CN101806724A - 一种简单、快速检测65%l-赖氨酸硫酸盐成品中l-赖氨酸含量的方法 - Google Patents

一种简单、快速检测65%l-赖氨酸硫酸盐成品中l-赖氨酸含量的方法 Download PDF

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本发明涉及饲料添加剂的检测方法，尤其是涉及一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：首先将65％L-赖氨酸硫酸盐成品溶解制成溶液，分别取1ml的样品溶液和1ml不同浓度的标准L-赖氨酸溶液加入到不同试管中，再在上述每个试管中分别加入1ml显色液，95℃以上水浴10min后立即冷却至室温，再在上述每个试管中加入8ml蒸馏水稀释，摇匀后用分光光度计测定吸光值，用标准L-赖氨酸溶液浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品吸光值换算样品中L-赖氨酸的含量；本发明提供的方法简便、快速、准确度高且所用费用较低。

Description

一种简单、快速检测65%L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法
技术领域
本发明涉及饲料添加剂的检测方法，尤其是涉及一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法。
背景技术
随着饲料添加行业快速发展，作为主要饲料添加剂的赖氨酸生产规模越来越大，在赖氨酸产品中有98％L-赖氨酸盐酸盐和65％L-赖氨酸硫酸盐等。由于65％L-赖氨酸硫酸盐具有成本低、节能且污染少等众多优点，目前已经成为饲料添加赖氨酸的一个重要方向。但是该产业发展的时间尚短，很多法规等还不是很完善，如：目前并没有国家标准作为成品检验的依据，国内各大厂家都施行企业标准。并且由于65％L-赖氨酸硫酸盐产品的特点，其L-赖氨酸含量不方便检测，经常造成质量投诉纠纷。
目前工业生产以及市场销售和检测部门都采用氨基酸分析仪来检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸的含量，但是氨基酸分析仪价格昂贵、检测费用高，造成普及率低，不适合工业生产中大批量检测样品；而且氨基酸分析仪检测样品耗时长，很难快速反馈检测结果，因此对工业生产的指导作用较差；另外，氨基酸分析仪误差值相对较高，一般相对误差值在4％左右，比较适合检测低含量氨基酸或多种氨基酸浓度比较接近的样品，但在检测高含量样品时，氨基酸分析仪所带来的仪器误差较大，造成最终检测结果误差值较大。
发明内容
本发明的目的主要是克服现有测定方法繁琐、费用高且准确率不高的缺点，提供一种简便、快速、准确度高且所用费用较低的检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法。
本发明通过如下方式实现：
一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：首先将65％L-赖氨酸硫酸盐成品颗粒溶解，分别取1ml溶解后样品溶液和1ml不同浓度的标准L-赖氨酸溶液加入到不同试管中，再分别加入1ml显色液。95℃以上水浴10min后冷却至室温，再分别加入8ml蒸馏水稀释，然后用分光光度计测定吸光值。用标准L-赖氨酸溶液浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品吸光值换算L-赖氨酸含量；
所述的65％L-赖氨酸硫酸盐成品溶解步骤为，将65％L-赖氨酸硫酸盐成品研磨后过大于或等于60目筛，取一定量研磨后样品，加入蒸馏水后加热超声溶解，定容后制备成样品溶液；
所述的超声波功率为300-500W，超声温度为50-70℃，超声时间为30min-60min；
所述的标准L-赖氨酸溶液浓度在0.1g/L-0.8g/L之间；
所述显色液为pH1.5的用0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液溶解成的质量体积比为1％茚三酮溶液。
本发明具有如下效果：
1)方法简单、独特：本发明提供的检测方法为首先将65％L-赖氨酸硫酸盐成品溶解制成溶液，分别取1ml的样品溶液和1ml不同浓度的标准L-赖氨酸溶液加入到不同试管中，再在上述每个试管中分别加入1ml显色液，95℃以上水浴10min后立即冷却至室温，再在上述每个试管中加入8ml蒸馏水稀释，摇匀后用分光光度计测定吸光值，用标准L-赖氨酸溶液浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品吸光值换算样品中L-赖氨酸的含量。
2)方法准确度高，误差值小：本发明提供的方法采用的显色液为pH1.5的用0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液溶解成的质量体积比为1％茚三酮溶液，茚三酮在高温下可与氨基酸反应形成络合物，该络合物浓度可通过分光光度计进行检测。本方法利用茚三酮在pH值为1.5左右时可专一性的与赖氨酸反应的特点，利用超声波仪高效溶解样品，溶解后样品和标准赖氨酸溶液分别与茚三酮溶液反应后用分光光度计进行比色。通过标准赖氨酸浓度与对应吸光值来计算样品中赖氨酸的含量。
3)测定方法快速：本发明提供的方法检测样品时间较短，每个样品检测时间在2.5小时左右，可快速反馈检测结果。而氨基酸分析仪在样品前处理、上机检测及数据分析通常需要40h左右。
4)该测定方法简单，操作步骤少，对化验员要求不高。该方法涉及到的步骤较简单，容易掌握，即使操作者进行该项工作的时间较短、学历水平不高，也可以较快掌握。
5)检测费用低，本方法所需设备、仪器等皆为实验室常备设备。试剂也为实验室常用的分析纯试剂，每个样品检测所消耗的试剂及仪器损耗费用在10元以内，而氨基酸分析仪每个样品检测费用在250元左右，因此本方法具有较大的成本优势。
6)结果准确度较高，本方法在检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品时绝对误差值在1％左右，而氨基酸分析仪检测该类样品时绝对误差值在1.5-2％。
7)所用仪器简单，本方法所用的仪器如超声波清洗仪、水浴锅和分光光度计皆为价格较低、实验室常备的仪器。而氨基酸分析仪价格昂贵，普及率较差，其价格一般在60万至120万不等。
8)方法稳定性好，通过本公司的大量实验及前期应用，该方法的稳定性好，检测差错率非常低。而氨基酸分析仪由于仪器精密、各种配件繁多，经常由于各种原因出现错样现象。
具体实施方式
实施例一：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过60目筛，称取过筛后样品0.25g，用200ml蒸馏水溶解，然后放入加热到55℃左右的超声波清洗仪中，500W超声30min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.15g/L、0.3g/L、0.45g/L、0.6g/L的L-赖氨酸标准溶液1ml以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，再分别加入显色液1ml，放入96℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在470nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
实施例二：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过80目筛，称取过筛后样品0.25g，用200ml蒸馏水溶解，然后放入加热到60℃左右的超声波清洗仪中，400W超声40min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.15g/L、0.25g/L、0.35g/L、0.45g/L的L-赖氨酸标准溶液1ml以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，再分别加入显色液1ml，放入98℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在478nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
实施例三：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过60目筛，称取过筛后样品0.25g，用200ml蒸馏水溶解，然后放入加热到55℃左右的超声波清洗仪中，500W超声30min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.2g/L、0.3g/L、0.4g/L、0.5g/L的L-赖氨酸标准溶液以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，再分别加入显色液1ml，放入96℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在490nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
实施例四：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过60目筛，称取过筛后样品0.25g，用250ml蒸馏水溶解，然后放入加热到60℃左右的超声波清洗仪中，500W超声30min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.12g/L、0.24g/L、0.36g/L、0.48g/L的L-赖氨酸标准溶液以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，再分别加入显色液1ml，放入96℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在458nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
实施例五：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过80目筛，称取过筛后样品0.25g，用250ml蒸馏水溶解，然后放入加热到60℃左右的超声波清洗仪中，300W超声60min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.10g/L、0.25g/L、0.40g/L、0.55g/L的L-赖氨酸标准溶液1ml以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，在分别加入显色液1ml，放入98℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在500nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
实施例六：一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，该方法包括如下步骤：称取具有代表性的样品10g，研磨后过60目筛，称取过筛后样品0.25g，用250ml蒸馏水溶解，然后放入加热到50℃左右的超声波清洗仪中，500W超声30min，超声结束后冷却定容至500ml。分别取0.2g/L、0.4g/L、0.6g/L、0.8g/L的L-赖氨酸标准溶液1ml以及定容后的样品溶液1ml加入到不同试管中，在分别加入显色液1ml，放入95℃水浴中10min，水浴后立即冷取至室温，分别加入8ml蒸馏水后在440nm下用分光光度计比色。利用标准L-赖氨酸溶液的浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，然后将样品吸光值带入计算样品溶液浓度，最终换算出样品含量。
上述显色液为pH1.5的用0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液溶解成的质量体积比为1％茚三酮溶液。

Claims (6)

1.一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：首先将65％L-赖氨酸硫酸盐成品溶解制成溶液，分别取1ml的样品溶液和1ml不同浓度的标准L-赖氨酸溶液加入到不同试管中，再在上述每个试管中分别加入1ml显色液，95℃以上水浴10min后立即冷却至室温，再在上述每个试管中加入8ml蒸馏水稀释，摇匀后用分光光度计测定吸光值，用标准L-赖氨酸溶液浓度和对应的吸光值绘制标准曲线，根据样品吸光值换算样品中L-赖氨酸的含量。
2.如权利要求1所述的一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：所述65％L-赖氨酸硫酸盐成品溶解成溶液的步骤为：将65％L-赖氨酸硫酸盐成品研磨后过大于或等于60目筛，称量约0.25g研磨后样品，加入200ml蒸馏水后加热超声溶解，定容后制备成样品溶液。
3.权利要求2所述的一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：所述超声溶解的超声波功率为300-500W，超声温度为50-70℃，超声时间为30min-60min。
4.如权利要求1所述的一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：所述选取的标准L-赖氨酸溶液浓度在0.1g/L-0.8g/L之间。
5.如权利要求1所述的一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：所述显色液为pH1.5的用0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液溶解成的质量体积比为1％质量体积比茚三酮溶液。
6.如权利要求1所述的一种简单、快速检测65％L-赖氨酸硫酸盐成品中L-赖氨酸含量的方法，其特征在于：所述分光光度计测定吸光值时，检测波长为440-500nm。
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