CN101993281A - 用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 - Google Patents
用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101993281A CN101993281A CN2009101665586A CN200910166558A CN101993281A CN 101993281 A CN101993281 A CN 101993281A CN 2009101665586 A CN2009101665586 A CN 2009101665586A CN 200910166558 A CN200910166558 A CN 200910166558A CN 101993281 A CN101993281 A CN 101993281A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- ganoderma
- culture medium
- extracting solution
- substratum
- sodium phosphate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了一种用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基、用该培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法以及利用该培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法。所述培养基的配方为:黄豆饼粉2.0~3.0%、麸皮粉1.0~2.0%、蔗糖3.0~5.0%、硫酸铵0.04~0.06%、硫酸镁0.05~0.1%、磷酸二氢钠0.1~0.2%、磷酸氢二钠0.2~0.4%、豆油0.4~0.6%、维生素B20.00005~0.0002%、赖氨酸0.0001~0.0003%、甘氨酸0.0002~0.0004%,其余为水。
Description
技术领域
本发明涉及生物和化工技术领域。更具体地说,涉及一种用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基、用该培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法以及利用该培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法。
背景技术
薄芝糖肽注射液系用GCL菌株,经液体发酵培养制得薄树芝干燥菌丝体,菌丝体经提取、纯化、稀配、过滤、灌封而制得的灭菌水溶液。
本品具有调节机体免疫功能的作用,对机体非特异性免疫、体液免疫及细胞免疫等有促进作用;具有抗氧化作用,清除氧自由基,还有促进核酸、蛋白质生物合成作用。临床使用静脉注射或肌肉注射治疗进行性肌营养不良、萎缩性肌强直及前庭功能障碍、高血压等引起的眩晕和植物神经功能紊乱、癫痫、失眠等症,亦可用于肿瘤、肝炎的辅助治疗。
多糖、多肽是薄芝糖肽注射液的主要有效成分,现行国家药品标准中,薄芝糖肽注射液的规格为2ml中含多糖5mg,含多肽1mg,产品中多糖多肽的含量不得低于标示量的90%。
当前工业化规模生产中,单位发酵液中多糖多肽的得量不高,每毫升发酵液平均得多糖0.5毫克,得多肽0.1毫克。
在薄芝糖肽注射液质量标准中,可见异物和热原是两个重要检查项目,因本品是经发酵制备的产品,如生产条件控制不当,很易造成上述两项达不到标准要求,从而降低成品收率。
如何提高单位发酵液中多糖多肽的得量,以及如何改进稀配、灌装工艺,使可见异物、热原两项质量指标稳定合格,对提高薄芝糖肽注射液的技术水平、提高产品质量、降低生产成本方面具有重要意义。
发明内容
因此,本发明的一个目的是提供一种适合灵芝属薄树芝菌生长、代谢的发酵培养基配方。
该培养基的配方为:黄豆饼粉2.0~3.0%、麸皮粉1.0~2.0%、蔗糖3.0~5.0%、硫酸铵0.04~0.06%、硫酸镁0.05~0.1%、磷酸二氢钠0.1~0.2%、磷酸氢二钠0.2~0.4%、豆油0.4~0.6%、维生素B2 0.00005~0.0002%、赖氨酸0.0001~0.0003%、甘氨酸0.0002~0.0004%,其余为水。
上述培养基的配方优选:黄豆饼粉2.5%、麸皮粉1.5%、蔗糖4.0%、硫酸铵0.05%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钠0.15%、磷酸氢二钠0.3%、豆油0.5%、维生素B2 0.0001%、赖氨酸0.0002%、甘氨酸0.0003%,其余为水。
本发明的另一个目的是提供一种用上述培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法。
本发明的再一个目的是提供一种利用上述培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法。
上述薄芝糖肽注射液的制备方法,包括下列步骤:
a)将灵芝属薄树芝菌株置上述培养基中发酵培养,得菌丝体;
b)将所得菌丝体用醇溶剂进行提取,静置,得薄芝糖肽提取液;
c)将上述提取液进行稀配、灌封、灭菌,得薄芝糖肽注射液;
其中,步骤b)中所述的醇为乙醇、丙醇、1,2-丙二醇中的一种或几种,优选乙醇,更优选75%~95%的乙醇水溶液,最优选85%的乙醇水溶液;
考虑到薄芝糖肽注射液为经发酵得到,为去除产品中蛋白质、鞣质等杂质,故提取液在稀配前,增加了步骤b)中的低温静置过程;具体说,步骤b)中静置的温度为0~15℃,优选2℃;静置的时间为6~16小时,优选10小时;
此外,在注射液稀配过滤灌装过程中,控制药液在较低温度范围内,以防止微生物污染;具体说,步骤c)中对提取液进行稀配、过滤、灌封的过程中,将提取液温度控制在0~20℃,优选控制在4~6℃;
另外,薄芝糖肽注射液属最终灭菌的小容量注射剂,按GMP(药品生产质量管理规范)要求,最终灭菌的小容量注射剂的稀配、过滤和灌封应在10000级空气洁净条件下进行。本发明考虑到产品的特点,为了进一步提高产品的质量,提高了对制造环境的洁净度要求。即,步骤c)中提取液进行稀配、过滤、灌封的过程在10000级背景下局部100级的空气洁净度条件下进行。
采用本发明的培养基培养的灵芝属薄树芝菌菌丝粗壮,单位发酵液中多糖、多肽的产量显著提高,平均每毫升发酵液可得多糖0.8毫克,可得多肽0.14毫克。利用该培养基培养的薄树芝菌制备的薄芝糖肽注射液,其产品质量得到明显提高。其中,可见异物、热原两检查项目符合要求,一次成品合格率达98%以上。
附图说明
图1是本发明的薄芝糖肽注射液工业化规模的生产工艺流程图。
具体实施方式
为了更加清楚地对本发明进行说明,以下通过具体实施例对本发明的具体实施方式进行详细说明。但是应该理解,以下所述具体实施例仅用于对本发明进行示例性地说明,而非用于对本发明进行任何性质的限定,其中所用材料、试剂等仅为代表性的,其并不限于所列举的情况。所属技术领域的技术人员通过阅读以下说明可以对本发明做出不脱离本发明权利要求所限定的保护范围的改动和改进,这些改动和改进也处于本发明所要求保护的范围内。
本发明的生产工艺流程如图1所示。下面是对流程图中所提到的材料和步骤的详细说明。
1.菌种灵芝属薄树芝[Ganoderma Capense(Llogd)Teng]
2.斜面菌种的制备
培养基:蔗糖2%、磷酸二氢钠0.3%、硫酸镁0.15%、琼脂2%、麸皮5%,25℃恒温培养5~6天,待白色菌丝布满斜面,4℃保存。
3.一级种子瓶制备
培养基:蔗糖2%、磷酸二氢钠0.3%、硫酸镁0.15%、琼脂2%、麸皮5%和维生素B20.0001%。接入斜面菌种,26~28℃摇床培养72~96小时,至菌液浅黄棕色,澄清,菌球多刺,直径3毫米左右。
4.二级种子瓶制备
培养基:蔗糖2%、磷酸二氢钠0.3%、硫酸镁0.15%、琼脂2%、麸皮5%和维生素B2 0.0001%。
接入一级种子瓶液,种量8%,26~28℃培养72~96小时,至菌液浅黄棕色,澄清,菌球多刺,直径3~5毫米。
5.种子罐培养
培养基配比:黄豆饼粉2.0~3.0%、麸皮粉1.0~2.0%、蔗糖3.0~5.0%、硫酸铵0.04~0.06%、硫酸镁0.05~0.1%、磷酸二氢钠0.1~0.2%、磷酸氢二钠0.2~0.4%、豆油0.4~0.6%、维生素B2 0.00005~0.0002%、赖氨酸0.0001~0.0003%、甘氨酸0.0002~0.0004%,其余为水。
最佳培养基配比为:黄豆饼粉2.5%、麸皮粉1.5%、蔗糖4.0%、硫酸铵0.05%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钠0.15%、磷酸氢二钠0.3%、豆油0.5%、维生素B2 0.0001%、赖氨酸0.0002%、甘氨酸0.0003%,其余为水。
实罐灭菌,罐压0.1Mpa 122℃灭菌30分钟,保压0.1Mpa,降温至培养温度,接入二级种瓶液,培养条件:温度26~28℃,罐压0.05Mpa,空气流量:0~16小时时10~15立方米/时;16小时~放罐20立方米/时。
6.发酵罐培养
培养基配比:黄豆饼粉2.0~3.0%、麸皮粉1.0~2.0%、蔗糖3.0~5.0%、硫酸铵0.04~0.06%、硫酸镁0.05~0.1%、磷酸二氢钠0.1~0.2%、磷酸氢二钠0.2~0.4%、豆油0.4~0.6%、维生素B2 0.00005~0.0002%、赖氨酸0.0001~0.0003%、甘氨酸0.0002~0.0004%,其余为水。
最佳培养基配比为:黄豆饼粉2.5%、麸皮粉1.5%、蔗糖4.0%、硫酸铵0.05%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钠0.15%、磷酸氢二钠0.3%、豆油0.5%、维生素B2 0.0001%、赖氨酸0.0002%、甘氨酸0.0003%,其余为水。
实罐灭菌,罐压0.1Mpa,122℃灭菌30分钟,保压0.1Mpa,降温至培养温度,利用压差将种子罐种子压入发酵罐。
培养条件:温度26~28℃,罐压0.05Mpa,空气流量:0~16小时5~20立方米/时,16小时~放罐25立方米/时,培养时间66~78小时。
放罐条件:菌丝内充满液泡,分枝分节部分断裂,溶液浅黄棕色,发酵液开始变稀。
7.发酵液及菌丝体处理
放罐发酵液以离心机脱水,所得潮菌丝体于70~80℃干燥,至水份≤5%,得干菌丝体。
8.菌丝体提取
菌丝体以75~95%乙醇或丙醇提取,过滤,得提取液。
最佳提取工艺为:干菌丝体加85%乙醇,回流提取2次,加活性炭,搅拌过滤,滤液减压赶醇,加注射用水,于2℃静置10小时,过滤,得提取液。
9.提取液静置
提取液在0~15℃静置6~16小时。
最佳提取液静置条件为:提取液稀配前2℃静置10小时。
10.稀配
控制药液温度0~20℃进行稀配。
最佳稀配工艺为:操作在10000级背景下局部100级中进行,控制药液温度4~6℃,以5%碳酸氢钠液调节提取液,pH值为5.8~6.5,加注射用水,使溶液中多糖含量为2.5~10毫克/毫升,多肽含量为0.5~2毫克/毫升,经0.45毫微米和0.22毫微米滤器过滤,在2000~3000Lx照度下灯检,药液应为浅黄棕色溶液,澄明,无可见异物。
11.灌封
控制药液温度0~20℃进行灌封。
最佳灌封工艺为:操作在10000级背景下局部100级中进行,控制药液温度4~6℃。
将灯检合格的药液按规定装量灌注至洁净安瓿中,封口。
12.灭菌
在121℃流通蒸气下灭菌30分钟。
Claims (10)
1.一种用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基,其特征在于,该培养基的配方为:黄豆饼粉2.0~3.0%、麸皮粉1.0~2.0%、蔗糖3.0~5.0%、硫酸铵0.04~0.06%、硫酸镁0.05~0.1%、磷酸二氢钠0.1~0.2%、磷酸氢二钠0.2~0.4%、豆油0.4~0.6%、维生素B2 0.00005~0.0002%、赖氨酸0.0001~0.0003%、甘氨酸0.0002~0.0004%,其余为水。
2.如权利要求1所述的培养基,其特征在于,该培养基的配方为:黄豆饼粉2.5%、麸皮粉1.5%、蔗糖4.0%、硫酸铵0.05%、硫酸镁0.075%、磷酸二氢钠0.15%、磷酸氢二钠0.3%、豆油0.5%、维生素B2 0.0001%、赖氨酸0.0002%、甘氨酸0.0003%,其余为水。
3.用权利要求1或2所述的培养基培养灵芝属薄树芝菌的方法。
4.一种利用权利要求1或2所述的培养基培养的薄树芝菌来制备薄芝糖肽注射液的方法,包括下列步骤:
a)将灵芝属薄树芝菌株置所述培养基中发酵培养,得菌丝体;
b)将所得菌丝体用醇液进行提取,静置,得薄芝糖肽提取液;
c)将上述提取液进行稀配、灌封、灭菌,得薄芝糖肽注射液。
5.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤b)中所述的醇液为乙醇、丙醇、1,2-丙二醇中的一种或几种。
6.如权利要求4或5所述的方法,其特征在于,步骤b)中所述的醇液为75%~95%的乙醇水溶液。
7.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤b)中静置的温度为0~15℃,静置的时间为6~16小时。
8.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤c)中对提取液进行稀配、过滤、灌封的过程中,将提取液温度控制在0~20℃。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,步骤c)中对提取液进行稀配、过滤、灌封的过程中,将提取液温度控制在4~6℃。
10.如权利要求4所述的方法,其特征在于,步骤c)中提取液进行稀配、过滤、灌封的过程在10000级背景下局部100级的空气洁净度条件下进行。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200910166558 CN101993281B (zh) | 2009-08-26 | 2009-08-26 | 用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN 200910166558 CN101993281B (zh) | 2009-08-26 | 2009-08-26 | 用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101993281A true CN101993281A (zh) | 2011-03-30 |
CN101993281B CN101993281B (zh) | 2013-03-06 |
Family
ID=43784106
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN 200910166558 Active CN101993281B (zh) | 2009-08-26 | 2009-08-26 | 用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101993281B (zh) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103933081A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-23 | 浙江瑞新药业股份有限公司 | 一种薄盖灵芝药品的制备方法 |
CN105483180A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-04-13 | 天津泰创生物科技有限公司 | 一种提高薄芝多糖产量的方法 |
CN105733956A (zh) * | 2016-02-18 | 2016-07-06 | 天津泰创生物科技有限公司 | 薄芝糖肽生产菌及其应用 |
CN106967619A (zh) * | 2017-04-25 | 2017-07-21 | 井冈山市益生缘灵芝生态园有限公司 | 一种灵芝培养基及灵芝菌丝体的制备方法 |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104894297A (zh) * | 2015-05-12 | 2015-09-09 | 苏州葛家坞生物科技有限公司 | 一种提高灵芝多糖产量的控温液体培养方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1118005A (zh) * | 1994-05-11 | 1996-03-06 | 北京天河生物研究所 | 新型灵芝营养液及其制备方法 |
CN1651568A (zh) * | 2004-02-03 | 2005-08-10 | 李勇 | 一种食用菌液体菌种深层发酵工艺 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1273004C (zh) * | 2003-10-21 | 2006-09-06 | 中国科学院植物研究所 | 一种生产猴头菇的方法及其专用培养基 |
-
2009
- 2009-08-26 CN CN 200910166558 patent/CN101993281B/zh active Active
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1118005A (zh) * | 1994-05-11 | 1996-03-06 | 北京天河生物研究所 | 新型灵芝营养液及其制备方法 |
CN1651568A (zh) * | 2004-02-03 | 2005-08-10 | 李勇 | 一种食用菌液体菌种深层发酵工艺 |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103933081A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-23 | 浙江瑞新药业股份有限公司 | 一种薄盖灵芝药品的制备方法 |
CN105483180A (zh) * | 2016-01-14 | 2016-04-13 | 天津泰创生物科技有限公司 | 一种提高薄芝多糖产量的方法 |
CN105483180B (zh) * | 2016-01-14 | 2020-01-10 | 天津泰创生物科技有限公司 | 一种提高薄芝多糖产量的方法 |
CN105733956A (zh) * | 2016-02-18 | 2016-07-06 | 天津泰创生物科技有限公司 | 薄芝糖肽生产菌及其应用 |
CN105733956B (zh) * | 2016-02-18 | 2018-10-26 | 天津泰创生物科技有限公司 | 薄芝糖肽生产菌及其应用 |
CN106967619A (zh) * | 2017-04-25 | 2017-07-21 | 井冈山市益生缘灵芝生态园有限公司 | 一种灵芝培养基及灵芝菌丝体的制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101993281B (zh) | 2013-03-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101993281B (zh) | 用于制备薄芝糖肽注射液的灵芝属薄树芝菌的培养基 | |
CN101372701B (zh) | 一种金针菇多糖的制备方法 | |
CN1986822A (zh) | 用寇氏隐甲藻发酵生产二十二碳六烯酸油脂的方法 | |
CN102242165A (zh) | 一种发酵生产高分子量透明质酸钠的方法及其所用的培养基 | |
CN1896263A (zh) | 一种从产聚唾液酸大肠杆菌发酵液中提取聚唾液酸的方法 | |
WO2020134688A1 (zh) | 一种发酵猴头菌制备高纯度猴头菌多糖的方法和发酵培养基 | |
CN102154168A (zh) | 一种阿维菌素产生菌及其制备方法 | |
CN101173221A (zh) | 小麦栽培北虫草的方法 | |
CN101633900A (zh) | 产大环糊精4-α-糖基转移酶的制备方法 | |
CN101838626B (zh) | 巴尔通氏体固液双相斜面培养基及其制备及应用方法 | |
CN107177515A (zh) | 一种灵芝固体菌种及其在灵芝液体深层发酵上的应用 | |
CN102485902B (zh) | 一种发酵生产达托霉素的方法 | |
CN1751694A (zh) | 一种灰树花口服液及其生产方法 | |
CN106754401A (zh) | 一种中国被毛孢菌的生产方法 | |
CN1689452A (zh) | 冬虫夏草滋补汤及其生产方法 | |
CN106035985A (zh) | 一种混菌液态发酵黄酒加工废弃物生产单细胞蛋白的方法 | |
CN105476001A (zh) | 一种提高免疫力的蛹虫草葡萄酵素的制作方法 | |
CN110564805B (zh) | 一种兔血抗氧化肽的发酵制备方法 | |
RU2707541C2 (ru) | Способ получения иммобилизованного мицелия базидиомицета fomitopsis officinalis | |
CN101974500A (zh) | 高纯中温α-淀粉酶的生产方法 | |
CN106676087B (zh) | 一种脯氨酸内切酶的制备方法 | |
CN111926049A (zh) | 大豆粕抗菌肽及其制备方法和用途 | |
CN108707555A (zh) | 高产富含莫纳可林k的红曲霉菌株及其应用 | |
CN109852652A (zh) | 重组尘螨Ⅰ型变应原Der p1和Der f1蛋白的制备与应用 | |
CN115232752B (zh) | 一种用于制备云芝菌丝体的深层液态发酵法及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: No.9, Jiankang 2nd Road, biological health industrial park, Yangzhou City, Jiangsu Province, 225000 Patentee after: YANGZHOU PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee after: JIANGSU LIANHUAN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Address before: 225009 No.7, Wenfeng South Road, Yangzhou City, Jiangsu Province Patentee before: YANGZHOU PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. Patentee before: JIANGSU LIANHUAN PHARMACEUTICAL Co.,Ltd. |
|
CP02 | Change in the address of a patent holder |