CN101845469A - 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 - Google Patents
连续补料发酵生产槐糖脂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101845469A CN101845469A CN201010185605A CN201010185605A CN101845469A CN 101845469 A CN101845469 A CN 101845469A CN 201010185605 A CN201010185605 A CN 201010185605A CN 201010185605 A CN201010185605 A CN 201010185605A CN 101845469 A CN101845469 A CN 101845469A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- culture medium
- sophorolipid
- liquid
- seed culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种连续补料发酵生产槐糖脂的方法，步骤如下：(1)孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为105-106个；(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中得到液体种子；(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中发酵；(4)发酵24-72h之间，每12h补加浓度为30-60g/L的油类；发酵过程中，补加浓度为30-60g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在5-10g/L；溶氧20-30%，pH值3.3-3.8；(5)发酵72h后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇，比例4：1，单位v/v，混合有机溶剂提取槐糖脂，并抽真空除去有机溶剂，得槐糖脂产量为200-240g/L。该方法缩短发酵周期，提高生产效率和得率。
Description
技术领域
本发明涉及一种发酵生产槐糖脂的方法，特别涉及一种连续补料发酵生产槐糖脂的方法。
背景技术
槐糖脂(sophorolipid)是一种可降解的生物表面活性剂。生物表面活性剂具有较高的选择性，其表面活性受极端温度、pH值、盐度等条件影响小。与其它通过化学合成或石油炼制法生产的表面活性剂相比，生物表面活性剂在食品、化妆品、医药和环境保护等领域具有广阔的应用前景。槐糖脂作为其中重要的一员，毒性低，与人体和环境相容性好，具有良好的乳化、分散、增溶等特性，在食品、医药、化妆品、冶金、环境保护、废油回收等领域具有研究和开发价值，目前已应用于日化、食品工业、石油工业等。国际上对槐糖脂理论研究及应用开发已开展多年，最近欧美及韩国一些学者经研究发现，槐糖脂具有一定的抑菌作用，并且能够刺激皮肤表皮细胞和真皮成纤维细胞的生长，这些研究对槐糖脂的有效应用具有非常重要的意义。我国目前该领域还处于起步阶段。
目前通常采用一步发酵法生产槐糖脂，由于生产工艺的种种限制使得槐糖脂的发酵水平较低，发酵到90h产量只有大约80g/L,240h产量能达到250g/L左右。但是发酵周期较长，生产工艺较复杂，再加上后提取工艺损失率较大，所以槐糖脂的收率也较低，导致槐糖脂的成本较高，市场价格也较高，很不利于槐糖酯的推广应用。
因此，提供一种高效可行的连续补料发酵生产槐糖脂的方法，是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足之处，提供一种高效可行并可降低槐糖脂生产成本，减小投资，降低成本，益于生产应用的连续补料发酵生产槐糖脂的方法。
为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下：一种连续补料发酵生产槐糖酯的方法，其特征在于实施步骤如下：
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为105-106个，待用；斜面培养基组成包括，单位1L：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5；其中所用菌种：球拟酵母菌（Torulopsisbombicola）TJZKBA10326；
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位1L：糖类含量20-60g，油类含量20-60g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5；将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积百分比2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，500ml规格的摇瓶装液量是100ml，摇瓶于30-34℃、转速为100-150rpm的摇床上培养24h，得到液体种子；
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括，单位1L：初始糖类含量30-80g,初始油类含量30-80g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g；用蒸馏水定容至3L，pH值4.0-4.5，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比2-5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-34℃，溶氧控制在30-40%，发酵时间24h；
（4）发酵24-72h，每12h补加浓度为30-60g/L的油类；发酵过程中，补加浓度为30-60g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在5-10g/L；溶氧20-30%，pH值3.3-3.8；
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇，所述乙酸乙脂/异丙醇两者比例4：1，单位v/v，混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为200-240g/L。
所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
本发明的有益效果是：本发明采用连续发酵生产槐糖脂工艺可以大大减短发酵周期，采用一般发酵工艺周期约是240h左右，但是连续补料发酵周期可以降至72h,可将生产效率提高65%-75%，得率提高20%-30%，有效提高生产质量。并且不需要复杂的设备，处理方法简单，发酵过程简单易行，连续化、自动化发酵生产节省了人力，大大提高了各种底物的利用率。因此降低了生产成本，利于槐糖脂的开发应用的推广。该方法具有很高的实际应用价值，市场优势非常明显。
具体实施方式
以下结合实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
实施例1
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为3.6×105个，待用；斜面培养基组成包括（1L）：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。其中所用菌种为：球拟酵母菌（Torulopsisbombicola）TJZKBA10326。
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括（1L）：果糖30g，玉米油30g，酵母粉5g，尿素0.5g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积百分比2%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中（500ml规格的摇瓶装液量是100ml），摇瓶于30℃、转速为100rpm的摇床上培养24h，得到液体种子。
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括（1L）：果糖50g，玉米油50g，酵母粉6g，尿素0.5g。用蒸馏水定容至3L，pH值4.2，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积百分比3%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30℃，溶氧控制在35%，发酵时间24h。
（4）发酵24-72h之间，每12h补加浓度为30g/L的玉米油。发酵过程中，补加浓度为40g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在5g/L。溶氧20%，pH值3.5。
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇（乙酸乙脂/异丙醇比值是4：1，v/v），其混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为215g/L。
所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
实施例2
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上，于30℃恒温培养2天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为4.5×105个，待用；斜面培养基组成包括（1L）：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括（1L）：蔗糖50g，菜籽油50g，酵母粉7g，尿素0.8g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比4%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中（500ml规格的摇瓶装液量是100ml），摇瓶于32℃、转速为120rpm的摇床上培养24h，得到液体种子。
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括（1L）：蔗糖60g,菜籽油60g,酵母粉7g,尿素0.8g。用蒸馏水定容至3L，pH值4.5，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比4%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度32℃，溶氧控制在30%，发酵时间24h。
（4）发酵24-72h之间，每12h补加浓度为40g/L的菜籽油。发酵过程中，补加浓度为50g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在8g/L。溶氧30%，pH值3.3。
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇（4：1，v/v）混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为229g/L。
其它同实施例1。
实施例3
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上，于30℃恒温培养3天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为5.8×105个，待用；斜面培养基组成包括（1L）：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括（1L）：葡萄糖60g，大豆油60g，酵母粉8g，尿素1g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比3%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中（500ml规格的摇瓶装液量是100ml），摇瓶于34℃、转速为150rpm的摇床上培养24h，得到液体种子。
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括（1L）：葡萄糖80g,大豆油80g,酵母粉6g,尿素1g。用蒸馏水定容至3L，pH值4.3，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度34℃，溶氧控制在40%，发酵时间24h。
（4）发酵24-72h之间，每12h补加浓度为60g/L的大豆油。发酵过程中，补加浓度为30g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在6g/L。溶氧25%，pH值3.8。
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇（4：1，v/v）混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为237g/L。
其它同实施例1。
实施例4
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上，于30℃恒温培养4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量约为7.6×105个，待用；斜面培养基组成包括（1L）：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括（1L）：菊糖20g，橄榄油20g，酵母粉4g，尿素0.6g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中（500ml规格的摇瓶装液量是100ml），摇瓶于30℃、转速为110rpm的摇床上培养24h，得到液体种子。
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括（1L）：菊糖30g，橄榄油30g，酵母粉5g，尿素0.6g。用蒸馏水定容至3L，pH值4.0，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比2%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度32℃，溶氧控制在30%，发酵时间24h。
（4）发酵24-72h之间，每12h补加浓度为50g/L的橄榄油。发酵过程中，补加浓度为60g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在10g/L。溶氧30%，pH值3.6。
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇（4：1，v/v）混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为208g/L。
其它同实施例1。
上述参照实施例对用连续发酵生产槐糖脂的方法进行的详细描述，是说明性的而不是限定性的，可根据所限定范围例举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种连续补料发酵生产槐糖酯的方法，其特征在于实施步骤如下：
（1）孢子悬液的制备：将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上，于30℃恒温培养2-4天，加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体，获得菌悬液，悬液中孢子含量为105-106个，待用；斜面培养基组成包括，单位1L：葡萄糖8g，麦芽粉3g，蛋白胨4g，酵母粉4g,琼脂15g，用蒸馏水定容至1L，pH值3.5；
（2）上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中，液体种子培养基组成包括，单位1L：糖类含量20-60g，油类含量20-60g，酵母粉4-8g，尿素0.5-1g,用蒸馏水定容至1L，pH值3.5；将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积百分比2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中，500ml规格的摇瓶装液量是100ml，摇瓶于30-34℃、转速为100-150rpm的摇床上培养24h，得到液体种子；
（3）上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中，发酵罐培养基组成包括，单位1L：初始糖类含量30-80g,初始油类含量30-80g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g；用蒸馏水定容至3L，pH值4.0-4.5，将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温；然后按照体积比2-5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中，发酵温度30-34℃，溶氧控制在30-40%，发酵时间24h；
（4）发酵24-72h，每12h补加浓度为30-60g/L的油类；发酵过程中，补加浓度为30-60g/L的葡萄糖，控制葡萄糖浓度在5-10g/L；溶氧20-30%，pH值3.3-3.8；
（5）发酵72h结束后，用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇，所述乙酸乙脂/异丙醇两者比例4：1，单位v/v，混合有机溶剂提取槐糖脂，并在70℃抽真空除去有机溶剂，得到槐糖脂产量为200-240g/L。
2.根据权利要求1所述的连续补料发酵生产槐糖酯的方法，其特征在于所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
3.根据权利要求1所述的连续补料发酵生产槐糖酯的方法，其特征在于所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010185605A CN101845469A (zh) | 2010-05-28 | 2010-05-28 | 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201010185605A CN101845469A (zh) | 2010-05-28 | 2010-05-28 | 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101845469A true CN101845469A (zh) | 2010-09-29 |
Family
ID=42770287
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201010185605A Pending CN101845469A (zh) | 2010-05-28 | 2010-05-28 | 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101845469A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102492605A (zh) * | 2011-11-30 | 2012-06-13 | 中海石油环保服务（天津）有限公司 | 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法 |
| CN105671106A (zh) * | 2016-02-16 | 2016-06-15 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法 |
| CN107177643A (zh) * | 2017-06-30 | 2017-09-19 | 广州美中生物科技有限公司 | 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法 |
| CN113151020A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-23 | 南京工业大学 | 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法 |
| CN113604523A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-11-05 | 华东理工大学 | 一种基于数据机理融合模型的高效发酵生产槐糖脂的方法 |
-
2010
- 2010-05-28 CN CN201010185605A patent/CN101845469A/zh active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102492605A (zh) * | 2011-11-30 | 2012-06-13 | 中海石油环保服务（天津）有限公司 | 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法 |
| CN102492605B (zh) * | 2011-11-30 | 2014-08-20 | 中海石油环保服务（天津）有限公司 | 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法 |
| CN105671106A (zh) * | 2016-02-16 | 2016-06-15 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法 |
| CN105671106B (zh) * | 2016-02-16 | 2021-06-11 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法 |
| CN107177643A (zh) * | 2017-06-30 | 2017-09-19 | 广州美中生物科技有限公司 | 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法 |
| CN107177643B (zh) * | 2017-06-30 | 2021-07-30 | 广州美中生物科技有限公司 | 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法 |
| CN113151020A (zh) * | 2021-05-12 | 2021-07-23 | 南京工业大学 | 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法 |
| CN113151020B (zh) * | 2021-05-12 | 2023-10-20 | 南京工业大学 | 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法 |
| CN113604523A (zh) * | 2021-08-23 | 2021-11-05 | 华东理工大学 | 一种基于数据机理融合模型的高效发酵生产槐糖脂的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN106967775B (zh) | 生物催化制备薯蓣皂苷元的方法及其所用菌剂 | |
| CN108823261A (zh) | 一种超低分子量铁皮石斛多糖及其制备与应用 | |
| CN104013657A (zh) | 一种西洋参药材提取皂苷后发酵提取方法 | |
| CN101589151A (zh) | 乙醇或乳酸的制备方法 | |
| CN101845469A (zh) | 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 | |
| CN115039636B (zh) | 一种栽培银耳的培养基及其制作方法 | |
| CN101914211A (zh) | 一种从杜仲叶林萌生枝皮中提取杜仲胶的方法 | |
| CN102351580B (zh) | 一种利用食品加工剩余物制备黑木耳营养液的方法 | |
| CN102851259B (zh) | 抗氧化剂的制造方法 | |
| CN108294224A (zh) | 一种利用植物乳杆菌发酵脱除大米中重金属镉的方法 | |
| CN103589759B (zh) | 一种用废糖蜜和地沟油双碳源发酵生产槐糖脂的方法 | |
| CN103352016B (zh) | 利用Alteromonas colwelliana A321发酵浒苔制备生物肥 | |
| CN102994430A (zh) | 一株细菌纤维素产生菌株及其应用 | |
| CN103110118B (zh) | 一种利用猴头菌固体发酵灰树花残渣制备膳食纤维的方法 | |
| CN102433288B (zh) | 一种产鸟氨酸的菌株及用该菌株生物合成鸟氨酸的方法 | |
| CN103627513A (zh) | 一种流加预处理固态发酵油料作物辅助冷榨提油的工艺 | |
| CN102329833A (zh) | 用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖酯的方法 | |
| CN105420143A (zh) | 一种东方醋杆菌及其生产黄芪多糖的方法 | |
| CN103571779B (zh) | 一种发酵生产环磷腺苷的发酵培养基、菌株及生产方法 | |
| CN101481662B (zh) | 一种链霉菌及其应用 | |
| CN102703558B (zh) | 一种利用亚麻刺盘孢霉羟化去氢表雄酮的方法 | |
| CN101805760A (zh) | 一种生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法 | |
| CN106636252A (zh) | 干巴菌胞外多糖及其制备方法和应用 | |
| CN105112387A (zh) | 一种脂肪酶的制备方法 | |
| CN103333872B (zh) | 一种制备β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20100929 |