CN101885624A

CN101885624A - 一种降解秸秆的腐熟剂

Info

Publication number: CN101885624A
Application number: CN 201010228347
Authority: CN
Inventors: 李双来; 胡诚; 乔艳; 陈云峰; 付爱国
Original assignee: Hubei Jindi Agriculture Science & Technology Co Ltd
Current assignee: Hubei Jindi Agriculture Science & Technology Co Ltd; Institute of Plant Protection and Soil Fertilizer of Hubei Academy of Agricultural Science
Priority date: 2010-07-16
Filing date: 2010-07-16
Publication date: 2010-11-17
Anticipated expiration: 2030-07-16
Also published as: CN101885624B

Abstract

本发明涉及一种降解秸秆的腐熟剂，它的活性成份包括热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。该腐熟剂能快速腐熟麦秆、稻秆、谷秆、红薯藤、蚕豆秸、油菜秆、杂草、树叶、纤维物质含量高的生活垃圾，从而制备有机肥料，具有降解时间短、有效杀灭病虫和提供作物养分得优点。

Description

一种降解秸秆的腐熟剂

技术领域

本发明涉及一种降解秸秆的腐熟剂，尤其涉及一种降解时间短、分解作用稳定，在常温下具有分解作用的秸秆腐熟剂。

背景技术

目前，在我国农村由于化肥的过量使用，造成土壤有机质和有益微生物菌群和数量的减少，土壤理化状况严重恶化，势必影响农业的可持续发展和生态环境的恶化。为此，国家采取了以提升土壤有机质、改良土壤、减少环境污染为目的的系列方针政策，投入了大量的人力、物力、财力改良以上状况。

农作物秸秆数量大、种类多、分布广。全世界秸秆年产量29亿多吨，我国是粮食生产大国，也是秸秆生产大国，每年可生产秸杆7亿多吨，约占全世界秸秆总量的20％～30％，其中，水稻、小麦、大豆、玉米、薯类等粮食作物秸秆约518亿吨，占秸秆总量的89％；花生、油菜籽、芝麻、向日葵等油料作物秸秆占总量的8％，棉花、甘蔗秸秆占总量的3％。由于认识偏差，认为秸秆是废弃物，而不是资源，因此开发利用的重视程度不够，设备研究相对滞后，尤其是在茬口紧的多熟农区，秸秆便捷处理设施配套不足。据粗略估计，目前我国直接用作生活燃料的部分秸秆约占总量的20％，用作肥料直接还田的部分秸秆约占总量的15％，用作于饲料的秸秆量约占总量的15％，用作工业原料的秸秆量约占总量的2％，废弃或露天焚烧的部分秸秆约占总量的33％。露天焚烧是目前解决秸秆去向的主要途径，既浪费了资源又污染了大气环境，还带来严重的社会问题，引起附近居民呼吸道疾病、高速公路被迫关闭、飞机停飞等问题。

秸秆腐熟剂加速秸秆腐熟，从而制备优质的天然有机化肥，可以避免秸秆资源浪费，以及避免土壤理化状况的恶化。沙春燕在《植保土肥》杂志《催腐剂快速腐熟玉米秸秆还田技术》一文中，公开了一种催腐剂快速腐熟玉米秸秆还田技术，他利用生物菌快速堆沤玉米秸秆，使秸秆腐熟时间提早15～20天，不过没有公开具体采用了何种菌体组成的催腐剂。姜佰文在《东北农业大学学报》第40卷第5期《秸秆常温快速腐熟生物菌剂的筛选》一文中，公开了从枯草杆菌1号、枯草杆菌2号、木霉、酵母、放线菌、担子菌和放线菌中筛选腐熟剂组合的方案，并最终筛选出7号腐解剂为最优配方组合，然而，该文献并没有明确给出7号腐解剂为何种菌体的组合。

中国专利CN101139561公开了一种低成本快速腐熟秸秆的腐熟剂，其配比为枯草芽孢杆菌20％、地衣芽孢杆菌10％、黄曲霉20％、半裸毛壳20％、伞枝梨头霉20％、酵母菌10％；其生产工艺为从不同环境中提取出不同的有机物有益分解菌，分别进行纯化、复壮、扩繁和培养；再把培养好的各单个菌株按比例接入经过灭菌处理过的固体培养基中，在25-50℃的温度范围内，经4-5天发酵后晾干备用；然后把各个菌株晾干水分达到25％，将晾干的单个固体菌株按上述配方配比、搅拌均匀、包装制成固体腐熟剂。利用该腐熟剂虽然只需10天即可促使秸秆腐熟，然而该腐熟剂的菌株需要利用紫外线辐射进行复壮性培养，制备工艺复杂，成本高。

中国专利CN101306961公开了一种园林植物废弃物堆肥菌剂的生产方法及其应用，其将枯草芽孢杆菌、绿色木霉、植物乳杆菌、脱氮副球菌、米曲霉和酿酒酵母各10～20份质量接种于固态发酵培养基中，在25～30℃和黑暗密封下培养发酵1～3周；一周后添加250份质量锯末，搅匀，继续培养发酵；二周后放干草吸收多余水分后移除干草，阴干即得粉状菌剂。然而，利用该菌剂促使秸秆完全腐熟的时间需要3周，腐熟时间长，不适合在茬口紧的多熟农区应用。

目前已上市的秸杆腐熟剂，例如：邯郸县福瑞生物有机肥料有限责任公司生产的秸杆腐熟剂(菌落为啤酒酵母菌、绿色木霉菌、枯草芽孢杆菌)、武汉太阳雨三农科技有限责任公司的秸杆腐熟剂(菌落为枯草芽孢杆菌(Bacillu subtilis)、粉状毕赤酵母(Pichiafarinosa)、戊糖片球菌(Pediococcus pentosaceus)、多食鞘氨醇杆菌(Sphingobacteriummultivorum)、米根霉(Rhizopus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、中国科技开发院云南分院和云南省微生物研究所联合研究开发的秸杆腐熟剂(由真菌、放线菌、细菌、酵母菌组成4大类14株菌种组成)、山东亿安生物工程有限公司应研制的多功能复合菌剂(主要由光合菌、酵母菌、醋酸杆菌、放线菌、芽孢杆菌等组成)。这些秸杆腐熟剂开始分解秸杆的时间长，需要14天以上，分解作用不稳定，分解秸杆需要较高的温度，难以满足农业生产需要。特别是南方双季稻水稻机械收割茬口紧的地区，为了加速秸杆的腐熟，不影响下茬作物的生长，急需效率更高的秸秆腐熟剂。

因此，研制降解时间短、分解作用稳定，在常温下具有分解作用的秸杆腐熟剂一直是本领域技术人员的研究方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种降解时间短、有效杀灭病虫、分解作用稳定，在常温下具有分解作用的秸秆腐熟剂。

发明人通过大量实验筛选，意外地获得了由菌剂组成的优质秸秆腐熟剂，并对其所包含的菌株进行了DNA初步鉴定，然后得出了如下技术方案：本发明所提供的用于降解秸秆的腐熟剂，它的活性成份包括热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

本发明所提供的用于降解秸秆的腐熟剂，它的活性成份也可仅有热带假丝酵母(Candida tropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)组成。

上述秸秆腐熟剂，所述热带假丝酵母(Candida tropicalis)、米曲霉(Aspergillusoryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为(0.1-10)∶(0.1-10)∶(0.1-10)∶(0.1-10)。

优选地，本发明的秸秆腐熟剂，所述热带假丝酵母(Candida tropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位数目比为(0.5-2)∶(0.5-2)∶(0.5-2)∶(0.5-2)。

进一步优选地，本发明的秸秆腐熟剂，所述热带假丝酵母(Candida tropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的菌落形成单位数目比为0.5∶1.0∶0.5∶2.0。

上述任一秸秆腐熟剂，它为固体制剂。

优选地，上述任一秸秆腐熟剂，它为粉剂。

本发明的用于降解秸秆的腐熟剂，能快速腐熟麦秆、稻秆、谷秆、红薯藤、蚕豆秸、油菜秆、杂草、树叶、纤维物质含量高的生活垃圾，从而制备有机肥料。

总的来说，本发明的用于降解秸秆的腐熟剂具有如下优点：1)降解时间短：通过本发明实施例6表2和表3可以看出，20℃以上时，4天后堆温即可达到50-60℃。通常情况下，在第7天时秸秆即可开始腐熟，秸秆碎裂。与不添加腐熟剂的处理相比，秸秆完全腐熟的时间提前了26天。与现有技术的其他腐熟剂相比，秸秆腐熟的时间提前了3-14天。具体为，与中国专利CN101306961公开的菌剂相比，提前了14天；与中国专利CN101139561公开的腐熟剂相比，提前了3天。

2)有效杀灭病虫：堆肥过程中的堆温较高，可以达到60℃以上，能杀灭秸秆中的病菌、虫卵及杂草种子，减轻病虫草害及污染。秸秆腐熟剂中的高效有益微生物，能在堆制过程中和施入土壤后大量繁殖，抑制杀灭土壤中的致病真菌，减轻作物病害，对枯枯萎病、黄萎病有十分良好的防治效果，增强了作物的抗病能力。

3)制备工艺简单，成本低。与中国专利CN101139561公开的腐熟剂相比，不需要利用紫外线辐射进行复壮性培养，制备工艺简单，成本低。

具体实施方式

以下通过优选实施例进一步描述本发明，然而本发明范围不仅仅限于下列实施例。凡是不背离本发明构思的改变或等同替代均包括在本发明的保护范围之内。

实施例1 秸秆腐熟剂的制备和酶活性检测1腐熟剂的制备本实施例用于降解秸秆的腐熟剂由菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D组成。菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D按照如下方法制备：菌株培养基：米糠0.6g/L、麸皮0.2g/L、秸秆粉0.8g/L、豆粕0.4g/L，pH值7.0。

热带假丝酵母(Candida tropicalis)，在上述菌株培养基中28℃，200r/min摇床振荡培养3d，收集所有的发酵液，低温负压干燥后作为菌剂A。

米曲霉(Aspergillus oryzae)，在上述菌株培养基中28℃，200r/min摇床振荡培养3d，收集所有的发酵液，低温负压干燥后作为菌剂B。

绿色木霉菌(Trichoderma viride)，在上述菌株培养基中28℃，200r/min摇床振荡培养3d，收集所有的发酵液，低温负压干燥后作为菌剂C。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，在上述菌株培养基中28℃，200r/min摇床振荡培养3d，收集所有的发酵液，低温负压干燥后作为菌剂D。

将上述方法制备的菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D按如下要求混合：菌剂A热带假丝酵母(Candida tropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichoderma viride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为0.5∶1.0∶0.5∶2.0。混合后的复合菌剂为秸秆腐熟剂。

2实施例1腐熟剂中的纤维素酶活、蛋白酶活和淀粉酶活的检测2.1纤维素酶活的测定测定原理：用羧甲基纤维钠盐(CMC)作底物，经纤维素酶水解后生成还原糖；3，5-二硝基水杨酸(DNS)是一种氧化剂，能与还原糖作用，使硝基还原成氨基，溶液变为橙色，橙色的深度与还原糖的浓度成正比。因此，可采用比色法求的还原糖的含量，进而从还原糖的数量来求得纤维素酶活的大小。

试剂配置：(1)磷酸钠缓冲溶液(0.2mol/L，pH6.0)；将0.2mol/L磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)12.3mL和0.2mol/L磷酸二氢钠(NaH₂PO₄)87.7mL混合即得。(具体试验中使用Na₂HPO₄·12H₂O和NaH₂PO₄·2H₂O，通过计算配置100mL磷酸钠缓冲溶液需要磷酸氢二钠0.8810g；需要磷酸二氢钠2.7364g。)(2)CMC缓冲液：准确称取0.625g羧甲基纤维素钠盐，溶于100.0mL磷酸钠缓冲液，加热搅拌使之溶解。(羧甲基纤维素钠盐很难溶解，但在溶液煮沸的情况下比较容易溶解，溶解过程中不断搅拌，防止沸液溅出。)(3)DNS显色液：称取10.0g3，5-二硝基水杨酸溶于蒸馏水中，加入20.0g氢氧化钠、200.0g酒石酸钾钠和500.0mL水，加热溶解后再加入重蒸酚2.0g、无水亚硫酸钠0.5g待全部溶解后冷却，定容至1000.0mL。(DNS显色液对吸光度影响最大，因此DNS显色液重配时，需要重新绘制标准曲线，重新进行酶活的测定。)(4)1000ug/mL标准葡萄糖溶液：准确称取25.0mg葡萄糖，用蒸馏水定容至25.0mL。

标准曲线的制作：取5支大试管，按表1的数据，用吸管准确吸取标准葡萄糖溶液与磷酸钠缓冲液混匀，即得各种不同浓度的标准葡萄糖液。初期试验表明，由于DNS颜色较深，当加入的葡萄糖的量超过2.0mL时，吸光度就超过了紫外可见分光光度计的量程4，因此葡萄糖添加量控制在2.0mL以内，详细见表1。

表1 不同浓度标准葡萄糖液

试管号	标准葡萄糖液/mL	磷酸钠缓冲液/mL	试管中葡萄糖量/ug
试管号	标准葡萄糖液/mL	磷酸钠缓冲液/mL	试管中葡萄糖量/ug	1	0	5	0
2	0.4	4.6	400	1	0	5	0
2	0.4	4.6	400	3	0.8	4.2	800
4	1.2	3.2	1200	3	0.8	4.2	800
4	1.2	3.2	1200	5	1.6	3.4	1600

原样酶液的制备称取样品10.0g，加入装有玻璃珠的三角瓶中，再加入一定体积的蒸馏水稀释，静置20min之后，200r/min震荡30min，然后四层纱布过滤，滤液3000r/min离心10min。离心后的上清液根据酶活力稀释至适当浓度，即为原样酶液，供测试用。实验中测定鱼米香腐熟剂和北京圃园秸秆腐熟剂的酶活，分别加入50mL和100mL蒸馏水稀释，获得5倍和10倍原样稀释液。

样品吸光度测定取3支大试管，1支作为空白对照，其余2支作为平行样品管。样品管中加1.0mL原样酶液，然后3支试管中分别加入4.0mL已预热至60℃的CMC缓冲液，在60℃的水浴锅中反应20min取出，每管立即加入3.0mLDNS显色液，摇匀后在对照管中再加入1.0mL原样酶液。将3支试管放入沸水浴中，显色5min后立即取出，流水冷却，用分光光度计于540nm处测其OD值。

纤维素酶活计算根据标准曲线将测得的OD值换算成葡萄糖微克数，按式(1)计算酶活力：

U = k \times \frac{m_{1} - m_{0}}{20} - - - (1)

式中：U——样品的酶活，单位为微克每克(ug/g)或微克每毫升(ug/mL)；k——样品稀释倍数；m₁——样品葡萄糖量，单位为微克(ug)；m₂——对照葡萄糖量，单位为微克(ug)；20——酶与底物反应时间，单位为分钟(min)；1mL原样酶液，1min产生1ug葡萄糖定义为1个酶活力单位(U)。

2.2蛋白酶活的测定测定原理：采用福林-酚试剂法。福林-酚试剂在碱性条件下可被酚类化合物还原呈蓝色(钼蓝和钨蓝混合物)，由于蛋白质分子中有含酚基的氨基酸(如酪氨酸、色氨酸等)，可使蛋白质及其水解产物呈上述反应。因此可利用此原理测定蛋白酶活力。通常以酪蛋白为底物，在一定pH值和温度条件下，同酶液反应，经一段时间后终止酶促反应，经离心或过滤除去酪蛋白筹沉淀物后取上清液，用Na₂CO₃碱化，再加入福林-酚试剂显色，蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比；酪氨酸含量用分光光度计在660nm波长处测定，从而计算出蛋白酶的活力。

试剂配置：福林-酚试剂：向2000mL的磨口回流瓶中加入100g钨酸钠(Na₂WO₄·2H₂O)、25g钼酸钠及700mL的去离子水，再加入50mL85％的磷酸及浓盐酸100mL，充分混合后，接上回流冷凝管，以文火回流10h，结束后再加入150g的硫酸锂(LiSO4)、50mL去离子水及数滴溴水，再继续沸腾15min，以驱除过量的溴，冷却后滤液呈黄绿色(如仍呈绿色，需再重复滴加溴水的步骤)，加去离子水定容至1000mL乱，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中，贮于冰箱中可长期保存备用。此溶液使用时可按1∶3比例用去离子水稀释。

0.4mol/L三氯乙酸(TCA)溶液精确称取TCA65.4g，加去离子水定容至1000mL。

0.4mol/L碳酸钠溶液精确称取无水碳酸钠42.4g，加去离于水溶解后，定容至1000mL。

pH值3～6醋酸缓冲液精确取NaAc·3H₂O16g与268mL浓度为6mol/L醋酸溶液混合，用去离子水稀释定容至1000mL。

2％酪蛋白底物缓冲液测试酸性蛋白酶缓冲液精确称取酪蛋白20g，加入0.1mol/L氢氧化钠20mL(用去离子水配制)，在水浴中加热溶解，然后用pH值3.6醋酸缓冲液定容至1000mL。当日配用或置于冰箱中保存。

测试中性蛋白酶缓冲液精确称取酪蛋白20g，置于1000mL三角瓶中，加入0.2mol/LNa₂HPO₄溶液(去离子水配制)610mL，在沸水浴中搅拌使其溶解，冷却后过滤，加入0.2mol/L Na₂HPO₄溶液(去离子水配制)390mL，用去离子水定容至1000mL，即成pH7.0、2％酪蛋白溶液。当天配用或置于冰箱中保存。

100μg/mL酪氨酸溶液精确称取100mg酪氨酸，逐步加入0.1mol/L盐酸溶解后，用去离于水定容至100mL放入冰箱中保存，临用时用去离子水稀释10倍。

测定操作步骤：酪氨酸标准曲线的绘制取18支试管分成6组(每组3支，平行样)，编号，按表1分别加入标准酪氨酸、去离子水、0.4mol/L的碳酸钠和福林-酚试剂，混匀后，放入40℃水浴保温20min，然后在721型分光光度计上进行比色创定(波长660nm)，以浓度为0μg/mL酪氨酸反位液做空白对照。

样品酶活的测定精确称取酶粉5g，充分碾细，加去离子水100mL，在40℃水浴中搅拌30min，充分溶出酶蛋白，然后过滤，留滤液待测。取4支试管编号(1号为空白对照)，分别加入酶液1mL，1号管立即加入0.4mol/L TCA溶液2mL，使酶失活，另3支样品加入1mL pH 7.0、浓度为2％酪蛋白底物缓冲液(如测酸性蛋白酶活力加pH3.6、2％酪蛋白底物缓冲液)，迅速混匀，并立即放入40℃恒温水浴准确计时，保温10min后，立即加入0.4mol/LTCA溶液2mL，终止反应，同时向1号空白管中加入1mL2％酪蛋白底物缓冲液，摇匀，继续置于水浴中保温20min，取出离心或过滤除去剩余酪蛋白及酶蛋白沉淀物，然后取各试管滤液1mL，分别移入另4支试管中，再加入0.4mol/L碳酸钠溶液5nL和己稀释的福林-酚试剂1mL，摇匀，保温显色20min后，进行比色测定(波长660nm)。对照标准曲线，计算酪氨酸含量。

管号标准酪氨酸去离子水 Na₂CO₃ 福林一酚试剂酪氨酸含量(100μg/mL)(mL) (mL) (0.4mol/L)(mL) (mL) (μg/mL)1 0 1.0 5 1 02 0.2 0.8 5 1 203 0.4 0.6 5 1 404 0.6 0.4 5 1 605 0.8 0.2 5 1 806 1.0 0 5 1 100蛋白酶活力计算：蛋白酶活力＝A×4×N/10。

式中：A：对照标准曲线得出的酪氨酸释放量；4：4机反应液取出1mL；N：酶粉的稀释倍数；10：反应时间10min；蛋白酶活性定义：在一定pH值(pH3.6或7.0)和40℃温度条件下，每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸定义为一个蛋白酶活力单位。

2.3淀粉酶活的测定原理：碘-淀粉比色法淀粉经α-淀粉酶催化水解，生成产物为葡萄糖、麦芽糖及糊精，在底物淀粉浓度已知且过量的条件下，反应后加入碘液与末被催化水解的淀粉结合成蓝色复合物。其蓝色的深浅与未经酶促反应的空白管比较成比例，从而计算出淀粉的量，推算肘淀粉酶活力。

试剂：底物缓冲液精确称，取9.0g；氯化钠；22。6g无水磷酸二钠和12.5g无水磷酸二氢钾，置于约500mL去离子水中力口热至沸腾溶解。称取0.4g可溶性淀粉于一小烧杯中，加入10mL去离子水，使其混悬后加人上述沸腾溶液中，冷却至室温后加入5mL37％甲醛溶液，用去离子水稀释至1000mL。此即为pH7.0、酶底物淀粉浓度为0.4g/L的缓冲液。

碘贮存液(0.1mol/L)称取1.7835g碘酸钾和22.5g碘化钾，溶于去离子水中，再缓慢加人4.5mL浓盐酸，用去离子水稀释至500mL，充分混匀，贮棕色瓶中，每月配制新鲜溶液，置冰箱中保存。

碘稀释液(0.1mol/L)取碘贮备液用去离子水稀释10倍，贮棕色瓶中，现用现配。

操作步骤称取酶粉1-2g，精确_T P，0.0002g(或吸取液体酶1.00mL)，先用少量的磷酸缓冲液溶解，并用玻璃搅拌棒捣研，将上清液小心倾人容量瓶中，沉渣部分再加人少量缓冲液，如此捣研3-4次.最后全部移入容量瓶中，用缓冲液定容至刻度(将估计酶活力除以4，即酶活力应在3.7-5.6u/mL范围内)，摇匀。通过四层纱布过滤，滤液供测定用。(见中华人民共和国轻工行业标准QB/T 1803-1993)。

吸取可溶性淀粉溶液20.0mL于试管中，加人缓冲液5.00Ml，摇匀后，于60℃士0.2℃恒温水浴中预热5min，加人稀释好的待测酶液1.00mL，立刻计时，摇匀，准确反应5min.立即吸取反应液1.00mL于稀碘液5.00mL中，摇匀，并以稀碘液作空白，于660nm波长下，用10nm比色皿，迅速测定其吸光度(A)。根据其吸光度查表A1，求得测试酶液的浓度(c)。

淀粉酶活力计算淀粉酶活力X＝c×n式中X一样品的酶活力，u/g(u/mL)；c-测试酶液的浓度，u/mL；n一样品的稀释倍数。

所得结果表示至整数。

2.4纤维素酶活、蛋白酶活、淀粉酶活的测定结果用上述方法测定本发明的秸秆腐熟剂，测定结果表明，用于降解秸秆的腐熟剂的纤维素酶活为30U/mL，蛋白酶活为15U/mL，淀粉酶活为10U/mL。上述实验结果说明，本发明的秸杆腐熟剂具有很高的纤维素酶活性、蛋白酶活性及淀粉酶活性。

实施例2用于降解秸秆的腐熟剂的制备本实施例用于降解秸秆的腐熟剂，包括菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D。菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D分别按照如下方法制备：菌株培养基：米糠0.6g/L、麸皮0.2g/L、秸秆粉0.8g/L、豆粕0.4g/L，pH值7.0。

将上述方法制备的菌剂A、菌剂B、菌剂C和菌剂D按如下要求混合：菌剂A热带假丝酵母(Candida tropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichoderma viride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为0.1∶0.1∶10∶10。混合后的复合菌剂为秸秆腐熟剂，该腐熟剂可以包含其它菌剂。

用实施例1的方法测定本实施例制备的秸秆腐熟剂的酶活，测定结果表明，本发明的秸杆腐熟剂具有很高的纤维素酶活性、蛋白酶活性及淀粉酶活性。

实施例3用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例1一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为10∶0.1∶10∶0.1。

实施例4用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例2一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为10∶10∶0.1∶0.1。

实施例5用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例2一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为1∶1∶1∶1。

实施例6用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例2一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为0.5∶10∶1∶0.1。

实施例7用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例1一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为0.5∶0.5∶2∶2。

实施例8用于降解秸秆的腐熟剂的制备除以下技术特征不同之外，其它工艺均与实施例1一致：菌剂A热带假丝酵母(Candidatropicalis)、菌剂B中米曲霉(Aspergillus oryzae)、菌剂C中绿色木霉菌(Trichodermaviride)和菌剂D中枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位(CFU)数目比为2∶0.5∶0.5∶2。

实施例9本发明实施例1的腐熟剂降解秸秆的效果研究1制备秸秆有机肥料将稻草或油菜秸秆用铡草机切断，长度小于3-5厘米为宜。试验设四个处理：处理一：堆稻草500kg，①按秸秆干重的2倍加水，力求湿透，使秸秆含水量达到65％。按秸秆干重的0.05％加实施例1制备的腐熟剂，将250g的腐熟剂与2.5kg麸皮混匀，均匀地撒在吃透水的秸秆上。②调节碳氮比：添加2％尿素(以秸秆干重计)。堆肥分3层，1、2层各厚60cm，第3层30cm，分别在各层上均匀撒尿素，其用量比自下而上为4∶4∶2。⑧将秸秆堆垛成宽2m、高1.5m，并用锨轻轻拍实(不可用脚踩)，用塑料膜覆盖，以免雨水淋湿。

处理二：堆油菜秸杆500kg，加实施例1制备的腐熟剂。①按秸秆干重的1.8倍加水，力求湿透，使秸秆含水量达到65％。按秸秆干重的0.05％加腐熟剂，将250g的腐熟剂与2.5kg麸皮混匀，均匀地撒在吃透水的秸秆上。②调节碳氮比：添加2.5％尿素(以秸秆干重计)。堆肥分3层，1、2层各厚60cm，第3层30cm，分别在各层上均匀撒尿素，其用量比自下而上为4∶4∶2。⑧将秸秆堆垛成宽2m、高1.5m，并用锨轻轻拍实(不可用脚踩)，用塑料膜覆盖，以免雨水淋湿。

处理三：除不用腐熟剂之外，其它操作同处理一。

处理四：除不用腐熟剂之外，其它操作同处理二。

2观察结果2.1实施例1制备的腐熟剂处理对堆肥温度的影响从表2可以看出，第四天各个处理开始快速升温，施用腐熟剂的处理一、与处理二分别比相应的不用腐熟剂的处理高19℃与18℃。施用腐熟剂的稻草处理一，第10天达到最高温度，施用腐熟剂的油菜秸杆处理二，第7天达到最高温度，而相应的对照处理三、处理四第14天才达到最高温度。

另外，堆肥过程中的堆温较高，最高可达70℃，能杀灭秸秆中的病菌、虫卵及杂草种子，减轻病虫草害及污染。秸秆腐熟剂中的高效有益微生物，能在堆制过程中和施入土壤后大量繁殖，抑制杀灭土壤中的致病真菌，减轻作物病害，对枯棉花枯萎病、黄萎病有十分良好的防治效果，增强作物的抗病能力。

表2不同的处理在不同时间的堆肥温度

处理的时间	处理一(℃)	处理二(℃)	处理三(℃)	处理四(℃)
处理的时间	处理一(℃)	处理二(℃)	处理三(℃)	处理四(℃)	2天	43	45	37	36
4天	56	58	38	39	2天	43	45	37	36
4天	56	58	38	39	7天	67	68	41	42
10天	70	66	56	54	7天	67	68	41	42
10天	70	66	56	54	14天	52	55	58	57
18天	48	45	50	49	14天	52	55	58	57
18天	48	45	50	49	21天	41	40	48	46
25天	38	39	45	43	21天	41	40	48	46
25天	38	39	45	43	40天	36	37	44	43
60天	34	35	36	35	40天	36	37	44	43

2.2实施例1制备的腐熟剂处理对稻草及油菜秸杆颜色的影响从表3可以看出，添加了腐熟剂的处理一与处理二稻草与油菜秸杆7天后颜色变为暗褐，添加了腐熟剂的处理一14天后稻草变成黑褐色，添加了腐熟剂的处理二10天后油菜秸杆变成黑褐色；而没有加腐熟剂的稻草秸秆要到18天才变成褐色、40天才变成黑褐色，油菜秸秆要21天左右才变成暗褐色、25天才变成黑褐色。

表3不同的处理在不同时间的堆肥颜色

处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四
处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四	2天	浅黄	褐色	浅黄	褐色
4天	暗黄	暗褐	浅黄	褐色	2天	浅黄	褐色	浅黄	褐色
4天	暗黄	暗褐	浅黄	褐色	7天	暗褐	暗褐	浅黄	褐色
10天	暗褐	黑褐	浅黄	褐色	7天	暗褐	暗褐	浅黄	褐色
10天	暗褐	黑褐	浅黄	褐色	14天	黑褐	黑褐	深黄	褐色
18天	黑褐	黑褐	深黄	褐色	14天	黑褐	黑褐	深黄	褐色
18天	黑褐	黑褐	深黄	褐色	21天	黑褐	黑褐	褐色	暗褐
25天	黑褐	黑褐	暗褐	黑褐	21天	黑褐	黑褐	褐色	暗褐
25天	黑褐	黑褐	暗褐	黑褐	40天	黑褐	黑褐	黑褐	黑褐
60天	黑褐	黑褐	黑褐	黑褐	40天	黑褐	黑褐	黑褐	黑褐

2.3实施例1制备的腐熟剂处理对稻草及油菜秸杆腐烂天数的影响从表4可以看出，添加了腐熟剂的处理一，稻草大量腐烂(70％左右秸秆用手一搓均成粉状)只需要14天，完全腐烂(所有秸秆用手一搓均成粉状)只需要18天，而没有添加腐熟剂的处理三则需要40天；添加了腐熟剂的处理二，油菜秸杆10天大量腐烂，14天完全腐烂，而没有添加腐熟剂的处理四大量腐烂则需要14天，完全腐烂需要40天。

表4不同的处理稻草与油菜秸杆开始杆腐烂的天数

处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四
处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四	2天	没有	轻微腐烂	没有腐烂	没有腐烂
4天	轻微腐烂	腐烂	没有腐烂	没有腐烂	2天	没有	轻微腐烂	没有腐烂	没有腐烂
4天	轻微腐烂	腐烂	没有腐烂	没有腐烂	7天	腐烂	较多腐烂	轻微腐烂	轻微腐烂
10天	较多腐烂	大量腐烂	轻微腐烂	较多腐烂	7天	腐烂	较多腐烂	轻微腐烂	轻微腐烂
10天	较多腐烂	大量腐烂	轻微腐烂	较多腐烂	14天	大量腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂
18天	完全腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂	14天	大量腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂
18天	完全腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂	21天	完全腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂
25天	完全腐烂	完全腐烂	大量腐烂	大量腐烂	21天	完全腐烂	完全腐烂	较多腐烂	大量腐烂

处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四
处理的时间	处理一	处理二	处理三	处理四	40天	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂
60天	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂	40天	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂	完全腐烂

3结论本发明降解秸秆的腐熟剂，可以缩短稻草与油菜秸杆的腐烂时间，稻草腐烂只需要14天，油菜秸杆腐烂只需要7天，比不添加腐熟剂提前17-25天。

Claims

1.一种降解秸秆的腐熟剂，其特征在于：它的活性成份包括热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。

2.如权利要求1所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：它的活性成份由热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)组成。

3.如权利要求1或2所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：所述热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位数目比为(0.1-10)∶(0.1-10)∶(0.1-10)∶(0.1-10)。

4.如权利要求3所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：所述热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位数目比为(0.5-2)∶(0.5-2)∶(0.5-2)∶(0.5-2)。

5.如权利要求4所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：所述热带假丝酵母(Candidatropicalis)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、绿色木霉菌(Trichoderma viride)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌落形成单位数目比为0.5∶1.0∶0.5∶2.0。

6.如权利要求3所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：它为固体制剂。

7.如权利要求6所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：它为粉剂。

8.如权利要求4或5所述的降解秸秆的腐熟剂，特征在于：它为粉剂。