CN101939012B - 通过抑制pde而介导的用于治疗疾病的大环内酯类 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(I)或(I-A)的大环内酯类化合物：其中基团R1、R2、R3、R4、R12、R13和R14具有本申请中所定义的确定含义，其用于治疗或预防动物和人的炎性或过敏性疾病或癌症。

Description

通过抑制PDE而介导的用于治疗疾病的大环内酯类
本发明涉及通过应用大环内酯类化合物和含有所述化合物的药物组合物来治疗或预防炎性和过敏性疾病和动物或人体内与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病例如癌症。本发明还涉及在前述通过抑制磷酸二酯酶特别是磷酸二酯酶4(PDE4)介导的作用中具有抗炎、抗过敏和抗癌活性的大环内酯类化合物，所述的活性使得这些化合物用于治疗和/或预防例如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、类风湿性关节炎、特应性皮炎或炎性肠病、癌症疾病和其它疾病。
环腺苷酸(cAMP)是细胞中的关键的第二信使。已知增加环状AMP的水平可抑制在各种类型的炎性和免疫细胞中的细胞应答，所述的细胞包括淋巴细胞、单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肺上皮细胞。cAMP的细胞内浓度通过腺苷酸环化酶和环状核苷酸磷酸二酯酶(PDE)进行调节。PDE是通过将环状核苷酸cAMP和cGMP水解成AMP和GMP而使其失活的酶的家族。cAMP-特异性酶PDE4是促炎细胞中占主导地位的酶。已显示了PDE4与炎症性过程有关(参见例如Lipworth B.J.，Lancet(2005)365，167页或Giembycz M.A.，Curr.Opin.Pharmacol.(2005)，5，238页)。因此，PDE4的抑制剂可用于治疗和/或预防炎性和过敏性疾病诸如哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、银屑病、类风湿性关节炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、局限性回肠炎、成人呼吸窘迫综合症和多发性硬化。按照例如D.G.McEwan等人在″ChemoresistantKM12C Colon Cancer Cells Are Addicted to Low Cyclic AMP Levels in aPhosphodiesterase 4-Regulated Compartment via Effects onPhosphoinositide 3-Kinase(在磷酸二酯酶4受调控的隔室中通过对磷酸肌醇3-激酶的作用使化学抗性的KM12C结肠癌细胞处于低的环AMP水平)″，Cancer Res.2007；67(11)；2007年6月1日中所表明的，PDE4的抑制剂还可能用于治疗和/或预防癌症疾病。
文献中公开了为数众多的PDE4抑制剂(参见例如J.O.Odingo，Expert.Opin.Ther.Patents，2005，15(7)，773；M.Hendrix，C.Kallus，Methods and Principles in Medicinal Chemistry(药物化学中的方法和原理)(2004)，22卷(Chemogenomics in Drug Discovery)，243-288(Wiley-VCH))。许多已知的PDE4抑制剂表现出剂量限制性副作用诸如呕吐和头痛。罗氟司特和西洛司特位列最先进的PDE4抑制剂。
具有硫取代的稠合到大环内酯环的11，12-位上的5-元内酯环的红霉素衍生物已公开在例如WO 02/16380、WO 03/072588、WO2006/084410、US0038915和US6720308中。文献WO 02/16380、WO 03/072588和US0038915描述了在红霉素骨架的3位上具有羰基的所谓的酮内酯类。文献US6720308描述了所谓的脱水内酯类(anhydrolides)。文献WO2006/084410描述了具有连接到大环内酯3位的克拉定糖部分的化合物。发现在红霉素骨架的3位上具有羟基的化合物可作为最终化合物合成中的中间体。在例如J.Med.Chem.2003，46，2706中描述了3-酰基-衍生物的形成。
在上述文献中所述的所有大环内酯类化合物用于治疗细菌感染性疾病已被公开。由红霉素衍生的大环内酯类也已被报道具有抗炎活性(例如Journal of Antimicrobial Chemotherapy，1998，41，增刊B，37-46页；Bioorg.Med.Chem.Lett.，2006，16，5801页)。此外，已知由红霉素衍生的大环内酯类可在炎性细胞中累积。
现已令人惊奇地发现，某些具有稠合到红霉素骨架上的5元内酯环且由特定侧链取代的大环内酯类化合物选择性地抑制PDE4，这是对于该类分子而言到目前为止未曾公开过的新发现的活性。因此在动物或特别是人类中，这些大环内酯类可用于炎性疾病的预防和/或治疗、过敏性疾病的预防和/或治疗或用于癌症的预防和/或治疗。本文所述的分子与目前已知的PDE4抑制剂在结构上不同，因此特别有可能克服上述已知PDE4抑制剂的副作用。
发现的一些大环内酯类是新颖的。因此，一方面，本发明由此涉及式(I)的大环内酯类化合物：
其中
R1是基团-Y-X-Q；
Y是S、SO或SO2；
X是键或由氢原子和1-9个选自C、N、O和/或S的原子组成的直链基团，其中最多2个原子可以是N并且一个原子可以是O或S，一个碳原子可以以CO基团的形式出现，并且硫原子可以以SO2基团的形式出现，并且两个相邻的C原子可以以-CH＝CH-或-C≡C-存在，并且该X基团是未取代的或被-COO-W或-CONH-W所取代；
Q是基团-V-A1-L-A2-W，或者，如果X不表示键的话，Q还可以是-NR6R7；
V是任选取代的二价芳族或杂环基团；
W是任选取代的芳基或杂环基；或者在基团-V-A1-L-A2-W中，其中存在基团A1、L或A2中的至少一个，W还可以是具有由C、N、O和/或S组成的最多5个原子的单价的取代的或未取代的、饱和或不饱和的直链基团，其中一个碳原子可以以CO基团的形式存在，一个硫原子可以以SO2基团的形式存在，
A1和A2相互独立地不存在或者是C1-C4亚烷基；
L是单键、-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、-NH(CO)O-，或者如果A1和/或A2存在的话L还可以不存在；
R2是OR2a氢，且
R3是氢，或者
R2和R3与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团；
R2a是氢、乙酰基、-(C＝O)CH2NR2bR2c或-(C＝O)CH2CH2NR2bR2c；
R2b和R2c相互独立地是氢或可以被取代或未取代的C1-C6烷基，且所述烷基中最多两个原子可以是N、O或S且一个碳原子可以以C＝O基团的形式出现，或与它们所连接的氮原子一起形成其中最多两个原子可以是N、O或S且一个碳原子可以以C＝O形式出现的4-7元环；
R4是氢，或
R2和R4与它们所连接的碳原子之间的键一起形成双键；
R6和R7相互独立地选自氢、甲基；选自任选取代的芳基；芳烷基；杂环基和杂环基烷基；并且R6和R7之一还可以是基团-L-A2-W；
R12是氢，且
R13是OR14，或者
R12和R13与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团；
R14在式I中每次出现时独立地是氢或具有1至6个碳原子的饱和或不饱和的脂族基团；
＊表示为(R)或(S)构型的手性中心。
在一个更具体的方面，本发明涉及用于治疗通过抑制磷酸二酯酶、尤其是磷酸二酯酶4可改善或减轻的动物或人的疾病或病症的式(I)大环内酯类。
此外，本发明涉及用于预防和/或治疗动物或人的炎性疾病、预防和/或治疗动物或人的过敏性疾病或者用于预防和/或治疗动物或人的癌症的所述式(I)化合物。
特别优选将式(I)化合物用于预防和/或治疗动物或人的癌症。用于癌症治疗的用途是优选的。
本发明还涉及式(I-A)的大环内酯类化合物
其中
R1是基团-Y-X-Q；
Y是S、SO或SO2；
X是键或由氢原子和最多9个选自C、N、O和/或S的原子组成的直链基团，其中最多2个原子可以是N并且一个原子可以是O或S，一个碳原子可以以CO基团的形式出现，并且硫原子可以以SO2基团的形式出现，并且两个相邻的C原子可以以-CH＝CH-或-C≡C-的形式存在，并且该X基团是未取代的或被-COO-W或-CONH-W所取代；
Q是基团-V-A1-L-A2-W，或者，如果X不表示键的话，Q还可以是-NR6R7；
V是任选取代的二价芳族或杂环基团；
W是任选取代的芳基或杂环基；或者在基团-V-A1-L-A2-W中，其中存在基团A1、L或A2中的至少一个，W还可以是具有由C、N、O和/或S组成的最多5个原子的单价的取代的或未取代的、饱和或不饱和的直链基团，其中一个碳原子可以以CO基团的形式存在，一个硫原子可以以SO2基团的形式存在，
A1和A2相互独立地不存在或者是C1-C4亚烷基；
L是单键、-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-、-NH(CO)O-，或者如果A1和/或A2存在的话L还可以不存在；
R6和R7相互独立的选自芳基；芳烷基；杂环基和杂环基烷基；并且R6和R7之一还可以是基团-L-W；
R12是氢，且
R13是OR14，或
R12和R13与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团；
R14在式(I-A)中每次出现时独立地是氢或具有1至6个碳原子的饱和或不饱和脂族基团；并且
＊表示为(R)或(S)构型的手性中心；
其尤其用于预防和/或治疗动物或人的癌症。
治疗癌症是优选的。
通过本申请人于2007.08.08提出的申请号PCT/EP2007/058247、公开号WO2008/017696的国际申请中已经描述了式(I-A)化合物和其在治疗通过抑制特别是磷酸二酯酶4(PDE4)可改善或减轻的人的疾病或病症中的用途，并且基于该活性，它们在动物或人中用于预防和/或治疗炎性疾病以及用于预防和/或治疗过敏性疾病，但未用于预防和/或治疗与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病例如癌症。
对于本发明的目的而言，术语“大环内酯类化合物”应理解成包括所述化合物的单独的立体异构形式以及非对映异构体混合物。
此外，对于本发明的目的而言，术语“大环内酯类化合物”应理解成包括式(I)或(I-A)化合物的可药用的盐和N-氧化物以及在体内可裂解的所述化合物的酯。
本发明化合物对磷酸二酯酶(PDE)、特别是对PDE4表现出明显的抑制活性，已显示PDE4与炎性过程有关(参见例如Lipworth B.J.，Lancet(2005)365，167页或Giembycz M.A.，Curr.Opin.Pharmacol.(2005)，5，238页)。这在实施例中进行了证实。因此，本发明化合物用于治疗通过抑制磷酸二酯酶、特别是磷酸二酯酶4(PDE4)可改善或减轻的动物或人的疾病或病症的用途是本发明的一个方面。基于该活性，本发明化合物特别用于在选自动物、尤其是哺乳动物并还更优选人的个体中预防和/或治疗炎性疾病以及用于治疗和/或预防过敏性疾病并用于治疗与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病。
这些疾病特别重要的实例例如包括慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、类风湿性关节炎、特应性皮炎或炎性肠病和与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病。
对于本发明的目的而言，术语“芳族基团”和“芳基”是指具有一个或多个优选6-元的母核并且具有6至14个碳原子的芳族基团。其实例特别是苯基、萘基、蒽基和菲基。这些基团可进一步被1、2、3或4个选自例如下列的取代基所取代：烷基诸如以下所定义的烷基，低级烷氧基诸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基，C3-C7环烷基氧基或C3-C7环烷基-C1-C4烷氧基如环戊氧基、环丙基甲氧基，卤素诸如以下所定义的卤素、卤素取代的烷基诸如二氟甲基或三氟甲基、三氯乙基，卤素取代的烷氧基诸如二氟甲氧基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巯基、羟基、氨基甲酰基、羧基。在多于一个的取代基连接到芳基上的情况下，这些取代基可彼此相同或不同。还包括在本发明范围内的是具体基团的不同的可能的区域异构体(构造异构体)，例如“二甲氧基-苯基”是指两个甲氧基取代基可连接到苯环的2，3-位、2，4-位、2，5-位、2，6-位、3，4-位、3，5-位和3，6-位上。
如本文所用的，术语“杂环基团”或“杂环基”指不饱和或饱和、未取代的或取代的5-至10-元(单-或二环)杂环环系，其含有至少一个选自硫、氧、和优选氮的杂原子。示例性的杂环取代基包括但不限于例如下列基团：哌啶基、吗啉基、2-、3-或4-吡啶基、吡咯烷基、哌嗪基、1H-吡唑-1-基、1H-咪唑-1-基、1H-咪唑-2-基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、三嗪基、噻唑基、噻二唑基、二唑基、三唑基，例如1H-[1，2，4]-三唑-1-基、1H-四唑基、2H-四唑基；噻吩基、呋喃基(2-呋喃基或3-呋喃基)、1H-氮杂基、四氢噻吩基、3H-1，2，3-氧杂噻唑基、1，2，3-二唑基、1，2，5-氧杂二硫杂环戊烯基(oxadithiolyl)、异唑基、异噻唑基、4H-1，2，4-二嗪基、1，2，5-噻嗪基、1，2，3，5-噻二嗪基、1，3，4-硫杂二氮杂基、1，2，5，6-氧杂三氮杂基、唑烷基、四氢噻吩基等，或稠合的杂环环系诸如喹啉基例如喹啉-8-基、喹啉-5-基、喹啉-2-基、喹啉-6-基、喹啉-3-基、异喹啉基(6-异喹啉基)、喹唑啉基、1H-苯并三唑基、1H-咪唑并[4，5-c]吡啶基、5H-咪唑并[4，5-c]吡啶基、1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-1-基、3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-3-基、1H-吡唑并[3，4-b]吡啶基、1，2，3，4-四氢-喹啉基、1，2，3，4-四氢-异喹啉基、噻吩并[2，3-b]吡啶基、苯并噻唑基(例如2-苯并噻唑基)、1H-苯并咪唑基、1H-吲哚基、1，2，3，4-四氢喹啉基、嘌呤基、例如9H-嘌呤-9-基、6-氨基-9H-嘌呤-9-基、2，6-二氨基-9H-嘌呤-9-基、1H-嘌呤-6-基、1H-2，3-二氢吲哚-1-基、2，1，3-苯并二唑-5-基、2，1，3-苯并二唑-4-基、1，3-苯并间二氧杂环戊烯-5-基、2，3-苯并唑烷基、1，2-二氢-唑并[5，4-c]吡啶基、6-喹喔啉基、2-苯并[b]噻吩-3-基、3，4-二氢-1H-2-氧代-喹啉-6-基。
杂环基可进一步被一个或多个取代基所取代。所述的取代基包括例如烷基诸如下文所定义的烷基、低级烷氧基诸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基、C3-C7环烷基氧基或C3-C7环烷基-C1-C4烷氧基如环戊氧基、环丙基甲氧基、卤素诸如下文所定义的卤素、卤素取代的烷基诸如三氟甲基、三氯乙基、卤素取代的烷氧基诸如二氟甲氧基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巯基、羟基、氨基甲酰基、羧基、氧代基团。在多于一个的取代基连接到杂环基上的情况下，这些取代基可彼此相同或不同。不同的区域异构体也包括在本定义的范围内，例如“二甲基吡啶基”是指两个甲基取代基可在所有的化学上可能的位置上连接到吡啶基上。例如两个甲基取代基可连接到2-吡啶基上的3，4-位、4，5-位、5，6-位、3，5-位、3，6-位和4，6-位上。两个甲基取代基可连接到3-吡啶基上的2，4-位、2，5-位、2，6-位、4，5-位、4，6-位和5，6-位上。两个甲基取代基可连接到4-吡啶基上的2，3-位、2，5-位、2，6-位和3，5-位上。
对杂环基而言尤其优选的取代基是烷基、烷氧基、氧代、卤素、氨基、烷基氨基或二烷基氨基，其中烷基和烷氧基如上文所定义的。
优选的取代的杂环的实例是1H-嘧啶-2，4-二酮、1H，3H-嘧啶-2，4-二酮-5-甲基、1H-嘧啶-4-氨基-2-酮、6-氨基-9H-嘌呤、6-二甲基氨基-9H-嘌呤、2，6-二氨基-9H-嘌呤、6-氨基-8-[(3-吡啶基甲基)氨基]-9H-嘌呤、4-氨基-咪唑并[4，5-c]吡啶、4-甲氧基-咪唑并[4，5-c]吡啶、1-乙基-吡唑并[3，4-b]吡啶、4-苯基-1H-吡唑、3-(吡啶-3-基)-1H-吡唑、3-(吡啶-4-基)-1H-吡唑-1-基、3-(吡啶-3-基)-1H-咪唑-1-基、3-(吡啶-4-基)-1H-咪唑-1-基、3-(吡啶-3-基)-1H-[1，2，4]三唑、3-(吡啶-4-基)-1H-[1，2，4]三唑和2-氧代-1，2，3，4-四氢-喹啉。
如本文所用的，术语“烷基”是指优选具有1至6个碳原子的支链或直链的饱和烃基。所述的基团是例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、戊基、己基等。所述烷基可进一步被一个或多个选自例如下列的取代基所取代：低级烷氧基诸如C1-C4烷氧基如甲氧基、乙氧基、丙氧基或正丁氧基、C3-C7环烷基氧基或C3-C7环烷基-C1-C4烷氧基如环戊基氧基、环丙基甲氧基、卤素诸如以下所定义的卤素、卤素取代的烷基诸如二氟甲基或三氟甲基、三氯乙基、氰基、硝基、氨基、烷基氨基、二烷基氨基、烷硫基、巯基、羟基、氨基甲酰基、羧基或氧代。如果一个以上的取代基存在，那么这些取代基可彼此相同或不同。
术语脂族基团指优选具有1至6个碳原子的支链或优选直链的烃基，其可以是饱和或不饱和的。实例包括关于烷基所述的那些基团、乙烯基、正丙烯基、正丙炔基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基等。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。优选氟和氯。
在组合词“杂环基烷基”和“芳烷基”中，单一部分的“杂环基”、“芳”(＝芳基)和“烷基”具有以上所示的含义。
本文所用的术语C1-C4亚烷基指例如亚甲基、亚乙基、亚正丙基、亚异丙基和亚正丁基。
R1是式-Y-X-Q的基团。
在该式中，Y通常可以是S、SO或SO2；优选的是S和SO2，尤其是S。
X是键；即，是“不存在”的，或者是由氢原子和最多9个选自C、N、O和/或S的原子组成的直链基团，其中最多2个原子可以是N并且一个原子可以是O或S、一个碳原子可以以CO基团的形式存在，并且硫原子可以以SO2基团的形式存在。两个相邻的C原子还可以以-CH＝CH-或-C≡C-的形式存在。基团X可以是未取代的或被式-COO-W或-CONH-W的取代基所取代，其中W具有本文所定义的含义。正如已指明的那样，具有最多9个原子的间隔基团X可带有另外的氢原子以使C原子饱和从而形成例如亚甲基，或使N原子饱和以形成氨基。优选该间隔基团由2至5个选自C、N、O和/或S的原子所组成。
优选的基团X是：(CH2)n、(CH2)mOCH2、(CH2)2NCH3(CH2)2、CH2CH2NH、(CH2)pCOO、(CH2)pCONH、O(CH2)p或HN(CH2)p，其中n和p是1、2或3，并且m是0或者优选1、2或3，并且基团X与基团Y通过碳原子连接在一起。
特别优选的基团X是1，2-亚乙基、亚正丙基或亚异丙基和O(CH2)p或HN(CH2)p，其中p是2或3，优选2。
Y和X的适当组合是例如下列基团：
对于Y＝S，X是1，2-亚乙基、1，2-和1，3-亚丙基、CH2CO、CH2COCH2、CH2CONR、CH2CONRCH2、CH2CONRCH2CH2、CH2CH2O、CH2CH2CONR、CH2CH2CONRCH2、CH2CH2NR、CH2CH2NRCO、CH2CH2NRSO2、CH2CH2NRCOO、CH2CH2OCH2、CH2SO2NR、CH2SO2NRCH2、CH2CH2OCONR、CH2CH＝CH或CH2C≡C；其中在以上表达式中的R是氢或甲基，并且其通过碳原子与基团Y连接在一起。
特别优选的Y和X的组合是SCH2CH2、SCH2CH2NH、SCH2CH2O、SCH2CH2CH2、SCH2CH2CH2NH和SCH2CH2CH2O。
在式I中，Q是式-V-A1-L-A2-W的基团。或者，并且如果X不表示键的话，式I中的Q还可以是-NR6R7。
V可以是二价芳族或杂环基团，例如以上特别提到的基团之一。
在另一组优选的式(I)或(I-A)化合物中，基团V是下式的二价基团：
其中
是亚苯基环或x-元饱和或不饱和的二价杂环脂族或杂芳族环，其含有2至(x-1)个碳原子和1至4个选自硫与优选的氧和氮的杂原子，x是5至8、优选5或6，R8和R9独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-环烷基氧基、C3-C7环烷基-C1-C4烷氧基、卤素、卤素-取代的C1-C4烷基、卤素-取代的C1-C4烷氧基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巯基、羟基、氨基甲酰基、羧基、氧代基团；或芳基或杂环基，其可以是未取代的或被一个或多个以上所述的除芳基或杂环基之外的取代基所取代，或者当两个取代基R8和R9位于环的相邻碳原子上时，这两个取代基还可以与所述的相邻碳原子一起形成5-或6-元芳环或x-元饱和或不饱和杂环脂族或杂芳族环，其含有2至(x-1)个碳原子和1至4个选自硫与优选的氧和氮的杂原子，x是5至8，优选5或6，并且其中V可以总共具有1至4个如对R8和R9定义的这类取代基，并且自由价可位于基团V的一个或两个环上。
V的特别优选的含义包括：
式(I)或(I-A)中的W可以是以上所述的芳基或优选杂环基。
在基团-V-A1-L-A2-W中，其中存在基团A1、L或A2中的至少一个，W还可以是单价的取代的或未取代的、饱和或不饱和的直链基团，该基团具有最多5个由C、N、O和/或S组成的原子，其中一个碳可以以CO基团的形式存在，一个硫原子可以以SO2基团的形式存在。在这种情况下，W还可以带有另外的氢原子以饱和C或N原子，正如以上对基团X所述的那样。
在式(I)或(I-A)的优选实施方案中，基团W表示下式的基团：
其中
是苯基环或x-元饱和或不饱和的杂环脂族或杂芳族环，其含有2至(x-1)个碳原子和1至4个选自硫与优选的氧和氮的杂原子，x是5至8、优选5或6，R10和R11独立地选自氢、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C3-C7环烷基氧基、C3-C7环烷基-C1-C4烷氧基、卤素、卤素-取代的C1-C4烷基、卤素-取代的C1-C4烷氧基、氰基、硝基、氨基、C1-C4烷基氨基、二(C1-C4)烷基氨基、C1-C4烷硫基、巯基、羟基、氨基甲酰基、羧基和氧代基团；或当两个取代基R10和R11位于环的相邻碳原子上时，这两个取代基可以与所述的相邻碳原子一起形成5-或6-元芳环或x-元饱和或不饱和杂环脂族或杂芳族环，其含有2至(x-1)个碳原子和1至3个选自硫与优选的氧和氮的杂原子，x是5至8，优选5或6，其中W可以总共具有1至4个如对R10和R11所定义的这类取代基，并且自由价可位于基团W的任何一个环上。
W的特别优选的实例是下列基团：
其中R16是氢或C1-C4烷基，尤其是甲基。
在基团-V-A1-L-A2-W中，基团A1和A2通常相互独立地不存在或者是C1-C4亚烷基。L通常选自单键、-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-和-NH(CO)O-，优选选自-O-、-S-、-SO2-、-NH-、-CO-、-(CO)O-、-O(OC)-、-(CO)NH-、-NH(CO)-、-(SO2)NH-、-HN(SO2)-、-HN(CO)NH-、-O(CO)NH-和-NH(CO)O-，而如果A1和/或A2存在的话L还可以是不存在的。
在本发明的大环内酯类化合物的优选实施例中，A1和A2相互独立地不存在或表示C1-C2亚烷基；并且L选自-NH-、-(CO)NH-和-NH(CO)-；或者是不存在的。
特别优选的是如下式(I)和(I-A)的化合物，其中
A1、A2相互独立地不存在或者是C1-C2亚烷基；
L是-NH-、-(CO)NH-或-NH(CO)-；
V是下式的二价基团：
并且，
W是下式的基团：
还优选的是式(I)或(I-A)的化合物，例如前面的段落中提到的化合物，
其中
Y是-S-，并且
X是-CH2-CH2-CH2-，或者优选是分别通过NH基团或O氧原子连接到基团Q上的-CH2-CH2-NH-或-CH2-CH2-O-、或-CH2-CH2-，最优选-CH2-CH2-。
如果X在式(I)或(I-A)中不表示键，则Q还可以是-NR6R7。在这种情况下，R6、R7可独立地选自芳基、芳烷基、杂环基和杂环基烷基，例如如以上所解释的那样，并且R6和R7之一还可以是基团-L-A2-W；优选-L-W，其中A2、L和W具有以上所述的含义之一。
本发明的相应的大环内酯类化合物的优选实施例是其中的Q是基团-NR6R7且Q具有下列结构式之一的式I化合物：
其中指甲氧基。
在式(I)或(I-A)的化合物的另外的特定实施方案中，基团Q表示上文所概括定义的基团W。具体的这种类型的化合物包含作为基团W的下式之一的基团：
特别优选的是式(I)化合物，其中R12和R13与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团，并且R14是甲基。
此外，下面的优选方案还与文中所述的其它优选方案组合使用：
当基团R2a存在于式(I)化合物中时，则基团R2a优选是氢。
还优选的是式(I)化合物，其中R2和R3与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团。
还优选的是式(I)化合物，其中R2和R4与它们所连接的碳原子之间的键一起形成双键，以及式(I)化合物，其中R4是氢。
在本发明中所用的还优选的式(I)和式(I-A)化合物的实施方案包括：
其中R13是羟基或烯丙氧基的化合物；
其中R12和R13与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团的化合物；
其中R14表示氢或优选的甲基的化合物；
特别是，其中大环内酯环6位的OR14表示甲氧基的化合物。
重申的是，所述的优选方案可以与一种或多种本文中所述的其它优选方案组合。
根据本发明使用的化合物的具体实例包括例如具有下式之一的结构的化合物：
下列化合物表示尤其用于预防和/或治疗动物或人的癌症的本发明化合物的新的实例：
如上文所述，如果需要的话，式(I)或式(I-A)的大环内酯类化合物还可以以可药用的酸加成盐的形式存在和使用。不仅考虑与无机酸形成的盐，而且要考虑与有机酸形成的盐。盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐等是所述盐的实例。
此外，式(I)或式(I-A)化合物还可以是在体内可裂解的酯的形式并以体内可裂解的酯使用，例如与氨基糖部分的2′-羟基形成的酯。适合的酯通常是乙酸酯、新戊酸酯、酒石酸酯、马来酸酯、琥珀酸酯等。
式(I)化合物及其可药用的酸加成盐或其在体内可裂解的酯可依据本发明例如用于预防和/或治疗疾病诸如慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、类风湿性关节炎、特应性皮炎或炎性肠病或者用于预防和/或治疗疾病诸如慢性支气管炎、肺气肿、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、银屑病、脓毒性休克、成人呼吸窘迫综合症和多发性硬化。
式(I)及式(I-A)化合物都还可以依据本发明用于预防和/或治疗癌症。
对于本发明的治疗而讲，适合的个体主要是动物，特别是哺乳动物和人。用于人的用途是优选的。
还可以依据本发明将式(I)和式(I-A)化合物以含有一种或多种所述化合物和可药用载体的药物组合物的形式用作药物。式(I)和式(I-A)化合物具有良好的口服吸收性质。
因此，本发明的另一个实施方案是含有式(I)化合物或其上述优选实施方案之一或其可药用的酸加成盐、其N-氧化物或其体内可裂解的酯以及可药用载体的药物组合物，所述药物组合物用于
·预防和/或治疗选自动物或人的个体的病症和/或疾病的方法中，其中该方法是基于抑制所述个体中磷酸二酯酶特别是磷酸二酯酶4；
·用于预防和/或治疗动物或人的炎性或过敏性疾病或与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病；特别用于预防和/或治疗人的哮喘、慢性支气管炎、肺气肿、特应性皮炎、荨麻疹、过敏性鼻炎、过敏性结膜炎、银屑病、慢性阻塞性肺病(COPD)、脓毒性休克、溃疡性结肠炎、炎性肠病例如人的局限性回肠炎、成人呼吸窘迫综合症和多发性硬化、类风湿性关节炎；更优选地，用于预防和/或治疗人的慢性阻塞性肺病(COPD)、哮喘、类风湿性关节炎或特应性皮炎；以及
·用于预防和/或治疗人的癌症；特别是
·用于治疗癌症。
本发明的另一个特定实施方案是用于预防和/或治疗人的与不受控制的细胞生长、增殖和存活相关的疾病例如癌症的含有式(I-A)化合物或其上述优选实施方案之一或其可药用的酸加成盐、其N-氧化物或其体内可裂解的酯以及可药用载体的药物组合物。
本发明的药物组合物和产品可例如以如片剂、薄膜衣片剂、糖衣片剂、硬和软胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式经口给药，或以如栓剂的形式直肠给药，或例如通过注射来胃肠外给药，或经鼻给药，或通过吸入或透皮给药，或例如通过在局部施用来局部给药，优选将所述化合物局部或口服给药。
含这些化合物的药物组合物可利用本领域技术人员熟悉的常规方法制得，例如通过将各组分与适合的、无毒的、惰性、治疗上相容的固体或液体载体物质和如果需要时的常用的药用辅料一起混合成剂型来制得。
尽管可以将式(I)或(I-A)化合物主要按照本发明如所述的那样使用，但是优选的是将化合物掺入到尤其适合于所面临的给药途径即适于口服、胃肠外或局部剂型的组合物中，所述给药途径是本领域技术人员已知的或可以用常规技术发展的。所述药物组合物可含有作为任选组分的任何的在药物制剂的制备中通常使用的各种辅料。
因此，例如，为了将该组合物配制成口服剂型，可以使用作为任选的组分的填充剂诸如微晶纤维素、磷酸钙或乳糖；崩解剂诸如淀粉、交联的羧甲基纤维素钠或交联的聚乙烯吡咯烷酮；和润滑剂诸如滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸钙等。然而，应该充分理解的是本文所述的任选组分仅通过举例的形式给出并且本发明不限于在此所述的用途。可将本领域公知的其它辅料用于实现本发明。
像这样适合的载体物质不仅可以是无机的载体物质，而且也可以是有机的载体物质。因此，对于片剂、薄膜衣片剂、糖衣片剂和硬胶囊剂来说，其中可使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐。用于软胶囊剂的适宜载体是例如植物油、石蜡、脂肪和半固体和液体多元醇(取决于活性物质的性质)。用于制备溶液剂和糖浆剂的适宜载体物质是例如水、醇、多元醇、蔗糖、转化糖和葡萄糖。用于栓剂的适宜载体是例如天然的或硬化油、石蜡、脂肪和半液体或液体多元醇。
作为药用辅料，涉及到的是常规的防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、用于调节渗透压的盐、缓冲剂、包衣材料和抗氧化剂。
式(I)或(I-A)化合物及其酸加成盐、N-氧化物或其在体内可裂解的酯可用于胃肠外给药。对于该目的而言，特别是作为注射用制剂，将化合物以冷冻干燥物或干粉形式与常规物质如水或等渗的常规盐溶液一起稀释来使用。
式(I)或(I-A)化合物及其酸加成盐、N-氧化物或其在体内可裂解的酯还可以用于局部给药，对于该目的而言，优选将其以如软膏剂、霜剂或凝胶剂形式的局部制剂使用。
因此，本发明的另一方面是式(I)化合物或其酸加成盐、N-氧化物或体内可裂解的酯在生产用于治疗通过抑制人磷酸二酯酶特别是人磷酸二酯酶4可改善的病症或疾病的药物中的用途，和在生产用于预防和/或治疗选自动物和人的个体的炎性或过敏性疾病或与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病例如癌症的药物中的用途，以及式(I-A)化合物或其酸加成盐、N-氧化物或体内可裂解的酯在生产用于预防和/或治疗选自动物和人的个体的与不受控制的细胞生长、增殖和/或存活相关的疾病例如癌症的药物中的用途。
在另一方面，本发明涉及用于治疗罹患可通过抑制磷酸二酯酶、特别是磷酸二酯酶4而被改善的病症或疾病的个体的方法，其中个体选自需要所述治疗的动物，特别是哺乳动物，且更优选人，并将对于改善所述病症或疾病有效量的，或者更特别地，将对于治疗或预防所述个体的炎性或过敏性疾病有效量的式(I)化合物给药至所述个体，并且其中将预防或治疗所述个体的所述炎性或过敏性疾病有效量的式(I)化合物给药至所述个体，或者本发明涉及用于治疗罹患癌症的选自动物、特别是哺乳动物、并更优选人的个体的方法，其中将治疗所述个体的癌症有效量的式(I)或式(I-A)化合物的给药至所述个体。
对于哺乳动物、特别是人的炎性、过敏性疾病或癌症的治疗和/或预防来说，常用的日剂量是约10mg至约2000mg、尤其是约50mg至约1000mg，本领域的普通技术人员知道，许多其他已知的参数之一的剂量还取决于哺乳动物的年龄、类型、重量和哺乳动物的状况或要预防或治疗的疾病的种类。日剂量可以以单一剂量的形式给药，或可分成数次剂量给药。可预期的适合的平均的单一剂量通常约为10mg、100mg、250mg、500mg和1000mg。
本发明所用的式(I-A)化合物可由红霉素A、克拉霉素或任何其它6-O-烷基-红霉素A、6-O-链烯基-红霉素A或6-O-炔基-红霉素A作为原料制得。其中的Rp1和Rp2是H、乙酰基、苯甲酰基或任何其它适合的羟基保护基的式II、III和IV化合物可通过本领域已知的方法制得(流程1)。
流程1
为了得到其中的Rp1和Rp2如以上所定义的式II化合物，将原料大环内酯的2’-和4”-羟基如在以下文献中所述通过与适合的酸酐或酰氯反应来相继或同时保护，例如Baker等人，J.Org.Chem.1988，53，2340-2345和Kashimura等人，J.Antibiotics，2001，54，664-678。然后将式II化合物例如按照Baker等人，J.Org.Chem.1988，53，2340-2345所述的相类似的方法转化成式IV化合物。
将式IV化合物的12位上的羟基通过用2-氯乙酸、活化剂诸如DCC和DMAP或用2-氯乙酸酐、吡啶、DMAP在氯化溶剂诸如二氯甲烷中处理而酯化。然后将中间体V用适合的亲核试剂Q-X-SH在丙酮中在碱诸如DBU的存在下处理得到式VI化合物，其中R1、Rp1和Rp2如以上所定义。根据R1的性质，式VI化合物还可通过将式IV化合物与适合的羧酸(R1CH2COOH)、活化剂诸如DCC和DMAP在适合的溶剂诸如二氯甲烷中反应来合成，以得到式VI化合物。将式VI化合物用碱金属碱诸如NaH或叔丁醇钾或LDA在非质子溶剂诸如DMF或THF中处理得到式VII化合物(流程1)。
用甲醇在20℃至60℃温度反应2-5天将其中的R1、Rp1和Rp2如以上所定义的式VII化合物在2′-位上脱保护以得到式VIII化合物(流程2)。通过将该化合物用DBU在回流甲醇中处理3至12小时(J.Antibiotics，2001，54(8)，664)或通过用胍/硝酸胍在甲醇/二氯甲烷中处理(TetrahedronLetters 1997，38(9)，1627)或用碳酸钾在甲醇中或用MeONa的甲醇混合物、优选用DBU在回流甲醇中处理5至7小时来将4”-羟基脱保护以得到式Ia化合物。
或者，用以上关于4”-羟基的脱保护所述的方法之一能将式VII化合物同时在2’-和4”-位上脱保护以得到式Ia化合物(流程2)。
流程2
在其中R1是S-Rp3且Rp3是硫保护基例如苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基或4-硝基-苄基、优选4-甲氧基苄基的情况下，将中间体VIIa在分子筛的存在下按照类似于WO03/072588所述的方法转化成二硫化物衍生物IX，其中Rp1和Rp2如以上所定义，并且Rp4是例如3-硝基-2-吡啶基或甲基。
将式IX化合物用还原剂诸如三烷基膦、优选三丁基膦或三芳基膦、优选三苯基膦在溶剂诸如含水的丙酮、含水的二甲基甲酰胺、含水的二烷或含水的四氢呋喃、优选含水的二甲基甲酰胺中优选在0℃至60℃处理1分钟至1小时以得到化合物X。将化合物X、优选未经分离的化合物X直接在相同的溶剂体系中用式Q-X-Lg的化合物处理，其中Q和X如前所定义，并且Lg是离去基团，例如氯、溴、碘、甲磺酰基氧基、对甲苯磺酰基氧基、三氟甲磺酰基氧基，或在X表示羰基或磺酰基的情况下为乙烯基，从而得到式VII化合物。反应优选在碱诸如碱金属碳酸盐或碳酸氢盐、例如碳酸钾、碳酸铯或碳酸氢钠或有机碱例如三乙胺、N-乙基N，N-二异丙基胺、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯或1，5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯、优选1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯的存在下在0℃至50℃进行。将催化量的碘盐、优选碘化钠加入到反应混合物中可有利于反应(流程3)。
对于R1＝S-Rp3
流程3
或者，其中的R12和R13一起形成基团C＝O并且R14具有以上所述的含义并且R1是基团-Y-X-Q、其中X和Q具有以上所述的相同含义并且Y是S的式I化合物还可通过以下所述的方法制得：
a)将具有下式结构的大环内酯类化合物
按照本身已知的方式转化成式IV化合物，例如按照以上关于流程1所述的方法转化，
其中Rp1和Rp2均是羟基保护基并且R14如以上所定义，
b1)将所述的式IV化合物在活化的氯乙酸衍生物例如二(氯乙酸)酸酐的存在下按照本身已知的方式转化成式V化合物，例如按照以上流程1中所述的方法转化，
其中Rp1和Rp2以及R14具有以上所述的含义；
b2)将所述的式V化合物进一步与其中M表示碱金属原子并且X和Q具有以上所述的含义的式MS-X-Q化合物反应以形成式VI化合物
其中R1是-S-X-Q并且X、Q、Rp1和Rp2以及R14具有以上所述的含义，
c)将所述的式VI化合物在非质子溶剂中与碱金属碱反应以形成式VII化合物
其中R1与Rp1和Rp2以及R14具有以上所述的含义，并且
同时或相继地除去羟基保护基Rp1和Rp2以形成式I-A化合物。
如果需要的话，这些化合物可按照本身已知的方式例如按照流程5所述转化成式I化合物，其中R2是氢并且R3选自羟基或-O-(脂族基团)，所述的脂族基团表示具有1至6个碳原子的饱和或不饱和的脂族基团。
式Ic化合物例如可通过将式Ib化合物(其中的Y＝S的式I化合物)用2至2.5当量3-氯过苯甲酸(mCPBA)和4至5当量NaHCO3在溶剂诸如二氯甲烷中在0℃至室温下、优选0℃处理1小时至3小时来制得。将在反应过程中在糖残基的二甲基氨基上形成的N-氧化物在后处理时通过将有机相用焦亚硫酸钠水溶液在室温下处理5分钟至24小时来还原，以得到所需的式Ic化合物，为非对映异构体混合物。或者，如果适合的话，将N-氧化物按照标准方法通过催化氢化还原。式Ic化合物还可按照以上所述的方法但是在室温下处理1至48小时而进一步氧化，在还原N-氧化物之后得到式Id化合物。化合物Id还可从式Ib化合物通过利用3.5至10当量氧化剂和7至20当量NaHCO3在0℃至室温处理5至48小时、然后通过以上所述的方法进行后处理而一步得到(流程4)。
在其中的Q进一步被对氧化敏感的取代基如氨基取代的情况下，在将硫化物Ia进行氧化之前可能需要对这些取代基进行保护。可将本领域通常已知的适当保护基按照T.W.Green等，Protective Groups in OrganicSynthesis(有机合成中的保护基)，John Wiley&Sons，1999所述的标准方法引入。氧化后，可将保护基按照T.W.Green等人所述的标准方法除去。
流程4
流程5
式XI化合物例如可通过将式VII化合物用还原剂诸如NaBH4在溶剂诸如甲醇、乙醇、异丙醇、THF、THF/水或乙醚中在0℃至室温下处理1小时至24小时来制得。然后将式XI化合物按照以上所述的方法脱保护以得到式Ie化合物。或者，式Ie化合物还可用式Ia化合物作为原料按照关于式VII化合物的还原所述的方法制得。在其中的Rp1是乙酰基的情况下，保护基可能会在还原过程中在溶剂诸如甲醇中被部分地除去，这需要在将新形成的羟基烷基化之前重新保护2′-羟基。
将式XI化合物的羟基按照有关羟基的烷基化的已知的标准方法进行烷基化以得到式XII化合物。在其中的Q进一步被在用于将XI转化成XII的条件下会发生烷基化的取代基所取代的情况下，在将XI化合物进行烷基化之前可能需要对这些取代基进行保护。将本领域通常已知的适当保护基按照T.W.Green等，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，John Wiley&Sons，1999所述的标准方法引入。烷基化后，将保护基按照T.W.Green等人所述的标准方法除去。将式XII化合物按照以上所述的方法脱保护以得到式If化合物。
用本领域公知的方法通过选择性裂解式VII或XII化合物的克拉定糖部分，例如按照如WO 02/16380中所述的，通过将所述化合物与1-5％HCl在醇溶剂诸如甲醇或乙醇或在水中或其混合物中以优选的-15℃至40℃温度反应12-72小时，可以例如从化合物XII(参见流程5)得到本发明中所用的化合物XII-1(流程6)。
流程6
其中R2和R4一起形成双键、R3是氢且R1和R14如上所定义(化合物Ig)的式(I)化合物的制备按照流程7来实现。
流程7
式Ig化合物可以例如从其中的Rp1是乙酰基、苯甲酰基等且Ra是甲基、三氟甲基或甲基苯基的式XIII化合物起始来制备。其中的Rp1是乙酰基且Ra是甲基的式XIII化合物的制备例如描述于J.Med.Chem.1998，41，1651中。将式XIII化合物用碱诸如氢化钠或DBU在溶剂诸如丙酮、甲苯、DMF或THF或其混合物中以0℃-50℃处理以得到式XIV化合物。将式XIV化合物用2-氯乙酸、活化剂诸如DCC和DMAP处理或者将其用2-氯乙酸酐、吡啶、DMAP在溶剂诸如二氯甲烷、氯仿或四氢呋喃、优选在二氯甲烷中处理来酯化，以得到式XV化合物。然后，将中间体XV用其中的Q和X如上所定义的适当亲核试剂Q-X-SH在丙酮中、在碱如DBU存在下处理以得到式XVI化合物。根据R1的性质，式XVI化合物还可以通过式XIV化合物与适合的羧酸(R1CH2COOH)、活化剂诸如DCC和DMAP在适合的溶剂诸如二氯甲烷中反应来合成，以得到式XVI化合物。将式XVI化合物用碱金属碱诸如NaH或叔丁醇钾或LDA在非质子溶剂诸如DMF或THF中处理以得到式XVII化合物。将其中的Rp1如上所定义的式XVII化合物用甲醇在20℃-60℃脱保护2-5天或用DBU在回流甲醇中处理化合物3-12小时(J.Antibiotics，2001，54(8)，664)或者用胍/硝酸胍在甲醇/二氯甲烷中(Tetrahedron Letters 1997，38(9)，1627)或用碳酸钾在甲醇中或用MeONa甲醇的混合物、优选用甲醇在20-50℃处理2-5天，以得到式Ig化合物。
其中的R2和R3与它们所连接的碳原子一起形成C＝O基团、R4是氢且R1是如上所定义的式I化合物(化合物Ii)和其中的R2是-OH且R3和R4是氢且R1是如上所定义的式I化合物(化合物Ih)的制备按照流程8来完成。通式XVIII化合物的合成已描述于例如WO03/072588和WO2006/084410中。可以通过用1％-5％HCl在醇溶剂如甲醇或乙醇或在水或其混合物中于0℃-30℃处理式XVII化合物，来得到式XIX化合物。按照上述从式XVII化合物制备式Ig化合物的同样方法，可从式XIX化合物得到式Ih化合物。
流程8
用EDC＊HCl、DMSO和三氟乙酸吡啶在氯化溶剂诸如二氯甲烷中或用1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯碘酰-3-(1H)-酮(戴斯-马丁试剂)在氯化溶剂诸如二氯甲烷中或用N-氯代琥珀酰亚胺和二甲基亚砜在合适的溶剂诸如二氯甲烷中完成化合物XIX的氧化，以得到式XX化合物。根据上述从式XVII化合物制备式Ig化合物的相同方法从式XX化合物得到式Ii化合物。或者，根据流程7中所述的步骤，式Ii化合物可从原料化合物XXIII得到。式XXIII化合物的合成描述于J.Med.Chem.1998，41，4080中。
流程9
根据本领域公知的羟基酯化的方法，式Ik化合物可通过化合物XIX与2-氯乙酰氯、2-氯乙酸酐或2-氯乙酸反应而得到，以得到式XXIV化合物(Rb＝CH2Cl)。然后，将该化合物与适合的亲核试剂例如二甲基胺或吗啉反应，接着按照上述进行脱保护，以得到式Ie化合物(流程9)。根据本领域公知的方法用类似的方式，通过化合物XIX与丙烯酰氯反应来得到式Im化合物，以得到其中的Rb是CH＝CH2的化合物XXIV，接着用适合的亲核试剂处理。
在R1是S-Rp3(流程10)且Rp3是硫保护基团，例如苄基、4-甲氧基苄基、3，4-二甲氧基苄基或4-硝基-苄基，优选4-甲氧基苄基的情况下，类似于WO03/072588或WO2006084410中所述的方法，将中间体XXVII转化成其中的R2-R4、R14和Rp1是如上所定义的且Rp4是3-硝基-2-吡啶基或甲基的二硫化物衍生物XXVIII。将式XXVIII化合物用还原剂如三烷基膦、优选三丁基膦、或者三芳基膦、优选三苯基膦在溶剂如含水丙酮、含水二甲基甲酰胺、含水二氧杂环己烷或含水四氢呋喃、优选含水二甲基甲酰胺中于0℃-60℃处理1分钟-1小时，以得到化合物XXIX。将化合物XXIX，优选不经分离，直接在相同的溶剂系统中用其中的Q和X如前面所定义且Lg是离去基团例如氯化物、溴化物、碘化物、甲磺酰氧基、对甲苯磺酰氧基、三氟甲磺酰氧基的式Q-X-Lg化合物处理，以得到式XXX化合物，可根据上述的方法将其脱保护以得到其中的Y＝S的式I化合物。该反应优选在碱诸诸如碱金属碳酸盐或碳酸氢盐如碳酸钾、碳酸铯或碳酸氢钠或者有机碱例如三乙胺、N-乙基-N，N-二异丙基胺、1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯或1，5-二氮杂二环[4.3.0]壬-5-烯、优选1，8-二氮杂二环[5.4.0]十一-7-烯存在下于0℃-50℃的温度优选20℃进行。加入催化量的碘盐、优选碘化钠到反应混合物中可以有利于反应。如果需要，根据本领域公知的如T.W.Green等人，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，John Wiley&Sons，1999中所述的方法来除去保护基。
对于R1＝S-Rp3
流程10
可以例如通过用2-2.5当量的3-氯过苯甲酸(mCPBA)和4-5当量的NaHCO3在溶剂诸如二氯甲烷中于0℃-室温、优选0℃的温度处理式XXX化合物(其中的Y＝S的式I化合物)1-3小时而制备式XXXI化合物。在后处理中通过在室温用焦亚硫酸钠水溶液处理有机相5分钟至24小时来还原在反应过程中在糖残基的二甲基氨基上形成的N-氧化物，以得到所需的式XXXI化合物。或者，如果适合的话，根据标准步骤通过催化氢化来还原N-氧化物。式XXXI化合物还可按照以上所述的方法但是在室温下处理1至48小时而进一步氧化，在N-氧化物还原后得到式Id化合物。化合物Ir还可以从式XXII化合物通过用3.5-10当量氧化剂和7-20当量NaHCO3在0℃至室温处理5-48小时、然后通过以上所述的方法进行后处理而一步得到(流程11)。
在其中的Q进一步被氧化敏感取代基如氨基取代的情况下，在将硫化物Ia氧化前，这些取代基可能需要保护。可以根据T.W.Green等人，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，JohnWiley&Sons，1999中所述的，引入本领域公知的适当保护基。氧化后，可根据T.W.Green等人所述的标准方法除去保护基。
流程11
在某些情况下，用保护基保护R1和/或R14上的官能团可能是必需的。可以根据T.W.Green等人，Protective Groups in Organic Synthesis(有机合成中的保护基)，John Wiley&Sons，1999中所述的，引入本领域公知的适当保护基。如果式I或式XXI化合物在R1上具有保护基，根据T.W.Green等人，在Protective Groups in Organic Synthesis，John Wiley&Sons，1999中所述的本领域公知的方法的脱保护步骤将是必需的，以便得到终产物。
还应理解，例如式I或I-A化合物中的R1和如上述那些中间体的R1还可以得到进一步修饰。根据本领域公知的方法，例如可以将酯基水解，并可将形成的酸与胺偶联以形成酰胺。
给出下列实施例以进一步解释说明本发明，并且不能将其以任何方式解释为对本发明范围的限制。
A.实施例
通用注释：MS谱利用(A)带有Masslynx软件的Micromass Waters ZQ系统和(B)利用配备有Waters Cap-LC的Q-Tof-Ultima(沃特世公司)进行测定。对于精确质量的测定，使用纳升锁定质量ESI源。给出的精确质量精确到小数点后四位。分析型HPLC：系统Aa：柱子：Inertsil ODS-3V、5μm、250×4mm；流速：1.0mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水；流动相B：乙腈；梯度：0-5分钟，恒定5％乙腈；5-25分钟，线性地从5％至95％乙腈。系统Ba：仪器：Varian Prostar 210；柱：Inertsil ODS-3V、5μm、250×4mm；流速：1.0mL/分钟；检测：254nm；柱温：35℃；流动相A：水+0.1％HCOOH；流动相B：乙腈+0.1％HCOOH；梯度：0-5分钟恒定5％B；5-20分钟，线性地从5％至95％B。系统Ca：柱：AgilentZORBAX Eclipse plus C18，5μm，250×4.6mm；流速：1.0mL/分钟；检测：220nm；流动相A：水/乙腈/TFA 98.9/1/0.1(v/v/v)；流动相B：水/乙腈/TFA 1/98.9/0.1(v/v/v)；梯度：0-5分钟恒定0％B；5-45分钟线性地从0％至100％B；45-55分钟100％B。终产物的制备型HPLC纯化利用下列系统完成：系统Ap：柱：YMC ODS-AQ、120A、5μm、50×20mm；预柱：YMC ODS-AQ、120A、5μm、10×20mm；流速：30ml/分钟；进样：500μl；检测：ELSD；流动相A：水+0.1％HCOOH；流动相B：乙腈；梯度：线性地从10至95％乙腈，4分钟。系统Bp：柱：Purospher STARRP8e、5μm、125×25mm；流速：25mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水25mM甲酸铵；流动相B：甲醇；梯度：线性地从60％至90％甲醇，10分钟。系统Cp：柱：Purospher STAR RP8e、5μm、125×25mm；流速：25mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水25mM甲酸铵；流动相B：乙腈；梯度：线性地从20％至50％乙腈，10分钟。
缩写词：HPLC：高效液相色谱；DMSO：二甲基亚砜；DBU：二氮杂二环十一烷；DCM：二氯甲烷；DIPEA：二异丙基乙基胺(Huenig氏碱)；DMF：二甲基甲酰胺；THF：四氢呋喃；DCC：二环己基碳二亚胺；DMAP：4-二甲基氨基吡啶；EDC·HCl：N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐；HOBt：1-羟基-苯并三唑；HATU：2-(1H-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐；mCPBA：间氯过苯甲酸；KOtBu：叔丁醇钾；TBDMSCl：叔丁基-二甲基-硅烷基氯；TBAF：氟化四丁基铵；MS：质谱；NMR：核磁共振；ESI电喷雾离子化。
实施例1
其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-1)的制备A]2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇的制备
向10g 2-(6-氨基-嘌呤-9-基)乙醇在200ml 0.5M AcONa/AcOH缓冲液pH 4中的溶液中加入4ml Br2。将形成的混合物在室温下搅拌8小时。将沉淀析出的产物分离，用水洗涤并用乙醇结晶得到6.13g(43％)所需化合物。
B]2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙炔基)-嘌呤-9-基)乙醇的制备
向258mg 2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇在Et3N和DMF的混合物中的溶液中在氩气氛下加入35mg Pd(PPh)3Cl2、19mg CuI和150mg 3-乙炔基吡啶。将混合物在氩气下在60℃下搅拌3小时，然后在室温下搅拌过夜。将沉淀物分离，用水和热乙醇洗涤并干燥得到150mg(53％)所需产物。
C]2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基)乙醇的制备
向1.1g 2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙炔基)-嘌呤-9-基)乙醇在400ml甲醇中的悬浮液中加入2.0g兰尼镍并将混合物在80℃下氢化(4个大气压)6小时。反应完成后除去催化剂并蒸发溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(CHCl3∶MeOH 9∶1)得到0.45g(41％)所需产物。
D]6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤的制备
将0.45g 2-(6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基)乙醇冷却至-20℃并加入6ml SOCl2。将温度逐渐升至50℃并将混合物在该温度下搅拌12小时。蒸发过量的SOCl2并将残余物溶于二氯甲烷，用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(CHCl3∶MeOH 50∶1)得到40mg(8％)所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.65(s，1H)；8.4(s，1H)；8.1(s，1H)；7.75(d，1H)；7.30(m，1H)；6.95(s，2H，-NH2)；4.45(t，2H)；4.0(t，2H)。
E]其中的Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式II化合物(II-1)的制备
向25g(33.4mmol)克拉霉素和1.63g(13.4mmol)DMAP在50mlDCM中的溶液中一次性加入11ml(117mmol)乙酸酐并将混合物在室温下搅拌20小时。将反应混合物倒入足够的0.2N NaOH中以使得pH值为8-9，然后萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用MgSO4干燥并减压蒸发。将粗产物用热乙酸乙酯结晶得到24.3g(87％)无色结晶。MS(ESI)：832.5[MH]+。
F]其中的Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式III化合物(III-1)的制备
将24.3g(29.2mmol)2’，4”-二-O-乙酰基-6-O-甲基红霉素A(II-1)在-45℃下在氩气下溶于500ml THF并在15分钟内滴加29.2ml1M二(三甲基硅烷基)氨基钠在四氢呋喃(29.2mmol)中的溶液。在-45℃下20分钟后在5分钟内分三批加入16.24g(100.1mmol)羰二咪唑。将反应混合物在-45℃下搅拌30分钟，然后在15分钟内升温至0℃并在0℃下保持2.5小时。
将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液和水(1∶1)处理并用乙酸乙酯萃取2次。将合并的有机层用10％氨水溶液洗涤两次，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并减压蒸发得到23.57g(94％)无色固体。MS(ESI)：858.6[MH]+。
G]其中的Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式IV化合物(IV-1)的制备
将溶于500ml甲苯的23.5g(27.47mmol)化合物III-1和10.25ml(68.7mmol)DBU在回流温度下加热1.5小时，冷却至室温并倒入0.5MNaH2PO4水溶液中。将水层用乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机萃取液用0.5M NaH2PO4、盐水洗涤，用Na2SO4干燥并浓缩得到18.43g(86％)无色固体。MS(ESI)：814.5[MH]+。
H]其中的Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式V化合物(V-1)的制备
向64.0g(78.6mmol)化合物IV-1、3.84g(31.4mmol)4-二甲基氨基吡啶和12.5g吡啶在600ml二氯甲烷中的溶液中在氮气下于2小时内滴加26.9g氯乙酸酐(157.3mmol)在250ml二氯甲烷中的溶液。将溶液在室温下搅拌3.5小时。将反应混合物倒入0.2N NaOH中以使pH值为8-9并用二氯甲烷萃取两次。将合并的有机层依次用水、两次0.5N NaH2PO4、水和两次盐水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发得到粗产物。将石油醚加入到粗产物中，将混合物在室温下搅拌3小时并过滤得到浅棕色固体状标题化合物(57.5g，82％)。MS(ESI)：890.3。
I]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式VI化合物(VI-1)的制备
将10.5g化合物V-1在氩气下溶于180ml丙酮并一次性加入2.42gDBU、20mg碘化钠和2.20g(4-甲氧基苯基)甲硫醇。将反应混合物在氩气下于室温搅拌2.5小时。将250ml DCM加入到反应混合物中。将有机层用5％NaHCO3洗涤三次，用Na2SO4干燥并真空蒸发得到11.7g(98.4％)浅棕色泡沫状物。MS(ESI)：1008.4。
K]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且Rp1和Rp2是乙酰基并且R14是甲基的式VII化合物(VII-1)的制备
将6.00g化合物VI-1在氮气下溶于60ml DMF并用冰浴冷却。加入0.39g氢化钠的油分散体(60％)并将混合物在0-5℃下搅拌3小时。此时加入KH2PO40.5N水溶液并将混合物用100ml乙醚萃取。将有机层用60ml3％NaHCO3水溶液洗涤三次，然后用80ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发得到4.65g粗产物。MS(ESI)：1008.4[MH]+。
L]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物的制备
将21.8g(21.6mmol)粗制的化合物VII-1溶于290ml甲醇中并加入16.2ml(108.3mmol)DBU。将混合物在氩气下加热回流5小时。减压蒸发溶剂并将残余物溶于580ml DCM中。将有机层用水洗涤两次，然后用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物用石油醚/乙醚5/1洗涤。将残余物溶于150ml甲醇中并加入55ml水。将混合物搅拌2小时，将产物通过过滤分离得到11.1g(41％)固体状标题化合物。MS(ESI)：924.4。
M]其中的Rp3是(4-甲氧基苯基)甲基且Rp1是乙酰基、Rp2是氢并且R14是甲基的式VIIa(VIIa-1)化合物的制备
将2.0g(2.16mmol)实施例1步骤L的产物溶于50ml DCM并加入0.22ml(2.4mmol)乙酸酐。将混合物在室温下搅拌48小时。将溶液用NaHCO3水溶液(5％)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到2.17g浅棕色泡沫状物。该粗产物未经纯化而用于下一步骤。MS(ESI)：967.3[M+H]+。
N]其中的Rp4是甲基、Rp1是乙酰基、Rp2是氢并且R14是甲基的式IX化合物(IX-1)的制备
将2.17g(2.25mmol)VIIa-I溶于50ml DCM中并加入分子筛。将880mg(4.49mmol)二甲基(甲硫基)锍四氟硼酸盐加入到混合物中并将反应液在室温下搅拌5小时。将反应混合物过滤并用20ml NaHCO3水溶液(5％)和盐水洗涤两次，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到1.62g浅棕色泡沫状物。该粗产物未经纯化而用于下一步骤。MS(ESI)：893.1[MH]+。
O]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、Rp1是乙酰基、Rp2是氢并且R14是甲基的式VII化合物(VII-1)的制备
向溶于4ml DMF和1滴水的0.120g(0.13mmol)实施例1步骤N的产物的溶液中加入66.4μl(0.27mmol)三丁基膦并将混合物在室温下搅拌30分钟。然后将44.8mg(0.15mmol)6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤和40.2μl DBU(0.27mmol)加入到该溶液中。将反应液在室温下搅拌过夜并真空浓缩，并将残余物溶于DCM中。将有机层用NaHCO3水溶液(5％)和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH/NH399∶1∶0.01→95∶5∶0.01)得到57mg(38％)所需产物。MS(ESI)：1112.6([MH]+)，577.0([MH2]++)。
P]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(2-吡啶-3-基-乙基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R2是克拉定糖基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物(I-1)的制备
将实施例1步骤O的产物(54mg)溶于2ml甲醇中并在室温下搅拌96小时。然后将反应混合物真空浓缩并将残余物通过HPLC纯化，得到白色固体状所需产物。MS：精确质量(ESI)：1069.5792Da。
实施例2
其中的R1是[2-[6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-2)的制备
A]6-氨基-8-溴-9-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙基]-嘌呤的制备
向3.0g 2-(6-氨基-8-溴-嘌呤-9-基)乙醇(实施例1，步骤A)在30ml DMF中的溶液中加入2.8g TBDMSCl和1.1g咪唑并将混合物在氩气下于20℃搅拌24小时。滤出沉淀物，用水洗涤并干燥，得到3.6g(84％)所需产物。
B]6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-9-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)乙基]-嘌呤的制备
向0.372g实施例2步骤A的产物和0.23g 3-氨基吡啶在10ml甲苯中的溶液中加入0.091g Pd2(dba)3、0.14gt-BuONa和0.087g 9，9-二甲基-4，5-二(二苯基膦)呫吨(Xantphos)。将混合物于100℃在氩气氛下搅拌16小时。反应完成后将混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机层浓缩并将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(CHCl3∶MeOH 20∶1)得到0.1g(26％)所需产物。
C]2-(6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基)乙醇的制备
向0.46g实施例2步骤B的产物在10ml THF中的溶液中加入0.12gTBAF＊3H2O并将混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物随后浓缩并将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯∶甲醇20∶1)，得到0.19g(59％)所需产物。
D]6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤的制备
将0.11g 2-(6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基)乙醇冷却至-20℃并加入2ml SOCl2。将温度逐渐地升至50℃并将混合物在该温度下搅拌12小时。蒸发过量的SOCl2并将氨水加入到残余物中。将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机层分离并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯∶MeOH 20∶1)，得到30mg(27％)所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：9.10(s，1H)；9.0(s，1H)；8.35(d，1H)；8.20(d，1H)；8.05(s，1H)；7.30(m，1H)；6.65(s，2H，-NH2)；4.55(t，2H)；4.0(t，2H)。
E]其中的R1是[2-[6-氨基-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物(I-2)的制备
该标题化合物I-2用6-氨基-9-(2-氯乙基)-8-(吡啶-3-基氨基)-嘌呤和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。MS：精确质量(ESI)：1056.5548Da。
实施例3
其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基-羰基)-氨基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-3)的制备
A]N-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-异烟酰胺的制备
将7.0g(33.8mmol)3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基胺(Garcia等，JOC，2005，70，1050页)溶于150ml DCM。将溶液冷却至0℃并将5.74g(40.5mmol)异烟酰氯在50ml DCM中的溶液加入到该溶液中。形成沉淀物。随后将反应混合物在室温下搅拌2小时。将2.7g NaOH在100ml水中的溶液加入到浅红色反应混合物中。分离出有机层，用Na2SO4干燥并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷2∶1)得到7.2g(62％)所需产物。MS(ESI)：313.1。
B]N-(2-氯乙基)-N-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-异烟酰胺的制备
将3.0g(9.6mmol)实施例3步骤A的产物溶于50ml1-溴-2-氯乙烷并将5.33g(95mmol)氢氧化钾加入到溶液中。将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在60℃下加热4小时。将反应混合物冷却至室温并加入50ml水。将混合物用50ml DCM萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶1)得到黄色油状的1.3g(43％)所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.45(d，2H)；7.21(d，2H)；6.8(m，3H)；4.63(m，1H)；4.13(t，2H)；3.76(t，2H)；3.66(s，3H)；1.4-1.8(m，8H)。
C]其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基-羰基)-氨基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-3)的制备
该标题化合物I-3用N-(2-氯乙基)-N-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-异烟酰胺和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。MS：精确质量(ESI)：1141.6073Da。
实施例4
其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-4)的制备
A](3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-胺的制备
将0.5g(1.6mmol)实施例3步骤A的产物在氮气下溶于20ml无水THF并在室温下加入0.24g(6.4mmol)氢化铝锂。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后冷却至0℃并加入2ml水。将混合物用3×20ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发得到油状粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶1)得到油状的0.4g(84％)所需产物。MS(ESI)：299.2([MH]+)。
B](2-氯-乙基)-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-胺的制备
将3.85g(12.9mmol)实施例4步骤A的产物在25℃下溶于50ml甲醇中并加入5.1ml氯乙醛溶液(40％的水溶液；77.4mmol，6当量)、4.86g(77.4mmol，6当量)氰基硼氢化钠和0.74ml(12.9mmol)乙酸。将混合物在25℃下搅拌16小时。然后减压除去溶剂并将残余物溶于100ml二氯甲烷中。将混合物用3×50ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶4)得到油状的1.66g(35％)所需产物。MS(ESI)：361.2，363.1([MH]+)。1H-NMR(CDCl3)：8.52(d，2H)；7.17(d，2H)；6.75(d，1H)；6.18-6.24(m，2H)；4.6(m，1H)；4.52(s，2H)；3.75(s，3H)；3.64-3.73(m，4H)；1.5-1.9(m，br，8H)。
C]其中的Rp4是甲基、Rp1和Rp2是氢并且R4是甲基的式IX化合物(IX-4)的制备
将3.1g(3.35mmol)实施例1步骤L的产物溶于80ml DCM中并加入分子筛。将1.0g(4.94mmol)二甲基(甲硫基)锍四氟硼酸盐加入到混合物中并将反应液在室温下搅拌20小时。将反应混合物过滤并将滤液用80mlNaHCO3水溶液(5％)、80ml水和80ml盐水洗涤两次，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩得到3.04g浅棕色泡沫状物。该粗产物未经纯化而用于下一步骤。MS(ESI)：850.2[MH]+。
D]其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-4-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-4)的制备
向溶于7.5ml DMF和35μl水的0.136g(0.16mmol)实施例4步骤C的产物的溶液中加入80μl(0.32mmol)三丁基膦并将混合物在室温下搅拌至没有原料剩余(3小时)。然后将45mg(0.24mmol)实施例4步骤B的产物和36μl DBU(0.24mmol)加入到溶液中。将反应液在室温下搅拌13小时，然后加入15ml水并将混合物用3×20ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层浓缩，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色油状粗产物。将产物通过快速硅胶色谱初步纯化(乙酸乙酯/己烷5/1)。将该化合物进一步通过制备型HPLC纯化(柱：Xterra C18(5μm)100mm×10mm；流动相A：水+0.02％NH4OH，流动相B：MeOH；流速：10ml/分钟；检测：254nm；梯度：0分钟/90％A/10％B，10分钟/40％A/60％B，10.1分钟/0％A/100％B)。MS：精确质量(ESI)：1128.6423Da。保留时间：10.8分钟。(柱：Prontosil120-3-C18SH 3μm，75×4.6mm；流速：1.0mL/分钟；检测：254nm；柱温：室温；流动相A：水+0.1％TFA；流动相B：甲醇；梯度：0-5分钟是恒定的30％B；5-25分钟线性地从30％至95％B)。
实施例5
其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-5)的制备
A]N-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-烟酰胺的制备
将3.2g(14.3mmol)3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基胺(Garcia等，JOC，2005，70，1050页)溶于120ml DCM中。将溶液冷却至0℃并将15ml(107.6mmol，7.5当量)三乙胺和在50ml DCM中的3.7g(26.1mmol；1.8当量)烟酰氯加入到反应混合物中。将反应混合物搅拌2小时，然后将1.3g NaOH在50ml水中的溶液加入到混合物中。分离出有机相并用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶1)，得到4g(85％)白色固体状所需产物。MS(ESI)：313.0([MH]+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：10.24(s，1H)；9.07(s，1H)；8.73(d，1H)；8.25(d，1H)；7.54(dd，1H)；7.42(s，1H)；7.29(d，1H)；6.91(d，1H)；4.70(m，1H)；3.71(s，3H)；1.56-1.90(m，8H)。
B](3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-胺的制备
将0.5g(1.6mmol)实施例5步骤A的产物在氮气下溶于20ml无水THF中并在0℃加入0.24g(6.4mmol)氢化铝锂。将反应混合物在15℃下搅拌2小时，然后冷却至0℃并加入2ml水。将混合物用3×20ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到油状粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶1)得到180mg(38％)所需产物，为浅黄色油状物。MS(ESI)：299.1([MH]+)。
1H-NMR(DMSO-d6)：8.54(s，1H)；8.41(d，1H)；7.72(d，1H)；7.32(dd，1H)；6.64(d，1H)；6.22(d，1H)；6.02(dd，1H)；4.60(m，1H)；4.21(s，2H)；3.56(s，3H)；1.50-1.76(m，8H)。
C](2-氯-乙基)-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-胺的制备
将150mg(0.51mmol)实施例5步骤B的产物在25℃下溶于10ml甲醇中并加入0.5ml氯乙醛溶液(40％的水溶液；7.74mmol，15当量)、0.25g(3.98mmol，7.8当量)氰基硼氢化钠和0.05ml(0.87mmol)乙酸。将混合物在15℃下搅拌4小时。然后减压除去溶剂并将残余物溶于100ml二氯甲烷中。将混合物用3×50ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶4)得到140mg(35％)浅黄色油状所需产物。MS(ESI)：361.2，363.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：8.45(s，1H)；8.39(d，1H)；7.58(d，1H)；7.29(dd，1H)；6.72(d，1H)；6.25(s，1H)；6.20(d，1H)；4.62(m，1H)；4.60(s，2H)；3.74(t，2H)；3.71(t，2H)；3.58(s，3H)；1.46-1.67(m，8H)。
D]其中的R1是[2-[(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-(吡啶-3-基甲基)-氨基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-5)的制备
该标题化合物I-5用(2-氯-乙基)-(3-环戊氧基-4-甲氧基-苯基)-吡啶-3-基甲基-胺(实施例5步骤C)和IX-4作为原料按照实施例4的步骤D所述的方法制得。
将产物首先通过制备型HPLC用系统Bp纯化。将分离出的产物溶于DCM中并用稀释的NaOH水溶液洗涤。将有机层干燥并蒸发。将该产物进一步通过HPLC纯化(系统Ap)。MS：精确质量(ESI)：1128.6434Da。保留时间(系统Aa)：16.7分钟。
实施例6
其中的R1是[2-[(5-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基氨基)-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-6)的制备
A]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯的制备
将2.54g(10mmol)4-氯-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸乙酯(J.Med.Chem.2001，44，1025)和1.28g(11mmol)2-氯乙基胺盐酸盐加入到40ml无水乙醇中。然后加入7ml(50mmol)三乙胺。将混合物加热回流至反应完成(4小时)。将反应混合物减压浓缩并加入20ml饱和碳酸钠水溶液。将混合物用3×20ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用15ml水和15ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物(2.88g)首先通过快速硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯5∶1)，然后用20ml己烷/乙酸乙酯＝1/1结晶，得到1.24g(42％)所需产物，为白色结晶固体。MS(ESI)：297.1([M+H]+)。
1H-NMR(CDCl3)：9.70(宽峰，1H)，8.90(s，1H)，8.04(s，1H)，4.54(q，2H)，4.36(q，2H)，4.03(t，2H)，3.87(t，2H)，1.50(t，3H)，1.40(t，3H)。B]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸的制备
将1.17g(4.0mmol)实施例6步骤A的产物在15ml乙醇中的溶液加入到0.64g(16.0mmol)NaOH在2ml水中的溶液中。将形成的混合物加热回流3小时。减压除去乙醇并将10ml水加入到残余物中。将溶液用2NHCl酸化至pH 5，导致产物沉淀。将沉淀物通过过滤分离并干燥，得到0.5g(44％)白色固体状所需产物。MS(ESI)：269.1([M+H]+)。
1H-NMR(CDC13)：12.75(b，1H)，9.54(s，1H)，8.68(s，1H)，8.19(s，1H)，4.36(q，2H)，4.05(t，2H)，3.93(t，2H)，1.34(t，3H)。
C]4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸(3，5-二氯-吡啶-4-基)-酰胺的制备
将0.8g(3.0mmol)实施例6步骤B的产物、0.8g(6mmol)HOBt和1.14g(6mmol)EDC·HCl悬浮在25ml THF中并加入2.1g(21mmol)三乙胺。将混合物在15℃下搅拌至所有原料消失(24小时)。减压除去溶剂并将粗产物通过柱色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯4∶1)得到0.64g白色固体。将131mg NaH(60％，5.7mmol)悬浮在15ml THF中并在15℃下将3，5-二氯-4-氨基吡啶在5ml THF中的溶液滴加到该悬浮液中。1小时后将570mg(1.42mmol)上述白色固体在5ml THF中的溶液缓慢加入到该混合物中并继续搅拌30分钟。将0.1ml水加入到反应混合物中并蒸发溶剂。将残余物通过快速硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯4∶1)得到92mg所需产物。将该产物用丙酮/己烷1/2重结晶，得到68mg(11.6％)所需产物，为浅黄色固体。MS(ESI)：413.0([M+H]+)。1H-NMR(CDCl3)：9.68(s，1H)，8.77(s，1H)，8.56(s，2H)，8.06(s，1H)，7.91(s，1H)，4.53(q，2H)，4.03(t，2H)，3.82(t，2H)，1.52(t，3H)。
D]其中的R1是[2-[(5-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基氨基)-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-6)的制备
该标题化合物I-6用4-(2-氯-乙基氨基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-5-甲酸(3，5-二氯-吡啶-4-基)-酰胺(实施例6步骤C的产物)和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。将产物通过HPLC纯化(系统Ap)。MS：精确质量(ESI)：1180.5134Da。
实施例7
其中的R1是[3-[2，3-二甲氧基-6-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-苯基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-7)的制备
A]1-(3-苄氧基-丙基)-2，3-二甲氧基-苯的制备
将2.50g(62.5mmol)NaH(60％的油分散体)在氮气下悬浮在70ml无水THF中，然后在18℃下滴加7.1g(36.2mmol)3-(2，3-二甲氧基-苯基)-丙-1-醇(J.Org.Chem.，1987，52，1072)的50ml THF溶液。将形成的混合物搅拌30分钟，然后滴加6.81g(39.8mmol)苄基溴在30ml THF中的溶液并将混合物在18℃下搅拌过夜。用10ml水终止反应并将有机溶剂减压蒸发。将残余物溶于200ml乙酸乙酯中并将有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶40)，得到8g(77％)无色油状所需产物。1H-NMR(CDCl3)：7.36-7.27(m，5H)；6.99-6.95(m，1H)；6.78-6.76(m，2H)；4.52(s，2H)；3.86(s，3H，)；3.81(s，3H)；3.52(t，2H)；2.73(t，2H)；1.93(m，2H)。
B]1-(3-苄氧基-丙基)-6-溴-2，3-二甲氧基-苯的制备
将8.0g(27.9mmol)实施例7步骤A的产物在氮气下溶于120ml DCM中并加入5.47g(30.7mmol)N-溴丁二酰亚胺和0.48g(2.8mmol)。将混合物在18℃下搅拌过夜。将反应混合物真空浓缩并将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/正己烷1∶40)，得到9.7g(95％)无色油状所需产物。
1H-NMR(CDCl3)：7.38-7.27(m，5H)；7.24(d，1H)；6.67(d，1H)；4.54(s，2H)；3.84(s，3H)；3.81(s，3H)；3.58(t，2H)；2.86(t，2H)；1.875(m，2H)。
C]2-(3-苄氧基-丙基)-3，4-二甲氧基-苯甲酸的制备
将9.7g(26.7mmol)实施例7步骤B的产物在氮气下溶于40ml无水THF中。将溶液冷却至-78℃并加入18ml丁基-锂溶液(2.2M的正己烷溶液)。30分钟后加入400g固体CO2并将反应混合物缓慢升温至室温。将反应混合物倒入水中并将混合物用己烷萃取。将20ml 3M HCl水溶液加入到水层中并用2×100ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发，得到9g白色固体状粗产物。1H-NMR(CDCl3)：7.86(d，1H)；7.37-7.24(m，5H)；6.82(d，1H)；4.53(s，2H)；3.92(s，3H)；3.82(s，3H)；3.59(t，2H)；3.13(t，2H)；1.92(m，2H)。
D]2-(3-苄氧基-丙基)-N-(3，5-二氯-吡啶-4-基)-3，4-二甲氧基-苯甲酰胺的制备
将10.8g(52.4mmol)DCC和5.0g(37mmol)HOBt在氮气氛下加入到8.7g(26.3mmol)实施例7步骤C的产物在150ml DCM中的溶液中并将混合物在40℃下搅拌2小时。将悬浮液过滤并将滤液真空浓缩。将形成的产物通过硅胶柱色谱纯化(己烷/乙酸乙酯8/1)，得到8.5g白色固体。将4g该白色固体(8.9mmol)的40ml无水THF溶液滴加到1.6g(9.8mmol)4-氨基-3，5-二氯-吡啶和822mg(35.8mmol)NaH(60％的油分散体)在THF中的悬浮液中，将其在室温下搅拌1.5小时。将形成的混合物在30℃下搅拌2小时，然后用水终止反应。将混合物用2×100ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到4.1g(96％)白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.47(s，2H)；8.39(s，1H)；7.43(d，1H)；7.26-7.17(m，5H)；6.88(d，1H)；4.38(s，2H)；3.92(s，3H)；3.84(s，3H)；3.54(t，2H)；3.08(t，2H)；2.09(q，2H)。
E]2-(3-羟基-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺的制备
将1.0g(2.1mmol)实施例7步骤D的产物溶于200ml乙醇中并加入230mg Pd/C(10％)。将混合物在室温下在氢气气氛下(40psi)搅拌36小时。滤出催化剂并将滤液减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化，得到280mg白色固体状所需产物。MS(ESI)：317.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：11.58(s，1H)；8.71(d，2H)；8.18(d，2H)；7.37(d，1H)；7.04(d，1H)；3.86(s，3H)；3.74(s，3H)；3.36(t，2H)；2.75(t，2H)；1.61(q，2H)。
F]2-(3-氯-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺的制备
将200mg(0.63mmol)实施例7步骤E的产物和163mg(0.76mmol)PCl5溶于4ml DCM中并将形成的混合物在20℃下搅拌30分钟。将混合物浓缩并将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 10∶1)，得到160mg(75％)白色固体状所需产物。MS(ESI)：335.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：11.54(s，1H)；8.69(d，2H)；8.15(d，2H)；7.391(d，1H)；7.09(d，1H)；3.87(s，3H)；3.76(s，3H)；3.61(t，2H)；2.84(t，2H)；1.934(q，2H)。
G]其中的R1是[3-[2，3-二甲氧基-6-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-苯基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-7)的制备
该标题化合物I-7用2-(3-氯-丙基)-3，4-二甲氧基-N-吡啶-4-基-苯甲酰胺(实施例7步骤F)和IX-4作为原料按照实施例4步骤D所述的方法制得。将该产物通过制备型HPLC纯化(系统Ap)，得到白色固体。MS：精确质量(ESI)：1102.5927Da。
实施例8
其中的R1是[3-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-8)的制备
A]4，6-二羟基-烟酸乙酯的制备
将5.0g(24.73mmol)1，3-丙酮二甲酸二乙酯、5.05g(49.45mmol)乙酸酐和3.7g(24.73mmol)原甲酸乙酯的混合物加热至120℃，保持2小时。减压除去挥发性组分并将剩余的混合物用10ml氨水(25％)处理。将混合物在室温下搅拌30分钟。随后将混合物的pH用HCl水溶液(2N)调节至pH 2。滤出固体，用冷水洗涤并干燥。将8ml甲苯加入到粗产物中，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后过滤并干燥，得到2.26g(50％)红色固体。1H-NMR(DMSO-d6)：11.77(s，br，1H)；10.74(s，br，1H)；8.01(s，1H)；5.60(s，1H)；4.26(q，2H)；1.28(t，3H)。
B]4，6-二羟基-5-硝基-烟酸乙酯的制备
向2.34g(12.78mmol)实施例8步骤A的产物在9ml乙酸中的溶液中在60℃下滴加1.24g硝酸(65％；12.78mmol)。将混合物在90℃下搅拌20小时。将反应混合物冷却至0℃，过滤并将滤饼用冷水洗涤。将固体干燥，得到2.2g(75％)浅黄色结晶状所需产物。MS(ESI)：229.0([MH]+)。
C]4，6-二氯-5-硝基-烟酸乙酯的制备
将在8.0ml(86mmol)磷酰氯中的2.0g(8.77mmol)实施例8步骤B的产物在80℃下搅拌74小时。然后真空除去大约一半的磷酰氯并将剩余的混合物倒在冰上。将混合物用3×30ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用30ml碳酸钠水溶液(10％)、2×30ml水和30ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发得到棕色油状粗产物，将其通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/己烷1∶20)，得到1.67g(72％)浅黄色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：9.08(s，1H)；4.40(q，2H)；1.35(t，3H)。
D]3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙基胺的制备
将7.4g(98mmol)3-氨基丙醇的10ml THF溶液在室温下加入到4.12g氢化钠(60％；103.2mmol)在140ml THF中的悬浮液中。将混合物搅拌1小时，然后加入16.28g(108mmol)叔丁基-二甲基硅烷基氯并继续剧烈搅拌1小时。将混合物用300ml乙醚稀释，并依次用100ml K2CO3水溶液(10％)、100ml水和100ml盐水洗涤，用MgSO4干燥并蒸发，得到17g浅黄色粗产物。将该产物溶于乙酸乙酯/己烷1/10中并通过硅胶垫过滤。将滤液真空浓缩，得到13g(70％)无色油状所需产物。1H-NMR(CDCl3)：3.67(t，2H)；2.78(t，2H)；1.83(s，br，2H)；1.64(m，2H)；0.87(s，9H)；0.33(s，6H)。
E]4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙基氨基]-6-氯-5-硝基-烟酸乙酯的制备
将6.0g(22.6mmol)实施例8步骤C的产物和2.3g(22.6mmol)三乙胺的75ml乙醇溶液加热回流。将4.0g(22.6mmol)实施例8步骤D的产物加入到该溶液中并将混合物在回流下继续搅拌1小时。减压除去溶剂并将形成的残余物通过硅胶柱色谱纯化(己烷/乙酸乙酯80∶1)，得到9g(95％)黄色油状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.96(t，1H)；8.70(s，1H)；4.36(q，2H)；3.70(t，2H)；3.22(td，2H)；1.84(m，2H)；1.39(t，3H)；0.88(s，9H)；0.02(s，H)。
F]5-氨基-4-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙基氨基]-6-氯-烟酸乙酯的制备
将8.5g(26.5mmol)实施例8步骤E的产物溶于100ml乙醇中并加入2.5g兰尼镍。将反应混合物在氢气气氛下(1个大气压)于室温搅拌16小时。通过硅胶垫滤出催化剂并将滤液减压浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(己烷/乙酸乙酯20∶1)，得到5.6g(58％)棕色油状所需产物。MS(ESI)：388.1；390.1([MH]+)。
G]1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙基]-4-氯-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的制备
将5.6g(15.5mmol)实施例8步骤F的产物溶于45ml原甲酸三乙酯中并将混合物加热回流44小时。将混合物减压浓缩并补加45ml原甲酸三乙酯，然后将混合物继续加热回流24小时。将混合物减压浓缩并将残余物通过硅胶柱色谱纯化，用己烷/乙酸乙酯(20/1→5/1)洗脱，得到2.7g(40％；纯度～62％)浅黄色固体状所需化合物。1H-NMR(CDCl3)：8.27(t，1H)；7.90(s，1H)；4.25(q，2H)；3.60(t，2H)；3.40(td，2H)；1.65(m，2H)；1.30(t，3H)；0.80(s，9H)；0.01(s，6H)。
H]4-氨基-1-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的制备
将约20g氨气溶于100ml高压釜中的40ml乙醇中并加入2.7g(6.28mmol；纯度～62％)实施例8步骤G的产物。将混合物在100℃下搅拌20小时。将反应液冷却并减压蒸发溶剂。将残余物通过硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 100∶1然后50∶1)，得到1.5g(83％)深棕色固体。
I]4-氨基-1-[3-羟基-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的制备
将1.5g(3.4mmol)实施例8步骤H的产物溶于30ml无水THF中并加入1.17g(～4.5mmol)氟化叔丁基铵·H2O。将混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂并将残余物通过硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯，然后是乙酸乙酯/MeOH 50∶1，然后是乙酸乙酯/MeOH 20∶1)，得到750mg(69％)白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.31(s，1H)；8.08(s，1H)；7.00(s，2H)；4.59(t，2H)；4.26(q，2H)；3.22(t，2H)；1.72(m，2H)；1.29(t，3H)。
K]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的制备
将750mg(2.36mmol)实施例8步骤I的产物在22ml亚硫酰氯中的悬浮液在50℃下搅拌0.5小时。加入0.275ml三乙胺并在50℃下继续搅拌11小时。反应完成后将30ml乙醚加入到冷的反应混合物中，导致形成沉淀。通过过滤分离出固体，得到640mg(91％)浅黄色粉末状所需产物。MS(ESI)：283.0([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：9.00(s，br，2H)；8.52(s，1H)；8.30(s，1H)；4.68(t，2H)；4.35(q，2H)；3.40(t，2H)；2.15(m，2H)；1.32(t，3H)。
L]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸的制备
向100mg(0.35mmol)实施例8步骤K的产物和0.7ml 2M LiOH水溶液的混合物中加入2ml THF和4ml MeOH。将混合物在室温下搅拌过夜，然后补加0.7ml 2M LiOH水溶液并将混合物在45℃下搅拌过夜。将混合物的pH用2N HCl水溶液调节至pH＝7并减压蒸发溶剂。将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Purospher STAR RP18e、5μm、125×25mm；流速：25mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水+0.1％甲酸；流动相B：乙腈；梯度：在10分钟内线性地从20％至60％乙腈)，得到30mg(33％)白色固体状所需产物。
M]4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基酰胺的制备
将60mg(0.24mmol)实施例8步骤L的产物、108mg(0.28mmol)HATU、72mg(0.77mmol)4-氨基-吡啶和0.048ml(0.28mmol)DIPEA在4.5ml DMF中的悬浮液在30℃下搅拌3小时。反应混合物变得澄清。将90mg(0.24mmol)HATU、22mg(0.24mmol)4-氨基-吡啶和0.040ml(0.24mmol)DIPEA加入到反应混合物中并继续搅拌21小时。将混合物浓缩并将粗产物通过制备型HPLC纯化，得到白色固体状所需产物(含一些甲酸盐)。MS(ESI)：331.1；333.1([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：10.76(s，1H)；8.44(d，2H)；8.15(s，1H)；8.13(s，1H)；7.21(d，2H)；6.93(s，2H)；4.51(t，2H)；3.42(t，2H)；2.03(m，2H)。
N]其中的R1是[3-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-8)的制备
该标题化合物I-8用4-氨基-1-[3-氯-丙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基酰胺(实施例8步骤M的产物)和IX-1作为原料按照实施例1步骤O-P所述的方法制得。将产物I-8通过HPLC纯化(系统Ap)。
1H-NMR(CDCl3)：(仅特征性信号)8.97(s，br，1H)；8.56(d，2H)；8.27(s，1H)；8.15(s，1H)；7.72(d，br，2H)；5.82(s，br，2H)；5.40(dd，1H)；4.91(d，1H)；4.60-4.77(m，2H)；4.51(d，1H)；4.18(s，1H)；3.98-4.05(m，1H)；3.79(d，1H)；3.69(d，1H)；3.5-3.6(m，1H)；3.35(s，3H)；3.08(s，3H)；1.42(s，3H)；1.37(s，3H)；1.15(d，3H)；1.08(d，3H)；1.01(d，3H)；0.85(t，3H)。
实施例9
其中的R1是[3-[4-氨基-7-([甲氧基羰基甲基]-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-9)的制备
A]{[4-氨基-1-(3-氯-丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-羰基]-氨基}-乙酸甲酯的制备
将60mg(0.24mmol)实施例8步骤L的产物、54mg(0.28mmol)EDC、38mg(0.28mmol)HOBt和89mg(0.71mmol)甘氨酸甲酯HCl盐在6mlDMF中的混合物在室温下搅拌2小时。将混合物浓缩并将粗产物通过制备型HPLC纯化，得到72mg白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：9.32(m，1H)；8.66(s，br，2H)；8.47(s，1H)；7.89(s，1H)；4.52(t，2H)；4.04(d，2H)；3.67(s，3H)；3.52(t，2H)；2.11(m，2H)。
B]其中的R1是[3-[4-氨基-7-([甲氧基羰基甲基]-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-丙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-9)的制备
该标题化合物I-9用{[4-氨基-1-(3-氯-丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-羰基]-氨基}-乙酸甲酯(实施例9步骤A的产物)和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。将产物I-8通过HPLC纯化(系统Ap)，得到白色固体状所需产物。MS：精确质量(ESI)：1093.5698Da。
实施例10
其中的R1是[2-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-10)的制备
A]4-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙基氨基]-6-氯-5-硝基-烟酸乙酯的制备
将362mg(1.37mmol)实施例8步骤C的产物和138mg(1.37mmol)三乙胺在4ml乙醇中的溶液加热回流。将240mg(1.37mmol)2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-乙基胺滴加到该溶液中并将混合物在回流下继续搅拌1小时。减压除去溶剂并将形成的残余物通过硅胶柱色谱纯化(己烷/乙酸乙酯80∶1)，得到430mg(79％)黄色油状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：9.05(m，1H)；8.66(s，1H)；4.33(q，2H)；3.75(t，2H)；3.11(t，2H)；1.32(t，3H)；0.84(s，9H)；0.04(s，6H)。
B]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯的制备
4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯用实施例10步骤A的产物作为原料按照实施例8步骤F至K所述的方法制得。分离得到浅黄色粉末状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：9.00(s，br，2H)；8.53(s，1H)；8.31(s，1H)；4.96(t，2H)；4.33(q，2H)；4.00(t，2H)；1.32(t，3H)。
C]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸的制备
向50mg(0.19mmol)4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸乙酯(实施例10步骤B)和1.1ml 2M NaOH水溶液的混合物中加入0.3ml THF和0.8ml MeOH。将混合物在室温下搅拌2.5小时。减压蒸发MeOH和THF并将剩余混合物的pH用2N HCl水溶液调节至pH＝2。将产物沉淀并通过过滤分离。将甲苯加入到产物中并蒸发溶剂。该过程重复三次。最后分离得到浅灰色固体状的24mg(53％)所需产物。MS(ESI)：241.0([MH]+)。1H-NMR(DMSO-d6)：8.35(s，1H)；8.14(s，1H)；7.06(s，br，2H)；4.93(m，2H)；3.89(m，1H)。
D]4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基酰胺的制备
将48mg(0.20mmol)实施例10步骤C的产物、114mg(0.30mmol)HATU、61mg(0.65mmol)4-氨基-吡啶和0.051ml(0.30mmol)DIPEA在15ml DMF中的混合物在30℃下搅拌过夜。将产物直接通过制备型HPLC纯化，得到47mg(74％)白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：10.79(s，1H)；8.43(d，2H)；8.29(s，1H)；8.17(s，1H)；7.69(d，2H)；6.94(s，2H)；4.77(t，2H)；3.86(t，2H)。
E]其中的R1是[2-[4-氨基-7-(吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-10)的制备
该标题化合物I-10用4-氨基-1-[2-氯-乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-7-甲酸吡啶-4-基酰胺(实施例10步骤D)和IX-4作为原料按照实施例4的步骤D所述的方法制得。将该产物通过制备型HPLC纯化(系统Cp)，得到白色固体。MS：精确质量(ESI)：1084.5637Da。
实施例11
其中的R1是[2-[4-氨基-7-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-11)的制备
A]其中的R1是[2-[4-氨基-7-乙氧基羰基-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物的制备
向1.6g(1.9mmol)实施例4步骤C的产物(IX-4)和0.5ml水在40mlDMF中的溶液中加入765mg(3.8mmol)三丁基膦并将混合物在室温下搅拌3小时。加入400mg(1.39mmol)实施例10步骤B的产物和290mg(1.9mmol)DBU并将混合物在20℃下搅拌20小时。然后将60ml水加入到反应液中并将混合物用3×80ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发溶剂。将粗产物通过硅胶柱色谱纯化(DCM/MeOH 40/1，20/1，10/1)，得到895mg(46％)浅黄色粉末状所需产物。MS(ESI)：518.8([M+2H]++/2)。
B]其中的R1是[2-[4-氨基-7-羧基-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物的制备
将300mg(0.3mmol)实施例11步骤A的产物、3ml LiOH水溶液(2N)、8ml THF和6ml MeOH的混合物在18℃下搅拌20小时。将反应混合物减压浓缩并将残余物用3×50ml DCM萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发溶剂，得到0.172g粗产物。将粗产物通过制备型HPLC纯化(柱：Purospher Star RP-18e、5μm、125×25mm；流速：25mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水+0.1％甲酸；流动相B：乙腈；梯度：线性地从10％至40％乙腈，8分钟；然后是100％乙腈)，得到白色固体。MS(ESI)：504.8([M+2H]++/2)。保留时间(系统Ba)：12.9分钟。
C]其中的R1是[2-[4-氨基-7-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-11)的制备
将153mg(4.46mmol)NaH(60％的油分散体)悬浮在1ml DMF中并加入873mg(5.3mmol)4-氨基-3，5-二氯吡啶在2ml DMF中的溶液。将悬浮液在25℃下搅拌3小时。同时将260mg(0.26mmol)实施例11步骤B的产物、153mg(0.8mmol)EDC和78mg(0.58mmol)HOBt在5ml DMF中的溶液在25℃下搅拌1小时。然后将该溶液在-5至0℃下加入到以上制备的4-氨基-3，5-二氯吡啶的溶液中。将混合物在该温度下搅拌10分钟并用1ml水终止反应，然后将混合物的pH用2N HCl水溶液调节至pH 7-8。将混合物浓缩并将残余物通过制备型HPLC纯化(柱：Purospher StarRP-18e、5μm、125×25mm；流速：25mL/分钟；检测：254nm；流动相A：水+0.01％甲酸；流动相B：乙腈；梯度：线性地从20％至60％乙腈，10分钟；60％乙腈，5分钟)，得到210mg(70％)白色固体状所需产物。
1H-NMR(DMSO-d6)：10.68(s，1H)；8.70(t，2H)；8.31(s，1H)；8.24(s，1H)；6.97(t，2H)；5.15(m，1H)；4.85(m，1H)；4.72(m，1H)；4.62(m，1H)；4.40(m，3H)；4.00(m，1H)；3.66(m，1H)；3.58(t，2H)；2.40(s，6H)；1.80(m，2H)；1.65(m，2H)；1.51(m，3H)；1.40(s，3H)；1.29(s，3H)；1.05-1.20(m，16H)；1.00(d，3H)；0.93(d，3H)；0.73(t，3H)。MS：精确质量(ESI)：1152.4906Da。
实施例12
其中R1是[2-[6-氨基-2-[[(3-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-12)的制备
A]9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤的制备
将10g(66.6mmol)2，6-二氨基嘌呤在氩气下悬浮在300ml DMF中并加入21.6g(156.5mmol)碳酸钾和24ml 1-溴-2-氯乙烷。将混合物在室温下搅拌64小时。将浅黄色悬浮液过滤，并将固体用30ml DMF洗涤，随后用100ml水研制30分钟。将混合物过滤，并将固体用50ml水洗涤并真空干燥，得到10.15g(72％)白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：7.72(s，1H)；6.67(s，br，2H)；5.81(s，br，2H)；4.30(t，2H)；3.99(t，2H)。
B]6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(3-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤的制备
将100mg(0.47mmol)9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤(实施例12，步骤A)溶于10ml MeOH中并加入3g分子筛0.044ml(0.47mmol)3-吡啶甲醛和0.135ml(2.35mmol)乙酸。将混合物在室温下搅拌2小时。加入23.6mg(0.38mmol)氰基-硼氢化钠并继续搅拌4小时。补加0.044ml(0.47mmol)3-吡啶甲醛并在3天内于室温下分三批加入72mg氰基-硼氢化钠。蒸发溶剂并将残余物溶于50ml乙酸乙酯中。将有机层用饱和碳酸钠水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发溶剂，得到0.254g黄色油状粗产物。将粗产物通过快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH 99.5/0.5→80∶20)，得到88mg白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.57(s，1H)；8.40(m，1H)；7.74(s，br，1H)；7.73(s，1H)；7.30(m，1H)；6.99(m，1H)；6.75(s，br，2H)；4.45(d，2H)；4.30(t，2H)；3.95(t，2H)。
C]其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(3-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-12)的制备
该标题化合物I-12用6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(3-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤(实施例12步骤B的产物)和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。将粗产物通过HPLC纯化(系统Ap)，得到白色固体状所需产物。MS：精确质量(ESI)：1071.5826Da。
实施例13
其中的R1是[2-[6-氨基-2-[[(4-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-13)的制备
A]6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤的制备
6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤从4-吡啶甲醛和9-(2-氯乙基)-2，6-二氨基-嘌呤按照实施例12的步骤B所述的方法制得。将粗产物通过快速色谱纯化(DCM/MeOH 99.5/0.5→80∶20)，得到白色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)：8.44(d，2H)；7.73(s，1H)；7.31(d，2H)；7.01(t，1H)；6.75(s，br，2H)；4.46(d，2H)；4.27(t，2H)；3.91(t，2H)。
B]其中R1是[2-[6-氨基-2-[[(4-吡啶基)甲基]氨基]-嘌呤-9-基]乙基]硫基、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I-A化合物(I-13)的制备
该标题化合物I-13用6-氨基-9-(2-氯乙基)-2-[(4-吡啶基甲基)氨基]-嘌呤(实施例13步骤A的产物)和IX-1作为原料按照实施例1的步骤O-P所述的方法制得。将粗产物通过HPLC纯化(系统Ap)，得到白色固体状所需产物。MS：精确质量(ESI)：1071.5826Da。
实施例14
其中R1是[2-[4-氨基-7-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-乙基]硫基、R2是羟基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物(I-14)的制备
在氮气气氛下将60mg化合物1-11溶于5ml HCl水溶液(1N)中，并将该溶液在28℃搅拌5小时。将反应化合物冷却至0℃并用Na2CO3水溶液(10％)处理以调节溶液至pH 7-8。将该混合物用30ml DCM萃取3次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂真空蒸发，得到粗产物。将该粗产物经硅胶色谱纯化(DCM/MeOH 10∶1)，得到20mg(38％)米色固体状所需产物。1H-NMR(DMSO-d6)(仅特征信号)：10.64(s，1H)；8.70(t，2H)；8.31(s，1H)；8.15(s，1H)；6.93(s，2H)；5.18-5.28(m，2H)；4.83(m，1H)；4.63(m，1H)；4.52(d，1H)；4.44(s，1H)；3.66(s，1H)；1.79-1.91(m，2H)；1.61-1.72(m，2H)；1.40(s，3H)；1.18(s，3H)；0.95(d，3H)；0.93(d，3H)；0.71(t，3H)。
实施例15
其中R1是[2-[(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-氨基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基团、R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物(I-15)的制备
A](3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-氨的制备
将1.408g(6.48mmol)3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基胺(Garcia等人，JOC，2005，70，1050页)溶解于20ml甲苯中，并加入1.197g(6.6mmol)3，5-二氯-4-吡啶甲醛、3.6ml(25.9mmol)三乙胺和1.85ml(32.4mmol)乙酸。将混合物在25℃下搅拌2小时，然后加入1.629g(25.9mmol)NaBH3CN，并将混合物在25℃下继续搅拌1小时。将溶剂蒸发，并将粗产物经硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯15∶1)，得到1.98g(82％)的浅黄色固体状所需产物。1H NMR(DMSO-d6)：8.61(s，2H)；6.70(d，1H)；6.30(d，1H)；6.15(dd，1H)；5.55(t，1H)；4.65(m，1H)；4.36(d，2H)；3.59(s，3H)；1.77-1.81(m，2H)；1.64-1.67(m，4H)；1.53-1.56(m，2H)。
B](2-氯乙基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-氨的制备
将1.9g(4.96mmol)步骤A的化合物溶于20ml甲醇中，并加入5.8g氯乙醛溶液(40％的水溶液；29.7mmol，6当量)、1.87g(77.4mmol，6当量)NaBH3CN和0.44ml(7.69mmol)乙酸。将混合物在28℃下搅拌5小时。然后减压除去溶剂，并将残余物溶于20ml水和40ml二氯甲烷中。分离混合物，并将水相用30ml DCM萃取。将合并的有机层用30ml水洗涤，然后用30ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空蒸发。将粗产物经快速硅胶色谱纯化(石油醚/乙酸乙酯15∶1和10∶1)，得到1.6g(72％)浅黄色固体状所需产物。1H NMR(DMSO-d6)：8.59(s，2H)；6.77(d，1H)；6.40(s，1H)；6.38(d，1H)；4.66(m，1H)；4.65(s，2H)；3.62(s，3H)；3.60(t，2H)；3.55(t，2H)；1.51-1.65(m，8H)。
C]其中R1是[2-[(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-氨基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基团、R12和R13一起形成C＝O基团和R14是甲基且Rp1是乙酰基的式XX化合物的制备
在氮气气氛下将89mg(0.12mmol)其中的R2和R3一起形成C＝O键、R4是氢、R14是甲基、Rp1是乙酰基、且Rp4是甲基的式XVIII化合物(根据WO03/072588中所述的方法合成的)溶解于5ml DMF中，并加入1滴水和0.06ml(0.24mmol)的三丁基膦，并将混合物在室温搅拌至无原料剩余(2h)。然后将57.5mg(0.13mmol)(2-氯乙基)-(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-胺和0.018ml DBU加入到溶液中。将反应液在室温搅拌20小时并真空浓缩，并将残余物溶解于5ml DCM中。将有机层用2ml NaHCO3(5％)洗涤2次并用2ml盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到黄色油状粗产物。将粗产物经快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH/NH399.5∶0.5∶0.01→97∶3∶0.01)，得到44mg黄色油状所需产物。MS(ESI)：1079.6([MH]+)、550.9([M+2H]++/2)。
D]其中R1是[2-[(3-环戊基氧基-4-甲氧基-苯基)-(3，5-二氯吡啶-4-基-甲基)-氨基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基团、R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物的制备
将实施例15步骤C的产物(42mg)溶解于2ml甲醇中，并在室温搅拌过夜。然后将反应混合物真空浓缩，并将残余物经快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH/NH399.5∶0.5→95∶5)，得到0.013mg米色固体状所需产物。MS(ESI)：1036.6([MH]+)、518.9([M+2H]++/2)。
实施例16
其中R1是[2-[(5-(3，5-二氯-吡啶-4-基-氨基-羰基)-1-乙基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-4-基氨基]-乙基]硫基、R2是-OH、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团并且R14是甲基的式I化合物1-16的制备
将27mg化合物1-6(实施例6)悬浮于1ml乙醇和2ml水中，并将0.15ml 3N HCl滴加至混合物中。将混合物在室温搅拌20小时。用2N NaOH中和混合物并将混合物用5ml乙酸乙酯萃取两次。将合并的有机层用NaHCO3(5％)水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到米色固体状粗产物。将该粗产物经快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH/NH399∶1∶0.01→85∶15∶0.01)，得到20mg米色固体状所需产物。MS(ESI)：1022.7，1024.6([MH]+)，512.9([M+2H]++)。
实施例17
其中R1是[2-[5-[(3，5-二氯-吡啶-4-基甲基)-氨基]-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基团、R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团、且R14是甲基的式I化合物1-17的制备
A]2-(2-氯-乙氧基)-1-甲氧基-4-硝基苯的制备
将40g(0.236mol)2-甲氧基-5-硝基苯酚、135g(0.946mol)1-溴-2-氯乙烷和130.7g(0.946mol)碳酸钾在500ml丙酮中的混合物加热沸腾至无原料剩余(8h)。过滤混合物并蒸发滤液。将残余物溶解于乙酸乙酯中并通过硅藻土(dicalite)过滤。将滤液减压蒸发并将残余物在乙酸乙酯中结晶，得到39.6g黄色固体状所需产物。1H NMR(DMSO-d6)：7.95(m，1H)；7.79(d，1H)；7.21(d，1H)；4.39(t，3H)；3.98(t，3H)；3.93(s，3H)。
B]3-(2-氯-乙氧基)-4-甲氧基-苯胺的制备
将25.9g(0.112mol)2-(2-氯-乙氧基)-1-甲氧基-4-硝基苯(实施例17步骤A)溶解于250ml四氢呋喃中，并将溶液脱气。然后加入2.16g钯炭(10％)，并将混合物在氢气气氛(1个大气压)下搅拌至无原料剩余。将混合物经硅藻土(dicalite)过滤并蒸发滤液。该化合物未经纯化而用于下一步骤。
C][3-(2-氯-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-(3，5-二氯-吡啶-4-基甲基)-胺的制备
将20g(99mmol)3-(2-氯-乙氧基)-4-甲氧基-苯胺(实施例17步骤B)溶解于200ml甲醇中，并加入17.8g(101mol)3，5-二氯-4-吡啶甲醛和26.5ml(436mmol)乙酸。出现沉淀。并将混合物在室温搅拌30分钟，然后加入23.3g(370mmol)氰基硼氢化钠。沉淀消失，并将混合物在室温搅拌至无原料剩余(～30分钟)。减压蒸发溶剂并将残余物溶于乙酸乙酯中。用盐水洗涤有机层，用Na2SO4干燥，过滤并真空浓缩，得到固体状粗产物。将粗产物在乙酸乙酯-正己烷中结晶，得到17.4g米色固体。1H NMR(DMSO-d6)：8.63(s，2H)；6.76(d，1H)，6.39(d，1H)；6.23(dd，1H)；5.60(t，1H)；4.37(d，2H)；4.15(t，2H)；3.90(t，2H)；3.65(s，3H)。
D]其中R1是[2-[5-[(3，5-二氯-吡啶-4-基甲基)-氨基]-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2和R3一起形成C＝O基团、R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团、且R14是甲基的式I化合物(1-17)的制备
所述标题化合物是按照实施例15步骤C和D所述的方法从[3-(2-氯-乙氧基)-4-甲氧基-苯基]-(3，5-二氯-吡啶-4-基甲基)-胺(实施例17步骤C)和其中的R2和R3一起形成C＝O键、R4是氢、R14是甲基、Rp1是乙酰基且Rp4是甲基的式XVIII化合物(根据WO03/072588中所述的方法合成)制备的。MS(ESI)：968.5([MH]+)，485.0([M+2H]++)。
实施例18
其中R1是[2-[5-(3，5-二氯吡啶-4-基-氨基羰基)-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2是2-(4-吗啉基)乙酰氧基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团且R14是甲基的式I化合物1-18的制备
A]3-(2-氯-乙氧基)-4-甲氧基-苯甲酸的制备
将500mg(2.97mmol)异香草酸溶解于5ml DMF中，并加入1.07g(7.74mmol)碳酸钾和0.7ml(8.49mmol)1-溴-2-氯乙烷。将混合物加热至50℃，保持6小时，并加热至70℃，保持1小时。随后，蒸发DMF并将20ml水加入到残余物中。将水层用50ml乙酸乙酯萃取两次。合并有机层并减压蒸发溶剂。将残余物溶于20ml THF和20ml甲醇中并加入20ml 4NNaOH水溶液。将反应混合物在室温搅拌2小时，并蒸发有机层。用浓盐酸将水相调至pH＝7，致使产物沉淀，通过过滤分离产物并将其用水洗涤，得到347mg灰色固体状所需产物。
B]3-(2-氯-乙氧基)-N-(3，5-二氯-吡啶-4-基)-4-甲氧基-苯甲酰胺的制备
将31mg(0.74mmol)氢化钠溶于2ml DMF中，并加入4-氨基-3，5-二氯吡啶。将混合物在28℃搅拌3小时，得到“溶液A”。
将50mg(0.22mmol)化合物14-A、99mg(0.26mmol)HATU和45μl(0.26mmol)乙基二异丙基胺溶解于20ml DMF中，并将得到的溶液在29℃搅拌45分钟。在0-10℃滴加溶液A(参见上面)，并将混合物在该温度搅拌15分钟。通过加入盐酸将混合物的pH调至6，并减压蒸发DMF。将残余物溶于70ml乙酸乙酯中，并将有机层用50ml 0.5N盐酸洗涤两次，用50ml水洗涤和用50ml盐水洗涤两次，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到120mg褐色固体状粗产物。将粗产物经快速硅胶色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚1∶2)，得到60mg白色固体状所需产物。1H NMR(DMSO-d6)：3.86(s，3H)，3.96(t，2H)，4.30(t，2H)，7.14(d，1H)，7.58(d，1H)，7.70(dd，1H)，8.73(s，2H)，10.45(s，1H)。
C]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且Rp1是乙酰基且R14是甲基的式XIX化合物的制备
将300mg化合物VII-1(实施例1步骤K的产物)悬浮于30ml 1N HCl中，并将混合物在40℃下搅拌13小时。加入2ml乙腈并继续搅拌17小时。用2N NaOH水溶液将反应混合物调至pH＝7，并将混合物用30mlDCM萃取两次。将合并的有机层用水和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到浅褐色泡沫状粗产物。将粗产物经快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH 40∶1)，得到130mg米色固体状所需产物。MS(ESI)：808.3([MH]+)
D]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且Rb是CH2Cl、Rp1是乙酰基且R14是甲基的式XXIV化合物的制备
将60mg(0.07mmol)实施例18步骤C的化合物溶解于5ml DCM中，并加入28mg(0.16mmol)2-氯乙酸酐、8mg(0.15mmol)DMAP和15mg吡啶。将混合物在15℃下搅拌1小时，随后倒入50ml水中。将水相用20ml DCM萃取两次。将合并的有机层用5％盐酸、水、饱和NaHCO3水溶液和盐水洗涤，用Na2SO4干燥并真空浓缩，得到米色固体状粗产物。产物未经纯化而用于下一步骤。MS(ESI)：884.4([MH]+)
E]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且R2b和R2c一起形成吗啉环(包括它们所连接的氮原子)、Rp1是乙酰基且R14是甲基的式XXV化合物的制备
将600mg(0.68mmol)实施例18步骤C的化合物溶解于30ml丙酮中，并加入280mg(3当量)碳酸钾、150mg吗啉(1.7mmol)和20mg NaI。将反应混合物在20℃下搅拌20小时且在50℃下搅拌12小时。蒸发溶剂并将水加入到残余物中。将水层用30ml DCM萃取3次。并将合并的有机层用水和盐水洗涤，用硫酸钠干燥并真空浓缩，得到粗产物。将粗产物经快速硅胶色谱纯化(DCM/MeOH 80∶1)，得到220mg白色固体状所需产物。MS(ESI)：935.3([MH]+)，468.2([M+2H]++)
F]其中的R1是[2-[5-(3，5-二氯吡啶-4-基-氨基羰基)-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2是2-(4-吗啉基)乙酰氧基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团且R14是甲基的式I化合物(1-18)的制备
按照实施例15步骤C和D所述的方法，标题化合物从3-(2-氯-乙氧基)-N-(3，5-二氯-吡啶-4-基)-4-甲氧基-苯甲酰胺(实施例18步骤B)和实施例18步骤E的化合物制得。MS(ESI)：1111.3([MH]+)，556.4([M+2H]++)保留时间(系统Ca)：28.0分钟
实施例19
其中R1是[2-[5-(3，5-二氯吡啶-4-基-氨基羰基)-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2是3-(4-吗啉基)-1-氧代丙氧基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团且R14是甲基的式I化合物1-19的制备
A]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且Rb是-CH＝CH2、Rp1是乙酰基且R14是甲氧基的式XXIV化合物的制备
将30mg(0.04mmol)实施例18步骤C的化合物溶解于10ml DCM中，并加入6.7mg(2.当量)丙烯酰氯和11.3mg三乙胺。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后再加入3.35mg丙烯酰氯。将反应混合物在室温搅拌至无原料保留(1.5h)。将混合物用10ml盐水洗涤，用MgSO4干燥并减压蒸发，得到粗产物(44mg)，其未经进一步纯化而直接用于下一步骤。MS(ESI)：862.2([MH]+)
B]其中的R1是[(4-甲氧基苯基)甲基]硫基且R2b和R2c一起形成吗啉环(包括它们所连结的氮原子)、Rp1是乙酰基且R14是甲基的式XXVI化合物的制备
将54mg(0.06mmol)实施例19步骤A的化合物溶解于4ml乙腈中并加入54.6mg(0.63mmol)吗啉。将反应混合物在室温搅拌24小时。减压蒸发溶剂并真空干燥。粗产物未经进一步纯化而用于下一步骤。MS(ESI)：949.3([MH]+)，475.2([M+2H]++)
C]其中的R1是[2-[5-(3，5-二氯吡啶-4-基-氨基羰基)-2-甲氧基-苯氧基]乙基]硫基、R2是3-(4-吗啉基)-1-氧代丙氧基、R3和R4是氢、R12和R13一起形成C＝O基团且R14是甲基的式I化合物1-19的制备
按照实施例15步骤C和D所述的方法，标题化合物从3-(2-氯-乙氧基)-N-(3，5-二氯-吡啶-4-基)-4-甲氧基-苯甲酰胺(实施例18步骤B)和实施例19步骤B的化合物制得。MS(ESI)：1125.5([MH]+)，563.5([M+2H]++)保留时间(系统Ca)：28.0分钟
B.生物学活性
本发明化合物对人的磷酸二酯酶(PDE)、尤其是对PDE4表现出显著的抑制活性。以下试验用于测定所述化合物的抑制活性。
试验
PDE4特异性地水解cAMP并且释放产物AMP。所述活性剂抑制PDE的能力在体外的酶试验中进行测定。该试验是商业上可得的(IMAPTM FP试验Molecular Devices Corp.)并且将其优化来用于人的PDE4。将荧光标记的cAMP通过PDE4水解，然后在第二个步骤中，将标记的产物结合到较大的结合伙伴上，从而可以通过荧光偏振(FP)测定法检测产物。
将PDE4从未分化的人单核细胞(U-937)按照Thorpy等1992(J.Pharmacol.Exp.Ther.263：1195)所述的方法部分地纯化。最终的制备物对于cAMP是特异性的，并且在该试验的检测限之上不水解cGMP。另外，通过利用PDE4-特异性和非特异性PDE抑制剂的抑制试验来确认PDE4的制备物。
在DMSO中制备待测化合物的储备溶液，然后在试验缓冲液(10mMTris-HCl、10mM MgCl2、0.1％BSA、0.05％NaN3，pH 7.2)中稀释至所需的浓度。用于该试验的溶液含有在具有2％DMSO的试验缓冲液中的待测化合物。
将10μl底物(以厂商推荐的浓度)与5μl适当稀释的PDE和5μl待测化合物溶液相混合。将含有2％DMSO的5μl反应缓冲液用于对比反应。试验中DMSO的终浓度为0.5％，该浓度不会明显地改变PDE的活性。在室温下孵育90分钟后按照厂商的说明加入60μl结合剂。进行结合30分钟，然后测定荧光偏振。PDE抑制的剂量依赖性通过一式两份地测定系列稀释的待测化合物来测定。IC50值从测定的活性通过曲线拟合来确定。
结果
  实施例   IC50(PDE4)[μM]
  1   13.4
  2   3.9
  3   3.4
  4   0.28
  5   0.85
  6   0.37
  7   7.6
  8   4.7
  9   24.2
  10   1.0
  11   0.008
  12   3.8
  13   2.6
  14   0.0049
  15   0.48
  16   0.11
如实施例所示的本发明化合物的PDE4-抑制活性是特别令人惊奇的，因为所列举的化合物中的具有下式结构的基本的大环内酯在高达50μM的浓度下在实施例所用的试验中没有表现出任何的PDE4-抑制活性，
并且，即使在本发明化合物之一中连接到所述基本的大环内酯上的取代基当以游离形式使用时在所述的试验中表现出一定的PDE4-抑制活性，例如下列化合物：
其IC50(PDE4)值为3.6μM，本发明的各化合物(其中与所述的非常相似的各化合物连接在一起形成式(I-A)的分子)的PDE4-抑制活性通常也表现出比其各局部组分相应的活性以及比对所述局部组分的混合物合理预期的活性要显著改善的PDE4-抑制活性。在本发明的情况下，例如对于具有下式的实施例11的化合物来说，IC50(PDE4)为0.008μM：
它仅仅是游离形式的大环内酯取代基IC50(PDE4)的约五百分之一。

Claims (13)

1.式(I)的大环内酯类化合物：
其中：
R1是基团-Y-X-Q；
Y是S；
X是-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-或者是通过NH基团或O与基团Q连接的-CH2-CH2-O-、-CH2-CH2-NH-；
Q是基团-V-A1-L-A2-W或-NR6R7；
V是下式的二价基团：
或
W是下式的基团：
A1和A2相互独立地不存在或者是C1-C4亚烷基；
L是-NH-、-(CO)NH-或-NH(CO)-；
R2是OR2a，且
R3是氢，或者
R2和R3与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团；
R2a是氢；
R4是氢，
R6是下式的基团：
R7选自：和
R12和R13与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团；
R14为氢或甲基；并且
＊表示为(R)或(S)构型的手性中心。
2.用于预防和/或治疗动物或人的癌症的根据权利要求1所述的式(I)化合物。
3.用于治疗动物或人的癌症的用途的根据权利要求1所述的式(I)化合物。
4.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中R2为OR2a且其他基团如权利要求1所定义。
5.根据权利要求1所述的式(I)化合物，其中R2和R3与它们所连接的碳原子一起表示C＝O基团。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中大环内酯环6位的OR14表示甲氧基。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中Q是基团-V-A1-L-A2-W。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中Q是-NR6R7。
9.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有下式之一的结构：
10.包含根据权利要求1所述的化合物和可药用载体的药物组合物。
11.用于预防和/或治疗人的癌症的根据权利要求10所述的药物组合物。
12.根据权利要求1所述的化合物在生产用于预防和/或治疗选自动物和人的个体的癌症的药物中的用途。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述个体是人。
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