CN101896480A

CN101896480A - 作为亲代谢性谷氨酸受体(mglurs)调节剂的四唑衍生物

Info

Publication number: CN101896480A
Application number: CN2008801179810A
Authority: CN
Inventors: 厄万·阿泽尔; 路易丝·爱德华兹; 梅思文·艾萨克; 唐纳德·A·麦克劳德; 阿卜杜马利克·斯拉西; 辛淘
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 2007-10-19
Filing date: 2008-10-17
Publication date: 2010-11-24
Also published as: CO6321281A2; EA201000654A1; DOP2010000119A; EP2231647A1; MX2010004272A; US7960422B2; WO2009051556A1; EP2231647A4; PE20090875A1; CR11376A; KR20100090777A; CA2703425A1; ZA201002694B; AR068921A1; US20090131454A1; JP2011500673A; UY31403A1; CL2008003085A1; BRPI0818448A2; IL204958A0

Abstract

本发明涉及式(I)化合物、它们在制备用于治疗mGluR5受体介导的障碍的药物中的用途，式(I)为

其中R¹为

或

Description

作为亲代谢性谷氨酸受体(MGLURS)调节剂的四唑衍生物

技术领域

本发明涉及新化合物、它们在治疗中的用途和含所述新化合物的药物组合物。

背景技术

谷氨酸(glutamate)是哺乳动物的中枢神经系统(CNS)中主要的兴奋性神经递质。谷氨酸与细胞表面受体结合并由此使细胞表面受体活化，从而对中枢神经元产生影响。根据受体蛋白的结构特征、受体将信号转导入细胞的方式以及药理学分布(pharmacological profiles)，已经将这些受体分为两种主要的类型，即亲离子性谷氨酸受体与亲代谢性谷氨酸受体。

亲代谢性谷氨酸受体(mGluRs，metabotropic glutamate receptors)为G-蛋白偶联受体，这些受体使多种细胞内第二信使系统活化，之后与谷氨酸结合。mGluRs在完整哺乳动物神经元中的活化引起了一种或多种下列的反应：磷脂酶C的活化；磷酸肌醇(PI)水解的增加；细胞内钙释放；磷脂酶D的活化；腺苷酸环化酶的活化或抑制；环腺苷酸(cAMP)形成的增加或减少；鸟苷酸环化酶的活化；环鸟苷酸(cGMP)形成的增加；磷脂酶A₂的活化；花生四烯酸释放的增加；以及电压-和配体-门控性离子通道活性的增加或减少。Schoepp等人，Trends Pharmacol.Sci.14：13(1993)；Schoepp，Neurochem.Int.24：439(1994)；Pin等人，Neuropharmacology 34：1(1995)；和Bordi and Ugolini，Prog.Neurobiol.59：55(1999).

分子克隆已鉴定了八种不同的mGluR亚型，称为mGluR1至mGluR8。Nakanishi，Neuron 13：1031(1994)；Pin等人，Neuropharmacology 34：1(1995)；和Knopfel等人，J.Med.Chem.38：1417(1995)。进一步的受体多样性通过某些mGluR亚型的供选剪接形式的表达发生。Pin等人，PNAS89：10331(1992)；Minakami等人，BBRC 199：1136(1994)；Joly等人，J.Neurosci.15：3970(1995)。

基于氨基酸序列同源性、受体所利用的第二信使系统及其药理学特征，亲代谢性谷氨酸受体亚型可再分为三组：第I组、第II组和第III组mGluRs。第I组mGluR包括mGluR1、mGluR5及其供选的剪接变体。激动剂与这些受体的结合使得磷脂酶C活化，随后产生细胞内钙的动员。

神经障碍、精神障碍和疼痛障碍

阐明第I组mGluRs生理学作用时的尝试提示，这些受体的活化引起了神经元兴奋。不同的研究证实了第I组mGluRs激动剂在应用至海马、大脑皮层、小脑和丘脑以及其它CNS区域中的神经元时，能够产生突触后兴奋。有证据表明这种兴奋是由于突触后mGluRs的直接活化引起的，但也暗示了突触前mGluRs活化的发生，从而导致了神经递质释放的增加。Baskys，Trends Pharmacol.Sci.15：92(1992)；Schoepp，Neurochem.Int.24：439(1994)；Pin等人，Neuropharmacology 34：1(1995)；和Watkins等人，Trends Pharmacol.Sci.15：33(1994)。

亲代谢性谷氨酸受体已经牵涉在哺乳动物CNS中的多种正常过程中。已经表明，mGluRs的活化需要诱导海马长时程增强和小脑长时程抑制。Bashir等人，Nature 363：347(1993)；Bortolotto等人，Nature 368：740(1994)；Aiba等人，Cell 79：365(1994)；Aiba等人，Cell 79：377(1994)。mGluRs活化在伤害感受和痛觉缺失中的作用也得到了证明，Meller等人，Neuroreport 4：879(1993)；Bordi and Ugolini，Brain Res.871：223(1999)。此外，mGluRs的活化已经暗示了在多种其它正常过程中起到调节性作用，这些过程包括突触传递、神经元发育、凋亡神经元死亡、突触可塑性、空间学习、嗅觉记忆、心搏的中心控制、醒觉、运动控制及前庭眼球反射的控制。Nakanishi，Neuron13：1031(1994)；Pin等人，Neuropharmacology 34：1；Knopfel等人，J.Med.Chem.38：1417(1995)。

此外，第I组亲代谢性谷氨酸受体和特别是mGluR5已经表明在多种病理生理学过程和影响CNS的障碍中起作用。这些过程包括中风、头部创伤、缺氧和缺血性损伤、低血糖、癫痫和神经变性疾病如阿尔兹海默病和疼痛。Schoepp等人，Trends Pharmacol.Sci.14：13(1993)；Cunningham等人，LifeSci.54：135(1994)；Hollman等人，Ann.Rev.Neurosci.17：31(1994)；Pin等人，Neuropharmacology 34：1(1995)；Knopfel等人，J.Med.Chem.38：1417(1995)；Spooren等人，Trends Pharmacol.Sci.22：331(2001)；Gasparini等人Curr.Opin.Pharmacol.2：43(2002)，Neugebauer Pain 98：1(2002)。在这些症状中的多数病理学被认为是由于谷氨酸诱导的CNS神经元兴奋过度引起的。因为第I组mGluRs显出通过突触后机制和增强的突触前谷氨酸释放来增加谷氨酸介导的神经元兴奋，它们的活化很可能是导致病理学的原因。因此，第I组mGluR受体的选择性拮抗剂在治疗上是有益的，特别是作为神经保护药物、镇痛药或抗惊厥剂。

在阐明亲代谢性谷氨酸受体(通常是并且特别是第I组受体)的神经生理学作用时，最新进展已将这些受体确定为治疗急性和慢性神经障碍、急性和慢性精神障碍以及慢性和急性疼痛障碍的有希望的药物靶标。

胃肠道障碍

食管下括约肌(LES)易于间歇性松弛。结果，由于在此时暂时失去了机械屏障，所以来自胃的流体能够进入食管，下文中将该事件称为“反流”。

胃-食管反流疾病(GERD)是最普遍的上胃肠道疾病。目前的药物治疗针对减少胃酸分泌，或针对中和食管中的酸。在反流背后的主要原理被认为取决于低张性食管下括约肌。然而，例如Holloway & Dent(1990)Gastroenterol.Clin.N.Amer.19，pp.517-535已经显示，多数反流发作在暂时性食管下括约肌松弛(TLESRs)(即，非通过吞咽触发的松弛)期间发生。还已经显示，在患有GERD的患者中，胃酸分泌通常是正常的。

本发明的新化合物被认为可用于抑制暂时性食管下括约肌松弛(TLESRs)，并因此可用于治疗胃-食管反流障碍(GERD)。

由于它们的生理和病理生理重要性，需要对mGluR亚型，特别是第I组受体亚型，最特别是mGluR5显示高选择性的新的强效mGluR激动剂和拮抗剂。还需要不导致反应性代谢物和具有有限hERG相互作用的mGluR5拮抗剂。

本发明的目的是提供在亲代谢性谷氨酸受体(mGluRs)，尤其是在mGluR5受体呈现活性的化合物。

发明内容

本发明涉及式I化合物及其可药用盐、水合物、同工型化合物和/或对映异构体：

其中R¹为

在一种实施方式中，式I化合物为R-对映异构体。在另一种实施方式中，式I化合物为S-对映异构体。

另一种实施方式是药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的作为活性成分的式I化合物，以及一种或多种可药用的稀释剂、赋形剂和/或惰性载体。

下面更详细地描述的其它实施方式涉及在治疗中，在治疗mGluR5介导的障碍中，在制造用于治疗mGluR5介导的障碍的药物中使用的式I化合物。

其它实施方式涉及治疗mGluR5介导的障碍的方法，该方法包括向哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物。

在另一种实施方式中，提供了抑制mGluR5受体的活化的方法，该方法包括用有效量的式I化合物处理含所述受体的细胞。

本发明化合物可用于治疗，特别是用于治疗神经障碍、精神障碍、疼痛障碍和胃肠障碍。

本领域技术人员还应了解的是，本发明的某些化合物可以以溶剂化形式如水合形式以及非溶剂化形式存在。还应了解的是，本发明包含式I化合物的所有这种溶剂化形式。

式I化合物的盐也在本发明的范围内。本发明化合物的可药用盐通常使用本领域熟知的标准操作来获得，例如使足够碱性的化合物(如烷基胺)与适当的酸(如HCl或乙酸)反应，得到含有生理学可接受的阴离子的盐。也可以通过在含水介质中，用一当量碱金属或碱土金属氢氧化物或烷氧化物(例如乙氧化物或甲氧化物)或合适的碱性有机胺(例如胆碱或葡甲胺)处理具有合适酸性质子(例如羧酸或苯酚)的本发明化合物，接着通过常规纯化技术处理以制备相应的碱金属盐(例如钠盐、钾盐或锂盐)或碱土金属盐(例如钙盐)。此外，可通过使烷基化试剂与例如中性胺的加成来制备季铵盐。

在本发明的一个实施方式中，可将式I化合物转化为可药用盐或其溶剂化物，特别是酸加成盐例如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、乙酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。

在本发明的其它实施方式中，可以将式I化合物用磺酸、1，2-乙烷二磺酸(以1∶1和2∶1的形式)、乙磺酸、硝酸、2-均三甲苯磺酸、1，5-萘二磺酸(以1∶1和2∶1的形式)或对二甲苯磺酸转化成它的可药用盐或溶剂化物。

药物组合物

可将本发明化合物配制成常规的药物组合物，其包含式I化合物或其药用盐或溶剂化物以及药用载体或赋形剂。药用载体可为固态或液态的。固体形式制剂包括但不限于粉剂、片剂、可分散的颗粒剂、胶囊剂、扁囊剂和栓剂。

固体载体可为一种或多种物质，其也可作为稀释剂、调味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘合剂或片剂崩解剂。固体载体也可为包胶材料(encapsulating material)。

在粉剂中，载体为微细粉碎的固体，其与微细粉碎的本发明化合物或活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必要粘合性质的载体以合适的比例混合，并压制成所需的形状和尺寸。

为制备栓剂组合物，首先将低熔点蜡(如脂肪酸甘油酯与可可脂的混合物)熔化，并且通过例如搅拌，将活性成分分散在其中。然后将熔化的均相混合物倒入适宜尺寸的模具中并使其冷却固化。

适当的载体包括但不限于：碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、乳糖、蔗糖、果胶、糊精、淀粉、黄蓍树胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等等。

术语“组合物”也意在包括活性成分与作为载体而提供胶囊的包胶材料的制剂，其中所述活性成分(包括或不包括其它载体)被载体包围，所述载体由此与所述活性成分(包括或不包括其它载体)结合。类似的，也包括扁囊剂。

片剂、粉剂、扁囊剂和胶囊剂可用作适于口服给药的固体剂型。

液体形式的组合物包括溶液剂、混悬剂和乳剂。例如活性化合物的无菌水或丙二醇水溶液可为适于肠胃外给药的液体制剂。液体组合物也可用聚乙二醇水溶液以溶液的形式配制。

口服给药的水溶液可通过将活性成分溶于水中并根据需要加入适当的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂制得。口服用的水混悬剂可通过将微细粉碎的活性成分与粘性物质一起分散在水中来制备，所述粘性物质例如为自然合成胶质、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和药物制剂领域已知的其它悬浮剂。旨在用于口服的示例性组合物可包含一种或多种着色剂、甜味剂、调味剂和/或防腐剂。

取决于给药模式，药物组合物将包括约0.05％w(重量百分数)至约99％w，或者约0.10％w至50％w的本发明化合物，所有的重量百分数基于组合物的总重量。

本领域普通技术人员可以利用已知的标准来确定实践本发明的治疗有效量，所述标准包括个体患者的年龄、体重和反应，并可以在正在被治疗或预防的疾病的范围内解释。

医药用途

本发明化合物可用于治疗与mGluR5的兴奋性活化相关的病症和用于抑制由mGluR5的兴奋性活化所导致的神经元损伤。所述化合物可用于在哺乳动物(包括人类)中产生mGluR5的抑制作用。

包括mGluR5的第I组mGluR受体在中枢和外周神经系统和其它组织中高度表达。因此，预期本发明的化合物充分适合用于治疗mGluR5介导的障碍，如急性和慢性神经障碍、急性和慢性精神障碍、胃肠道障碍以及慢性和急性疼痛障碍。

本发明涉及在上文定义的式I化合物，其用于治疗。

本发明涉及在上文定义的式I化合物，其用于治疗mGluR5介导的障碍。

本发明涉及在上文定义的式I化合物，其用于治疗阿尔茨海默氏病、老年性痴呆、AIDS诱导的痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病、偏头痛、癫痫、精神分裂症、抑郁、焦虑、急性焦虑、眼科障碍(例如视网膜病变、糖尿病视网膜病、青光眼)、听觉神经性障碍(auditory neuropathicdisorders)(例如耳鸣)、化学疗法诱导的神经病、疱疹后神经痛和三叉神经痛、耐受性(tolerance)、依赖性、脆性X综合征(Fragile X)、孤独症、精神发育迟滞、精神分裂症和唐氏综合征。

本发明涉及上面定义的式I化合物，其用于治疗与偏头痛、炎性疼痛、神经性疼痛障碍如糖尿病神经病变、关节炎和类风湿病相关的疼痛、腰痛(low back pain)、手术后疼痛和与各种症状(包括癌症、心绞痛、肾绞痛或胆绞痛、月经、偏头痛和痛风)相关的疼痛。

本发明涉及上面定义的式I化合物，其用于治疗卒中、头损伤、缺氧性和缺血性损伤、低血糖症、心血管疾病和癫痫。

本发明还涉及在上文定义的式I化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗mGluR第I组受体介导的障碍和上面列出的任何障碍。

本发明的一种实施方式涉及式I化合物在治疗胃肠道障碍中的用途。

本发明的另一种实施方式涉及式I化合物，该式I化合物用于抑制暂时性食管下括约肌松弛，用于治疗GERD，用于预防胃食管反流，用于治疗反胃(regurgitation)，用于治疗哮喘，用于治疗喉炎，用于治疗肺病，用于处理发育停滞，用于治疗肠易激综合征(IBS)和用于治疗功能性消化不良(FD)。

本发明的另一种实施方式涉及式I化合物在制备药物中的用途，所述药物用于抑制暂时性食管下括约肌松弛，用于治疗GERD，用于预防胃食管反流，用于治疗反胃，用于治疗哮喘，用于治疗喉炎，用于治疗肺病，用于处理发育停滞(failure to thrive)，用于治疗肠易激综合征(IBS)和用于治疗功能性消化不良(FD)。

本发明的另一种实施方式涉及式I化合物在治疗膀胱活动过度或尿失禁(overactive bladder or urinary incontinence)中的用途。

措辞“TLESR”，暂时性食管下括约肌松弛，在本申请中根据Mittal，R.K.，Holloway，R.H.，Penagini，R.，Blackshaw，L.A.，Dent，J.，1995；Transient loweresophageal sphincter relaxation.Gastroenterology 109，pp.601-610定义。

措辞“反流”在本申请中定义为由于在此时暂时失去机械屏障，来自胃的流体能够进入食管。

措辞“GERD”，胃-食管反流疾病，在本申请中根据van Heerwarden，M.A.，Smout A.J.P.M.，2000；Diagnosis of reflux disease.Baillière’s Clin.Gastroenterol.14，pp.759-774定义。

本发明的又一种实施方式涉及式I化合物在制备用于治疗咳嗽的药物中的用途。在一种实施方式中，进行治疗的咳嗽是久咳。在又一种实施方式中，进行治疗的咳嗽是急性咳嗽(acute cough)。根据Kardos P等人(TheGerman Respiratory Society｀s Guideline for the Diagnosis and Treatment ofPatients with Acute and Chronic Cough Medizinische Klinik2004；99(8)：468-75)，将术语久咳定义为持续超过8周的咳嗽。然而，也可以将久咳定义为持续超过3周的咳嗽或持续超过2个月的咳嗽。术语“急性咳嗽”也根据上面的文献定义为持续少于8周的咳嗽。

上面式I的化合物可用于治疗或预防肥胖或超重(例如，促进体重减轻和维持体重减轻)，预防或逆转体重增长(例如，反弹的、药物诱导的或继发于停止吸烟的体重增长)，用于调节食欲和/或饱满感，进食障碍(例如，暴饮暴食(blinge eating)、食欲缺乏、食欲亢进和强迫性进食障碍)和成癖(craving)(对于药物、烟草、酒精、任何促进食欲的大量营养素(appetizingmacronutrient)或非必需食品成癖)。

本发明还提供了治疗在患有mGluR5介导的障碍和上面列出的任何障碍的患者中或处于mGluR5介导的障碍和上面列出的任何障碍的危险中的患者中的所述病症的方法，所述方法包括向所述患者给药有效量的在上文定义的式I化合物。

治疗性或预防性地处理具体障碍所需要的剂量必然地根据治疗主体、给药途径和所治疗的疾病的严重性而改变。

在本说明书的上下文中，术语“治疗”和“处理”包括防止或预防，除非有相反的特定指示。术语“治疗的”和“治疗地”应作相应地解释。

在本说明书中，除非另外指出，术语“拮抗剂”和“抑制剂”应表示无论通过任何方法，部分或完全地阻滞通过配体产生响应的转导途径的化合物。

除非另外指出，术语“障碍”表示与亲代谢性谷氨酸受体活性相关的任何病症和疾病。

非医药用途

式I化合物及其盐除了它们在治疗药物中的用途外，还可用作体外和体内测试系统开发和标准化的药理学工具，用于评价mGluR相关活性的抑制剂在实验动物中的作用，以作为寻找新治疗剂的部分，所述动物包括，例如猫、狗、兔、猴、大鼠和小鼠。

具体实施方式

制备方法

中间体的合成

(i)NaNO₂、HCl、2-氯-3-氧代丁酸乙酯、NaOAc；(ii)NH₃xH₂O、THF；

(iii)NaNO₂、AcOH、85℃；

(iv)MeMgBr/EtN₃、甲苯；

(v)NaBH₄、MeOH；(vi)Novozyme 435

、乙酸乙烯酯、甲苯；(vii)LiOH水溶液、THF

R2＝OH，NHNH₂

(viii)R2＝OH：SOCl₂、4-乙基-3-硫代氨基脲、NaOH、MeI；

R2＝NHNH₂：异硫氰酸甲酯、NaOH、MeI；

(ix)mCPBA或KMnO₄

最终化合物的合成

一般方法

所有起始材料可商购获得或更早地描述在文献中。¹H和¹³C NMR在Bruker 300、Brucker DPX400光谱仪(对于¹H NMR，分别在300和400MHz操作)上记录，使用TMS或残留溶剂信号作为参照，以氘代氯仿作为溶剂，除非另外指明。所有报告的化学位移在δ标度上(on the delta-scale)以ppm表示，信号的微细裂分如记录中所示(s：单峰，br s：宽单峰，d：双峰，t：三重峰，q：四重峰，m：多重峰)。

在由Alliance 2795(LC)和ZQ单四极质谱仪组成的Waters LCMS上记录分析型在线液相色谱分离以及随后的质谱检测。所述质谱仪配有以正离子模式和/或负离子模式操作的电喷射离子源。离子喷射电压为±3kV，质谱仪在m/z 100-700范围内以0.8s的扫描时间扫描。将线性梯度施用至柱，X-Terra MS，Waters，C8，2.1×50mm，3.5mm，所述线性梯度为在10mM乙酸铵(水溶液)中或在0.1％TFA(水溶液)中的5％至100％的乙腈。制备型反相色谱在具有二极管阵列检测器的Gilson自动制备型HPLC上，使用柱XterraMS C819×300mm，7mm进行。产物的纯化也通过快速色谱法，在硅胶填充玻璃柱中进行。

缩写目录

Aq. 水溶液

mCPBA 间氯过苯甲酸

Novozyme 435与聚合物结合的candida antartica lipase(polymerbound candida antartica lipase)的注册商标名

实施例

中间体的合成

实施例1：(2Z)-氯[(3-甲基苯基)亚肼基]乙酸乙酯

如Farmaco Ed.Sci.1985，40(4)，259-271中所述合成(2Z)-氯[(3-甲基苯基)亚肼基]乙酸乙酯。

实施例2：(2Z)-氨基[3-甲基苯基)亚肼基]乙酸乙酯

一边搅拌，一边将氢氧化铵水溶液(20％)(768mL)历时50分钟添加至(2Z)-氯[(3-甲基苯基)-亚肼基]乙酸乙酯(256g，1064mmol)在四氢呋喃(1024mL)中的溶液。在40分钟后，添加石油醚(250mL)和乙酸乙酯(250mL)的溶剂混合物。在搅拌15分钟后，将两个层分离并用乙酸乙酯(2×150mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，以得到标题产物(200g，85％)。

¹H NMR(400MHz)：7.14(m，1H)，6.98(m，1H)，6.88(m，1H)，6.74(m，1H)，6.61(br.s，1H)，4.38(m，4H)，2.32(s，3H)，1.39(m，3H)。

¹³C NMR(100MHz)：162.3，145.2，139.1，135.9，129.0，122.1，114.8，111.4，62.3，21.5，14.2。

实施例3：2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-羧酸乙酯

一边搅拌，一边将乙酸(207mL，3.62mol)添加至(2Z)-氨基[3-甲基苯基)-亚肼基]乙酸乙酯在四氢呋喃(2170mL)中的溶液并将混合物加热至85℃。历时3小时添加亚硝酸钠(74.8g，1.08mol)在水(226mL)中的溶液。在搅拌20分钟后，将混合物冷却至室温。浓缩混合物，并向残留物添加乙酸乙酯(750mL)和饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)。将各层分离并用乙酸乙酯(250mL)萃取水层。将合并的有机层用盐水(250mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到标题产物(176g，84％)。

¹H NMR(400MHz)：7.99(m，2H)，7.44(t，1H)，7.34(m，1H)，4.56(q，2H)，2.45(s，3H)，1.48(t，3H)。

¹³C NMR(100MHz)：157.8，157.7，140.2，136.3，131.3，129.6，120.8，117.4，62.7，21.3，14.2。

实施例4：1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙酮

在-10℃，历时5小时，一边搅拌，一边将在三乙胺(520mL，3.74mol)中的甲基溴化镁(1070mL，1.50mol，1.4M，在四氢呋喃/甲苯中)通过加料漏斗(addition funnel)添加至2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-羧酸乙酯在无水甲苯(1000mL)中的溶液。在-10℃将混合物持续搅拌过夜。历时2小时20分钟添加盐酸(37％，500mL)和水(500mL)的冷却(+3℃)溶液。将各层分离并用水(500mL)和盐水(2×250mL)洗涤有机层。用甲苯(3x500mL)萃取水层并用盐水(2×250mL)洗涤甲苯。将合并的有机萃取液浓缩并在硅胶上使用二氯甲烷作为洗脱剂进行纯化。将浓缩产物残留物用石油醚研磨，过滤并在减压下于室温干燥，以得到标题产物(90.86g，60％)。

¹H NMR(400MHz)：7.99(m，2H)，7.45(t，1H)，7.35(m，1H)，2.83(m，3H)，2.48(s，3H)。

¹³C NMR(100MHz)：188.1，162.6，140.4，136.5，131.6，129.8，121.0，117.6，28.3，21.5。

实施例5：1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙醇

将在甲醇(1000mL)中的1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙酮(96.89g，479mmol)在冰/水浴中冷却。历时1小时30分钟添加硼氢化钠(29g，767mmol)。在搅拌40分钟后，添加乙酸水溶液(70％，20mL)并浓缩混合物。将二氯甲烷(400mL)添加至残留物并用饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)萃取。用二氯甲烷(170mL)萃取水层，并将合并的有机层依次用盐酸水溶液(0.5M，250mL)和碳酸氢盐水溶液(aqueous hydrogen carbonate)(280mL)洗涤，然后用盐水(500mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到标题产物(95g，97％)。

¹H NMR(400MHz)：7.88(m，2H)，7.40(t，1H)，7.28(m，1H)，5.29(m，1H)，3.15(m，1H)，2.44(s，3H)，1.74(m，3H)。

实施例6：乙酸(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙基酯

缓慢地搅拌1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙醇(93g，460mmol)和Novozyme 435

(10g)在无水甲苯(4800mL)中的混合物。添加乙酸乙烯酯(39.2g，460mmol)并将混合物在室温搅拌5小时。将Novozyme 435

过滤并用甲苯(100mL)洗涤。将滤液浓缩并在硅胶上使用石油醚/乙酸乙酯(6∶1)作为洗脱剂进行纯化，得到标题产物(47.92g，42％)。

¹H NMR(400MHz)：7.89(m，2H)，7.39(t，1H)，7.26(m，1H)，6.27(m，1H)，2.44(s，3H)，2.13(m，3H)，1.77(m，3H)。

实施例7：(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙醇

一边搅拌，一边将氢氧化锂一水合物(16.68g，400mmol)添加至(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙酸乙酯(46.6g，190mmol)在四氢呋喃/水(1∶1，750mL)中的溶液。在反应3小时后，将混合物浓缩至一半体积。添加盐水(100mL)并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取混合物。将合并的有机层经硫酸钠干燥，过滤并浓缩以得到标题产物(38.18g，99％)。

¹H NMR(400MHz)：7.89(m，2H)，7.42(t，1H)，7.28(m，1H)，5.29(m，1H)，2.72(br.s，1H)，2.46(s，3H)，1.75(m，3H)。

¹³C NMR(100MHz)：169.3，139.9，136.7，130.5，129.4，120.4，117.1，62.9，22.3，21.3。

(4-甲基-5-甲基硫基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-芳基化合物的制备

方法1：

将相应的芳基羧酸(n mmol)吸收在亚硫酰氯(n×1.05mL)中并回流4h。将过量的亚硫酰氯在减压下除去并用吡啶(n×0.52mL)替换。分批添加4-乙基-3-硫代氨基脲(1当量，用n×0.16mL/mmol二氯甲烷漂洗/刮擦)，同时在冰浴上冷冻。移除冰浴并将反应混合物在室温搅拌24小时。将吡啶在减压下除去并用NaOH水溶液(1N，n×3.16mL)代替，将所得的混合物在70-80℃搅拌4小时。在冷却至室温后，历时20分钟滴加在乙醇(n×0.42mL)中的碘甲烷(1.5当量)。将反应混合物在室温搅拌16h。用二氯甲烷(2×(n×4.2mL))萃取产物。真空除去溶剂并实施快速色谱法(硅胶，在氯仿中的3％甲醇)，得到标题化合物。

用方法1合成了以下化合物：

方法2：

实施例8.3：2-甲基-5-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡嗪

将甲醇(25mL)添加至异硫氰酸甲酯(1.052g，14.4mmol)和5-甲基吡嗪-2-碳酰肼(carbohydrazide)(2.192g，14.4mmol)的混合物。将所得的混合物在60℃加热1h，并真空浓缩。将残留物溶解在氢氧化钠水溶液(0.8M，20mL，16mmol)中并将所得的溶液在60℃加热19h，然后冷却至室温。添加NaOH水溶液(6M，2.6mL，15.6mmol)，接着添加在乙醇(31mL)中的碘甲烷(1.24mL，19.8mmol)以及另外的水(5mL，用于漂洗)，并将所得的混合物在室温搅拌1小时。使产物在水(添加的30mL)和二氯甲烷(300mL)之间分配。用二氯甲烷(4×100mL)萃取水层。将合并的有机层用水(75mL)和盐水(75mL)洗涤并经硫酸钠干燥。真空除去溶剂，接着实施快速色谱法(硅胶，在二氯甲烷中的2-3％甲醇)，得到标题化合物(2.559g，80％)。

¹H NMR(300MHz)：9.40(s，1H)，8.46(s，1H)，3.95(s，3H)，2.80(s，3H)，2.65(s，3H)。

用类似的方式合成了以下化合物：

实施例8.5：3-(4-甲基-5-甲基硫基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶

3-(4-甲基-5-甲基硫基-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶如WO2005/080379中所述合成。

[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]-芳基化合物的制备

方法1：

历时20分钟将间氯过氧苯甲酸(77％，2.5当量)分批添加至相应的(4-甲基-5-甲基硫基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-芳基(n mmol)在二氯甲烷(n×6.25mL)中的冷溶液，并将反应混合物在室温搅拌16小时。添加饱和碳酸氢钠(n×6.25mL)并将产物萃取到二氯甲烷(2×(n×12.5mL))中。快速色谱法(硅胶，在氯仿中的2％甲醇)得到标题化合物。

用方法1合成了以下化合物：

方法2：

实施例9.3：2-甲基-5-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡嗪

将高锰酸钾(3.38g，17.0mmol)在水(95mL)中的溶液添加至2-甲基-5-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡嗪(1.853g，11.52mmol)在冰乙酸(45mL)中的溶液。将所得的混合物在室温搅拌过夜。分份加入固体硫酸氢钠，直到暗褐色消失，得到透明无色溶液。使产物在氯仿(350mL)和水(50mL)之间分配，并用氯仿(3×150mL)萃取水层。用NaOH水溶液(40mL，6M)和饱和碳酸氢钠(250mL)中和合并的有机层，直到气体停止逸出和pH为约7。将有机层用盐水(100mL)洗涤并经硫酸钠干燥。真空除去溶剂，得到标题化合物(2.715g，93％，白色固体)。

¹H NMR(300MHz)：9.44(s，1H)，8.55(s，1H)，4.36(s，3H)，3.62(s，3H)，2.69(s，3H)。

用类似的方式合成了以下化合物：

实施例9.5：3-(5-甲磺酰基-4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-吡啶

3-(5-甲磺酰基-4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)-吡啶如WO2005/080356中所述合成。

最终化合物的合成

实施例10.1：2-(4-甲基-5-{(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙氧基}-4H-1，2，4-三唑-3-基)嘧啶

将(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙醇(251mg，1.23mmol)、2-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]嘧啶(239mg，1.00mmol)和碳酸铯(911mg，2.80mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物在65℃搅拌15h。在冷却至室温后，使产物在乙酸乙酯(300mL)和水(50mL)之间分配。将有机层用水(3×50mL)和盐水(50mL)洗涤，并经硫酸钠干燥。真空浓缩溶剂。快速色谱法(硅胶，在二氯甲烷中的2-3％甲醇)得到标题化合物(265mg，73％，油)。

¹H NMR(300MHz)：8.85(d，2H)；7.93(m，2H)；7.42(t，1H)；7.29(m，2H)；6.68(q，1H)；3.88(bs，3H)；2.46(bs，3H)；2.03(d，3H)。

LC-MS(M⁺+1)364。

用类似的方式合成了以下化合物：

生物学评价

在表达mGluR5D的细胞系中进行mGluR5拮抗作用的功能评价

可以使用用于药理学活性的标准测定来分析本发明化合物的性质。谷氨酸受体测定的实例是本领域公知的，如在例如Aramori等人的Neuron8：757(1992)、Tanabe等人的Neuron 8：169(1992)、Miller等人的J.Neuroscience15：6103(1995)、Balazs等人的J.Neurochemistry 69：151(1997)中所述。将这些出版物中所述的方法引入本申请作为参考。适宜的是，本发明化合物可以通过测量在表达mGluR5的细胞中的细胞内钙[Ca²⁺]_i动员的测定(FLIPR)或另一种测量肌醇磷酸转换的测定(IP3)进行研究。

FLIPR测定

将如WO97/05252中所述表达人类mGluR5d的细胞以100,000个细胞/每孔的密度接种在胶原涂覆的，底部透明的96-孔板(具有黑色侧面)上，并且在接种24小时后进行实验。所有测定在含127mM NaCl、5mM KCl、2mMMgCl₂、0.7mM NaH₂PO₄、2mM CaCl₂、0.422mg/ml NaHCO₃、2.4mg/mlHEPES、1.8mg/ml葡萄糖和1mg/ml BSA第IV级份(Fraction IV)(pH 7.4)的缓冲液中进行。将96-孔板中的细胞培养物在上述缓冲液中加载60分钟，该缓冲液含有在0.01％pluronic acid(专有的非离子表面活性剂多元醇醇-CAS号9003-11-6)中的4μM的荧光钙指示剂Fluo-3(Molecular Probes，Eugene，Oregon)的乙酰氧基甲基酯形式。在装载期后，将Fluo-3缓冲液除去并用新鲜测定缓冲液替换。使用具有0.800W和0.4秒CCD照相机快门速度的激光装置(激发波长和发射波长分别为488nm和562nm)进行FLIPR实验。用160μl存在于细胞板的每个孔中的缓冲液引发每一实验。加入来自拮抗剂板的40μl添加物，然后加入来自激动剂板的50μL添加物。以30分钟的间隔分开拮抗剂和激动剂的加入。在两次添加的每一次之后，立即以1秒的间隔采样荧光信号50次，接着以5秒的间隔采样3次。按照对激动剂响应的峰高之间的差(扣除采样期间的背景荧光)来测量响应。使用线性最小二乘法拟合程序确定IC₅₀。

IP3测定

对mGluR5d的另外的功能测定描述于WO97/05252中，并且基于磷脂酰肌醇转换。受体活化刺激磷脂酶C活性并导致形成的肌醇1，4，5-三磷酸酯(IP₃)增加。

将稳定地表达人类mGluR5d的GHEK以40×10⁴细胞/孔接种到含1μCi/孔[3H]肌醇的培养基中的24孔聚-L-赖氨酸涂覆的板上。将细胞孵育过夜(16h)，然后洗涤三遍并在补充有1单位/ml谷丙转氨酶(glutamate pyruvatetransaminase)和2mM丙酮酸盐(pyruvate)的HEPES缓冲盐水(146mM NaCl，4.2mM KCl，0.5mM MgCl₂，0.1％葡萄糖，20mM HEPES，pH 7.4)中于37℃孵育1小时。将细胞在HEPES缓冲盐水中洗涤一遍并在含10mM LiCl的HEPES缓冲盐水中预孵育10分钟。将化合物一式两份在37℃孵育15分钟，然后添加谷氨酸(glutamate)(80μM)或DHPG(30μM)，并且再孵育30分钟。通过添加在冰上的(on ice)0.5ml高氯酸(5％)终止反应，并且在4℃孵育至少30分钟。将样品收集在15ml聚丙烯管中，并使用离子交换树脂(DowexAG1-X8甲酸盐形式，200-400目，BIORAD)柱分离肌醇磷酸。肌醇磷酸分离通过以下方法进行：首先用8ml 30mM甲酸铵洗脱甘油磷脂酰肌醇。接着，用8ml 700mM甲酸铵/100mM甲酸洗脱全部肌醇磷酸并收集在闪烁瓶中。然后，使该洗脱液与8ml闪烁体混合并通过闪烁计数测定[3H]肌醇结合。绘制来自一式两份样品的DPM数，并使用线性最小二乘法拟合程序确定IC₅₀。

缩写

BSA 牛血清白蛋白

CCD 电荷耦合器件

CRC 浓度响应曲线

DHPG 3，5-二羟基苯基甘氨酸

DPM 每分钟衰变次数

EDTA 乙二胺四乙酸

FLIPR 荧光成像板读数器

GHEK 含GLAST的人胚肾

GLAST 谷氨酸/天冬氨酸运载体

HEPES 4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸(缓冲剂)

IP3 肌醇三磷酸

通常，所述化合物在上面的测定中具有活性，其IC₅₀值小于10000nM。在本发明的一个方面，IC₅₀值小于1μM。在本发明的又一方面，IC₅₀值小于100nM。

实施例	IC₅₀/nM(IP3测定)
		10.1	36
10.2	25
		10.3	22
10.4	20
		10.5	23

筛选具有抗TLESR活性的化合物

使用雄性和雌性的成年拉布拉多猎犬，经训练，能够在巴普洛夫吊索(Pavlov sling)中站立。形成粘膜到皮肤的食管造口(Mucosa-to-skinesophagostomies)，并在进行任何实验前使狗完全恢复。

运动性测量

简而言之，在禁食约17小时(自由地供应水(free supply of water))后，通过食管造口引入多腔套/侧孔组合件(multilumen sleeve/sideholeassembly)(Dentsleeve，Adelaide，South Australia)，以测量胃、食管下括约肌(LES)和食管的压力。使用低顺应性测压灌注泵(low-compliance manometricperfusion pump)(Dentsleeve，Adelaide，South Australia)给该组合件灌注水。将空气灌注管(air-perfused tube)沿口腔方向通入以测量吞咽(swallows)，并使用在LES上方3cm处的锑电极监测pH。将所有信号放大并在个人计算机上以10Hz获取。

当获得无禁食的胃/LES III期运动活动(fasting gastric/LES phase IIImotor activity)的基线测量时，在前肢静脉中将安慰剂(0.9％NaCl)或测试化合物静脉内给药(静脉内，0.5ml/kg)。在静脉内给药10分钟后，将营养餐(10％胨，5％D-葡萄糖，5％英脱利匹特(Intralipid)，pH 3.0)通过所述组合件的中心腔以100ml/min注入到胃中，达到30ml/kg的最终体积。在注入营养餐后，以500ml/min的速率注入空气，直到获得10±1mmHg的胃内压。然后，使用注入泵进一步注入空气或从胃排出空气，以便在整个实验期间将压力维持在该水平。从开始营养物注入至空气注入结束的实验时间为45分钟。该操作已经被确认为触发TLESRs的可靠方法。

将TLESRs定义为食管下括约肌压力(相对于胃内压)以＞1mmHg/s的速率降低。松弛不应在发作之前晚于咽信号≤2s，在这种情况中将松弛归为吞咽诱发的(swallow-induced)。在LES和胃之间的压力差应小于2mmHg，以及完整松弛的持续时间长于1s。

Claims

1.式I化合物或其可药用盐、水合物、同工型化合物或对映异构体，

其中R¹为

2.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为S-对映异构体。

3.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物为R-对映异构体。

4.如权利要求1所述的化合物，其选自：

2-(4-甲基-5-{(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙氧基}-4H-1，2，4-三唑-3-基)嘧啶；

5-(4-甲基-5-{(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙氧基}-4H-1，2，4-三唑-3-基)嘧啶；

2-甲基-5-(4-甲基-5-{(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙氧基}-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡嗪；

2-甲基-4-(4-甲基-5-{(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙氧基}-4H-1，2，4-三唑-3-基)吡啶；和

3-{4-甲基-5-[(1R)-1-(2-(3-甲基苯基-2H-四唑-5-基)-乙氧基]-4H-[1，2，4]三唑-3-基}-吡啶；

或它们的可药用盐、水合物或同工型。

5.如权利要求1-4中的任意一项所述的化合物，其用于治疗。

6.一种药物组合物，其包含作为活性成分的如权利要求1-4中的任意一项所述的化合物，以及在药理上和药学上可接受的载体。

7.如权利要求1-4中的任意一项所述的化合物或其可药用盐或光学异构体在制备用于治疗mGluR5受体介导的障碍的药物中的用途。

8.如权利要求7所述的用途，其中所述障碍是神经障碍。

9.如权利要求7所述的用途，其中所述障碍是精神障碍。

10.如权利要求7所述的用途，其中所述障碍是胃肠道障碍。

11.如权利要求7所述的用途，其中所述障碍是以下障碍中的任何一种：胃食管反流疾病、肠易激综合征、功能性消化不良、咳嗽、肥胖症、阿尔茨海默氏病、老年性痴呆、AIDS诱导的痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病、偏头痛、癫痫、精神分裂症、抑郁、焦虑、急性焦虑、强迫性障碍、眼科障碍，例如视网膜病变、糖尿病视网膜病、青光眼；听觉神经性障碍，例如耳鸣；化学疗法诱导的神经病、疱疹后神经痛和三叉神经痛、耐受性、依赖性、成瘾和成癖性障碍、神经发育障碍，包括脆性X综合征、孤独症、精神发育迟滞、精神分裂症和唐氏综合征；与偏头痛、炎性疼痛、神经性疼痛障碍如糖尿病神经病变、关节炎和类风湿病相关的疼痛、腰痛、手术后疼痛、与各种症状相关的疼痛，所述症状包括心绞痛、肾绞痛或胆绞痛、月经、偏头痛和痛风；卒中、头损伤、缺氧性和缺血性损伤、低血糖症、心血管疾病和癫痫。

12.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是慢性疼痛障碍。

13.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是急性疼痛障碍。

14.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是焦虑。

15.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是抑郁。

16.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是帕金森病。

17.如权利要求11所述的用途，其中所述疼痛障碍是神经性疼痛障碍。

18.如权利要求11所述的用途，其中所述疼痛障碍是偏头痛。

19.如权利要求11所述的用途，其中所述疼痛障碍是炎性疼痛。

20.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是胃食管反流疾病。

21.如权利要求11所述的用途，其中所述障碍是咳嗽。

22.用于治疗或预防mGluR5受体介导的障碍的方法，其中向需要该治疗或预防的受试者给药有效量的如权利要求1-4中的任意一项所述的化合物。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述障碍是神经障碍。

24.如权利要求22所述的方法，其中所述障碍是精神障碍。

25.如权利要求22所述的方法，其中所述障碍是以下障碍中的任何一种障碍：胃食管反流疾病、肠易激综合征、功能性消化不良、咳嗽、肥胖症、阿尔茨海默氏病、老年性痴呆、AIDS诱导的痴呆、帕金森病、肌萎缩侧索硬化、亨廷顿舞蹈病、偏头痛、癫痫、精神分裂症、抑郁、焦虑、急性焦虑、强迫性障碍、眼科障碍，例如视网膜病变、糖尿病视网膜病、青光眼；听觉神经性障碍，例如耳鸣；化学疗法诱导的神经病、疱疹后神经痛和三叉神经痛、耐受性、依赖性、成瘾和成癖性障碍、神经发育障碍，包括脆性X综合征、孤独症、精神发育迟滞、精神分裂症和唐氏综合征；与偏头痛、炎性疼痛、神经性疼痛障碍如糖尿病神经病变、关节炎和类风湿病相关的疼痛、腰痛、手术后疼痛、与各种症状相关的疼痛，所述症状包括心绞痛、肾绞痛或胆绞痛、月经、偏头痛和痛风；卒中、头损伤、缺氧性和缺血性损伤、低血糖症、心血管疾病和癫痫。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是慢性疼痛障碍。

27.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是急性疼痛障碍。

28.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是焦虑。

29.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是抑郁。

30.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是帕金森病。

31.如权利要求25所述的方法，其中所述疼痛障碍是神经性疼痛障碍。

32.如权利要求25所述的方法，其中所述疼痛障碍是偏头痛。

33.如权利要求25所述的方法，其中所述疼痛障碍是炎性疼痛。

34.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是胃食管反流疾病。

35.如权利要求25所述的方法，其中所述障碍是咳嗽。

36.化合物，其选自：

(2Z)-氨基[3-甲基苯基)亚肼基]乙酸乙酯；

2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-羧酸乙酯；

1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙酮；

乙酸(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙基酯；

(1R)-1-[2-(3-甲基苯基)-2H-四唑-5-基]乙醇；

2-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]嘧啶；

5-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]嘧啶；

2-甲基-5-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡嗪；

2-甲基-4-[4-甲基-5-(甲基硫基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡啶；

2-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]嘧啶；

5-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]嘧啶；

2-甲基-5-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡嗪；和

2-甲基-4-[4-甲基-5-(甲基磺酰基)-4H-1，2，4-三唑-3-基]吡啶。