CN102008837A

CN102008837A - 含串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器

Info

Publication number: CN102008837A
Application number: CN 201010297548
Authority: CN
Inventors: 邱明华; 李忠荣; 周琳; 吴海燕
Original assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Current assignee: Kunming Institute of Botany of CAS
Priority date: 2010-09-30
Filing date: 2010-09-30
Publication date: 2011-04-13
Anticipated expiration: 2030-09-30
Also published as: CN102008837B

Abstract

含串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器，主要部件包括：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；C1一级色谱分离柱；C21二级色谱分离柱1；C22二级色谱分离柱2；C23二级色谱分离柱3；C2n二级色谱分离柱n；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪；连续利用一级色谱分离柱C1分离馏分F1-Fn，分别进样二级色谱分离柱一组C21，C22，C23...C2n，分离纯化化合物单体；形成一级色谱分离柱与二级色谱分离柱组串联，而二级色谱分离柱组间并联形式，独立分离纯化化合物单体；BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀由色谱工作站控制程序。

Description

含串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器

技术领域：

本发明涉及一种分离制备色谱仪器，特别涉及连续使用二个或多个预装分离制备柱组合成的分离制备色谱仪器。

背景技术：

天然活性化合物或先导化合物的研究，离不开提取分离，随着高通量生物活性筛选技术(HTS)的发展；天然化合物的分离成为研究瓶颈。制备色谱作为高效分离技术，其分离模式包括冲洗、置换和前沿三种模式；色谱系统包括所有液液色谱、液固色谱、反相色谱和超临界流体色谱；分离机理涉及吸附、分配、离子交换、分子排阻、疏水作用、亲和和电动胶束等。特别是随着色谱技术的发展，使制备色谱技术应用日趋广泛，其分离能力在医药、生物技术、材料、食品、精细化工等产业中高技术领域，特别是在纯度要求高、附加值高而一般分离技术难以实现的产品生产应用领域，在医药特别是源于天然资源的医药产品如中药注射剂、植物药、海洋药物等领域优势尤为突出，如(1)分子质量相差不大、结构近似、物理化学性质接近的化合物，如同分异构体、光学异构体或系列结构类似物的分离；(2)在较高温度下易于分解、缩聚或失活的热敏性物质、生物活性物质、蛋白、酶等的分离；以及(3)天然或合成高聚物的分级分离等。它的成长与医药、生命科学和生物技术的发展呈同步增长，近10年来制备色谱以每年高于15％的增长率迅速发展，工业上应用十分广泛，特别是活性单体或化合物产品的制备上几乎无处不在；但是在天然产物研究的系统分离中应用较少，主要原因是药用植物中的化学成分过于复杂，制备色谱在研究中应用，操作繁杂，费时费力费事，其应用受到限制。

我国拥有最为庞大的中药化学成分和天然药物结构研究队伍，主要从事天然产物的提取分离和结构鉴定研究，几乎80％以上的工作都是在进行天然化合物的分离，这一研究领域似乎成为劳动力密集型的体力劳动，天然化合物的分离纯化成为天然药物创制或先导化合物发现的瓶颈，大量的时间和精力浪费在分离纯化；而快速高效的现代自动化分离技术设备仍然是突破瓶颈的关键。因此组合应用色谱新技术，设计各种快速分离装置设备的竞争也就十分激烈，出现许多设备和技术方法有很多，但对完整解决一种药用植物中各种成分的高效快速分离制备纯化设备，并不多见，而且面对中药成分结构的复杂多样，效果理想的就更少。自动分离天然化合物的应用设备中，最为有名的是德国Sepiatec GmbH公司的全自动高通量制备型分离系统，其中较大的型号为Sepbox 2D-5000，该设备主要特点是能在24小时之内将0.5-5克天然植物提取物全自动分离成300个化合物的馏分，是高通量药物筛选中较为有效的设备。但该设备主要应用高速逆流色谱(HSCCC)，经过大量的高速逆流色谱分离柱，分离效率有限，馏分中某一天然化合物含量有所提高，分离为高纯单一化合物的较少，大多是一些混合化合物馏分。

目前2D-HPLC分析设备已经有了很大进展，理论上已经有比较充分的研究和探讨，但在实际应用中还有待突破；制备色谱由于化合物组分馏分量非常大，技术难度上与分析设备不可同日而语，因而在大量化合物的分离纯化制备上应用串联色谱技术，目前模拟移动床色谱方法能够解决工业制备化合物单体的需求，但要高效快速分离纯化许多化合物单体，仍然不能作为有效解决方法。

发明内容：

本发明的目的旨在应用预装制备色谱柱的简单切换，实现预装制备色谱柱之间的连续串联，通过一个制备色谱柱与其他一个到几个制备色谱柱的连续反复分离，达到分离纯化化合物单体的目的。以解决天然产物或中药化学成分分离纯化制备纯品化合物的技术瓶颈。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

所述的分离制备色谱仪器，其二位三通电磁阀BV-3和预柱PC先后位置能互换。

所述的分离制备色谱仪器，采用三支分离柱：一级色谱分离柱C1，二级色谱分离柱C21，C22：一级色谱分离柱C1分量得到的不同极性馏分，极性小的馏分比如F1，F2，F3，均用二级色谱分离柱C21依次分离；一级色谱分离柱C1分量得到极性较大的馏分比如F4，F5，F6，均用二级色谱分离柱C22依次分离。这样既扩展了二级色谱分离柱可以虚拟达到C21-C26，节省了二级色谱分离柱，采用不同特性的填料，易于达到分离纯化化合物单体的目的。

所述的分离制备色谱仪器，其一级色谱分离柱和二级色谱分离柱中柱色谱管材料采用玻璃管或有机玻璃管或不锈钢管或聚四氟乙烯管或钛合金管；一级色谱分离柱和二级色谱分离柱采用相同的材料，规格大小相同或不同；柱色谱分离填料采用各种正向硅胶、C18、RP2-18、氨基硅胶、硝基硅胶、醇基硅胶，各种葡聚糖凝胶、聚乙烯、聚苯乙烯的衍生物树脂；分离色谱柱压力采用低压或中压或高压。

所述的分离制备色谱仪器，一级色谱分离柱C1在洗脱馏分F1，F2，F3过程中，洗脱液的组成比例相同或不同；二级色谱分离柱C21，C22，C23在分离纯化化合物单体过程中，洗脱液的组成比例相同或不同，采用甲醇或/和氯仿或/和乙腈或/和乙酸乙酯或/和水，比例从0-100％，根据分离对象来调整和控制洗脱液的组成和比例。

所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C21进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C21柱馏分F1进样过程。2)二级分离柱C21色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C22进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F2：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C22柱馏分F2进样过程。2)二级分离柱C22色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C23进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F3：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C23柱馏分F3进样过程。2)二级分离柱C23色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C23→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C22-C23进样和分离过程中洗脱液流动过程类似，能扩展到二级色谱分离柱C2n。

本发明设计了上述的以串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(以下简称PAI)，并以该设备的设计思路为核心技术，提出一种解决分离纯化化合物单体的思路。该设备PAI的设计和应用方法为：应用电磁阀控制，实现串联制备色谱柱的简单切换，作为分离制备色谱仪器装置核心技术的解决分离纯化化合物单体的思路，以推进解决天然产物或中药化学成分分离纯化制备纯品化合物的技术瓶颈。

附图说明：

图1：为本发明串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(PAI)的设备组合连接示意图；

图2：为图1中二位三通电磁阀BV-3和预柱PC位置互换的示意图；

图中：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；C1一级色谱分离柱；C21二级色谱分离柱1；C22二级色谱分离柱2；C23二级色谱分离柱3；C2n二级色谱分离柱n；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵。

表示二位三通电磁阀，

表示二位四通电磁阀，

表示二位六通电磁阀。

具体实施方式：

下面结合附图，用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。

实施例1：

本发明内容和技术方法的实现途径，可以通过图1、图2表示，并详细表述如下：

1、上样：试验样品用溶剂溶解后，通过手动进样器MI进样，待分离。如果样品量较多，不便用手动进样器1-2次进样的，也可以通过预柱装柱上样，即用预柱的填料吸附样品以后，装柱上样。

2、分离：

1)一级分离柱C1色谱柱分离：一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液到一级分离柱C1色谱柱分离进行分离，同时二位六通电磁阀BV-6控制洗脱液的一段馏分F1，该馏分F1用洗脱时间T1控制，使F1进入到二级分离柱C21色谱柱分离，待分离。

该分离阶段洗脱液流动过程路径是：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出。

2)二级分离柱C21色谱柱进样：与一级分离柱C1色谱柱分离同时进行。从一级分离柱C1色谱柱分离T1时间后，馏分F1通过二位六通电磁阀BV-6控制，进入到二级分离柱C21色谱柱待分离，形成二级分离柱C21上样。

3)二级分离柱C21色谱柱分离：当设定一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1完全进入二级分离柱C21上后，可以控制一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液绕过一级分离柱C1色谱柱，直接到进入二位六通电磁阀BV-6控制，洗脱液进入二级分离柱C21色谱柱进行分离；洗脱液分离馏分进入检测器，由检测器按不同控制方法，得到单一化合物吸收峰的馏分，完成二级分离柱C21色谱柱分离。该分离过程是对一级分离柱C1得到的分离馏分F1的完全分离，可以收集到分离纯化的各种化合物单体。

该分离阶段洗脱液流动过程路径是：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

4)二级分离柱C22色谱柱进样：二级分离柱C21色谱柱分离完成之后，重复1)步骤的洗脱液流动路径。一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液到一级分离柱C1色谱柱分离进行分离，同时二位六通电磁阀BV-6控制洗脱液的一段馏分F2，该馏分F2用洗脱时间T2控制，使F2进入到二级分离柱C22色谱柱分离，待分离。该过程与一级分离柱C1色谱柱分离同时进行。从一级分离柱C1色谱柱分离T1时间后，馏分F2通过二位六通电磁阀BV-6控制，进入到二级分离柱C22色谱柱待分离，形成二级分离柱C22上样。

该进样阶段洗脱液流动过程路径是：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出。

5)二级分离柱C22色谱柱分离：当设定一级分离柱C1色谱柱分离馏分F2完全进入二级分离柱C22上后，可以控制一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液绕过一级分离柱C1色谱柱，直接到进入二位六通电磁阀BV-6控制，洗脱液进入二级分离柱C21色谱柱进行分离；洗脱液分离馏分进入检测器，由检测器按不同控制方法，得到单一化合物吸收峰的馏分，完成二级分离柱C22色谱柱分离。该分离过程是对一级分离柱C1得到的分离馏分F1的完全分离，可以收集到分离纯化的各种化合物单体。

该分离阶段洗脱液流动过程路径是：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

进一步进行二级分离柱C23色谱柱分离，控制操作过程与4)，5)二个步骤一致，即：

6)二级分离柱C23色谱柱进样：二级分离柱C22色谱柱分离完成之后，重复1)步骤的洗脱液流动路径。一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液到一级分离柱C1色谱柱分离进行分离，同时二位六通电磁阀BV-6控制洗脱液的一段馏分F3，该馏分F3用洗脱时间T3控制，使F3进入到二级分离柱C22色谱柱分离，待分离。该过程与一级分离柱C1色谱柱分离同时进行。从一级分离柱C1色谱柱分离T3时间后，馏分F3通过二位六通电磁阀BV-6控制，进入到二级分离柱C23色谱柱待分离，形成二级分离柱C23上样。

7)二级分离柱C23色谱柱分离：当设定一级分离柱C1色谱柱分离馏分F3完全进入二级分离柱C23上后，可以控制一定比例的洗脱液将试验样品洗脱，此时二位三通电磁阀BV-3控制洗脱液绕过一级分离柱C1色谱柱，直接到进入二位六通电磁阀BV-6控制，洗脱液进入二级分离柱C21色谱柱进行分离；洗脱液分离馏分进入检测器，由检测器按不同控制方法，得到单一化合物吸收峰的馏分，完成二级分离柱C22色谱柱分离。该分离过程是对一级分离柱C1得到的分离馏分F1的完全分离，可以收集到分离纯化的各种化合物单体。

该分离阶段洗脱液流动过程路径是：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C23→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

实现复杂组分的试验样品的化合物单体结构完全分离。本发明也涉及二级分离柱C2n色谱柱进样，洗脱液流动过程是：预柱PC→二位三通电磁阀BV-3→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C2n→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出。即二位三通电磁阀BV-3和预柱PC位置互换的状况(如图2所示)。

如果起始试验样品的组分组成十分复杂，本发明方法中二级分离柱C21-C23色谱柱分离还不能完全分离，就可以控制一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1-F3的时间，得到更多的分离馏分F1-Fn，串接更多的分离柱，即可以扩展到C2n分离柱。当然如果要得到很好的分离效果，应该考虑一级分离柱C1色谱柱分离划分馏分F1-Fn的效果，在进行各种试验样品预处理之后，再考虑用本方法分离，会取得事半功倍的结果。

本发明上述方法可概括如下：作为串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(图1)，连续利用一级色谱分离柱分离馏分F1-Fn，进样二级色谱分离柱一组C21，C22，C23...C2n，分离纯化化合物单体；形成一级色谱分离柱与二级色谱分离柱组串联，而二级色谱分离柱组间并联形式，独立分离纯化化合物单体。该仪器装置主要包括：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；C1一级色谱分离柱；C21二级色谱分离柱1；C22二级色谱分离柱2；C23二级色谱分离柱3；C2n二级色谱分离柱n；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪等组合而成。而关键技术是BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀的程序控制，由色谱工作站完成。

上述一级色谱分离柱和二级色谱分离柱在具体实施中，可以有各种选择：

1)柱色谱管材料：玻璃管、有机玻璃管、不锈钢管、聚四氟乙烯管、钛合金管等材料制成；一般情况，一级色谱分离柱和二级色谱分离柱采用相同的材料。

2)柱色谱分离填料：各种正向硅胶、C18、RP2-18、氨基硅胶、硝基硅胶、醇基硅胶，各种葡聚糖凝胶、聚乙烯、聚苯乙烯的衍生物树脂等等。

3)分离色谱柱适用压力：低压、中压、高压。

4)一级色谱分离柱和二级色谱分离柱规格大小可以相同，可以不同。

5)一级色谱分离柱C1在洗脱馏分F1，F2，F3过程中，洗脱液的组成比例可以相同，也可以不同；二级色谱分离柱C21，C22，C23在分离纯化化合物单体过程中，洗脱液的组成比例可以相同，也可以不同。例如可采用甲醇、氯仿、乙腈、乙酸乙酯、水等等，比例可从0-100％，根据分离对象来调整和控制洗脱液的组成和比例。

6)分离纯化得到的化合物单体主要根据检测器和馏分收集仪器，与色铺工作站的通讯协议以设定控制程序，由色谱工作站完成实现。

实施例2：

本实施例中一级色谱分离柱C1，二级色谱分离柱C21，二级色谱分离柱C22，二级色谱分离柱C23采用不锈钢制的预装柱分离制备柱；分离填料采用：1)四支装柱分离制备柱全用一种材料；2)根据分离化合物对象，四支装柱分离制备柱用不同材料；需要有前期分离条件的详细研究。并用与一、二级分离色谱柱相匹配的：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪等仪器组件，根据所附示意图1组合而成一套串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(PAI)。在根据上述：1.上样；2.分离：1)-7)条的详细描述，进行制备化合物单体的分离纯化操作，得到目标化合物，实现试验样品的分离制备。本实施实例中采用的是高压液相色谱分离模式。

实施例3：

本实施例中一级色谱分离柱C1，二级色谱分离柱C21，二级色谱分离柱C22，二级色谱分离柱C23采用玻璃制的装柱分离制备柱；分离填料采用：1)四支装柱分离制备柱全用一种材料；2)根据分离化合物对象，四支装柱分离制备柱用不同材料；需要有前期分离条件的详细研究。并用与一、二级分离色谱柱相匹配的：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪等仪器组件，根据所附示意图1组合而成一套串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(PAI)。在根据上述：1.上样；2.分离：1)-7)条的详细描述，进行制备化合物单体的分离纯化操作，得到目标化合物，实现试验样品的分离制备。本实施实例中采用的是中压液相色谱分离模式。

实施例4：

本实施例中一级色谱分离柱C1，二级色谱分离柱C21，二级色谱分离柱C22，采用玻璃制的装柱分离制备柱；分离填料采用：1)三支装柱分离制备柱全用一种材料；2)根据分离化合物对象，三支装柱分离制备柱用不同材料；需要有前期分离条件的详细研究。并用与一、二级分离色谱柱相匹配的：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪等仪器组件，根据所附示意图1组合而成一套串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器装置(PAI)。在根据上述：1.上样；2.分离：1)-7)条的详细描述类似，进行制备化合物单体的分离纯化操作，得到目标化合物，实现试验样品的分离制备。但本实施实例中，与实施实例1，实施实例2不同的是：一级色谱分离柱C1分量得到的不同极性馏分，极性小的馏分比如F1，F2，F3，均用二级色谱分离柱C21依次分离；一级色谱分离柱C1分量得到极性较大的馏分比如F4，F5，F6，均用二级色谱分离柱C22依次分离；这样既扩展了二级色谱分离柱可以虚拟达到C21-C26，节省了二级色谱分离柱，采用不同特性的填料，易于达到分离纯化化合物单体的目的。本实施实例中采用的是中压液相色谱分离模式。

本发明最为适用的领域为中药化学成分或天然药用资源中同类成分的分离纯化制备，如在一个药用植物的提取物，或萜类提取物中，总还会混有黄酮、二萜、三萜、甾体、生物碱、木脂素等各种类型，通过本发明PAI装置分离，一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1-Fn，首先可以把不同类型的化合物分离成不同的化合物组分馏分，此馏分划段优于溶剂划分；二级分离柱C21-C23色谱柱分离从一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1-Fn，使结构更加类似化合物组成馏分段F1-Fn，分离纯化同类结构的化合物单体，更加高效精准。而同一组分馏分段如三萜组分段F3，则可以利用化合物的酸碱性等物理性质差异，在二级分离柱C21-C23色谱柱上采用针对分离不同性质化合物的填料担体，可以使整体分离纯化得到优化。这也是本发明PAI装置的一大优势。

本发明是一个多级分离色谱柱串联分离，对复杂的化合物混合体系，特别应用于药用植物或中药化学成分中构成复杂种类繁多的混合体系，分离单体化合物结构，本发明通用性强，简便可行，大量节省复杂体系分离操作时间、节省大量溶剂损耗，具有重大应用价值和推广意义。

Claims

1.含串联制备色谱柱的分离制备色谱仪器，主要部件包括：BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀；C1一级色谱分离柱；C21二级色谱分离柱1；C22二级色谱分离柱2；C23二级色谱分离柱3；C2n二级色谱分离柱n；MI手动进样器；PC预柱；PA，PB输液泵；检测器，馏分收集仪；连续利用一级色谱分离柱C1分离馏分F1-Fn，分别进样二级色谱分离柱一组C21，C22，C23...C2n，分离纯化化合物单体；形成一级色谱分离柱与二级色谱分离柱组串联，而二级色谱分离柱组间并联形式，独立分离纯化化合物单体；BV-3二位三通电磁阀；BV-6二位六通电磁阀；BV-4二位四通电磁阀由色谱工作站控制程序。

2.根据权利要求1所述的分离制备色谱仪器，其二位三通电磁阀BV-3和预柱PC先后位置能互换。

3.根据权利要求1所述的分离制备色谱仪器，采用三支分离柱：一级色谱分离柱C1，二级色谱分离柱C21，C22：一级色谱分离柱C1分量得到的不同极性馏分，极性小的馏分比如F1，F2，F3，均用二级色谱分离柱C21依次分离；一级色谱分离柱C1分量得到极性较大的馏分比如F4，F5，F6，均用二级色谱分离柱C22依次分离。

4.根据权利要求1所述的分离制备色谱仪器，其一级色谱分离柱和二级色谱分离柱中柱色谱管材料采用玻璃管或有机玻璃管或不锈钢管或聚四氟乙烯管或钛合金管；一级色谱分离柱和二级色谱分离柱采用相同的材料，规格大小相同或不同；柱色谱分离填料采用各种正向硅胶、C18、RP2-18、氨基硅胶、硝基硅胶、醇基硅胶，各种葡聚糖凝胶、聚乙烯、聚苯乙烯的衍生物树脂；分离色谱柱压力采用低压或中压或高压。

5.根据权利要求1所述的分离制备色谱仪器，一级色谱分离柱C1在洗脱馏分F1，F2，F3过程中，洗脱液的组成比例相同或不同；二级色谱分离柱C21，C22，C23在分离纯化化合物单体过程中，洗脱液的组成比例相同或不同，采用甲醇或/和氯仿或/和乙腈或/和乙酸乙酯或/和水，比例从0-100％，根据分离对象来调整和控制洗脱液的组成和比例。

6.根据权利要求1-5所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C21进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F1：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C21柱馏分F1进样过程。2)二级分离柱C21色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C21→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

7.根据权利要求1-5所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C22进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F2：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C22柱馏分F2进样过程。2)二级分离柱C22色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

8.根据权利要求1-5所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C23进样和分离过程中洗脱液流动过程为：1)一级分离柱C1色谱柱分离馏分F3：二位三通电磁阀BV-3→预柱PC→一级分离柱C1→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C22→二位四通电磁阀BV-4→检测器→废液流出；为C23柱馏分F3进样过程。2)二级分离柱C23色谱柱分离：二位三通电磁阀BV-3→二位六通电磁阀BV-6→二级分离柱C23→二位四通电磁阀BV-4→检测器→馏分收集化合物单体。

9.根据权利要求6-8所述的分离制备色谱仪器，其二级色谱分离柱C22-C23进样和分离过程中洗脱液流动过程类似，能扩展到二级色谱分离柱C2n。