CN101984766A - 内皮素原-1水平用于快速性心律失常事件的风险预测 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及用于对患有心脏病例如心力衰竭的患者进行预后和风险分层的体外方法。本发明还涉及这种方法的应用。

Description

内皮素原-1水平用于快速性心律失常事件的风险预测
本发明涉及对患有心脏病例如心力衰竭的患者进行风险分层的体外方法，用于为装置植入和/或抗心律失常混合疗法提供指示。本发明还涉及这种方法的应用。
植入式心律转复除颤器(ICD)有效终止恶性室性心律失常以避免猝死。但是，ICD植入是昂贵的、侵入性的，并伴随有副作用例如不适当放电、社会心理问题、导线问题和感染(Ezekowitz等，Ann Intern Med 2007；147：251-62；Rosenqvist等，Circulation 1998；98：663-70；Sanders GD等，N Engl J Med 2005；353：1471-80)。有趣的是，预防性植入ICD的成本效益甚至已被质疑(Goldman等，N Engl J Med2005；353：1513-5)，因为高达三分之二的没有接受前期ICD疗法的患者死亡(Ezekowitz等，Ann Intern Med 2007；147：251-62)。与此相一致的是，用于为装置植入和/或抗心律失常混合疗法提供适当指示的风险分层是强制性的(Ezekowitz等，Ann Intern Med 2007；147：251-62)。
在患有收缩性左心室(LV)机能障碍的患者中，神经体液系统的活化已经与恶性快速性心律失常(快速室性心动过速或心室纤颤)的风险增加相关联。事实上，B-型利尿钠肽(BNP)水平的增加指示了心脏性猝死风险的增加(Berger等，Circulation 2002；105：2392-7；Brunner-La Rocca等，Eur Heart J 2001；22：1136-43)。但是，BNP是心力衰竭严重性的定量标志物，并指示了死亡风险的增加(Dao等，J AmCoIl Cardiol 2001；37：379-85)，而以前它并不用于正确预测需要ICD疗法的快速性心律失常事件。
在患有或曾患有心室性快速性心律失常的患者中，观察到了升高的血清内皮素和大内皮素水平(Szucs等，J Cardiovasc Pharmacol 2004，44：S402-6)。
基于短期实验，已经进一步推测在兔中ET和大ET可能起到致心律失常的介导物的作用(Alexiou等，JACC 1998，32：1773-8)。
US 2005/0177196A1提出了关于使用生物标志物评估患者获得心室性快速性心律失常的风险。但是，该申请在本文中没有提供具体的生物标志物。
因此，本发明的目的是发现在患有心脏病例如慢性心力衰竭的患者中预测快速性心律失常事件的标志物。
令人吃惊的是，已经发现CT-proET-1水平的增加可以预测需要装置疗法的第一次恶性心室性快速性心律失常事件的发生。CT-proET-1水平的增加在患有心力衰竭以及LV-EF降低的ICD患者中，独立地预测了将来恶性快速性心律失常的发生。此外，测量CT-proET-1水平对于需要ICD用于心律失常性猝死一级预防的患者的风险分层来说，可能是非常有用的。
因此，本发明的主题是对患有心脏病的患者进行风险分层的体外方法，用于为ICD装置植入和/或抗心律失常混合疗法提供指示，所述方法包括：
●在从患者获得的样品中测定内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平。
在测定ProET-1片段水平的情况下，这些片段包含至少12个氨基酸、优选至少20个氨基酸、优选至少30个氨基酸。内皮素(ET)-1是强有力的内皮衍生的内源性血管收缩剂(Yanagisawa M，Kurihara H，Kimura S，Goto K，Masaki T.一种新的肽类血管收缩剂，内皮素，由血管内皮产生并调节平滑肌Ca2+通道(A novel peptide vasoconstrictor，endothelin，1s produced by vascular endothelium and modulates smooth muscle Ca2+channels)，J Hypertens Suppl 1988；6：S188-91)。ET-1通过活化平滑肌细胞上的ET(A)和ET(B)受体执行其血管效应，导致细胞内钙的增加(Yanagisawa等，J Hypertens Suppl 1988；6：S188-91)。成熟的内皮素-1源自于被称为内皮素原-1的较大的前体。内皮素原-1可以被蛋白水解加工成所述的各种不同片段(Struck J，Morgenthaler NG，Bergmann A，内皮素-1前体的体内蛋白水解加工模式(Proteolytic processing pattern of the endothelin-1precursor in vivo)，Peptides.2005Dec；26(12)：2482-6)。这些片段在血液循环中经受蛋白水解降解，这种降解可以快速或缓慢发生，取决于片段的类型和循环中存在的蛋白酶的类型和浓度/活性。这些片段的一个实例是C-端内皮素原-1(CT-proET-1)，它可以通过夹心免疫测定法测量(Papassotiriou J，Morgenthaler NG，Struck J，Alonso C，Bergmann A，用于在人类血浆中测量C-端内皮素-1前体片段的免疫发光测定法(Immunoluminometric assay for measurement of the C-terminal endothelin-1precursor fragment in human plasma)，Clin Chem.2006 Jun；52(6)：1144-51)。
根据指示，连续性变量被表示成平均值±标准偏差(SD)或表示成中值(范围)和点估算(95％置信区间)。目的是为了研究CT-proET-1对预测第一次恶性快速性心律失常事件的时间是否有贡献。恶性快速性心律失常被定义为周期长度≤250ms(心率≥240bpm)的快速心室性快速性心律失常(VT或VF)，如果不用装置终止可能导致死亡(Bocker D，Block M，Isbruch F等，具有植入式除纤颤器的患者活得更长吗？(Do patients with an implantable defibrillator live longer？)，J AmColl Cardiol 1993；21：1638-44)。使用了单变量和多变量Cox比例危险模型来评估结果测量之间的关联性。
在本发明方法的一个实施方案中，将所述内皮素原-1或其至少12个氨基酸的片段的水平与第一次恶性快速性心律失常的风险相关联。所述方法的目的是根据患者对植入式心律转复除颤器(ICD)和/或抗心律失常混合疗法的需要对患者进行分层。
根据本发明的优选实施方案，所述关联步骤包括将所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与阈值水平进行比较，由此，当所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平高于所述阈值水平时，所述患者处于快速性心律失常的高风险下。
根据CT-proET-1或BNP水平已经将ICD患者分层为两个组，并进行了Kaplan Meier分析。在CT-proET-1血浆水平＞73pmol/L(中值)的患者中，与CT-proET-1值低于该截止点的患者相比，快速性心律失常的风险明显更高(对数秩检验p＜0.001，图1A)。在BNP血浆水平≤183pg/mL(中值)或＞183pg/mL的患者中，使用恶性快速性心律失常作为终点，没有发现显著差异(对数秩检验，p＝0.10，图1B)。没有发现LV射血分数与CT-proET-1水平的显著关联(图2)。使用CT-proET-1水平预测第一次恶性快速性心律失常发生的ROC曲线下的面积是0.69(图1A，插入部分)。从ROC曲线获得的用于计算阳性和阴性预测准确性的CT-proET-1的最适浓度是75.5pmol/L(灵敏性80.8％，特异性64.4％，阴性预测值92.1％，阳性预测值39.6％，阳性似然比2.27)。
CT-proET-1血浆水平对预测第一次恶性快速性心律失常风险的多变量Cox回归模型有显著贡献。计算了CT-proET-1水平每pmol/L的增加的风险比(表2)。在统计分析中使用log CT-proET-1不改变获得的结果。多变量Cox回归分析揭示，用β-阻断剂进行治疗显示出有利的预后(表2)。
因此，在本发明的优选实施方案中，所述阈值水平是约73±20％pmol/L。
根据优选实施方案，心脏病是可能指示植入ICD的任何病症，包括缺血性或非缺血性病因的心力衰竭。根据优选实施方案，患者具有≤45％的LV射血分数。
从患者获得的样品优选为选自血液样品、血清样品和血浆样品的样品。
此外，本发明的主题是一种方法，所述方法进一步包含了将所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与一种或多种附加预后标志物、参数或因子的水平/状态相组合，由此所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与所述一种或多种附加预后标志物、参数或因子的水平/状态的组合，增加了所述方法对风险的预测值。
在优选实施方案中，附加的预后标志物、参数或因子选自表2中列出的所有在单变量或多变量分析中显示出p＜0.05的参数，其中BNP仅仅是包括BNP或NT-proBNP的proBNP或其至少12个氨基酸的片段的一个例子。
优选情况下，所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平使用夹心免疫测定法测量。优选情况下测量C-端ET-1前体片段(CT-proET-1)，它间接地估算内皮素系统的活性。在优选实施方案中，在该测定法中使用了两种抗体、优选为多克隆抗体。在优选实施方案中，抗体针对pre-proET-1的168-212位氨基酸。该方法可以使用可商购的夹心免疫测定法进行(CT-proET-1 LIA，B.R.A.H.M.SAG，Hennigsdorf，Berlin)。测定方法(正常参考范围：中值：44.3，范围：10.5-77.4pmol/L)具有0.4pmol/L的分析检测极限，对于＞10pmol/L的值来说分析间CV＜10％(Papassotiriou J，Morgenthaler NG，Struck J，Alonso C，Bergmann A，用于在人类血浆中测量C-端内皮素-1前体片段的免疫发光测定法(Immunoluminometric assay for measurement of theC-terminal endothelin-1 precursor fragment in human plasma)，Clin Chem.2006；52：1144-51)。
在本发明的文本中，“心脏病”是与患者的心脏系统、例如心脏和/或血管相关的病理状态。这种心脏病可以是例如先天性心脏缺损、冠状动脉疾病、心力衰竭和/或瓣膜性心脏病。
在本发明中，术语“一级预防”是指在健康或至少无症状的个体中避免疾病的发生。
在本发明的文本中，恶性快速性心律失常优选被定义为周期长度≤250ms(心率≥240bpm)的快速心室性快速性心律失常(VT或VF)。
在本发明中，术语“风险分层”是指为个体指派经历某种不利事件的可能性。据此，可以优选将个体归于某种风险类型，其中类型包括例如高风险对低风险，或基于数值的风险类型，例如风险类型1、2、3等。
在本发明的文本中，例如“预测值”这样的术语是指某种测量确定的结果的统计学重要性。因此，在本发明的文本中，预测值或预测能力增加意味着基于从样品中某种标志物水平的测量值确定的某个值进行正确诊断、预后、分层等的可能性增加。
本文中提到的“测定法”或“诊断测定法”可以是在诊断学领域中应用的任何类型的测定方法，包括但不限于基于酶反应、发光、荧光或放射性化学物质的测定方法。优选的检测方法包括条样试验、放射免疫测定法、化学发光和荧光免疫测定法、免疫印迹测定法、酶联免疫测定法(ELISA)、基于Luminex珠子的测定法和蛋白微阵列测定法。测定法的类型可以进一步是基于微量滴定板、基于芯片、基于珠子的，其中标志物可以附着于表面或在溶液中。测定法可以是均相或非均相测定法、夹心测定法、竞争性和非竞争性测定法。在特别优选实施方案中，测定法采取夹心测定法形式，这是一种非竞争性免疫测定法，其中待检测和/或定量的分子与第一抗体结合并与第二抗体结合。第一抗体可以结合到固相上，例如珠子、孔或其他容器的表面、芯片和条板，第二抗体是用例如染料、放射性同位素或反应性或催化活性部分标记的抗体。然后通过适合的方法测量位点上标记抗体的量。涉及“夹心测定法”的通用组合物和步骤是已确立的，对于专业技术人员来说是公知的。(《免疫测定手册》(The Immunoassay Handbook)，David Wild主编，Elsevier LTD，Oxford；第三版(2005年5月)，ISBN-13：978-0080445267；Hultschig C等，Curr Opin Chem Biol.2006Feb；10(1)：4-10.PMID：16376134)，在此引为参考。
在特别优选实施方案中，测定法包含两种捕获分子、优选为抗体，它们都作为分散体系存在于液体反应混合物中，其中第一种标志组分与第一种捕获分子结合，其中所述第一种标志组分是基于荧光或化学发光淬灭或扩增的标志系统的一部分，所述标志系统的第二种标志组分与第二种捕获分子结合，使得当两种捕获分子与所述蛋白酶或所述内源抑制剂或所述蛋白酶与内源抑制剂的复合物结合后，产生了可测量信号，允许在包含样品的溶液中检测形成的夹心复合物。
更优选情况下，所述标志系统包括稀土穴合物或稀土螯合物与荧光染料或化学发光染料、特别是花青类型的染料的组合。
在本发明的文本中，基于荧光的测定法包括使用染料，所述染料可以选自例如FAM(5-或6-羧基荧光素)、VIC、NED、荧光素、荧光素异硫氰酸酯(FITC)、IRD-700/800、花青染料例如CY3、CY5、CY3.5、CY5.5、Cy7、占吨、6-羧基-2′，4′，7′，4，7-六氯荧光素(HEX)、TET、6-羧基-4′，5′-二氯-2′，7′-二甲氧基荧光素(JOE)、N，N，N′，N′-四甲基-6-羧基罗丹明(TAMRA)、6-羧基-X-罗丹明(ROX)、5-羧基罗丹明-6G(R6G5)、6-羧基罗丹明-6G(RG6)、罗丹明、罗丹明绿、罗丹明红、罗丹明110、BODIPY染料例如BODIPY TMR、俄勒冈绿、香豆素例如伞形酮、苯甲亚胺类例如Hoechst 33258、菲啶类例如德克萨斯红、雅吉瓦黄、Alexa Fluor、PET、溴乙啶、吖啶染料、咔唑染料、吩噁嗪染料、卟啉染料、聚甲炔染料等。
在本发明的文本中，基于化学发光的测定法包括使用染料，所述染料基于在下述文献中描述的化学发光材料的物理原理，所述文献为Kirk-Othmer，《化学技术百科全书》(Encyclopedia of chemical technology)，第四版，执行主编J.I.Kroschwitz，编辑M.Howe-Grant，John Wiley&Sons，1993，vol.15，p.518-562，在此引为参考，包括在551-562页上的引用资料。
本文中使用的术语“混合疗法”是指组合疗法，其中在一位患者中组合了药物疗法和装置疗法。
在本发明的意义中，“患者”被理解为是所有人和动物，不论他们是否表现出病理变化，除非另有指明。在本发明的意义中，从细胞、组织、器官、生物体等收集的任何样品可以是待诊断患者的样品。在优选实施方案中，本发明的患者是人类。
正如本文中在蛋白或肽的情况下提到的，术语“片段”是指可以从较大蛋白或肽衍生的较小的蛋白或肽，因此它们包含较大蛋白或肽的部分序列。所述片段可以从较大蛋白或肽通过其一个或多个肽键的皂化作用而衍生。
在本发明的文本中，在例如“蛋白酶水平”、“被分析物水平”的表述或类似表述中的术语“水平”，是指在相应上下文中提到的分子实体的量。
本文中使用的术语例如“标志物”、“诊断标志物、参数或因子”或“生物标志物”或“生物学标志物”可以互换使用，涉及可测量和可定量的生物学参数(例如特定酶浓度、特定激素浓度、特定基因表型在群体中的分布、生物物质的存在)，它们用作健康和生理相关的评估例如疾病风险、精神机能障碍、环境暴露及其影响、疾病诊断、代谢过程、药物滥用、怀孕、细胞系发育、流行病学研究等的指标。此外，生物标志物被定义为被客观测量和评估的特征，作为正常生物学过程、病理性过程或对治疗干预的药效学响应的指示。生物标志物可以在生物样品上测量(作为血液、尿液或组织化验)，它可以是从人获得的记录(血压、ECG或动态心电图)，或者它可以是成像测试(超声心动图或CT扫描)(Vasan等，2006，Circulation113：2335-2362)。
生物标志物能够指示各种不同的健康或疾病特征，包括暴露于环境因子的水平或类型、遗传易感性、对暴露的遗传响应、亚临床或临床疾病的生物标志物、或对疗法响应的指示物。因此思考生物标志物的简单化方式是作为疾病特质(风险因子或风险生物标志物)、疾病状态(临床前或临床)或疾病速度(进展)的指示物。因此，生物标志物可以分类为先行生物标志物(鉴定发生疾病的风险)、筛选标志物(筛选亚临床疾病)、诊断生物标志物(识别外显疾病)、分级标志物(对疾病严重性分类)或预后标志物(预测将来的疾病过程，包括复发和对疗法的响应，以及监测疗法的效能)。生物标志物也可以用作替代终点。替代终点是在临床试验中可以作为结果用来代替所研究的真正结果的测量，以评估疗法的安全性和有效性的终点。其中隐藏的原理是替代终点的变化密切追随所研究结果的变化。替代终点的优点在于与需要大型临床试验进行评估的终点例如发病和死亡相比，它们可以在较短的时间框架中、以较少的花费来收集。替代终点的附加价值包括这个事实，即与更遥远的临床事件相比，它们更接近于所研究的暴露/干预，可以更容易地进行因果关联。替代终点的一个重要缺点是如果所研究的临床结果受到大量因素(除了替代终点之外)的影响，剩余的混杂性可能降低替代终点的有效性。已经建议，如果替代终点能够解释暴露或干预对所研究的结果的至少50％的影响，那么它的有效性较高。例如，生物标志物可以是蛋白、肽或核酸分子。
附图说明
图1
心力衰竭患者已经根据CT-proET-1和BNP水平分层为两个组，并已经进行了Kaplan Meier分析。A)以恶性快速性心律失常事件作为终点时，CT-proET-1血浆水平＞73pmol/L(中值)的患者与CT-proET-1值低于该截止点的患者相比，具有明显更糟的结果(对数秩检验)。B)BNP血浆水平≥183pg/mL(中值)的患者与低于该截止点的患者相比，没有更高的恶性心室性快速性心律失常事件比率(对数秩检验)。相应的ROC曲线分析显示在插入图中。
图2
在123位带有植入式心律转复除颤器的心力衰竭患者中，LV射血分数和CT-proET-1水平的线性回归分析。
实施例
方法
患者、研究设计
研究群体包含123位患有缺血性或非缺血性病因心力衰竭的使用除纤颤器的患者，他们是2002年6月到2003年9月间在Marburg大学除纤颤器门诊部(defibrillator outpatient clinic of the University of Marburg)按计划招募的(Christ等，Eur J Heart Fail 2007；9：272-9)。研究按照临床试验规范(Good Clinical Practice)和赫尔辛基宣言(Declaration of Helsinki)的原则进行，患者在登记进入研究之前给出了知会同意书(Christ等，Eur J Heart Fail 2007；9：272-9)。
心电描记术和超声心动描记术
从每个患者以50mm/秒的纸速记录了标准化的12根导线的心电图(ECG)，并由同一位对后果未知的有经验研究人员进行解释。如果在ECG记录过程中超过50％的心跳是起搏的，患者被分类为具有起搏器心律。在呼气期结束时，使用Vingmed Vivid Five机(GE Medical Systems，Solingen，德国)和使用标准步骤(Christ等，Eur J Heart Fail2007；9：272-9)测量的参数获得了心脏的二维超声心动描记图像。
实验室步骤
禁食过夜后，在8:30h和10:30h之间，通过插入到肘前静脉中的21号插管抽取静脉血样，使用了含有乙二胺四乙酸(EDTA)的monovette管(Sarstedt，Nuembrecht，德国)。患者以仰卧体位躺至少15分钟。将EDTA血样立即转移到冷却的冰上，使用离心机分离血浆，将血浆储存在-80℃直到分析。
使用化学发光免疫测定法(Bayer AG，Fernwald，德国)测定BNP水平。测定法的分析检测极限是2pg/mL。测定内变差系数(CV)在29.4-1763pg/mL BNP下是1.8-4.3％，测定间CV在29.4-1736pg/mLBNP下是2.3-4.7％(Christ等，Eur J Heart Fail 2007；9：272-9))。
由于不稳定性和受体结合，内皮素-1测量困难。使用两种针对pre-proET-1的168-212位氨基酸的多克隆抗体，通过新的夹心免疫测定法(CT-proET-1 LIA，B.R.A.H.M.S AG，Hennigsdorf，Berlin，Germany)(Papassotiriou等，Clin Chem 2006；52：1144-51)测定了C-端ET-1前体片段(CT-proET-1)，它能够间接地估算内皮素系统的活性。测定法(正常参比范围：中值：44.3，范围：10.5-77.4pmol/L)的分析检测极限为0.4pmol/L，对于＞10pmol/L的值来说测定间CV＜10％(Papassotiriou等，Clin Chem 2006；52：1144-51)。
除纤颤器植入和装置编程
专门使用了具有非胸廓切开术导线系统和双相电震波形、最高电震能量为27到34J的ICD。所有使用的ICD系统提供了储存心内电描记图以及触发装置行动的发作的起搏间期(Guidant，St.Paul，Minnesota；Medtronic，Minneapolis，Minnesota)。在Guidant装置中，用于VF检测的时间间期为1到3秒；Medtronic装置被编程为需要24次起搏中的18次低于已编程的检测循环长度(范围240-280ms)，以便VF区中的初始电容器充电。检测到了较慢的心室性快速性心律失常，并在一个或两个分开的VT区中使用抗心动过速的短阵快速起搏进行处理，然后进行最多4次心律转复电击(Grimm等，J Am Coll Cardiol2002；39：780-7)。
随访
所有基线临床特征、包括心脏评估结果和植入数据，已经预先收集在Marburg除纤颤器数据库中(Christ等，Eur J Heart Fail2007；9：272-9；Grimm等，J Am Coll Cardiol 2002；39：780-7)。本研究中的随访开始于测量生物标志物时，持续到最多60个月，可以在所有登记的患者中完成。患者随访主要在我们的除纤颤器门诊部以3到6个月的间期或在自发ICD电击后尽可能快地进行，用于装置的查询和检索储存的心电图。两位有经验的电生理学家使用以前描述的判断标准将所有储存的触发ICD疗法的发作的或不适合的心电图进行分类(Christ等，Eur J Heart Fail 2007；9：272-9；Marchlinski等，Pacing Clin Electrophysiol 1993；16：527-34)。
统计学分析
根据指示，连续性变量被表示成平均值±标准偏差(SD)或表示成中值(范围)和点估算(95％置信区间)。主要目的是为了研究生物标志物水平包括CT-proET-1或BNP对预测第一次恶性快速性心律失常事件的时间是否有贡献。恶性快速性心律失常被定义为周期长度≤250ms(心率≥240bpm)的快速心室性快速性心律失常(VT或VF)，如果不用装置终止可能导致死亡(Bocker等，J Am Coll Cardiol 1993；21：1638-44)。使用了单变量和多变量Cox比例风险模型来评估结果测量值之间的关联性。
因此，为了构建第一个Cox回归模型，我们使用了准入水平为0.05的逐级步骤。保留在模型中所需的p值被设定为0.05。使用Kaplan-Meier方法估算事件概率，使用对数秩检验来比较曲线。其他的统计学分析被用于探查、描述和解释。当适用时，组之间的比较通过Students t-检验、U-检验或chi-平方检验进行。所有报道的p值是双边的，p-值＜0.05被认为是显著的。
构建了受试者工作特性(ROC)曲线以在整个浓度范围内评估生物标志物的灵敏性和特异性以检测相应的终点。所有统计学计算使用SPSS统计学软件包(14.0版；SPSS Inc.，Chicago，IL)进行。
结果
整个研究组群的人口统计学特征显示在表1中。在登记后最高长达60个月(中值51个月)的随访中，27位患者具有第一次恶性快速性心律失常事件。具有恶第一次恶性快速性心律失常事件的患者(中值：90pmol/L)与不具有第一次恶性快速性心律失常事件的患者(中值：67pmol/L；p＝0.003)相比，CT-proET1水平明显更高。相反，对于BNP来说，在组之间没有发现差异(p＝0.55)(表1)。
初次恶性快速性心律失常事件的预测因子
在研究登记后，恶性快速性心律失常以18个月的中值发生(IQR：8-41个月)。CT-pro-ET-1水平、NYHA类别、颈静脉压增加和用β-阻断剂处理对单变量Cox回归模型预测主要终点来说有明显贡献。BNP、收缩压、LV舒张末期直径、LV-EF或存在左束支传导阻滞(LBBB)都不能预测需要ICD疗法的恶性快速性心律失常的风险(表2)。ICD患者已经根据CT-proET-1或BNP水平分层成两个组，并进行了Kaplan Meier分析。在CT-proET-1血浆水平＞73pmol/L(中值)的患者中，与CT-proET-1值低于该截止点的患者相比，快速性心律失常的风险明显更高(对数秩检验，p＜0.001，图1A)。使用恶性快速性心律失常作为终点，在BNP血浆水平≤183pg/mL(中值)或＞183pg/mL的患者中没有发现差异(对数秩检验，p＝0.10，图1B)。没有发现LV射血分数和CT-proET-1水平的显著关联性(图2)。
使用CT-proET-1水平预测第一次恶性快速性心律失常发生的ROC曲线下面积是0.69(图1A，插入图)。从ROC曲线获得的用于计算阳性和阴性预测准确性的CT-proET-1最适浓度是75.5pmol/L(灵敏性80.8％，特异性64.4％，阴性预测值92.1％，阳性预测值39.6％，阳性似然比2.27)。
CT-proET-1血浆水平对预测第一次恶性快速性心律失常风险的多变量Cox回归模型有显著贡献。计算了CT-proET-1水平每pmol/L的增加的风险比(表2)。在统计分析中使用log CT-proET-1不改变获得的结果。多变量Cox回归分析揭示，用β-阻断剂进行治疗显示出有利的预后(表2)。
表1
进入研究时具有植入式心电复律器/除纤颤器植入的患者的临床特征
Figure BPA00001231118900141
Figure BPA00001231118900151
NYHA，纽约心脏病联合会(New York Heart Association)；LV，左心室；CT，C-端；EDD，舒张末期直径；ACE-I，血管紧张肽转化酶抑制剂；ARB，血管紧张肽受体阻断剂。统计学分析按照统计学部分中概括的进行。值被显示成平均值±SD或按照所标明的。
表2：随访过程中ICD患者中的快速性心律失常事件
Figure BPA00001231118900152
Figure BPA00001231118900161
在60个月的随访过程中主要终点(第一次恶性快速性心律失常事件)的风险率(n＝123；LV，左心室；ICD，植入式心律转复除颤器)。

Claims (12)

1.一种体外方法，用于对患有心脏病的患者出现恶性快速性心律失常进行风险分层，所述方法包括：
●在从患者获得的样品中测定内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平。
2.权利要求1的体外方法，其中所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平，与需要植入植入式心律转复除颤器(ICD)和/或抗心律失常混合疗法的恶性快速性心律失常的风险相关联。
3.权利要求2的体外方法，用于心律失常性猝死的一级预防。
4.权利要求2或3的方法，其中所述关联步骤包括将所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与阈值水平进行比较，由此，当所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段或其片段的水平高于所述阈值水平时，所述患者处于快速性心律失常的高风险下。
5.权利要求4的方法，其中如果CT-proET-1用作内皮素原-1(ProET-1)的片段，所述阈值水平是约73±20％pmol/L。
6.权利要求1-5的方法，其中心脏病是缺血性或非缺血性病因的心力衰竭。
7.权利要求1-6的方法，其中患者具有≤45％的LV射血分数。
8.前述权利要求任一项的方法，其中所述样品选自血液样品、血清样品和血浆样品。
9.前述权利要求任一项的方法，还包含将所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与一种或多种附加预后标志物、参数或因子的水平/状态相组合，由此所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平与所述附加预后标志物、参数或因子的水平/状态的组合，增加了所述方法的风险预测值。
10.权利要求9的方法，其中附加预后标志物、参数或因子选自表2中列出的所有在单变量或多变量分析中显示出p＜0.05的参数，其中BNP仅仅是包括BNP或NT-proBNP的proBNP或其至少12个氨基酸的片段的一个例子。
11.权利要求1到10的方法，其中所述内皮素原-1(ProET-1)或其至少12个氨基酸的片段的水平使用夹心免疫测定法测量。
12.权利要求1-10的方法，其中内皮素原-1片段是CT-proET-1。
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