CN101845469A - 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 - Google Patents

连续补料发酵生产槐糖脂的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN101845469A
CN101845469A CN201010185605A CN201010185605A CN101845469A CN 101845469 A CN101845469 A CN 101845469A CN 201010185605 A CN201010185605 A CN 201010185605A CN 201010185605 A CN201010185605 A CN 201010185605A CN 101845469 A CN101845469 A CN 101845469A
Authority
CN
China
Prior art keywords
fermentation
culture medium
sophorolipid
liquid
seed culture
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201010185605A
Other languages
English (en)
Inventor
徐勇虎
刘晓鸥
国华
李睿颖
王永乐
胡娅君
刘云
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
TIANJIN SF-BIO INDUSTRIAL BIO-TECH Co Ltd
Original Assignee
TIANJIN SF-BIO INDUSTRIAL BIO-TECH Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by TIANJIN SF-BIO INDUSTRIAL BIO-TECH Co Ltd filed Critical TIANJIN SF-BIO INDUSTRIAL BIO-TECH Co Ltd
Priority to CN201010185605A priority Critical patent/CN101845469A/zh
Publication of CN101845469A publication Critical patent/CN101845469A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及一种连续补料发酵生产槐糖脂的方法,步骤如下:(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上,于30℃恒温培养2-4天,加入0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为105-106个;(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中得到液体种子;(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中发酵;(4)发酵24-72h之间,每12h补加浓度为30-60g/L的油类;发酵过程中,补加浓度为30-60g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在5-10g/L;溶氧20-30%,pH值3.3-3.8;(5)发酵72h后,用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇,比例4:1,单位v/v,混合有机溶剂提取槐糖脂,并抽真空除去有机溶剂,得槐糖脂产量为200-240g/L。该方法缩短发酵周期,提高生产效率和得率。

Description

连续补料发酵生产槐糖脂的方法
技术领域
本发明涉及一种发酵生产槐糖脂的方法,特别涉及一种连续补料发酵生产槐糖脂的方法。
背景技术
槐糖脂(sophorolipid)是一种可降解的生物表面活性剂。生物表面活性剂具有较高的选择性,其表面活性受极端温度、pH值、盐度等条件影响小。与其它通过化学合成或石油炼制法生产的表面活性剂相比,生物表面活性剂在食品、化妆品、医药和环境保护等领域具有广阔的应用前景。槐糖脂作为其中重要的一员,毒性低,与人体和环境相容性好,具有良好的乳化、分散、增溶等特性,在食品、医药、化妆品、冶金、环境保护、废油回收等领域具有研究和开发价值,目前已应用于日化、食品工业、石油工业等。国际上对槐糖脂理论研究及应用开发已开展多年,最近欧美及韩国一些学者经研究发现,槐糖脂具有一定的抑菌作用,并且能够刺激皮肤表皮细胞和真皮成纤维细胞的生长,这些研究对槐糖脂的有效应用具有非常重要的意义。我国目前该领域还处于起步阶段。
目前通常采用一步发酵法生产槐糖脂,由于生产工艺的种种限制使得槐糖脂的发酵水平较低,发酵到90h产量只有大约80g/L,240h产量能达到250g/L左右。但是发酵周期较长,生产工艺较复杂,再加上后提取工艺损失率较大,所以槐糖脂的收率也较低,导致槐糖脂的成本较高,市场价格也较高,很不利于槐糖酯的推广应用。
因此,提供一种高效可行的连续补料发酵生产槐糖脂的方法,是该技术领域科研人员急需开发的新课题之一。
发明内容
本发明的目的在于克服上述已有技术的不足之处,提供一种高效可行并可降低槐糖脂生产成本,减小投资,降低成本,益于生产应用的连续补料发酵生产槐糖脂的方法。
为实现上述目的本发明所采用的实施方式如下:一种连续补料发酵生产槐糖酯的方法,其特征在于实施步骤如下:
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上,于30℃恒温培养2-4天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为105-106个,待用;斜面培养基组成包括,单位1L:葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5;其中所用菌种:球拟酵母菌(Torulopsisbombicola)TJZKBA10326;
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括,单位1L:糖类含量20-60g,油类含量20-60g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5;将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积百分比2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中,500ml规格的摇瓶装液量是100ml,摇瓶于30-34℃、转速为100-150rpm的摇床上培养24h,得到液体种子;
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括,单位1L:初始糖类含量30-80g,初始油类含量30-80g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g;用蒸馏水定容至3L,pH值4.0-4.5,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比2-5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度30-34℃,溶氧控制在30-40%,发酵时间24h;
(4)发酵24-72h,每12h补加浓度为30-60g/L的油类;发酵过程中,补加浓度为30-60g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在5-10g/L;溶氧20-30%,pH值3.3-3.8;
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇,所述乙酸乙脂/异丙醇两者比例4:1,单位v/v,混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为200-240g/L。
所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
本发明的有益效果是:本发明采用连续发酵生产槐糖脂工艺可以大大减短发酵周期,采用一般发酵工艺周期约是240h左右,但是连续补料发酵周期可以降至72h,可将生产效率提高65%-75%,得率提高20%-30%,有效提高生产质量。并且不需要复杂的设备,处理方法简单,发酵过程简单易行,连续化、自动化发酵生产节省了人力,大大提高了各种底物的利用率。因此降低了生产成本,利于槐糖脂的开发应用的推广。该方法具有很高的实际应用价值,市场优势非常明显。
具体实施方式
以下结合实施例,对依据本发明提供的具体实施方式详述如下:
实施例1
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上,于30℃恒温培养2天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为3.6×105个,待用;斜面培养基组成包括(1L):葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。其中所用菌种为:球拟酵母菌(Torulopsisbombicola)TJZKBA10326。
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括(1L):果糖30g,玉米油30g,酵母粉5g,尿素0.5g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积百分比2%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml),摇瓶于30℃、转速为100rpm的摇床上培养24h,得到液体种子。
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括(1L):果糖50g,玉米油50g,酵母粉6g,尿素0.5g。用蒸馏水定容至3L,pH值4.2,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积百分比3%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度30℃,溶氧控制在35%,发酵时间24h。
(4)发酵24-72h之间,每12h补加浓度为30g/L的玉米油。发酵过程中,补加浓度为40g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在5g/L。溶氧20%,pH值3.5。
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇(乙酸乙脂/异丙醇比值是4:1,v/v),其混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为215g/L。
所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
实施例2
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上,于30℃恒温培养2天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为4.5×105个,待用;斜面培养基组成包括(1L):葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括(1L):蔗糖50g,菜籽油50g,酵母粉7g,尿素0.8g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比4%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml),摇瓶于32℃、转速为120rpm的摇床上培养24h,得到液体种子。
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括(1L):蔗糖60g,菜籽油60g,酵母粉7g,尿素0.8g。用蒸馏水定容至3L,pH值4.5,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比4%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度32℃,溶氧控制在30%,发酵时间24h。
(4)发酵24-72h之间,每12h补加浓度为40g/L的菜籽油。发酵过程中,补加浓度为50g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在8g/L。溶氧30%,pH值3.3。
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇(4:1,v/v)混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为229g/L。
其它同实施例1。
实施例3
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上,于30℃恒温培养3天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为5.8×105个,待用;斜面培养基组成包括(1L):葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括(1L):葡萄糖60g,大豆油60g,酵母粉8g,尿素1g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比3%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml),摇瓶于34℃、转速为150rpm的摇床上培养24h,得到液体种子。
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括(1L):葡萄糖80g,大豆油80g,酵母粉6g,尿素1g。用蒸馏水定容至3L,pH值4.3,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度34℃,溶氧控制在40%,发酵时间24h。
(4)发酵24-72h之间,每12h补加浓度为60g/L的大豆油。发酵过程中,补加浓度为30g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在6g/L。溶氧25%,pH值3.8。
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇(4:1,v/v)混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为237g/L。
其它同实施例1。
实施例4
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到斜面上,于30℃恒温培养4天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量约为7.6×105个,待用;斜面培养基组成包括(1L):葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括(1L):菊糖20g,橄榄油20g,酵母粉4g,尿素0.6g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5。将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中(500ml规格的摇瓶装液量是100ml),摇瓶于30℃、转速为110rpm的摇床上培养24h,得到液体种子。
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括(1L):菊糖30g,橄榄油30g,酵母粉5g,尿素0.6g。用蒸馏水定容至3L,pH值4.0,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比2%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度32℃,溶氧控制在30%,发酵时间24h。
(4)发酵24-72h之间,每12h补加浓度为50g/L的橄榄油。发酵过程中,补加浓度为60g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在10g/L。溶氧30%,pH值3.6。
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的乙酸乙脂/异丙醇(4:1,v/v)混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为208g/L。
其它同实施例1。
上述参照实施例对用连续发酵生产槐糖脂的方法进行的详细描述,是说明性的而不是限定性的,可根据所限定范围例举出若干个实施例,因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改,应属本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种连续补料发酵生产槐糖酯的方法,其特征在于实施步骤如下:
(1)孢子悬液的制备:将球拟酵母菌TJZKBA10326接种到培养基斜面上,于30℃恒温培养2-4天,加入质量浓度为0.75%的生理盐水洗涤菌丝体,获得菌悬液,悬液中孢子含量为105-106个,待用;斜面培养基组成包括,单位1L:葡萄糖8g,麦芽粉3g,蛋白胨4g,酵母粉4g,琼脂15g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5;
(2)上述菌悬液用于接种至灭菌后的液体种子培养基中,液体种子培养基组成包括,单位1L:糖类含量20-60g,油类含量20-60g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g,用蒸馏水定容至1L,pH值3.5;将液体种子培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积百分比2-5%的接种量将孢子悬液接入上述冷却的液体种子培养基中,500ml规格的摇瓶装液量是100ml,摇瓶于30-34℃、转速为100-150rpm的摇床上培养24h,得到液体种子;
(3)上述液体种子培养基用于接种至灭菌后的5L发酵罐中,发酵罐培养基组成包括,单位1L:初始糖类含量30-80g,初始油类含量30-80g,酵母粉4-8g,尿素0.5-1g;用蒸馏水定容至3L,pH值4.0-4.5,将发酵罐培养基于121℃、15min灭菌再冷却至室温;然后按照体积比2-5%的接种量将液体培养基接入上述冷却的发酵罐培养基中,发酵温度30-34℃,溶氧控制在30-40%,发酵时间24h;
(4)发酵24-72h,每12h补加浓度为30-60g/L的油类;发酵过程中,补加浓度为30-60g/L的葡萄糖,控制葡萄糖浓度在5-10g/L;溶氧20-30%,pH值3.3-3.8;
(5)发酵72h结束后,用与发酵液等体积的有机溶剂乙酸乙脂/异丙醇,所述乙酸乙脂/异丙醇两者比例4:1,单位v/v,混合有机溶剂提取槐糖脂,并在70℃抽真空除去有机溶剂,得到槐糖脂产量为200-240g/L。
2.根据权利要求1所述的连续补料发酵生产槐糖酯的方法,其特征在于所述糖类选用葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、淀粉、菊糖其中一种。
3.根据权利要求1所述的连续补料发酵生产槐糖酯的方法,其特征在于所述油类选用玉米油、菜籽油、大豆油、橄榄油、蓖麻油、花生油其中一种。
CN201010185605A 2010-05-28 2010-05-28 连续补料发酵生产槐糖脂的方法 Pending CN101845469A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010185605A CN101845469A (zh) 2010-05-28 2010-05-28 连续补料发酵生产槐糖脂的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201010185605A CN101845469A (zh) 2010-05-28 2010-05-28 连续补料发酵生产槐糖脂的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101845469A true CN101845469A (zh) 2010-09-29

Family

ID=42770287

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201010185605A Pending CN101845469A (zh) 2010-05-28 2010-05-28 连续补料发酵生产槐糖脂的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101845469A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102492605A (zh) * 2011-11-30 2012-06-13 中海石油环保服务(天津)有限公司 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法
CN105671106A (zh) * 2016-02-16 2016-06-15 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法
CN107177643A (zh) * 2017-06-30 2017-09-19 广州美中生物科技有限公司 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法
CN113151020A (zh) * 2021-05-12 2021-07-23 南京工业大学 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法
CN113604523A (zh) * 2021-08-23 2021-11-05 华东理工大学 一种基于数据机理融合模型的高效发酵生产槐糖脂的方法

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102492605A (zh) * 2011-11-30 2012-06-13 中海石油环保服务(天津)有限公司 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法
CN102492605B (zh) * 2011-11-30 2014-08-20 中海石油环保服务(天津)有限公司 生物反应器及其连续生产槐糖脂的方法
CN105671106A (zh) * 2016-02-16 2016-06-15 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法
CN105671106B (zh) * 2016-02-16 2021-06-11 珀莱雅化妆品股份有限公司 一种采用橄榄油发酵法制备鞘糖脂的方法
CN107177643A (zh) * 2017-06-30 2017-09-19 广州美中生物科技有限公司 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法
CN107177643B (zh) * 2017-06-30 2021-07-30 广州美中生物科技有限公司 银耳渣料发酵产物、含有该发酵产物的护肤洗涤用品及其制备方法
CN113151020A (zh) * 2021-05-12 2021-07-23 南京工业大学 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法
CN113151020B (zh) * 2021-05-12 2023-10-20 南京工业大学 一种高产酸型槐糖脂的补料发酵方法
CN113604523A (zh) * 2021-08-23 2021-11-05 华东理工大学 一种基于数据机理融合模型的高效发酵生产槐糖脂的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106967775B (zh) 生物催化制备薯蓣皂苷元的方法及其所用菌剂
CN108823261A (zh) 一种超低分子量铁皮石斛多糖及其制备与应用
CN104013657A (zh) 一种西洋参药材提取皂苷后发酵提取方法
CN101589151A (zh) 乙醇或乳酸的制备方法
CN101845469A (zh) 连续补料发酵生产槐糖脂的方法
CN115039636B (zh) 一种栽培银耳的培养基及其制作方法
CN101914211A (zh) 一种从杜仲叶林萌生枝皮中提取杜仲胶的方法
CN102351580B (zh) 一种利用食品加工剩余物制备黑木耳营养液的方法
CN102851259B (zh) 抗氧化剂的制造方法
CN108294224A (zh) 一种利用植物乳杆菌发酵脱除大米中重金属镉的方法
CN103589759B (zh) 一种用废糖蜜和地沟油双碳源发酵生产槐糖脂的方法
CN103352016B (zh) 利用Alteromonas colwelliana A321发酵浒苔制备生物肥
CN102994430A (zh) 一株细菌纤维素产生菌株及其应用
CN103110118B (zh) 一种利用猴头菌固体发酵灰树花残渣制备膳食纤维的方法
CN102433288B (zh) 一种产鸟氨酸的菌株及用该菌株生物合成鸟氨酸的方法
CN103627513A (zh) 一种流加预处理固态发酵油料作物辅助冷榨提油的工艺
CN102329833A (zh) 用废糖蜜和废甘油发酵生产槐糖酯的方法
CN105420143A (zh) 一种东方醋杆菌及其生产黄芪多糖的方法
CN101481662B (zh) 一种链霉菌及其应用
CN102703558B (zh) 一种利用亚麻刺盘孢霉羟化去氢表雄酮的方法
CN101805760A (zh) 一种生产含有花生四烯酸的微生物油脂的方法
CN106636252A (zh) 干巴菌胞外多糖及其制备方法和应用
CN105112387A (zh) 一种脂肪酶的制备方法
CN103333872B (zh) 一种制备β-葡萄糖醛酸苷酶粗酶制剂的方法
CN102433289B (zh) 一株产瓜氨酸的菌株及用该菌株生物合成瓜氨酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20100929