CN101912423A

CN101912423A - 含有益生菌的红曲制造方法

Info

Publication number: CN101912423A
Application number: CN201010213999XA
Authority: CN
Inventors: 陈小林; 陈平华; 方俊; 邵群慧; 冯永刚
Original assignee: HANGZHOU QIANDAO LAKE XINGYAO INDUSTRY CO LTD
Current assignee: Zhejiang thousand grass biological Polytron Technologies Inc
Priority date: 2010-07-01
Filing date: 2010-07-01
Publication date: 2010-12-15
Anticipated expiration: 2030-07-01
Also published as: CN101912423B

Abstract

本发明属于药品或者是健康食品的制造领域，特别是涉及一种含有益生菌的红曲制造方法，包括固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接种红曲菌发酵为：接种量2-25%(v/w)，30-35℃下培养3-5天，然后转入20-24℃下培养5-30天；接种益生菌进行二次发酵为：接种量2-10%(v/w)，28-37℃下培养2-5天。本发明的红曲产品中益生菌的数量均在1×10⁸个/克(干重)以上，使红曲和益生菌二者有机结合，在获得红曲疗效的同时，低成本的补充体内的益生菌，可达到更好的健康效果。

Description

含有益生菌的红曲制造方法

技术领域

本发明属于药品或者是健康食品的制造领域，特别是涉及一种含有Monacolin K等活性物质亦含有益生菌的红曲制造方法。

背景技术

红曲菌（Monascus spp．）是我国重要的微生物资源，在我国已有上千年的使用历史，被广泛用于食品发酵剂、食品着色剂和中药配伍的生产。红曲菌在发酵过程中能产生多种具有生理活性的代谢产物：如红曲色素、Monacolin类物质、γ-氨基丁酸以及多种酶类。自1979年，日本学者在红曲的发酵液中发现具有降血脂效果的Monacolin K以来。红曲这一中华民族先民智慧结晶的产物，便开始成为国际生物领域学术研究的热点。这从另一个方面又促进了红曲的产业化发展与普及。而今，我们国家生产的功能性红曲已经远销欧洲，美洲，非洲等等多个国家和地区，其卓越的效果和极低的副作用，正受到越来越多国家消费者的喜爱。

对功能性红曲的研究是从降血脂开始的，关于功能性红曲降血脂效果，已为中国、美国、德国、挪威等等许多国家的动物试验和临床试验所证实。但近年来的研究结果表明，功能性红曲的效果不仅局限于降低血脂，在防治心脑血管疾病方面，功能性红曲在抗癌、抗氧化、抗疲劳、降血压、抗炎症、防治骨质疏松等方面也有相当不错的表现。

益生菌作为人体肠道内的有益菌，随着研究的不断深入日益为人民所熟知，它在癌症、冠心病、孤僻症、老年痴呆、乳糖不耐受症，糖尿病、肠道易激综合症、唐氏综合症等方面均有良好的效果。（《益生菌是最好的药》，美，马克·A ·布鲁奈克著，王丽译，2008年1月出版）。如今益生菌已经发展成世界菌类的第一大产业。带有益生菌的各种产品更是层出不穷：益生菌酸奶、益生菌豆奶，益生菌奶片等等。

益生菌通常都是以液态发酵，浓缩，加入抗冻剂，再进行冷冻干燥后获得的，所获得的都是单纯的益生菌，如公开号为CN101559082A，CN101028289A，CN101028290A 和CN101045903A等的中国发明。虽然也有固态发酵获得益生菌的报道，但均是以单一获得益生菌为目的的单一发酵，如王天云等对嗜酸乳杆菌固态发酵进行了研究（王天云等，生命科学研究，2002年6月第6卷第2期），周剑忠等对嗜热链球菌固态培养的研究（周剑忠等，中国酿造2004年第4期），季伟等利用乳酸链球菌固态发酵豆粕的研究（季伟等，利用乳酸链球菌固态发酵豆粕的研究，粮食与饮料工业，2006年第五期），郑裴等对植物乳杆菌固态发酵豆粕的研究（郑裴等，植物乳杆菌发酵豆粕及其抗营养因子的研究，安徽农学通报，2009，15(10)）。此外，还有公开号为CN101671637A的中国发明公开“一种肠道益生菌固态营养载体培养方法”等。公开号为CN1974782A的中国发明提供了“一种固态发酵生产富含益生菌多肽制品的方法”，其虽然以同时获得多肽和益生菌为目的，但是多肽是作为益生菌的产物而获得的。就目前来说，在获得红曲有效成分的同时，获得一定数量益生菌的方法未见报道。

发明内容

红曲以其对中老年人“三高”，以及骨质疏松等老年性慢性疾病的良好的功效，已经为人们所认同。而体内益生菌的减少作为引起中老年相关疾病的原因之一，也已经为众多试验所证实。如何将二者有机的结合起来，在获得红曲疗效的同时，低成本的补充体内的益生菌，达到更好的健康效果是本发明要解决的问题。

本发明提供一种含有益生菌的红曲制造方法，通过二次发酵技术，在先接种红曲菌进行发酵的情况下，进行灭活后，再接入益生菌进行二次发酵，最后进行干燥，获得含有益生菌的红曲，利用本发明的方法在以红曲中活性物质Monacolin K为评价指标的情况，接种益生菌后，对Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在1×10⁸个/克（干重）以上。

本发明采用的技术方案是：

一种含有益生菌的红曲制造方法，包括：

固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接种红曲菌发酵为：接种量2-25 %（v/w，即体积重量比），30-35℃下培养3-5天，然后转入20-24℃下培养5-30天；接种益生菌进行二次发酵为：接种量2-10 %（v/w，即体积重量比），28-37℃下培养2-5天。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的红曲菌选自紫色红曲菌(Monascus purpureus)、红曲红曲菌（Monascus anka）、丛毛红曲菌（Monascus pilosus）或红色红曲菌（Monasucs ruber）。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的益生菌选自植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、酿酒酵母（Sccharomyces cerevisiae）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）、乳酸链球菌（Streptococcus lactis）、产朊假丝酵母（Cadida atilis）、乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）或干酪乳杆菌（Lactobacillus Casei）中的一种或它们之间的任意组合物。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的固态培养基主要是以大米、麸皮、大豆、米糠中的一种或者是它们之间的任意组合物作为固态基质，加入营养液调整含水量为30-50%，营养液中的大豆蛋白胨含量为2-5%（g/mL）、蔗糖含量为2-5%（g/mL）。大米、大豆一般需要粉碎处理后过20目筛再使用。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的红曲菌菌种是经过液态菌种扩培后获得红曲液态菌种。这样既可以获得足够的红曲菌种，有利于缩短发酵时间，又可以给固态培养基补充水分。所述的液态培养基中包括红曲菌生长的各种碳源、氮源、微生素以及微量元素。本领域技术人员根据现有技术不需要付出创造性劳动，选用通用的液态培养基都可实现本发明的目的。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的益生菌菌种是经过液态菌种扩培后获得益生菌液态菌种。这样既可以获得足够的益生菌菌种，有利于缩短发酵时间，又可以给固态培养基补充水分。所述的液态培养基中包括益生菌生长的各种碳源、氮源、微生素以及微量元素。本领域技术人员根据现有技术不需要付出创造性劳动，选用通用的液态培养基都可实现本发明的目的。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的二次发酵结束后干燥处理的温度在45℃以下，优选冷冻真空干燥，这样可以保证益生菌的存活。所述的冷冻真空干燥采用本领域通用的冷冻干燥机即可，温度控制在-50～-10℃之间，真空度控制在1.3～13帕之间。

作为优选方案，根据本发明所述的含有益生菌的红曲制造方法，其中，所述的含有益生菌的红曲中益生菌数量大于1×10⁸个/g（干重），同时红曲产品中亦含有Monacolin K等活性物质，因此本发明所得的含有益生菌的红曲干粉，可以用作具有调节肠道和降低血脂的药物或者是健康食品原料。

本发明具有以下优点：

本发明以红曲中活性物质Monacolin K作为评价指标的情况，接种益生菌后，对Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在1×10⁸个/克（干重）以上。

本发明的另一优势在于不添加任何设施设备的情况下，仅利用一条红曲生产线，就能完成红曲和益生菌两条生产线的作用，极大的节约了生产成本。

具体实施方式

下面结合实施例，更具体地说明本发明的内容。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

设备说明：

LZG冷冻真空干燥机，常州市科龙干燥机械设备有限公司。

实施例1

植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）的液态培养：

液态培养基的组成（均为重量百分比）：葡萄糖4%、乳糖1%、大豆蛋白胨2%、酵母膏1%，乳清粉 1%，碳酸钙1%、MgSO₄0.2%、KH₂PO₄0.2%、ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌处理20分钟，待冷却到40℃下后，用接种环接种植物乳杆菌3环，然后置于37℃下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

紫色红曲菌（Monasucs purpureus）的液态培养：

液态培养基的组成（均为重量体积比）：葡萄糖2%、蔗糖2%、大米粉 1%、黄豆粉 1%、MgSO₄0.1%、ZnSO₄ 0.1%、KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌处理20分钟，待冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 10mL，然后于温度为32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠 100克，混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L）273 mL，使含水量为30%，得到固态培养基。将固态培养基质装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，冷却到30℃以下，接种入上述紫色红曲菌（Monasucs purpureus）液态种，接种量为20%（mL/g）。接种后转入32℃下培养3天，扣瓶转入23℃下培养14天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）液态种，接种量为5%（mL/g），37℃发酵72个小时。最后将发酵产物置于冷冻真空干燥机干燥后，低温粉碎（40℃以下）得到粉状红曲产品，测定粉状红曲产品中的植物乳杆菌数量为3×10⁸个/g(干重)，测定Monacolin K含量为6.01mg/g。而未接种植物乳杆菌的红曲Monacolin K含量为6.12mg/g。

实施例2：

酿酒酵母（Sccharomyces cerevisiae）液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种酿酒酵母3环，然后于28℃和160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

红曲红曲菌（Monasucs anka）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，MgSO₄ 0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的红曲红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 15mL，然后于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉50克，米糠 100克，麸皮 200混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L），使含水量为50%，得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，冷却到30℃以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为25%（mL/g），接种后转入30℃下培养5天，再扣瓶转入24℃下培养5天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入酿酒酵母（Sccharomyces cerevisiae），接种量为5%（mL/g），28℃下发酵48个小时，最后将发酵产物在40℃进行干燥，经低温粉碎（40℃以下）得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中酵母菌体数量为5×10⁹个/克（干重），Monacolin K为2.53mg/g，而未接种酿酒的酵母的红曲Monacolin K经测定含量为2.56mg/g。

实施例3：

乳酸链球菌（Streptococcus lactis）液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，麦芽糖 2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏 1%，碳酸钙1%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种乳酸链球菌3环，置于37℃下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

紫色红曲菌（Monasucs purpureus）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，MgSO₄0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 10mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠 100克，麸皮 100混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L），使含水量为40%，得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，冷却到30℃以下，接种紫色红曲菌（Monasucs purpureus）液态种，接种量为5%（mL/g），接种后转入35℃下培养3天，再扣瓶转入20℃下培养30天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入上述已培养好的液态乳酸链球菌（Streptococcus lactis），接种量为2%（mL/g），于37℃下发酵120个小时。最后将发酵产物进行真空冷冻干燥（冷冻温度为-30℃，真空度5Pa），经低温粉碎（40℃以下）得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中链球菌菌体数量为3×10⁸个/g（干重），Monacolin K为5.78mg/g。而未接种乳酸链球菌的红曲的Monacolin K含量为 5.56mg/g.

实施例4：

干酪乳杆菌（Lactobacillus Casei）液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，麦芽糖1%，大豆蛋白胨1%，酵母膏 1%，碳酸钙1%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种干酪乳杆菌3环，置于35℃下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

紫色红曲菌（Monasucs purpureus）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，大豆蛋白胨 2%，MgSO₄，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 20mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉50克，米糠 100克，麸皮100混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L），使含水量为45%，得到固态培养基。于121℃灭菌45分钟后，冷却到30℃以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为20%（mL/g），接种后转入32℃下培养3天，再扣瓶转入22℃下培养20天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入上述已培养好的干酪乳杆菌（Lactobacillus Casei）液态种，接种量为6%（mL/g），于37℃下发酵60个小时。最后将发酵物进行冷冻干燥，低温粉碎（40℃以下），得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中乳杆菌数量4×10⁹个/g（干重），Monacolin K为10.24mg/g。同样的条件下，未接种干酪乳杆菌的红曲，经干燥测定Monacolin K含量为10.53mg/g.

实施例5：

嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖1%，麦芽糖 1%，大豆蛋白胨2%，酵母膏1%，碳酸钙1%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种嗜酸乳杆菌3环，置于35℃下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

紫色红曲菌（Monasucs purpureus）的液态培养基：葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉 1%，牛肉浸膏 1%，黄豆粉 1%，MgSO₄0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的紫色红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 20mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉50克，米糠 200克，混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L），使含水量为40%（wt），得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30℃以下，接种紫色红曲菌（Monasucs purpureus）液态种，接种量为20%（mL/g），接种后转入32℃下培养3天，再扣瓶转入23℃下培养12天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入已发酵好的上述液态嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌种，接种量为5%（mL/g），于37℃下发酵60个小时。最后将发酵产物真空冷冻干燥，低温粉碎（40℃以下）得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量为5×10¹⁰个/g(干重)，Monacolin K为4.98mg/g。同样条件下，未接种嗜酸乳杆菌的红曲中Monacolin K含量为4.87mg/g。

实施例6：

产朊假丝酵母（Cadida atilis）液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，酵母膏 1%，MgSO₄0.2% KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种产朊假丝酵母3环，置于28℃和160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

红曲红曲菌（Monasucs anka）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖1%，蔗糖4%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，酵母膏2%，MgSO₄0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的红曲红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 20mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠 100克，混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L）273 mL，使含水量为30%，得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30℃以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为20%（mL/g），接种后转入32℃下培养3天，再扣瓶转入23℃下培养12天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入产朊假丝酵母（Cadida atilis）液态种，接种量为5%（mL/g），于28℃下发酵48个小时。最后将发酵产物于40℃下干燥处理，粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量7×10⁹个/g(干重)，Monacolin K为5.34mg/g。而未接种产朊假丝酵母的红曲中Monacolin K含量为5.42mg/g。

实施例7：

乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）液态培养：

液态培养基组成（重量百分比）：葡萄糖4%，蔗糖2%，大豆蛋白胨2%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种乳酸克鲁维酵母3环，置于28℃和160r/min下培养48个小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

红色红曲菌（Monasucs ruber）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，MgSO₄0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的红色红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 15mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠 100克，麸皮50克混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L, 酵母膏 20g/L），使含水量为35%，得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30℃以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为20%（mL/g），接种后转入32℃下培养3天，再扣瓶转入23℃下培养12天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）液态种，接种量为5%（mL/g），于28℃下发酵60个小时。最后将发酵产物于37℃下干燥处理，粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量为5×10¹⁰个/g（干重），Monacolin K为4.76mg/g。未接种乳酸克鲁维酵母的红曲Monacolin K含量为4.64mg/g。

实施例：8

嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）液态培养：

液态培养基组成（重量体积百分比）：乳糖2%，葡萄糖2%，脱脂乳粉 1%，大豆蛋白胨2%，碳酸钙1%，MgSO₄ 0.2%，KH₂PO₄ 0.2%，ZnSO₄ 0.1%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL三角瓶装量300mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，待冷却到40℃后，用接种环接种嗜热链球菌3环，置于37℃下静止培养48小时后，作为二次发酵用的益生菌液态种。

丛毛红曲菌（Monascus pilosus）的液态培养：

液态培养基组成（重量体积分比）：葡萄糖2%，蔗糖2%，大米粉 1%，黄豆粉 1%，MgSO₄ 0.1%，ZnSO₄ 0.1%，KH₂PO₄ 0.2%，余量为蒸馏水，pH值自然。500mL装量250mL，然后将液态培养基于121℃下灭菌20分钟，冷却到40℃下后，接种从斜面上洗脱下来的丛毛红曲菌孢子大于10⁸个/mL的红曲孢子悬液 10mL，于32℃和180r/min下培养72h后作为红曲液态种。

取经粉碎过20目筛的大米1kg，黄豆粉100克，米糠 100克，麸皮100克，混合均匀后，加入营养液（含蔗糖40g/L，大豆蛋白胨 40g/L，酵母膏 20g/L），使含水量为35%，得到固态培养基。将固态培养基装到塑料瓶中，121℃灭菌45分钟后，就热打散后，冷却到30℃以下，接种上述红曲液态菌种，接种量为15%(mL/g)，接种后转入32℃下培养3天，再扣瓶转入23℃下培养16天后，放入灭菌锅内121℃灭菌10分钟，待冷却到40℃后接种入嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）液态菌种，接种量为8%(mL/g)，于37℃下发酵60个小时。最后将发酵产物于40℃下干燥处理，低温粉碎得到粉状红曲产品。测定粉状红曲产品中菌体数量为6×10⁸个/g(干重)，Monacolin K为8.32mg/g。未接种嗜热链球菌的红曲经测定，其Monacolin K含量为 8.21mg/g。

工业实用性

本发明以红曲中活性物质Monacolin K作为评价指标的情况，接种益生菌后，对Monacolin K含量没有影响，且获得的红曲中，益生菌的数量均在1×10⁸个/克以上，因此本发明所得的含有益生菌的红曲干粉，可以用作具有调节肠道和降低血脂的药物或者是健康食品原料。本发明的在不添加任何设施设备的情况下，仅利用一条红曲生产线，就能完成红曲和益生菌两条生产线的作用，可极大的节约生产成本。

尽管发明人已经对本发明的技术方案做了较为详细的阐述和列举，应当理解，对于本领域一个熟练的技术人员来说，对上述实施例作出修改或变通或者采用等同的替代方案是显然的，都不能脱离本发明精神的实质，本发明中出现的术语用于对本发明技术方案的阐述和理解，并不能构成对本发明的限制。

Claims

1.一种含有益生菌的红曲制造方法，包括：

固态培养基经灭菌处理后，接种红曲菌进行发酵，发酵结束后作灭活处理，然后接种益生菌进行二次发酵，二次发酵结束后再经干燥处理得到含有益生菌的红曲，其中，所述接种红曲菌发酵为：接种量2-25%(v/w)，30-35℃下培养3-5天，然后转入20-24℃下培养5-30天；接种益生菌进行二次发酵为：接种量2-10%(v/w)，28-37℃下培养2-5天。

2.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的红曲菌选自紫色红曲菌、红曲红曲菌、丛毛红曲菌或红色红曲菌。

3.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌选自植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌、酿酒酵母、嗜热链球菌、乳酸链球菌、产朊假丝酵母、乳酸克鲁维酵母或干酪乳杆菌中的一种或它们之间的任意组合物。

4.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的固态培养基主要是以大米、麸皮、大豆、米糠中的一种或者是它们之间的任意组合物作为固态基质，加入营养液调整含水量为30-50%，营养液中的大豆蛋白胨含量为2-5%（g/mL）、蔗糖含量为2-5%（g/mL）。

5.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的红曲菌菌种是经过液态菌种扩培后获得红曲液态菌种。

6.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的益生菌菌种是经过液态菌种扩培后获得益生菌液态菌种。

7.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的二次发酵结束后干燥处理的温度在45℃以下。

8.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的干燥处理采用冷冻真空干燥。

9.根据权利要求1所述的含有益生菌的红曲制造方法，其特征在于，所述的含有益生菌的红曲中益生菌数量以干重计大于1×10⁸个/g。