CN101805345A

CN101805345A - 一种从夏天无中提纯原阿片碱的方法

Info

Publication number: CN101805345A
Application number: CN200910232659A
Authority: CN
Inventors: 刘东锋; 张翼; 杨成东
Original assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2009-12-04
Filing date: 2009-12-04
Publication date: 2010-08-18

Abstract

本发明涉及一种操作简便、成本低的原阿片碱提取纯化方法，工艺以原阿片碱含量高的夏天无药材为原料，粉碎，乙醇回流提取2-3次，减压浓缩至低度醇加入乙酸助溶，复合超滤膜截留大分子杂质，再经混合树脂柱富集，梯度洗脱杂质，收集原阿片碱洗脱液氨水调节pH值结晶，分离粗结晶物，乙醇和乙醇氯仿分步重结晶。采用该法生产品，周期短、收率高。该工艺易放大和工业化。

Description

一种从夏天无中提纯原阿片碱的方法

技术领域：

本发明涉及一种从夏天无中提取纯化原阿片碱的方法，尤其是一种采用膜分离、混合树脂富集技术纯化原阿片碱的方法。

背景技术：

原阿片碱又称原鸦片碱，普罗托平，原托品碱，普鲁托品。

分子式：C₂₀H₁₉NO₅

分子量：353.36

分子结构：

原阿片碱为单斜棱晶(乙醇-氯仿)。熔点208℃。溶于15份氯仿、900份乙醇、1000份乙醚，微溶于乙酸乙酯、二硫化碳、苯、石油醚，几乎不溶于水。具有镇痛、解痉、止咳、平喘、改善微血管循环、抗血小板聚集，促进戊巴比妥钠的催眠作用，并有弱的杀菌和抗肿瘤作用。可用于治疗眼底充血及抗血栓等。

原阿片碱存在于存在于罂粟科植物罂粟(Papaver somniferum L.)的愈合组织，延胡索(Corydalis yanhusuoW.T.Wang)的块茎，白屈菜(Chelidonium，majus L.)的带花全草、伏生紫堇[Corydalis decumbens(Thunb.)Pers]的块茎等植物中。其中夏天无系伏生紫堇[Corydalisdecumbens(Thunb.)Pers]的块茎含量较高，《解放军药学报》第25卷第3期“HPLC法测定夏天无中原阿片碱延胡索乙素和巴马亭”文献报道夏天无药材中含原阿片碱高达0.48％。《药典》中也规定夏天无中原阿片碱含量不得低于0.3％，也是判定夏天无药材好坏的标准。目前天然产物原阿片碱多是从夏天无中提取纯化所得。

现有公开提取原阿片碱的方法，多是酸水、酸醇渗漉或乙醇回流提取，再多次碱沉酸沉，乙多次氯仿等有机试剂结晶。如中国专利200510024334.3(申请号)“从夏天无中提取原阿片碱的方法”和专利号200410042527.X(申请号)“一种从植物中提取原阿片碱及其药物制剂的制备应用”所公开的方法中，即采用所举方法。分离纯化的方法中也有采用大孔树脂吸附，如中国专利03118261.5(申请号)“夏天无总生物碱及其制备方法”公开了大孔树脂吸附纯化生物总碱的方法。膜分离技术应用纯化原阿片碱的方法也有公开，如《中草药》第36卷第9期2005“超滤膜纯化夏天无总碱的研究”文献公开了膜分离技术的应用，后序的纯化没有研究。现有公开的方法，多是毒性试剂应用较多和树脂专属性低。

发明内容：

发明人经多年树脂筛选试验和工艺优化试验，发明了一种提取纯化原阿片碱的方法。该方法能够减少有毒试剂的用量，提高产品收率，降低生产成本。

本发明是采用以下技术方案实现的：

一种从夏天无中提纯原阿片碱的方法，其特征在于包含以下步骤：

1.乙醇提取：将夏天无原料粉碎，加入85-95％乙醇回流提取，提取2～3次，滤过合并提取液体；

2.膜分离：将上述提取液减压浓缩至醇浓度30-40％加入乙酸，先通过微滤膜系统微滤，再通过超滤膜系统超滤，收集透过液；

3.混合树脂富集：上述透过液通过混合树脂柱饱和吸附，梯度溶液洗脱，收集原阿片碱洗脱液，加入洗脱液量的0.1～0.3％的浓氨水，放置结晶，得粗结晶；

4.结晶：将上述粗结晶在乙醇中回流饱和溶解，放置结晶，过滤结晶物用氯仿乙醇混合溶回流饱和溶解，放置结晶，过滤干燥即得产品。

所述乙醇提取条件：每次乙醇加入量为原料的5-8量，提取时间1-2小时。优选6、5、5倍量三次回流提取。

所述膜分离的加酸步骤为：浓缩液先缓慢加入其体积的0.1～0.3％的乙酸，充分搅拌。

所述超滤膜选用截留分子量3000-6000的管式复合超滤膜。

所述混合树脂为：AB-8大空树脂和110弱酸性阳离子树脂2～3∶1混合。优选3∶1组合。

所述树脂柱饱和吸附条件：树脂柱下柱液流速(升/小时)为柱体积量的1/2～1/3，流出液(高效液相检测)阿片碱浓度不超过0.01％。

所述混合树脂梯度洗脱为：先水洗中性，再用5-6倍柱体积量50-60％乙醇溶液洗脱杂质，最后用5-6倍柱体积量90-95％乙醇洗脱原阿片碱。

所述结晶条件为：乙醇浓度90-95％，氯仿乙醇混合比为1∶2～3。

综上所述，本发明存在以下优点：

1)提取液浓缩至低醇调酸，提高了膜分离的速度，减少产品在膜分离过程的损失。

2)膜分离的应用除去大量杂质，后序无需活性炭脱色，增加了树脂的吸附量。

3)混合树脂应用，提高了树脂的吸附量和选择性。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施例中原阿片碱的含量测定采用高效液相色谱法(参照中国药典2005版夏天无药材检测方法)，具体方法如下：

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-三乙胺醋酸溶液(取三乙胺8ml，冰醋酸30ml，加水稀释至1000ml)(18∶82)为流动相；检测波长为289nm。理论板数按原阿片碱峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取原阿片碱对照品10mg.置50ml量瓶中，加1％的盐酸溶液5ml使溶解，再加50％甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml，置25mI量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含原阿片碱40μg)。供试品配制参照对照品。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10-20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

实施例1：

第一步：提取。称取夏天无20千克(原阿片碱含量0.4％)粉碎20目，先加入120L85％的乙醇回流提取2小时，滤过，加入100L85％的乙醇，回流提取1小时，滤过，再加100L85％的乙醇，回流提取1小时；合并三次提取液得280L。

第二步：膜分离。减压浓缩提取液至醇浓度40％放出，得浓缩液80L，缓慢加入浓缩240ml乙酸，充分搅拌，滤过，加入微滤膜系统过滤，再通过分子截留量3000的复合超滤膜超滤，收集透过液。

第三步：混合树脂富集。透过液加入10LAB-8和110树脂3∶1混合树脂柱吸附，柱流速5L/小时。洗脱时先去离子水洗中性，再用60L50％乙醇溶液洗脱杂质，最后用50L95％乙醇洗脱原阿片碱，收集洗脱液45L，加入130ml浓氨水，放置结晶。

第四步：过滤粗结晶物，90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶。过滤结晶物，氯仿乙醇(混合比1∶2)混合溶剂回流饱和溶解，放置结晶，过滤得成品54克，含量98.3％(HPLC)。

实施例2：

第一步：提取。称取夏天无20千克(原阿片碱含量0.4％)粉碎40目，先加入160L90％的乙醇回流提取2小时，滤过，然后再加入120L90％的乙醇，回流提取1小时，合并提取液得240L。

第二步：膜分离。减压浓缩提取液至醇浓度30％放出，得浓缩液70L，缓慢加入浓缩140ml乙酸，充分搅拌，滤过，加入微滤膜系统过滤，再通过分子截留量3000的复合超滤膜超滤，收集透过液。

第三步：混合树脂富集。透过液加入10LAB-8和110树脂2∶1混合树脂柱吸附，柱流速5L/小时。洗脱时先去离子水洗中性，再用50L60％乙醇溶液洗脱杂质，最后用60L90％乙醇洗脱原阿片碱，收集洗脱液45L，加入90ml浓氨水，放置结晶。

第四步：过滤粗结晶物，95％乙醇回流饱和溶解，放置结晶。过滤结晶物，氯仿乙醇(混合比1∶3)混合溶剂回流饱和溶解，放置结晶，过滤得成品52克，含量98.5％(HPLC)。

实施例3：

第一步：提取。称取夏天无10千克(原阿片碱含量0.45％)粉碎20目，先加入60L90％的乙醇回流提取2小时，滤过，然后再加入50L90％的乙醇，回流提取1小时，滤过，再加50L90％的乙醇，回流提取1小时；合并三次提取液得140L。

第二步：膜分离。减压浓缩提取液至醇浓度30％放出，得浓缩液40L，缓慢加入浓缩40ml乙酸，充分搅拌，滤过，加入微滤膜系统过滤，再通过分子截留量6000的复合超滤膜超滤，收集透过液。

第三步：混合树脂富集。透过液加入5LAB-8和110树脂3∶1混合树脂柱吸附，柱流速5L/小时。洗脱时先去离子水洗中性，再用60L50％乙醇溶液洗脱杂质，最后用30L95％乙醇洗脱原阿片碱，收集洗脱液26L，加入26ml浓氨水，放置结晶。

第四步：过滤粗结晶物，95％乙醇回流饱和溶解，放置结晶。过滤结晶物，氯仿乙醇(混合比1∶2)混合溶剂回流饱和溶解，放置结晶，过滤得成品26克，含量98.1％(HPLC)。

实施例4：

第一步：提取。称取夏天无10千克(原阿片碱含量0.45％)粉碎40目，先加入80L95％的乙醇回流提取2小时，滤过，然后再加入80L95％的乙醇，回流提取1小时，合并提取液得140L。

第二步：膜分离。减压浓缩提取液至醇浓度30％放出，得浓缩液30L，缓慢加入浓缩120ml乙酸，充分搅拌，滤过，加入微滤膜系统过滤，再通过分子截留量6000的复合超滤膜超滤，收集透过液。

第三步：混合树脂富集。透过液加入5LAB-8和110树脂2∶1混合树脂柱吸附，柱流速2L/小时。洗脱时先去离子水洗中性，再用30L60％乙醇溶液洗脱杂质，最后用30L95％乙醇洗脱原阿片碱，收集洗脱液25L，加入50ml浓氨水，放置结晶。

第四步：过滤粗结晶物，90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶。过滤结晶物，氯仿乙醇(混合比1∶3)混合溶剂回流饱和溶解，放置结晶，过滤得成品27克，含量98.3％(HPLC)。

Claims

1.一种从夏天无中提纯原阿片碱的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)乙醇提取：将夏天无原料粉碎，加入85-95％乙醇回流提取，提取2～3次，滤过合并提取液体；

2)膜分离：将上述提取液减压浓缩至醇浓度30-40％加入乙酸，先通过微滤膜系统微滤，再通过超滤膜系统超滤，收集透过液；

3)混合树脂富集：上述透过液通过混合树脂柱饱和吸附，梯度溶液洗脱，收集原阿片碱洗脱液，加入洗脱液量的0.2～0.5％的浓氨水，放置结晶，得粗结晶；

4)结晶：将上述粗结晶在乙醇中回流饱和溶解，放置结晶，过滤结晶物用氯仿乙醇混合溶回流饱和溶解，放置结晶，过滤干燥即得产品。

2.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述乙醇提取条件：每次乙醇加入量为原料的5-8量，提取时间1-2小时。

3.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述膜分离的加酸步骤为：浓缩液先缓慢加入其体积的0.1～0.3％的乙酸，充分搅拌。

4.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述超滤膜选用截留分子量3000-6000的管式复合超滤膜。

5.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述混合树脂为：AB-8大空树脂和110弱酸性阳离子树脂2～3∶1混合。

6.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述树脂柱饱和吸附条件：树脂柱下柱液流速(升/小时)为柱体积量的1/2～1/3，流出液(高效液相检测)阿片碱浓度不超过0.01％。

7.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述混合树脂梯度洗脱为：先去离子水洗中性，再用5-6倍柱体积量50-60％乙醇溶液洗脱杂质，最后用5-6倍柱体积量90-95％乙醇洗脱原阿片碱。

8.如权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述结晶条件为：乙醇浓度90-95％，氯仿乙醇混合比为1∶2～3。