CN101696281B - 一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 - Google Patents
一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101696281B CN101696281B CN2009101933382A CN200910193338A CN101696281B CN 101696281 B CN101696281 B CN 101696281B CN 2009101933382 A CN2009101933382 A CN 2009101933382A CN 200910193338 A CN200910193338 A CN 200910193338A CN 101696281 B CN101696281 B CN 101696281B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- microgel
- molecularly imprinted
- maleic anhydride
- preparation
- detection function
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 70
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 58
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 44
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 23
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000011837 N,N-methylenebisacrylamide Substances 0.000 claims abstract description 6
- ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N n,n'-methylenebisacrylamide Chemical compound C=CC(=O)NCNC(=O)C=C ZIUHHBKFKCYYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N theophylline Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(C)C2=C1NC=N2 ZFXYFBGIUFBOJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 47
- 230000032050 esterification Effects 0.000 claims description 38
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 claims description 38
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 26
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 21
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 21
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 21
- 229960000278 theophylline Drugs 0.000 claims description 21
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 18
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 17
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 10
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 9
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 9
- VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N propan-2-yl n-propan-2-yloxycarbonyliminocarbamate Chemical compound CC(C)OC(=O)N=NC(=O)OC(C)C VVWRJUBEIPHGQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- WREVVZMUNPAPOV-UHFFFAOYSA-N 8-aminoquinoline Chemical compound C1=CN=C2C(N)=CC=CC2=C1 WREVVZMUNPAPOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 claims description 5
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims description 4
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims description 4
- HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxybutanediamide Chemical compound NC(=O)CCC(=O)NO HOGDNTQCSIKEEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 8
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-cyanopropan-2-yldiazenyl)-2-methylpropanenitrile Chemical compound N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 239000011540 sensing material Substances 0.000 description 7
- RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N caffeine Chemical compound CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N=CN2C RYYVLZVUVIJVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N Isocaffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1N(C)C=N2 LPHGQDQBBGAPDZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960001948 caffeine Drugs 0.000 description 2
- VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N caffeine Natural products CN1C(=O)N(C)C(=O)C2=C1C=CN2C VJEONQKOZGKCAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000547 conjugated polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 229920001002 functional polymer Polymers 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 125000002943 quinolinyl group Chemical group N1=C(C=CC2=CC=CC=C12)* 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000005316 response function Methods 0.000 description 2
- DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 4-bromo-1,1,1-trifluorobutane Chemical compound FC(F)(F)CCCBr DBCAQXHNJOFNGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical class OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000274 adsorptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N azane;7-fluoro-2,1,3-benzoxadiazole-4-sulfonic acid Chemical compound N.OS(=O)(=O)C1=CC=C(F)C2=NON=C12 JXLHNMVSKXFWAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000008358 core component Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003255 drug test Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 125000006575 electron-withdrawing group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol dimethacrylate Substances CC(=C)C(=O)OCCOC(=O)C(C)=C STVZJERGLQHEKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 1
- 229920001109 fluorescent polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000004186 food analysis Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002117 illicit drug Substances 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000012716 precipitator Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 125000000391 vinyl group Chemical group [H]C([*])=C([H])[H] 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法。该方法是将马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺、N，N-亚甲基双丙烯酰胺和茶碱溶于二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入甲醇，室温下搅拌2～4h；在保护气体氛围中，加入偶氮二异丁腈，60～70℃下反应8～12h，分离，得到凝胶化产物；将凝胶化产物洗脱除去模板分子茶碱，得到分子印迹微凝胶。本方法具有成本低、操作简便快捷、灵敏度高等优点，且制得的分子印迹微凝胶具有较好的识别性能及优良的生物降解性和生物相容性，在药物检测领域具有潜在的应用价值。
Description
技术领域
本发明属于功能高分子凝胶材料的技术领域，特别涉及一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法。
背景技术
近年来，随着分析技术的不断进步，对各类检测方法的研究开发也越来越重视。临床诊断、环境监测、食品分析、产品监控、违禁药品检测等技术面临的问题也为分析技术的发展提供了新的机遇。荧光检测法具有灵敏度高、操作简便、重现性好、设备简单等特点，近年来受到广泛关注(NguyenT H，Richard J.A.Organic & Biomolecular Chemistry，2009，7，1211-1220)。
识别单元是荧光检测器的核心部件。识别单元负责对复杂样品中的目标分析物进行特性识别、结合。因此，荧光检测技术的快速发展必需依托于结构稳定、选择性好、灵敏度高的识别单元。酶、抗体、受体以及其它一些生物分子已显示出优良的灵敏性和选择性。然而，由于这些生物分子的物理、化学稳定性较差，其在生物传感上的应用受到了极大限制(Karsten H.，KlausM.Chemical Review，2000，100：2495-2504)。中国专利CN 1827664公开了用于对双氧水的检测一类含有磺酸酯和吸电子基团的共轭聚合物荧光传感材料的制备方法。但是，该体系存在以下不足：①一种荧光聚合物分子只能用于一种或一类分析物；②制得材料的稳定性较差，难以重复利用；③制备条件复杂，且成本较高。分子印迹技术是一种制备人工合成识别单元的有效方法，采用分子印迹技术制得的识别材料具有较好的物理、化学稳定性，其选择性具有预定性，可广泛用于各类目标分子。
目前，分子印迹材料体系用于荧光检测主要基于以下两种方法：①对分析物进行荧光标记(中国专利CN 101487822)；②共轭聚合物荧光传感材料与分子印迹材料形成复合物(中国专利CN 101381438)。然而，这两种方法存在的主要问题是：第一，分子印迹材料仅起到识别单元的作用，需外加荧光物质做响应材料，过程较繁琐；第二，灵敏度低，且检测限较高；第三，常用的分子印迹材料多以乙烯基衍生物作为功能单体，二甲基丙烯酸乙二醇酯、N，N-亚甲基双丙烯酰胺等作为交联剂(Ohad K.，Havazelet B.P.Langmuir，2007，23：6329-6335)，致使制备成本增加，所得分子印迹材料的生物降解性及相容性较差，极大限制分子印迹材料的应用。因此，如何制备出价格低廉，集识别和响应功能于一体的分子印迹荧光检测材料是荧光检测技术领域的一项重要研究课题。
发明内容
为了解决上述现有技术中存在的不足之处，本发明的目的在于提供一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，包括以下步骤：将马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺、N，N-亚甲基双丙烯酰胺和茶碱溶于二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入甲醇，室温下搅拌；在保护气体氛围中，加入偶氮二异丁腈进行反应，分离，得到凝胶化产物；将凝胶化产物洗脱除去模板分子茶碱，得到分子印迹微凝胶。
所述马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物的合成方法按以下步骤进行：
(1)制备马来酸酐酯化淀粉：将3.0～4.0g可溶性淀粉、3.0～4.0mL三乙胺和25～30mL二甲基亚砜加入容器中，搅拌形成均匀悬浮液；在80～90℃和氮气保护条件下，搅拌使其形成均匀透明溶液，继续保持上述条件30～60min；冷却至55～60℃，加入4.0～5.0g马来酸酐，搅拌反应8～9h，用乙醇沉淀、洗涤，真空干燥，得到马来酸酐酯化淀粉；
(2)制备马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物：取0.5～1.0g步骤(1)所得马来酸酐酯化淀粉和0.6～1.0g 8-氨基喹啉溶于15～30mL二甲基亚砜中，搅拌条件下加入0.42～0.80gN，N-二环己基碳二亚胺和0.20～0.40gN-羟基琥珀酰亚胺，搅拌条件下反应48h后，过滤除去沉淀物，用乙醇沉淀、洗涤，真空干燥，得到马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物。
步骤(1)和(2)所述真空干燥的温度为40～50℃，干燥时间为48h。
所述搅拌的时间为2～4h；所述反应的温度为60～70℃，反应的时间为8～12h；所述保护气体为氮气。
所述混合溶液中的马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺、N，N-亚甲基双丙烯酰胺和茶碱的质量体积比浓度分别为10～15g/L、10～20g/L、5～25g/L和0～0.6g/L。
所述甲醇与二甲基亚砜的体积比为2∶5～2∶4。
所述偶氮二异丁腈的用量为马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺和N，N-亚甲基双丙烯酰胺总质量的2～5％。
所述洗脱除去模板分子茶碱的方法为：将凝胶化产物用乙酸/甲醇混合溶液进行洗涤，直至紫外检测洗脱液在272nm处没有吸收波长。所述乙酸/甲醇混合溶液是体积比为1∶9～2∶8的乙酸和甲醇混合物。
将所得分子印迹微凝胶用水洗涤至中性，除去残余的乙酸，真空干燥得分子印迹微凝胶。该分子印迹微凝胶粒径分布见图1，其平均粒径为44.1um。
本发明的原理为：通过模板分子与含荧光基团的功能聚合物(马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物)之间的相互作用，在微凝胶上构造出大量的特异识别单元，使制得的分子印迹微凝胶对茶碱具有较好的吸附选择性，可用于茶碱的检测。本发明制得的分子印迹微凝胶上的喹啉基团在水溶液中，能与茶碱分子发生相互作用，从而使原本发光较强的喹啉基团荧光减弱，因此达到检测的目的。
本发明所得分子印迹微凝胶检测茶碱的方法为：将制得的分子印迹微凝胶分散于水中制成浓度为2mg/mL的悬浮液，将茶碱溶液加入到分子印迹微凝胶悬浮液中，其中茶碱的浓度为0～300ug/mL，吸附平衡后，330nm波长激发光条件下，测定了分子印迹微凝胶的荧光发射光谱，根据467nm处荧光强度的变化，获得检测结果。
本发明与现有技术相比，具有如下优点和有益效果：(1)采用沉淀法制备分子印迹微凝胶颗粒，无需经过粉碎、过筛等复杂工序，且无需加入乳化剂而干扰模板分子与功能基团间的相互作用；(2)分子印迹微凝胶的荧光强度可通过马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物的取代度进行调控，操作简便快捷、灵敏度高；(3)本发明方法制得的分子印迹微凝胶集识别和响应功能于一体，测量方法简单；(4)由本发明的方法制得的分子印迹微凝胶性能稳定，可长期保存；(5)所采用的主要原料为淀粉，原料来源广泛，所形成的分子印迹微凝胶具有良好的生物降解性及生物相容性，在药物检测领域具有潜在的应用价值。
附图说明
图1为分子印迹微凝胶粒径分布。
图2为不同浓度茶碱溶液中分子印迹和非分子印迹微凝胶在发射波长为467nm处的荧光强度图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
本发明所得分子印迹微凝胶的选择吸附特性测定方法为：称取两份质量为0.10g的分子印迹微凝胶浸入蒸馏水中充分溶胀，再分别置于12.5mL浓度均为100ug/mL的茶碱、咖啡因水溶液中，吸附1.5h后，用紫外分光光度法测定吸附量(茶碱和咖啡因的测定波长分别为272nm和261nm)，计算出分离因子(α)和印迹效率(β)。
实施例1
(1)制备马来酸酐酯化淀粉：将3.0g可溶性淀粉，3mL三乙胺及25mL二甲基亚砜加入50mL圆底烧瓶中，搅拌形成均匀悬浮液；在80℃和氮气(N2)保护条件下，搅拌使其形成均匀透明溶液，继续保持该条件30min；冷却至60℃，加入4.0g马来酸酐，搅拌反应9h，用乙醇沉淀、洗涤，于40℃下真空干燥48h，得到马来酸酐酯化淀粉；
(2)制备马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物：取0.50g步骤(1)所得马来酸酐酯化淀粉和0.60g 8-氨基喹啉溶于15mL二甲基亚砜中，搅拌条件下加入0.42g N，N-二环己基碳二亚胺和0.20g N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌条件下反应48h后，过滤除去沉淀物，用乙醇沉淀、洗涤，在50℃下真空干燥后得到马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物；
(3)将0.10g马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、0.10g丙烯酰胺和0.15gN，N-亚甲基双丙烯酰胺溶于10mL二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入4mL甲醇，室温下搅拌4h；在氮气保护下，加入17.5mg偶氮二异丁腈，在65℃下反应10h，分离得到凝胶化产物；
(4)将步骤(3)所得凝胶化产物用乙酸/甲醇混合溶液(乙酸和甲醇的体积比为2∶8)洗涤至紫外检测洗脱液在272nm处没有吸收波长，得到分子印迹微凝胶；再用大量蒸馏水洗涤至中性，除去残余的乙酸，真空干燥得分子印迹干胶。
测定本实施例制得的分子印迹微凝胶的分离因子(α)为2.18，印迹效率(β)为2.10。
将步骤(4)制得的分子印迹微凝胶置于浓度分别为0、50、100、150、200和300ug/mL的茶碱溶液中，吸附1.5h后，330nm波长激发光条件下，测定了分子印迹微凝胶荧光传感材料在467nm处的荧光强度变化情况。由图2(A)可以看出，非分子印迹微凝胶荧光传感材料的荧光强度受茶碱浓度影响较小；而由图2(B)可以看出，分子印迹微凝胶荧光传感材料的荧光强度受茶碱浓度影响较大。
实施例2
(1)制备马来酸酐酯化淀粉：将4.0g可溶性淀粉，4mL三乙胺及30mL二甲基亚砜加入50mL圆底烧瓶中，搅拌形成均匀悬浮液；在90℃和N2保护条件下，搅拌使其形成均匀透明溶液，继续保持该条件60min；冷却至60℃后，加入5.0g马来酸酐，搅拌反应9h，用乙醇沉淀、洗涤，于50℃下真空干燥48h，得到马来酸酐酯化淀粉；
(2)制备马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物：取0.80g步骤(1)所得马来酸酐酯化淀粉和0.85g 8-氨基喹啉溶于27mL二甲基亚砜中，搅拌条件下加入0.80gN，N-二环己基碳二亚胺和0.40g N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌条件下反应48h后，过滤除去沉淀物，用乙醇沉淀、洗涤，50℃下真空干燥后得马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物；
(3)将0.15g马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、0.20g丙烯酰胺、0.05gN，N-亚甲基双丙烯酰胺和4.0mg茶碱溶于10mL二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入5mL甲醇，室温下搅拌3h；氮气保护下，加入16mg偶氮二异丁腈，60℃下反应8h，分离得到凝胶化产物；
(4)将制得的凝胶化产物用乙酸/甲醇混合溶液(乙酸和甲醇的体积比为1∶7)洗涤至紫外检测洗脱液在272nm处没有吸收波长，得到分子印迹微凝胶；再用大量蒸馏水洗涤至中性，除去残余的乙酸，真空干燥得分子印迹干胶。
测定本实施例制得的分子印迹微凝胶的分离因子(α)为1.34，印迹效率(β)为1.29。
将步骤(4)制得的分子印迹微凝胶置于浓度为100ug/mL的茶碱溶液中，330nm波长激发光条件下，通过荧光光谱仪进行观测，发现分子印迹微凝胶荧光传感材料在467nm处的荧光强度由有明显减弱现象。因此，证明该分子印迹微凝胶可以有效地检测茶碱。
实施例3
(1)制备马来酸酐酯化淀粉：将3.0g可溶性淀粉，3mL三乙胺及25mL二甲基亚砜加入50mL圆底烧瓶中，搅拌形成均匀悬浮液；在90℃和N2保护条件下，搅拌使其形成均匀透明溶液，继续保持该条件30min；冷却至55℃后，加入4.0g马来酸酐，搅拌反应8h，用乙醇沉淀、洗涤，于40℃下真空干燥48h，得马来酸酐酯化淀粉；
(2)制备马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物：取1.0g步骤(1)所得马来酸酐酯化淀粉和1.0g 8-氨基喹啉溶于30mL二甲基亚砜中，搅拌条件下加入0.60g N，N-二环己基碳二亚胺和0.30g N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌条件下反应48h后，过滤除去沉淀物，用乙醇沉淀、洗涤，40℃下真空干燥后得马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物；
(3)将0.12g马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、0.15g丙烯酰胺、0.25gN，N-亚甲基双丙烯酰胺和6.0mg茶碱溶于10mL二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入4.5mL甲醇，室温下搅拌2h；氮气保护下，加入10.4mg偶氮二异丁腈，70℃下反应12h，分离得到凝胶化产物；
(4)将制得的凝胶化产物用乙酸/甲醇混合溶液(乙酸和甲醇的体积比为1∶9)洗涤至紫外检测洗脱液在272nm处没有吸收波长，得到分子印迹微凝胶；再用大量蒸馏水洗涤至中性，除去残余的乙酸，真空干燥得分子印迹干胶。
测定本实施例制得的分子印迹微凝胶的分离因子(α)为2.23，印迹效率(β)为2.15。
将步骤(4)制得的分子印迹微凝胶置于浓度为50ug/mL的茶碱溶液中，330nm波长激发光条件下，通过荧光光谱仪进行观测，发现分子印迹微凝胶荧光传感材料在467nm处的荧光强度有明显减弱现象。因此，证明该分子印迹微凝胶可以有效地检测茶碱。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于包括以下步骤：将马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺、N，N-亚甲基双丙烯酰胺和茶碱溶于二甲基亚砜中，得到混合溶液；向混合溶液中加入甲醇，室温下搅拌；在保护气体氛围中，加入偶氮二异丁腈进行反应，分离，得到凝胶化产物；将凝胶化产物洗脱除去模板分子茶碱，得到分子印迹微凝胶；所述混合溶液中的马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺和N，N-亚甲基双丙烯酰胺的质量体积比浓度分别为10～15g/L、10～20g/L和5～25g/L，茶碱的质量体积比浓度为0.4g/L或0.6g/L。
2.根据权利要求1所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物的合成方法按以下步骤进行：
(1)制备马来酸酐酯化淀粉：将3.0～4.0g可溶性淀粉、3.0～4.0mL三乙胺和25～30mL二甲基亚砜加入容器中，搅拌形成均匀悬浮液；在80～90℃和氮气保护条件下，搅拌使其形成均匀透明溶液，继续保持上述条件30～60min；冷却至55～60℃，加入4.0～5.0g马来酸酐，搅拌反应8～9h，用乙醇沉淀、洗涤，真空干燥，得到马来酸酐酯化淀粉；
(2)制备马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物：取0.5～1.0g步骤(1)所得马来酸酐酯化淀粉和0.6～1.0g 8-氨基喹啉溶于15～30mL二甲基亚砜中，搅拌条件下加入0.42～0.80g N，N-二环己基碳二亚胺和0.20～0.40g N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌条件下反应48h后，过滤除去沉淀物，用乙醇沉淀、洗涤，真空干燥，得到马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物。
3.根据权利要求2所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：步骤(1)和(2)所述真空干燥的温度为40～50℃，干燥时间为48h。
4.根据权利要求1所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述搅拌的时间为2～4h；所述反应的温度为60～70℃，反应的时间为8～12h；所述保护气体为氮气。
5.根据权利要求1所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述甲醇与二甲基亚砜的体积比为2∶5～2∶4。
6.根据权利要求1所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述偶氮二异丁腈的用量为马来酸酐酯化淀粉-喹啉偶联物、丙烯酰胺和N，N-亚甲基双丙烯酰胺总质量的2～5％。
7.根据权利要求1所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述洗脱除去模板分子茶碱的方法为：将凝胶化产物用乙酸/甲醇混合溶液进行洗涤，直至紫外检测洗脱液在272nm处没有吸收波长。
8.根据权利要求7所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：所述乙酸/甲醇混合溶液是体积比为1∶9～2∶8的乙酸和甲醇混合物。
9.根据权利要求7所述的一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法，其特征在于：将所得分子印迹微凝胶用水洗涤至中性，除去残余的乙酸，真空干燥得分子印迹干胶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101933382A CN101696281B (zh) | 2009-10-27 | 2009-10-27 | 一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101933382A CN101696281B (zh) | 2009-10-27 | 2009-10-27 | 一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101696281A CN101696281A (zh) | 2010-04-21 |
| CN101696281B true CN101696281B (zh) | 2011-07-20 |
Family
ID=42141413
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009101933382A Expired - Fee Related CN101696281B (zh) | 2009-10-27 | 2009-10-27 | 一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101696281B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103626920B (zh) * | 2013-11-28 | 2016-02-03 | 东北林业大学 | 一种吲哚-3-乙酸分子印迹磁性纤维素微球及其制备方法和应用 |
| CN110018142B (zh) * | 2019-03-20 | 2021-10-22 | 西南交通大学 | 复合荧光基底、复合荧光基底的制备方法以及应用 |
| TWI724978B (zh) * | 2020-09-29 | 2021-04-11 | 國立中興大學 | 8-胺基喹啉醯胺感測雙網絡水凝膠及其製備方法 |
-
2009
- 2009-10-27 CN CN2009101933382A patent/CN101696281B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101696281A (zh) | 2010-04-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Liu et al. | Fabrication of carbon dots@ restricted access molecularly imprinted polymers for selective detection of metronidazole in serum | |
| Wang et al. | Molecularly imprinted fluorescent hollow nanoparticles as sensors for rapid and efficient detection λ-cyhalothrin in environmental water | |
| Yan et al. | Characterization and quality assessment of binding properties of malachite green molecularly imprinted polymers prepared by precipitation polymerization in acetonitrile | |
| CN103626920B (zh) | 一种吲哚-3-乙酸分子印迹磁性纤维素微球及其制备方法和应用 | |
| CN109406474A (zh) | 一种检测罗丹明b的聚集诱导发光-分子印迹荧光传感器的制备方法及应用 | |
| CN109142312A (zh) | 一种基于表面增强拉曼光谱的塑化剂领苯二甲酸酯检测方法 | |
| Liang et al. | Molecularly imprinted monolithic column based on functionalized β-cyclodextrin and multi-walled carbon nanotubes for selective recognition of benzimidazole residues in citrus samples | |
| CN107021953A (zh) | 一种香豆素荧光探针和制备方法及其在检测次氯酸根离子上的应用 | |
| CN103694269A (zh) | 一种可检测仲胺的化合物及其制备和应用 | |
| CN101696281B (zh) | 一种具有荧光检测功能的分子印迹微凝胶的制备方法 | |
| CN109030456A (zh) | 一种表面增强拉曼光谱检测基底及其制备方法和应用 | |
| Nazerdeylami et al. | Direct monitoring of diclofenac using a supramolecular fluorescent approach based on β-cyclodextrin nanosponge | |
| CN101613432A (zh) | 一种用于酚的分子印迹聚合物微球及其制备方法和应用 | |
| Yan et al. | Specific “light-up” sensor made easy: An aggregation induced emission monomer for molecular imprinting | |
| CN113249115B (zh) | 一种金属有机框架复合材料的制备及作为比率型荧光探针在检测双氧水和Pi中的应用 | |
| CN105669996B (zh) | 一种热稳定型的二元超分子水凝胶的制备方法和应用 | |
| CN104693363B (zh) | 青蒿琥酯表面分子印迹多孔磁性纤维素微球及其制备方法和应用 | |
| Li et al. | Surface-enhanced Raman spectroscopy detection of organic molecules and in situ monitoring of organic reactions by ion-induced silver nanoparticle clusters | |
| CN102866226B (zh) | 一种使用吡嘧磺隆分子印迹聚合物分析磺酰脲类除草剂的方法与用途 | |
| CN109320537A (zh) | 一种用于面粉和活体内过氧苯甲酰检测的可溶性双光子荧光探针及其制备方法和应用 | |
| Wang et al. | Chemiluminescence imaging assay dipyridamole based on molecular imprinted polymer as recognition material | |
| Fernández et al. | Easy, fast, and clean fluorescence analysis of tryptophan with clays and graphene/clay mixtures | |
| Polo-Luque et al. | Effect of carbon nanotubes on properties of soft materials based on carbon nanotubes–ionic liquid combinations | |
| CN113861973B (zh) | 一种氮磷共掺杂比率荧光碳点及其制备方法和应用 | |
| CN102643218B (zh) | 一种荧光材料及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20110720 Termination date: 20131027 |