时密度达到50-80％的融合。在荧光素酶基因上游插入了p21-启动子，gdf11-启动子，MEF-结合元件，Nur77-启动子等调控序列的报告基因质粒分别使用FuGene6(Roche)转染试剂，根据操作说明进行转染。同时为了校正转染效率，共转染了绿色荧光蛋白(GFP)的表达质粒。在转染24小时后加入化合物或溶剂对照(DMSO)。再过24小时后收集并裂解细胞，按照操作说明使用荧光素酶(Promega)检测试剂盒对荧光素酶的量进行评估。同时进一步测定GFP的含量，对转染效率进行校正。

实验结果见表2。

表2

实施例57

化合物4-21对肿瘤细胞增值抑制的MTS试验

将肿瘤细胞用胰酶消化后，以3000个每孔的密度分种于96孔微孔板，在含10％FBS的完全培养基里培养24小时。加入待测化合物和溶剂对照，最终化合物浓度为100nmol/L到100μmol/L。然后在完全培养基里培养72小时。根据说明书的方法加入MTS试剂(Promega)，在37℃CO₂培养箱中培养2小时，然后在ELISA酶标仪上读取490nm的吸收值。

实验结果见表3。

表3

^*CS055：西达本胺，是微芯生物科技有限公司在临床研究阶段的抗肿瘤HDAC抑制剂；Sorafinib和Sutent是已上市的多活性酪氨酸激酶抑制剂。

Claims (6)

1.一种具有通式(I)的6-氨基烟酰胺衍生物：

其中，

R¹，R²，R³和R⁴分别为氢或氟；

R⁵为

X为共价键；

环A和环B分别为苯环；

n为2到4的整数；

或其盐。

2.通式(I)的化合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

(a)将6-氯烟酸与化合物(1)进行缩合反应得到化合物(2)；

(b)将化合物(2)与化合物(3)进行缩合反应得到化合物(4)；

(c)将化合物(4)与化合物(5)进行缩合反应得到通式(I)的化合物；

其中，

R¹，R²，R³和R⁴分别为氢或氟；

R⁵为

X为共价键；

环A和环B分别为苯环；

n为2到4的整数。

3.一种用于治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常相关的疾病的药用制剂，其特征在于：该制剂包括作为活性组分的权利要求1所述通式(I)的化合物以及药用辅料。

4.如权利要求3所述的药用制剂，其特征在于：所述药用制剂的规格为0.0001～200mg。

5.如权利要求3所述的药用制剂，其特征在于：所述药用制剂为片剂、胶囊、粉剂、液剂或针剂。

6.权利要求1所述的化合物在制备用于治疗鲁-泰二氏综合征、脆性X染色体综合症、癌症、免疫学疾病、心肌肥大、骨骼疾病和神经系统疾病的药物中的应用。