CN101788527B - 用于单细胞凝胶电泳试验的成套装置 - Google Patents
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Abstract
本发明公开的单细胞凝胶电泳试验的成套装置包括盒体、盒盖，盒体中有网格状支架，支架的每个网格中放置玻璃载玻片，玻璃载玻片由水平底板、垂直于底板的两个侧板和分别设在两个侧板上端平行于底板且向外延的平板构成，盒盖上设由与盒体中支架网格相对应的进样孔，进样孔封有供进样枪头穿透的隔垫。该装置集单细胞凝胶电泳实验的样品制备和保存于一体，使用方便，凝胶不易脱落，可实现样品批量化制备，加快样品制备速度，提高成功率，从而确保单细胞凝胶电泳实验的高效性与准确性。
Description
技术领域
本发明涉及单细胞凝胶电泳实验装置，适用于单细胞凝胶电泳实验的样品制备及保存。
背景技术
单细胞凝胶电泳技术(single cell gel electrophoresis，SCGE)，是一种80年代末发展起来的在细胞水平上快速检验真核细胞DNA的损伤与修复的新技术。在诱变剂的作用下，细胞的DNA受到损伤，将分离出的细胞与低熔点琼脂糖混合，铺于载玻片上电泳，断裂的DNA会在电场力的作用下从核内移出。荧光染料染色后，在荧光显微镜下，可观察到受损细胞核的彗星状图像——明亮的头部为细胞核与一系列的DNA断片组成的彗尾，尾巴的长度和荧光强度与诱变剂导致的DNA断裂数成正比，未受损细胞只有不动的细胞核(彗核)而无彗尾。通过对彗星图像进行测量与分析即可判断细胞DNA的损伤程度，广泛应用于毒理学、生物学、医学、环境生物监测等领域。
单细胞凝胶电泳实验的基本步骤包括：(1)制胶；(2)裂解；(3)解旋与电泳；(4)中和洗涤；(5)荧光染色。制备好的玻片样品即可利用荧光显微镜拍照分析，从而对细胞DNA损伤程度进行进行评价。长期以来，单细胞凝胶电泳样品制备过程中制胶工艺比较复杂，对操作环境的避光要求高，操作不慎会导致样品DNA损伤；每批次处理样品数量少且制得的胶体易在后续过程中脱落，实验效率低，平行性差；制备过程中有毒试剂使用量较大，成本高，同时对环境存在污染；另外，制备后样品保存环境要求较高，需避光、保湿条件，同时要易于查找。以上几点不足限制了单细胞凝胶电泳技术的进一步推广应用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有样品制备过程中存在的不足，提供一种快速、高效、操作简单、集单细胞凝胶电泳实验的样品制备和保存于一体的单细胞凝胶电泳试验的成套装置。
本发明的单细胞凝胶电泳试验的成套装置，包括盒体、盒盖，盒体中有网格状支架，支架的每个网格中放置玻璃载玻片，玻璃载玻片由水平底板、垂直于底板的两个侧板和分别设在两个侧板上端平行于底板且向外延的平板构成，盒盖上设由与盒体中支架网格相对应的进样孔，进样孔封有供进样枪头穿透的隔垫。
本发明的的成套装置可用于单细胞凝胶电泳实验中样品制胶、细胞裂解、解旋与电泳、中和洗涤以及荧光染色。使用方法如下：
(1)制胶：关闭盒盖。将吸取有1％常熔点琼脂糖凝胶的进样枪头穿透盒盖上隔垫，快速滴加在载玻片上，左右摇晃盒体，使常熔点琼脂糖在载玻片上均匀铺开，放置于室温下固化，得到铺有第一层琼脂糖凝胶的玻片；再将含有待测细胞的培养液与0.7％低熔点琼脂糖凝胶在37℃温度下预热并混匀，滴加在所述铺有第一层琼脂糖凝胶的玻片上，左右摇晃盒体，使低熔点琼脂糖在载玻片上均匀铺开，并置于4℃固化，得到铺有两层琼脂糖凝胶的玻片。
(2)细胞裂解：载玻片上加入1mL 4℃细胞裂解液，浸没琼脂糖凝胶，60分钟后得到细胞裂解后的玻片。
(3)解旋与电泳：将细胞裂解后的载玻片连同支架一起从盒体中提出，用电泳液冲洗，然后置于装有预冷电泳液的电解槽中静置20分钟，再进行电泳。
(4)中和洗涤：将电泳后的载玻片连同支架一起放入盒体中，载玻片中加入1mL Tris缓冲液(0.4M，pH＝7.5)浸洗。浸洗完成后取出，蒸馏水反复冲洗后，放回盒体，载玻片中加入1mL无水乙醇脱水。
(5)荧光染色：在载玻片中加入0.5mL EB染料染色。
制备好后的单细胞凝胶电泳样品放置于盒体中，盖上盒盖，密封、避光、冷藏保存。
本发明有如下优点：
1、高效性：可同时对大量样品进行处理，提高了样品制备的效率。
2、稳定性：制得的琼脂糖凝胶较薄，与载玻片贴合紧密，不易脱落，且琼脂糖凝胶中细胞分散均匀，样品间平行性好。
3、避光性：样品均置于盒体中避光制备，避免了紫外线对细胞的额外损伤。
4、经济环保：使用本发明成套装置可节约大量试剂，节省成本，减少有毒试剂排放，降低对环境的危害。
5、样品保存：本发明成套装置集单细胞凝胶电泳实验的样品制备和保存于一体，可有效保存制备后的样品，避免保存过程中环境因素给样品带来损伤。
附图说明
图1是单细胞凝胶电泳试验的成套装置纵向局部剖视图；
图2是单细胞凝胶电泳试验的成套装置俯视局部剖视图。
具体实施方式
下面结合附图和实例对本发明进一步详细说明。
参照图1、图2，用于单细胞凝胶电泳试验的成套装置，包括盒体1、盒盖2，盒体1中有网格状支架3，支架3的每个网格中放置玻璃载玻片4，玻璃载玻片4由水平底板、垂直于底板的两个侧板和分别设在两个侧板上端平行于底板且向外延的平板构成，这样玻璃载玻片利用外延的平板支承在支架的网格中，盒盖2上设由与盒体1中网格相对应的进样孔5，进样孔封有供进样枪头7穿透的隔垫6。
Claims (1)
1. 用于单细胞凝胶电泳试验的成套装置，其特征是包括盒体（1）、盒盖（2），盒体中有网格状支架（3），支架的每个网格中放置玻璃载玻片（4），玻璃载玻片（4）由水平底板、垂直于底板的两个侧板和分别设在两个侧板上端平行于底板且向外延的平板构成，盒盖（2）上设有与盒体（1）中支架网格相对应的进样孔（5），进样孔封有供进样枪头穿透的隔垫（6）。
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