CN101932326A

CN101932326A - 4-苯胺喹唑啉衍生物的制药用途

Info

Publication number: CN101932326A
Application number: CN2008800252166A
Authority: CN
Inventors: 姜勇; 郭建辉
Original assignee: Shanghai Allist Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Shanghai Allist Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2007-07-20
Filing date: 2008-07-18
Publication date: 2010-12-29
Also published as: WO2009012702A1; CN101347433B; CN101347433A

Abstract

本发明公开了一种具有式I结构的苯胺喹唑啉化合物，特别是N-{4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)苯基胺基]-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺和N-{4-[3-氯-4-(3-氟-苄氧基)苯基胺基]-7-甲氧基-喹唑啉-6-基-}-丙烯酰胺在制备治疗肺癌、卵巢癌、乳腺癌等erb-B1和/或erb-B2高度表达肿瘤的药物中的用途。

Description

4-苯胺喹唑啉衍生物的制药用途

技术领域

本发明涉及 4-苯胺喹唑啉衍生物的制药用途。具体的说，本发明涉及 4-苯胺喹唑啉衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。背景技术

癌症被认为是细胞内信号传导系统或信号传导机制的疾病。细胞接受许多来自细胞外的指令，指导细胞是否增殖，信号传导系统的目的是接受细胞表面的这些或其它信号，将其导入细胞内，然后将这些信号传递到细胞核、细胞骨架，影响基因的转录和蛋白质的合成。

细胞表面存在大量的受体，生长因子与这些受体的相互作用是细胞生长正常调节的必需事件。然而，在某些条件下，由于这些受体或者突变或者过量表达，这些受体可变为异常，其结果是细胞繁殖不受控制，最终导致肿瘤的生长。

表皮生长因子受体（EGFR)被确定为在细胞生长和繁殖过程中至关重要的驱动因素，在常见的肿瘤，如非小细胞肺癌中，表皮生长因子受体大量表达，远远超出正常范围。表皮生长因子受体家族由 EGFR (Erb-Bl) 、 Erb-B2 (HER-2/neu) , Erb-B3和 Erb-B4组成。表皮生长因子受体与大部分癌症的疾病进程有关，特别是结肠癌和乳腺癌。该受体的过度表达和突变已被明确证实是预后不好的乳腺癌的主要危险因素。此外，已证实该受体家族的所有四个成员均可与该家族的其它成员聚合为异源二聚体，形成信号传导复合物，如果该家族中有一个以上的成员在恶性肿瘤中过度表达，便可导致协同的信号传导作用。

EGFR属于蛋白酪氨酸激酶（PTK)家族，蛋白酪氨酸激酶是一类将磷酸基团从 ATP催化转移到位于蛋白质底物的酪氨酸残基的酶。蛋白酪氨酸激酶在正常细胞生长中起作用。 EGFR的过度表达，导致受体在缺乏配体的条件下被激活，使某些蛋白发生磷酸化，产生了细胞分裂的信号。因此， EGFR通过自身酪氨酸激酶的作用，导致了弱信号的过度放大，引起了细胞的过量增值。

由于异常的受体激酶在癌发病机理中所起作用的重要性，因此最近的许多研究都涉及作为潜在抗癌治疗药物的特异的 PTK 抑制剂的研制。

欧洲专利申请 520722 A1 公开了某些 4-苯胺基间二氮杂萘具有 PTK抑制剂活性。

欧洲专利申请 566226 Al公开了在位置 5-8含有许多取代基的 4-苯胺基间二氮杂萘具有 PTK抑制剂活性。

从欧洲专利申请 635498 A1 得知，在位置 6含有许多取代基、在位置 7必须有一个卤素的某些 4-苯胺基间二氮杂萘也具有 PTK抑制剂活性。

W096/30347涉及一些 4- (取代苯氨基）喹唑啉衍生物、其前药和其药学上可接受的盐，用于治疗过度增生疾病。

W097/38983提供了作为酪氨酸激酶不可逆抑制剂的化合物。

W000/06555也涉及某些取代的喹唑啉的衍生物具有 PTK抑制剂活性。

W099/35146公开了作为蛋白酪氨酸激酶抑制剂的二环杂芳族化合物。然而，目前仍缺乏令人满意的肿瘤治疗药物，因此本领域仍需要开发对受体激酶有抑制活性的肿瘤治疗药物。发明概述

本发明的目的就是提供一类苯胺咪唑啉及其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，尤其是在制备治疗表皮生长因子受体高度表达的肿瘤药物中的应用在本发明的第一方面，提供了一种如通式 I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，

(I)

其中，！？为^ 甲基、甲氧基或乙氧基。

在另一优选例中， 1?为

在另一优选例中， R为甲氧基。

在另一优选例中，所述肿瘤为表皮生长因子受体高度表达的肿瘤类型。在另一优选例中，所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肿瘤类型。更佳地为 erb-Bl和 /或 erb-B2高度表达的肺癌、卵巢癌、或乳腺癌。

在本发明的第二方面，提供了一种治疗肿瘤的方法，包括步骤：给予需要治疗的哺乳动物对象（如人）应用 0. l-50mg/kg体重 /天的式 I化合物或其药学上可接受的盐，

(I)

其中，！？为^ 甲基、甲氧基或乙氧基。

在本发明的第三方面，提供了式 I化合物或其药学上可接受的盐作为表皮生长因子受体高表达的肿瘤的治疗剂的用途。

在本发明的第四方面，提供了一种用于治疗表皮生长因子受体高表达的肿瘤的药物组合物，所示药物组合物含有式 I化合物或其药学上可接受的盐作为活性成分以及药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述肿瘤为表皮生长因子受体高度表达的肿瘤类型。在另一优选例中，所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肿瘤类型。

在另一优选例中，所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肺癌、卵巢癌、乳腺癌。附图说明

图 1显示了本发明化合物对 Erb-B2磷酸化的抑制作用，图中标示 1306为

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺（化合物 1) ; 图中标示 1328为 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -7-甲氧基 -喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺（化合物 2)。发明内容

本发明人经过广泛而深入的研究，证明如下式结构 I化合物或其药学上可接受的盐具有良好的抗肿瘤效果，尤其是对于表皮生长因子受体高表达的肿瘤，具有良好的抑瘤效果，在此基础上完成了本发明

(I)

其中，！？为^ 甲基、甲氧基或乙氧基。本发明提供了一种上述通式 I所示的苯胺咪唑啉化合物（如 Ν- {4- [3-氯 -4_ (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺或 Ν- {4- [3-氯 -4- (3- 氟-苄氧基）苯基胺基] -7-甲氧基-喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺）或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用。

如本文所用，术语 "本发明化合物 " 指式（I)所示化合物或其药学上可接受的盐。本发明中，术语 "药学上可接受的盐" 是指相对无毒的式（I)化合物的与无机或有机的酸或碱形成的盐。例如，这些盐可在化合物最后的分离和提纯过程中现场制备，或者是使纯化的化合物以其游离碱形式与适宜的有机或无机酸进行反应，再将形成的盐分离而制成酸加成盐。代表性盐包括氢溴酸盐、盐酸盐、对甲苯磺酸盐、乙酸盐、硫酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐等。还包括碱金属和碱土金属等阳离子的盐，这些阳离子包括：钠、钾、锂、钙、镁、季胺和胺阳离子。

在本发明中，所述肿瘤类型优选为表皮生长因子受体，即 EGFR高度表达的肿瘤类型。 EGFR应理解为它的四种亚型，如 EGFR (erb-Bl)、erb-B2 (HER-2/neu)、 erb-B3或 erb-B4。本发明所述肿瘤类型优选为 EGFR (erb-Bl) 高度表达的肿瘤类型，如 erb-Bl高度表达的肺癌；本发明另一优选的肿瘤类型为 erb-B2高度表达的肿瘤类型，如 erb-B2高度表达的肺癌、卵巢癌、乳腺癌等。

如本领域技术人员所公知，可以通过添加药学上可接受的载体的方法，来制备含有本发明化合物的药物，从而可用于治疗肿瘤。本发明化合物可以与至少一种常规惰性赋形剂（或载体）混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：（a) 填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸； (b) 粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；（C) 保湿剂，例如，甘油；（d) 崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；（e) 缓溶剂，例如石蜡；（f) 吸收加速剂，例如，季胺化合物；（g) 润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；（h) 吸附剂，例如，高岭土；和（i) 润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。可以通过常规的混合、制粒、压片或包囊的方法，将含有本发明化合物的药物制备成为颗粒剂、片剂、胶囊剂。如果需要，例如所选用的填充剂或崩解剂对水分比较敏感时，还可按照制药实践中常规的方法，选用对水分具有隔离作用的薄膜衣材料进行包衣，或出于获得更好的口感的需要，还可按照制药实践中常规的方法，可以包糖衣层。本领域内技术人员经过简单的处方和工艺筛选，即可得到合理的处方配比和制备方法。

还可以将本发明化合物制备成液体剂型，包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、 1， 3 -丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、娇味剂和香料。除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

上述制备完成的含有本发明化合物的药物可直接给药于人，给药途径可以是口服或舌下给药，优选为口服给药。可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合使用。

在本发明的另一方面，还提供了一种应用通式 I所示化合物或其药学上可接受的盐治疗肿瘤的方法，包括给予肿瘤病人，如 EGFR高度表达的肿瘤病人，尤其是 erb-Bl高度表达和 /或 erb-B2高度表达的肿瘤病人，如 erb-Bl高度表达的肺癌病人或 erb-B2高度表达的肺癌病人、卵巢癌病人、乳腺癌病人，应用 0. l-50mg/kg体重 /天的式 I化合物或其药学上可接受的盐，

(I)

其中，！？为^ 甲基、甲氧基或乙氧基。

在本发明中，给药方式没有特别限制，包括但并不限于：口服、直肠、肠胃外（静脉内、肌肉内或皮下）、局部给药（粉剂、软膏剂或滴剂）、或瘤内给药。优选的给药方式是口服。

给予人体所示化合物的剂量可以是一个应用药物的常规剂量范围，如 0. l-50mg/kg体重 /天，优选 0. 5-20mg/kg体重 /天，具体地说，剂量范围可以是 20mg〜1000mg/天，优选地，每天给予药物的单位剂量是较高的剂量，以获得良好的抗肿瘤治疗作用。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药物联合给药。

本发明的主要优点在于：

(1)本发明化合物对于 erb— B2等表皮生长因子受体高表达的癌症具有很好的抑制和治疗效果。

(2) 本发明化合物毒副作用低，安全性好。下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计。

具体实施方式

实施例 1

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺（化合物 1)

在一个装有冷凝装置的烧瓶中，将原料 6-硝基 -4-氯-喹唑啉 1.20g(5.7mmol)和 4-间氟苄氧基 -3-氯苯胺 1.37g(5.6mmol)溶于 80ml异丙醇，回流反应 3h，体系中析出大量黄色固体，过滤，固体用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤至 pH=8。样品真空干燥，经鉴别该化合物为： 4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基 ]-6-硝基喹唑啉，收率 67%。

在一个装有回流冷凝装置的烧瓶中加入 4-[3-氯 -4-(3-氟-苄氧基）苯基胺基]- 6-硝基喹唑啉 1.60g(3.77mmol)，还原铁粉 1.05g (18.85mmol， 5eq)，冰醋酸 2ml，甲醇 40ml， 85°C油浴下回流反应 2.5h后，过滤除去铁粉，滤液用乙酸乙酯稀释，碳酸氢钠溶液洗涤，水洗，有机相干燥浓缩，得到黄色固体，经鉴别该化合物为： 4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -6-胺基喹唑啉，收率 61%。

在一个 100ml烧瓶中，在冰浴下加入 4-[3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基]- 6-胺基喹唑啉 1.2g(3.04mmol)，三乙胺 0.6ml (4.58mmol， 1.5eq)，丙烯酰氯 0. 28ml (3.33mmol, 1. leq)， THF40ml，逐渐升至室温反应， 3h后，停止反应，过滤，固体水洗至中性，干燥，得到固体 1.0g。经鉴别该化合物为： N-{4-[3- 氯 _4-(3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基- } -丙烯酰胺。

MS: 449。 mp: 222- 225°C。实施例 2

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺盐酸盐将按照实施例 1所述方法制备的 N-{4-[3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] - 喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺 1.0g(2.23mmol)溶于 20mL乙酸乙酯 /三乙胺混合溶剂 (EA/Et3N=40/l)中，于冰水浴下搅拌，缓慢滴加 4mol/L的 HC1/1, 4-二氧六环溶液（2mL)。有黄色固体析出， 45min后停止搅拌，过滤，水洗，干燥得黄绿色固体 530mg(1.09mmol)。经鉴别该化合物为 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺盐酸盐，收率 49%。

MS: 449。 mp: 249- 252°C。 ¾-NMR (400MHz, CDC1₃+DMS0)： δ 8. 91 (IH, s) , 8. 76-8. 69 (2H, m) , 8. 01 (IH, d)， 7. 83 (2H, s)， 7. 68 (IH, dd)， 7. 46-7. 33 (2H, m)， 7. 34-7. 29 (2H, m)， 7. 23-7. 18 (2H, m)， 6. 51 (2H, d)， 6. 28 (IH, t) , 5. 61 (2H, s)。实施例 3

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺对甲苯磺酸盐

将按照实施例 1所述方法制备的 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] - 喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺 3g (6. 68mmol)溶于 50mL四氢呋喃 /甲醇的混合溶剂 (THF/CH₃0H=1/1)中，向体系中缓慢滴加对甲苯磺酸（6eq， 7. 62g)的四氢呋喃 / 甲醇混合溶液（THF/CH₃0H=l/l) 24mL，在滴加过程中，体系缓慢析出大量黄色固体，过滤，固体水洗。真空干燥得黄绿色固体 2. 93g (4. 72mmol)。经鉴别该化合物为 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基- }丙烯酰胺对甲苯磺酸盐，收率 70%。

元素分析（C31H26C1FN405S)：

理论值： C : 59. 95%， H: 4. 22%, N: 9. 02%, S : 5. 16%

实测值： C : 60. 01%, H: 4. 22%, N: 8. 99%, S : 5. 13%

¾-NMR (400MHz, CDC1₃+DMS0)： δ 10. 78 (1H, s) 9. 07 (1Η, s) , 8. 89 (IH, s) , 8. 06-8. 04 (IH, d)， 7. 88-7. 84 (2H, t) , 7. 59-7. 57 (IH, d)， 7. 50-7. 44 (3H, dd) 7. 35-7. 30 (3H, m)， 7. 21-7. 16 (1H, t) , 7. 10-7. 08 (2H, d)， 6. 54-6. 48 (IH, dd) 6. 38-6. 34 (IH, d)， 5. 90-5. 87 (2H, d)， 2. 26 (3H, s)。实施例 4

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺草酸盐将按照实施例 1所述方法制备的 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] - 喹唑啉 -6-基卜丙烯酰胺 1. 0g (2. 23mmol)溶于 20mL甲醇中，于冰水浴下搅拌，缓慢滴加草酸（990mg)的甲醇溶液（2mL)，有黄色固体析出， 45min后停止搅拌，过滤，水洗，干燥得黄绿色固体 530mg (0. 9811111101 - {4- [3-氯-4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6-基} -丙烯酰胺草酸盐，收率 44%。

MS : 449。 mp_: 253- 256°C。

¾-NMR (400MHz, CDC1₃+DMS0)： δ 9. 11 (IH, s) , 8. 76-8. 64 (2H, m) , 8. 01 (1H, d, J=2. 44Hz) , 7. 90 (2H, s)， 7. 71 (1H, dd， J=2. 56Hz, 8. 92Hz) , 7. 52-7. 41 (2H, m)， 7. 33-7. 26 (2H, m)， 7. 12-7. 05 (2H, m)， 6. 54 (2H, d)， 6. 12 (1H, t) , 5. 56 (2H, s) ， 2. 98 (6H, s) . 实施例 5

N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -7-甲氧基-喹唑啉-6-基-} -丙烯酰胺（化合物 2)

4-氯 -2-胺基苯甲酸 10. 0g溶于 50ml甲酰胺，回流反应 5h，析出大量固体，过滤干燥得 7-氯喹唑酮 11. 5g。取 10. 0g喹唑酮，冰浴下缓慢加入到浓硫酸和发烟硝酸（1 : 1)混酸 40ml中，然后升温 90°C反应 3h，体系澄清溶液，小心倾入 300ml 冰水中，析出浅黄色固体，过滤水洗，再溶于热的冰醋酸中，析出 6-硝基 -7- 氯喹唑酮晶体，收集得产物 6. 50g。取 4. 00g该产物与 15ml三氯氧磷一起回流反应 2h，倾入冰水中，过滤干燥得 6-硝基 -4， 7-二氯喹唑啉中间体；将之溶于 30ml 异丙醇中，加入 3. 00g 3-氯 -4- (间氟苄氧基） -苯胺回流反应 2h，析出大量固体，过滤真空干燥得 6-硝基 -7-氯 -4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基-喹唑啉固体产物 3. 83g。

将上述产物与甲醇钠-甲醇体系反应，生成 6-硝基 -7-甲氧基 -4- [3-氯 -4_ (3-氟-苄氧基）苯基胺基-喹唑啉；接着以常规方法还原硝基，再与丙烯酰氯反应，纯化后得标题产物。

¾-NMR (300MHz, CDC1₃)： δ 9. 80 (1H, s)， 9. 70 (1H, s)， 8. 91 (1H, s)， 8. 50 (1H, s) , 7. 98 (1H, d, J = 2. 44Hz) , 7. 69 (1H, dd， J = 2. 44Hz, 9. 16Hz) , 7. 51-7. 42 (1H, m)， 7. 39-7. 16 (5H, m)， 6. 75 (1H, q, J = 10. 06Hz, 16. 78Hz) , 6. 31 (1H, dd， J = 2. 14Hz, 7. 09Hz) , 5. 80 (1H, dd， J =2. 14Hz, 10. 06Hz) , 5. 27 (2H, s)， 4. 02 (3H, s)。

将所得产物按照实施例 2、 3、 4所述的方法，分别制得化合物 2的盐酸盐、对甲苯磺酸盐、乙酸盐。实施例 6: 体外肿瘤细胞抑制实验

将化合物 1、 2或其盐分别配制成 5个浓度梯度，参照活细胞的改良 MTT方法，分别将 1X10⁵个不同的肿瘤细胞，如 A431(人表皮样鳞癌细胞， erbBl高表达 /erbB2低表达）、 Calu-3 (人肺癌细胞， erbBl低表达 /erbB2高表达）、 BT-474(人乳腺癌细胞， erbBl低表达 /erbB2高表达）、 SKBR3 (人乳腺癌细胞， erbBl低表达 /erbB2高表达）、 SK0V3 (人卵巢癌细胞， erbBl低表达 /erbB2高表达）悬液 lOOul接种于 96孔培养板内，然后加入不同浓度药液 10ul，使其达到终浓度；置 37°C湿性培养箱中， 72小时后取出培养板，每孔再加 MTT，继续培养 6hr，加入 lOOul SDS终止液。在自动酶标仪测定各孔光密度（0D)值，计算出抑制率，并计算 50%抑制浓度 IC₅。（单位 uM)。

结果表明：化合物 1、 2对 erbBl高表达或 erbB2高表达的各肿瘤细胞株有良好的抑制作用。

实施例 7: 荷瘤小鼠体内抑瘤实验

分别取生长良好的 A431实体瘤，无菌条件下切割成 2-3mm大小的均匀小块，用套管针在小鼠右腋皮下接种一块，接种后 7日起开始给药，连续经口灌胃 13 天，接种后 23天脱颈处死动物，解剖取瘤块，称瘤重，计算抑瘤率。结果如下: 动物体重（g) 瘤重（g)

(去瘤后）士 SD

空白对照

25ml/kg igX 13 22·40±2·81 1· 13±0· 18

(相应溶剂） 25 igX 13 23.05±1· 59 0.71 + 0.20** 37.25 化合物 1 50 igX 13 23. 35±1· 92 0. 51 + 0. 21** 54. 45

100 igX 13 24. 58±1· 23 0. 29±0· 12** 74. 30

25 igX 13 21. 58±2· 18 0. 79±0· 20** 29. 99 化合物 2 50 igX 13 22. 87 + 3. 96 0. 69 ±0· 17** 38. 67

100 igX 13 22. 13±1· 83 0. 64 ±0· 23** 43. 63 小鼠分别接种 ΒΤ- 474、 SKBR3、 SK0V3、 Calu- 3细胞，连续经口灌胃 13天 (50mg/kg)，按照相同试验方法，计算抑瘤率。结果如下：

结果表明：化合物 1、 2对 EGFR高表达细胞株接种的荷瘤小鼠生长有良好的抑制作用，尤其对于 erbB2高表达细胞株，如人乳腺癌细胞 BT-474接种的荷瘤小鼠生长有良好的抑制作用。实施例 8: 化合物对 Erb-B2磷酸化的抑制作用

人乳腺癌 BT474细胞调整到合适浓度，接种于培养板，经化合物处理 1.5小时；然后，收集并裂解细胞，定蛋白到相同的量。蛋白变性后，进行 SDS-PAGE, 转移到硝酸纤维素膜，分别与抗磷酸化抗体（一抗），抗 β-tublin抗体（一抗），抗小鼠 IgG抗体（二抗）杂交，最后用 ECL试剂盒检测， X光片曝光。根据相应蛋白条带的大小及密度，评价化合物对 Erb-B2激酶的抑制程度。

结果如图 1所示：与市售药物 Ires_Sa(EGFR抑制剂）相比，化合物 1和 2在 0.1 μ M和 1 μ Μ下具有更优的抑制活性。实施例 9: 化合物 1片剂的制备

处方：活性成分（化合物 1) 200g，可压性淀粉 200g，微晶纤维素 400g，交联聚乙烯吡咯烷酮 100g，硬脂酸 80g，滑石粉 20g。按照上述处方，将 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6- 基} -丙烯酰胺和基本等重量的部分可压性淀粉或微晶纤维素一起粉碎混合，使 API高度分散；将混合物过 80目筛，加入其他辅料混合均匀后，直接压片，压得的片剂的硬度控制在 60-70牛顿（N) 。

实施例 10: 化合物 1对甲苯磺酸盐胶囊的制备

处方：活性成分（化合物 1对甲苯磺酸盐） 500g，可压性淀粉 150g，微晶纤维素 300g，交联聚乙烯吡咯烷酮 20g，硬脂酸 20g，滑石粉 10g。

按照上述处方，将 N- {4- [3-氯 -4- (3-氟-苄氧基）苯基胺基] -喹唑啉 -6- 基} -丙烯酰胺对甲苯磺酸盐和基本等重量的部分可压性淀粉一起粉碎，过 80目筛，加入其他辅料混合均匀后，加入浓度为 70%的乙醇湿法制粒，干燥，整粒，装入胶囊即得。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

权利要求

1. 一种如通式 I所示化合物或其药学上可接受的盐在制备抗肿瘤药物中的应用，

(I)

其中，！？为^ 甲基、甲氧基或乙氧基。
2. 如权利要求 1所述的应用，其中！？为^
3. 如权利要求 1所述的应用，其中 R为甲氧基。
4. 如权利要求 1所述的应用，其中所述肿瘤为表皮生长因子受体高度表达的肿瘤类型。
5. 如权利要求 4所述的应用，其中所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肿瘤类型。
6. 如权利要求 5所述的应用，其中所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2高度表达的肺癌、卵巢癌、或乳腺癌。
7. 一种治疗肿瘤的方法，其特征在于，包括步骤：给予需要治疗的哺乳动物对象应用 0. l-50mg/kg体重 /天的式 I化合物或其药学上可接受的盐，

(I)

其中， 1?为11、甲基、甲氧基或乙氧基。
8. 如权利要求 7所述的方法，其中所述肿瘤为表皮生长因子受体高度表达的肿瘤类型。
9. 如权利要求 8所述的方法，其中所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肿瘤类型。
10. 如权利要求 9所述的方法，其中所述肿瘤为 erb-Bl和 /或 erb-B2受体高度表达的肺癌、卵巢癌、乳腺癌。