CN101935295A - 番木瓜种子活性成分的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种番木瓜种子活性成分的提取方法。本发明所提供的方法包括采用食用油提取该活性成分，具体包括以下步骤：1)取番木瓜种子，加水酶解，得到活性成分；2)加入食用油提取出步骤1)所得到的活性成分。本发明所提供的方法制备工艺简单易行，非常适合规模化工业生产操作，能够有效地将活性成分如异硫氰酸苄酯转变成了便于人们食用的制剂。

Description

番木瓜种子活性成分的提取方法
技术领域
本发明涉及一种番木瓜种子活性成分的提取方法。
背景技术
番木瓜是极具营养价值的热带水果，内含丰富的营养和保健成分。番木瓜种子中含有较多的苄基硫代葡萄糖苷，在番木瓜自身的芥子酶的作用下可以水解生成具有防癌抗癌作用的成分——异硫氰酸苄酯。苄基硫代葡萄糖苷在番木瓜果肉中的含量很低，仅为番木瓜种子中含量的千分之一左右。
鉴于番木瓜种子不直接食用，而作为废弃物处理，开发其中的活性成分及其相关产品就成为提高其附加值的重要途径。
因此，有待开发一种提取番木瓜种子中的异硫氰酸苄酯等活性成分的方法。
发明内容
因此，本发明的目的是，提供一种番木瓜种子活性成分的提取方法。
本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。
本发明提供一种番木瓜种子活性成分的提取方法，所述方法包括采用食用油提取该活性成分的步骤。
优选地，所述方法包括以下步骤：1)取番木瓜种子，加水研碎后酶解，得到活性成分；2)加入食用油提取出步骤1)所得到的活性成分。
优选地，所述方法步骤1)中加水酶解的具体操作如下：取番木瓜种子，加少量水研碎成糊状后，再加适量水使之淹没；优选地，所述番木瓜种子主要为成熟番木瓜种子。
优选地，所述方法步骤2)中加入食用油提取的具体操作如下：加入食用油后，混匀，放置10～30分钟，离心，分离油层，即得；优选地，所述放置时间为15分钟，所述离心条件为5000rpm下离心10分钟。
优选地，所述方法中食用油的用量为所提取番木瓜种子重量的3～10倍。
优选地，所述方法中的食用油选自大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、菜籽油、棕榈油、葵花籽油、茶油、红花油和色拉油中的一种或几种。
优选地，所述方法还包括将所提取的活性成分制备成药物制剂的步骤；更优选地，所述制剂为软胶囊、乳剂、微球或注射剂；最优选为软胶囊。
优选地，所述方法所提取出的活性成分含有异硫氰酸苄酯，其含量为100～1000μmol/100g(即每100g番木瓜种子中提取出的异硫氰酸苄酯为100～1000μmol)，优选为200～400μmol/100g。不同的品种会有所差别。
本发明还提供了上述的方法在提取番木瓜种子活性成分中的用途；优选地，所述活性成分含有异硫氰酸苄酯。
在本发明的一个优选实施方案中，所提供的番木瓜种子活性成分的提取与制剂方法，该方法依次由下述过程组成：
(1)取成熟番木瓜种子，加少量水研碎成糊状后再加水适量使之淹没，然后加入5倍量食用油，混匀；
(2)室温下放置15分钟，再室温下5000rpm离心10分钟；
(3)分离上层油层，加工成制剂。
所述步骤(1)中所用的食用油包括大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、菜籽油、棕榈油、葵花籽油、茶油、红花油、色拉油或调和油等。
所述步骤(3)中制备的制剂剂型为软胶囊。
综上所述，番木瓜种子通常作为废弃物，但其中有含量较高的苄基硫代葡萄糖苷，这是具有防癌抗癌作用的活性成分——异硫氰酸苄酯的前体物质。本发明首先提取此前体物质，将番木瓜种子加水研碎后放置一定时间，种子中有内源性的芥子酶，可以使苄基硫代葡萄糖苷发生水解，最后生成异硫氰酸苄酯，即通过对番木瓜种子进行酶水解，将前体物质苄基硫代葡萄糖苷转变成了具有良好生物活性的物质异硫氰酸苄酯，再经过食用油提取、分离得到食用油层，最终将收集的活性成分制备成适宜的剂型，如软胶囊等。本发明所提供的方法制备工艺简单易行，非常适合规模化工业生产操作，能够有效地将活性物质转变成了便于人们食用的制剂，从而进行人类相关疾病的预防和治疗。
由此可见，本发明具有的优点如下：
首先，本发明采用食用油对活性成分进行提取，可以避免采用其它有机溶剂提取造成的溶剂残留的危害，且提取的效率不低于有机溶剂；
其次，本发明可以将食用油提取物直接制备成适宜的剂型，如软胶囊，制备工艺简单成熟。若是采用有机溶剂如正己烷等提取，由于有机溶剂对人体有毒害，故不能直接制剂，即使对有机溶剂先进行回收，也会因为有残留而需要严格控制残留量，增加许多工序及成本。
因此，本发明所提供的方法可使番木瓜种子变废为宝，具有安全无污染、生产设备投入少、生产环节少等优点，非常适于大规模工业化生产。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1A为异硫氰酸苄酯对照品的色谱图。
图1B为异硫氰酸苄酯的标准曲线图。
图2为实施例2中大豆油提取物的色谱图。
图3为实施例3中玉米油提取物的色谱图。
图4为实施例4中葵花籽油提取物的色谱图。
图5为实施例5中茶油提取物的色谱图。
图6为实施例6中橄榄油提取物的色谱图。
图7为实施例7中芝麻油提取物的色谱图。
图8为实施例8中花生油提取物的色谱图。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实施例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
本实施例分别对番木瓜种子的酶解时间和离心条件进行了优化，具体如下。
1、酶解时间的优化
取成熟番木瓜的种子，研碎后加水适量使淹没，并加入5倍量玉米油，混匀，分别放置5、10、15、20、30分钟，然后5000rpm下离心15分钟；考察异硫氰酸苄酯的含量，结果如表1所示。
表1  不同酶解时间的影响
  酶解时间(min)   异硫氰酸苄酯含量(μmol/100g)
  5   340
  10   358
  15   380
  20   381
  30   372
由表1可见，研碎放置15分钟和20分钟含量无明显差别，而放置30分钟含量还略有下降，故放置15分钟的酶解效果最好。
2、离心条件的优化
取成熟番木瓜的种子，研碎后加水适量使淹没，并加入5倍量玉米油，混匀，放置15分钟后，分别于以下离心条件下进行离心：离心转速分别为3000、4000、5000rpm，时间分别5、10、15分钟，考察分离效果和异硫氰酸苄酯的含量，结果如表2所示。
表2  不同离心条件的影响
Figure BSA00000256165200041
由表2可见，研碎放置15分钟后，5000rpm离心10分钟与4000rpm离心15分钟效果相当，综合考虑工作效率，选择在5000rpm下离心10分钟。
实施例2
取成熟番木瓜的种子1kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入5升大豆油，混匀，室温下放置15分钟，室温5000rpm离心10分钟，分离上层油层，采用压制法或滴制法(具体工艺可参见如《药剂学》(第6版)第168-169页，崔福德主编，人民卫生出版社，2007年)，加工成软胶囊。
按中国药典2005年版二部附录V E气相色谱法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定，实验条件如下：GC-17C气相色谱仪(日本岛津公司)，色谱柱为SPB1701 30m×0.32mm×0.25μm熔融石英毛细管柱，FID检测器，载气为氮气，梯度升温如下：起始温度100℃，保持5分钟，然后以10℃/min升到180℃，保持5分钟，再以20℃/min升到250℃，保持2分钟；检测器温度为280℃，气化室温度为250℃，进样量为1μl。
采用异硫氰酸苄酯对照品(购于sigma公司，纯度大于98％)做出对照图谱，见图1A，并做出标准曲线图，如图1B所示，其中y＝226125x-2749.1，R2＝0.9985。
提取物的色谱结果如图2所示，根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为409μmol/100g。
实施例3
取成熟番木瓜的种子1.5kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入7.5升玉米油，混匀，室温下放置20分钟，室温5000rpm离心15分钟，油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图3所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为388μmol/100g。
实施例4
取成熟番木瓜的种子2kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入10升葵花籽油，混匀，室温下放置20分钟，室温5000rpm离心20分钟，油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图4所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为320μmol/100g。
实施例5
取成熟番木瓜的种子1kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入5升茶油，混匀，室温下放置15分钟，室温5000rpm离心10分钟，使用油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图5所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为376μmol/100g。
实施例6
取成熟番木瓜的种子1.5kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入7.5升橄榄油，混匀，室温下放置20分钟，室温5000rpm离心15分钟，油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图6所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为289μmol/100g。
实施例7
取成熟番木瓜的种子2kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入10升芝麻油，混匀，室温下放置20分钟，室温5000rpm离心20分钟，油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图7所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为340μmol/100g。
实施例8
取成熟番木瓜的种子1.5kg，加少量水研碎成糊状，再加水适量使之淹没，加入7.5升花生油，混匀，室温下放置20分钟，室温5000rpm离心15分钟，油水分离器分离上层油层，采用压制法加工成软胶囊。
参照实施例2中的方法对提取物中的活性成分异硫氰酸苄酯的含量进行测定。所得到的色谱结果如图8所示。根据标准曲线计算出所提取活性成分异硫氰酸苄酯的含量为245μmol/100g。

Claims (9)

1.一种番木瓜种子活性成分的提取方法，其特征在于，所述方法包括采用食用油提取所含活性成分的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
1)取番木瓜种子，加水酶解，得到活性成分；
2)加入食用油提取出步骤1)所得到的活性成分。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述方法步骤1)中加水酶解的具体操作如下：取番木瓜种子，加少量水研碎成糊状后，再加适量水使之淹没；优选地，所述番木瓜种子主要为成熟番木瓜种子。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述方法步骤2)中加入食用油提取的具体操作如下：加入食用油后，混匀，放置10～30分钟，离心，分离油层，即得；优选地，所述放置时间为15分钟，所述离心条件为5000rpm下离心10分钟。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中食用油的用量为所提取番木瓜种子的3～10倍。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法中的提取溶媒为食用油，含有但并不限于大豆油、花生油、玉米油、芝麻油、菜籽油、棕榈油、葵花籽油、茶油、红花油和色拉油中的一种或几种。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所提取的活性成分制备成药物制剂的步骤；优选地，所述制剂为软胶囊、乳剂、微球或注射剂，更优选为软胶囊。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法所提取出的活性成分为异硫氰酸苄酯，其含量为100～1000μmol/100g，优选为200～400μmol/100g。
9.权利要求1至7中任一项所述的方法在提取番木瓜种子活性成分中的用途；优选地，所述活性成分含有异硫氰酸苄酯。
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