CN101991744A - 一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药灌注剂 - Google Patents
一种治疗奶牛子宫内膜炎的中药灌注剂 Download PDFInfo
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Abstract
本发明目的是提供一种制备防治奶牛子宫内膜炎的中药灌注剂,以筛选有效的抗病毒中药。本发明的技术方案是:将十三中中药组方,然后提取、浓缩、过滤、离心、助溶、附加剂处理、调节pH值、混合、灭菌、灌封得到成品,应用于防治奶牛子宫内膜炎。本发明提取的中药稳定性好,抗菌效果明显增强,获得了良好的应用效果。
Description
技术领域
本发明涉及中兽药制剂领域,具体涉及一种中药灌注剂的制备。
背景技术
奶牛子宫内膜炎是奶牛养殖业中的常发病,传统的治疗方法是抗生素疗法,但经常出现药物残留、耐药菌株等现象,导致食品安全问题。研究表明中草药对治疗子宫内膜炎有着残留低、刺激性小,效果好的优点。
目前,使用的中兽药剂型有散剂、汤剂、子宫灌注剂等。散剂一般采用拌料和饮水方式服药,药物经过消化道酶的作用,很多药物很难达到应有的药效,还有适口性问题会导致动物饮食下降。汤剂主要采用灌服,除了和散剂一样的缺点外,灌服给动物造成的应激也是汤剂使用受限的一个方面。子宫灌注剂直接针对病灶用药,药前对受试牛进行直肠适度按摩,促使子宫收缩,排出子宫内容物,待子宫无内容物排出后再灌注药物。本发明的灌注剂是纯中草药提取溶液,用于取代抗生素治疗奶牛乳房炎,不会在牛奶中残留,用药期间无停药期,无需弃奶。
发明内容
针对现有技术的缺陷,本发明通过筛选有效的抗病毒中药组方,制备了一种用于治疗奶牛子宫内膜炎中药灌注剂。
本发明中的一种中药灌注剂,原料配方为:
益母草48-52份,川芎18-22份,香附子23-27份,黄芩28-32份,赤芍43-47份,鸡血藤23-27份,连翘28-32份,苦参38-42份,白芷28-32份,元胡28-32份,苍术33-37份,艾叶18-22份,功劳木18-22份;
以上份上均为重量份;
按照以上比例将上述十三种中草药组方,其中益母草、川芎、香附子、黄芩、赤芍、鸡血藤和连翘用水提法提取;苦参、白芷、元胡、苍术、艾叶和功劳木用醇提法提取,浓缩,过滤,离心,分离上清液,混合上述两种溶液;加入辅料,最后加注射用水调节总量至400ml-450ml,灭菌灌封。
其中优选原料配方为:
益母草50份,川芎20份,香附子25份,黄芩30份,赤芍45份,鸡血藤25份,连翘30份,苦参40份,白芷30份,元胡30份,苍术35份,艾叶20份,功劳木20份;以上份数均为重量份。
对本发明而言,灌注剂中药的组方和稳定性是重要的,实验测得中药灌注剂的PH在5.4~6.8之间,表现稳定;密度都高于1.10,表现稳定;芍药苷含量未见明显变化,表现正常;根据美国FDA推荐的标准,该灌注剂的有效期2年。
中药中芍药苷的浓度是本发明的一个关键,芍药苷的浓度应该要大于0.0150mg/ml。此种成分在此药方中是有效的抗菌成分,经过多次样品实验,芍药苷的浓度可以作为该药的质量标准和有效性的依据,后面有实施案例说明。可作为该中药灌注剂的定量检测。
本发明中所述一种中药灌注剂在治疗奶牛子宫内膜炎上的应用。
按照本方法13种中药提取物进行了抗菌筛选,赤芍、白芍、连翘、黄芩水煎剂的综合抑菌效果好,对五种细菌都有较强的抑菌作用。苦参、艾叶、元胡、苍术和功劳木的醇提液相比水煎剂,抗菌谱和抑菌活性都得到扩大和增强。按照原料配比组方后获得了良好的应用效果。
附图说明
图1是中药灌注剂中芍药苷含量的标准曲线。
具体实施方式
实施例1
中草药对奶牛子宫内膜炎病原菌的体外抑菌试验
1材料与方法
1.1药物
艾叶、败酱草、旱莲草、益母草、功劳木、鸡血藤、元胡、白鲜皮、赤参、白参、蛇床子、白术、连翘、白芷、川芎、苦参、虎杖、兔丝子、香附子、薏苡仁、石南藤、苍术、地肤子、淫羊霍、大血藤、黄芩均购自湖南药材公司。
1.2培养基
普通肉汤培养基、普通琼脂平皿培养基、鲜血琼脂平皿培养基
1.3菌种
从湖南省某奶牛场分离的五种病原菌:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、化脓链球菌、普通变形杆菌和克雷伯氏杆菌。
1.4试验方法
1.4.1菌液的制备
将从患有子宫内膜炎的奶牛分泌物中分离到的五种病原菌,接种于普通营养肉汤培养基,在37℃的恒温箱中培养18~24h,用麦氏比浊法,经肉汤稀释,使其在625nm处吸光度为0.8。
1.4.2药液的制备
1.4.2.1水提法
取上述26种药物各10g,用5倍水浸泡,而后保持微沸1h,5层纱布过滤得滤液;滤渣再加水以盖住中药为准,后保持微沸1h,5层纱布过滤得滤液,如此操作重复两次,将三次滤液合并,减压浓缩药液至1g/ml(1ml药液相当于1g生药材),后静置12h,滤纸过滤。药液流通空气灭菌30min,4℃冰箱保存备用。
1.4.2.2醇提法
每种药物的主要成分是不一致的,醇提法主要适合含有生物碱的一些物质,上述26种药物中有8种适合醇提法。
固用醇提法提取艾叶、白芷、苦参、元胡、苍术、地肤子、连翘和功劳木等8中药物各10g,用5倍75%乙醇浸泡3天,后用5层纱布过滤得滤液,滤渣也用5倍量的75%的乙醇浸泡3天,过滤得滤液,滤渣按此步骤再操作一次,合并三次滤液,减压回收乙醇,浓缩至1g/ml,4℃冰箱保存备用。
1.4.3纸片的制备
用直径5.5mm的打孔器在新华一号定性滤纸上打孔,得滤纸,将30片滤纸装于一青霉素小瓶中,在121℃条件下高压蒸汽灭菌20min,后往每一小瓶中加药液1ml,使其充分浸透5min,在超净工作台上无菌条件下吹干,保存于4℃冰箱中备用。
1.4.4体外抑菌试验
运用药敏纸片抑菌法
2结果
2.1水提26味中药抑菌结果
采用药敏纸片法测定26种单味中药,对奶牛临床型的五种病原菌的抑菌效果。不同的细菌用各自合适的培养基培养,置37℃恒温箱中培养24h,量取5张纸片的抑菌圈直径,取其均值得结果如下表:
表126种水提中药对五种病原菌的抑菌圈直径(单位:mm)
Table 1The Restrainning Diameters of Water Extracts From 26 Kinds of Chinese HerbalMedicine to 5 Pathogenic Bacterias
注:直径小于8mm为低敏;8-15mm为中敏;15mm以上为高敏;-表示无抑菌圈
由表1可知,中药赤参、白参和黄芩对五种病原菌都呈现较强的抑制作用,除白参对链球菌表现低敏外,其余都显示出较强的抑菌作用。益母草、石南藤对五种病原菌皆无抑制作用。中草药对大肠杆菌的抑制效果依次为:赤参CS、白参表现为高度敏感;旱莲草、白芷、黄芩、艾叶、败酱草、淫羊藿、连翘、白鲜皮、大血藤属于中度敏感。中草药对金黄色葡萄球菌的抑制效果依次为:白术、赤参、白参、虎杖、元胡表现为高度敏感;艾叶、功劳木、蛇床子、连翘、川芎、KS、大血藤、黄芩属于中度敏感。中草药对化脓链球菌的抑制效果依次为:功劳木、赤参、连翘、白芷、川芎、苦参、苍术、黄芩表现为中度敏感。中草药对普通变形杆菌的抑制效果依次为:赤参为高度敏感;艾叶、败酱草、旱莲草、白参、连翘、白芷、虎杖、苍术、黄芩属于中度敏感。中草药对克雷伯氏杆菌的抑制效果依次为:败酱草、白鲜皮、赤参、白参、连翘、大血藤表现为中度敏感。
2.2醇提8味中药抑菌结果
同上采用药敏纸片法测定8种醇提中药对上述五种病原菌的抑菌活性,得结果如下表:
表28种醇提中药对五种病原菌的抑菌圈直径(单位:mm)
Table 2 The Restrainning Diameters of Alcohol Extracts From 8 Kinds of Chinese HerbalMe dicineto 5 Pathogenic Bacterias
注:直径小于8mm为低敏;8-15mm为中敏;15mm以上为高敏;-表示无抑菌圈
由表1、表2可知,部分中药经过乙醇提取后,其抑菌活性比水提煎剂增强,抗菌谱也有所扩大,如苦参对肠道杆菌也表现出抑制作用,抗菌谱明显扩大;对金黄色葡萄球菌的抑制作用明显增强。中药艾叶、元胡、苍术和功劳木的抗菌谱和抑菌活性都得到扩大和增强;白芷的抗菌能力进一步提高,但连翘和地肤子的部分抑菌活性有减弱的趋势。
实施例2
奶牛子宫内膜炎中药灌注剂的研制
1材料与方法
1.1材料
益母草、鸡血藤、黄芩、赤芍、苦参等十三味中草药,95%芍药苷、10%NaOH、10%HCl、丙二醇、吐温-80、苯钾酸钠、95%乙醇、75%乙醇、旋转蒸发仪、紫外-分光光度计、电热恒温培养箱、手提式电热压力蒸汽灭菌锅、超净工作台、电子分析天平、离心机等。
1.2方法
1.2.1中药灌注剂的制备
1.2.1.1组方
中兽医学认为,子宫内膜炎属湿热带下范畴,乃邪毒秽浊之邪客于胞宫,致使瘀血停滞胞宫内,瘀久化热而发病。本试验依据清热利湿、活血化瘀、收敛止带为治疗原则,结合上一章单味中药的体外药敏抑菌结果,特形成组方:益母草50g,川芎20克、香附子25g,黄芩30g、赤芍45g、鸡血藤25g、连翘30g、苦参40g、白芷30g、元胡30g、苍术35g、艾叶20g、功劳木20g等十三味中药组成。
1.2.1.2、提取
水煮法制备中药药液:提取益母草50份,川芎20份,香附子25份,黄芩30份,赤芍45份,鸡血藤25份,连翘30份,,混合装于10L的玻璃瓶中,加5~8倍的蒸馏水浸泡4h,后用一铝锅在电炉上加热,保持微沸1h,过滤得滤液,往药材中再加入蒸馏水,使其能没过药材,加热,保持微沸1h,用5层纱布过滤得滤液,重复上述操作一次,将三次滤液合并,静置,再用水醇法进行处理
醇提法制备中药药液:提取苦参40份,白芷30份,元胡30份,苍术35份,艾叶20份,功劳木20份,混合装于10L的玻璃瓶中,加75%的乙醇使其盖过中药,浸泡3天,过滤得滤液,按此操作重复两次,将三次滤液合并,静置,再用醇水法进行处理。
1.2.1.3制备
将上述药液分别进行旋转蒸发浓缩至1克/ml、5000r/m离心10分钟、分离上清液,混合上述两种溶液(每种提取液的浓度都是浓缩至1克/ml,就是最终药物是1ml液体含有1克生药,所有的原料药都要进入最后的药物),加入吐温800.5克、防腐剂山梨酸钾0.25克,最后加注射用水调节总量至400-450ml。调节PH值至6.1、110℃灭菌30分钟、灌封得到成品。浓缩、过滤、离心、助溶、附加剂处理、调节PH值、混合、灭菌、灌封和贴标签。
1.2.2芍药苷含量的测定
主要成分的测定:采用紫外-分光光度计测定药液中芍药苷的含量。
对照品溶液的制备:精密称取干燥恒重芍药苷对照品5mg于25ml量瓶中,加甲醇完全溶解并稀释至刻度,摇匀,即得0.20mg/ml的标准储备液备用。
制备标准曲线:精密量取标准储备液0.0ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml于5ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,制成含芍药苷系列标准溶液。以甲醇为空白,在230nm波长处测定其吸光度,以浓度(x)为横坐标,吸收度(Y)为纵坐标绘图。
供试品溶液含量的测定:吸取供试品溶液,在230nm处测定吸收度,按当日标准曲线之回归方程计算。
1.2.3稳定性试验
1.2.3.1热稳定性试验将样品置于温度为40±1℃,相对湿度为75%的恒温培养箱中,连续放置3个月,每月检查一次,观察其稳定性,检查外观性状、PH值、相对密度以及芍药苷的含量。
1.2.3.2光稳定性试验将样品置于洁净透明的玻璃瓶中,密封,放在2000LX的日光灯下照射,连续15天,每隔5天就进行抽样,观察其稳定性,检查外观性状,PH值,相对密度以及芍药苷的含量。
1.2.4体外抑菌试验
运用体外药敏纸片法。将五种细菌复壮,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、普通变形杆菌、克雷伯氏杆菌接种于LB肉汤培养基,37℃培养18小时;化脓链球菌接种于加有新鲜血清的LB肉汤培养基中,37℃培养24h;后将上述细菌培养于普通琼脂平皿培养基和THB平皿培养基,进行药敏抑菌试验。
2结果
2.1制得中药灌注剂成品
该中药灌注剂是一种呈棕褐色、清亮透明、PH值为6.1的液体制剂。
2.2芍药苷含量的测定
采用紫外-分光光度法测定中药灌注剂中主要成分芍药苷的含量,测得标准品芍药苷在230nm波长处的吸光度见表1,并绘制标准曲线如下:
表1标准样品芍药苷的吸收度测定值
根据上述测定结果,绘制标准曲线如图1所示,得线性回归方程为:Y=0.6269X+9.9602浓度(X)为横坐标,吸收度(Y)为纵坐标,结果表明芍药苷在0.04mg/ml~0.2mg/ml的浓度范围内,吸收度与浓度呈现良好的线性关系。按照紫外-分光光度法测定中药灌注剂供试品溶液中的芍药苷的吸光度,并依据上述线性回归方程计算,得供试品溶液中芍药苷含量如下表:
表2供试品溶液芍药苷含量测定结果
由表2可以知道,该复方中药灌注剂中主要抗炎物质芍药苷的浓度为0.0158mg/ml,可作为该中药灌注剂的定量检测。
2.3稳定性试验
药物的稳定关系到用药的安全性和有效性,试验测定了该灌注剂在一定光和热的条件下的理化变化,得结果如下:
表3中药灌注剂的热稳定性试验结果
表4中药灌注剂的光稳定性试验结果
标准为:PH在5.4~6.8范围之间为稳定,密度>1.10即为稳定
由表3和表4可以看出,经过光、热稳定性试验以后,该中药灌注剂的PH在5.4~6.8之间,表现稳定,密度都高于1.10,表现稳定,芍药苷含量未见明显变化,表现正常,根据美国FDA推荐的标准,该灌注剂的有效期2年。
2.4中药灌注剂体外抑菌试验结果
运用药敏纸片抑菌法,测得该中药灌注剂对上述五种病原菌的抑菌圈如下表:表5中药灌注剂对五种病原菌的抑菌圈直径(单位:mm)
从上表可知,中药灌注剂的体外抑菌效果较好。
Claims (5)
1.一种中药灌注剂,其特征在于,原料配方为:
益母草48-52份,川芎18-22份,香附子23-27份,黄芩28-32份,赤芍43-47份,鸡血藤23-27份,连翘28-32份,苦参38-42份,白芷28-32份,元胡28-32份,苍术33-37份,艾叶18-22份,功劳木18-22份;
以上份上均为重量份;
按照以上比例将上述十三种中草药组方,其中益母草、川芎、香附子、黄芩、赤芍、鸡血藤和连翘用水提法提取;苦参、白芷、元胡、苍术、艾叶和功劳木用醇提法提取,浓缩,过滤,离心,分离得到上清液,混合上述两种溶液;加入辅料,最后加注射用水调节总量至400ml,灭菌灌封。
2.根据权利要求1所述一种中药灌注剂,其特征在于,原料配方为:
益母草50份,川芎20份,香附子25份,黄芩30份,赤芍45份,鸡血藤25份,连翘30份,苦参40份,白芷30份,元胡30份,苍术35份,艾叶20份,功劳木20份;以上份数均为重量份。
3.根据权利要求1或2所述一种中药灌注剂,其特征在于所说的醇提中使用体积百分数为75%的乙醇。
4.根据权利要求1或2所述一种中药灌注剂,其特征在于,该中药灌注剂中的有效成分芍药苷的浓度大于0.0150mg/ml。
5.根据权利要求1或2所述一种中药灌注剂在制备治疗奶牛子宫内膜炎药物中的应用。
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