CN101804094B - 一种体外杀精子的药物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种体外杀精子的药物，由下述重量比的原料制成：桔梗皂苷D3-7毫克、防风提取物3-5毫克、桂枝提取物3-5毫克、补骨脂提取物1-3毫克和0.9％生理盐水130-170毫升，将桔梗皂苷D、防风提取物、桂枝提取物、补骨脂提取物置入容器内混合均匀，再将0.9％生理盐水130-170毫升置入容器内摇匀，制成药剂。本发明全部采用中药原料制成，能够快速实现体外杀灭精子的目的，并具有较好的抑菌杀菌作用，可使本发明药物制成乳剂、栓剂等剂型，用于阴道外用避孕的目的，也可制成缓释胶囊，放置在节育器内被携带进入人体，增加节育器的避孕效果，没有任何毒副作用。
Description
技术领域
本发明涉及药品，是一种体外杀精子的药物。
背景技术
目前，体外杀精子的药物主要是西药，效果较好的西药是壬苯醇醚，但是这种药物对人体有较大的刺激作用，特别是易被人体吸收后对肝脏产生较大的损害，长期使用，严重影响人体健康。虽然现有的节育器、避孕套等措施具有较好的避孕效果，但是，对于某些人群来说是不能使用的。因此，本技术领域技术人员长期以来一直在研究纯中药制剂，用于体外杀精，以达到避孕的同时，对人体无损害。申请人曾经在众多中药中选取了桔梗提取液做为杀精子的药物，实验证明它能在一分钟内杀灭精子。但是这种桔梗提取液包含了皂苷类与其它化合物，使用时，需要用量较多，对于用缓释胶囊置入节育器内携带时，带来较多不便。另外，桔梗提取液单独用于体外杀精子时缺少抗炎抗菌等效果。
发明内容
本发明的目的是，提供一种体外杀精子的药物，它具有较好的体外杀灭精子的作用，并同时具备抗炎、抗菌等效果，对人体无毒副作用。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：一种体外杀精子的药物，由下述重量比的原料制成：桔梗皂苷D 3-7毫克、防风提取物3-5毫克、桂枝提取物3-5毫克、补骨脂提取物1-3毫克和0.9％生理盐水130-170毫升；所述防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物；所述补骨脂提取物的提取方法是：取5克补骨脂中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉末1.18克，即为补骨脂提取物；所述桂枝提取物的提取方法是：取5克桂枝中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到桂枝提取液，低温冷冻干燥离心，得桂枝干燥粉末1.25克，即为桂枝提取物。
所述的一种体外杀精子的药物，由下述重量比的原料制成：桔梗皂苷D 5毫克、防风提取物4毫克、桂枝提取物4毫克、补骨脂提取物2毫克和0.9％生理盐水150毫升，。
所述药物的剂型是乳剂、栓剂或缓释胶囊。
所述的一种体外杀精子的药物的制备方法，按重量比取桔梗皂苷D 3-7毫克备用，用0.9％生理盐水提取防风，得到防风提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取桂枝，得到桂枝提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物1-3毫克备用，所述防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物；所述补骨脂提取物的提取方法是：取5克补骨脂中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉末1.18克，即为补骨脂提取物；所述桂枝提取物的提取方法是：取5克桂枝中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到桂枝提取液，低温冷冻干燥离心，得桂枝干燥粉末1.25克，即为桂枝提取物；然后将桔梗皂苷D、防风提取物、桂枝提取物及补骨脂提取物置入容器内混合均匀，再将0.9％生理盐水130-170毫升置入容器内摇匀，制成药剂。
本发明药物原料中的桔梗皂苷D用于杀灭精子，防风提取物用于抗炎抗菌，抗病原微生物，桂枝提取物用于抗菌、抗病毒、抗过敏，补骨脂提取物用于抗炎、抗菌、止血。上述各组份组合后，能够达到快速体外杀灭精子的目的，并具有较好的抗炎、抗菌、止血等作用，本发明药物可以制成乳剂、栓剂等剂型，达到阴道外用避孕目的，也可制成缓释胶囊，放置在节育器内被携带进入人体，增加节育器的避孕效果。本发明药物无任何毒副作用。
本发明药物经实验证明，具有快速杀灭精子的作用，比现有壬苯醇醚杀灭精子在不同浓度下均快，实验结果如下：
实验用精液标本选自25-35岁健康男性38例，禁欲3-5d，手法取精液于干净灭菌的25ml小烧杯内，精液量2-4ml，pH 7.0-8.0，液化时间＜30min，精子活动率70-92％，活动力a+b级50％-80％，精子密度＞60×106/ml，畸形精子率＜20％。
本实验规定的体外杀精子效果分级：从精子接触药物起至0.5分钟(即30秒钟)内全部失活为具有瞬间杀精子作用；0.5分钟-3分钟之间为具有较强杀精子作用，3分钟-5分钟为微弱杀精子作用。将人精液0.5ml，分别加入到0.5ml原液(10.0mg/mL)、稀释液1(1.0mg/mL)、稀释液2(0.1mg/mL)及稀释液3(0.01mg/mL)中，另取对照品壬苯醇醚(0.9％生理盐水稀释，壬苯醇醚浓度为分别配置成0.1％、0.01％及0.001％三种不同浓度)及0.9％生理盐水各0.5ml，加入同样0.5毫升精液(同一份精液)，即刻混匀，迅速取1小滴于载玻片上，倒置显微镜(37℃恒温)下观察精子活动情况，连续观察10个高倍视野，以精子全部失去活动能力为终点。从精子接触药物时起至全部失活的时间为杀精子时间。每次实验反复进行2-3次。
实验结果表明，稀释液1对人精子体外杀灭作用最短时间为3秒钟，最长时间为5秒钟；稀释液2对人精子体外杀灭作用最短时间为3秒钟，最长时间为6秒钟；稀释液3对人精子体外杀灭作用最短时间为48秒钟，最长时间为98秒钟。壬苯醇醚(NP-9)1毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为5秒钟，最长时间为12秒钟；0.1毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为38秒钟，最长时间为426秒钟；0.01毫克/毫升对人精子体外杀灭作用最短时间为19分钟，最长时间为35分钟。0.9％的生理盐水对精子活动无影响，与原精液活动率相同。
本发明药物、壬苯醇醚及生理盐水与人精液(38份)混合后精子失活时间(均数±标准差，秒)
上述稀释液1是指1毫升本发明药物，加0.9％生理盐水1毫升，混合均匀后配制成0.1％浓度的本发明药物，稀释液2是指1毫升本发明药物，加0.9％生理盐水10毫升，混合均匀后配制成0.01％浓度的本发明药物，稀释液3是指1毫升本发明药物，加0.9％生理盐水100毫升，混合均匀后配制成0.001％浓度的本发明药物。
本发明药物急性毒性和致突变实验：
实验方法：采用霍恩氏法研究灌胃给予小鼠本发明药物的半数致死量(LD50)。选用健康昆明种小鼠40只，雌雄各半，体重17～22g，随机分为4个受试药物剂量组：1.00，2.15，4.64，10.00克/公斤体重，灌胃给药，观察7天，记录中毒和死亡情况，计算得出LD50。采用鼠伤寒沙门菌回复突变试验(Ames试验)研究其致突变性，小鼠精子畸变试验和小鼠骨髓细胞微核试验研究其致畸变性。结果：小鼠口服本发明药物的LD50大于10.0克/公斤体重；提取物各剂量组小鼠灌胃后未见明显中毒症状，亦无死亡。Ames试验阴性、未发现对小鼠精子产生畸变作用、对小鼠骨髓细胞染色体未见损伤。在急性毒性、小鼠精子畸变和小鼠骨髓细胞微核试验中，从试验开始到结束，小鼠体重增重情况良好，说明本发明药物无明显急性毒性作用和致突变作用。
本发明药物体外抗病原微生物实验：本发明药物可增强体外杀菌抗病原微生物作用。稀释液1、2、3在体外均能抑制大肠杆菌、枯草杆菌及金黄色葡萄球菌，有效浓度分别为1mg/ml 0.1mg/ml及0.01mg/ml；对白色葡萄球菌、志贺氏痢疾杆菌、伤寒和副伤寒甲杆菌、肺炎球菌、产气杆菌、变形杆菌、炭疽杆菌、肠炎沙门氏菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌及霍乱弧菌等亦有抑制作用。
本发明药物的抗菌试验：
菌液的制备：取形态相同的菌落(标准菌株为：金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，肺炎克雷伯菌)5～10个接种于培养管内，36℃，4～6小时后纠正浓度，使其混浊度相当于0.5麦氏比浊管，约为1.5×108菌落形成单位(CFU)/ml，立即用于实验。
最低抑菌浓度(MIC)测定方法参照《全国临床检验操作规程》关于最低抑菌浓度的检测方法用胨水或琼脂将药物配成所需浓度。
琼脂平皿稀释法：选用直径为10cm的玻璃平皿，将本发明的药物按比例添加到培养基。用微量加样器接种，每个平皿接种7种菌，每个接种点接种20微升(μl)稀释好的菌液，形成一个直径为8～10微米的小液滴，最终接种菌量约每个接种点含107个菌。放置10分钟(min)，待菌液稍干后倒置放入37℃恒温培养箱培养24h，观察结果。以培养皿上菌落生长完全被抑制的最低药物浓度为本发明药物对该菌的MIC。
试管法：每组排列无菌试管13只，于第2～12号管内放相应培养基2ml，取制备好的药液分别加入2ml1号2号管，第2管混匀后取2ml加入第3号管，如此依次对倍稀释至第10号管，吸出2ml弃去。这样第1～10号管内含药液浓度倍量稀释，浓度分别为每毫升含药64，32，16，8，6，4，2，1，0.5，0.25mg，第11和第12号管内为无菌培养基，第13号管内加入1∶25的84消毒液2ml，作为阳性对照。除第11号管外，每管内接种菌液100微升，37℃恒温摇床震荡24h观察结果。肉眼未见细菌生长的最低药物浓度为本发明药物对该菌的MIC。
本发明药物对常见致病菌的最低抑制浓度如下表所示。表中可看出对金黄色葡萄球菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，肺炎克雷伯菌有很好的抑制作用。
本发明药物对常见致病菌的最低抑制浓度
试验动物：试验小鼠为8～10周龄性成熟昆明小鼠(购自北京试验动物中心)。雌鼠体重29.32g。60只清洁级小鼠腹腔注射标准菌株2×107CFU/ml 2ml，7天(d)后感染发生，试验组30只开始注射本发明药物20mg/kg，每天1次，连续3d，另30只注射生理盐水(无药物)作为对照。治疗后第7d，实验组30只小鼠均存活，其精神状态佳、活拨、毛发光泽、能自主进食、无畏光流泪等现象。治愈率为100％。30只对照组仅有2只存活，28只因感染死亡，死亡率为93.3％。
本发明药物解脲脲原体抑制实验
解脲脲原体液体培养基按照Roberson等(Roberson JA，Stcmke GW.Expandedserotyping scheme for Ureaplasma urealytleum strains isolated from humansf.JClin Mierobiol，1982；15：812.)方法进行。方法配制。1∶1牛心消化液、10％新鲜酵母液、20％新生小牛血清、0.002％酚红、青霉素20000单位/升。解脲脲原体培养基加0.1％尿素，pH调至6.0。人型支原体培养基加0.1％精氨酸，pH调至6.5。支原体株30株。解脲脲原体(UU)和30株人型支原体(MH)临床株为泌尿生殖道感染患者标本中分离获得，经菌落形态、底物分解、pH值、生长速度初步鉴定为，液体传代3次后，-70℃短期保存备用。实验菌液：保存的备用菌液，室温下融化，用解脲脲原体液体培养基或人型支原体液体培养基按1∶100稀释，37℃培养24～48h后达106颜色变化单位/0.1ml作为接种物。实验方法采用液体培养基稀释法。加培养基在96孔(8×12)聚苯乙烯板上，用微量加样器向每一孔内均加入100微升培养基。往第一孔内加入配制好的本发明药物100微升，充分混匀后取100微升加入第二孔，再吹打混匀吸出100微升加入第三孔，依次类推，直至第十一孔，充分混匀后，弃去100微升。由此将药液倍比稀释至10～20微克/ml。第十二孔不加药物作为对照。加菌液用支原体培养基按1∶100稀释UU与MH培养物，混匀取100微升加入每一个孔内。将加好的96孔板盖上板盖，轻摇混匀，置于湿盒内，37℃培养箱孵育。根据培养基颜色变化判断结果：培养基由黄色变为红色表明有支原体生长。24h内观察UU生长变化，如加药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对UU无抑制作用，24h仍不出现颜色变化为有效抑制UU生长的药物浓度；24～48h内观察MH生长变化，如加药孔出现与对照孔相同的颜色变化，表示所加药物的对应浓度对MH无抑制作用，48h仍不出现颜色变化为有效抑制MH生长的药物浓度。加药组以不出现颜色变化的最小浓度为最小有效抑制支原体生长的药物浓度(MIC)。实验采用UU1，UU2，UU3，UU4和MH标准株作参照。抗支原体效位实验结果表明，本发明药物对解脲脲原体的MIC50分别为1.024mg/ml，0.512mg/ml，0.512mg/ml和0.256mg/ml；对人型支原体的MIC50分别为1.024mg/ml，0.512mg/ml，0.512mg/ml及0.256mg/ml。
本发明药物临床试验218例应用栓剂避孕，成功率达100％，无1例意外妊娠。
具体实施方式
本发明的一种体外杀精子的药物，包括下述重量比的原料，桔梗皂苷D 3-7毫克、防风提取物3-5毫克、桂枝提取物3-5毫克、补骨脂提取物1-3毫克和0.9％生理盐水130-170毫升。
本发明药物由下述重量比的原料制成可有多种组合：
1、桔梗皂苷D 5毫克、防风提取物4毫克、桂枝提取物4毫克、补骨脂提取物2毫克和0.9％生理盐水150毫升。
2、桔梗皂苷D 3毫克、防风提取物3毫克、桂枝提取物3毫克、补骨脂提取物1毫克和0.9％生理盐水130毫升。
3、桔梗皂苷D7毫克、防风提取物5毫克、桂枝提取物5毫克、补骨脂提取物3毫克和0.9％生理盐水170毫升。
本发明所述的一种体外杀精子的药物的制备方法，按重量比取桔梗皂苷D 3-7毫克备用，用0.9％生理盐水提取防风，得到防风提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取桂枝，得到桂枝提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物1-3毫克备用，然后将桔梗皂苷D、防风提取物、桂枝提取物、补骨脂提取物置入容器内混合均匀，再将0.9％生理盐水130-170毫升置入容器内摇匀，制成药剂。
本发明所述的药物剂型是乳剂、栓剂或缓释胶囊。
本发明药物所述的中药原料防风、桂枝及补骨脂的提取方法均采用0.9％生理盐水提取方法，例如：防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物。
补骨脂提取物的提取方法是：取5克补骨脂中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉末1.18克，即为补骨脂提取物。
桂枝提取物的提取方法是：取5克桂枝中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到桂枝提取液，低温冷冻干燥离心，得桂枝干燥粉末1.25克，即为桂枝提取物。
Claims (4)
1.一种体外杀精子的药物，其特征在于：由下述重量比的原料制成：桔梗皂苷D 3-7毫克、防风提取物3-5毫克、桂枝提取物3-5毫克、补骨脂提取物1-3毫克和0.9％生理盐水130-170毫升；所述防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物；所述补骨脂提取物的提取方法是：取5克补骨脂中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉末1.18克，即为补骨脂提取物；所述桂枝提取物的提取方法是：取5克桂枝中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到桂枝提取液，低温冷冻干燥离心，得桂枝干燥粉末1.25克，即为桂枝提取物。
2.根据权利要求1所述的一种体外杀精子的药物，其特征在于：由下述重量比的原料制成：桔梗皂苷D 5毫克、防风提取物4毫克、桂枝提取物4毫克、补骨脂提取物2毫克和0.9％生理盐水150毫升。
3.根据权利要求1所述的一种体外杀精子的药物，其特征在于：所述药物的剂型是乳剂、栓剂或缓释胶囊。
4.权利要求1所述的一种体外杀精子的药物的制备方法，其特征在于：按重量比取桔梗皂苷D 3-7毫克备用，用0.9％生理盐水提取防风，得到防风提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取桂枝，得到桂枝提取物3-5毫克备用，用0.9％生理盐水提取补骨脂，得到补骨脂提取物1-3毫克备用，所述防风提取物的提取方法是，取5克防风中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到防风提取液，低温冷冻干燥离心，得防风干燥粉末1.12克，即为防风提取物；所述补骨脂提取物的提取方法是：取5克补骨脂中药原料，加0.9％生理盐水50毫 升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到补骨脂提取液，低温冷冻干燥离心，得补骨脂干燥粉末1.18克，即为补骨脂提取物；所述桂枝提取物的提取方法是：取5克桂枝中药原料，加0.9％生理盐水50毫升，在100℃加热60分钟，过滤纸过滤得到桂枝提取液，低温冷冻干燥离心，得桂枝干燥粉末1.25克，即为桂枝提取物；然后将桔梗皂苷D、防风提取物、桂枝提取物及补骨脂提取物置入容器内混合均匀，再将0.9％生理盐水130-170毫升置入容器内摇匀，制成药剂。
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110727 Termination date: 20140319 |