CN101679492A - 来自球栗薯的功能性r基因 - Google Patents

来自球栗薯的功能性r基因 Download PDF

Info

Publication number
CN101679492A
CN101679492A CN200880002980.1A CN200880002980A CN101679492A CN 101679492 A CN101679492 A CN 101679492A CN 200880002980 A CN200880002980 A CN 200880002980A CN 101679492 A CN101679492 A CN 101679492A
Authority
CN
China
Prior art keywords
leu
ser
arg
glu
lys
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN200880002980.1A
Other languages
English (en)
Inventor
埃德温·安德里斯·杰拉尔德·范德福森
阿诺马·阿库维·洛科苏
理查德·赫拉尔杜斯·弗朗西斯库斯·菲瑟
埃弗特·雅各布森
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
KWEEK EN RES BEDRIJF AGRICO B
Wageningen Universiteit
Original Assignee
KWEEK EN RES BEDRIJF AGRICO B
Wageningen Universiteit
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by KWEEK EN RES BEDRIJF AGRICO B, Wageningen Universiteit filed Critical KWEEK EN RES BEDRIJF AGRICO B
Publication of CN101679492A publication Critical patent/CN101679492A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
    • C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
    • C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
    • C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
    • C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
    • Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
    • Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
    • Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明涉及一种分离自球栗薯(S.bulbocastanum)的抗性基因以及其功能性同源物或片断。此外，本发明涉及所述抗性基因的应用，例如，所述抗性基因在用来在植物中增加或赋予对卵菌感染的至少部分抗性的方法中的应用。本发明提供了一种分离或重组核酸序列，其包含编码图6中的氨基酸序列之一或其功能性片断或功能性同源物的核酸序列。

Description

来自球栗薯的功能性R基因
本发明涉及分离自球栗薯(S.bulbocastanum)的抗性基因。此外，本发明涉及所述抗性基因例如在克隆功能性同源物中的应用，以及所述(一种或多种)抗性基因在用来在植物中增加或赋予对卵菌感染的至少部分抗性的方法中的应用。更具体地，本发明提供了一种能够增加或赋予对疫霉(Phytophthora)(例如致病疫霉(Phytophthora infestans))的至少部分抗性的抗性基因。
由卵菌致病疫霉引起的晚疫病是全世界马铃薯生产中最严重的疾病之一。它是19世纪中叶爱尔兰马铃薯饥荒的原因，其导致百万人死亡。虽然在控制病原体方面已付出大量努力，但对致病疫霉的化学控制仍然是主要的作物管理战略，然而环境安全正变得更重要并且该病原体有时能够进化而耐化学性。因此，在现代马铃薯品种中引入抗性是控制该疾病的最持久战略。
在上个世纪，墨西哥六倍体物种落果薯(Solanum demissum)被广泛用于马铃薯的晚疫病抗性育种中。起初，描述了源于落果薯的一系列的11R基因。在这些基因中，R1、R2、R3a/b、R6和R7已被定位在马铃薯的基因图谱上。然而，这些R基因赋予种特异性抗性(race-specific resistance)并且那些渗入马铃薯品种中的基因，主要为R1、R2、R3、R4、以及R10，被病原体快速克服。因此，需要抗性的新来源，并且目前，已报道几种其他野生茄属(Solanum)物种，作为抗性的潜在来源，目前其中已有许多得到遗传学表征(表1)。
球栗薯，一种来自墨西哥的自交不亲和二倍体物种，被认为是晚疫病抗性的来源。通过球栗薯(S.bulbocastanum)、无茎薯(S.acaule)、富利亚薯(S.phureja)、以及马铃薯(S.tuberosum)之间的种间桥杂交(bridge cross)已实现球栗薯源抗性的引入(Hermsenand Ramanna，Euphytica 22：457-466，1973)，得到广泛用于马铃薯晚疫病育种的所谓的ABPT材料。另外，Helgeson等人(Theor.Appl.Genet.96：738-742，1998)在球栗薯与培植马铃薯之间形成体细胞杂种(somatic hybrids)。该体细胞杂种形成能育植物(fertile plant)，该能育植物保留了抗性并且可以用于育种。对引起抗性的基因进行分子克隆并随后将该基因引入马铃薯品种中是第三种方法，该方法可以避开先前两种策略中所遇到的许多问题。
迄今为止，已克隆来自球栗薯的两种R基因，在第8号染色体上的等位基因RB和Rpi-blb1(Song et al.Proc.Natl.Acad.Sci 100：9128-9133，2003；van der Vossen et al.Plant Journal 36：867-882，2003)以及在第6号染色体上的Rpi-blb2(van der Vossen et al.PlantJournal 44：208-222，2005)。如表5所示，Rpi-blb1以及Rpi-blb2提供保护以免受多组致病疫霉分离菌(isolates)的影响。直到本发明，没有描述疫霉分离菌可以扩繁于具有(harboring)Rpi-blb1的植物，因此属性‘广谱抗性基因’用来描述由这种基因赋予的保护。然而，如在表5中所披露的，疫霉分离菌99189能够生长在Rpi-blb1植物上，并因此‘中断’抗性，这提示具有种族特异性。
虽然用RB以及Rpi-blb1和Rpi-blb2获得的最初结果是有希望的，但仍然需要另外的R基因。本发明描述了从球栗薯中克隆第三种晚疫病R基因。在种内球栗薯作图群体(mapping population)中，Rpi-blb3基因被定位于第4号染色体上的R基因热点。高度连接于Rpi-blb3的标记用来产生R基因座的物理图谱。靶向包含Rpi-blb3基因座的两种BAC克隆中的一种上存在的两种R基因候选物(RGC)用于互补分析，其中之一证明是功能性Rpi-blb3基因。出人意料地，Rpi-blb3与来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的RPP13具有最高氨基酸序列同一性(34.9％)以及与在茄科(Solanaceae)内先前鉴定的任何R基因具有非常小的同源性。
如表5所示，克隆自球栗薯的3个R基因对于分离菌99177和99189产生差异反应(differential reaction)，因此推断这3种R基因在功能上是不同的。此外，由于较大的序列差异，3种R基因很可能识别来自疫霉的不同效应子(效应物，effectors)。这通过以下事实来证实：Rpi-blb1识别ipiO，而两种其他R基因产物并不识别这种疫霉效应子。
在第一种实施方式中，本发明提供了一种分离或重组核酸序列，其包含一种核酸序列，该核酸序列编码图6的氨基酸序列Rpi-blb3或其功能性片断或功能性同源物，即，如图6所示的氨基序列的功能性片断或功能性同源物。
术语“核酸”是指单链或双链DNA或RNA分子。
还包括本文描述的核苷酸序列的互补序列。
术语“其功能性片断”通常用来指Rpi-blb3蛋白的片断，其能够在茄科家族植物中提供至少部分抗性或增加抗性来抵抗卵菌感染。这样的片断是Rpi-blb3蛋白的截短的变体，如图6所示。Rpi-blb3蛋白的截短的变体/片断是这样的片断，其小于847个氨基酸并且优选包含LRR结构域的更大部分(即，更大部分的富含亮氨酸的重复结构域，其从Rpi-blb3的约氨基酸512延伸到氨基酸827)和/或Rpi-blb3蛋白的N端部分。
术语“功能性同源物”通常用来指本文描述的Rpi-blb3蛋白的变体，该变体能够在茄科家族植物中提供至少部分抗性或增加抗性来抵抗卵菌感染。包括至少部分地保持Rpi-blb3蛋白的效应的人工改变或氨基酸残基替代。例如，某些氨基酸残基可以常规地被具有相当特性的其他氨基酸残基替换，例如，碱性残基被另一种碱性残基替换，酸性残基被另一种酸性残基替换，疏水残基被另一种疏水残基替换，等等。疏水氨基酸的实例是缬氨酸、亮氨酸以及异亮氨酸。苯丙氨酸、酪氨酸以及色氨酸是具有芳族侧链的氨基酸的实例，而半胱氨酸以及蛋氨酸(methonine)是具有含硫侧链的氨基酸的实例。丝氨酸和苏氨酸包含脂族羟基基团并且被认为是亲水的。天冬氨酸和谷氨酸是具有酸性侧链的氨基酸的实例。简言之，术语“其功能性同源物”包括Rpi-blb3蛋白的变体，其中部分氨基酸已常规地被替换并且其至少部分地保持Rpi-blb3蛋白的效应(即，在茄科家族植物中至少部分地提供或增加对卵菌感染的抗性)。还包括在术语“其功能性同源物”中的是同源序列。优选地，这样的同源物在氨基酸水平上具有至少40％同一性。更优选地，氨基酸同源性百分比为至少86％或90％。甚至更优选的是91％、92％、93％、94％或95％的氨基酸同源性百分比。最优选的是96％、97％、98％或99％的氨基酸同源性百分比。
同源核酸序列是编码如上所述同源蛋白的核酸序列。同源蛋白和它们各自的核苷酸序列是，例如，命名为Rpi-abpt、R2-样(R2-like)以及R2的基因，参见图6(氨基酸序列)以及图9-11(核苷酸序列)。
可以例如通过使用计算机程序如BLAST、ClustalW或ClustalX来确定同源性百分比。
多个核酸序列编码如图6所述的100％相同于Rpi-blb3蛋白的蛋白质。这是因为在核苷酸三联体中的第三核苷酸可以变化而不会改变相应的氨基酸(核苷酸三联体中的摆动位置)。因此，在没有影响蛋白质的氨基酸序列的情况下，编码该蛋白质的核苷酸序列可以被改变。然而，在一种优选的实施方式中，本发明提供了一种分离或重组的核酸序列，如图8中所示。用小写字体(2944-5487)突出2544bp的Rpi-blb3编码区。上游2732nt(211-2942)和下游882nt(5488-6370)提供调节序列。在一种优选的实施方式中，本发明提供了一种分离或重组的核酸，其表示Rpi-blb3蛋白的编码序列(CDS)，即，图8的核苷酸2944-5487或其功能性部分或功能性同源物。
可以例如通过利用根癌农杆菌瞬时分析(ATTA)和/或通过利用离体叶片(detached leaf)分析来测试本文描述的Rpi-blb3基因和蛋白质的片断以及同源物的功能性。
实验部分例如描述了一种利用根癌农杆菌瞬时分析(ATTA)来测试候选基因的功能性筛选，借此用包含候选Rpi-blb3同源物的土壤杆菌(Agrobacterium)株系浸润4周龄的野生型本氏烟草(Nicotiana benthamiana)植株。在离体叶片分析中，在浸润后一天随后用对本氏烟草具有毒性的致病疫霉菌株，例如IPO-C或90128激发(challenge)经浸润的叶片。该系统同样适用于测试Rpi-blb3的候选同源性片断。
ATTA测定法利用了瞬时表达。瞬时基因表达是一种高水平表达有用蛋白质的快速、灵活且可重现的方法。在植物中，根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)的重组菌株可以用于瞬时表达已插入到细菌Ti质粒的T-DNA区中的基因。细菌培养物被浸润到叶片中，并在T-DNA转移以后，在植物细胞中存在感兴趣的基因的异位表达。然而，系统的效用受到限制，因为在2-3天以后异位蛋白表达会停止。这表明，转录后基因沉默(PTGS)是这种缺少效能的主要原因。基于基因沉默的病毒编码抑制剂(番茄丛矮病毒(TBSV)的p19蛋白)的共表达的系统可以防止浸润组织中PTGS的发生并允许高水平的瞬时表达。在存在p19的情况下，一定范围的蛋白质的表达被增强50倍或更多，使得可由少至100mg的浸润叶片材料实现蛋白质纯化。尽管，p19的使用明显具有优点，但没有p19的ATTA也可以用来测试候选片断和同源物的功能性。
可替换地，靶向每种候选基因(例如是片断或同源物)构建物，用于转化至易感马铃薯品种，例如底西瑞(Desiree)。在离体叶片分析中利用例如分离菌IPO-0、IPO-C或90128激发初级转化体(primary transformant)。耐抗这些分离菌的转化体具有例如Rpi-blb3的功能性片断或同源物。
在又一种实施方式中，本发明提供了一种载体，该载体包含如本文提供的核酸，即，能够在茄科家族植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的核酸。更具体地，本发明提供了一种载体，该载体包括分离或重组的核酸序列，该分离或重组的核酸序列包含编码图6的氨基酸序列Rpi-blb3的核酸序列或其功能性片断或功能性同源物。本发明还提供了一种载体，该载体包括如图8所示的核酸序列，优选图8的编码序列，即，核苷酸2944-5487。
适宜载体的实例是pBeloBACII、pBINPLUS、pKGW-MG或任何商业上可获得的克隆载体。
如下文将概述的，存在多种方式，其中本发明的核酸可以被转移至植物。转移的一种适宜方式是通过土壤杆菌(Agrobacterium)介导，其中待转移的核酸是二元载体的一部分，因此优选上述载体是二元载体。
本发明进一步提供一种宿主细胞，其包含如本文描述的核酸或如本文描述的载体。优选的宿主细胞的实例是适合于BAC克隆(例如，DH10B)的大肠杆菌(E.coli)细胞或土壤杆菌(宿主)细胞。在另一种实施方式中，所述宿主细胞包括植物细胞。一种优选的植物细胞是源自茄科家族成员的细胞，并且甚至更优选的所述植物细胞包括来自马铃薯(Solanum tuberosum)或番茄(Solanumlycopersicum)，以前称作西红柿(Lycopersicon esculentum)的细胞。由这样的细胞，通过技术人员已知的方法(例如再生方案)可以获得转基因或基因改造植物(例如马铃薯或番茄植物)。
本发明进一步提供了一种如本文所描述的基因改造植物的叶片、块茎、果实或种子或部分或子代。
在又一种实施方式中，本发明提供了一种由本文描述的分离或重组核酸编码的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物。在一种优选的实施方式中，本发明提供了一种由图8中所示的核酸序列编码的蛋白质，优选由核苷酸2944-5487编码的蛋白质。在又一种优选的实施方式中，本发明提供了一种包含图6的氨基酸序列的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物。
本文描述的Rpi-blb3蛋白包含847个氨基酸，而Rpi-blb3的LRR结构域由14个不完全的重复(imperfect repeats)构成(图6)。有趣的是，Rpi-blb3与来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的RPP13蛋白具有最高同源性(表3)(Bittner-Eddy et al.，Plant Journal 21：177-188，2000)。Rpi-blb3的不同结构域与RPP13的相应结构域具有不同程度的同源性(表3)。NBS结构域是最保守的(48.2％氨基酸同一性)，接着是CC结构域(34.4％氨基酸同一性)。LRR结构域保守性最差(21.5％氨基酸同一性)(表3)。在拟南芥中的RPP13基因控制对卵菌病原体寄生霜霉(Hyaloperenospora parasitica)的抗性。
如已经描述的，Rpi-blb3的功能性片断或功能性同源物是能够在茄科家族植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的片断或同源物。
上文已提供了用来测试Rpi-blb3的功能性片断或功能性同源物的功能性的方式。利用这些分析，本发明的发明人，例如通过等位基因挖掘(allel mining)，发现了另外的功能性同源物。这些同源物命名为Rpi-abpt、R2-样以及R2(参见图6)。表5中报道的功能性测试表明这些基因的转基因对于致病疫霉具有抗性。然而，还似乎是，在这些同源物之间可辩别抗性谱的细微差别，尤其是对于致病疫霉分离菌99190、99183以及99189。
基于本文描述的核酸序列，本发明还提供了探针和引物(即，互补于如本文描述的(互补)DNA链之一的寡核苷酸序列)。探针例如可用于Southern或Northern分析，而引物例如可用于PCR分析。基于本文描述的核酸序列的引物对帮助植物育种学家(活跃在传统育种和/或通过基因改造植物的核酸内含物进行育种(优选地所述植物是马铃薯或番茄(Solanum lycopersicum)，以前称作西红柿(Lycopersicon esculentum)的领域中)在选择能够表达Rpi-blb3的植物方面是非常有用的。
因此，在一种进一步的实施方式中，本发明提供了一种结合分子，该结合分子能够结合至如本文描述的核酸或其互补核酸。在一种优选的实施方式中，所述结合分子是引物或探针。如所提及的，这样的结合分子对于植物育种学家是非常有用的，因此本发明进一步提供了一种对于其对卵菌感染的易感性或抗性来选择植物或植物材料或其子代的方法，所述方法包括以下步骤：测试至少部分的所述植物或植物材料或其子代是否存在如本文描述的核酸，例如编码Rpi-blb3的核酸。在一种优选的实施方式中，所述方法进一步包括提供如本文描述的结合分子，如引物或探针。在又一种优选的实施方式中，待测试植物的核酸分离自所述植物，并且使获得的分离的核酸与一种或多种(优选不同的)结合分子接触。可以例如使用PCR分析来测试植物在植物基因组中是否存在Rpi-blb3。
通过技术人员已知的方式，本文描述的Rpi-blb3蛋白还可以用来诱导抗体。因此本发明还提供了一种(特异性地)结合于由本文描述的分离或重组核酸(例如图8的核酸序列以及尤其是核苷酸2944-5487)编码的蛋白质的抗体，或一种(特异性地)结合于如图6所示的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物的抗体。这样的抗体例如可用于蛋白质分析方法如蛋白质印迹或ELISA。
基于本文提供的核酸序列，本发明还提供了在植物中引入或增加对卵菌感染的抗性的方式。因此本发明还提供了一种方法，该方法用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染，其中包括向植物或其部分提供：
-分离或重组核酸序列，其包括一种编码图6的Rpi-blb3氨基酸序列或其功能性片断或功能性同源物的核酸序列，或
-如图8所示的分离或重组核酸序列，或
-载体，其包含本文描述的核酸序列，或
-如本文描述的宿主细胞。
这样的用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的方法涉及将DNA转移到植物中，即，涉及用于转化植物细胞的方法，该方法包括向所述植物细胞提供如本文描述的核酸或如本文描述的载体或如本文描述的宿主细胞。
存在多种方式，其中重组核酸可以被转移至植物细胞，例如土壤杆菌介导的转化。然而，当希望实施本发明时，除了通过土壤杆菌感染之外，还存在有效地将DNA递送至受体植物细胞的其他方式。用于将DNA递送至植物细胞的适宜方法被认为几乎包括可以将DNA引入细胞的任何方法，如通过直接递送DNA如通过原生质体的PEG介导转化、通过脱水/抑制(desiccation/inhibition)介导的DNA摄取(Potrykus et al.，Mol.Gen.Genet.，199：183-188，1985)、通过电穿孔(美国专利第5,384,253号)、通过利用碳化硅纤维进行搅拌(Kaeppler et al.，1990；美国专利第5,302,523号；以及美国专利第5,464,765号)、以及通过DNA涂覆颗粒的加速(美国专利第5,550,318号；美国专利第5,538,877号；以及美国专利第5,538,880号)。通过使用如上述的技术，几乎来自任何植物物种的细胞可以被稳定地转化，并且这些细胞可发展成转基因植物。
在使用土壤杆菌介导的转移的情况下，优选使用基本为毒性(virulent)的土壤杆菌如根癌农杆菌(A.tumefaciens)，如通过菌株A281或由其衍生的菌株或本领域可获得的另一种毒性菌株所举例说明的。这些土壤杆菌菌株携带源自Ti质粒pTiBo542(包含virB、virC以及virG基因)的毒性区的DNA区。根癌农杆菌的毒性(vir)基因产物协调T-DNA的加工以及其转移进入植物细胞。vir基因表达受virA和virG的控制，借此virA在感知诱导信号后通过磷酸化激活virG。VirG又诱导virB、C、D、E的表达。这些基因编码与DNA的转移有关的蛋白质。pTiBo542的增强的毒性被认为是由该Ti质粒上的超毒力(hypervirulent)virG基因引起的(Chenet al.Mol.Gen.Genet 230：302-309，1991)。
在核酸转移到植物或植物细胞中以后，必须确定哪些植物或植物细胞已被提供有所述核酸。这是例如通过利用选择性标记或报告基因来完成的。在最广泛用于植物转化的选择性标记或选择基因中有细菌新霉素磷酸转移酶基因(nptI、nptII以及nptIII基因)，其赋予对选择剂卡那霉素的抗性，其在EP131623中提出，以及在EP186425中提出的细菌aphIV基因，其赋予对潮霉素的抗性。EP275957披露了来自绿色产色链霉菌(Streptomycesviridochromogenes)的乙酰转移酶基因的应用，其赋予针对除草剂草胺膦(phosphinotricin)的抗性。在EP218571中提出了赋予对除草剂草甘膦的相对抗性的植物基因。该抗性是基于编码5-烯醇丙酮莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)的基因的表达，其相对耐受N-磷酸甲基甘氨酸。某些氨基酸如赖氨酸、苏氨酸、或赖氨酸衍生物氨基乙基半胱氨酸(AEC)以及色氨酸类似物如5-甲基色氨酸也可以用作选择剂，这是由于当以高浓度施用时它们能够抑制细胞生长。在该选择系统中，选择性标记基因的表达导致转基因细胞过度产生氨基酸，其允许在选择下转基因进行生长。报告基因的适宜实例是β-葡萄糖苷酸酶(GUS)、β-半乳糖苷酶、荧光素酶以及绿色荧光蛋白(GFP)。
在一种优选的实施方式中，本发明提供了一种用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的方法，该方法包括向植物或其部分提供：
-分离或重组核酸序列，其包括一种编码图6的Rpi-blb3氨基酸序列或其功能性片断或功能性同源物的核酸序列，或
-如图8所示的分离或重组核酸序列，或
-载体，其包含本文描述的核酸序列，或
-如本文描述的宿主细胞，
其中所述卵菌包括疫霉，优选致病疫霉和/或其中所述植物包括来自茄科家族的植物，优选马铃薯或番茄植物。
本发明还提供了一种植物，其可以通过利用如上所述的用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的方法来获得。一种优选的植物是来自茄科家族的植物，并且甚至更优选地所述植物是马铃薯或番茄(Solanum lycopersicum)，以前称作西红柿(Lycopersicon esculentum)。因此本发明还提供了一种植物，该植物已被提供有编码Rpi-blb3蛋白或其功能性片断或功能性同源物的核酸。植物是否已被提供有如本文描述的核酸是例如通过利用探针或引物(其已基于本文描述的核酸序列加以设计)来确定的。还可以使用(特异性地)结合于编码的Rpi-blb3蛋白的抗体。
本发明进一步提供了基因改造的植物的叶片、块茎、果实或种子或部分或子代，其包含一种核酸，该核酸编码图6的Rpi-blb3氨基酸序列或其功能性片断或功能性同源物。
在一种优选的实施方式中，本文描述的核酸被转移至非球栗薯的马铃薯品种中，即本文描述的核酸优选被转移至非球栗薯背景(background)中，优选转移至商业上感兴趣的品种如手指薯(或宾杰，Bintje)、底西瑞(Desiree)或Premiere、斯朋达(Spunta)、Nicola、费乌瑞它(Favorit)、褐色布尔班克(Russet Burbank)、Aveka或Lady Rosetta。
在又一种优选的实施方式中，本文描述的核酸对于宿主细胞是外源的(foreign)。术语“外源的”在本文中用来描述这样的情况，其中本文描述的核酸对于宿主细胞是异源的(即，源于具有不同基因组背景的细胞或生物体)或本文描述的核酸对于所使用的宿主细胞是同源的但位于与所述核酸的天然存在的对应物不同的基因组环境中(例如并不位于自然基因座或位于不同基因之间)。
在又一种实施方式中，本发明提供了一种用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性以抵抗卵菌感染的方法，该方法包括向植物或其部分提供：
-分离或重组核酸序列，其包括一种核酸序列，该核酸序列编码图6的Rpi-blb3氨基酸序列或其功能性片断或功能性同源物，或
-如图8所示的分离或重组核酸序列，或
-载体，其包含本文描述的核酸序列，或
-如本文描述的宿主细胞，
其中所述植物在被提供有核酸(其编码Rpi-blb3或其功能性部分或功能性同源物)以前至少部分地易感于卵菌感染(例如致病疫霉)。植物部分地易感/部分地抗卵菌感染的事实可以是天然存在于所述植物中的基因的结果，但它也可以是已经引入的(其他)抗性基因的结果。
本发明进一步提供了包含编码图6的Rpi-blb3氨基酸序列或其功能性片断或功能性同源物的核酸序列的分离或重组核酸序列的应用；或如图8所示的分离或重组核酸序列的应用；或包含任何所述核酸序列的载体的应用；或包含任何所述核酸序列或所述载体的宿主细胞在向植物提供对卵菌感染的至少部分抗性中的应用。在一种优选的实施方式中，所述卵菌包括疫霉，并且甚至更优选致病疫霉。在又一种优选的实施方式中，所述植物包括马铃薯或番茄(Solanum lycopersicum)，以前称作西红柿(Lycopersiconesculentum)。
在又一种实施方式中，本发明提供了一种用于生产Rpi-blb3蛋白或其功能性片断或功能性同源物的方法，该方法包括将如本文描述的核酸功能性连接于调节序列并使所述核酸可以表达在宿主细胞中。调节序列的实例是启动子和/或终止子序列。
本发明进一步提供了Rpi-blb3的启动子和/或终止子序列(参见图8)。图8示出了克隆Blb25-B2(8461bp)的核苷酸序列，其包含Rpi-blb3基因和调节序列。2544bp的Rpi-blb3编码区用小写字体突出(2944-5487)。上游2732nt(211-2942)和下游882nt(5488-6370)提供调节序列，其确保基因的正确表达。技术人员完全能够克隆所述调节序列(的部分)并测试它们在转录中的效能。
在以下非限制性实施例中将更详细地说明本发明。
实验部分
结果
这里，我们描述了来自马铃薯的第4号染色体上的主要晚疫抗性基因座的Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2-样以及R2的克隆和功能性表征(Park et al 2005a，2005b，2005c；Li et al.1998)。
Rpi-blb3和Rpi-abpt的克隆
为了克隆Rpi-blb3和Rpi-abpt，利用分别源于抗性克隆Blb99-256-3和707TG11-1的DNA构建了两个BAC文库。对于每个文库，获得了大约74000个克隆，其具有85kb的平均插入片段大小，相当于8个基因组当量。起初用SCAR标记Th21(表2)筛选这些文库，分别在1396和1383 F1子代植物的作图群体中与抗性共分离(Park et al.2005)。以这种方式，分别鉴定了BAC克隆Blb22和TG9(图1)。通过对这两种BAC的末端进行测序，开发了新标记(表2)，其用来更精确地限定R基因座的遗传间距以及再筛选BAC文库以鉴定与最初BAC克隆重叠的克隆。以这种方式，Rpi-blb3基因座被限定于0.3cM(Blb22S-Blb25T；4/1396重组体)间距，其物理上被两个部分重叠的BAC克隆Blb22和Blb25所跨越(图1A)。在Rpi-abpt基因座的情况下，鉴定了部分重叠的BAC克隆TG9和TG77。重叠群(或毗连群，contig)的一端与抗性共分离(TG77S)，而另一端定位于邻近Rpi-abpt(TG9S)0.1cM(图1B)。
为了深入了解所研究的R基因座的分子结构，BAC克隆Blb22和TG9被测序至6x覆盖率(coverage)。这揭示了，克隆Blb22并不包含任何R基因同源物(RGH)，而克隆TG9包含两种RGH，其与存在于经测序的番茄BAC克隆AF411807L中的RGH(van derHoeven et al.2002)具有显著的同源性。随后通过PCR分析，对BAC克隆Blb25和TG77筛选RGH特异序列的存在，其中利用引物4-PLOOP-F和4-GLPL-R(表2)，其是通过序列对比克隆AF411807L的RGH序列与在BAC克隆TG9上存在的那些RGH序列而设计的。BAC克隆Blb22、Blb25、TG9以及TG77的Southern分析(其中利用扩增自BAC克隆Blb25的RGH特异性PCR片断作为探针)鉴定了在BAC Blb25和TG9上的最少两种RGH以及在TG77上的一种RGH(图1)。
因此具有8-10kb的随机重叠二元亚克隆的文库由BAC克隆Blb25和TG9产生。利用引物GLO2-F和-R(表2)，对每文库总共1152个克隆筛选RGH的存在。基于PCR片断的限制酶切分析，将RGH阳性亚克隆分为单独的类别，对于Rpi-blb3为Blb3GH-A和Blb3GH-B、对于Rpi-abpt为AbptGH-A和AbptGH-B。在8-13kb亚克隆内确定RGH的相对位置以后，靶向来自每类的候选物，以转化至易感马铃薯品种底西瑞(Desiree)。用亚克隆Blb25-A3、Blb25-B2、TG9-A1以及TG9-B2(分别具有候选物Blb3GH-A、Blb3GH-B、AbptGH-A以及AbptGH-B)进行转化实验，得到许多初级转化体。利用分离菌IPO-0和90128进行的离体叶片分析揭示了，用Blb25-A3、TG9-A1以及TG9-B2转化的所有植物均易感于两种分离菌，但所测试的转基因植物(具有Blb25-B2)中的大多数(7/8)与两种分离菌具有超敏反应(HR)(图2)。鉴于初级转化体(具有Blb3GH-A和Blb3GH-B)之间的差异反应，我们指定Blb3GH-B为Rpi-blb3基因。
为了鉴定Rpi-abpt的另外的候选基因，用TG77S筛选Rpi-abpt特异性BAC文库，导致TG77重叠BAC克隆TG92的鉴定(图1B)。用不同组的用来扩增AbptGH-A、AbptGH-B、Blb3GH-A或Rpi-blb3的引物来筛选这种BAC克隆导致第三Rpi-abpt候选基因，AbptGH-C的鉴定(图1B)，当被转变成特异性标记(AbptGH-C；表2和图1B)时，其也与抗性共分离。利用AbptGH-C扩增子作为探针的DNA印迹分析揭示了克隆TG92仅包含单RGH。基于Rpi-blb3的起始和终止密码子(Blb3-start和Blb3-end，表2)设计的引物随后用来从克隆TG92扩增全长AbptGH-C扩增子，其被克隆到
Figure A20088000298000201
进入载体pDONR221。利用多位点
Figure A20088000298000202
技术，AbptGH-C扩增子随后在2723nt和883nt的Rpi-blb3源启动子和终止子序列之间被克隆到二元pKGW-MG目的载体中，其被克隆到pDONRTM P4-P1R和pDONRTM P2R-P3中(图3)。
利用根癌农杆菌瞬时分析(ATTA)在本氏烟草中进行互补分析，借此用包含pKGW-AbptGH-C的土壤杆菌株COR308浸润(infiltrate)4周龄野生型本氏烟草植株。分别包含原始基因组Rpi-blb3基因构建物和多位点
Figure A20088000298000203
重组的Rpi-blb3基因构建物的二元克隆pBP-Rpi-blb3和pKGW-Rpi-blb3用作阳性对照，而pBP-AbptGH-A用作阴性对照。在离体叶片分析(DLA)中，在两天以后，用致病疫霉菌株PY23或IPO-复合体激发经浸润的叶片。用pKGW-AbptGH-C、pBP-Rpi-blb3以及pKGW-Rpi-blb3浸润的叶片在接种部位产生HR，而野生型叶片和那些用pBP-AbptGH-A浸润的叶片则易感于分离菌PY23。如预期的，所有接种有IPO-C的叶片是易感的(图4)。鉴于这些结果，AbptGH-C是指定的Rpi-abpt。
通过Blb3GH等位基因挖掘来克隆R2和R2-样(R2-like)
Rpi-blb3和Rpi-abpt属于在第4号染色体上的主要晚疫(MLB)抗性基因座，其还具有R2和R2-样(Li et al.，1998；Park et al.，2005c)。鉴于在Rpi-blb3、R2、以及R2-样的基因图谱之间的保守标记次序(marker order)和观测到的等位基因保守性(Park et al.，2005c)、以及Rpi-blb3和Rpi-abpt之间的高序列保守性，我们通过Rpi-blb3等位基因挖掘策略开始克隆R2和R2-样。用来从BAC克隆TG92扩增Rpi-abpt候选基因的相同引物用来从抗性亲代基因型BET95-4200-3(MaR2)和AM3778-16(分别具有R2和R2-样)扩增全长Blb3GH。预计大小的扩增子被克隆到pDONR221中并被完全测序。总计，由AM3778-16获得8种独特的序列(R2-样GH)，而由BET95-4200-3获得19种独特的序列(R2GH)，其中Rpi-blb3和新型Blb3GH之间的氨基酸同一性对于R2-样GH为86.4％至97.3％，而对于R2GH为83.8％至94.2％(表3)。所有可获得的氨基酸序列的系统进化分析，与功能性基因Rpi-blb3和Rpi-abpt一起在进化枝中簇集一种R2-样GH和五种R2GH(图5)。R2-样GH-8的氨基酸序列与Rpi-blb3具有97.3％的氨基酸同一性。R2GH-2、R2GH-8、R2GH-G3、R2GH-D3以及R2GH-65与Rpi-blb3分别具有94.2％、91％、92.6％、89.7％、以及92.8％的氨基酸同一性(表3)。靶向该组候选基因用于功能性分析，并因此在Rpi-blb3启动子和终止子序列之间将其克隆到二元载体pKGW-MG中，如上文针对Rpi-abpt基因所描述的。
在本氏烟草中的瞬时互补分析表明，R2GH-G3和R2-样RGH-8将抗性赋予适当的品种(race)，而R2GH-2、R2GH-8、R2GH-D3以及R2GH-65是非功能性的(图4)。因此R2GH-G3和R2-样GH-8被分别指定为R2和R2-样。
基因结构和功能性
Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2以及R2-样编码2538-2544核苷酸(nt)的ORF，其编码845-847个氨基酸(具有为LZ-NBS-LRR R蛋白特征性的所有识别标志序列)的蛋白质(图6)。有趣的是，关于已知的功能性R蛋白，Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2、以及R2-样与来自拟南芥(Arabidopsis thaliana)的RPP13具有最高同源性(34.9％氨基酸同一性)(Bittner-Eddy et al.，2000)，其赋予对寄生霜霉(Hyaloperenospora parasitica)的抗性。与NBS结构域中的RPP13残基的最高同源性具有49.3％的序列同一性，而与LRR结构域中的RPP 13残基具有最低同一性(34.3％)。Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2、以及R2-样的LRR结构域是高度同源的并且包含14个不完全的重复(图6)。LZ和NBS结构域是更加多态的，R2的那些结构域则是最趋异(或多样化，divergent)的。除LRR2和LRR3之间的序列以外，Rpi-abpt和R2-样是相同的，其中Rpi-abpt包含一段氨基酸，其相同于R2的一段氨基酸。除氨基酸残基774以外，R2的LRR结构域相同于Rpi-abpt的结构域(图6)。
四种功能性基因的核苷酸序列和四种另外的Blb3GH的核苷酸序列的比对以及对信息多态性位点(IPS)(即，其中两种或更多基因携带相同核苷酸的位点(Parniske et al.，1997))的随后分析揭示了基因家族的不同成员之间的序列相关性(或序列联系，sequenceaffiliation)的明显区块(图7)，这表明Blb3RG之间的序列交换事件已参与基因家族的进化(图7)。有趣的是，在5’-末端中观察到的序列相关性，一半基因延伸整个LZ和NBS结构域，而在LRR结构域中的序列相关性提示LRR的特定组合的交换，这强调了R蛋白的模块特性(modular nature)。
为了试图估计观察到的序列交换事件相对于抗性谱的生物相关性，在离体叶片分析中用17种不同的致病疫霉分离菌(表4和5)激发亲本克隆，其具有Rpi-blb3(Blb99-256-3)、Rpi-abpt(707TG11)、R2(BET95-4200-3(MaR2))以及R2-样(AM-3778-16)。对于14种分离菌，所有四种克隆呈现相同的特异性。然而，对于三种分离菌，观察到不同的相互作用(表5)。分离菌99190和99189对于Blb99-256-3、AM-3778-16以及BET95-4200-3(MaR2)是毒性的，但对于707TG11-1则是无毒性的。此外，分离菌99183对于BET95-4200-3(MaR2)和707TG11是毒性的，但对于AM-3778-16和Blb99-256-3则是无毒性的。这些数据表明，所研究的四种基因反映了三种识别特异性，由此Rpi-blb3和R2-like具有相同的抗性谱。当考虑到Rpi-blb3、R2-样与Rpi-abpt之间观察到的序列相关性时，令人感兴趣的是，推测LRR2和LRR3之间的多态序列可以解释Rpi-blb3和R2-样的同等功能性以及R2-like和Rpi-abpt之间的抗性谱的差异。可替换地，四种克隆的不同抗性谱可以反映另外的R基因的存在。
四种功能性基因的氨基酸序列与R2GH-2的非功能性序列的氨基酸序列的比较揭示了，大多数R2GH-2特异性氨基酸集中在LRR11-LRR13的推断的溶剂暴露残基中(图6)，其位于LRR结构域的3’-最大重组区块(recombination block)内(图7)，这表明这些LRR在决定R2特异性中起重要作用。然而，R2特异性溶剂暴露残基的存在对于R2特异性而言并不是足够的，如由非功能性同源物R2GH-D3所说明的，其包含R2特异性LRR11-LRR13序列但在具有LRR3-LRR10的区域中不同于四个功能性基因，其位于LRR结构域的中心重组区块中(图7)。后者观察结果说明，LRR结构域内以及可能在LRR结构域和LZ或NBS结构域之间的推测分子内相互作用在确定功能性Blb3GH的功能性中起关键作用。
材料与方法
植物材料和致病疫霉分离菌
在该研究中，我们使用了四种晚疫抗性克隆Blb99-256-3、707TG11-1、AM3778-16以及BET95-4200-3，其分别具有Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2-样、以及R2。马铃薯栽培品种底西瑞(Desiree)用于转化。野生型本氏烟草(Nicotiana benthamiana)植株用于瞬时互补分析(transient complementation assays)。
在该研究中使用的致病疫霉分离菌的特征及起源示于表4中。
BAC文库构建
克隆Blb99-256-3和707TG11-1用作构建BAC文库的DNA来源。如由Rouppe van der Voort等人(1999)所描述的，进行高分子量DNA制备和BAC文库构建。每个文库获得具有相当于8个基因组当量的85kb的平均插入片段大小的大约74000个克隆。BAC克隆被存储为包含大约700至1000个白色菌落的细菌池。利用无菌玻璃涂布器，通过从琼脂平板将菌落刮到包含18％甘油和12.5μg ml-1氯霉素的LB培养基中来产生这些白色菌落。这些所谓的超级池(super pools)被存放在-80℃下。首先通过利用标准碱裂解方案从每个池分离质粒DNA而完成BAC文库的标记筛选，然后进行PCR以鉴定阳性池。稀释对应于阳性池的细菌并平皿接种在包含氯霉素(12.5μg ml-1)的LB琼脂平板上。单独的白色菌落被挑选到384孔微量滴定板中，随后通过标记筛选来鉴定单阳性BAC克隆，如由Rouppe van der Voort等人(1999)所描述的。分离自超级池的BAC克隆的名称带有前缀Blb(例如，Blb25)或TG(例如，TG9)。
候选基因的亚克隆
如下从BAC克隆BLB25和TG9中亚克隆候选RGA。用0.03U的Sau3Al限制酶对大约1微克BAC DNA等分试样消化10分钟。在室温下、在0.5X TAE中利用1-10秒的线性增加脉冲时间以及90V cm-1的场强，使部分消化的BAC DNA经受电泳6小时。在电泳以后，用溴化乙啶染色琼脂糖凝胶以定位包含大约10Kbp大小的DNA片断的凝胶的区域。从凝胶切除该区域并按照制造商说明用GELASE(Epicentre Technologies，USA)进行处理。将所选大小的DNA连接至BamH1消化且去磷酸化的二元载体pBINPLUS(VanEngelen et al.，1995)，接着转化至ElectroMAX大肠杆菌DH10B感受态细胞(Life technologies，UK)。
易感马铃薯品种的转化
将具有候选基因的二元质粒转化至根癌农杆菌(A.tumefaciens)菌株COR308(Hamilton et al.，1996)。在证实了它们在土壤杆菌中的稳定性以后，这些克隆被转化到易感马铃薯品种底西瑞(Desiree)。经转化的根癌农杆菌菌株的过夜培养物用来转化来自体外生长植物的节间插条(internodal cuttings)(Heilersig，H.J.Bet al.，2006)。总共200个外植体用于每次转化。将初级转化体(primary transformants)转移至温室。
DNA测序和计算机分析
利用鸟枪法克隆策略进行BAC克隆测序。利用染料终止循环测序反应试剂盒(Perkin-Elmer，Pt Biosystem，Warrington，UK)、M13通用正向和反向引物、以及ABI377自动测序仪(Applied Biosystem，La Jolla，CA，USA)进行测序反应。利用ATADEN序列和分析程序(Dear and Staden，1991)拼接序列重叠群。
利用引物移步策略(700bp×700bp)对二元亚克隆进行测序。利用FGENESH++(Softberry)对基因结构进行预测。利用CLUSTALX 1.81(Thompson et al.，1997)进行多序列比对。利用局部相似性基本查询工具(BLAST)对Rpi-blb3的同源基因进行搜索。利用Swiss-Prot(InterProScan，EMBL-EBI，ExPASy，SAPS)鉴定保守结构域。
抗性测定
离体叶片分析用来确定初级转化体和本氏烟草叶片的抗性表型。对于互补分析，用分离菌IPO-0和90128测试初级转化体(图2)。如由Vleeshouwers和合作者(1999)所描述的，进行接种物制备和接种。接种后6天，确定植物表型。在接种点没有呈现症状或局部坏死的叶片评价为抗性而那些具有明显孢子形成病变(sporulating lesion)的叶片评价为易感。
在本氏烟草中的瞬时互补
对本氏烟草进行土壤杆菌瞬时转化分析(ATTA)。在补充有5mg/L四环素和50mg/L卡那霉素(用于COR308构建物)的LB培养基(1升MQ水中10克细菌蛋白胨、10克NaCl以及5克酵母提取物)中生长重组根癌农杆菌培养物。在一天或两天以后，对于所有菌株，将计算量的培养物(根据在600nm处的OD 0.5)转移到补充有卡那霉素的YEB培养基(1升MQ水中5克牛肉提取物、5克细菌蛋白胨、5克蔗糖、1克酵母提取物、2ml 1M MgSO4)中。在一天以后，将过夜细胞以3500rpm离心，然后再悬浮在补充有1ml 200mM乙酰丁香酮的MMA培养基(20克蔗糖、5克MS盐以及1.95克MES)中至最终OD为0.2并借助于3ml注射器浸润进入4周龄植物。在两天以后，在离体叶片分析(DLA)中随后用致病疫霉菌株IPO-复合体和PY23激发(或挑战，challenge)经浸润的叶片。接种后的第4至第8天对超敏反应(HR)或致病疫霉(P.infestans)孢子形成进行评价。
等位基因挖掘
基于Rpi-blb3序列设计32个核苷酸的引物，其中正向引物开始于起始密码子(ATG)，而反向引物开始于终止密码子(TGA)。包含Rpi-abpt的BAC克隆TG92-4-H3以及亲本克隆AM3778-16和BET95-4200-3(分别包含R2-样和R2)的基因组DNA用作长链PCR反应(95℃：2’40”，30X[94℃：20”，56.8℃：25”，64.3℃：7’]，64.3℃：25’)中的模板，其中使用高保真DNA聚合酶
Figure A20088000298000271
(Stratagene)。在琼脂糖凝胶上分离PCR产物并利用来自Qiagen的QIAquick GelExtraction Kit(凝胶提取试剂盒)进行纯化。按照由Untergasser等人描述的程序，将经纯化的Blb3GH池与供体质粒pDONR 221一起用于BP反应(http://www.untergasser.de/lab/protocols/bp_gateway_reaction_ii_vl_ 0.shtml)。BP反应产物被转移到DH10B大肠杆菌感受态细胞中，随后被平皿接种在包含适当抗生素的LB琼脂平板上。在包含适当抗生素的LB液体上/中培养经转化的克隆并利用由Sambrook等人(第2版)改进的标准微量制备方案分离质粒DNA，其中利用来自Qiagen的P1、P2、P3溶液。借助于多个LR反应，将具有候选Blb3GH的克隆克隆到二元表达载体pKGW-MG(在Rpi-blb3调控元件之间)中，其中利用具有Rpi-blb3启动子的pDONR-P4P1R质粒、具有Rpi-blb3终止子的pDONR-P2RP3质粒、以及具有感兴趣的候选基因的pDONR221质粒。在通过限制酶切分析检查构建物的完整性以后，即将具有感兴趣的基因的pKGW-MG质粒转移至大肠杆菌，并且随后转移到适当的根癌农杆菌菌株，例如，COR308或AGL1中。
表
表1.关于野生茄属(Solanum)物种所报道的针对晚疫抗性的R基因和数量性状基因座
野生物种                      基因座类型或名称     染色体
腺毛薯(S.berthaultii)         QTL(4)               I、III、VII以及XI
                              Rpi-ber1             X
                              Rpi-ber2             VII
球栗薯(S.bulbocastanum)       RB/Rpi-blb1          VIII
                              Rpi-blb2             VI
                              Rpi-blb3             IV
S.caripense                   QTL(2)               未指定
落果薯(S.demissum)            R1                   V
                              R2                   IV
                              R3，R6，R7           XI
                              R3a                  XI
                              R3b                  XI
                              R5-R11               XI
                              R10，R11             XI
小拱薯(S.Microdontum)         QTL(3)               IV、V以及X
                              QTL                  未指定
S.mochiquense                 Rpi-mcq1             IX
                              (Rpi-mocl)
S.paucissectum                QTL(3)               X、XI以及XII
富利亚薯(S.phureja)           Rpi-phu1             IX
S.pinnatisectum               Rpi-pnt1             VII
                              (Rpi1)
芽叶薯(S.Vernei)               QTL(多个)           VI、VIII、IX
与马铃薯(S.tuberosum)的杂交种  Rpi-abpt            IV
                               R2-样(R2-like)      IV
                               QTL(多个)           多个
                               QTL                 IV
表2.用于定位和克隆的标记和引物的概述
                                                               酶b
标记       类型    PCR引物(5′至3′)                     Tma   (Enzymeb)
Th21       SCAR    F：ATTCAAAATTCTAGTTCCGCC                    a.s.
                   R：AACGGCAAAAAAGCACCAC
Blb22-S    CAPS    F：GTTTGATGTATGTTTGTTCTTGC             56   Msp1
                   R：TAATGCACTAATAACTAACTAGG
Blb22-T    SCAR    F：CTTTATTAGTTCCAAGAGCTAC              56
                   R：ACCCATCCCTTTTTCCTTATC
Blb25-S    CAPS    F：ACAGATGCTACGTCCATCAC                56   Alu1
                   R：CTCCACATGCGATGCAAAAAG
Blb25-T    CAPS    F：TTTCGATTATGGTGAGCCTTC               56   Hpy 188
                   R：TAGAAAAAGGGTGGTTGTGAC
RGH引物
RGH1       CAPS    F：GGSAAGACCACTCTTGCAAG                50   HpyCH4IV
                   R：GGTTTTTAAGCTGCTAATGTTG
RGH2       SCAR    F：GGSAAGACCACTCTTGCAAG                50   a.s.
                   R：TGGTYATAATYACTCTGCTGC
RGH3       CAPS    F：ATGRCTGATGCMTTTRTGTC                50   HaeII1
                   R：CCYAAGTASAGAAAACACTGC
4-PLOOP            F：GGiATGGGiGGiYTiGGiARGAC             68
4-GLPL             R：TACiACAATiGCAAGiGGTAAMCC
4-GLO2             F：GTGTCTCTCAAGAGTACAACAC              56
                   R：GCTCGAACATCAAGTAGTTTCC
Blb3-开始
(Blb3-start)       F：ATGGCTGATGCCTTTCTRTCATTTG           55
Blb3-结束
(Blb3-end)         R：TCAGGAATCTCCTTTAAATTTGGAC
Blb3-启动子
(Blb3-prom)        F：TCTTCCTTAGCATTCGTAGC                55
                   R：CTTTAGGAATACTAGTTTTGATTG
Blb3-终止子
(Blb3-ter)         F：AGCTTTTCTGCCAAGCACATTGG             55
                   R：GTACCCTCCGTTTGTCGTTTGATC
Blb3-LRR-1-8       F：CTCTTTATGTATCAGACATGGC              55
                   R：CAACATCTTTCCACTGATCAC
Blb3-启动子-结束
(Blb3-prom-end)    F：CCCCAAGTTGTATAATGGTTG               55
Blb3-orf-bg        R：TGCTTGAGTGATTGAATCTCC
Sto-orf-bg         R：GGCCATATTCAGACTGGGAG
Blb3-spe           F：AGCTTTTTGAGTGTGTAATTGG              55
                   R：GTAACTACGGACTCGAGGG
Figure A20088000298000301
表4在该研究中使用的致病疫霉分离菌的特性、以及它们的推测毒性分布。
  分离菌   年   地理起源   交配型   获自   毒性谱
  90128   1990   Geldrop，荷兰   A1   Govers，Phytopathology WUR   1.3.4.7.8.11
  USA618   未知   托卢卡山谷，墨西哥   A2   Bill Fry，Cornell，USA   1.2.3.6.7.11
  89148-09   1989   荷兰   Govers，Phytopathology WUR   0
  IPO-0   荷兰   Kessel，PRI，WUR   0
  IPO-C   Kessel，PRI，WUR   1.2.3.4.6.7.10.11
  VK98014   1998   Veenkolonién，荷兰   A1   Kessel，PRI，WUR   1.2.4.11
  Dinteloord   Dinteloord，荷兰   Kessel，PRI，WUR   1.2.4
  EC1   厄瓜多尔   Birch，SCRI，Scotland   3.4.7.11
  F95573   1995   Flevoland，荷兰   A1   Govers，Phytopathology，WUR   1.3.4.7.10.11
  IPO-428-2   1992   埃德，荷兰   A2   Kessel，PRI，WUR   1.3.4.6.7.8.11
  Katshaar   Katshaar，荷兰   Kessel，PRI，WUR   1.3.4.7.10.11
  PIC 99177   1999   Metepec，墨西哥   Kessel，PRI，WUR(Flier et al.，2002)   2.7
  PIC 99183   1999   Metepec，墨西哥   Kessel，PRI，WUR(Flier et al.，2002)   1.3.7
  PIC 99189   1999   Metepec，墨西哥   Kessel，PRI，WUR(Flier et al.，2002)   1.3.4.7.8.10
  PIC 99190   1999   Metepec，墨西哥   Kessel，PRI，WUR(Flier et al.，2002)   1.3.4.7
  PY23*   1999   GGO   Govers，Phytopathology，WUR   1.3.4.7
*PY23：野生型致病疫霉分离菌88069的不产生INF-1的衍生物(Kamoun etal；1998；van West et al；1999)。
附图说明
图1.Rpi-blb3(A)和Rpi-abpt(B)基因座的基因和物理图谱。示出了标记的相对位置、在标记之间鉴定的重组体的数目、跨越R基因座的重叠BAC克隆、以及候选基因(Blb3GH和AbptGH)的相对位置，其靶向用于互补分析。
图2.晚疫易感性的遗传互补。用致病疫霉(Phytophtorainfestans)分离菌90128的孢囊孢子悬浮液接种后8天的典型疾病表型。
Blb-99-256-3：抗性亲本克隆；栽培种底西瑞(cv.Desiree)：用于转化的马铃薯栽培种；Blb25A-2-4和Blb25A-2-5：具有RGH-Blb25A的初级转化体；Blb25B-2-1和Blb25B-2-2：具有RGH-Blb25B的初级转化体(Rpi-blb3)。
图3.用来克隆Rpi-abpt、R2以及R2-样的Gateway策略。携带DNA片断Rpi-blb3启动子、候选基因、以及Rpi-blb3终止子的三种进入克隆与多位点Gateway目的二元载体pKGW-MG的LR重组，导致功能性基因表达克隆。
图4.在本氏烟草(Nicotiana benthamiana)叶片中的瞬时互补。在用致病疫霉分离菌IPO-0(无毒性)、90128(无毒性)以及IPO-C(除Rpi-sto之外，对所有都是毒性的)的孢囊孢子悬浮液接种后7天的典型疾病表型。
对照：野生型本氏烟草(wt N.benthamiana)；pBP-Rpi-blb3：基因组Rpi-blb3基因构建物；pKGW-Rpi-blb3、-abpt、-R2-样、-R2、Rpi-stol：多位点Gateway基因构建物，其中通过Rpi-blb3启动子和终止子序列来调节基因表达。
图5.系统树，该系统树基于Rpi-blb3、Rpi-blb3基因同源物的氨基酸序列，其扩增自晚疫抗性马铃薯克隆，这些克隆具有Rpi-abpt(AbptGH)、R2-样(R2-样GH)或R2(R2GH)、存在于番茄BAC克隆AF411807、RPP13-Nd以及Rpi-blb1上的RGH。框中的是包含Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2以及R2-样的簇。
图6.Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2-样、R2、以及非功能性R2基因同源物R2GH-2的氨基酸序列比对。示出了Rpi-blb3和同源物的全氨基酸序列。示出的是14个LRR重复(1-14)，其中以粗体示出了亮氨酸(样)残基。
图7.Rpi-blb3基因同源物之间的序列相关性分析。示出的仅是7种Rpi-blb3同源物(包括Rpi-blb3、Rpi-abpt、R2以及R2-样)的核苷酸序列的信息多态性位点(IPS)。在每列顶部的垂直数字表明在全共有序列(full consensus sequence)中对应的核苷酸位置。突出的是不同于Rpi-blb3序列的IPS。在底部示出的是结构域，每个IPS源于此(LZ、NBS或LRR)，以及四个推测的重组区块(区域A-D)的相对位置。
图8.克隆Blb25-B2(8461 bp)(包含Rpi-blb3基因和调节序列)的核苷酸序列。以小写字体(2944-5487)突出2544 bp的Rpi-blb3编码区。上游2732 nt(211-2942)和下游882 nt(5488-6370)提供调节序列。
图9.Rpi-abpt的cds的核苷酸序列。
图10.R2的cds的核苷酸序列。
图11.R2-样的cds的核苷酸序列。
参考文献
Bendahmane，A.，Kanyuke，K.and Baulcombe，D.C.1997.High-resolution genetical and physical mapping of the Rx gene forextreme resistance to potato virus X in tetraploid potato.Theor ApplGenet 95：153-162.
Bittner-Eddy et al.，2000.RPP13 is a simple locus in Arabidopsisthaliana for alleles that specify downy mildew resistance to differentavirulence determinants in Perenospora parasitica.The Plant Journal 21，177-188.
Hamilton，C.M.，A.Frary，C.Lewis，and S.D.Tanksley.1996.Stable transfer of intact high molecular weight DNA into plantchromosomes.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93：9975-9979.
Heilersig，H.J.B.；Loonen，A.E.H.M.；Bergervoet-van Deelen，J.E.M.van；Wolters，A.M.A.；Visser，R.G.F.(2006)Post-transcriptionalgene silencing of GBSSI in potato：effects of size and sequences of theinverted repeats.Plant Molecular Biology 60(2006)5.-ISSN0167-4412-p.647-662.
Helgeson，J.P.，Pohlman，J.D.，Austin，S.，Haberlach，G.T.，Wielgus，S.M.，Ronis，D.，Zambolim，L.，Tooley，P.，McGrath，J.M.，James，R.V.and Stevenson，W.R.1998.Somatic hybrids between Solanumbulbocastanum and potato：a new source of resistance to late blight.Theor Appl Genet 96：738-742.
Hermsen，J.G.T.H.and Ramanna，M.S.1973.Double-bridgehybrids of Solanum bulbocastanum and cultivars of Solanumtuberosum.Euphytica 22：457-466.
Li，X.，Van Eck，H.J.，Rouppe van der Voort，J.N.A.M.，Huigen，D.J.，Stam，P.and Jacobsen，E.1998.Autotetraploids and geneticmapping using common AFLP markers：the R2 allele conferringresistance to Phytophthora infestans mapped on potato chromosome 4.Theor Appl Genet 96：1121-1128.
Michelmore，R.W.，Paran，I.and Kesseli，R.V.1991.Identificationof markers linked to disease-resistance genes by bulked segregantanalysis：A rapid method to detect markers in specific genomic regionsby using segregating populations.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：9828-9832.
Park T.-H.，Vleeshouwers V.G.A.A.，Hutten R.C.B.，van Eck H.J.，van der Vossen E.A.G.，Jacobsen E.and Visser R.G.F.2005aHigh-resolution mapping and analysis of the resistance locus Rpi-abptagainst Phytophthora infestans in potato.Molecular Breeding 16，33-39.
Park T.-H.，Vleeshouwers V.G.A.A.，Huigen D.，van der VossenE.A.G.，van Eck H.J.and Visser R.G.F.2005b.Characterization andhigh-resolution mapping of a late blight resistance locus similar to R2in potato.Theoretical and Applied Genetics 111，591-597.
Park T.-H.，Gros J.，Sikkema A.，Vleeshouwers V.G.A.A.Muskens M.，Allefs S.，Jacobsen E.，Visser R.G.F.and van der VossenE.A.G.2005c.The late blight resistance locus Rpi-blb3 from Solanumbulbocastanum belongs to a major late blight R gene cluster onchromosome 4 of potato.Molecular Plant-Microbe Interactions 18(7)，722-729.
Rose，L.E.，et al..2004.The maintenance of extreme amino acidresistance diversity at the disease resistance gene RPP13 in Arabidopsisthaliana.Genetics 166，1517-1527.
Rouppe van der Voort，J.，Kanyuka，K.，Van der Vossen，E.，Bendahmane，A.，Mooijman，P.，Klein-Lankhorst，R.，Stiekema，W.，Baulcombe，D.and Bakker，J.1999.Tight physical linkage of thenematode resistance gene Gpa2 and the virus resistance gene Rx on asingle segment introgressed from the wild species Solanum tuberosumsubsp.andigena CPC 1673 into cultivated potato.MPMI 12：197-206.
Sandbrink，J.M.，Colon，L.T.，Wolters，P.J.C.C.and Stiekema，W.J.2000.Two related genotypes of Solanum microdontum carry differentsegregating alleles for field resistance to Phytophthora infestans.Molecular Breeding 6：215-225.
van der Hoeven，R.，Ronning，C.，Giovannoni，J.，Martin，G.andTanksley，S.2002.Deductions about the number，organization，andevolution of genes in the tomato genome based on analysis of a largeexpressed sequence tag collection and selective genomic sequencing.The Plant Cell 14：1441-1456.
van der Vossen，E.A.，Sikkema，A.，Hekkert，，B.T.L.，Gros，J.，Stevens，P.，Muskens，M.，Wouters，D.，Pereira，A.，Stiekema，W.J.andAllefs，S.2003.An ancient R gene from the wild species Solanumbulbocastanum confers broad-spectrum resistance to Phytophthorainfestans in cultivated potato and tomato.Plant Journal 36：867-882.
van der Vossen，E.A.，Gros，J.，Sikkema，A.，Muskens，M.，Wouters，D.，Wolters，P.，Pereira，A.and Allefs，S.2005.The Rpi-blb2gene from Solanum bulbocastanum is an Mi-1 gene homologconferring broad-spectrum late blight resistance in potato.Plant J.44：208-222.
van Engelen，F.A.，Molthoff，J.W.，Conner，A.J.，Nap，J.-P.，Pereira，A.and Stiekema，W.J.(1995)pBINPLUS：an improved planttransformation vector base don pBIN19.Trans.Res.4，288-290.
Vleeshouwers，V.G.A.A.，van Dooijweert，W.，Paul Keizer，L.C.，Sijpkes，L.，Govers，F.，Colon，L.T.1999. A laboratory assay forPhytophthora infestans resistance in various Solanum species reflectsthe field situation. Eur. J. Plant Pathol. 105：241-250.
Voinnet，O.，Rivas，S.，Mestre，P.，and Baulcombe，D.2003.Anenhamced transient expression system in plants based on suppression ofgene silencing by the p19 protein of tomato bushy stunt virus.The PlantJournal 33，949-956.
Vos，P.，Hogers，R.，Bleeker，M，Reijans，M，van de Lee，T.，Hornes，M.，Frijters，A.，Pot，J.，Peleman，J.，Kuiper，M.and Zabeau，M.1995. AFLP：a new technique for DNA fingerprinting. Nucleic AcidsResearch 23(21)：4407-4414。
序列表
<110>瓦赫宁根大学(Wageningen Universiteit)
阿格里高培植及研究有限公司(Kweek-en Researchbedrijf Agrico B.V.)
<120>来自球栗薯的功能性R基因
<130>P27052VERE
<140>PCT/NL2008/050050
<141>2008-01-28
<150>EP 07101270.2
<151>2007-01-26
<160>36
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>1
attcaaaatt ctagttccgc c                                                 21
<210>2
<211>19
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>2
aacggcaaaa aagcaccac                                                    19
<210>3
<211>23
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>3
gtttgatgta tgtttgttct tgc                                               23
<210>4
<211>23
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>4
taatgcacta ataactaact agg                                            23
<210>5
<211>22
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>5
ctttattagt tccaagagct ac                                             22
<210>6
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>6
acccatccct ttttccttat                                                21
<210>7
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>7
acagatgcta cgtccatcac                                                20
<210>8
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>8
ctccacatgc gatgcaaaaa g                                              21
<210>9
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>9
tttcgattat ggtgagcctt c                                              21
<210>10
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>10
tagaaaaagg gtggttgtga c                                           21
<210>11
<211>23
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<220>
<221>modified_base
<222>(3)..(3)
<223>I
<220>
<221>modified_base
<222>(9)..(9)
<223>I
<220>
<221>modified_base
<222>(12)..(12)
<223>I
<220>
<221>modified_base
<222>(15)..(15)
<223>1
<220>
<221>modified_base
<222>(18)..(18)
<223>I
<400>11
ggaatgggag gaytaggaar gac                                        23
<210>12
<211>24
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<220>
<221>modified_base
<222>(4)..(4)
<223>I
<220>
<221>modified_base
<222>(10)..(10)
<223>I
<220>
<221>modified_base
<222>(16)..(16)
<223>I
<400>12
tacaacaata gcaagaggta amcc     24
<210>13
<211>22
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>13
gtgtctctca agagtacaac ac       22
<210>14
<211>22
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>14
gctcgaacat caagtagttt cc       22
<210>15
<211>25
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>15
atggctgatg cctttctrtc atttg    25
<210>16
<211>25
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>16
tcaggaatct cctttaaatt tggac    25
<210>17
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>17
tcttccttag cattcgtagc          20
<210>18
<211>24
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>18
ctttaggaat actagttttg attg     24
<210>19
<211>23
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>19
agcttttctg ccaagcacat tgg      23
<210>20
<211>24
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>20
gtaccctccg tttgtcgttt gatc     24
<210>21
<211>22
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>21
ctctttatgt atcagacatg gc       22
<210>22
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>22
caacatcttt ccactgatca c    21
<210>23
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>23
ccccaagttg tataatggtt g    21
<210>24
<211>21
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>24
tgcttgagtg attgaatctc c    21
<210>25
<211>20
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>25
ggccatattc agactgggag       20
<210>26
<211>22
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>26
agctttttga gtgtgtaatt gg    22
<210>27
<211>19
<212>DNA
<213>人工
<220>
<223>引物
<400>27
gtaactacgg actcgaggg        19
<210>28
<211>8461
<212>DNA
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<220>
<221>CDS
<222>(2944)..(5487)
<400>28
gatcaaaaac ggattcgggg agtgaaaagc ttaccgttag cctcaagaac gatggaaaac  60
tatcaagagt cgtctggggt tcgttcctta gctctaaaaa tcgaaaagtg cagaataaag  120
acgttttgag gcttatttac gcactacaaa aaaatcatat attgctgcaa aatttgttgt  180
agctaaatat gaaaatttcc atggctaaac ttcaatattt tcttccttag cattcgtagc  240
aagatatagc atggctaaaa gttagctaca aactttacat ggttcatggc tgagaactaa  300
tatctattgc tacaaaattt ttgagttgta gctgtactga taaaaagttt ttgccacaca  360
aaatatatat atatatatag caaataactt tattcttttg ccacgtcaaa aatgatttat  420
agttgtcttt ttagatgcag ccacaaagct attacattgt agcaacatat ttaatttggt  480
ttccatgtaa acagaaattt gtagctattt gtatagctta gtcacgtggc aatagtactc  540
gtatttagtt atgactatta aaattcatgg caataacatg aagtatttac cacaagcatt  600
ttcgaattat agctaaaatt catatcttta gccatgaata tatataattt tagctaaaaa  660
tccatttgct acgaaagtca aaatttatat acatgttttt ttacgtgata tatatagaaa  720
atttgttgca ttcaatatat aattccatta ttattagaga ttttttcgca agctttatta  780
gttccaagag ctacataatg tagctatgaa ttaattttta agatttcaaa acacttccta  840
aattacgtat aattacaatt tacaatttta aaaatagttc taattatata taactcatgt  900
aatacactat cttgtttgag tacaaagcag tatagtcttc tcttatttct ccttccacaa  960
cgttcaattg aatcttagct tgatttacac cgatcttgtc atttagatgc tttaactcca  1020
ttgatatacc tatcaaaatg atgaagtatt tcaacaccaa caatcattac caactaatta  1080
tagatgagag tgtgtgttat ataatatttc aagaagacaa caaatttatt tatatatata  1140
tcattagcta aaaaatttga aagatacaaa caaaaatatg caagaaaaaa aagtaaacaa  1200
atctataaac ttttatttct taaaataatg ttcacctcaa ttgtgacatt tttggcggtt  1260
tgcgaattat gactcctctc aacactattt aaattttaaa atcttcacaa tctgctcata  1320
aataagatgt aatatttttt aaaagatcta aaataatcta aacccaaaaa tctaagtcaa  1380
ataagtgaaa cataaattcg aaaattgtaa ataagaagat atgaacatgc cttgaatata  1440
aaaaaaccac aaaaagaaat tagcaaaaca ttctacattt tgaaatgcca aagtcttctc  1500
tctcaacatt tatctcttga gcaagaagat ttccatgtaa acttcatgtc ctttacttta  1560
agcattactt ccgatattgt tcttaccttt gtcaaggaac ctagtccatt gacctatggt   1620
ggacacagat aagctaacaa catttaatac cctaactacc attaccacaa caggtagagt   1680
acgctgaatt tttctaagtt gtgtcaccat ttaaaggaca aaaatgactc aagagtaaaa   1740
tcaatgaagc atttgctgca ggcctccaaa agttttatcg atatattttt ttttaataat   1800
ttgctcgttc ttccaaatca gttgaaactt gagttgttaa aattgatttg gtacgtctgg   1860
attttttttc aaataatacc gctccatcaa atttagatta atatgatgta atatgcacaa   1920
ttagaattgc ggacaattgt aaccaattta atgaattcaa aattatttca ttgtaacaag   1980
caaatagtaa aaaataaaat tattattatg aacaaataaa aagggacaag gcataagtac   2040
tctcctagac tatgactgaa atctcagaaa cacacataaa cttaactagg gtcctattac   2100
cccctaaact aatttaaaat ggaataaata caccacaaac ggtgacatga catagagagt   2160
gtacacactc tattgaaggc aattgattag tgcacaaatt ggacacatgt cattttttta   2220
ttgataactt tattattagt tagtacacat atttattgat aataaaaatt atatatatat   2280
aattattttt atttctttct ttgtaaaata tttattttaa tttcttttta ctttaaactt   2340
ttttttattt aatttattat gttttcactt ttgattattt aaaaaaaatt tatgtgtatt   2400
ttttaaaaaa gtaattttaa agtgtccttt aattttaatg ttttaacttt tttatgtttt   2460
atttgaattt cttcacttat tttaatatcc gttcaattta atgaatccta aattatttca   2520
ttgtaacaag taaatagaaa aaaataaaat aagtcttatg aagaaataaa aacaaatata   2580
ttttttccac aagttgtgta atgattgttg aagatgcttc cattttttaa atcttttctc   2640
aatatatatt ttccacaagt tgtgcaatga ttgctgaagt tgctttattg ttttaagact   2700
tttctctata tgtgtttttc cccaagttgt ataatggttg ttgaagatgc tttaattaaa   2760
aaaaaaaacc ttttgtttag tggaaaattt caaaaagctt tagtacatct ttgtcgtttt   2820
atccaatcgt aattctttat tcagaaacca catgtttttt ttctaatctt acttttatgt   2880
ctatcaccca ttttccaata tacagcctac tctttttttc aatcaaaact agtattccta   2940
aag atg gct gat gcc ttt cta tca ttt gca gtt caa aaa ttg ggt gat     2988
    Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp
    1               5                   10                  15
ttc cta ata cag aaa gtt tcc ctg cgt aaa agt ctc aga gat gaa att     3036
Phe Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile
            20                  25                  30
aga tgg ctg ata aat gag cta ctc ttc ata cgg tct ttc ctc aga gat     3084
Arg Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp
        35                  40                  45
gca gaa caa aag cag tgc gga gat caa aga gtt caa caa tgg gtg ttt     3132
Ala Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe
    50                  55                  60
gag atc aac tct att gct aat gat gct gtt gct ata ctc gag act tat     3180
Glu Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr
    65                  70                  75
agc ttt gag gct ggt aaa ggt gct agt cgt ctc aag gct tgc act tgc      3228
Ser Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys
80                  85                  90                  95
ata tgt agg aag gag aag aaa ttc tac aat gtt gcc gag gag att caa      3276
Ile Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln
                100                 105                 110
tca ctc aag caa cga atc atg gat atc tct cgc aaa cga gag act tat      3324
Ser Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr
            115                 120                 125
ggt att aca aat atc aat tat aat tca gga gaa agg cca agt aat cag      3372
Gly Ile Thr Asn Ile Asn Tyr Asn Ser Gly Glu Arg Pro Ser Asn Gln
        130                 135                 140
gtt aca aca ttg agg aga act acc tca tat gta gat gaa cag gat tac      3420
Val Thr Thr Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr
    145                 150                 155
att ttt gtt ggc ttt cag gat gtt gta caa aca ttg cta gct caa ctt      3468
Ile Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Leu Leu Ala Gln Leu
160                 165                 170                 175
ctg aaa gca gag cct cgt cga agc gtc ctc tcc att tat gga atg ggg      3516
Leu Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly
                180                 185                 190
ggt tta ggc aag acc act ctt gcc aga aaa ctt tac acc agt cct gat      3564
Gly Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp
            195                 200                 205
ata ctc aat agc ttt cct aca cgc gct tgg ata tgt gtc tct caa gag      3612
Ile Leu Asn Ser Phe Pro Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu
        210                 215                 220
tac aac aca atg gat ctt ctt agg act atc ata aaa tcc atc caa ggc      3660
Tyr Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Thr Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly
    225                 230                 235
tgc gcc aag gaa act cta gat ttg ttg gaa aag atg gca gaa ata gat      3708
Cys Ala Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Lys Met Ala Glu Ile Asp
240                 245                 250                 255
cta gaa aat cac ctt cgt gat cta ttg aaa gaa tgc aaa tac ctt gtg      3756
Leu Glu Asn His Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Cys Lys Tyr Leu Val
                260                 265                 270
gtg gtt gat gat gta tgg cag aga gaa gca tgg gag agt ttg aaa aga      3804
Val Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg
            275                 280                 285
gca ttc ccg gat ggc aag aat gga agc aga gtc att att acc acg cgc      3852
Ala Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg
        290                 295                 300
aaa gag gat gtc gct gaa aga gta gac cac aga ggt ttt gtt cat aaa      3900
Lys Glu Asp Val Ala Glu Arg Val Asp His Arg Gly Phe Val His Lys
    305                 310                 315
ctt cgt ttc cta agt caa gaa gaa agt tgg gat ctc ttt cgt agg aaa      3948
Leu Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys
320                 325                 330                 335
cta ctt gat gtt cga gca atg gtt cca gaa atg gaa agt tta gct aag      3996
Leu Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys
                340                 345                 350
gat atg gtg gaa aag tgt aga ggc tta cct ctt gca att gtt gta ttg      4044
Asp Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu
            355                 360                 365
agc gga cta ctt tcg cat aaa aag ggg cta aac caa tgg caa aag gtg      4092
Ser Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val
        370                 375                 380
aaa gat cac ctt tgg aag aac att aaa gaa gat aaa tct att gaa atc      4140
Lys Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile
    385                 390                 395
tct aac ata cta tcc tta agc tac aat gat ttg tca act gcg ctc aag      4188
Ser Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys
400                 405                 410                 415
cag tgt ttt ctc tac ttt ggt att ttt cca gaa gat caa gtg gta aag      4236
GIn Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys
                420                 425                 430
gct gat gac ata ata cgg ttg tgg atg gcg gag ggt ttc ata ccc aga      4284
Ala Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg
            435                 440                 445
gga gaa gaa aga atg gag gat gtg gct gac ggc ttc ttg aat gaa ctg      4332
Gly Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu
        450                 455                 460
ata aga cga agc ttg gtt caa gta gct aaa aca ttt tgg gaa aaa gtt      4380
Ile Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val
    465                 470                 475
act gac tgt agg gtt cat gat tta ctt cgt gat ctt gcg ata caa aag      4428
Thr Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys
480                 485                 490                 495
gca ttg gag gta aac ttc ttt gac gtt tat ggt cca aga agc cac tcc      4476
Ala Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Val Tyr Gly Pro Arg Ser His Ser
                500                 505                 510
ata tcc tct tta tgt atc aga cat ggc att cat agt gaa gga gaa agg      4524
Ile Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg
            515                 520                 525
tac ctc tca tca ctt gat ctt tct aac ttg aag ttg agg tca att atg      4572
Tyr Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met
        530                 535                 540
ttc ttc gat cca gat ttt cgt aag atg agt cat ata aac ctc agg agt      4620
Phe Phe Asp Pro Asp Phe Arg Lys Met Ser His Ile Asn Leu Arg Ser
    545                 550                 555
gag ttc caa cat ctg tat gtg ttg tac ttg gat acg aat ttt ggg tat      4668
Glu Phe Gln His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr
560                 565                 570                 575
gtg tct atg gta cct gat gcc ata gga agt ttg tac cac ctc aag ttg      4716
Val Ser Met Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu
                580                 585                 590
tta aga ttg aga ggt atc cat gat att ccg tct tcc att ggc aac ctc      4764
Leu Arg Leu Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu
            595                 600                 605
aag aat tta caa aca ctt gtc gtt gta aat ggt tac aca ttt ttt tgc      4812
Lys Asn Leu Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys
        610                 615                 620
caa cta ccc tgc aag aca gct gac cta ata aat cta aga cat tta gtt      4860
Gln Leu Pro Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val
    625                 630                 635
gtt caa tat tca gag cct tta aaa tgt ata aac aaa ctc act agt ctt      4908
Val Gln Tyr Ser Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu
640                 645                 650                 655
caa gtt ctt gat ggt gtt gct tgt gat cag tgg aaa gat gtt gac cct      4956
Gln Val Leu Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro
                660                 665                 670
gtt gat tta gtc aat ctt cga gaa tta agc atg gat cgt atc agg agc      5004
Val Asp Leu Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser
            675                 680                 685
tct tac tcc cta aac aac att agc agc ttg aaa aac ctt agc act ctc      5052
Ser Tyr Ser Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu
        690                 695                 700
aaa ttg att tgt gga gaa cgt caa tca ttt gca tcc ctt gaa ttt gtt      5100
Lys Leu Ile Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val
    705                 710                 715
aat tgt tgt gaa aag ctc cag aaa ttg tgg tta caa ggg aga ata gag      5148
Asn Cys Cys Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu
720                 725                 730                 735
gaa ctg cct cat ctg ttt tca aac tcc atc aca atg atg gtt ctg agt      5196
Glu Leu Pro His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser
                740                 745                 750
ttc tca gaa ctg aca gaa gat ccg atg cct att ttg gga agg ttt cca      5244
Phe Ser Glu Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro
            755                 760                 765
aac cta agg aat ctc aaa tta gat gga gct tat gaa gga aaa gaa ata      5292
Asn Leu Arg Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile
        770                 775                 780
atg tgc agt gat aac agc ttc agt caa cta gag ttc ctt cat ctt cgt      5340
Met Cys Ser Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg
    785                 790                 795
gat ctt tgg aag cta gaa aga tgg gat tta ggc aca agt gcc atg cct      5388
Asp Leu Trp Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro
800                 805                 810                 815
ctg att aaa ggt ctt ggt atc cat aac tgt cca aat tta aag gag att      5436
Leu Ile Lys Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile
                820                 825                 830
cct gag aga atg aaa gac atg gag ctg ttg aag cgg aat tat atg ttg      5484
Pro Glu Arg Met Lys Asp Met Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
            835                  840                 845
tga agcttttctg ccaagcacat tggttattaa ttgagtggtt ttagtgttga          5537
tttcttatta ttgttttaag ctttttgagt gtgtaattgg tttgaacatt attgttttaa   5597
ttaattggtc tactgtatgt tctcatgctt atccacattt aagacaatgc tttatatgtt   5657
aaaatgaaat taaaaatact agtatatggt actctctctt gtccacaatt tcgtatattt   5717
tttgttcctc ttcataaaaa aaatggtaaa aaataccatt aaactatgtg ataggaacaa   5777
aaatgtcttc tattataatt taacttaaaa atgtctttac tgtcagtacc ttagttcaaa   5837
attgccctcg agtccgtagt tacaaaatgt cctttttcga ataaatatat atattttttt   5897
aaacacatct tcttcctaat taaaatatta ttaaagaaga ctattcttgt tttctttttt   5957
ctaaaaatca ctttaacaaa taaaaatgta ggaaatattt tgttttcttc ttaatctcac   6017
tttatcaatt aaaatagaat aactccatgt accctttcga catataatat atgtcatata   6077
tatatataag atcatagtat atgcatcatt aatttatatt tatataacga taaaaaataa   6137
tgataataaa ataagaaata tttttatttt ttattttctt ctgaattgaa gtaatataaa   6197
catttgctaa ttttaaaaaa aaataataca aaaataatgt gttaaaaaga aaataataat   6257
atatttattt ggaaaatgag tatttttgat ccattaaata acagtaagtg tatttttaga   6317
ccaaagtatt gacaacaagg gtatttttgg atcaaacgac aaacggaggg tacttttgct   6377
cctttcgcat aatttaaggg tatttttaaa ccaaaatatt gacggtaaag gcatttttga   6437
gtcaaattat gaacgaaaga catttttatt tctttcacat agtttaagga catttttgac   6497
ccatttccct cctttatata aataatattt atgttaaatc aacagagaag aagctgtcaa   6557
ttgaagacat tcactttcat caacttggct tctccaagca tcaatcaact tggattattt   6617
caacattctg ttttttcaat gtttaatttc tttctatttt tggaaacatg tgttggaaga   6677
gaaccttttt tctggatttt gtgatgacct aattaacgaa acaaagttaa aaatgttctt   6737
aaattatgta aaatgaataa aaatatcctc agttaatagt ttgatccaaa aatattgttg   6797
tctctaataa ttgatctaaa aatgatatta ttgttactta ataagtgaaa accgtctttt   6857
tttcaattaa atatattatt tttctttttt taaaacacgc tcttttccta ataatgattt   6917
tttttcatta aaaaatattc atcctacttc aatttataaa aaatattact aataaataaa   6977
aatgtttttt atattattag aaagtttttt atcgttattt aaatgaaaat taatgacggg   7037
gttactatga ggacatataa tggaagaagt tgagaactcg cttagtgtga agcgagaata   7097
actaaaaaaa aaaaaaaaac ttacaaactc gcttggtgcg gagcgatttt tgggggaaaa   7157
tagagagcaa atcgctcata ggtagcgaga aaaaaaagat aaaataaaag agaaaatcgc   7217
tcgtaagtca acaagatgat caattttttt atgccgttaa cgatagttat agcacaaaca   7277
tatctcgctc cttctctagc aaagtgtccc ttttgattaa accaaaaatt gaaagaccct   7337
ttatgtattt taaagaaaaa aagtgatgtt tttaactttg aattcgaaat ttaatcatcc   7397
caatataatt cataaacgaa tttttacatc aattttaaaa taaagaataa aaaaaagaaa   7457
gataatatat actagcaggg aactacatgt gattactaca aaagataaat tcaatttcag   7517
gtggtatttg gatttgaatt gtcttacctt gctatcataa cattattttt gtttttatcc   7577
attaaaaaaa tgatgcattt atatatttat tactagtaaa gtaatatctt taatgtgtca   7637
acacataagt atccctcaat tagtaaaatg ttaggacttt tttcatgtga gaaacccaac   7697
ctcattgaaa aaggaaatta atacatttta actcaacttt taattaatta atgtcaagtt   7757
tgataaaaat aaataaaaaa acaatcgtag acaatctcta attattagaa ttttacaata   7817
tgcatattta atgggttata taaattttga gttggccttc tttttttctt cttgtgattc   7877
taagtcctcc actttatttt tatttttata tttataatta aatatttttt actcgattca   7937
cagaccgagt tggaccagtc caatcttgat taagcctcac gagttgacga gcttatttag   7997
gcttggctaa ataatttcgt tcttaaatga acttttaatt ttttttgagc tcaatcctat   8057
caaatcgcag attaggttgg atttgggtga aacaatggac caaagtccaa actaacagct   8117
ccaaaatcta cgaggtttag aaatagaaag tcttcttata tgttatgtat atctaacaaa   8177
ttatatgtta tgtatgatat tgtataaata gttatttaat gtatcaatat tgtataataa   8237
catatagtta tgtatttata atgtataact atatatgata ttgtataaat agttatttaa   8297
tgtatcgata ttgtatagta gcatatagtt atgtatttat aatgtatgta taactatgta   8357
tgatattgta taaatagatt ttggacttgg gaagtctgca gcaagcaaag gaagaggtcc   8417
aggtagcaac acttttatct taatgaatac accaaatgat gatc                    8461
<210>29
<211>847
<212>PRT
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<400>29
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
Leu Lys Gln Arg lle Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
Ile Thr Asn Ile Asn Tyr Asn Ser Gly Glu Arg Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
Thr Thr Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Leu Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
Leu Asn Ser Phe Pro Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Thr Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly Cys
225                 230                 235                 240
Ala Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Lys Met Ala Glu Ile Asp Leu
                245                 250                 255
Glu Asn His Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Cys Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ala
        275                 280                 285
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
Glu Asp Val Ala Glu Arg Val Asp His Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Val Tyr Gly Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
Phe Asp Pro Asp Phe Arg Lys Met Ser His Ile Asn Leu Arg Ser Glu
545                 550                 555                 560
Phe Gln His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val
                565                 570                 575
Ser Met Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu
            580                 585                 590
Arg Leu Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys
        595                 600                 605
Asn Leu Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Gln
    610                 615                 620
Leu Pro Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val
625                 630                 635                 640
Gln Tyr Ser Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln
                645                 650                 655
Val Leu Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val
            660                 665                 670
Asp Leu Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser
        675                 680                 685
Tyr Ser Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys
    690                 695                 700
Leu Ile Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn
705                 710                 715                 720
Cys Cys Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu
                725                 730                 735
Leu Pro His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe
            740                 745                 750
Ser Glu Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn
        755                 760                 765
Leu Arg Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met
    770                 775                 780
Cys Ser Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp
785                 790                 795                 800
Leu Trp Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu
                805                 810                 815
Ile Lys Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro
            820                 825                 830
Glu Arg Met Lys Asp Met Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>30
<211>2538
<212>DNA
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2538)
<400>30
atg gct gat gcc ttt cta tca ttt gca gtt caa aaa ttg ggt gat ttc        48
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
cta ata cag aaa gtt tcc ctg cgt aaa agt ctc aga gac gaa att aga        96
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
tgg ctg atc aat gag cta ctc ttc ata cgg tct ttc ctc aga gat gca       144
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
gaa caa aag cag tgc gga gat caa aga gtt caa caa tgg gtg ttt gag       192
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
atc aac tct att gct aat gat gct gtt gct ata ctc gag act tat agc       240
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
ttt gag gct ggt aaa ggt gct agt cgt ctc aag gct tgc act tgc ata       288
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
tgt agg aag gag aag aaa ttc tac aat gtt gcc gag gag att caa tca       336
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
ctc aag caa cga atc atg gat atc tct cgc aaa cga gag act tat ggt       384
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
att aca aat atc aat aat aat gca gga gaa ggg cca agt aat cag gtt       432
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ala Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
aca aaa ttg agg aga act acc tca tat gta gat gaa cag gat tac att       480
Thr Lys Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
ttt gtt ggc ttt cag gat gtt gta caa aca ttt cta gct caa ctt ctg       528
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Phe Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
aaa gca gag cct cgt cga agc gtc ctc tcc att tat gga atg ggg ggt       576
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
tta ggc aag acc act ctt gcc aga aaa ctt tac acc agt cct gat ata       624
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
ctc aat agc ttc cgt aca cgc gct tgg ata tgt gtc tct caa gag tac       672
Leu Asn Ser Phe Arg Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
aac aca atg gat ctt ctt agg aat atc ata aaa tcc atc caa ggt cgc       720
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
acc aag gaa act cta gat ttg ttg gaa agg atg aca gaa gga gat ctt       768
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
gaa att tat ctt cgt gat tta ttg aaa gaa cgc aaa tac ctt gtg gtg       816
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
gtt gat gat gta tgg cag aga gaa gca tgg gag agt ttg aaa aga tca       864
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ser
        275                 280                 285
ttc ccg gat ggc aag aat ggc agc aga gtc att att acc acg cgc aaa       912
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
gag gat gtc gct gaa aga gca gac gac aga ggt ttt gtt cat aaa ctt       960
Glu Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
cgt ttc cta agc caa gaa gaa agt tgg gat ctc ttt cgt agg aaa cta       1008
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
ctt gat gtt cga gca atg gtt cca gaa atg gaa agt cta gct aag gat       1056
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
atg gtg gaa aag tgt aga ggc tta cct ctt gca att gtt gta ttg agc       1104
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
gga cta ctt tcg cat aaa aag ggg cta aac caa tgg caa aag gtg aaa       1152
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
gat cac ctt tgg aag aac att aaa gaa gat aaa tct att gaa atc tct       1200
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
aac ata cta tcc tta agc tac aat gat ttg tca act gcg ctc aag cag       1248
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
tgt ttt ctc tac ttt ggt att ttt cca gaa gat caa gtg gta aag gct       1296
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
gat gac ata ata cgg ttg tgg atg gcg gag ggt ttc ata ccc aga gga       1344
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
gaa gaa aga atg gag gat gtg gct gac ggc ttc ttg aat gaa ctg ata       1392
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
aga cga agc ttg gtt caa gta gct aaa aca ttt tgg gaa aaa gtt act      1440
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
gac tgt agg gtt cat gat tta ctt cgt gat ctt gcg ata caa aag gca      1488
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
ttg gag gta aac ttc ttt gac att tat gat cca aga agc cac tcc ata      1536
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
tcc tct tta tgt atc aga cat ggc att cat agt gaa gga gaa agg tac      1584
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
ctc tca tca ctt gat ctt tct aac ttg aag ttg agg tca att atg ttc      1632
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
ttc gat cca tat att tgt aat gtg ttc caa cat ata gat gtg ttt cga      1680
Phe Asp Pro Tyr Ile Cys Asn Val Phe Gln His Ile Asp Val Phe Arg
545                 550                 555                 560
cat cta tat gtg ttg tac ttg gat acg aat ttt ggg tat gtg tct atg      1728
His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val Ser Met
                565                 570                 575
gta cct gat gcc ata gga agt ttg tac cac ctc aag ttg tta aga ttg      1776
Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu Arg Leu
            580                 585                 590
aga ggt atc cat gat att ccg tct tcc att ggc aac ctc aag aat tta      1824
Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys Asn Leu
        595                 600                 605
caa aca ctt gtc gtt gta aat ggt tac aca ttt ttt tgc gaa cta ccc      1872
Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu Leu Pro
    610                 615                 620
tgc aag aca gct gac cta ata aat cta aga cat tta gtt gtt caa tat      1920
Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val Gln Tyr
625                 630                 635                 640
aca gag cct tta aaa tgt ata aac aaa ctc act agt ctt caa gtt ctt      1968
Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln Val Leu
                645                 650                 655
gat ggt gtt gct tgt gat cag tgg aaa gat gtt gac cct gtt gat tta      2016
Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val Asp Leu
            660                 665                 670
gtc aat ctt cga gaa tta agc atg gat cgt atc agg agc tct tac tcc      2064
Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser Tyr Ser
        675                 680                 685
cta aac aac att agc agc ttg aaa aac ctt agc act ctc aaa ttg att      2112
Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys Leu Ile
    690                 695                 700
tgt gga gaa cgt caa tca ttt gca tcc ctt gaa ttt gtt aat tgt tgt      2160
Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn Cys Cys
705                 710                 715                 720
gaa aag ctc cag aaa ttg tgg tta caa ggg aga ata gag gaa ctg cct      2208
Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu Leu Pro
                725                 730                 735
cat ctg ttt tca aac tcc atc aca atg atg gtt ctg agt ttc tca gaa      2256
His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe Ser Glu
            740                 745                 750
ctg aca gaa gat ccg atg cct att ttg gga agg ttt cca aac cta agg      2304
Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn Leu Arg
        755                 760                 765
aat ctc aaa tta gat gga gct tac gaa gga aaa gaa ata atg tgc agt      2352
Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met Cys Ser
    770                 775                 780
gat aac agc ttc agt caa cta gag ttc ctt cat ctt cgt gat ctt tgg      2400
Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp Leu Trp
785                 790                 795                 800
aag cta gaa aga tgg gat tta ggc aca agt gcc atg cct ctg att aaa      2448
Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu Ile Lys
                805                 810                 815
ggt ctt ggt atc cat aac tgt cca aat tta aag gag att cct gag aga      2496
Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro Glu Arg
            820                 825                 830
atg aaa gac gtg gag ctg ttg aag cgg aat tat atg ttg tga              2538
Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>31
<211>845
<212>PRT
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<400>31
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ala Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
Thr Lys Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Phe Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
Leu Asn Ser Phe Arg Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ser
        275                 280                 285
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
Glu Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
Phe Asp Pro Tyr Ile Cys Asn Val Phe Gln His Ile Asp Val Phe Arg
545                 550                 555                 560
His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val Ser Met
                565                 570                 575
Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu Arg Leu
            580                 585                 590
Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys Asn Leu
        595                 600                 605
Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu Leu Pro
    610                 615                 620
Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val Gln Tyr
625                 630                 635                 640
Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln Val Leu
                645                 650                 655
Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val Asp Leu
            660                 665                 670
Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser Tyr Ser
        675                 680                 685
Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys Leu Ile
    690                 695                 700
Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn Cys Cys
705                 710                 715                 720
Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu Leu Pro
                725                 730                 735
His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe Ser Glu
            740                 745                 750
Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn Leu Arg
        755                 760                 765
Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met Cys Ser
    770                 775                 780
Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp Leu Trp
785                 790                 795                 800
Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu Ile Lys
                805                 810                 815
Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro Glu Arg
            820                 825                 830
Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>32
<211>2538
<212>DNA
<213>落果薯(Solanum demissum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2538)
<400>32
atg gct gat gcc ttt cta tca ttt gca gtt caa aaa ttg ggt gat ttc        48
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
ctc att caa caa gtt tct ctg cgt aaa aat ctg aga aag gaa att gag        96
Leu Ile Gln Gln Val Ser Leu Arg Lys Asn Leu Arg Lys Glu Ile Glu
            20                  25                  30
tgg ctg aga aat gag cta ctc ttc ata cag tct ttc ctc aga gat gca       144
Trp Leu Arg Asn Glu Leu Leu Phe Ile Gln Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
gaa cta aag caa tat gga gat caa aga gtt caa caa tgg gtg ttt gag       192
Glu Leu Lys Gln Tyr Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
atc aac tct att gct aat gat gtt gtt gct ata ctc gag act tac acc       240
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Val Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Thr
65                  70                  75                  80
ttc gag gct ggt aaa ggt gct agt cgt ctc aag gct tgc gct tgc ata       288
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Ala Cys Ile
                85                  90                  95
tat acg aag gag aag aaa ttc tac aat gtt gcc gag gag atc caa tca       336
Tyr Thr Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
ctc aag caa cga atc atg gat atc tct cgc aaa cga gag act tat ggt       384
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp lle Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
att aca aat atc aat aat aat tca gga gaa ggg cca agt aat cag gtt       432
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ser Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
aga aca ttg agg aga act acc tca tat gtg gat gac cag gat tac att       480
Arg Thr Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Asp Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
ttt gtt gga ctt cag gat gtt gta caa aaa ttg cta gct caa ctt ctc       528
Phe Val Gly Leu Gln Asp Val Val Gln Lys Leu Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
aaa gca gag ccc cgt cga acc gtc ctc tcc att cat ggc atg ggc gga       576
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Thr Val Leu Ser Ile His Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
ttg ggc aag acc act ctt gcg aga aaa ctt tac aac agt tct gct ata       624
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Asn Ser Ser Ala Ile
        195                 200                 205
ctc aat agc ttc cct aca cgc gct tgg ata tgt gtc tct caa gag tac       672
Leu Asn Ser Phe Pro Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
aac aca atg gat ctt ctt agg aat atc ata aaa tcc gtc caa ggt cgc       720
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Val Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
acc aag gaa act cta gat ttg ttg gaa agg atg aca gaa gga gat cta       768
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
gaa atc tat ctt cgt gat cta tta aaa gaa cgc aaa tac ctt gtg atg       816
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Met
            260                 265                 270
gtt gat gat gta tgg cag aaa gaa gca tgg gat agt ttg aag aga gca       864
Val Asp Asp Val Trp Gln Lys Glu Ala Trp Asp Ser Leu Lys Arg Ala
        275                 280                 285
ttc ccg gat agc aag aat ggc agc aga gtc att att acc acg cgc aaa       912
Phe Pro Asp Ser Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
cag gat gtc gct gaa aga gca gac gac ata ggt ttt gtt cat aaa ctt       960
Gln Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Ile Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
cgt ttc cta agt caa gaa gaa agt tgg gat ctc ttt cgt aag aaa cta       1008
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Lys Lys Leu
                325                 330                 335
ctt gat gtt cga tca atg gtt cca gaa atg gaa aat cta gct aag gat       1056
Leu Asp Val Arg Ser Met Val Pro Glu Met Glu Asn Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
atg gtg gaa aag tgt aga ggc tta cct ctt gca att gtt gta ttg agc       1104
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
gga cta ctt tcg cat aaa aag ggg cta aac caa tgg caa aag gtg aaa       1152
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
gat cac ctt tgg aag aac att aaa gaa gat aaa tct att gaa atc tct       1200
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
aac ata cta tcc tta agc tac aat gat ttg tca act gcg ctc aag cag       1248
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
tgt ttt ctc tac ttt ggt att ttt cca gaa gat caa gtg gta aag gct       1296
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
gat gac ata ata cgg ttg tgg atg gcg gag ggt ttc ata ccc aga gga       1344
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
gaa gaa aga atg gag gat gtg gct gac ggc ttc ttg aat gaa ctg ata       1392
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
aga cga agc ttg gtt caa gta gct aaa aca ttt tgg gaa aaa gtt act       1440
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
gac tgt agg gtt cat gat tta ctt cgt gat ctt gcg ata caa aag gta      1488
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Val
                485                 490                 495
ttg gag gta aac ttc ttt gac att tat gat cca aga agc cac tcc ata      1536
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
tcc tct tta tgt atc aga cat ggc att cat agt gaa gga gaa agg tac      1584
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
ctc tca tca ctt gat ctt tct aac ttg aag ttg agg tca att atg ttc      1632
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
ttc gat cca tat att tgt aat gtg ttc caa cat ata gat gtg ttt cga      1680
Phe Asp Pro Tyr Ile Cys Asn Val Phe Gln His Ile Asp Val Phe Arg
545                 550                 555                 560
cat cta tat gtg ttg tac ttg gat acg aat ttt ggg tat gtg tct atg      1728
His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val Ser Met
                565                 570                 575
gta cct gat gcc ata gga agt ttg tac cac ctc aag ttg tta aga ttg      1776
Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu Arg Leu
            580                 585                 590
aga ggt atc cat gat att ccg tct tcc att ggc aac ctc aag aat tta      1824
Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys Asn Leu
        595                 600                 605
caa aca ctt gtc gtt gta aat ggt tac aca ttt ttt tgc gaa cta ccc      1872
Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu Leu Pro
    610                 615                 620
tgc aag aca gct gac cta ata aat cta aga cat tta gtt gtt caa tat      1920
Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val Gln Tyr
625                 630                 635                 640
aca gag cct tta aaa tgt ata aac aaa ctc act agt ctt caa gtt ctt      1968
Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln Val Leu
                645                 650                 655
gat ggt gtt gct tgt gat cag tgg aaa gat gtt gac cct gtt gat tta      2016
Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val Asp Leu
            660                 665                 670
gtc aat ctt cga gaa tta agc atg gat cgt atc agg agc tct tac tcc      2064
Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser Tyr Ser
        675                 680                 685
cta aac aac att agc agc ttg aaa aac ctt agc act ctc aaa ttg att      2112
Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys Leu Ile
    690                 695                 700
tgt gga gaa cgt caa tca ttt gca tcc ctt gaa ttt gtt aat tgt tgt      2160
Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn Cys Cys
705                 710                 715                 720
gaa aag ctc cag aaa ttg tgg tta caa ggg aga ata gag gaa ctg cct      2208
Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu Leu Pro
                725                 730                 735
cat ctg ttt tca aac tcc atc aca atg atg gtt ctg agt ttc tca gaa      2256
His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe Ser Glu
            740                 745                 750
ctg aca gaa gat ccg atg cct att ttg gga agg ttt cca aac cta agg      2304
Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn Leu Arg
        755                 760                 765
aat ctc aaa tta gat gga gct tac gaa gga aaa gaa ata atg tgc agt      2352
Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met Cys Ser
    770                 775                 780
gat aac agc ttc agt caa cta gag ttc ctt cat ctt cgt gat ctt tgg      2400
Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp Leu Trp
785                 790                 795                 800
aag cta gaa aga tgg gat tta ggc aca agt gcc atg cct ctg att aaa      2448
Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu Ile Lys
                805                 810                 815
ggt ctt ggt atc cat aac tgt cca aat tta aag gag att cct gag aga      2496
Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro Glu Arg
            820                 825                 830
atg aaa gac gtg gag ctg ttg aag cgg aat tat atg ttg tga              2538
Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>33
<211>845
<212>PRT
<213>落果薯(Solanum demissum)
<400>33
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Gln Gln Val Ser Leu Arg Lys Asn Leu Arg Lys Glu Ile Glu
            20                  25                  30
Trp Leu Arg Asn Glu Leu Leu Phe Ile Gln Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Leu Lys Gln Tyr Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Val Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Thr
65                  70                  75                  80
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Ala Cys Ile
                85                  90                  95
Tyr Thr Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ser Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
Arg Thr Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Asp Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
Phe Val Gly Leu Gln Asp Val Val Gln Lys Leu Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Thr Val Leu Ser Ile His Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Asn Ser Ser Ala Ile
        195                 200                 205
Leu Asn Ser Phe Pro Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Val Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Met
            260                 265                 270
Val Asp Asp Val Trp Gln Lys Glu Ala Trp Asp Ser Leu Lys Arg Ala
        275                 280                 285
Phe Pro Asp Ser Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
Gln Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Ile Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Lys Lys Leu
                325                 330                 335
Leu Asp Val Arg Ser Met Val Pro Glu Met Glu Asn Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Val
                485                 490                 495
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
Phe Asp Pro Tyr Ile Cys Asn Val Phe Gln His Ile Asp Val Phe Arg
545                 550                 555                 560
His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val Ser Met
                565                 570                 575
Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu Arg Leu
            580                 585                 590
Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys Asn Leu
        595                 600                 605
Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu Leu Pro
    610                 615                 620
Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val Gln Tyr
625                 630                 635                 640
Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln Val Leu
                645                 650                 655
Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val Asp Leu
            660                 665                 670
Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser Tyr Ser
        675                 680                 685
Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys Leu Ile
    690                 695                 700
Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn Cys Cys
705                 710                 715                 720
Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu Leu Pro
                725                 730                 735
His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe Ser Glu
            740                 745                 750
Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn Leu Arg
        755                 760                 765
Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met Cys Ser
    770                 775                 780
Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp Leu Trp
785                 790                 795                 800
Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu Ile Lys
                805                 810                 815
Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro Glu Arg
            820                 825                 830
Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>34
<211>2544
<212>DNA
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<220>
<221>CDS
<222>(1)..(2544)
<400>34
atg gct gat gcc ttt cta tca ttt gca gtt caa aaa ttg ggt gat ttc       48
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
cta ata cag aaa gtt tcc ctg cgt aaa agt ctc aga gat gaa att aga       96
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
tgg ctg atc aat gag cta ctc ttc ata cgg tct ttc ctc aga gat gca       144
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
gaa caa aag cag tgc gga gat caa aga gtt caa caa tgg gtg ttt gag       192
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
atc aac tct att gct aat gat gct gtt gct ata ctc gag act tat agc       240
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
ttt gag gct ggt aaa ggt gct agt cgt ctc aag gct tgc act tgc ata       288
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
tgt agg aag gag aag aaa ttc tac aat gtt gcc gag gag att caa tca       336
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phc Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
ctc aag caa cga atc atg gat atc tct cgc aaa cga gag act tat ggt       384
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
att aca aat atc aat aat aat gca gga gaa ggg cca agt aat cag gtt       432
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ala Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
aca aaa ttg agg aga act acc tca tat gta gat gaa cag gat tac att       480
Thr Lys Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
ttt gtt ggc ttt cag gat gtt gta caa aca ttt cta gct caa ctt ctg       528
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Phe Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
aaa gca gag cct cgt cga agc gtc ctc tcc att tat gga atg ggg ggt       576
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
tta ggc aag acc act ctt gcc aga aaa ctt tac acc agt cct gat ata       624
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
ctc aat agc ttc cgt aca cgc gct tgg ata tgt gtc tct caa gag tac       672
Leu Asn Ser Phe Arg Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
aac aca atg gat ctt ctt agg aat atc ata aaa tcc atc caa ggt cgc       720
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
acc aag gaa act cta gat ttg ttg gaa agg atg aca gaa gga gat ctt       768
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
gaa att tat ctt cgt gat tta ttg aaa gaa cgc aaa tac ctt gtg gtg      816
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
gtt gat gat gta tgg cag aga gaa gca tgg gag agt ttg aaa aga tca      864
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ser
        275                 280                 285
ttc ccg gat ggc aag aat ggc agc aga gtc att att acc acg cgc aaa      912
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
gag gat gtc gct gaa aga gca gac gac aga ggt ttt gtt cat aaa ctt      960
Glu Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
cgt ttc cta agc caa gaa gaa agt tgg gat ctc ttt cgt agg aaa cta      1008
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
ctt gat gtt cga gca atg gtt cca gaa atg gaa agt cta gct aag gat      1056
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
atg gtg gaa aag tgt aga ggc tta cct ctt gca att gtt gta ttg agc      1104
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
gga cta ctt tcg cat aaa aag ggg cta aac caa tgg caa aag gtg aaa      1152
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
gat cac ctt tgg aag aac att aaa gaa gat aaa tct att gaa atc tct      1200
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
aac ata cta tcc tta agc tac aat gat ttg tca act gcg ctc aag cag      1248
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
tgt ttt ctc tac ttt ggt att ttt cca gaa gat caa gtg gta aag gct      1296
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
gat gac ata ata cgg ttg tgg atg gcg gag ggt ttc ata ccc aga gga      1344
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
gaa gaa aga atg gag gat gtg gct gac ggc ttc ttg aat gaa ctg ata      1392
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
aga cga agc ttg gtt caa gta gct aaa aca ttt tgg gaa aaa gtt act      1440
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
gac tgt agg gtt cat gat tta ctt cgt gat ctt gcg ata caa aag gca      1488
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
ttg gag gta aac ttc ttt gac att tat gat cca aga agc cac tcc ata      1536
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
tcc tct tta tgt atc aga cat ggc att cat agt gaa gga gaa agg tac      1584
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
ctc tca tca ctt gat ctt tct aac ttg aag ttg agg tca att atg ttc      1632
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
ttc gat cca gat ttt cgt aag atg agt cat ata aac ctc agg agt gag      1680
Phe Asp Pro Asp Phe Arg Lys Met Ser His Ile Asn Leu Arg Ser Glu
545                 550                 555                 560
ttc caa cat cta tat gtg ttg tac ttg gat acg aat ttt ggg tat gtg      1728
Phe Gln His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val
                565                 570                 575
tct atg gta cct gat gcc ata gga agt ttg tac cac ctc aag ttg tta      1776
Ser Met Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu
            580                 585                 590
aga ttg aga ggt atc cat gat att ccg tct tcc att ggc aac ctc aag      1824
Arg Leu Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys
        595                 600                 605
aat tta caa aca ctt gtc gtt gta aat ggt tac aca ttt ttt tgc gaa      1872
Asn Leu Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu
    610                 615                 620
cta ccc tgc aag aca gct gac cta ata aat cta aga cat tta gtt gtt      1920
Leu Pro Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val
625                 630                 635                 640
caa tat aca gag cct tta aaa tgt ata aac aaa ctc act agt ctt caa      1968
Gln Tyr Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln
                645                 650                 655
gtt ctt gat ggt gtt gct tgt gat cag tgg aaa gat gtt gac cct gtt      2016
Val Leu Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val
            660                 665                 670
gat tta gtc aat ctt cga gaa tta agc atg gat cgt atc agg agc tct      2064
Asp Leu Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser
        675                 680                 685
tac tcc cta aac aac att agc agc ttg aaa aac ctt agc act ctc aaa      2112
Tyr Ser Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys
    690                 695                 700
ttg att tgt gga gaa cgt caa tca ttt gca tcc ctt gaa ttt gtt aat      2160
Leu Ile Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn
705                 710                 715                 720
tgt tgt gaa aag ctc cag aaa ttg tgg tta caa ggg aga ata gag gaa      2208
Cys Cys Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu
                725                 730                 735
ctg cct cat ctg ttt tca aac tcc atc aca atg atg gtt ctg agt ttc      2256
Leu Pro His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe
            740                 745                 750
tca gaa ctg aca gaa gat ccg atg cct att ttg gga agg ttt cca aac      2304
Ser Glu Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn
        755                 760                 765
cta agg aat ctc aaa tta gat gga gct tac gaa gga aaa gaa ata atg     2352
Leu Arg Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met
    770                 775                 780
tgc agt gat aac agc ttc agt caa cta gag ttc ctt cat ctt cgt gat     2400
Cys Ser Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp
785                 790                 795                 800
ctt tgg aag cta gaa aga tgg gat tta ggc aca agt gcg atg cct ctg     2448
Leu Trp Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu
                805                 810                 815
att aaa ggt ctt ggt atc cat aac tgt cca aat tta aag gag att cct     2496
Ile Lys Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro
            820                 825                 830
gag aga atg aaa gac gtg gag ctg ttg aag cgg aat tat atg ttg tga     2544
Glu Arg Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>35
<211>847
<212>PRT
<213>球栗薯(Solanum bulbocastanum)
<400>35
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ala Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
Thr Lys Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Val Gln Thr Phe Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
Leu Asn Ser Phe Arg Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Ile Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ser
        275                 280                 285
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
Glu Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Asp Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Asp Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
Phe Asp Pro Asp Phe Arg Lys Met Ser His Ile Asn Leu Arg Ser Glu
545                 550                 555                 560
Phe Gln His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val
                565                 570                 575
Ser Met Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu
            580                 585                 590
Arg Leu Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys
        595                 600                 605
Asn Leu Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Glu
    610                 615                 620
Leu Pro Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val
625                 630                 635                 640
Gln Tyr Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln
                645                 650                 655
Val Leu Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val
            660                 665                 670
Asp Leu Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser
        675                 680                 685
Tyr Ser Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys
    690                 695                 700
Leu Ile Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn
705                 710                 715                 720
Cys Cys Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu
                725                 730                 735
Leu Pro His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Phe
            740                 745                 750
Ser Glu Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Arg Phe Pro Asn
        755                 760                 765
Leu Arg Asn Leu Lys Leu Asp Gly Ala Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met
    770                 775                 780
Cys Ser Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu His Leu Arg Asp
785                 790                 795                 800
Leu Trp Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu
                805                 810                 815
Ile Lys Gly Leu Gly lle His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro
            820                 825                 830
Glu Arg Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845
<210>36
<211>846
<212>PRT
<213>球栗薯(solanum bulbocastanum)
<400>36
Met Ala Asp Ala Phe Leu Ser Phe Ala Val Gln Lys Leu Gly Asp Phe
1               5                   10                  15
Leu Ile Gln Lys Val Ser Leu Arg Lys Ser Leu Arg Asp Glu Ile Arg
            20                  25                  30
Trp Leu Ile Asn Glu Leu Leu Phe Ile Arg Ser Phe Leu Arg Asp Ala
        35                  40                  45
Glu Gln Lys Gln Cys Gly Asp Gln Arg Val Gln Gln Trp Val Phe Glu
    50                  55                  60
Ile Asn Ser Ile Ala Asn Asp Ala Val Ala Ile Leu Glu Thr Tyr Ser
65                  70                  75                  80
Phe Glu Ala Gly Lys Gly Ala Ser Arg Leu Lys Ala Cys Thr Cys Ile
                85                  90                  95
Cys Arg Lys Glu Lys Lys Phe Tyr Asn Val Ala Glu Glu Ile Gln Ser
            100                 105                 110
Leu Lys Gln Arg Ile Met Asp Ile Ser Arg Lys Arg Glu Thr Tyr Gly
        115                 120                 125
Ile Thr Asn Ile Asn Asn Asn Ala Gly Glu Gly Pro Ser Asn Gln Val
    130                 135                 140
Thr Lys Leu Arg Arg Thr Thr Ser Tyr Val Asp Glu Gln Asp Tyr Ile
145                 150                 155                 160
Phe Val Gly Phe Gln Asp Val Ile Gln Thr Phe Leu Ala Gln Leu Leu
                165                 170                 175
Lys Ala Glu Pro Arg Arg Ser Val Leu Ser Ile Tyr Gly Met Gly Gly
            180                 185                 190
Leu Gly Lys Thr Thr Leu Ala Arg Lys Leu Tyr Thr Ser Pro Asp Ile
        195                 200                 205
Leu Asn Ser Phe Pro Thr Arg Ala Trp Ile Cys Val Ser Gln Glu Tyr
    210                 215                 220
Asn Thr Met Asp Leu Leu Arg Asn Ile Ile Lys Ser Val Gln Gly Arg
225                 230                 235                 240
Thr Lys Glu Thr Leu Asp Leu Leu Glu Arg Met Thr Glu Gly Asp Leu
                245                 250                 255
Glu Ile Tyr Leu Arg Asp Leu Leu Lys Glu Arg Lys Tyr Leu Val Val
            260                 265                 270
Val Asp Asp Val Trp Gln Arg Glu Ala Trp Glu Ser Leu Lys Arg Ser
        275                 280                 285
Phe Pro Asp Gly Lys Asn Gly Ser Arg Val Ile Ile Thr Thr Arg Lys
    290                 295                 300
Glu Asp Val Ala Glu Arg Ala Asp Asp Arg Gly Phe Val His Lys Leu
305                 310                 315                 320
Arg Phe Leu Ser Gln Glu Glu Ser Trp Asp Leu Phe Arg Arg Lys Leu
                325                 330                 335
Leu Asp Val Arg Ala Met Val Pro Glu Met Glu Ser Leu Ala Lys Asp
            340                 345                 350
Met Val Glu Lys Cys Arg Gly Leu Pro Leu Ala Ile Val Val Leu Ser
        355                 360                 365
Gly Leu Leu Ser His Lys Lys Gly Leu Asn Gln Trp Gln Lys Val Lys
    370                 375                 380
Asp His Leu Trp Lys Asn Ile Lys Glu Asp Lys Ser Ile Glu Ile Ser
385                 390                 395                 400
Asn Ile Leu Ser Leu Ser Tyr Asn Asp Leu Ser Thr Ala Leu Lys Gln
                405                 410                 415
Cys Phe Leu Tyr Phe Gly Ile Phe Pro Glu Asp Gln Val Val Lys Ala
            420                 425                 430
Asp Asp Ile Ile Arg Leu Trp Met Ala Glu Gly Phe Ile Pro Arg Gly
        435                 440                 445
Glu Glu Arg Met Glu Asp Val Ala Glu Gly Phe Leu Asn Glu Leu Ile
    450                 455                 460
Arg Arg Ser Leu Val Gln Val Ala Lys Thr Phe Trp Glu Lys Val Thr
465                 470                 475                 480
Asp Cys Arg Val His Asp Leu Leu Arg Asp Leu Ala Ile Gln Lys Ala
                485                 490                 495
Leu Glu Val Asn Phe Phe Asp Ile Tyr Gly Pro Arg Ser His Ser Ile
            500                 505                 510
Ser Ser Leu Cys Ile Arg His Gly Ile His Ser Glu Gly Glu Arg Tyr
        515                 520                 525
Leu Ser Ser Leu Asp Leu Ser Asn Leu Lys Leu Arg Ser Ile Met Phe
    530                 535                 540
Phe Asp Pro Tyr Ile Cys Asn Val Phe Gln His Ile Asp Val Phe Arg
545                 550                 555                 560
His Leu Tyr Val Leu Tyr Leu Asp Thr Asn Phe Gly Tyr Val Ser Met
                565                 570                 575
Val Pro Asp Ala Ile Gly Ser Leu Tyr His Leu Lys Leu Leu Arg Leu
            580                 585                 590
Arg Gly Ile His Asp Ile Pro Ser Ser Ile Gly Asn Leu Lys Asn Leu
        595                 600                 605
Gln Thr Leu Val Val Val Asn Gly Tyr Thr Phe Phe Cys Gln Leu Pro
    610                 615                 620
Cys Lys Thr Ala Asp Leu Ile Asn Leu Arg His Leu Val Val Gln Tyr
625                 630                 635                 640
Thr Glu Pro Leu Lys Cys Ile Asn Lys Leu Thr Ser Leu Gln Val Leu
                645                 650                 655
Asp Gly Val Ala Cys Asp Gln Trp Lys Asp Val Asp Pro Val Asp Leu
            660                 665                 670
Val Asn Leu Arg Glu Leu Ser Met Asp Arg Ile Arg Ser Ser Tyr Ser
        675                 680                 685
Leu Asn Asn Ile Ser Ser Leu Lys Asn Leu Ser Thr Leu Lys Leu Ile
    690                 695                 700
Cys Gly Glu Arg Gln Ser Phe Ala Ser Leu Glu Phe Val Asn Cys Cys
705                 710                 715                 720
Glu Lys Leu Gln Lys Leu Trp Leu Gln Gly Arg Ile Glu Glu Leu Pro
                725                 730                 735
His Leu Phe Ser Asn Ser Ile Thr Met Met Val Leu Ser Leu Ser Val
            740                 745                 750
Leu Thr Glu Asp Pro Met Pro Ile Leu Gly Ile Leu Pro Asn Leu Arg
        755                 760                 765
Asn Leu Val Leu Phe Arg Ala Ser Tyr Glu Gly Lys Glu Ile Met Cys
    770                 775                 780
Ser Asp Asn Ser Phe Ser Gln Leu Glu Phe Leu Ile Leu Arg Asp Leu
785                 790                 795                 800
Glu Lys Leu Glu Arg Trp Asp Leu Gly Thr Ser Ala Met Pro Leu Ile
                805                 810                 815
Lys Gly Leu Gly Ile His Asn Cys Pro Asn Leu Lys Glu Ile Pro Glu
            820                 825                 830
Arg Met Lys Asp Val Glu Leu Leu Lys Arg Asn Tyr Met Leu
        835                 840                 845

Claims (23)

1.一种分离或重组核酸序列，包括编码图6的氨基酸序列Rpi-b1b3或其功能性片断或功能性同源物的核酸序列。
2.根据权利要求1所述的分离或重组核酸，其中，所述功能性同源物选自如图6所示的Rpi-abpt、R2以及R2-样的组。
3.根据权利要求1或2所述的分离或重组核酸序列，包括如图8-11中任一图所示的核酸序列。
4.一种包括根据权利要求1-3中任一项所述的核酸序列的载体。
5.一种包括根据权利要求1-3中任一项所述的核酸或根据权利要求4所述的载体的宿主细胞。
6.根据权利要求5所述的宿主细胞，所述宿主细胞是土壤杆菌(Agrobacterium)细胞。
7.根据权利要求5所述的宿主细胞，所述宿主细胞是植物细胞。
8.一种包括根据权利要求1-3中任一项所述的核酸或根据权利要求4所述的载体的植物细胞。
9.根据权利要求8所述的植物细胞，其中，所述植物细胞是来自茄科(Solanaceae)的细胞。
10.一种包括根据权利要求8或8所述的细胞的基因改造/转基因植物。
11.来源于根据权利要求10所述的植物的部分。
12.根据权利要求11所述的部分，所述部分是块茎。
13.一种由根据权利要求1-3中任一项所述的分离或重组核酸编码的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物。
14.一种包括图6的任何氨基酸序列的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物。
15.一种(特异性地)结合于根据权利要求13或14所述的蛋白质的抗体。
16.一种用于在植物中提供至少部分抗性或增加抗性抵抗卵菌感染的方法，包括向植物或其部分提供根据权利要求1-3中任一项所述的核酸或根据权利要求4所述的载体或根据权利要求5或6所述的宿主细胞。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述卵菌包括疫霉，优选致病疫霉。
18.根据权利要求16或17所述的方法，其中，所述植物包括来自茄科家族的植物。
19.一种用于产生根据权利要求13或14所述的蛋白质或其功能性片断或功能性同源物的方法，包括将根据权利要求1-3中任一项所述的核酸功能性连接至调节序列并使所述核酸在宿主细胞中表达。
20.一种能够结合于根据权利要求1-3中任一项所述的核酸或其互补核酸的结合分子。
21.根据权利要求20所述的结合分子，所述结合分子是引物或探针。
22.一种用于针对其对卵菌感染的易感性或抗性来选择植物或植物材料或其子代的方法，所述方法包括测试至少部分所述植物或植物材料或其子代是否存在如权利要求1-3中任一项所描述的核酸的步骤。
23.根据权利要求22所述的方法，进一步包括提供根据权利要求20或21所述的结合分子。
CN200880002980.1A 2007-01-26 2008-01-28 来自球栗薯的功能性r基因 Pending CN101679492A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07101270 2007-01-26
EP07101270.2 2007-01-26
PCT/NL2008/050050 WO2008091153A1 (en) 2007-01-26 2008-01-28 A functional r-gene from solanum bulbocastanum

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101679492A true CN101679492A (zh) 2010-03-24

Family

ID=38701555

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200880002980.1A Pending CN101679492A (zh) 2007-01-26 2008-01-28 来自球栗薯的功能性r基因

Country Status (4)

Country Link
US (1) US8399737B2 (zh)
EP (1) EP2111411A1 (zh)
CN (1) CN101679492A (zh)
WO (1) WO2008091153A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110878315A (zh) * 2019-11-04 2020-03-13 山东农业大学 一种菌类效应因子及其编码基因与应用

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2774456C (en) 2009-09-18 2020-09-01 Wageningen Universiteit Cloning and exploitation of a functional r-gene from solanum chacoense
EP2390332A1 (en) 2010-05-31 2011-11-30 Coöperatie Avebe U.A. Cloning and exploitation of a functional R-gene from Solanum x edinense
KR102206251B1 (ko) * 2013-07-05 2021-01-22 타키이 슈뵤우 가부시키가이샤 토마토 식물의 뿌리혹 선충 저항성 마커, 뿌리혹 선충 저항성 토마토 식물, 뿌리혹 선충 저항성 토마토 식물의 제조 방법 및 뿌리혹 선충 저항성 토마토 식물의 스크리닝 방법

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1334979A1 (en) 2002-02-08 2003-08-13 Kweek-en Researchbedrijf Agrico B.V. Gene conferring resistance to Phytophthera infestans (late-blight) in Solanaceae
US7148397B2 (en) 2002-08-29 2006-12-12 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Solanum bulbocastanum late blight resistance gene and use thereof
MXPA06001622A (es) 2003-08-11 2006-07-03 Kweek En Researchbed Agrico Bv Plantas resistentes a hongos y sus usos.

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110878315A (zh) * 2019-11-04 2020-03-13 山东农业大学 一种菌类效应因子及其编码基因与应用
CN110878315B (zh) * 2019-11-04 2021-06-29 山东农业大学 一种菌类效应因子及其编码基因与应用

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008091153A8 (en) 2009-07-23
US8399737B2 (en) 2013-03-19
US20100162437A1 (en) 2010-06-24
WO2008091153A1 (en) 2008-07-31
EP2111411A1 (en) 2009-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lokossou et al. Exploiting knowledge of R/Avr genes to rapidly clone a new LZ-NBS-LRR family of late blight resistance genes from potato linkage group IV
Joshi et al. Functional analysis and expression profiling of HcrVf1 and HcrVf2 for development of scab resistant cisgenic and intragenic apples
Luo et al. The Xa7 resistance gene guards the rice susceptibility gene SWEET14 against exploitation by the bacterial blight pathogen
CN101802205B (zh) 晚疫病抗病基因和方法
AU2017203293B2 (en) Qtls associated with and methods for identifying whole plant field resistance to sclerotinia
BR122019002801B1 (pt) método para selecionar uma planta de milho e método para identificar uma planta de milho transformada
US10450581B2 (en) Cloning and exploitation of a functional R-gene from Solanum chacoense
CN107603963A (zh) 一种水稻双花小穗基因df1及其编码的蛋白质与应用
CN101679492A (zh) 来自球栗薯的功能性r基因
US11168335B2 (en) R8 Phytophthora resistance gene in potato
Shang et al. Identification of a new rice blast resistance gene, Pid3, by genome-wide comparison of paired NBS-LRR genes and their pseudogene alleles between the two sequenced rice genomes
WO2012006866A1 (zh) 植物黄矮病抗性蛋白tistk1及其编码基因与应用
CN113278721B (zh) 转基因玉米事件lw2-2及其检测方法
EP1950304A1 (en) Identification, classification and optionally stacking of r-genes in solanum using an effector-receptor approach
CN108707690B (zh) 与白肋烟控制基因共分离的分子标记及其应用
AU2021100674A4 (en) AhGPAT9A gene of Arachis hypogaea L. and use thereof in improving seed oil content
CN116676304B (zh) 转基因玉米事件lp016-1及其检测方法
CN116694814B (zh) 转基因大豆事件lp012-1及其检测方法
CN108728429B (zh) 金属蛋白酶ws1a在调控植物叶绿体代谢中的应用
CN108707596B (zh) 金属蛋白酶ws1b在调控植物叶绿体代谢中的应用
US9856494B2 (en) Cloning and exploitation of a functional R-gene from Solanum x edinense
Rani et al. A forward genetics approach identifies pathogenicity genes in Fusarium oxysporum f. sp. carthami, a fungus causing vascular wilt disease of safflower
CN115820674A (zh) up20序列在增强基因表达方面的应用及其方法
KR20040064821A (ko) 벼 유래 신규 ｍｉｔｅ

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20100324