CN101732695B - 一种脑蛋白水解物与马来酸的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种脑蛋白水解物与马来酸的组合物及其制备方法，还提供了该药物组合物分散片制剂的制备方法。本发明药物组合物为一种大脑所特有的肽能神经营养药物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的分化。本发明药物组合物可通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体，可用于制备改善失眠、头痛、记忆力下降、烦躁等症状，促进急性脑梗塞和急性脑外伤康复的治疗脑功能障碍的药物。

Description

一种脑蛋白水解物与马来酸的组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种由脑蛋白水解物和马来酸制成的药物组合物及其制备方法，以及该组合物在制备用于治疗脑功能障碍的药物中的用途。

背景技术

脑功能障碍包括脑组织缺血缺氧损伤，急慢性脑血管病、脑外伤、各种中毒性脑病等各种原因引起的脑神经功能障碍及记忆力减退，先天性脑发育不全，儿童智能发育迟缓，老年性痴呆等。脑组织对缺血、缺氧非常敏感。随着社会老年化趋势和人均寿命的延长，缺氧缺血性脑血管疾病的发病率明显上升，严重危害人类健康，给社会和家庭带来沉重负担。

脑蛋白水解物是从哺乳动物脑组织中提取的各种特异性氨基酸及小分子肽复合物，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞，使其免受各种缺血、低氧和神经毒素的损害，易通过血-脑脊液屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗低氧能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸环化酶和催化其他激素系统，提供神经递质肽类激素及辅酶前体，具有促进神经纤维生长的类神经生长因子功能，改善病变区脑细胞功能，是一种治疗脑神经功能障碍的药物。

专利CN200510103508将哺乳动物脑组织提取物直接制成脑蛋白水解物分散片，脑蛋白水解物化学性质不稳定，里面的有效成分很容易变质，不易长期的存放，直接制成分散片，给药品生产、储藏和运输带来了极大的不便，脑蛋白水解物要在pH为4-5比较稳定，所以要保持其在这个pH值下才容易保存。

同时作为一个作用于脑部的药物，血-脑屏障的透过性是药物活性的重要因素，现有脑蛋白水解物的脑靶向性并不理想，到达脑部的药量有限，从而影响了其药效。

马来酸能够满足脑蛋白水解稳定性存在的pH要求，同时，我们研究表明脑蛋白水解物和马来酸组合物有很好的脑靶向性，进而增加了脑蛋白水解物通过血-脑屏障的效率和通过速度，达到了增加脑蛋白水解物药效的结果。

发明内容

本发明提供一种脑蛋白水解物和马来酸制成的药物组合物，其化学稳定性较脑蛋白水解物要好，提高了用药稳定性。同时该组合物也比脑蛋白水解物单独制成制剂的作用效果更好。

本发明的技术方案如下：

一种含有脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，脑蛋白水解物和马来酸的重量份数比为：1∶0.01～10。

所述的脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，脑蛋白水解物和马来酸的重量份数比为1∶0.05～5。

所述的脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，脑蛋白水解物和马来酸的重量份数比为1∶0.1。

所述脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，所述的脑蛋白水解物和马来酸组合物为分散片。

所述的一种脑蛋白水解物和马来酸组合物的分散片，其特征在于，其辅料选自微晶纤维素、磷酸氢钙、羧甲淀粉钠、交联聚维酮XL-10、低取代轻丙基纤维素微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉或甜菊素。

所述的一种脑蛋白水解物和马来酸组合物的分散片，其特征在于，所述的辅料选自微晶纤维素、羧甲淀粉钠、微粉硅胶或硬脂酸镁。

所述的一种脑蛋白水解物和马来酸组合物的分散片，其特征在于，所述的脑蛋白水解物组合物的分散片的制备方法为

(1)将处方量的脑蛋白水解物组合物及辅料过80目筛混合；

(2)在所配好的混合物于沸腾制粒机中，充分混匀，向其中喷入50％的乙醇适量制粒，并整粒；

(3)将得到的药物颗粒根据含量检测结果计算所压的片重，选择相应的片冲后进行压片，包装得成品。

所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物在制备治疗脑功能障碍的药物中的应用。

本发明脑蛋白水解物和马来酸组合物，主要用于制备改善脑功能的药物。药理药效研究表明，本发明药物组合物对缺血再灌注损伤小鼠学习记忆功能有显著的改善作用；可显著减轻新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠的脑水肿和神经细胞变性，显著降低凋亡细胞的比例，对缺氧缺血性脑损伤具有显著的保护作用；可显著改善D-半乳糖诱导的脑老化小鼠的学习记忆能力，显著提高脑组织中SOD的活性，显著降低MDA的含量，具有保护脑组织细胞免受自由基伤害的作用；可显著延长小鼠的存活时间，具有提高小鼠的常压耐缺氧能力的作用。提示，本发明药物组合物在防治HIE，提高老年性痴呆、血管性痴呆患者的记忆学习能力，保护脑缺氧性和缺血性损伤等方面将有显著作用。

本发明脑蛋白水解物和马来酸组合物，药物组分的配比是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分配比都具有较好疗效。

本发明脑蛋白水解物和马来酸组合物的制剂可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的辅料。所述的辅料包括药学领域常规的渗透压调节剂、pH值调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、助悬剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。

本发明脑蛋白水解物和马来酸组合物在制成分散片时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。填充剂包括淀粉、糖粉、磷酸钙、硫酸钙二水物、糊精、微晶纤维素、乳糖、预胶化淀粉、甘露醇等；粘合剂包括羧甲基纤维素钠、PVP-K30、羟丙基纤维素、淀粉浆、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲纤维素、胶化淀粉等；崩解剂包括干淀粉、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素等；润滑剂包括硬脂酸镁、滑石粉、十二烷基硫酸钠、微粉硅胶等。

本发明药物组合物，具有下列优点：

(1)提供了一种新的改善脑功能的脑蛋白水解物和马来酸组合物，满足临床需要。

(2)对本发明药物组合物中药物组份的配比进行了大量摸索研究，通过不同配比制成的片剂、注射液对缺血再灌注损伤小鼠学习记忆功能的研究和新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的保护作用的研究，筛选出具有显著疗效的重量配比。

(3)药理药效研究表明，本发明药物组合物对缺血再灌注损伤小鼠学习记忆功能有显著的改善作用；能显著改善D-半乳糖拟衰老小鼠的学习记忆能力，提高脑组织中SOD的活性，降低MDA的含量；能显著提高血管性痴呆大鼠的学习记忆能力，降低Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数，延长一次性被动回避试验的步入潜伏期；能显著提高小鼠的常压耐缺氧能力，延长小鼠的存活时间，并比单独应用脑蛋白水解物制剂的药效好。

(4)对本发明药物组合物制成的制剂的稳定性研究表明，产品质量稳定，并比单独脑蛋白水解物制剂保存更长时间，保证了临床用药安全。

以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物组合物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学试验和稳定性试验。本发明药物组合物具有下列有益效果，但不应将此理解为本发明药物组合物仅具有下列有益效果。以下实验例中用NM代替脑蛋白水解物和马来酸制成的药物组合物。

实验例1本发明药物组合物对缺血再灌注脑损伤小鼠学习记忆功能的作用

受试动物：健康5～6周龄雄性小鼠，110只，体重18～22g，随机分为11组，每组10只。

供试品：生理盐水：市购。

脑蛋白水解物分散片：自制，360mg。

NM分散片：自制，见表1-1。

实验方法：采用双侧颈总动脉夹闭-缺血-再灌注术造成缺血再灌注脑损伤小鼠模型：用10％乌拉坦(1g/kg)腹腔麻醉小鼠后，仰面固定于手术台上，以75％酒精消毒颈部皮肤，行颈部正中切口，剥离下颌腺及双侧胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌与胸骨乳突肌，暴露颈总动脉，钝性分离双侧颈总动脉及伴行神经，用动脉夹同时夹闭双侧颈总动脉20min后，松开动脉夹恢复血流20min，如此重复缺血再灌注3次，最后恢复血供，缝合皮肤。假手术组只分离双侧颈总动脉，不行缺血再灌注术。正常对照组不行手术。正常对照组、假手术组、模型组均予蒸馏水(0.5mL/d)，各给药组按表1-1灌胃给药，每天3次，手术前后各灌胃7d，共14d。全部动物于手术前1d进行学习记忆训练，术后第6d重复训练1次，第7d进行学习记忆功能测定。

学习记忆训练：手术前1天连续训练2次，每次2min，两次间隔1h。以第2次测试结果作为术前学习记忆能力。术后第6d，重复训练1次。若小鼠2min内尚未找到站台，即将小鼠抓放在站台上并使其停留20s，以促进其学习。

小鼠在水池中的全部活动可在监视屏中看到，利用计算机软件对其活动进行全程跟踪，并显示整个活动轨迹。当设定的训练时间已到或小鼠爬上站台，计算机停止跟踪，记录游泳轨迹并自动计算出找到站台所需要的时间，即潜伏期。以此表示小鼠的学习记忆能力。水池内加入碳素墨水，水面高出站台0.5cm，水温控制在(22±0.5)℃。实验在暗室内进行，水池两侧(距水池2m处)各有1个15w的台灯照明。

表1-1缺血再灌注手术前后本发明药物组合物对小鼠登台潜伏期的影响(X±S，n＝10)

注：与假手术组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^**p＜0.01；与脑蛋白水解物片组相比较：^ap＜0.05。

实验结果及结论：术前各组小鼠潜伏期无显著性差异(p＞0.05)；术后第7天正常对照组与假手术组的潜伏期无显著性差异(p＞0.05)；模型组潜伏期延长，与假手术组比较有显著性差异(p＜0.01)；各给药组潜伏期缩短，与模型组比较有显著性差异(p＜0.01)，本发明药物组合物对缺血再灌注损伤小鼠学习记忆功能有显著的改善作用。并且，相同给药剂量下，脑蛋白水解物与马来酸重量配比在1∶0.1～1的范围内的效果均明显(p＜0.05)的优于单独脑蛋白水解物分散片。

实验例2本发明药物组合物对血管性痴呆(VD)大鼠的作用

受试动物：健康大鼠，体重180～200g，雌雄兼用。

供试品：生理盐水：市购。

脑蛋白水解物分散片：自制，360mg。

脑蛋白水解物组合物分散片：自制，(含脑蛋白水解物250mg、马来酸25mg)。

实验方法：VD模型大鼠以10％水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉，伏卧固定于立体定向仪，行背侧颈正中切口，暴露第一颈椎横突翼小孔，用直径0.5mm的电凝针烧灼双侧翼小孔内的椎动脉，造成永久性闭塞，再仰卧固定，行腹侧颈正中切口，分离双侧颈总动脉，4号丝线穿线备用。24h后乙醚麻醉，用微动脉夹夹闭双侧颈总动脉5min，共夹闭3次，每次间隔1h。局部伤口以庆大霉素处理，然后缝合，常规饲养观察。假手术组处理步骤同上，但不进行椎动脉烧灼和颈总动脉夹闭。术后5天，造模大鼠进行避暗实验，记录5min钟内错误次数，超过5次者，提示存在学习与记忆不良等智能障碍，纳入观察对象，对未出现学习与记忆不良的动物，则予以剔除。选取的造模成功的大鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别为模型组和各给药组。假手术组和模型组灌胃给予生理盐水20mL/kg，各给药组大鼠按表1-4灌胃给药，每天1次，连续4周。进行大鼠Y-型迷宫试验，计数大鼠Y-型迷宫达到学会标准的训练次数。进行一次性被动回避试验：将一盏40w白炽灯悬于踏板上方40cm处，将大鼠放在踏板上尾对门洞记录其进入暗箱前在踏板上停留时间，即步入潜伏期，实验在连续3天内完成。

表1-2本发明药物组合物对VD大鼠的影响(X±S，n＝10)

注：与假手术组相比较：^##p＜0.01；与模型组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01；与脑蛋白水解物分散片组相比较：^ap＜0.05。

实验结果：见表1-2。与假手术组相比较，模型组大鼠Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数显著升高(p＜0.01)，一次性被动回避试验的步入潜伏期极显著缩短(p＜0.01)。与模型组相比较，脑蛋白水解物分散片均显著降低VD大鼠Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数(p＜0.05)，显著延长一次性被动回避试验的步入潜伏期(p＜0.05)；各剂量NM分散片组均显著降低VD大鼠Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数(p＜0.05)，极显著延长一次性被动回避试验的步入潜伏期(p＜0.01)，高剂量组与假手术组无显著差别；与单独脑蛋白水解物分散片组比较，中高剂量的NM分散片组均显著降低VD大鼠Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数(p＜0.05)，显著延长一次性被动回避试验的步入潜伏期(p＜0.05)。

结论：实验结果表明，本发明药物组合物可显著降低VD大鼠Y-型迷宫试验达到学会标准的训练次数，显著延长一次性被动回避试验的步入潜伏期，具有保护脑缺血损伤的作用；并且，效果与给药剂量相关，高剂量组的效果最好。中高剂量的NM分散片的效果均优于脑蛋白水解物分散片单独使用的效果。提示，脑蛋白水解物组合物与脑蛋白水解物单独分散片比较，具有显著保护脑缺血损伤的作用，在提高血管性痴呆患者的学习记忆能力方面将有显著作用。

实验例3本发明药物组合物对小鼠常压耐缺氧的影响

受试动物：健康小鼠，50只，体重20～25g，雌雄兼用，随机分为5组，每组10只。

供试品：生理盐水：市购。脑蛋白水解物分散片：自制，360mg。脑蛋白水解物组合物分散片：自制，(含脑蛋白水解物250mg、马来酸25mg)。

实验方法：小鼠随机分为5组，每组10只，分别为对照组和各给药组。对照组灌胃给氯化钠注射液20mL/kg，各给药组按表1-3灌胃给药，每天1次，连续7天。末次给药1h后，分别置于经容量标定125mL的广口瓶中，瓶内置10g钠石灰以吸收CO₂和水分，瓶盖涂以凡士林密封，记录小鼠的死亡时间。

表1-3本发明药物组合物对小鼠常压耐缺氧的作用(X±S，n＝10)

注：与对照组相比较：^*p＜0.05，^**p＜0.01；与脑蛋白水解物分散片组相比较：^ap＜0.05。

实验结果：见表1-3。与对照组相比较，脑蛋白水解物分散物组显著延长小鼠的存活时间(p＜0.05)，NM分散片各剂量组可显著延长小鼠的存活时间(p＜0.05，p＜0.01)。与单独脑蛋白水解物分散片组相比较，NM分散片的中高剂量组均可显著延长小鼠的存活时间(p＜0.05)。

结论：实验结果表明，本发明药物组合物可显著延长小鼠的存活时间，具有提高小鼠的常压耐缺氧能力的作用；并且，效果与给药剂量相关，高剂量组的效果最好。中高剂量的NM注射液的效果均优于脑蛋白水解物分散片单独给药的效果。提示，脑蛋白水解物组合物与脑蛋白水解物单独分散片比较，具有显著保护脑缺氧损伤的作用，在治疗脑缺氧性损伤方面将有显著作用。

实验例4NM分散片稳定性试验

供试品：脑蛋白水解物分散片：自制，360mg(含脑蛋白水解物250mg)。

NM分散片：自制，275mg(含脑蛋白水解物250mg、马来酸25mg)。

长期试验：置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月。分别于第3个月、6个月、12个月，比较外观后，测量50片NM分散片中各个氨基酸的含量与50脑蛋白水解物分散片比较。结果如表1-4所示

表1-4NM分散片稳定性试验

温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置12个月，与3、6、12个月分别测量50片NM分散片和50片脑蛋白水解物分散片中各个氨基酸的含量，有结果可见NM分散片各个氨基酸和脑蛋白水解物分散片中各个氨基酸的含量均有所降低，但NM分散片中各个氨基酸的含量减少的速度与幅度都小于脑蛋白水解物分散片。

结论：上述考察结果表明，NM分散片中各个氨基酸的含量减少的速度与幅度都小于脑蛋白水解物分散片，这就可以说明NM分散片比单独蛋白水解物分散片更加稳定，更适合长期储存，更适应于工业大生产。

具体实施方式

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中分散片的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。

实施例1NM分散片的制备

1、处方：

6.5mg(按氨基氮计算)：14.4mg(按总氮计算)规格

蛋白水解物        148.0g

马来酸            14.8g

微晶纤维素        116.0g

羧甲淀粉钠        30.0g

50％乙醇          适量

硬脂酸镁          3.0g

微粉硅胶          3.0g

共制备            1000片

13mg(按氨基氮计算)：28.8mg(按总氮计算)规格

蛋白水解物          296.0g

马来酸              29.6g

微晶纤维素          232.0g

羧甲淀粉钠          60.0g

50％乙醇            适量

硬脂酸镁            6.0g

微粉硅胶            6.0g

共制备              1000片

2、具体步骤：

(1)取脑蛋白水解物组合物、马来酸、羧甲淀粉钠、微晶纤维素过80目筛备用；

(2)取处方量过80目筛的脑蛋白水解物组合物、马来酸羧甲淀粉钠、微晶纤维素于沸腾制粒机中，充分混匀，向其中喷入50％的乙醇适量制粒；

(3)将所得颗粒再置于整粒机中进行整粒；

(4)取经整粒的颗粒与处方量的微粉硅胶、硬脂酸镁置于混合器中充分混匀，取混匀后的物料进行含量检测；

(5)根据含量检测结果计算所压的片重，选择相应的片冲后进行压片；

(6)对所压制的片进行外观、装量差异等检测后，进行铝塑内包装；

(7)取内包装好的样品分别进行装盒、装箱、放合格证，最后以胶带封口、打包，检验合格后入库。

Claims (5)

1.一种含有脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，脑蛋白水解物和马来酸的重量份数比为1∶0.1。

2.如权利要求1所述脑蛋白水解物和马来酸的组合物，其特征在于，所述的脑蛋白水解物和马来酸组合物为分散片。

3.如权利要求2所述的一种脑蛋白水解物和马来酸组合物的分散片，其特征在于，所述的辅料选自微晶纤维素、羧甲淀粉钠、微粉硅胶和硬脂酸镁。

4.如权利要求2所述的一种脑蛋白水解物和马来酸组合物的分散片，其特征在于，所述的脑蛋白水解物组合物的分散片的制备方法为

(1)将处方量的脑蛋白水解物组合物及辅料过80目筛混合；

(2)在所配好的混合物于沸腾制粒机中，充分混匀，向其中喷入50％的乙醇适量制粒，并整粒；

(3)将得到的药物颗粒根据含量检测结果计算所压的片重，选择相应的片冲后进行压片，包装得成品。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于该药物组合物在制备治疗脑功能障碍的药物中的应用。