CN102010452A - 从油松的松针中提取的三种黄酮苷及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从油松的松针中提取的三种黄酮苷及其制备方法，有效解决从油松的松针中提取的三种黄酮苷的问题，该三种黄酮苷为：7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷；5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷；3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷；制备时，松针用乙醇连续回流提取两次，减压回收溶剂，得稠膏，加水溶解，用石油醚、乙酸乙酯分别萃取至无色，浓缩得乙酸乙酯稠膏，经硅胶柱色谱，进行梯度洗脱，再上硅胶柱洗脱，先后得7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，本发明方法先进可靠，容易操作，稳定可靠。
Description
一、技术领域
本发明涉及一种从油松的松针中提取的三种黄酮苷及其制备方法。
二、背景技术
油松别名：红皮松、短叶松，东北黑松，原产中国，自然分布范围广泛，主要分布于辽宁、吉林、内蒙古、河北、河南、山西、陕西、山东、甘肃、宁夏、青海、四川北部等地。朝鲜亦有分布。其松香、松针、松枝、松节、松油、松根、松花粉历代均入药用。而松针采集方便，可用于治疗风湿痿痹、跌打损伤、失眠、浮肿、湿疮、疥癣，并能治疗流脑、流感、钩虫病等。近年来，广泛用于治疗风湿病，心脑血管病、糖尿病、肥胖病、肝病、胃病、淋病、慢性支气管炎、癌症等，其价值日益受到重视。油松松针是一种具有潜在应用前景的天然药物，但目前对其化学成分的研究鲜有报道，为了阐明其药效物质基础，从油松的松针中分离出化学成分三种黄酮苷是完全有必要的。
三、发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种从油松的松针中提取的三种黄酮苷及其制备方法，可有效解决从油松的松针中提取的三种黄酮苷的问题。
本发明解决的技术方案是，该三种黄酮苷为：7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C24H26O12，结构式是：
5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C23H24O11，结构式是：
3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C22H22O11，结构式是：
其制备方法是：取刚摘下的新鲜油松的松针，每次用油松的松针重量的8-10倍量的体积浓度为80％的乙醇，70-90℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，40-50℃减压回收溶剂，得稠膏，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液(部位)，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板(薄层板为公知常用试剂板)上展开，用三氯化铁-铁氰化钾(三氯化铁-铁氰化钾为公知常用显色剂)喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％甲醇洗脱得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶ToyopearlHW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，可明显地观察到有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。
本发明制备方法先进可靠，科学严谨，容易操作，经对辽宁、吉林、河南、甘肃、青海、的油松的松针样品按上述方法经反复应用制备，均取得了相同或相近似的结果，表明本发明稳定可靠，可有效地用于各地从油松的松针中提取7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。
四、具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明所用的样品为松科松属植物油松(Pinus tabuleaformis carr)的松针。
柱层析所用硅胶H由青岛海洋化工厂生产(160-200目)，薄层层析硅胶为青岛海洋化工厂生产(颗粒范围10-40μm)，以0.5％CMC-Na制板，阴干，105℃活化0.5h。Toyopearl HW-40为日本TOSOH公司生产，Sephadex LH-20为Parmacia Biotech公司生产，所用分析纯试剂由北京化工产和天津第三化学试剂厂提供。
实施例1
将河南产刚摘下的新鲜油松的松针7.8kg，先用油松的松针重量的10倍量的体积浓度为80％的乙醇，再用油松的松针重量的8倍量的体积浓度为80％的乙醇，75℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，42℃减压回收溶剂，得稠膏2022g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液(部位)，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏250g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板(薄层板为公知常用试剂板)上展开，用三氯化铁-铁氰化钾(三氯化铁-铁氰化钾为公知常用显色剂)喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷15mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，可明显地观察到有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷10mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷20mg。
实施例2
将辽宁或吉林产的刚摘下的新鲜油松的松针9kg，先用油松的松针重量的8倍量的体积浓度为80％的乙醇，再用油松的松针重量的10倍量的体积浓度为80％的乙醇，80℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，45℃减压回收溶剂，得稠膏2068g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液(部位)，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏264g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板(薄层板为公知常用试剂板)上展开，用三氯化铁-铁氰化钾(三氯化铁-铁氰化钾为公知常用显色剂)喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶SephadexLH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷16mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶ToyopearlHW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，可明显地观察到有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷12mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷21mg。
实施例3
将甘肃或青海产的刚摘下的新鲜油松的松针12kg，每次油松的松针重量的9倍量的体积浓度为80％的乙醇，85℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，48℃减压回收溶剂，得稠膏2223g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液(部位)，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏322g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板(薄层板为公知常用试剂板)上展开，用三氯化铁-铁氰化钾(三氯化铁-铁氰化钾为公知常用显色剂)喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶ToyopearlHW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷18mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，可明显地观察到有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷14mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷32mg。
对上述产品经分析研究，本发明的7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的有关情况解析如下：
7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷，黄色粉末，易溶于甲醇，
(c 0.1，MeOH)；HRESIMSm/z：529.1308[M+Na]+(计算值：529.1322)；UV(MeOH)λmax nm：276.6，333.8；IR(KBr)vmaxcm-1：3334，2925，1652，1577，1491，1435，1385，1209，1174，1179，1078，1026，842。
1H-NMR谱中，芳香区出现4个氢质子信号，分别出现在δH8.02(d，2H，J＝8.8Hz，H-2′，6′)，6.40(d，2H，J＝8.8Hz，H-3′，5′)，4个氢质子构成AA′BB′系统。δH3.95(3H，s)，3.75(3H，s)为两个甲氧基的峰，δH2.04(3H，s)为一个甲基的峰。δH3.0-5.0有6个氢质子信号提示结构中有一个糖，δH4.88(d，1H，J＝7.6Hz)为糖的端基氢信号峰，且根据其偶合常数判断取代类型为β型。
13CNMR谱，δC103.3，77.5，76.7，74.5，70.6，61.4为一组葡萄糖的的信号峰。δC61.2和δC59.1为两个甲氧基的信号，δC8.3为甲基的信号，剩余的15个碳信号为黄酮骨架碳信号，其中δC176.8为4位羰基的特征信号峰。
HMBC谱中，δH3.75(3H，s)的氢和δC135.5(C-3)处的碳相关，提示一个甲氧基连在3位；δH3.93(3H，s)的氢和δC156.3(C-5)处的碳相关，提示另一个甲氧基连在5位；在1H-NMR谱看不到5位羟基的活泼H信号从侧面印证了推论的正确性；δH2.04(3H，s)和δC156.3(C-5)处的碳，δC 112.0(C-6)处的碳和δC155.3(C-7)处的碳相关，提示甲基连在6位；δH4.88(d，1H，J＝7.6Hz)的氢和δC127.9(C-8)处碳相关，提示糖连在8位。综上所述，该化合物的结构是7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷(7，8，4′-trihydroxy-3，5-dimethox-y-6-methy-lflavonol-8-O-β-D-glucopyranranoside)。
下表为化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷的1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)和13CNMR(100MHz，DMSO-d6)数据
注：该表给出了该化合物的碳氢归属，证明了结构解析的正确性。
5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，黄色粉末，
(c＝0.12，MeOH)；HRESIMSm/z：499.1224[M+Na]+(计算值：499.1211).UV(MeOH)λmaxnm：271.7，331.0；IR(KBr)vmaxcm-1：3289，2924，2854，1650，1600，1509，1457，1344，1259，1071，1033，802。
1H-NMR谱中，其中四个芳香氢信号δH7.94(d，2H，J＝8.8Hz，H-2′，6′)，6.71(d，2H，J＝8.8Hz，H-3′，5′)构成AA′BB′系统，另一个芳香氢出现在δH6.82(1H，s)。δH 3.75(3H，s)为一个甲氧基的氢信号，δH2.13(3H，s)为一个甲基氢信号。δH3.0-5.1有6个氢质子信号，提示结构中有一个糖，δH5.09(d，1H，J＝7.2Hz)为糖的端基氢信号峰，且根据其偶合常数判断取代类型为β型。
13CNMR谱，δC99.6，76.3，76.1，72.9，69.3，60.5为一组葡萄糖的的信号峰。δC58.2为甲氧基的信号，δC5.68为甲基的信号，剩余的15个碳信号为黄酮骨架碳信号，其中δC177.6为4位羰基的特征信号峰。
HMBC谱中，δH3.75(3H，s)的氢和δC136.4(C-3)处的碳相关，提示甲氧基连在3位；δH2.04(3H，s)的氢和δC160.3(C-7)，δC157.2(C-5)andδC108.4(C-6)处的碳相关，提示甲基连在6位；δH5.09(1H，d，J＝7.2Hz)的氢和δC160.3(C-7)，提示糖连在7位。综上所述，该化合物的结构是5，7，4′三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(5，7，4′-trihydroxy-3-methoxy-6-methylflavonol-7-O-β-D-gluc-opyranoside)。
下表为化合物5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的1H-NMR(400MHz，CD3OD)和13CNMR数据(100MHz，CD3OD)数据
注：该表给出了该化合物的碳氢归属，证明了结构解析的正确性。
3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，黄色粉末。
(c＝0.26，MeOH)；HRESIMSm/z：499.1224[M+Na]+(计算值：499.1211)。UV(MeOH)λmaxnm：268.5，337.7；IR(KBr)vmaxcm-1：3374，2930，2888，1646，1597，1597，1512，1481，1358，1271，1072，1025，802。
1H-NMR谱中，其中四个芳香氢信号8.13(1H，d，J＝8.8Hz)，6.93(1H，d，J＝8.8Hz)构成AA′BB′系统，另一个芳香氢出现在6.91(1H，s)。2.10(3H，s)为一个甲基氢信号。δH 3.0-5.1有6个氢质子信号，提示结构中有一个糖，δH 5.08(d，1H，J＝7.2Hz)为糖的端基氢信号峰，且根据其偶合常数判断取代类型为β型。
13CNMR谱，δC100.3，77.3，76.7，73.5，69.8，60.8为一组葡萄糖的的信号峰。δC7.8为甲基的信号，剩余的15个碳信号为黄酮骨架碳信号，其中δC177.6为4位羰基的特征信号峰。
HMBC谱中，δH 2.10(3H，s)的氢和δC160.7(C-7)，δC157.2(C-5)andδC107.7(C-6)处的碳相关，提示甲基连在6位；δH5.09(1H，d，J＝7.2Hz)的氢和δC160.7(C-7)，提示糖连在7位。综上所述，该化合物的结构是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(3，5，7，4′-tetrahydroxy-6-methylflavonol-7-O-β-D-glucopyranoside)。
下表为化合物3，5，7，4′-三羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷的1H-NMR谱(400MHz，DMSO-d6)和13CNMR(100MHz，DMSO-d6)数据
注：该表给出了该化合物的碳氢归属，证明了结构解析的正确性。
本发明制备方法先进可靠，科学严谨，容易操作，可靠性强，有效解决了从油松的松针中提取有效成份7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷、3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷三种黄酮苷的问题，为油松进一步应用，提供了有利的技术手段和药用价值。
Claims (5)
1.一种从油松的松针中提取的三种黄酮苷，其特征在于，该三种黄酮苷为：7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C24H26O12，结构式是：
5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C23H24O11，结构式是：
3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，分子式：C22H22O11，结构式是：
2.权利要求1所述的从油松的松针中提取的三种黄酮苷的制备方法，其特征在于，取刚摘下的新鲜油松的松针，每次用油松的松针重量的8-10倍量的体积浓度为80％的乙醇，70-90℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，40-50℃减压回收溶剂，得稠膏，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％甲醇洗脱得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶ToyopearlHW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，明显有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷。
3.根据权利要求2所述的从油松的松针中提取的三种黄酮苷的制备方法，其特征在于，将河南产刚摘下的新鲜油松的松针7.8kg，先用油松的松针重量的10倍量的体积浓度为80％的乙醇，再用油松的松针重量的8倍量的体积浓度为80％的乙醇，75℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，42℃减压回收溶剂，得稠膏2022g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏250g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷15mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，明显有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷10mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷20mg。
4.根据权利要求2所述的从油松的松针中提取的三种黄酮苷的制备方法，其特征在于，将辽宁或吉林产的刚摘下的新鲜油松的松针9kg，先用油松的松针重量的8倍量的体积浓度为80％的乙醇，再用油松的松针重量的10倍量的体积浓度为80％的乙醇，80℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，45℃减压回收溶剂，得稠膏2068g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏264g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex L H-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷16mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，明显有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷12mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷21mg。
5.根据权利要求2所述的从油松的松针中提取的三种黄酮苷的制备方法，其特征在于，将甘肃或青海产的刚摘下的新鲜油松的松针12kg，每次油松的松针重量的9倍量的体积浓度为80％的乙醇，85℃下，连续回流提取两次，每次2.5小时，合并提取液，过滤，48℃减压回收溶剂，得稠膏2223g，加适量水分散溶解，先用石油醚萃取至无色，再用乙酸乙酯萃取至无色，得乙酸乙酯萃取液，减压浓缩，得乙酸乙酯稠膏322g，乙酸乙酯稠膏经硅胶柱色谱，依次用二氯甲烷和甲醇以体积比100∶1、50∶1、40∶1和30∶1组成的混合液进行梯度洗脱，将用二氯甲烷和甲醇以体积比40∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分A上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为70％的甲醇洗脱得到，得到黄色粉末化合物7，8，4′-三羟基-3，5-二甲氧基-6-甲基黄酮-8-O-β-D-葡萄糖苷18mg；将上述用二氯甲烷和甲醇以体积比30∶1组成的混合液进行洗脱所得的组分B上硅胶柱，用三氯甲烷和乙酸乙酯以体积比1∶1组成的混合液进行洗脱，洗脱液在薄层板上展开，用三氯化铁-铁氰化钾喷雾显色检识，得到在薄层板上显现黄色，三氯化铁-铁氰化钾喷雾显现蓝色的组分，将蓝色的组分依次通过凝胶Toyopearl HW-40柱、凝胶Sephadex LH-20柱进一步分离纯化，用体积浓度为40％的甲醇洗脱，明显有两条分开的黄色色带，收集含两条色带的洗脱液，先流出柱体的色带成分是5，7，4′-三羟基-3-甲氧基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷14mg，随后流下的色带成分是3，5，7，4′-四羟基-6-甲基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷32mg。
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|---|---|---|---|---|
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| CN103613623A (zh) * | 2013-11-28 | 2014-03-05 | 江苏科技大学 | 多级溶剂萃取法在酶促合成异槲皮苷中的应用 |
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