CN101948883B - 一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，使用价格低廉的玉米皮渣，减少了淀粉行业排放的高浓度废弃物对环境的污染。所得微生物油脂，可作为生物柴油生产的油脂原料。本发明的方法得到玉米皮渣转化率49.34-53.23％、菌体生物量16.82-19.17g/L、油脂含量41.69-50.26％和油脂产量7.012-9.635g/L。处理后的玉米皮渣，除生产较高含量及产量的微生物油脂外，其剩余组分及提油后菌体仍可满足作为饲料的需要。而且，水解后获得的可发酵糖可作为微生物发酵的培养液用于生产各种生物发酵产品，实现了对玉米综合利用的延伸及发展，符合循环经济的科学发展趋势。

Description

一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法
技术领域
本发明属于生物化工领域，特别涉及一种利用玉米淀粉工业副产物的玉米皮渣为原料，深黄被孢霉(Mortierella isabellina)为菌株，发酵生产微生物油脂的方法。
背景技术
由于石化资源的不可再生性和人们的环境意识的不断加强，各种可再生资源越来越受到重视，其中生物质资源是可以转化成能源产品和各种化工产品的重要的可再生资源。玉米作为生物质资源，产量丰富，尤新等在文献《粮食加工，2009，34(4)：12-16》的“玉米深加工发展主要成就、存在问题及今后发展方针”，报道了全世界每年的玉米产量达到7.7亿吨以上，中国每年的玉米产量也在1.50亿吨以上，而玉米淀粉作为化工和食品原料的应用极广，中国2007年玉米淀粉的生产量达到1350万吨。而姜岷，姚嘉文，吴昊等在文献《食品与发酵工业，2007，33(10)：6-9》的“稀酸水解玉米皮制备丁二酸发酵糖液的研究”，报道了玉米在湿磨法加工淀粉过程中会产生10-15％左右的玉米皮渣。玉米皮渣主要含有剩余淀粉、半纤维素、纤维素、蛋白质及灰分等。目前，玉米淀粉加工企业主要将玉米皮渣作为饲料出售，玉米皮渣的利用没有科学的深化，从玉米综合利用的延伸及发展的角度看，这是对生物质资源的浪费。
微生物油脂又称单细胞油脂，是由藻类、真菌类等微生物，利用碳水化合物、碳氢化合物和普通油脂为碳源，在菌体内转化为油脂储存。Ratledge C.在《Biochimie，2004，86：807-815》的“Fatty acidbiosynthesis in microorgaisms being used for singnal cell oil production”报道微生物油脂一般占菌体干重的20％以上，微生物油脂的脂肪酸组成与植物油相似，可作为制备生物柴油原料。
目前以动植物油脂生产生物柴油面临成本高、原料总量缺口大、供给季节性强等不利于规模化生产的难题。而且，持续扩大传统油料作物种植以扩大获取生物柴油生产原料，将存在着与人争粮、与粮争地等问题。开拓新的微生物油脂资源是降低生物柴油价格和保障生物柴油产业持续发展的关键。
发明内容
针对微生物油脂的现有技术中所存在的问题，本发明提供了一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法。
本发明以玉米皮渣为原料，两步水解法制备水解液，水解液处理并浓缩，添加氮源，通过生物转化获取微生物油脂。
本方法使用玉米皮渣价格低廉，可降低微生物油脂生产成本，实现玉米淀粉工业副产物资源高值化利用。同时，减少淀粉行业排放的高浓度废弃物对环境的污染，开辟玉米皮渣利用的新途径，所得微生物油脂，可作为生物柴油生产的油脂原料，具有良好的工业化应用前景。
本发明提供的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其步骤和条件如下：
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入碎粉至40-200目玉米干皮渣，按照干燥的玉米皮渣的质量g与水的体积mL的配比为1∶4-8加入水，加入玉米皮渣干重0.5-2％的α-淀粉酶，淀粉酶的活性为36000IU/mL，再加入玉米皮渣干重0.1-0.2％的CaCl2，于40-50℃恒温20-50min，升温至80-85℃恒温60-120min，再煮沸10min，降温至50-60℃加入玉米皮渣干重0.1-0.5％的糖化酶，糖化酶的活性为100000IU/mL，于60℃保温30min，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酶解液的上清液；
②玉米皮渣酸水解
在反应釜中加入步骤①玉米皮渣水解后的滤渣，按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶4-8加入水，再加入该溶液总体积比的0.2-0.6％盐酸水解2-4h，水解温度80-100℃，水解后采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酸解液的上清液；所述盐酸质量浓度为37％；
(2)玉米皮渣水解液的中和
将步骤(1)的①和②得到的上清液混合，再将其浓缩至所含的还原糖质量浓度为60-80g/L，加入混合上清液体积的1.5-2.0％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为6.0-7.0，70℃恒温20-30min，离心除去沉淀，得到玉米皮渣水解液；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养：在无菌条件下将已长满深黄被孢霉(Mortierellaisabellina)分生孢子的试管斜面加入2-3ml无菌水，轻轻振荡使之悬浮于无菌水中，吸取孢子悬浮液加入已灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，摇瓶培养温度28-30℃，摇瓶转速80-100r/min，培养时间20-24h，得到发酵种子液；
所述的马铃薯葡萄糖培养基的组成为：质量/体积浓度为20％的土豆汁1000ml，葡萄糖20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O 1.5g，pH 6.0；
所述的所述的马铃薯葡萄糖培养基在121℃条件下灭菌15min；
②发酵培养：在步骤(2)得到的玉米皮渣水解液中，添加玉米皮渣水解液体积的0.1-0.2％硫酸铵，在玉米皮渣发酵培养液中接入步骤(3)的①得到种子液，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的5-10％，在全自动发酵装置中进行培养，发酵温度28-30℃，通气量0.4-0.8vvm，搅拌转速120-200r/min，发酵周期4-6d，过滤或离心获得油脂微生物菌体；所述的玉米皮渣发酵培养液在121℃条件下灭菌15min；
(4)微生物油脂制备
将步骤(3)的②得到的油脂微生物菌体干燥，再用有机溶剂提取法，对干燥的油脂微生物菌体细胞内油脂进行提取：把干燥的油脂微生物菌体研磨后用滤纸包装，放入索氏提取器中，按照干燥的油脂微生物菌体的质量g与石油醚的体积mL的配比为1∶15加入石油醚，提取温度90-100℃，提取时间5-8h，用旋转蒸发仪减压去除有机溶剂，得到微生物油脂。
本发明所得微生物油脂的组成和含量如表1和图1所示。表1为微生物油脂的组成和含量，从表1可以看出，微生物油脂的组成主要为16碳系和18碳系脂肪酸，其中棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸含量较多，其组成与含量与植物油类似，可作为油脂资源用于生物柴油的制备。
表1微生物油脂组成和含量
Figure BSA00000256705400041
有益效果：本发明提供的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，使用价格低廉的玉米皮渣，可降低微生物油脂生产成本，实现玉米淀粉工业副产物资源高值化利用。同时，减少淀粉行业排放的高浓度废弃物对环境的污染，开辟玉米皮渣利用的新途径，所得微生物油脂，可作为生物柴油生产的油脂原料，符合工业化生产的要求。
本发明的方法得到玉米皮渣转化率49.34-53.23％、菌体生物量16.82-19.17g/L、油脂含量41.69-50.26％和油脂产量7.012-9.635g/L。
利用本发明的方法处理后的玉米皮渣，除生产较高含量及产量的微生物油脂外，其剩余组分及提油后菌体仍可满足作为饲料的需要。而且，水解后获得的可发酵糖可作为微生物发酵的培养液用于生产各种生物发酵产品。这是对玉米综合利用的延伸及发展，是对生物质资源的充分利用，符合循环经济的科学发展趋势。
附图说明
图1是微生物油脂气相色谱图。
对微生物油脂进行气相-质谱联机分析，结果见图1。图1表明，提取的微生物油脂主要由16碳和18碳脂肪酸组成，质量含量为95.271％，以及少量8碳、14碳、20碳、22碳、24碳脂肪酸。与植物油相比，其主要脂肪酸相似，即为棕榈酸、硬脂酸、油酸、亚油酸和亚麻酸，可作为油脂资源用于生物柴油的制备。
具体实施方式
实施例1
一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法如下：
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至40目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶4加入水，玉米皮渣为100g，加入400mL水，加入玉米皮渣干重0.5％α-淀粉酶，淀粉酶的活性36000IU/mL，再加入玉米皮渣干重0.1％CaCl2，40℃恒温50min后，升温至85℃后恒温60min，再煮沸10min，降温至60℃加入玉米皮渣干重0.5％的糖化酶，糖化酶的活性100000IU/mL，60℃保温30min，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酶解液的上清液；
②玉米皮渣酸水解
在反应釜中加入步骤(1)的①玉米皮渣水解后的滤渣，按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶6加入水，再加入该溶液总体积比的0.5％的盐酸，100℃水解2h，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酸解液的上清液；所述盐酸质量浓度为37％；
(2)玉米皮渣水解液的中和
将步骤(1)的①和②得到的上清液混合，再将其浓缩至所含的还原糖质量浓度为60g/L，加入混合上清液体积的1.5％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为7.0，70℃恒温20min，离心除去沉淀，得到玉米皮渣水解液；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
在无菌条件下将已长满深黄被孢霉(Mortierella isabellina)分生孢子的试管斜面加入3ml无菌水，轻轻振荡使之悬浮于无菌水中，吸取孢子悬浮液加入已灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，摇瓶培养温度28℃，摇瓶转速100r/min，培养时间24h，得到发酵种子液；
所述的马铃薯葡萄糖培养基的组成为：质量/体积浓度为20％的土豆汁1000ml，葡萄糖20g，KH2PO43g，MgSO4·7H2O 1.5g，pH 6.0；
所述的所述的马铃薯葡萄糖培养基在121℃条件下灭菌15min；
②发酵培养
在步骤(2)得到的玉米皮渣水解液中，添加玉米皮渣水解液体积的0.2％硫酸铵，在玉米皮渣发酵培养液中接入步骤(3)的①得到种子液，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的10％，在全自动发酵装置中进行培养，通气量0.4vvm、搅拌转速120r/min，28℃，发酵培养4天，离心或抽滤得到油脂微生物菌体；
所述的玉米皮渣发酵培养液在121℃条件下灭菌15min；
(4)微生物油脂制备
将步骤(3)的②得到的油脂微生物菌体干燥，再用有机溶剂提取法，对干燥的油脂微生物菌体细胞内油脂进行提取：称取10g干菌体，研磨后用滤纸包装，放入索氏提取器中，加入150ml石油醚，提取温度100℃，提取时间8h，用旋转蒸发仪减压去除有机溶剂，得到微生物油脂。
玉米皮渣转化率49.4％、菌体生物量17.45g/L、油脂含量43.54％和油脂产量7.60g/L。
实例2-5实例2-5的条件如表2-6所示，其他条件同实例1。
表2玉米皮渣的酶水解条件
Figure BSA00000256705400061
注：F/W：干玉米皮渣质量和水的体积比。
表3玉米皮渣的酸水解条件
Figure BSA00000256705400062
注：F/W：干玉米皮渣质量和水的体积比。
表4玉米皮渣水解液的中和条件
Figure BSA00000256705400063
表5油脂微生物发酵培养条件
Figure BSA00000256705400071
表6微生物油脂制备
Figure BSA00000256705400072
表7实施例结果
Figure BSA00000256705400073

Claims (6)

1.一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，步骤和条件如下：
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入碎粉至40-200目玉米干皮渣，按照干燥的玉米皮渣的质量g与水的体积mL的配比为1∶4-8加入水，加入玉米皮渣干重0.5-2％的α-淀粉酶，淀粉酶的活性为36000IU/mL，再加入玉米皮渣干重0.1-0.2％的CaCl2，于40-50℃恒温20-50min，升温至80-85℃恒温60-120min，再煮沸10min，降温至50-60℃加入玉米皮渣干重0.1-0.5％的糖化酶，糖化酶的活性为100000IU/mL，于60℃保温30min，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酶解液的上清液；
②玉米皮渣酸水解
在反应釜中加入步骤①玉米皮渣水解后的滤渣，按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶4-8加入水，再加入该溶液总体积比的0.2-0.6％盐酸水解2-4h，水解温度80-100℃，水解后采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酸解液的上清液；所述盐酸质量浓度为37％；
(2)玉米皮渣水解液的中和
将步骤(1)的①和②得到的上清液混合，再将其浓缩至所含的还原糖质量浓度为60-80g/L ，加入混合上清液体积的1.5-2.0％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为6.0-7.0，70℃恒温20-30min，离心除去沉淀，得到玉米皮渣水解液；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养：在无菌条件下将已长满深黄被孢霉(Mortierella isabellina)分生孢子的试管斜面加入2-3ml无菌水，轻轻振荡使之悬浮于无菌水中，吸取孢子悬浮液加入已灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，摇瓶培养温度28-30℃，摇瓶转速80-100r/min，培养时间20-24h，得到发酵种子液；
所述的马铃薯葡萄糖培养基的组成为：质量/体积浓度为20％的土豆汁1000ml，葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 1.5g，pH6.0；
所述的马铃薯葡萄糖培养基在121℃条件下灭菌15min；
②发酵培养：在步骤(2)得到的玉米皮渣水解液中，添加玉米皮渣水解液体积的0.1-0.2％硫酸铵，在玉米皮渣发酵培养液中接入步 骤(3)的①得到种子液，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的5-10％，在全自动发酵装置中进行培养，发酵温度28-30℃，通气量0.4-0.8vvm，搅拌转速120-200r/min，发酵周期4-6d，过滤或离心获得油脂微生物菌体；所述的玉米皮渣发酵培养液在121℃条件下灭菌15min；
(4)微生物油脂制备
将步骤(3)的②得到的油脂微生物菌体干燥，再用有机溶剂提取法，对干燥的油脂微生物菌体细胞内油脂进行提取：把干燥的油脂微生物菌体研磨后用滤纸包装，放入索氏提取器中，按照干燥的油脂微生物菌体的质量g与石油醚的体积mL的配比为1∶15加入石油醚，提取温度90-100℃，提取时间5-8h，用旋转蒸发仪减压去除有机溶剂，得到微生物油脂。
2.如权利要求1所述的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，步骤和条件如下：
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至40目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶4加入水，加入玉米皮渣干重0.5％α-淀粉酶，淀粉酶的活性36000IU/mL，再加入玉米皮渣干重0.1％CaCl2，40℃恒温50min后，升温至85℃后恒温60min，再煮沸10min，降温至60℃加入玉米皮渣干重0.5％的糖化酶，糖化酶的活性100000IU/mL，60℃保温30min，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酶解液的上清液；
②玉米皮渣酸水解
在小型玻璃反应釜中加入步骤(1)的①玉米皮渣水解后的滤渣，按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶6加入水，再加入该溶液总体积比的0.5％的盐酸，100℃水解2h，采用过滤或离心的方法得到玉米皮渣酸解液的上清液；所述盐酸质量浓度为37％；
(2)玉米皮渣水解液的中和
将步骤(1)的①和②得到的上清液混合，再将其浓缩至所含的还原糖质量浓度为60g/L，加入混合上清液体积的1.5％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为7.0，70℃恒温20min，离心除去沉淀，得到玉米皮渣水解液； 
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
种子斜面加入2ml无菌水，轻轻振荡使之悬浮于无菌水中，吸取孢子悬浮液加入已灭菌的马铃薯葡萄糖培养基中，摇瓶培养温度28℃，摇瓶转速100r/min，培养时间24h，得到发酵种子液；
所述的马铃薯葡萄糖培养基的组成为：质量/体积浓度为20％的土豆汁1000ml，葡萄糖20g，KH2PO4 3g，MgSO4·7H2O 1.5g，pH6.0；
所述的马铃薯葡萄糖培养基在121℃条件下灭菌15min
②发酵培养
在步骤(2)得到的玉米皮渣水解液中，添加玉米皮渣水解液体积的0.2％硫酸铵，在玉米皮渣发酵培养液中接入步骤(3)的①得到种子液，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的10％，在全自动发酵装置中进行培养，通气量0.4vvm、搅拌转速120r/min，28℃，发酵培养4天，过滤或离心获得油脂微生物菌体；
所述的玉米皮渣发酵培养液在121℃条件下灭菌15min；
(4)微生物油脂制备
将步骤(3)的②得到的油脂微生物菌体干燥，再用有机溶剂提取法，对干燥的油脂微生物菌体细胞内油脂进行提取：把干燥的油脂微生物菌体研磨后用滤纸包装，放入索氏提取器中，按照干燥的油脂微生物菌体的质量g与石油醚的体积mL的配比为1∶15加入石油醚，提取温度100℃，提取时间8h，用旋转蒸发仪减压去除有机溶剂，得到微生物油脂。
3.如权利要求1所述的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，所述的
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至40目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶6加入水，加入玉米皮渣干重1.0％的α-淀粉酶，再加入玉米皮渣干重0.10％的CaCl2，40℃恒温20min后，升温至80℃后恒温60min，降温至60℃加入玉米皮渣干重0.2％的糖化酶；
②玉米皮渣酸水解
在反应釜中加入步骤①玉米皮渣水解后的滤渣，按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶4加入水，再加入该溶液总体积比的0.2％盐酸水解3h，水解温度80℃； 
(2)玉米皮渣水解液的中和
将步骤(1)的①和②得到的上清液混合，再将其浓缩至所含的还原糖质量浓度为60g/L，加入混合上清液体积的2.0％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为6.0，70℃恒温20min；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
种子斜面加入2ml无菌水，摇瓶培养温度30℃，摇瓶转速80r/min，培养时间20h；
②发酵培养：添加玉米皮渣水解液体积的0.2％硫酸铵，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的6％，发酵温度28℃，通气量0.8vvm，搅拌转速140r/min，发酵周期6d；
(4)微生物油脂制备
提取温度90℃，提取时间8h；
其余的条件同权利要求1。
4.如权利要求1所述的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，所述的
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至80目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶8加入水，加入玉米皮渣干重1.5％的α-淀粉酶，再加入玉米皮渣干重0.15％的CaCl2，45℃恒温30min后，升温至85℃后恒温70min，降温至50℃加入玉米皮渣干重0.4％的糖化酶；
②玉米皮渣酸水解
按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶6加入水，再加入该溶液总体积比的0.4％盐酸水解4h，水解温度85℃；
(2)玉米皮渣水解液的中和
所含的还原糖质量浓度为65g/L，加入混合上清液体积的2.0％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为6.5，恒温30min；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
种子斜面加入3ml无菌水，摇瓶培养温度28℃，摇瓶转速90r/min，培养时间22h； 
②发酵培养：添加玉米皮渣水解液体积的0.1％硫酸铵，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的8％，发酵温度29℃，通气量0.7vvm，搅拌转速160r/min，发酵周期5d；
(4)微生物油脂制备
提取温度95℃，提取时间7h；
其余的条件同权利要求1。
5.如权利要求1所述的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，所述的：
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至160目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶6加入水，加入玉米皮渣干重2.0％的α-淀粉酶，再加入玉米皮渣干重0.10％的CaCl2，50℃恒温40min后，升温至80℃后恒温80min，降温至55℃加入玉米皮渣干重0.3％的糖化酶；
②玉米皮渣酸水解
按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL 的配比为1∶8加入水，再加入该溶液总体积比的0.5％盐酸水解2h，水解温度95℃；
(2)玉米皮渣水解液的中和
所含的还原糖质量浓度为70g/L，加入混合上清液体积的1.5％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为7.0，恒温25min；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
种子斜面加入3ml无菌水，摇瓶培养温度29℃，摇瓶转速95r/min，培养时间22h；
②发酵培养：添加玉米皮渣水解液体积的0.2％硫酸铵，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的10％，发酵温度30℃，通气量0.5vvm，搅拌转速180r/min，发酵周期6d；
(4)微生物油脂制备
提取温度95℃，提取时间6h；
其余的条件同权利要求1。
6.如权利要求1所述的一种利用玉米皮渣为原料发酵生产微生物油脂的方法，其特征在于，所述的 
(1)玉米皮渣两步水解
①玉米皮渣酶水解
在反应釜中加入粉碎至200目的干燥的玉米皮渣，按照干燥的玉米皮渣与水的质量g与体积mL比为1∶4加入水，加入玉米皮渣干重0.5％的α-淀粉酶，再加入玉米皮渣干重0.20％的CaCl2，45℃恒温50min后，升温至85℃后恒温90min，降温至60℃加入玉米皮渣干重0.1％的糖化酶；
②玉米皮渣酸水解
按该滤渣酶解前玉米皮渣干重g与水的体积mL的配比为1∶4加入水，再加入该溶液总体积比的0.6％盐酸水解4h，水解温度90℃；
(2)玉米皮渣水解液的中和
所含的还原糖质量浓度为80g/L，加入混合上清液体积的1.5％玉米浆，用Ca(OH)2调pH值为7.0，恒温30min；
(3)油脂微生物发酵培养
①种子培养
种子斜面加入2ml 无菌水，摇瓶培养温度30℃，摇瓶转速85r/min，培养时间24h；
②发酵培养：添加玉米皮渣水解液体积的0.1％硫酸铵，接入的种子液是添加硫酸铵后的玉米皮渣水解液体积的10％，发酵温度30℃，通气量0.6vvm，搅拌转速200r/min，发酵周期4d；
(4)微生物油脂制备
提取温度10℃，提取时间5h；
其余的条件同权利要求1。 
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