CN101967153A

CN101967153A - 10-o-(二甲胺基乙基)银杏内酯b的代谢产物及包含它的药物组合

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Publication number: CN101967153A
Application number: CN2009101815691A
Authority: CN
Inventors: 秦引林; 余文兵
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2009-07-28
Filing date: 2009-07-28
Publication date: 2011-02-09

Abstract

本发明提供了一种化合物，10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B的代谢产物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B及其在制药中的应用，结构式为：

Description

10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B的代谢产物及包含它的药物组合

技术领域

本发明涉及一类具有血小板活化因子(PAF)拮抗作用的药物，尤其涉及一种抗血小板活化因子的药物化合物及其合成方法。

背景技术

式I化合物10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B是一种抗血小板活化因子化合物。CN1749257公开了其作用于缺血性中风、炎症、哮喘等与PAF因子相关的疾病预防及临床治疗的用途。

血小板活化因子(PAF)是一种内源性活性物质，其结构为1-O-烷基-2R-乙酰甘油基-3-磷酰胆碱(1-O-alkyl-2R-acetyl-glycero-3-phosphoryl-choline)，分子中烷基主要由十六烷和十八烷组成。PAF具有广泛的病理生理作用，是迄今发现的最强的血小板聚集诱导剂，PAF的生物活性主要是通过与特异性结合部位(受体)结合而产生的，也可直接刺激某些细胞释放活性介质而发生作用。

发明内容

本发明所涉及式II化合物为10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B在体内的代谢产物，进一步研究表明，式II化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B具有很强的抗血小板活化因子作用

本发明提供一类抗血小板活化因子化合物及其药学上可接受的盐作为活性成分以及一种或多种药用载体形成的药物组合。

本发明还涉及到式II化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B及其药学上可接受的盐的制备方法。

本发明化合物可与常规使用的载体、稀释剂或赋形剂一起构成药物组合及其单位计量的形式，其剂形可以是口服用的固体(如片剂或填充胶囊)，本发明化合物与各类有机酸或无机酸成盐后能直接溶于水制成液体(如溶液)。这些药物组合物及其单位剂型可包含配置成常规比例的诸成分，包括或不包括其它活性化合物或要素物质。当用做药物时，本发明的化合物通常以药物组合的形式给药。所述药物组合可用制药行业熟知的方法制备，包含至少一种活性化合物。

本发明进一步涉及到式II化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B作为一类抗血小板活化因子化合物，用于缺血性中风、炎症、哮喘等与PAF因子相关的疾病预防及临床治疗。

代谢产物的测定：以原药10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B的甲磺酸盐为原料，大鼠iv用药按0.2ml/100g(体重)的容量用注射用生理盐水调整药物浓度，ig用药按1ml/100g(体重)的容量用注射用生理盐水调整药物浓度。取胆汁和尿样结合高效液相-质谱进行测定。同时在实验室独立合成相关化合物，并经过高效液相-质谱、核磁等方法进行结构认证，对比分析。确认式II化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B为原药的代谢产物。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明涉及化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B具有更强的抗血小板活化因子作用，同时其毒性较10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B低，安全性更高。

10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B的合成方法如下：

具体实施例

实施例1 合成10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B

(1)、合成10-O-(N，N-甲基苄基胺基乙基)银杏内酯B(IV)

称取600mg银杏内酯B、600mg N，N-甲基苄基胺基氯乙烷(III)，2.36g碳酸钾、100mg的碘化钾加入到100mL的烧瓶中，同时倒入50mL的乙腈，搅拌，加热回流2小时，反应基本完全。停止加热，冷却，过滤，滤饼丙酮洗涤数次，合并滤液，减压浓缩得残留物，柱层析[乙酸乙酯/石油醚(1∶1)]洗脱，得化合物10-O-(N，N-甲基苄基胺基乙基)银杏内酯B(IV)，收率32％。

(2)、合成10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B(II)

称取干燥好的600mg10-O-(N，N-甲基苄基胺基乙基)银杏内酯B(IV)溶于30ml二氧六环中，置于密闭的容器中，加入5％的钯-碳200mg，导入氢气，剧烈搅拌至氢气体量不再减少，过虑，浓缩，得残留物，柱层析[CHCl₃/CH₃OH(10∶1)洗脱]，得目标化合物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B(II)，收率68％。IR(KBr)v_max 3511，1792，1478，1461cm^-1；¹H-NMR(DMSO-d6)δ7.5(d，OH)，6.33(s，OH)，6.11(s，1H)，5.31(d，1H)，5.09(s，1H)，4.52(d，1H)，4.34(dt，1H)，4.08(dd，1H)，3.56(dt，1H)，2.85(q，1H)，2.67(m，1H)，2.60(dt，1H)，2.22(s，3H)，2.13(dd，1H)，1.88(dt，1H)，1.73(dd，1H)，1.10(d，3H)，1.03(s，9H)；MS m/z 482.2[M]⁺，480.2[M]^-.

实施例2 合成10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐

10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B 1.0g，甲醇20mL，搅拌，滴加入4.15g的4.8％的甲磺酸甲醇溶液，微热，搅拌、全溶后继续搅拌30min，减压蒸发溶剂至适量，冷却、结晶，过滤，得10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐。

实施例3 合成10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B枸橼酸盐

10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B 1.0g，甲醇20mL，搅拌，加入0.44g枸橼酸，微热，搅拌、全溶后继续搅拌30min，减压蒸发溶剂至适量，冷却、结晶，过滤，得10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B枸橼酸盐。

实施例4 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B对PAF诱导的血小板聚集率的影响

实验方法：取雄性新西兰家兔，体重2.0-2.5kg。仰卧位固定于家兔手术台上，剪去颈部兔毛，皮下注射1％盐酸普鲁卡因注射液局部浸润麻醉，行血管插管后固定。手术结束后打开动脉夹，将血液放入含有3.8％柠檬酸钠的试管中，使血液与3.8％柠檬酸钠容积之比为9∶1。将上述制备的抗凝血液混匀后按不同的离心速度制备PRP和PPP。800rpm离心10min后吸取上层血浆即得PRP；将剩余血液2500rpm离心10min后吸取上层血浆即得PPP。先取250μl PPP加入测试杯中，然后放入测试孔，按“PPP”键进行定标。然后取250μl PRP加入测试杯中，在37℃预温槽中预热1min，放入测试孔后加入10μL不同浓度的药液，按“开始”键时立即加入PAF诱导剂10μL，以测定最大聚集率。每次测定4个通道，以求得平均最大聚集率。

结果显示：①10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B五个剂量组(0.037、0.37、3.7、37、370μg/ml)对PAF诱导的家兔血小板聚集有抑制作用，IC₅₀为7.24μg/ml。②10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B五个剂量组(0.037、0.37、3.7、37、370μg/ml)对PAF诱导的家兔血小板聚集有抑制作用，其中0.037μg/ml与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，0.37、3.7、37、370μg/ml与空白对照组比较有极显著性差异(P＜0.01)，量效关系曲线呈正相关(y＝20.055x+36.288，R2＝0.9955)，IC₅₀为4.83μg/ml。

药效实验结果显示代谢产物10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B的IC₅₀4.83μg/ml明显小于原药的IC₅₀(7.24μg/ml)，即代谢产物的抗PAF诱导的血小板聚集作用好于原药。

实施例5 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐急性毒性实验

测定方法：取清洁级ICR小鼠，按体重随机分组。每组10只小鼠，一共10组，每组按1～10号涂抹标记，进行给药，分别静脉注射原药10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B及10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B的甲磺酸盐，每种药物剂量分别为680、578、491、417、334mg/kg，连续观察14天，记录动物中毒症状及死亡情况。

实验结论：根据实验观察及计算得出，10-O-(二甲胺基乙基)银杏内酯B的甲磺酸盐的LD₅₀为520mg/kg；10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B的甲磺酸盐的LD₅₀为361mg/kg，代谢产物的毒性明显小于原药。

实施例6. 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐冻干粉针制备

称取10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐8g、甘氨酸80g、甘露醇160g、加注射用水至4000mL(1000支量)，搅拌并加热至70℃使溶解，加入4g针用活性碳，粗滤脱碳，后用0.22um微孔滤膜精滤，测定中间体含量，合格后灌装于10mL管制西林瓶中，每瓶约装4mL，半压入丁基胶赛。放入冻干机中按照预先设计好的冻干曲线进行冷冻干燥。干燥过程结束后压紧胶塞、铝塑组合盖轧盖，即得10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐冻干粉针。

实施例7. 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐无菌分装粉针制备

称取10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐8g、加入甘露醇、右旋糖酐或乳糖460 g，混合均匀(1000支量)。测定中间体含量，合格后用无菌分装器分装至10 mL西林瓶中，每瓶约装0.5g，压塞、轧铝塑组合盖，即得10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐无菌分装粉针。

实施例8 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐注射液制备

在称量间内称取10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐8g、甘氨酸80g、加注射用水至10000mL(1000支量)，搅拌并加热至60℃使溶解，用枸橼酸或枸橼酸钠调节pH值为6.0～8.0，加入10g针用活性碳，粗滤脱碳，后用0.22um微孔滤膜精滤，测定中间体含量，合格后灌装于10mL西林瓶，每瓶约装10mL，压紧丁基胶塞，轧盖。100℃流通蒸汽灭菌30min，灯检包装即得；若为无菌灌装，压塞、轧盖，灯检包装即得。

实施例9 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐大容量葡萄糖注射液制备

在称量间内称取10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐8g，甘氨酸2.5kg、依地酸钙钠100g、葡萄糖12.5kg、加注射用水至250L(1000瓶量)搅拌并加热至60℃使溶解，用枸橼酸或枸橼酸钠调节pH值为6.0～8.0，加入250g针用活性碳，粗滤脱碳，后用0.22um微孔滤膜精滤，测定中间体含量，合格后灌装于250mL玻璃瓶或PVC软袋中，每瓶或每袋约装255mL，加丁基胶塞，轧盖或熔封。100℃流通蒸汽灭菌30min，灯检包装即得；若为无菌灌装，灯检包装即得。

实施例10. 10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐大容量氯化钠注射液制备

在称量间内称取10-O-(甲胺基乙基)银杏内酯B甲磺酸盐8g，甘氨酸1000g、依地酸钙钠40g、氯化钠900g、加注射用水至100L(1000瓶量)搅拌并加热至60℃使溶解，用枸橼酸或枸橼酸钠调节pH值为6.0～8.0，加入100g针用活性碳，粗滤脱碳，后用0.22um微孔滤膜精滤，测定中间体含量，合格后灌装于100mL玻璃瓶或PVC软袋中，每瓶或每袋约装102mL，加丁基胶塞，轧盖或熔封。100℃流通蒸汽灭菌30min，灯检包装即得；若为无菌灌装，灯检包装即得。

Claims

1.一类抗血小板活化因子化合物，式II化合物及其相应的有机酸或无机酸盐，其结构特征是在银杏内酯B的10位的氧原子上连接有甲氨基乙基。

2.一种合成权利要求1的化合物的方法，该方法包括将甲基苄基胺基氯乙烷与银杏内酯B在弱碱和有机溶剂存在的条件下加热回流反应，所得产物经催化氢化去掉保护基团苄基得到式II化合物。

3.根据权利要求2所述式II化合物的合成方法，其特征在于弱碱为碱金属碳酸盐，碱金属碳酸氢盐的一种或几种任意混合。

4.根据权利要求1所述的一种抗血小板活化因子化合物，其特征主要是具有血小板活化因子(PAF)拮抗作用，可用于缺血性中风、炎症、哮喘等与PAF因子相关的疾病预防及临床治疗。

5.根据权利要求1所述的一种抗血小板活化因子化合物，其特征是可以和各类有机酸或无机酸成盐。

6.根据权利要求5所述的有机酸为枸橼酸、乙酰水杨酸和天冬氨酸；无机酸为甲磺酸、盐酸和硫酸。

7.药物组合物，包含权利要求1所述化合物及其合适的载体。