CN101717816B - Oatp1b1重要基因突变检测基因芯片 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种基因检测芯片，更具体地说是用于检测与高血压、恶性肿瘤、2型糖尿病、高胆固醇血症治疗药物的反应性密切相关的有机阴离子转运多肽1B1(简称OATP1B1)常见重要基因突变的基因检测芯片。本发明通过选择8个突变位点，并设计出相应的探针从而实现了对突变位点的检测并能给出突变位点的信息，从而为指导用药提供基础。
Description
技术领域
本发明属于基因分析检测领域，具体地说是涉及一种基因检测芯片，更具体地说是用于检测与高血压、恶性肿瘤、2型糖尿病、高胆固醇血症治疗药物的反应性密切相关的有机阴离子转运多肽1B1(简称OATP1B1)常见重要基因突变的基因检测芯片。
背景技术
据统计，我国高血压和糖尿病的患病人数分别约1.3亿和2000万，成人血脂异常发生率约为18.6％，恶性肿瘤患者约180～200万，在目前和将来很长一段时间内，药物仍将是以上重大疾病治疗的主要手段。肝脏是人体代谢和解毒药物及外源性物质的主要器官，有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)是一种肝脏特异性分布的转运体。除靶向转运非结合型胆红素、甲状腺激素等内源性物质外，OATP1B1介导多种具有重要临床意义药物的肝脏跨膜转运，如抗恶性肿瘤药(伊立替康、甲氨喋呤)、调血脂药(普伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀、罗苏伐他汀、西伐他汀)、抗高血压药(缬沙坦、奥美沙坦、波生坦)、抗高血糖药(瑞格列奈、那格列奈)等，与它们的吸收、分布及毒物排泄等过程密切相关，进而关乎药物的疗效和毒副作用。
药物反应的个体差异是临床上极其普遍的现象，产生这种差异的原因有许多，包括性别、年龄、体重、疾病状况在内的多种因素都可以导致不同病人对同一种药物的反应出现量与质的差别，然而20多年来的遗传药理学研究结果表明其中最重要、最根本的因素是遗传因素，即药物代谢酶、转运体和受体(药物作用靶点)的基因多态性导致了其编码蛋白的功能改变，进一步使血药浓度和药物敏感性显著不同，一言以蔽之，遗传变异导致了药物反应个体差异。
以他汀类降脂药普伐他汀为例，该药在肝细胞内可有效抑制HMG-CoA还原酶并抑制胆固醇的合成，同时外周循环中药物浓度过高也可能造成最严重的致命性不良反应-横纹肌溶解，研究发现某应用该药发生严重肌肉毒性的病人多为OATP1B1功能严重缺陷的*15/*15基因突变者。通过提前鉴定携带有OATP1B1*15/*15基因突变的携带者，及时换用其他药物，可有效降低横纹肌溶解的发生率，保障高风险者的生命安全。
经过长期研究，目前国内外已发现OATP1B1的多个基因突变与相应药物的反应性(疗效和毒副反应)密切相关，其中主要包括下列内容(表1)：
表1 OATP1B1常见重要基因突变及其功能意义
以上所述的OATP1B1的基因突变与高血压、恶性肿瘤、2型糖尿病、高胆固醇血症等疾病的治疗药物在人体内的反应性密切相关，这里所说的反应性包括了药物的疗效和安全性两个方面，同种同剂量的药物作用于拥有不同基因型的患者，有的人恰好有效，有的人根本无效，还有的人会出现药物的毒副反应，因此利用各种基因检测技术在治疗之前先确定病人的上述OATP1B1基因突变位点的基因型，根据检测的结果调整患者的用药种类与剂量，可以使药物发挥最佳的疗效，最大限度地防止毒副反应发生，这就是基因导向性的个体化用药新模式。目前该种用药模式已被越来越多的科研人员、临床医生及患者所接受。
目前国内外最常用的基因突变检测方法有聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP法)、序列特异性PCR、手工或自动测序等方法，这些方法不仅操作繁琐、检测周期长、无法做到高通量，而且影响检测结果的因素众多，不易控制，难以满足临床实际检测的要求，目前只在科研领域进行。
基因芯片(gene chip)，又称DNA芯片，是近些年在生物高科技领域内出现的最具时代特征的重大科技进展之一，它将能反映样本中大量基因信息的基因探针(寡核苷酸探针、cDNA克隆、PCR产物等)有序地固定在固相支持物(如醛基、氨基、巯基、羧基等活性基团修饰的载玻片或硅片、尼龙膜、硝酸纤维素膜)上形成阵列，通过与实际样本或扩增产物进行杂交反应和对荧光等杂交信号的检测，只需一次试验，就可高通量地获得所有待检基因的信息。与其他方法相比较，基因芯片的检测方法有多样品并行处理能力、分析速度快、所需样品量少、污染少、操作简单、价格低廉等优点。因此利用基因芯片技术检测上述OATP1B1的常见重要基因突变，是当下最好的选择，具有重要的现实意义。
目前尚未有对上述OATP1B1的常见重要基因突变进行全面系统检测的基因芯片及其技术方案被披露。
发明内容
本发明的目的在于针对目前药物反应个体差异所导致的药物有效性低、毒副反应严重的现象，提供一种用于检测与这些药物的反应性密切相关的OATP1B1的常见重要基因突变的基因芯片及其配套的检测试剂。本发明的检测结果可以辅助临床医生制定在人体内通过OATP1B1转运的若干种药物的个体化给药方案。
根据本发明的一方面，本发明提供的基因芯片包括固相支持物和有序固定在固相支持物上的寡核苷酸探针。
所述的固相支持物可采用基因芯片领域常用的各种材料，如但不限于经活性基团修饰的玻片或硅片、未修饰的玻片、塑料片、各种纤维膜、尼龙膜等，用于修饰的活性基团如但不限于醛基、氨基、巯基、羧基等，本发明优选醛基化修饰的玻片。
所述固定于固相支持物上的寡核苷酸探针可与OATP1B1的特定基因扩增片段特异性杂交，从而确定相关基因突变的类型。本发明所述的寡核苷酸探针序列如表2所示
表2
表2中，每一突变位点针对未发生突变(野生型)和发生突变(突变型)两种情况各设计了正反两条用于合成探针的序列，正向探针序列对应于目标寡核苷酸片段的正义链，反向探针序列对应于目标寡核苷酸片段的反义链，在实际使用时可选择上述序列中的任意连续14～25个碱基作为检测探针的序列，如果序列中包含基因突变位点(用方框标注)，则选择的连续14～25个碱基中必须包含该突变位点。针对每个待检测的基因突变，实验人员需根据表3的序列合成至少一条野生型探针和一条突变型探针，正向或反向均可。上述某一个或某几个或全部的突变位点的检测探针组成探针组，经合成后固定于固相支持物上。
在上述设计的各探针序列的基础上，本领域技术人员可通过本领域熟知的方法进行探针合成，并对探针3′端或5′端增加间隔臂(如：聚胸腺苷酸、聚四乙二醇等)，来增加杂交容量；以及对其3′端或5′端进行化学基团修饰(比如氨基化修饰)，使探针能通过化学键结合在相应的片基上(如醛基化片基)；优选对探针的3′端进行氨基修饰，其相较5′端修饰的探针具有更好的杂交效果。
在上述设计的各探针序列的基础上，为了控制杂交过程中各种因素对杂交信号值的干扰和对杂交过程进行评估，本领域技术人员还可通过本领域熟知的方法设计并合成芯片质控对照、阴性对照、阳性对照、空白对照等质控探针。
本发明所涉及的野生型检测探针、突变型检测探针、质控对照探针、阴性对照探针、阳性对照探针、空白对照探针的用途及其设计方法和修饰方法均是本领域一般技术人员所熟知的，详细技术细节可参阅《基因芯片技术》(李瑶编，化学工业出版社，2004年5月出版)。
根据本发明的另一方面，用上述芯片检测样本中OATP1B1常见重要基因突变发生情况的检测试剂至少包括用于扩增样本中OATP1B1基因的PCR引物以及上述本发明的基因芯片。本发明的PCR引物根据OATP1B1基因上相关基因突变位点上下游的的序列特点设计，通过PCR反应可扩增包含一种或几种突变位点在内的OATP1B1基因片段。
为便于进行结果检测，可以在PCR引物合成时进行适当的标记，所述标记基团包括：地高辛分子(DIG)、生物素分子(Bio)、荧光素及其衍生物分子(FITC等)、其他荧光分子(如Cy3、Cy5等)、碱性磷酸酶(AP)、辣根过氧化物酶(HRP)等，这些标记及其标记方法以及各标记物的检测方法都已是本领域众所周知的常规技术。本发明优选利用不对称PCR技术进行基因扩增，其目的是采用不等量的一对引物产生大量的单链DNA，所有探针(包括检测探针和阴性质控探针)均是针对该单链DNA设计合成，同时对非限制性引物(高浓度引物)进行标记，本发明优选对对非限制性引物(高浓度引物)进行5′端的Cy5标记，使得合成的单链PCR产物的5′端带有荧光标记，以便在后继的扫描过程中读取结果。本发明所述的引物设计、合成、标记的方法是本领域普通技术人员所熟知的，详细操作步骤可参见《分子克隆试验指南》(J.萨姆.布鲁克等，著，黄培堂等，译，2002)。
本发明的基因芯片可以根据点样区域的数目分为1人份、2人份和多人份不等，本发明根据实际应用的需要优选2人份的设计方案，即在基片上设置2个点样区域，分别点上所需的探针，一次可检测2份生物样品。
根据本发明的另一方面，提供一种用于系统检测样本中OATP1B1的常见重要基因突变的试剂盒，其至少包括本发明的上述基因芯片和PCR扩增引物，本发明的试剂盒还可进一步包含下述试剂中的一种或几种：
(1)样本处理类试剂；(2)PCR扩增类试剂：(3)杂交类试剂(4)显色类试剂。
上述样本处理类试剂、PCR扩增类试剂、杂交类试剂、显色类试剂均可使用本领域技术人员所熟知的在这些操作过程中需使用的各种具体试剂，这些试剂必要时可以包括在试剂盒中，也可以将其配方列明在试剂盒的说明书中由使用者按照说明书中的提示自行配制。
本发明的试剂盒还可包括相应的阴性对照和/或阳性对照样本。
在本发明试剂盒的操作方法为：1.将标记后的待测产物与固定在芯片上的探针进行杂交，其杂交原理与普通核酸杂交相同。杂交条件与探针和标记后的待测PCR产物的长度、GC含量、盐浓度、甲酰胺等有关，我们通过严谨的实验设计逐一确定最适合的各组分条件。优选的是在本发明的试剂盒体系中43℃孵育2小时后可获得具有良好特异性和灵敏度的杂交结果。2.利用不同的洗脱条件，例如温度、盐浓度等最大限度地去除非特异性杂交。3.对样本检测结果进行评估：通过样本中恶性肿瘤药物治疗相关基因的突变发生情况评估样本提供者对抗肿瘤药物的反应性。详细操作过程见实施例。
本发明的优点是：
1.本发明全面、系统、高通量地检测已知的与恶性肿瘤、高血压、糖尿病、高脂血症等重大疾病治疗药物反应个体差异密切相关的肝转运体OATP1B1的常见基因突变，并可针对相关药物制定出相应的调整方案。
2.准确、灵敏、特异性地对上述基因突变进行检测。
3.操作简便快捷，对样品的需要量少，人力投入少，大大降低人为误差，可避免不同实验人员操作带来的结果差异。
5.与PCR-RFLP和测序法相比较，本发明污染轻、成本较低。
6.可同时检测多份生物样本，多个基因突变。
附图说明：
图1：OATP1B1常见突变基因位点检测芯片平面图
图2：芯片A(野生型探针I+突变型探针I)扫描图
图3：芯片B(野生型探针II+突变型探针II)扫描图
图4：芯片C(野生型探针III+突变型探针III)扫描图
具体实施方式
实施例1：OATP1B1常见突变基因位点芯片检测系统的制备
1.详细制备过程
1.1.基片处理：基片采用玻璃介质，表面处理方式采用醛基化修饰。具体步骤为：
1、空白超平片的选择：选用76mm×25mm×1mm超平片，其长宽误差不超过0.2mm，厚度误差不超过0.1mm，无破损、表面无划痕；
2、超平片预处理：将超平片浸于新配的重铬酸钾洗液中，放置7天后，用去离子水清洗，晾干；
3、超平片氨基化：配制氨基硅烷的乙醇溶液，浓度分别为2％，将玻片浸入上述溶液中分别作用15分钟，取出用去离子水洗净，晾干；
4、超平片醛基化：将上述氨基化处理的超平片分别浸入5％的戊二醛PBS(0.2mol/lM，pH8.0)溶液中，分别作用30分钟，PBS溶液清洗晾干；
1.2.探针制备：探针序列设计如SEQ ID 1～32所示，按照本领域技术人员熟知的方法合成。
(1)在DNA合成仪上合成所需序列的寡核苷酸(包括5’端的10～15个碱基的polyT)；
(2)在DNA序列合成仪上，将寡核苷酸poly(T)分子臂引入活泼的脂族氨基臂。
(3)以HPLC纯化5’端氨基修饰的寡核苷酸，离心干燥后，溶于100mmol/LNa2CO3/NaHCO3溶液(PH9.0)，浓度为2mmol/L。
1.3.基因芯片的制备：
按图所示的OATP1B1常见突变位点基因检测芯片平面结构图，在一块玻璃介质的基片上划分为两个基因探针点样区域，每个点样区域的面积为7mm*7mm，在每个点样区域内的阵列式分布的基因探针：第1行为位点388G＞A的野生型和突变型探针，第2行为位点388G＞A的阴性质控探针和阳性质控探针；第3行为位点521T＞C的野生型和突变型探针，第4行为位点521T＞C的阴性质控探针和阳性质控探针；第5行为位点733G＞A的野生型和突变型探针，第6行为位点733G＞A的阴性质控探针和阳性质控探针；第7行为位点758G＞A的野生型和突变型探针，第8行为位点758G＞A的阴性质控探针和阳性质控探针；第9行为位点882G＞A的野生型和突变型探针，第10行为位点882G＞A的阴性质控探针和阳性质控探针；第11行为位点1463G＞C的野生型和突变型探针，第12行为位点1463G＞C的阴性质控探针和阳性质控探针；第13行为针对1929A＞C的野生型和突变型探针，第14行为针对1929A＞C的阴性质控探针和阳性质控探针；第15行为位点-11187G＞A的野生型和突变型探针，第16行为位点-11187G＞A的阴性质控探针和阳性质控探针。
选择表2各位点备选探针序列中的任意连续14～25个碱基用来实际合成各位点的检测探针(包括野生型探针和突变型探针)，序列如下：
1.4.点样与点样后处理：
(1)探针溶液各取2μl，用点样仪按上述格式打印到处理过的基片上；
(2)室温干燥放置18小时；
(3)室温干燥后立即使用或贮存于4℃备用。
1.5.肝药转运体OATP1B1常见基因突变芯片检测系统的组成
检测系统主要由寡核苷酸芯片、杂交液、洗涤母液、各检测基因位点的PCR反应液(包括引物、dNTP、buffer等)、生物酶和阳性参照DNA标本等组分构成，寡核苷酸芯片4℃冷藏保存，其他组分于-20℃冷冻保存，其中PCR反应液需避光。各检测基因位点PCR反应液中的引物根据表5中所示的序列设计。
【实施例2】用实施例1中的芯片检测系统对OATP1B1基因中影响多种抗肿瘤药、抗高血压药、降脂药、降糖药物的安全性和有效性的所有8种常见重要基因突变进行检测。
1.具体试剂和所用仪器：
【芯片检测系统的组成】(表6)
PCR反应液1～8分别为扩增包含本发明所述的8个OATP1B1基因多态性位点的片段所需的PCR引物。
【其他仪器及试剂】
PCR仪、电泳仪、杂交仪、激光共聚焦芯片扫描仪(具有635nm波长的通道)、紫外分光光度计、Promega DNA抽提试剂盒。
2.具体检测过程如下：
【临床样本的处理】
采集待检测个体的外周静脉血2ml，使用Promega DNA抽提试剂盒抽提DNA，也可用自配的DNA抽提试剂进行抽提，两种方法均为本领域技术人员所公知。DNA浓度应大于200ng/ul，用紫外分光光度计检测A260/A280比值，此比值应介于1.60～1.80之间。
【PCR扩增】
在0.2mL的Eppendorf管中加入PCR反应液18.8μl，模板DNA 0.8μl，及酶1 0.2μl，酶2 0.2ul，构成20.0μl反应体系(利用PCR反应液1～8共配成A、B、C、D、E、F、G、H共8管反应体系)。PCR扩增程序为：
37℃ 600秒
95℃ 240秒
注意：上述成分充分混匀，最后加入Taq酶并混匀，但不可剧烈振荡；放置PCR管于PCR仪上。
用PCR方法扩增染色体基因特定片段的方法已经是本领域的公知技术，其中的关键在于引物设计，利用本发明公布的引物序列，本领域的技术人员可根据经验或有关文献确定反应体系和扩增程序，独立完成该操作步骤。
【杂交】
取经43℃预热的杂交液7.5μl，加(A)(B)(C)(D)(E)(F)(G)(H)PCR产物各3μ1混匀，吸取20μl混合液，转移到芯片的点样区域；将芯片放入杂交舱，密封杂交舱，然后放进43℃水浴保温2小时。
本发明扩增产物与基因芯片之间的杂交按照本领域的经典方法进行，本领域一般技术人员依照经验可以确定有关缓冲液、样品浓度、预杂交温度、杂交温度以及时间等的最适条件。
【洗片】
打开杂交舱，取出芯片，用洗涤液1漂洗30秒，再置于去离子水中于室温洗涤30秒，取出，在离心机上瞬时离心30秒，甩去芯片上残留液体。
【扫描分析】
(1)将干燥后的芯片立即用GenePix4100A扫描仪扫描，PMT设置为600，激光波长为635nm；
(2)扫描图像用扫描仪自带的图像分析软件GenePix 6.0对扫描结果进行定量分析，并保存分析结果；
(3)利用与芯片检测系统配套的结果分析软件进行结果分析与整理。
(4)打印检测报告单。
3.对检测结果的分析过程如下：
通过芯片扫描仪得到的扫描图谱为一矩阵图谱，自第1行至第8行，由上至下即检测OATP1B1的388G＞A、521T＞C、733G＞A、758G＞A、882G＞A、1463G＞C、1929A＞C、-11187G＞A位点的基因型。探针分布情况如下表(表8)所示：
| 1-5点 | 6-10点 | |
| 第1行 | 388G＞A野生型探针 | 388G＞A突变型探针 |
| 第2行 | 521T＞C野生型探针 | 521T＞C突变型探针 |
| 第3行 | 733G＞A野生型探针 | 733G＞A突变型探针 |
| 第4行 | 758G＞A野生型探针 | 758G＞A突变型探针 |
| 第5行 | 882G＞A野生型探针 | 882G＞A突变型探针 |
| 第6行 | 1463G＞C野生型探针 | 1463G＞C突变型探针 |
| 第7行 | 1929A＞C野生型探针 | 1929A＞C突变型探针 |
| 第8行 | -11187G＞A野生型探针 | -11187G＞A突变型探针 |
对标本进行检测，当某一位点只有野生型探针出现信号时该位点为野生型，只有突变型探针出现信号时该位点为突变型，当同时出现信号时为杂合子。
根据检测出的基因型，提出用药调整意见。
【实施例3】不同碱基数的探针杂交效果比较
在本发明中，对于表3中所示序列的探针实际使用时可以选择连续14-25个碱基序列来合成探针，以下实验旨在证明上述碱基数的差异并不影响结果的灵敏度和特异性。
针对OATP1B1基因-11187G＞A突变合成以下不同长度的突变及正常探针：
野生型探针I(SEQ ID NO.1第19～34位碱基序列，共15个碱基)
5’-GTATACA
GTAAAAG-3’
突变型探针I(SEQ ID NO.3第19～34位碱基序列，共15个碱基)
5’-GTATACA
GTAAAAG-3’
野生型探针II(SEQ ID NO.1第17～36位碱基序列，共19个碱基)
5’-ATGTATACA
GTAAAAGTG-3’
突变型探针II(SEQ ID NO.3第17～36位碱基序列，共19个碱基)
5’-ATGTATACA
GTAAAAGTG-3’
野生型探针III(SEQ ID NO.1第15～38位碱基序列，共23个碱基)
5’-ATATGTATACA
GTAAAAGTGTG-3’
突变型探针III(SEQ ID NO.3第15～38位碱基序列，共23个碱基)
5’-ATATGTATACA
GTAAAAGTGTG-3’
以上述序列合成的探针按照实施例1的方法制备芯片A、B和C，按照实施例1的方法扩增11187G＞A野生型和突变型质粒，分别与芯片A、B和C杂交，结果显示分别见图2、3、4：
由图可见，不同长度的探针均取得了较好的杂交结果，由此证明不同碱基数的探针均具有良好的灵敏度和特异性。
以上对本发明的描述并不限制本发明，本领域的技术人员可以根据本发明做出各种改变和调整，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
序列表
<110>中南大学
<120>OATP1B1重要基因突变芯片检测系统及其制备方法和使用方法
<160>48
<170>PatentIn version 3.5
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<211>32
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<213>人工序列
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aaagaaagaa aagcttcact gtctttgcat gtgctggaaa c 41
<210>18
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>18
gtttccagca catgcaaaga cagtgaagct tttctttctt t 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>19
aaagaaagaa aagcttcact atctttgcat gtgctggaaa c 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>20
gtttccagca catgcaaaga tagtgaagct tttctttctt t 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>21
catctcaccc tgtctagcag gttgcaaatc ttcaagtggc a 41
<210>22
<211>41
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<213>人工序列
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tgccacttga agatttgcaa cctgctagac agggtgagat g 41
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<211>41
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<213>人工序列
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catctcaccc tgtctagcag cttgcaaatc ttcaagtggc a 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
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tgccacttga agatttgcaa gctgctagac agggtgagat g 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>25
cttgttttat atattatatt aatttatgcc atgaagaaaa a 41
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<211>41
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<213>人工序列
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tttttcttca tggcataaat taatataata tataaaacaa g 41
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<211>41
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<213>人工序列
<400>27
cttgttttat atattatatt catttatgcc atgaagaaaa a 41
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<211>41
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<213>人工序列
<400>28
tttttcttca tggcataaat gaatataata tataaaacaa g 41
<210>29
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>29
tatgtgcata tgtgtataca ggtaaaagtg tgtatatatg t 41
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<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
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acatatatac acacttttac ctgtatacac atatgcacat a 41
<210>31
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>31
tatgtgcata tgtgtataca agtaaaagtg tgtatatatg t 41
<210>32
<211>41
<212>DNA
<213>人工序列
<400>32
acatatatac acacttttac ttgtatacac atatgcacat a 41
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<212>DNA
<213>人工序列
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actaatatcg attcatca 18
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<211>18
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<213>人工序列
<400>34
actaatatca attcatca 18
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<400>35
ggatatatgt gttcatgg 18
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>36
ggatatatgc gttcatgg 18
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>37
ctaggcactg tcaggata 18
<210>38
<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>38
ctaggcacta tcaggata 18
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<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<400>39
gattctcgat gggtt 15
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<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
<400>40
gattctcaat gggtt 15
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<212>DNA
<213>人工序列
<400>41
agcttcactg tctttgc 17
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<211>17
<212>DNA
<213>人工序列
<400>42
agcttcacta tctttgc 17
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>43
gtctagcagg ttgcaaat 18
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>44
gtctagcagc ttgcaaat 18
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<211>18
<212>DNA
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<400>45
tattatatta atttatgc 18
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<211>18
<212>DNA
<213>人工序列
<400>46
tattatattc atttatgc 18
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<400>47
tgtatacagg taaaag 16
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<211>16
<212>DNA
<213>人工序列
<400>48
tgtatacaag taaaag 16
Claims (1)
1.OATP1B1重要基因突变检测芯片，包括固相支持物和有序固定在固相支持物上的检测探针；所述的检测探针序列如下：
SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.36、SEQ IDNO.37、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.41、SEQ IDNO.42、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.46、SEQ IDNO.47、SEQ ID NO.48；
上述包含OATP1B1重要基因8个突变位点的检测探针组成探针组，经合成后固定于固相支持物上。
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