CN102000079B - 尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂的应用。该尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂可有效预防或治疗血小板功能亢进、血液高凝状态或血栓，疗效好、副作用小、安全性高，对凝血亢进类疾病的医治具有重大意义。

Description

尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂的应用
技术领域
本发明涉及尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂的应用。 
背景技术
凝血系统有促凝和抗凝两个子系统，两个子系统的任何一方减弱或增强均会使凝血系统失去平衡。血液高凝状态是指血液凝固性增高易形成血栓的状态，英文称为“hypercoagulable state”。存在血液高凝状态的病人在临床上虽然没有心、脑血管的梗死症状，但有随时发生血栓栓塞的危险，属于严重的潜在危险。血液高凝状态还有一些同义词，如血液高凝状态、血栓素质、血栓前期、血栓前状态。它与多种疾病的发生发展均有着重要关系，如深静脉血栓，动脉粥样硬化等等。目前，肝素是临床上最主要用于对抗血液高凝状态的药物，但其使用很容易导致血液凝聚功能的完全丧失，导致病人危险。除此之外，阿司匹林也是常见的抗血小板药物，临床上广为应用。 
尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶(英文名Nicotinamide phosphoribosyltransferase，Nampt，式I)是体内存在的一种酶，调控体内重要辅酶NAD+合成，并且是限速酶。目前，对于尼克酰胺单核苷磷酸核糖转移酶的研究较少，在凝血系统，没有查询到这种酶在凝血相关过程中的任何作用的报道。在治疗血液高凝状态类疾病的领域中，亦没有任何相关文献。 
发明内容
本发明所要解决的技术问题是为提供疗效好、副作用小的预防或治疗血小板功能亢进、血液高凝状态或血栓的药物或保健品，而公开了尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂的应用。 
本发明涉及尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血小板功能亢进的药物或保健品中的应用。 
本发明还涉及尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血液高凝状态的药物或保健品中的应用。 
本发明还涉及尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血栓的药物或保健品中的应用。 
本发明中，术语“血液高凝状态”是指原发性或获得性的血液凝固性增高易形成血栓的状态，英文称为“hypercoagulable state”；在此状态下，血小板功能亢进。血液高凝状态的意义在于它易诱发血栓栓塞性疾病，例如冠心病时，可在冠状动脉粥样硬化的基础上进一步促进血栓形成。 
本发明中，所述的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶，英文名Nicotinamide phosphoribosyltra nsferase(Nampt)，是人体内存在的一种蛋白质，调控着体内一种重要辅酶NAD+合成。 
其中，所述的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂较佳的为FK866。所述的FK866市售可得，CAS号为201034-75-5，英文名为(E)-N-[4-(1-benzoylpiperidine-4-yl)butyl]-3-(pyridin-3-yl)acrylamide分子式为C24H29N3O2，结构式如式II所示。 
Figure BSA00000294934300021
本发明经过试验，结果表明：利用特异性的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖 转移酶抑制剂抑制了尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶后，富含血小板的血浆的凝结功能显著下降。 
本发明所用试剂和原料均市售可得。 
在符合本领域常识的基础上，本发明中上述的各技术特征优选条件可以任意组合得到较佳实例。 
本发明的积极进步效果在于：本发明的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂可有效预防或治疗血小板功能亢进、血液高凝状态或血栓，疗效好、副作用小，对血液高凝状态类疾病的医治具有重大意义。 
附图说明
图1为血小板上表达尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶一抗和荧光二抗近红外激光扫描图。 
图2为尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂不同浓度对血小板凝聚影响关系图。 
图3为尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶的示意图。 
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。 
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件进行。 
下述实施例除特别说明之外，所用的百分比都是质量百分比。 
实施例1尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶在血小板上的表达 
为证明尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶可调控血小板功能，必先证明在血小板上存在此种酶。使用蛋白质斑点杂交技术，验证尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶在血小板上是否有表达。 
具体操作过程如下：将混匀的抗凝血(含有枸橼酸钠)在25℃～32℃ 温度下离心，转速为500～800rpm，时间原则上控制在10分钟，待离心机自然停止后取出(如出现溶血现象应重新采血)，取离心出的上层富血小板血浆(PRP)，继续将PRP离心(1200×g，10min)，得血小板；然后用含EGTA 0.2mmol/L的无Ca2+台式液洗两次，再用含0.35％牛血清蛋白台式液悬浮；随后，使用Western细胞裂解液(碧云天公司产品)提取蛋白，采用BCA(碧云天公司产品)蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，由此调节蛋白浓度一致； 
取等量蛋白样品，用5×SDS加样缓冲液按1∶1(体积比)稀释待测样品，于90℃煮沸5min；1×SDS加样缓冲液溶解预染标准蛋白质混合物，100℃煮沸3min；取15μL上样，SDS-PAGE电泳；用湿转法将蛋白条带电转至硝酸纤维素膜(美国Millipore，孔径0.22μm)上，5％脱脂奶粉封闭后分别孵育尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶的一抗和荧光二抗； 
最后，使用美国Odyssey公司的近红外激光扫描仪对之进行扫描；结果可见图1。 
结果发现，在血小板上，可以非常清晰的看到：尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶有表达，因此可以证明尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶对血小板的功能影响。 
实施例2尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂抑制了尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶的活性后，富含血小板的血浆凝聚降低 
首先分离富含血小板的血浆，过程基本同实施例1。然后加入不同的浓度的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂FK866(化合物CAS号201034-75-5，由瑞士Apoxis公司获得)，分别为低(50nM)、中(100nM)、高(500nM)三个浓度，孵育30分钟。溶剂对照给予DMSO(二甲亚砜)。加入5M的ADP，促使血小板凝聚。每组重复8次。 
结果如表1和图2所示，结果表明，一旦尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶被抑制，血小板的凝结功能大为降低；由此表明，尼克酰胺单核苷酸磷 酸核糖转移酶抑制剂具有抗血液高凝状态的作用。 
表1尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂可对抗凝血 
Figure BSA00000294934300051
*表示给药组和溶剂对照组相比较，有统计学差异(P＜0.01) 
**表示给药组和溶剂对照组相比较，有显著的统计学差异(P＜0.01) 

Claims (3)

1.尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血小板凝聚的药物或保健品中的应用；所述的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂为如式II所示的化合物FK866；
Figure FSB00000731704900011
式II。
2.尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血液高凝状态的药物或保健品中的应用；所述的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂为如式II所示的化合物FK866；
Figure FSB00000731704900012
式II。
3.尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂在制备预防或治疗血栓的药物或保健品中的应用；所述的尼克酰胺单核苷酸磷酸核糖转移酶抑制剂为如式II所示的化合物FK866；
Figure FSB00000731704900013
式II。
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