CN101679471A - 靶向细菌16s核糖体rna的氨基糖苷类抗生素 - Google Patents

Abstract

本发明涉及按照式I的、针对核醣体16S RNA具有选择性抗菌活性的、基于巴龙霉胺的化合物。此外，本发明涉及所述化合物用于制备药物、药物制剂的用途和制备所述化合物的方法。

Description

靶向细菌16S核糖体RNA的氨基糖苷类抗生素

发明领域

本发明涉及按照式I的、针对核醣体16S RNA具有选择性抗菌活性的、基于巴龙霉胺的化合物。此外，本发明涉及所述化合物用于制备药物、药物制剂的用途和制备所述化合物的方法。

发明背景

氨基糖苷抗生素(AGAs)是临床重要的药物，其可有效抵御很多种微生物。AGAs的临床使用受到毒性(不可逆转的耳毒性和可逆的肾中毒性)和病原体对AGAs的抗性的限制。与2-脱氧链霉胺衍生的AGAs共有的是新霉胺型的假二糖核。它由2-脱氧链霉胺(环II)与氨基脱氧吡喃型葡萄糖(环I)以糖苷形式连接组成。其它糖基部分与2-脱氧链霉胺部分的羟基相连接，产生各种化合物，类别为4，5-或4，6-取代的脱氧链霉胺-衍生的氨基糖苷类，例如巴龙霉素(1a)和卡那霉素A(1b)。

AGAs通过与核糖体RNA(rRNA)的特异性位点结合来影响蛋白质合成的精确度(Magnet等人，Chem.Rev.2005，105，477；Jana等人，Appl.Microbiol.Biotechnol.2006，70，140；Vicens等人，Chembiochem 2003，4，1018；Ogle等人，Trends Biochem Sci 2003，28，259)。虽然核醣体药物使用了十年，但还是没有完全理解这些化合物的控治选择性(即在原核生物和真核核糖体之间的辨别力)和毒性的结构特点。遗传研究(Hobbie等人，Antimicrob.Agents Chemother.2006，50，1489；Hobbie等人，C.Antimicrob.Agents Chemother.2005，49，5112；Boettger等人，EMBOreports 2001，2，318)和与核糖体亚单位复合的AGAs的晶体结构(Carter等人Nature 2000，407，340；Francois等人Nucleic Acids Res 2005，33，5677；和上述的参考文献)有助于理解AGAs与rRNA靶向的相互作用。

以上研究表明，2-脱氧链霉胺衍生AGAs的氨基脱氧吡喃葡糖基环I用同样的方式与rRNA结合，与2-脱氧链霉胺是否是4，5-或4，6-二取代的无关。根据一些AGAs的晶体结构，环I插入到由A1408、A1492和A1493和碱基对C1409-G1491形成的凸出部分中。环I叠加到G1491上，并且与A1408形成假碱基对，以下列为特征：从C(6’)-OH至A1408的N(1)的H键，和从C(5’)-OH至A1408的N(6)的H键。另外，环I显示了与两个翻转出的腺嘌呤1492和1493的磷酸基的两种非特异性相互作用：C(3’)-OH与A1492的O2P形成氢键，C(4’)-OH与A1493的O2P形成氢键。

目前，正在研究基于新霉胺的衍生物用于降低细菌的氨基糖苷类(aminoglyoside)耐受性，和用作抗HIV药剂。

美国专利申请2006/0211634 A1公开了基于新霉胺的化合物用于抑制氨基糖苷-6’-N-乙酰基转移酶的用途，能够逆转或抑制细菌对氨基糖苷抗生素的耐药性。这些化合物的特点在于：在6’位置具有大的取代基，例如辅酶A。认为它们不能用作抗生素。

WO 2005/060573公开了用于调节核酸分子活性的组合物，该核酸分子包含与新霉胺部分共轭的肽核酸部分。该文献没有公开这些组合物的抗菌活性。

Feng等人(Angew.Chem.Int.Ed.2005，44，6859-6862)公开了区域和化学选择性的、基于新霉胺的氨基糖苷与辅酶A的6’-N-衍生物，产生双基质抑制剂，作为研究氨基糖苷6’-N-乙酰基转移酶(AAC(6’)抑制剂)的探针。相同作者(Feng等人，J.Med.Chem 2006，4，5273-5281)描述了基于新霉胺(在6’位置具有长多肽取代基)的第二代AAC(6’)抑制剂。

Riguet等人(Tetrahedron 60，2004：8053-8064)公开了制备基于新霉胺的衍生物(具有通过连接单元结合的杂环取代基)的方法，用于靶向HIV1 TAR RNA。随后，相同作者公开(Bioorganic & Medicinal ChemistryLetters 15(2005)4651-4655)了基于新霉胺的二聚物和三聚物，用于靶向HIV-1 TAR RNA。

由于它们的高毒性和显著的抗菌素耐药性水平，基于新霉胺的氨基糖苷在目前是限制使用的。

本发明的目的是：提供新的和改进的抗菌化合物，其不是通过常见的微生物耐药性决定子修饰的，而是靶向微生物尤其是细菌16S的核糖体RNA，即化合物根本不靶向或基本上较少程度靶向真核胞液和/或线粒体(mitochiondrial)核糖体。

本发明的说明

人们发现，特定的基于巴龙霉胺的化合物可选择性地靶向微生物的16S RNA。

在第一个方面，本发明涉及式(I)的化合物：

其中：

在所有情况下，X、Y和Z彼此独立地表示-O-、-NH-、-S-、取代的或未取代的-CH₂-或连接R¹和/或R²的直接键；

在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示氢，直链或支链的、取代的或非取代的烷基，烯基，炔基，亚烷基，碳环，或YR¹和ZR²一起形成取代的或非取代的环烷基或相应的杂环；

在所有情况下，R³和R⁴彼此独立地表示氢，氨基或羟基；

在所有情况下，R⁵和R⁶彼此独立地表示氢或糖基残基；

和它们的非对映异构体或对映体，以它们的碱的形式或其生理学可接受的酸的盐形式。

在本发明的上下文中，应该理解，前项术语例如直链或支链的、取代或非取代的表明每个随后的术语将被解释为是由所述前项术语所修饰的。例如，术语“直链或支链的、取代或非取代的烷基、烯基、炔基、亚烷基、碳环”的范围包括直链或支链的、取代或非取代的烷基；直链或支链的、取代或非取代的烯基；直链或支链的、取代或非取代的炔基；直链或支链的、取代或非取代的亚烷基；和直链或支链的、取代或非取代的碳环。例如，术语“C₂-C₁₂烯基、炔基或亚烷基”表示化合物的基团具有2至12个碳和烯基、炔基或亚烷基官能团。

本发明的化合物是稳定的，并且对细菌性降解有抗力。然而，据证实，该化合物的一些优选实施方案比其它的化合物更能抵抗细菌决定子。

在本发明的优选实施方案中，式I的化合物是其中R¹和/或R²(优选R¹和R²)不是氢的那些化合物。所述化合物显示了部分(R¹和/或R²≠H)或完全的(R¹和R²≠H)对选自下列的耐药性决定子的抗性：ANT4’-OH，APH2”-OH/AAC6’-NH，AAC3-NH，ANT2”-OH，AAC6’-NH(Magnet等人，Chem.Rev.2005)。

在更优选实施方案中，式I的化合物是其中YR¹和ZR²一起形成取代或非取代的环烷基或相应杂环的那些化合物。最优选，所述环烷基是亚烷基，优选芳基亚烷基(例如亚苄基)，最优选在芳基环中被取代的芳基亚烷基。

在本发明的另一个优选实施方案中，式I的化合物是其中R³和/或R⁴(优选R³和R⁴)是氢(即它们不是氨基或羟基)的那些化合物。所述化合物针对一个或两个耐药性决定子APH3’(如果R³是H)和AAC2’(如果R⁴是H)显示了抗性。

在最优选实施方案中，式I的化合物是其中R¹和/或R²不是氢且R³和/或R⁴是氢的那些化合物。

在本发明的优选实施方案中，在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示氢，直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₁₂烷基，C₂-C₁₂烯基、炔基或亚烷基，C₃-C₁₂环烷基，C₃-C₂₀芳基，优选芳烷基，C₃-C₂₀杂芳基或C₃-C₂₀杂环残基。更优选，在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，C₂-C₈烯基、炔基或亚烷基，C₅-C₁₂环烷基，C₅-C₁₂环芳基，C₅-C₁₂杂芳基或C₅-C₁₂杂环残基。最优选，在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₄烷基，C₂-C₆烯基、炔基或亚烷基，C₅-C₆环烷基，C₅-C₆环芳基，C₅-C₆杂芳基或C₅-C₆杂环残基。

在优选实施方案中，YR¹不是NH₂。在另一个优选实施方案中，ZR²不是OH。

还优选，R¹和/或R²不包含肽核酸部分。

人们注意到，在R¹和/或R²中，增加的大小和空间位阻可以降低选择性和/或提高毒性。由于那个缘故，一般而言，较小的R¹和/或R²取代基是优选的。

优选，R¹包括(优选是)烷基芳基，在芳基部分中是取代或非取代的，优选取代或非取代的(C₁-C₅烷基)芳基，且R²是H。

在另一个优选实施方案中，R²是直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₇烷基，C₂-C₇烯基、炔基或亚烷基，C₃-C₇环烷基，C₃-C₇芳基，优选芳烷基，C₃-C₇杂芳基或C₃-C₇杂环，和R¹是氢。

在本发明的另一个优选实施方案中，R³是羟基。

在本发明的另一个优选实施方案中，R⁴是氨基。

在本发明的另一个优选实施方案中，R⁵是氢。

在本发明的优选实施方案中，R⁵选自单和多糖。优选，R⁵是单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选二糖，特别优选2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基(idopyranosyl)-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分。

优选，R⁶是氢。

在另一个优选实施方案中，R⁶选自单和多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选单糖，特别优选3-氨基-3-脱氧-α-D-吡喃葡糖基部分。

在另一个优选实施方案中，R⁶是2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分。

在另一个更优选实施方案中，YR¹和ZR²一起形成取代或非取代的环烷基或相应的杂环。优选，由YR¹和ZR²形成的环和式I的环I是5或6元环，更优选6元环。

最优选，YR¹和ZR²一起形成6元的4’，6’-环烷基或取代的4’，6’-环烷基环。

在另一个优选实施方案中，Y和Z，优选X、Y和Z是氧。

在更优选实施方案中，上面的式(I)化合物是下面的式(II)化合物：

在这里：

在所有情况下，X、Y和Z彼此独立地表示-O-、-NH-、-S-、取代的或未取代的-CH₂-；

R⁷表示氢，直链或支链的、取代或非取代的烷基，烯基，炔基，亚烷基或碳环；

R⁸表示氢，OH(条件是，该化合物是稳定的)，NH₂，NR_aR_b，SH，SR_a，OR_a或直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基，其中R_a和R_b在所有情况下彼此独立地是C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基；

R³表示氢，氨基或羟基，优选氨基或羟基；

R⁴表示氢，氨基或羟基，优选氨基或羟基；

R⁵表示氢，单或多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选二糖，特别优选2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分；

R⁶表示氢，单或多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选单糖，特别优选3-氨基-3-脱氧-α-D-吡喃葡糖基部分。

在式II中，优选X、Y和Z都是氧。

在式II的优选实施方案中，R⁷表示氢，直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，C₃-C₈环烷基，C₅-C₂₀芳基，C₅-C₂₀杂芳基，优选C₅-C₁₂杂芳基。

在式II的更优选实施方案中，R⁷表示直链、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选取代的直链C₁-C₃烷基，更优选芳基取代的C₁-C₃烷基；取代或非取代的C₃-C₈环烷基，C₅-C₁₂芳基，C₅-C₁₂杂芳基，优选取代的C₅-C₁₂杂芳基。

在另一个更优选实施方案中，R⁷表示C₅-C₁₂芳基或杂芳基，优选(C₁-C₇烷基)芳基。

在式II的更优选实施方案中，R⁷是芳基取代的乙基。

在另一个优选实施方案中，式I或II的本发明化合物包含一个或多个卤素，优选一个卤素，优选氯、溴、氟或碘，更优选氟。对于式II的化合物，优选R⁷包含卤素，优选氯、溴、氟或碘，更优选氟。

对于式II的化合物，优选R⁸选自氢，卤素或直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基，最优选氢。

对于式II的化合物，优选R⁵或R⁶是氢。

对于式II的化合物，优选R⁶是2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分。

在与式I和/或II有关的本发明的进一步优选实施方案中，R¹和/或R²，优选两个，表示直链或支链的、取代或非取代的烷基或环烷基，其中一个或多个碳原子彼此独立地被氧、硫或氮原子取代。

在最优选实施方案中，基于巴龙霉胺的本发明化合物选自：

4’，6’-O-亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间甲氧基亚苄基巴龙霉素四乙酸盐，

4’，6’-O-邻甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-2，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对硝基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间硝基亚苄基巴龙霉素三乙酸盐，

4’，6’-O-对氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’O-3，5-二氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对氰基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对苯基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对氟亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-3，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’O-3，4，5-三甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-邻硝基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对三氟甲基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对二甲基氨基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-1-亚萘基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚萘基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚呋喃基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚噻吩基巴龙霉素和

4’，6’-O-亚乙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(2-苯基)-亚乙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙烯基巴龙霉素，

4’，6’-O-环己基亚甲基巴龙霉素，

4’-O-苄基巴龙霉素，

6’-O-苄基巴龙霉素，

4’-对氯苄基巴龙霉素，

4’-对(三氟甲基)苄基巴龙霉素，

4’-苄氧基甲基巴龙霉素和

4’-对甲氧基苄基巴龙霉素。

定义

在本文公开的所有化合物中，如果命名与结构不一致，应该理解，化合物是由结构定义的。

本发明包括本文所描述的、包含一个或多个不对称碳原子的所有化合物，其可以以消旋体和外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体的混合物和单一非对映异构体的形式存在。这些化合物的所有这种异构形式明确地包括在本发明中。每个立构碳可以是R或S构型，或构型的组合。当然，本发明化合物的巴龙霉胺核的立构结构是固定的，如式1、I和II所示。

本文公开的一些通式(I)和(II)的化合物可以存在一个以上的互变异构形式。本发明包括所有这种互变异构体。

本文使用的所有术语应该按照本领域已知的其普通含义来理解。

应该理解，本文使用的术语“杂原子”是指非碳和氢的原子，例如和优选O、N、S和P。

应该理解，术语烷基、烯基、炔基、亚烷基等等包括含碳链的直链以及支链形式(如果结构上可能的话)。在这些碳链中，一个或多个碳原子可以任选被杂原子取代，优选被O、S或N取代。如果N不是取代的，那么它是NH。杂原子可以取代端部或直链或支链碳链内的内含碳原子。这种基团可以按照本文所描述的方式、被例如氧代所取代，产生定义例如但不局限于烷氧羰基、丙烯酰基、酰胺基和硫代。

应该理解，术语“碳环”是指包含3至20个碳原子、优选3至12个碳原子、更优选5或6个碳原子的脂肪烃原子团。碳环包括含有3至10个碳原子的烃环。这些碳环可以是芳香或非芳香系统。非芳香环系统可以是单或多不饱和的。优选的碳环包括但不局限于环丙基，环丁基，环戊基，环戊烯基，环己基，环己烯基，环庚基，环庚烯基，苯基，茚满基，茚基，苯并环丁基，二氢萘基，四氢萘基，萘基，十氢萘基，苯并环庚基，和苯并环庚烯基。对于环烷基，某些术语例如环丁基(cyclobutanyl)和环丁基(cyclobutyl)可互换使用。

应该理解，术语“环烷基”是指具有3至12个碳原子、含有脂肪烃的环。这些非芳香环系统可以是单或多不饱和的，即该术语包括环烯基和环炔基。环烷基可以包含杂原子，优选O、S或N，并且是取代或非取代的。优选和非限制性环烷基包括环丙基，环丁基，环戊基，环戊烯基，环己基，环己烯基，环庚基，环庚烯基，苯并环丁基，苯并环庚基和苯并环庚烯基。

术语“杂环”是指稳定的非芳香环，优选3至20元，更优选3-12元，最优选5或6元的单环或多环，优选8-12元的双环，含有杂原子的环状原子团，其可以是饱和或不饱和的。每个杂环由碳原子和一个或多个、优选1至4个杂原子组成，杂原子选自氮、氧和硫。杂环残基可以通过环中任何原子与完整分子的剩余结构结合，产生稳定结构。示范性的杂环包括但不局限于：吡咯烷基，吡咯啉基，吗啉基，硫吗啉基，硫吗啉基亚砜，硫吗啉基砜，二氧杂环戊烷基，哌啶基，哌嗪基，四氢呋喃基，1-氧代-λ4-硫吗啉基，13-氧杂-11-氮杂-三环[7.3.1.0-2，7]十三烷基-2，4，6-三烯，四氢吡喃基，2-氧代-2H-吡喃基，四氢呋喃基，1，3-二氧杂戊环酮，1，3-二氧杂环己酮，1，4-二噁烷基，8-氧杂-3-氮杂-二环[3.2.1]辛基，2-氧杂-5-氮杂-二环[2.2.1]庚基，2-硫杂-5-氮杂-二环[2.2.1]庚基，哌啶酮基，四氢-嘧啶酮基，1，5-亚戊基硫醚，1，5-亚戊基亚砜，1，5-亚戊基砜，1，4-亚丁基硫醚，1，4-亚丁基亚砜和1，4-亚丁基砜。

应该理解，本文使用的术语“芳基”是指本文所定义的芳香碳环或杂芳基。除非另作说明，每个芳基或杂芳基包括其部分或完全氢化的衍生物。例如，喹啉基可以包括十氢喹啉基和四氢喹啉基；萘基可以包括它的氢化衍生物例如四氢萘基。本文所描述的芳基和杂芳基化合物的其它部分或完全氢化的衍生物对本领域普通技术人员是显而易见的。当然，该术语包括芳烷基和烷基芳基，其中两者都是实践本发明化合物的优选实施方案。例如，术语芳基包括苯基，茚满基，茚基，二氢萘基，四氢萘基，萘基和十氢萘基。

应该理解，术语“杂芳基”是指芳族C₃-C₂₀，优选5-8元单环，或优选8-12元双环，含有1-4个杂原子，例如N、O和S。示范性的杂芳基包括：氮丙啶基，噻吩基，呋喃基，异噁唑基，噁唑基，噻唑基，噻二唑基，四唑基，吡唑基，吡咯基，咪唑基，吡啶基，嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基，吡喃基，喹喔啉基，吲哚基，苯并咪唑基，苯并噁唑基，苯并噻唑基，苯并噻吩基，喹啉基，喹唑啉基，萘啶基，吲唑基，三唑基，吡唑并[3，4-b]嘧啶基，嘌呤基，吡咯并[2，3-b]吡啶基，吡唑[3，4-b]吡啶基，7-去氮杂腺苷基(tubercidinyl)，噁唑[4，5-b]吡啶基和咪唑并[4，5-b]吡啶基。

应该理解，与上述环状部分类似的术语例如芳氧基或杂芳基胺是指与其相应基团连接的上述芳基、杂芳基、杂环。

本文使用的术语“氮”和“硫”包括氮和硫的任何氧化形式和任何碱性氮的季铵化形式，只要得到的化合物化学上稳定即可。例如，对于-S-C_1-6烷基，应该理解其包括-S(O)-C_1-6烷基和-S(O)₂-C_1-6烷基。

本发明的化合物只是那些本领域技术人员所理解的‘化学上稳定’的化合物。例如，具有‘悬空化合价’或‘碳负离子’的化合物不是本文公开发明所包括的化合物。

上述化合物显示了强烈的抗菌的、尤其是抗菌的、16S RNA特定活性，使得它们特别可用于制备无毒性药物，这是由于它们在真核细胞中实质上无活性，即与真核的胞液和/或线粒体RNA没有相互作用。

由于上述高度的选择活性，本发明的另一个方面涉及一或多种本发明化合物用于制备药物的用途。

在优选实施方案中，一或多种本发明化合物用于制备药物，该药物用于治疗和/或预防微生物感染，优选细菌性感染。

在进一步的优选实施方案中，本发明涉及一或多种按照本发明的化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗和/或预防利什曼病。

在另一个优选实施方案中，本发明涉及一或多种按照本发明的化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗和/或预防锥虫病。

本发明的进一步方面涉及药物组合物，其包含作为活性物质的一或多种本发明化合物或其药学可接受的衍生物或前体药物，任选与常规赋形剂和/或载体组合。

医学用途和药物组合物

本发明包括式(I)和(II)化合物的可药用衍生物。“可药用衍生物”是指任何可药用盐或酯或任何其它化合物，当将其给予患者时，能够提供(直接或间接地)本发明的化合物，或其药理学活性代谢物或药理学活性残余物。应该理解，药理学活性代谢物是指能够被酶催或化学代谢的本发明的任何化合物。其包括例如式(I)和(II)化合物的羟基化的或氧化衍生物。优选实施方案涉及式(I)和(II)化合物的可药用衍生物(水合物)。

可药用盐包括衍生自可药用无机和有机酸和碱的那些盐。合适酸的例子包括盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，高氯酸，富马酸，马来酸，磷酸，乙二醇酸，乳酸，水杨酸，琥珀酸，对甲苯磺酸，酒石酸，乙酸，柠檬酸，甲磺酸，甲酸，苯甲酸，丙二酸，萘-2-硫酸和苯磺酸。其它酸(例如草酸，其本身不是可药用的)可以用于制备盐，这种盐可在获得本发明化合物和其可药用酸加成盐的过程中用作中间体。衍生自合适碱的盐包括碱金属(例如钠)、碱土金属(例如镁)、铵和N-(C₁-C₄烷基)₄ ⁺盐。

另外，本发明的范围还包括式(I)和(II)化合物的前体药物。前体药物包括一旦用简单化学变化来修饰就可产生本发明化合物的那些化合物。简单的化学变化包括水解、氧化和还原。具体地说，当将前体药物给予患者时，前体药物可以转变成上文公开的化合物，由此赋予所需要的药理学效果。

本发明的化合物显示了对细菌核糖体的选择性抑制。这些药物不影响真核核糖体，因为它们不靶向真核线粒体或胞液16S核糖体RNA，如试验所显示(用遗传设计的核糖体，核糖体携带真核16S RNA核苷酸位置)。

因此，在进一步的方面，本发明涉及一或多种按照本发明的化合物用于制备药物的用途。优选，本发明的化合物用于制备可治疗和/或预防细菌感染的药物。

在上述方面中，本发明还涉及药物组合物，其包含作为活性物质的一或多种按照本发明的化合物或其药学可接受的衍生物或前体药物，任选与常规赋形剂和/或载体组合。

使用方法

对于治疗或预防用途，可以以任何常规剂型、以任何常规方式给予本发明的化合物。给药途径包括但不局限于：静脉内，肌肉内，皮下，滑液内，输液，舌下，透皮，口服，局部，或吸入。优选的给药模式是口服和静脉内。

可以单独或与佐剂组合给予化合物，佐剂可增加抑制剂的稳定性，在某些实施方案中，便于给予含有它们的药物组合物，提供增加的溶解或分散性，增加抑制活性，提供辅助治疗，等等，包括其它活性组分。优选，这种组合治疗使用常规疗法的较低剂量，由此避免当那些药剂用作单疗法时引起的可能的毒性和不良副作用。上述化合物可以与常规疗法或其它佐剂物理组合为单一药物组合物。在这方面的参考文献可以从下列获得：Cappola等人：美国专利申请09/902,822，PCT/US 01/21860和美国临时申请60/313,527，将每个的整体结合到本文中作为参考。优选，可以一起在单一剂型中给予化合物。在一些实施方案中，包含这种化合物组合的药物组合物含有至少大约5％的式(2)或(3)化合物(w/w)或其组合，但更优选至少大约20％。本发明化合物的最佳百分数(w/w)可以变化，并且在本领域技术人员的权限范围之内。或者，化合物可以单独给予(顺序或并行)。独立给药可以使给药方式更具灵活性。

如上所述，本文所描述化合物的剂型包括本领域普通技术人员已知的可药用载体和佐剂。这些载体和佐剂包括例如离子交换剂，矾土，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，缓冲物质，水，盐或电解质和纤维素基物质。优选剂型包括片剂，胶丸，锭剂，液体，溶液，悬浮液，乳化液，糖锭，浆液，可重组的粉末，颗粒，栓剂和透皮贴片。制备这种剂型的方法是已知的(参见，例如，H.C.Ansel and N.G.Popovish，Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems，5^th ed.，Lea andFebiger(1990))。剂量水平和要求在本领域是很好辨别的，并且本领域普通技术人员可以从适合于具体患者的可获得方法和技术中选择。在一些实施方案中，对于70kg患者，剂量水平在大约1-100mg/剂量的范围。虽然每天一个剂量是足够的，但每天可以给予5个剂量。对于口服剂量，可以要求高达2000mg/天。在这方面的参考文献还可以在美国临时申请60/339,249中获得。正如技术人员理解的那样，根据具体因素，可以要求低或高剂量。例如，具体剂量和治疗方案取决于例如下列因素：患者的常规健康状况，患者病症的严重程度和病程，和治疗医生的判断。

例如，可以用和巴龙霉素及其它巴龙霉胺化合物一样的方法给予本发明的化合物。在治疗肠感染过程中，可以将它们口服给予，对于内脏的治疗，可以胃肠外给药，对于皮肤利什曼病，可以局部给药。

优选，以硫酸盐的形式给予本发明的化合物。在肠的阿米巴病的情况下，对于成人和儿童，每天每kg体重的内服量可以是5至70mg本发明的化合物，优选15至50mg，更优选25至35mg，给予三个剂量(与膳食一起)，给予5至10天。在肝昏迷情况下，口服日剂量是4g，每隔一定时间以分开剂量形式给予，给予5至6天。

按照配制巴龙霉素的相同方法，可以将本发明的化合物配制到胶丸中(例如Parke-Davis)。每个胶丸可以含有100至500mg本发明的化合物，优选150至300mg，更优选200至250mg。例如，对于本发明的化合物，胶丸中的非药物组分是胶丸壳：D&C yellow No.10，FD&C blue No.1，FD&C red No.3，FD&C yellow No.6，凝胶和二氧化钛。100号的瓶。(参见Martindale：the complete drug reference，34^th Edition，2005，Pharmaceutical Press，p 612)。

应该强调，可以用比巴龙霉素或其它非特定抗生素更高的剂量给予本发明的化合物，因为本发明的化合物对于微生物(尤其是细菌)核糖体具有选择性，并且可保留真核的核糖体，由此无严重的副作用。

制备本发明化合物的方法

本发明的化合物可以用本领域技术人员熟知的标准方法来制备，尤其是有机和糖苷化学领域。在下面实施例中，提供了制备它们的常规反应路线和具体实例，这些实施例没有限制的意思，只是作为说明性的。

在下面中，提供了制备本发明化合物的优选方法，可以将其视为实践本发明的最佳方式。

在进一步的方面，本发明涉及制备按照本发明化合物的方法，包括一个或多个下列步骤：

a)提供按照式III的化合物：

其中：

在所有情况下，V和W彼此独立地表示-O-、-NH-和-S-；

在所有情况下，R³和R⁴彼此独立地表示氢，氨基或羟基；

在所有情况下，R⁵和R⁶彼此独立地表示氢或糖基残基；

b)保护一个或多个(优选所有的)氨基；

c)任选保护一个或多个(优选所有的)羟基；

d1)将任选保护的4’-和/或6’-羟基选择性地转化为式I的YR¹和/或ZR²基团或式II的环系；或

d2)将保护的4’-和/或6’-羟基选择性地去保护，并且将脱保护的4’-和/或6’-羟基选择性地转化为式I的YR¹和/或ZR²基团或式II的环系；

e)将一个或多个氨基去保护；

f)将一个或多个羟基去保护；

其中步骤b)和c)以及e)和f)的顺序可以颠倒，b)和c)以及e)和f)的顺序是优选的。

对于步骤c)的任选，应该注意，为了制备本发明的一些化合物，例如式II的化合物，可能不需要保护一个或多个羟基。当引入二噁烷、二噁烷衍生物或其它芳基亚烷基(例如亚苄基)部分时，这种选择是特别正确的，以便产生式II的化合物。在那种情况下，步骤d1)中引入的部分已经可以起保护基的作用。

当V和/或W是二价硫原子时，通过与合适的亲电试剂例如卤素衍生物或磺酸酯反应，引入式I的R¹和/或R²基团。或者，可以由任选保护的式III化合物(其中VH和WH彼此独立地表示羟基)直接或间接地引入得到YR¹和/或ZR²的相同基团。可以通过与R⁷CHO或R⁷CH(OR^a)(OR^b)(其中R^a和R^b是烷基残基，优选甲基)进行缩醛形成，引入式II的环系，在合适有机和/或无机酸的存在下，如果需要的话，在合适溶剂中，或者，通过与

或

进行反应，其中X是离去基团，优选卤素原子，更优选溴，在碱的存在下，如果需要的话，在合适溶剂中。

应该注意，氨基和/或羟基的保护和去保护步骤可以通过任何合适反应实现，这种反应对技术人员是通常可利用的，并且对本发明的化合物没有不利影响。

优选，通过将氨基转化为叠氮基、氨基甲酰基或N-酰基胺基来保护它们。优选，利用重氮转移，通过将氨基转化为叠氮基来保护它们。

优选，通过将羟基转化为醚(优选烷基和/或甲硅烷基醚)和/或酯(优选磺酸酯或缩醛)来保护它们。更优选，用酰基转移试剂，优选乙酸酐，优选在碱和/或催化剂的存在下，通过将羟基转化为乙酰氧基来保护它们。

对于乙酰氧基，优选，通过碱或酸催化的水解来将其脱保护，或利用其它溶剂分解作用，或用氢供体例如二异丁基氢化铝、LiAlH₄或LiBH₄进行还原。

在另一个优选实施方案中，通过式III的羟基化合物与R⁷CHO或R⁷CH(OR^a)(OR^b)的反应来制备式III的4’，6’-缩醛，其中R^a和R^b是烷基残基，优选甲基，在合适有机和/或无机酸的存在下，并且如果需要的话，在合适溶剂中。

在另一个优选实施方案中，式III的4’，6’-缩醛是通过式III的羟基化合物与或

进行反应来制备的，其中X是离去基团，优选卤素原子，更优选溴，在碱的存在下，并且如果需要的话，在合适溶剂中。

优选利用选自下列的方法将叠氮基脱保护：

还原氢化，优选氢气，在合适催化剂例如Pd、Pd(OH)₂、Rh或Pt的存在下；

利用氢气和硼化镍；

与氢化物试剂反应，优选氢硼化物或氢化铝，

电子转移，优选与硫化氢、硫醇或双硫醇反应，在碱的存在下，

金属的还原，例如利用Zn或Na或Na-汞齐，在醇的存在下，和

用膦试剂处理，优选三甲基膦(Staudinger反应)，而后水解(参见Staudinger and Meyer，Helv.Chim.Acta 1919，2，635；Golobov等人，Tetrahedron，1981，37，437；和Scriven等人，Chem.Rev.，1988，88，297；和下列中描述的：S.D.Burke and R.L.Danheiser，ed.“Oxidizing andReducing Agents”，J.Wiley，Chichester，1999)。

在优选实施方案中，本发明涉及一种方法，在该方法中，将4’-和6’-羟基选择性地脱保护。

在另一个优选实施方案中，以亚苄基缩醛的形式将4’-和6’-羟基进行保护。优选，利用选自催化氢化、Birch还原和酸催化的水解的方法，将所述4’，6’-亚苄基缩醛脱保护。

在优选实施方案中，本发明方法包括：在合适路易斯酸的存在下，通过与合适氢化物试剂(优选硼烷-二甲硫醚复合物)进行反应，4’，6’-缩醛进行区域选择性还原裂解，产生较大位阻的醚衍生物。

在另一个优选实施方案中，本发明方法包括：在合适酸的存在下，通过与合适氢化物试剂(优选氰基硼氢化钠)进行反应，4’，6’-缩醛进行区域选择性还原裂解，产生较小位阻的醚衍生物。

在另一个优选实施方案中，以苄氧基形式保护式III化合物中的羟基，优选，苄基部分是取代或未取代的芳甲基或杂芳基甲基。最优选，苄氧基是对甲氧基苄氧基，优选，在合适碱或酸的存在下，通过式III化合物与合适的对甲氧苯甲基转移试剂例如对甲氧苯甲基卤化物的反应来引入。在优选实施方案中，通过用合适试剂(优选用二氯二氰基醌)进行氧化裂解，将对甲氧基苄氧基脱保护。

在更优选实施方案中，本发明方法要求将式III的原始的6’-羟基以醚形式进行选择性地保护，优选烷基或甲硅烷基醚，或酯形式，优选磺酸酯或缩醛。最优选，原始的6’-羟基是单甲氧基三苯甲基氧基，优选，在合适碱的存在下，通过与合适的单甲氧基三苯甲基转移试剂例如单甲氧基三苯甲基卤化物进行反应来引入到式III化合物中。

最后但并非最不重要，优选，以醚形式保护4’-羟基，优选，在合适碱的存在下，通过与合适烷氧基转移试剂(优选烷基卤)的反应。

附图

图1：举例说明了按照实施例3的rRNA操纵子rrnB的消除策略。空心箭头表示rRNA基因；P和T分别表示促进和终止序列。实箭头表示rrnB的上游和下游的开放读框。阴影线矩形表示抗菌素耐药性匣子，点画箭头表示sacB基因。虚线表示在置换型载体(A)和染色体的靶向位点(B)中的同源序列之间的可能交叉位点。在质粒结合到rrnB 5’-旁侧区(C)中之后，在同源3’-旁侧序列之间的第二次交叉活动将染色体的串联重复单元拆分开来，造成rrnB(D)的缺失。

图2举例说明了按照实施例3的M.smegmatis ΔrrnA ΔrrnBattB::prrnB的产生的序列策略。在消除染色体的rrnB之后，携带功能性rrnB操纵子的补充载体被引入到染色体的attB位点。rrnA的后续消除产生菌株M.smegmatis ΔrrnA ΔrrnB attB::prrnB，其中核糖体RNA单独由质粒转译。

在下面中，参照具体实施方案更详细地描述本发明的目标内容，不应将这些实施方案理解为对本发明范围的限制。

Brauchen wir diese Liste wirklich？Die meisten Abk ürzungen sinddem Fachmann/Fachfrau

Ich habe schon mal ein paar gestrichen，die wir mit Sicherheit nicht brauchen。

简写表

ax＝轴向，c＝浓度，DDQ＝二氯二氰基醌，dec.＝分解，eq＝平展的，equ.＝当量，ESI＝电喷雾电离，FC＝快速色谱，HR＝高分辨率，HSQC＝异核单量子相干，MMTr＝单甲氧基三苯甲基，-(X

)MS＝分子筛，PMB＝4-甲氧苯甲基，Tf＝三氟甲磺酰基，Ts＝4-甲苯磺酰。

实施例

实施例1：

材料和方法

如下新蒸馏溶剂：THF用Na蒸馏，二苯酮、CH₂Cl₂、MeOH、吡啶、Et₃N用CaH₂蒸馏。反应在氮气氛围中进行，除非另有说明。定性TLC：预涂硅胶玻璃板(Merck硅胶60 F₂₅₄)；用‘mostain’加热来检测(400ml 10％H₂SO₄ soln.，20g(NH₄)₆Mo₇O₂₄.6H₂O，0.4g Ce(SO₄)₂)。快速色谱(FC)：硅胶Merck 60(0.063-0.20)。M.p.未校正。旋光度：1-dm小池，在25°，589nm。FT-IR谱：ATR，吸收，cm^-1。¹H-和¹³C-NMR谱：化学位移(ppm，以TMS作为外标，偶合常数J(Hz)。HR-ES-MS或HR-MALDI-MS：在龙胆酸(＝2，5-二羟基苯甲酸，DHB)基质中。

缩醛的合成

反应路线1

i)TfN₃，CuSO₄，^tBuOK，H₂O/^tBuOH/CH₂Cl₂ 1/2/1，23℃，18h；ii)Ac₂O，DMAP，Pyr，Ar，23°，18h；iii)NaOMe，MeOH，23°，12h；iv)R⁷＝PhCHO，HCO₂H，-5°-0°，Ar，24h，85％；v)R⁷CH(OMe)₂，TsOH.H₂O，DMF，N₂，23°-65°；vi)0.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，N₂，65°.

按照Helv Chim Acta 2005，88，2967中描述的方法，合成化合物2、3、4.1。

形成缩醛4.2-4.12的典型方法(反应路线1)。在N₂氛围中，将2的DMF溶液用R⁷CHO(5equ)的相应二甲缩醛的DMF和TsOH.H₂O(0.5equ.)溶液处理，在25°或在65°搅拌。将混合物用AcOEt稀释，用0.1M NaOH水溶液洗涤。用AcOEt提取水层两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(己烷/AcOEt 8∶2，CHCl₃/AcOEt 1∶1→CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 6∶6∶0.25)得到4.2-4.12。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.2)。71mg 2的反应，得到57mg 4.2(69％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.46。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{29}=+112.5$ (c＝0.29，CH₃OH)。HR-Maldi-MS：902.2569(22，[M+K]⁺，C₃₁H₄₁KN₁₅O₁₅ ⁺；计算值902.2544)；887.2817(39，[M+Na+H]⁺，C₃₁H₄₂N₁₅NaO₁₅ ⁺；计算值887.2883)；886.2783(100，[M+Na]⁺，C₃₁H₄₁N₁₅NaO₁₅ ⁺；计算值886.2799)。C₃₁H₄₁N₁₅O₁₅.CH₃OH的分析计算值(895.79)：C 42.91，H 5.06，N 23.45；实测值：C 43.31，H 5.00，N 23.14。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-间甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.3)。101mg 2的反应，得到47mg 4.3(40％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.45。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{29}=+98.2$ (c＝0.17，CH₃OH)。HR-Maldi-MS：863.2932(33，[M]⁺，C₃₁H₄₁N₁₅O₁₅ ⁺；计算值863.2907)；862.2849(88，[M-H]⁺，C₃₁H₄₀N₁₅O₁₅ ⁺；计算值862.2834)。C₃₁H₄₁N₁₅O₁₅.CH₃CO₂CH₂CH₃的分析计算值(951.85)：C 44.16，H 5.19，N22.07；实测值：C 43.83，H 5.32，N 21.71。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-邻甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.4)。99mg 2的反应，得到76mg 4.4(66％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.40。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{29}=+120.6$ (c＝0.28，CH₃OH)。HR-Maldi-MS：887.2812(33，[M+Na+H]⁺，C₃₁H₄₃N₁₅NaO₁₅ ⁺；计算值887.2883)；886.2784(100，[M+Na]⁺，C₃₁H₄₂N₁₅NaO₁₅ ⁺；计算值886.2799)。C₃₁H₄₁N₁₅O₁₅.CH₃OH的分析计算值(895.79)：C 42.91，H 5.06，N 23.45；实测值：C 43.01，H 5.23，N 23.37。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.5)。119mg 2的反应，得到104mg 4.5(73％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.54。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{29}=+105.0$ (c＝0.295，CH₃OH)。HR-Maldi-MS：917.2917(40，[M+Na+H]⁺，C₃₂H₄₄N₁₅NaO₁₆ ⁺；计算值917.2988)；916.2887(100，[M+Na]⁺，C₃₂H₄₃N₁₅NaO₁₆ ⁺；计算值916.2904)。C₃₂H₄₃N₁₅O₁₆.CH₃OH的分析计算值(925.82)：C 42.81，H 5.12，N 22.69；实测值：C 42.93，H 5.34，N 22.34。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对硝基亚苄基巴龙霉素(4.6)。49mg 2的反应，得到104mg 4.6(35％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.36。HR-Maldi-MS：878.2619(39，[M]⁺，C₃₀H₃₈N₁₆O₁₆ ⁺；计算值878.2652)；877.2570(100，[M-H]⁺，C₃₀H₃₇N₁₆O₁₆ ⁺；计算值877.2573)。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-间硝基亚苄基巴龙霉素(4.7)。100mg 2的反应，得到29mg 4.7(26％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.36。HR-Maldi-MS：878.2604(44，[M]⁺，C₃₀H₃₈N₁₆O₁₆ ⁺；计算值878.2652)；877.2561(100，[M-H]⁺，C₃₀H₃₇N₁₆O₁₆ ⁺；计算值877.2573)。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对氯亚苄基巴龙霉素(4.8)。28mg 2的反应，得到10mg 4.8(31％)。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶1)0.48。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-3，5-二氯亚苄基巴龙霉素(4.9)。80mg 2的反应，得到22mg 4.7(23％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.39。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对氰基亚苄基巴龙霉素(4.10)。115mg 2的反应，得到43mg 4.10(33％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.31。HR-Maldi-MS：858.2722(39，[M]⁺，C₃₁H₃₈N₁₆O₁₄ ⁺；计算值858.2753)；857.2675(100，[M-H]⁺，C₃₁H₃₇N₁₆O₁₄ ⁺；计算值857.2681)。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对苯基亚苄基巴龙霉素(4.11)。80mg 2的反应，得到66mg 4.11(68％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.42。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{29}=+102.6$ (c＝0.29，CH₃OH)。HR-Maldi-MS：908.3058(100，[M-H]⁺，C₃₆H₄₂N₁₅O₁₄ ⁺；计算值908.3041)；909.3147(40，[M]⁺，C₃₆H₄₃N₁₅O₁₄ ⁺；计算值909.3114)。C₃₆H₄₃N₁₅O₁₄.CH₃OH的分析计算值(941.34)：C 47.18，H 5.03，N 22.31；实测值：C 47.26，H 5.11，N 22.39。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对氟亚苄基巴龙霉素(4.12)。175mg 2的反应，得到139mg 4.12(69％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.34。HR-Maldi-MS：890.2335(28，[M+K]⁺，C₃₀H₃₈FKN₁₅O₁₄ ⁺；计算值890.2344)；875.2620(38，[M+Na+H]⁺，C₃₀H₃₉FN₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值875.2683)；874.2582(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₃₈FN₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值874.2599)。C₃₀H₃₈FN₁₅O₁₄.CH₃OH的分析计算值(883.7551)：C 42.13，H 4.79，N 23.77；实测值：C 42.39，H 4.79，N23.77。

叠氮基的脱保护的典型方法。在N₂氛围中，将4.1-4.12的THF溶液用0.1M NaOH水溶液(2equ.)和1M PMe₃的THF(6equ.)溶液处理，在60°搅拌。蒸发和FC(THF，THF/MeOH，MeOH，MeOH/25％aq.NH₃ 49∶1→MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)得到5.1-5.12。

4’，6’-O-亚苄基巴龙霉素(5.1)。110mg 4.1的反应，得到73mg5.1(79％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃4∶1)0.30。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+43.2$ (c＝0.25，H₂O)。IR(ATR)：3355w，3290w，2909w，1589w，1455w，1378w，1334w，1023s，978s，927m。¹H-NMR(500MHz，D₂O，基于DQF COSY和HSQC谱归属)：7.57-7.55(m，2芳香H)；7.50-7.48(m，3芳香H)；5.58(s，PhCH)；5.55(d，J＝3.8，H-C(1’))；5.40(d，J＝2.3，H-C(1”))；5.04(d，J＝1.7，H-C(1”’))；4.44(dd，J＝6.6，5.0，H-C(3”))；4.35-4.31(m，2H，H-C(2”)，H_a-C(6’))；4.18-4.13(m，2H，H-C(4”)，H-C(5”’))；4.10-4.04(m，2H，H-C(3”’)，H-C(5’))；3.94-3.87(m，2H，H_a-C(5”)，H-C(3’))；3.91(t，J＝10.5，H_b-C(6’))；3.77-3.73(m，2H，H-C(4’)，H-C(5))；3.74(dd，J＝10.0，5.2，H_b-C(5”))；3.71-3.70(m，1H，H-C(4”’))；3.54(t，J＝9.3，H-C(4))；3.40(t，J＝9.7，H-C(6)；3.28(dd，J＝13.6，7.9，H_a-C(6”’))；3.21(dd，J＝13.5，3.9，H_b-C(6”’))；3.13(m，1H，H-C(2”’))；3.04-3.00(m，1H，H-C(3))；2.99(dd，J＝10.0，3.9，H-C(2’))；2.94-2.89(m，1H，H-C(1))；2.07(dt，J＝13.0，4.1，H_eq-C(2))；1.34(q，J＝12.5，H_ax-C(2))。¹³C-NMR(126MHz，D₂O，基于HSQC谱归属)：138.79(s)；132.61(d)，131.43(2d)；128.91(2d)；111.35(d，C(1”))；104.52(d，PhCH)；101.83(d，C(1’))；101.18(d，C(1”’))；86.96(d，C(5))；84.46(d，C(4))；83.89(d，C(4”))；83.52(d，C(4’))；78.88(d，C(6))；78.06(d，C(3”))；76.05(d，C(2”))；74.61(d，C(5”’))；72.73(d，C(3”’))；72.56(d，C(3’)，71.11(d，C(4”’))；70.72(t，C(6’))；66.32(d，C(5’))；63.38(t，C(5”))；58.55(d，C(2’))；54.87(d，C(2”’))；53.02(d，C(1))；52.24(d，C(3))；43.41(t，C(6”’))；36.81(t，C(2))。HR-Maldi-MS：726.3117(31，[M+Na]⁺，C₃₀H₄₉N₅NaO₁₄ ⁺；计算值726.3174)；705.3347(37，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₁N₅O₁₄ ⁺；计算值705.3433)；704.3336(100，[M+H]⁺，C₃₀H₅₀N₅O₁₄ ⁺；计算值704.3349)。C₃₀H₄₉N₅O₁₄的分析计算值(703.74)：C 51.20，H 7.02，N 9.95；实测值：C 51.30，H 7.15，N 9.98。

4’，6’-O-对甲氧基亚苄基巴龙霉素(5.2)。17mg 4.2的反应，得到11mg 5.2(76％)。白色固体。

R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.36。IR(ATR)：3355w(br.)，2917w，1614w，1518w，1461w，1378w，1302w，1250w，1101s，1024s，937m。HR-Maldi-MS：735.3475(36，[M+2H]⁺，C₃₁H₅₃N₅O₁₅ ⁺；计算值735.3538)；734.3442(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅O₁₅ ⁺；计算值734.3454)。

4’，6’-O-间甲氧基亚苄基巴龙霉素四乙酸盐(5.3)。26mg 4.3的反应，得到18mg 5.3(81％)。白色固体。通过在20％AcOH水溶液中搅拌，将产物转变为四乙酸盐(23mg)。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.34。IR(ATR)：3311w，2884w，1542m，1402m，1336w，1285w，1261w，1096s，1042s，1014s。HR-Maldi-MS：757.3323(28，[M+Na+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅NaO₁₅ ⁺；计算值757.3358)；756.3287(83，[M+Na]⁺，C₃₁H₅₁N₅NaO₁₅ ⁺；计算值756.3279)；735.3468(37，[M+2H]⁺，C₃₁H₅₃N₅O₁₅ ⁺；计算值735.3538)；734.3442(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅O₁₅ ⁺；计算值734.3454)；574.2595(31，[M-环IV+2H]⁺，C₂₅H₄₀N₃O₁₂ ⁺；计算值574.2612)。

4’，6’-O-邻甲氧基亚苄基巴龙霉素(5.4)。18mg 4.4的反应，得到21mg 5.4。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.31。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+51.3$ (c＝0.15，H₂O)。IR(ATR)：3148w(br.)，1606w，1526w，1498w，1463w，1386w，1287w，1250w，1095s，1047s。HR-Maldi-MS：757.3328(25，[M+Na+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅NaO₁₅ ⁺；计算值757.3358)；756.3291(67，[M+Na]⁺，C₃₁H₅₁N₅NaO₁₅ ⁺；计算值756.3279)；735.3470(36，[M+2H]⁺，C₃₁H₅₃N₅O₁₅ ⁺；计算值735.3538)；734.3442(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅O₁₅ ⁺；计算值734.3454)；442.15.17(32，[M-环III-环IV+2H]⁺，C₂₀H₃₂N₃O₈ ⁺；计算值442.2189)。

4’，6’-O-2，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素(5.5)。25mg 4.5的反应，得到21mg 5.5(98％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.29。IR(ATR)：3287w，2913w，1593w，1503m，1464m，1425w，1386w，1280w，1221w，1104s，1019s。HR-Maldi-MS：786.3382(26，[M+Na]⁺，C₃₂H₅₃N₅NaO₁₆ ⁺；计算值786.3385)；765.3571(37，[M+2H]⁺，C₃₂H₅₅N₅O₁₆ ⁺；计算值765.3644)；764.3545(100，[M+H]⁺，C₃₂H₅₄N₅O₁₆ ⁺；计算值764.3560)。

4’，6’-O-对硝基亚苄基巴龙霉素(5.6)。14mg 4.6的反应，得到6mg5.6(50％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.24. ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+168.1$ (c＝0.01，H₂O)。IR(ATR)：3172w(br.)，2900w，1611w，1521w，1349w，1130s，1099s，995s。HR-Maldi-MS：750.2943(38，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₀N₆O₁₆ ⁺；计算值750.3283)；749.3196(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉N₆O₁₆ ⁺；计算值749.3205)。

4’，6’-O-间硝基亚苄基巴龙霉素三乙酸盐(5.7)。16mg 4.7的反应，在10％AcOH水溶液中搅拌和蒸发之后，得到11mg 5.7(61％)。浅黄色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.31。IR(ATR)：3095m(br.)，1528m，1406m，1349m，1100s，1045s，1014s，937m。HR-Maldi-MS：750.3211(36，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₀N₆O₁₆ ⁺；计算值750.3283)；749.3187(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉N₆O₁₆ ⁺；计算值749.3200)。

4’，6’-O-对氯亚苄基巴龙霉素(5.8)。17mg 4.8的反应，得到12mg5.8(83％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.36。IR(ATR)：3037w(br.)，1738w，1603w 1524w，1493w，1454w，1406w，1375w，1081s，1049s，1018s。HR-Maldi-MS：738.2972(95，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉ClN₅O₁₄ ⁺；计算值750.3283)。

4’，6’-O-3，5-二氯亚苄基巴龙霉素(5.9)。25mg 4.9的反应，得到19mg5.9(89％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.29。IR(ATR)：3188w(br.)，2900w，1597w，1573w 1526w，1429w，1369w，1101s，1029s。HR-Maldi-MS：772.2556(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₈Cl₂N₅O₁₄ ⁺；计算值772.2575)。

4’，6’-O-对氰基亚苄基巴龙霉素(5.10)。10mg 4.10的反应，得到9mg5.10。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.27。IR(ATR)：3200w(br.)，1619w，1526w，1417w，1094s，996s。HR-Maldi-MS：730.3322(36，[M+2H]⁺，C₃₁H₅₀N₆O₁₄ ⁺；计算值730.3385)；729.3288(100，[M+H]⁺，C₃₁H₄₉N₆O₁₄ ⁺；计算值729.3307)。

4’，6’-O-对苯基亚苄基巴龙霉素(5.11)。20mg 4.11的反应，得到16mg  5.11(93％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.31. ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+42.3$ (c＝0.14，H₂O)。IR(ATR)：3356w，3284w，2903w，1599w，1532w，1489w，1451w，1375w，1110s，1074s，1026s。HR-Maldi-MS：803.3565(41，[M+Na+H]⁺，C₃₆H₅₄N₅NaO₁₄ ⁺；计算值803.3565)；802.3462(100，[M+Na]⁺，C₃₆H₅₃N₅NaO₁₄ ⁺；计算值802.3481)；780.3616(48，[M+H]⁺，C₃₆H₅₄N₅O₁₄ ⁺；计算值780.3667)。

4’，6’-O-对氟亚苄基巴龙霉素(5.12)。60mg 4.12的反应，得到51mg5.11。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.33.IR(ATR)：3285w，2875w，1606w，1514w，1457w，1376w，1300w，1224w，1047s，1014s，935m。¹H-NMR(500MHz，D₂O，基于DQF COSY和HSQC谱归属)：7.54-7.50(m，2芳香H)；7.19-7.13(m，2芳香H)；5.71(s，PhCH)；5.51(d，J＝3.9，H-C(1’))；5.35(d，J＝2.3，H-C(1”))；5.05(d，J＝1.8，H-C(1”’))；4.46(dd，J＝6.6，4.9，H-C(3”))；4.32(dd，J＝4.9，2.3，H-C(2”))；4.27(dd，J＝10.2，4.8，H_a-C(6’))；4.18-4.11(m，2H，H-C(4”)，H-C(5”’))；4.07(t，J＝3.2，H-C(3”’))；4.03-3.96(m，H-C(5’))；3.88-3.82(m，3H，H_a-C(5”)，H-C(3’)，H_b-C(6’))；3.73-3.63(m，4H，H_b-C(5”)，H-C(5)，H-C(4”’)，H-C(4’))；3.51(t，J＝9.4，H-C(4))；3.44(t，J＝10.0，H-C(6)；3.32-3.21(m，2H，H_a-C(6”’)，H_b-C(6”’))；3.18(t，J＝1.8，H-C(2”’))；3.01(dd，J＝9.8，3.9，H-C(2’))；3.00-2.93(m，2H，H-C(3)，H-C(1))；2.08(dt，J＝12.9，4.1，H_eq-C(2))；1.37(q，J＝12.5，H_ax-C(2))。¹³C-NMR(126MHz，D₂O，基于HSQC谱归属)：165.87(d，¹J(C，F)＝245.7)；135.04(d，J＝2.9，C_para)；131.09(d，³J(C，F)＝8.7，2C_meta)；118.18(d，²J(C，F)＝21.9，2C_ortho)；111.64(d，C(1”))；103.83(d，PhCH)；101.61(d，C(1’))；100.55(d，C(1”’))；86.95(d，C(5))；84.34(d，C(4))；83.91(d，C(4”))；83.38(d，C(4’))；78.06(d，C(3”))；77.90(d，C(6))；76.02(d，C(2”))；73.97(d，C(5”’))；72.30(d，C(3”’))；72.20(d，C(3’)，70.90(d，C(4”’))；70.67(t，C(6’))；66.33(d，C(5’))；63.37(t，C(5”))；58.42(d，C(2’))；54.61(d，C(2”’))；53.12(d，C(1))；52.15(d，C(3))；43.35(t，C(6”’))；35.95(t，C(2))。HR-Maldi-MS：744.3074(32，[M+Na]⁺，C₃₀H₄₈FN₅NaO₁₄ ⁺；计算值744.3079)；723.3262(34，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₀FN₅O₁₄ ⁺；计算值723.3338)；722.3242(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉FN₅O₁₄ ⁺；计算值722.3255)。

反应路线2

i)TfN₃，CuSO₄，^tBuOK，H₂O/^tBuOH/CH₂Cl₂ 1/2/1，23℃，18h；ii)PhCHO，HCO₂H，-5°-0°，Ar，24h；iii)Ac₂O，DMAP，Pyr，Ar，23°，12h，42％来自1；iv)TsOH.H₂O，MeOH，61％；v)R⁷CHO，FeCl₃，N₂，23°；vi)R⁷CHO；TsOH.H₂O，甲苯，N₂，回流；vii)NaOMe，MeOH；viii)O.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，N₂，65°。

按照Helv.Chim.Acta 2005，88，2967中描述的方法，合成化合物6。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-巴龙霉素(7)。将6(23mg，0.021mmol)的MeOH(1mL)溶液用TsOH.H₂O(2mg，0.011mmol)处理，在25°搅拌5小时。将混合物用AcOEt(10ml)稀释，并用水(8ml)洗涤。用AcOEt(2x10ml)提取水溶液层两次。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(环己烷/AcOEt 8∶2→环己烷/AcOEt 3∶7得到7(13mg，61％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.57。

形成缩醛4.13-4.27的典型方法。

方法A：在N₂氛围中，将7的醛溶液用FeCl₃处理，在23°搅拌2-24小时。将混合物用AcOEt稀释，用硅藻土过滤，用0.1M NaOH水溶液洗涤。用AcOEt提取水层两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(己烷或环己烷/AcOEt 8∶2→6∶4)得到8.15、8.19、8.21-8.27。

方法B：在N₂氛围中，将7的甲苯溶液用5

分子筛、TsOH.H₂O(0.5equ.)、醛(5equ.)的甲苯溶液处理，回流搅拌2-24小时。将混合物用AcOEt稀释，用硅藻土过滤，用0.1M NaOH水溶液洗涤。用AcOEt提取水层两次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(己烷或环己烷/AcOEt 8∶2→6∶4)得到8.13-8.14、8.16-8.18、8.20。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-3，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素(8.13)。方法B：70mg 7的反应，得到58mg 8.13(72％)。白色固体。R_f(己烷/AcOEt1∶1)0.34。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1184.3294(43，[M+K]⁺，C₄₄H₅₅KN₁₅O₂₂ ⁺；计算值1184.3283)；1169.3562(54，[M+Na+H]⁺，C₄₄H₅₆N₁₅NaO₂₂ ⁺；计算值1169.3622)；1168.3568(100，[M+Na]⁺，C₄₄H₅₅N₁₅NaO₂₂ ⁺；计算值1168.3544)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-3，4，5-三甲氧基亚苄基巴龙霉素(8.14)。方法B：61mg 7的反应，得到50mg 8.14(70％)。白色固体。R^f(己烷/AcOEt1∶1)0.34.M.p.95°(软化)-110°。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+92.5$ (c＝0.23，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1215.3367(31，[M+K+H]⁺，C₄₅H₅₈KN₁₅O₂₃ ⁺；计算值1215.3467)；1214.3355(57，[M+K]⁺，C₄₅H₅₇KN₁₅O₂₃ ⁺；计算值1214.3389)；1199.3654(56，[M+Na+H]⁺，C₄₅H₅₈N₁₅NaO₂₃ ⁺；计算值1199.3728)；1198.3634(100，[M+Na]⁺，C₄₅H₅₇N₁₅NaO₂₃ ⁺；计算值1198.3649).C₄₅H₅₇N₁₅O₂₃的分析计算值(1176.03)：C 45.96，H 4.89，N17.87；实测值：C 45.87，H 5.03，N 17.83。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-间氯亚苄基巴龙霉素(8.15)。方法A：153mg 7的反应，得到104mg 8.15(61％)。白色固体。M.p.76°(软化)-95°。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.60。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+99.4$ (c＝0.20，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1158.2693(35，[M+K]⁺，C₄₂H₅₀ClKN₁₅O₂₀ ⁺；计算值111158.2682)；1144.2897(44，[M+Na+2H]⁺，C₄₂H₅₂ClN₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1144.3099)；1143.2983(46，[M+Na+H]⁺，C₄₂H₅₁ClN₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1143.3021)；1142.2934(100，[M+Na]⁺，C₄₂H₅₀ClN₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1142.2943)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-邻硝基亚苄基巴龙霉素(8.16)。方法B：91mg 7的反应，得到30mg 8.16(29％)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对三氟甲基亚苄基巴龙霉素(8.17)。方法B：89mg 7的反应，得到75mg 8.17(73％)。白色固体。M.p.71°(软化)-115°。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.58.M.p.71-105°。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{26}=+98.2$ (c＝0.15，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1192.2894(50，[M+K]⁺，C₄₃H₅₀F₃KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1192.2946)；1177.3200(52，[M+Na+H]⁺，C₄₃H₅₁F₃N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1177.3285)；1176.3182(100，[M+Na]⁺，C₄₃H₅₀F₃N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1176.3201).C₄₃H₅₀F₃N₁₅O₂₀.0.5CH₃CO₂CH₂CH₃的分析计算值(1197.99)：C 45.12，H 4.54，N 17.54；实测值：C 44.90，H 4.63，N 17.29。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对二甲基氨基亚苄基巴龙霉素(8.18)。方法B：38mg 7的反应，得到75mg 8.18(42％)。浅黄色固体。R_f(环己烷/AcOEt 1∶1)0.48。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1168.3509(48，[M+K+H]⁺，C₄₄H₅₇KN₁₆O₂₀ ⁺；计算值1168.3572)；1167.3484(86，[M+K]⁺，C₄₄H₅₆KN₁₆O₂₀ ⁺；计算值1167.3494)；1152.3798(47，[M+Na+H]⁺，C₄₄H₅₇N₁₆NaO₂₀ ⁺；计算值1152.3833)；1151.3769(89，[M+Na]⁺，C₄₄H₅₆N₁₆NaO₂₀ ⁺；计算值1151.3754)；1143.4066(100，[M-CH₃+Na+7H]⁺，C₄₃H₆₀N₁₆NaO₂₀ ⁺；计算值1143.4067)；1130.3905(46，[M+2H]⁺，C₄₄H₅₈N₁₆O₂₀ ⁺；计算值1130.4013)；1129.3858(95，[M+H]⁺，C₄₄H₅₇N₁₆O₂₀ ⁺；计算值1129.3935)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-1-亚萘基巴龙霉素(8.19)。方法A：195mg 7的反应，得到157mg 8.19(71％)。白色固体。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.55.M.p.77°(软化)-115°。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+115.5$ (c＝0.21，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1175.3224(46，[M+K+H]⁺，C₄₆H₅₄KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1175.3307)；1174.3203(82，[M+K]⁺，C₄₆H₅₃KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1174.3228)；1159.3523(56，[M+Na+H]⁺，C₄₆H₅₄N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1159.3567)；1158.3489(100，[M+Na]⁺，C₄₆H₅₃N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1158.3489).C₄₆H₅₃N₁₅O₂₀.0.2CH₃CO₂CH₂CH₃的分析计算值(1153.62)：C 48.72，H 4.77，N 18.21；实测值：C 48.76，H 4.89，N 17.77。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-亚萘基巴龙霉素(8.20)。方法B：80mg7的反应，得到60mg 8.20(66％)。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.64。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-呋喃亚基巴龙霉素(8.21)。方法A：146mg 7的反应，得到91mg 8.21(58％)。淡橙色固体。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.60.M.p.98°(softens)-105°。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+117.2$ (c＝0.11，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1115.2929(40，[M+K+H]⁺，C₄₀H₅₀KN₁₅O₂₁ ⁺；计算值1115.2943)；1114.2916(75，[M+K]⁺，C₄₀H₄₉KN₁₅O₂₁ ⁺；计算值1114.2865)；1099.3154(50，[M+Na+H]⁺，C₄₀H₅₀N₁₅NaO₂₁ ⁺；计算值1099.3203)；1098.3129(100，[M+Na]⁺，C₄₀H₄₉N₁₅NaO₂₁ ⁺；计算值1098.3125)。C₄₀H₄₉N₁₅O₂₁的分析计算值(1075.91)：C 44.65，H 4.59，N 19.53；实测值：C44.74，H 4.59，N 19.05。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-噻吩亚基巴龙霉素(8.22)。方法A：80mg 7的反应，得到37mg 8.22(42％)。白色固体。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1130.2660(52，[M+K]⁺，C₄₀H₄₉KN₁₅O₂₀S⁺；计算值1130.2636)；1115.2904(50，[M+Na+H]⁺，C₄₀H₅₀N₁₅NaO₂₀S⁺；计算值1115.2975)；1114.2864(100，[M+Na]⁺，C₄₀H₄₉N₁₅NaO₂₀S⁺；计算值1114.2897)。C₄₀H₄₉N₁₅O₂₀S的分析计算值(1091.98)：C 44.00，H 4.52，N 19.24；实测值：C 43.86，H 4.61，N 19.23。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-亚乙基巴龙霉素(8.23)。方法A：21mg7的反应，得到18mg 8.23(84％)。白色固体。R_f(己烷/AcOEt 1∶1)0.48.HR-Maldi-MS(3-HPA)：1047.3167(46，[M+Na+H]⁺，C₃₇H₅₀N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1047.3254)；1046.3153(100，[M+Na]⁺，C₃₇H₄₉N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1046.3176)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(2-苯基)-亚乙基巴龙霉素(8.24)。方法A：116mg 7的反应，得到97mg 8.24(76％)。白色固体。M.p.90°(软化)-96°。R_f(Hexane/AcOEt 1∶1)0.46。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+90.0$ (c＝0.105，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1138.3234(39，[M+K]⁺，C₄₃H₅₃KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1138.3228)；1123.3511(53，[M+Na+H]⁺，C₄₃H₅₄N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1123.3567)；1122.3475(100，[M+Na]⁺，C₄₃H₅₃N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1122.3489)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙基巴龙霉素(8.25)。方法A：177mg 7的反应，得到189mg 8.25(96％)。白色固体。R_f(己烷/AcOEt1∶1)0.50。M.p.66°(软化)-86°。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+108.7$ (c＝0.24，CHCl₃)。HR-Maldi-MS(3-HPA)：1153.3457(27，[M+K+H]⁺，C₄₄H₅₆KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1153.3463)；1152.3403(49，[M+K]⁺，C₄₄H₅₅KN₁₅O₂₀ ⁺；计算值1152.3385)；1137.3650(54，[M+Na+H]⁺，C₄₄H₅₆N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1137.3724)；1136.3619(100，[M+Na]⁺，C₄₄H₅₅N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1136.3640)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙烯基巴龙霉素(8.26)。方法A：75mg 7的反应，得到37mg 8.26(44％)。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-环己基亚甲基巴龙霉素(8.27)。方法A：157mg 7的反应，得到83mg 8.27(49％)。白色固体。

形成4.13-4.27的典型方法。将8.13-8.27的CH₂Cl₂/MeOH(1/4)溶液用NaOMe(12equ.)处理，在25°搅拌。将混合物用Amberlite IR-120(H⁺)淬灭，过滤，蒸发。FC(CHCl₃/AcOEt 1∶1→CHCl₃/AcOEt/MeOH)得到4.13-4.27。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-3，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.13)。19mg 8.13的反应，得到26mg 4.13(98％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.21。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-3，4，5-三甲氧基亚苄基巴龙霉素(4.14)。47mg 8.14的反应，得到30mg 4.13(81％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.22。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-间氯亚苄基巴龙霉素(4.15)。70mg 8.15的反应，得到54mg 4.15(定量)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.45。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-邻硝基亚苄基巴龙霉素(4.16).54mg 8.16的反应，得到26mg 4.16(62％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.51。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对三氟甲基亚苄基巴龙霉素(4.17).57mg 8.17的反应，得到42mg 4.17(94％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 3∶3∶0.5)0.44。HR-Maldi-MS(3-HPA)：924.2549(100，[M+Na]⁺，C₃₁H₃₈F₃N₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值924.2567)。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-对二甲基氨基亚苄基巴龙霉素(4.18)。39mg 8.18的反应，得到22mg 4.18(73％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.21。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-1-亚萘基巴龙霉素(4.19)。107mg 8.19的反应，得到75mg 4.19(90％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.52。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-亚萘基巴龙霉素(4.20)。60mg 8.20的反应，得到30mg 4.20(65％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.50。ESI-MS：906.0(100，[M+Na]⁺，C₃₄H₄₁N₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值906.3)。C₃₄H₄₁N₁₅O₁₄的分析计算值(883.79)：C46.21，H 4.68，N 23.77；实测值：C 46.44，H 4.54，N 23.37。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-亚呋喃基巴龙霉素(4.21)。73mg 8.21的反应，得到48mg 4.21(86％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.38。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-2-亚噻吩基巴龙霉素(4.22)。60mg 8.22的反应，得到37mg 4.22(80％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.40。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-亚乙基巴龙霉素(4.23)。29mg 8.23的反应，得到20mg 4.23(92％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.24。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(2-苯基)-亚乙基巴龙霉素(4.24)。79mg 8.24的反应，得到55mg 4.24(90％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.46。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙基巴龙霉素(4.25)。127mg 8.25的反应，得到75mg 4.25(76％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.45。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙烯基巴龙霉素(4.26)。41mg 8.26的反应，得到24mg 4.26(76％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.48。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-环己基亚甲基巴龙霉素(4.27)。46mg 8.27的反应，得到26mg 4.27(74％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/CH₃OH 3∶3∶0.5)0.37。

最终脱保护的典型方法.在N₂氛围中，将4.13-4.27的THF溶液用0.1M NaOH水溶液(2equ.)和1M PMe₃/THF(6equ.)处理，在60℃搅拌、蒸发和FC(THF，THF/MeOH，MeOH，MeOH/25％aq.NH₃ 49∶1→MeOH/25％aq.NH₃4∶1)得到5.13-5.27。

4’，6’-O-3，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素(5.13)。24mg 4.13的反应，得到19mg 5.13(92％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.34.IR(ATR)：3179w(br.)，2896w，1597m，1463w，1431w，1384w，1338w，1304w，1200w，1150s，1087s，1047s。HR-Maldi-MS：765.3554(36，[M+2H]⁺，C₃₂H₅₅N₅O₁₆ ⁺；计算值765.3644)；764.3546(100，[M+H]⁺，C₃₂H₅₄N₅O₁₆ ⁺；计算值764.3560)。

4’，6’-O-3，4，5-三甲氧基亚苄基巴龙霉素(5.14).30mg 4.14的反应，得到21mg 5.14(82％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.19.IR(ATR)：3352w，3289w，3182w(br.)，2918w，1593w，1506w，1462w，1421w，1380w，1330w，1236w，1122s，1026s，994s。

HR-Maldi-MS：795.3686(40，[M+2H]⁺，C₃₃H₅₇N₅O₁₇ ⁺；计算值795.3749)；794.3651(100，[M+H]⁺，C₃₃H₅₆N₅O₁₇ ⁺；计算值794.3651)。

4’，6’-O-间氯亚苄基巴龙霉素(5.15)。52mg 4.15的反应，得到46mg5.15。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.33.HR-Maldi-MS：740.2943(43，[M+3H]⁺，C₃₀H₅₁ClN₅O₁₄ ⁺；计算值740.3121)；739.2982(38，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₀ClN₅O₁₄ ⁺；计算值739.3043)；738.2945(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉ClN₅O₁₄ ⁺；计算值738.2959)。

4’，6’-O-邻硝基亚苄基巴龙霉素(5.16)。20mg 4.16的反应，得到17mg 5.16(定量)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.22。IR(ATR)：3179w(br.)，2895w，1610w，1528m，1452w，1349s，1099s，1048s，1028s。HR-Maldi-MS：771.2961(31，[M+Na]⁺，C₃₀H₄₈N₆NaO₁₆ ⁺；计算值771.3024)；750.3213(46，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₀N₆O₁₆ ⁺；计算值750.3283)；749.3186(100，[M+H]⁺，C₃₀H₄₉N₆O₁₆ ⁺；计算值749.3205)。

4’，6’-O-对三氟甲基亚苄基巴龙霉素(5.17)。31mg 4.17的反应，得到26mg 5.17(98％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.32。IR(ATR)：3354w(br.)，2921w，1583w，1444w，1378w，1325s，1122s，1083s，1066s，1017s，927m。HR-Maldi-MS：773.3235(36，[M+2H]⁺，C₃₁H₅₀F₃N₅O₁₄ ⁺；计算值773.3306)；772.3210(100，[M+H]⁺，C₃₁H₄₉F₃N₅O₁₄ ⁺；计算值772.3223)。¹⁹F NMR：-60.85。

4’，6’-O-对二甲基氨基亚苄基巴龙霉素(5.18)。16mg 4.18的反应，得到13.5mg 5.18(99％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.27.IR(ATR)：3172w(br.)，2899w，1615w，1528w，1454w，1378w，1360w，1100s，1048s，996s。HR-Maldi-MS：748.3811(38，[M+2H]⁺，C₃₂H₅₆N₆O₁₄ ⁺；计算值748.3855)；747.3774(100，[M+H]⁺，C₃₂H₅₅N₆O₁₄ ⁺；计算值747.3771)。

4’，6’-O-1-亚萘基巴龙霉素(5.19)。49mg 4.19的反应，得到39mg5.19(93％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.32。IR(ATR)：3345w(br.)，2888w，1599w，1532w，1509w，1460w，1392w，1339w，1272w，1246w，1104s，1054s，1028s，996s，972s，920s。HR-Maldi-MS：755.3519(40，[M+2H]⁺，C₃₄H₅₃N₅O₁₄ ⁺；计算值755.3589)；754.3495(100，[M+H]⁺，C₃₄H₅₂N₅O₁₄ ⁺；计算值754.3511)。

4’，6’-O-2-亚萘基巴龙霉素(5.20)。19mg 4.20的反应，得到12mg5.20(74％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.36。IR(ATR)：3180w(br.)，2895w，1600w，1530w，1467w，1374w，1346w，1048s，1026s。HR-Maldi-MS：776.3309(56，[M+Na]⁺，C₃₄H₅₁N₅NaO₁₄ ⁺；计算值776.3330)；755.3538(36，[M+2H]⁺，C₃₄H₅₃N₅O₁₄ ⁺；计算值755.3589)；754.3509(100，[M+H]⁺，C₃₄H₅₂N₅O₁₄ ⁺；计算值754.3511)；594.2633(41，[M-环IV+2H]⁺，C₂₈H₄₀N₃O₁₁ ⁺；计算值594.2663)；462.2238(63，[M-环III-环IV+2H]⁺，C₂₃H₃₂N₃O₇ ⁺；计算值462.2240)。

4’，6’-O-2-亚呋喃基巴龙霉素(5.21)。49mg 4.21的反应，得到39mg5.21(94％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.21。IR(ATR)：3356w(br.)，2877w，1664w，1589w，1506w，1460w，1460w，1397w，1359w，1341w，1135s，1106s，1026s，994s，918s。HR-Maldi-MS：716.2997(31，[M+Na]⁺，C₂₈H₄₇N₅NaO₁₅ ⁺；计算值716.2966)；695.3146(34，[M+2H]⁺，C₂₈H₄₉N₅O₁₅ ⁺；计算值695.3225)；694.3128(100，[M+H]⁺，C₂₈H₄₈N₅O₁₅ ⁺；计算值694.3141)。

4’，6’-O-2-亚噻吩基巴龙霉素(5.22)。42mg 4.22的反应，得到29mg5.22(82％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.37。IR(ATR)：3353w，3287w，3174w(br.)，2909w，1595w，1543w，1445w，1377w，1332w，1243w，1100s，1053s，1023s，974s，926s。HR-Maldi-MS：733.2763(33，[M+Na+H]⁺，C₂₈H₄₈N₅NaO₁₄S⁺；计算值733.2816)；732.2730(100，[M+Na]⁺，C₂₈H₄₇N₅NaO₁₄S⁺；计算值732.2738)。

4’，6’-O-亚乙基巴龙霉素(5.23)。18mg 4.23的反应，得到15mg5.23(99％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.27。IR(ATR)：3286w(br.)，2888w，1664w，1571w，1472w，1392w，1341w，1102s，1017s，995s，937w，907w。HR-Maldi-MS：665.3048(31，[M+Na+H]⁺，C₂₅H₄₈N₅NaO₁₄ ⁺；计算值665.3095)；664.3018(100，[M+Na]⁺，C₂₅H₄₇N₅NaO₁₄ ⁺；计算值664.3012)。

4’，6’-O-(2-苯基)-亚乙基巴龙霉素(5.24)。52mg 4.24的反应，得到39mg 5.24(89％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.33。HR-Maldi-MS：741.3349(37，[M+Na+H]⁺，C₃₁H₅₂N₅NaO₁₄ ⁺；计算值741.3408)；740.3312(100，[M+Na]⁺，C₃₁H₅₁N₅NaO₁₄ ⁺；计算值740.3330)。

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙基巴龙霉素(5.25)。52mg 4.25的反应，得到35mg 5.25(79％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.27。IR(ATR)：3356w(br.)，2870w，1740w，1594w，1495w，1454w，1386w，1119s，1016s，931s。¹H-NMR(500MHz，D₂O，基于HSQC谱归属)：7.40-7.37(m，2芳香H)；7.33-7.27(m，3芳香H)；5.47(d，J＝3.8，H-C(1’))；5.37(d，J＝2.5，H-C(1”))；5.00(d，J＝1.8，H-C(1”’))；4.68(t，J＝5.3，PhCH₂CH₂CH)；4.46(dd，J＝6.6，5.0，H-C(3”))；4.31(dd，J＝4.9，2.5，H-C(2”))；4.18-4.13(m，2H，H_a-C(6’)，H-C(4”))；4.07-4.04(m，2H，H-C(5”’)，H-C(3”’))；3.90-3.85(m，2H，H_a-C(5”)，H-C(5’))；3.78-3.65(m，4H，H-C(3’)，H-C(5)，H_b-C(5”)，H-C(4”’))；3.62(t，J＝10.5，H_b-C(6’))；3.47(t，J＝9.3，H-C(4))；3.42(t，J＝9.6，H-C(4’))；3.40(t，J＝9.7，H-C(6)；3.17(dd，J＝13.5，8.5，H_a-C(6”’))；3.09-3.06(m，2H，H_b-C(6”’)，H-C(2”’))；2.93(ddd，J＝12.2，9.5，4.1，H-C(3))；2.86(dd，J＝10.0，3.8，H-C(2’))；2.82-2.75(m，2H，H-C(1)，PhCH₂CH₂)；2.03-1.95(m，3H，H_eq-C(2)，PhCH₂CH₂)；1.25(q，J＝12.4，H_ax-C(2))。HR-Maldi-MS：755.3505(38，[M+Na+H]⁺，C₃₂H₅₄N₅NaO₁₄ ⁺；计算值755.3565)；754.3467(100，[M+Na]⁺，C₃₂H₅₃N₅NaO₁₄ ⁺；计算值754.3481)；732.3642(38，[M+H]⁺，C₃₂H₅₄N₅O₁₄ ⁺；计算值732.3667)。

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙烯基巴龙霉素(5.26)。24mg 4.26的反应，得到19mg 5.26(92％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.34。IR(ATR)：3353w，3288w，2915w，1593w，1493w，1451w，1377w，1336w，1135s，1115s，1054s，1022s，994s，970s。HR-Maldi-MS：731.3519(37，[M+2H]⁺，C₃₂H₅₃N₅O₁₄ ⁺；计算值731.3589)；730.3492(100，[M+H]⁺，C₃₂H₅₂N₅O₁₄ ⁺；计算值730.3511)。

4’，6’-O-环己基亚甲基巴龙霉素(5.27)。26mg 4.27的反应，得到16mg 5.27(73％)。白色固体。R_f(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶1)0.25。IR(ATR)：3127m，3029m，2847w，1753w，1712w，1613w，1514w，1441w，1399m，1101s，996s。HR-Maldi-MS：711.3859(34，[M+2H]⁺，C₃₀H₅₇N₅O₁₄ ⁺；计算值711.3902)；710.3822(100，[M+H]⁺，C₃₀H₅₆N₅O₁₄ ⁺；计算值710.3824)。

4’-和6’-O-醚衍生物的合成。

反应路线3

i)2M BH₃·Me₂S在THF中，1M Bu₂BOTf in CH₂Cl₂，CH₂Cl₂，-5°，61％；ii)0.02N MeONa，MeOH，26°；86％；iii)0.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，50°；79％。

6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-乙酰基-1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’-O-苄基巴龙霉素(9)。在N₂氛围中，将6(1.8g，1.66mmol)的无水CH₂Cl₂(25ml，用CaH₂干燥)溶液冷却至-5℃，用2M BH₃·Me₂S/THF(8.3ml，16.6mmol)和1M Bu₂BOTf/CH₂Cl₂(0.83mL，0.83mmol)处理，搅拌5小时。用饱和NaHCO₃溶液稀释之后，分离各层。将有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(AcOEt/环己烷9∶11)得到9(1.1g，61％)。R_f(AcOEt/环己烷1∶1)0.41。M.p.82-86℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+98.2$ (c＝0.13，MeOH)。IR(ATR)：2940w，2872w，2100s，1740s，1492w，1453w，1430w，1371m，1215s，1027s。HR-ESI-MS：1110.3489(100，[M+Na]⁺，C₄₂H₅₃N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1110.3469)。C₄₂H₅₃N₁₅O₂₀的分析计算值(1087.97)：C 46.37，H 4.91，N 19.31，O 29.41；实测值：C 46.27，H 4.82，N19.02，O 29.38。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’-O-苄基巴龙霉素(10)。在N₂氛围中，将9(100mg，0.09mmol)的0.02N MeONa/MeOH(2ml)溶液在26℃搅拌12小时，用Amberlite-IR 120(H⁺形式)中和。过滤，蒸发和FC(CHCl₃/AcOEt/MeOH 10∶17.5∶2)得到10(65mg，86％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 4∶9∶1)0.45。M.p.98℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+106.1$ (c＝0.14，MeOH)。IR(KBr)：3418s，2928m，2107s，1633m，1497w，1454m，1384m，1332m，1261s，1114m，1068m，1029s，939w，749w。HR-ESI-MS：858.2835(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₄₁N₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值858.2855)。C₃₀H₄₁N₁₅O₁₄.0.3AcOEt的分析计算值(862.17)：C 43.46，H 5.07，N 24.37；实测值：C 43.13，H 5.03，N 24.47。

4’-O-苄基巴龙霉素(11)。将10(30mg，0.04mmol)的THF(3ml)溶液用0.1M NaOH水溶液(1ml)和1M PMe₃/THF(0.22ml，0.22mmol)处理，并在50℃搅拌2小时。蒸发和FC(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶3)得到11(20mg，79％)。白色固体。R_f(CHCl₃/MeOH/25％aq.NH₃ 1∶3∶4)0.55。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+36.3$ (c＝0.11，H₂O)。IR(KBr)：3418s，2925m，2852w，1631m，1537w，1452w，1397w，1384m，1298w，1123s，1051s，947w。HR-ESI-MS：728.3269(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₅₁N₅NaO₁₄ ⁺；计算值728.3330)；706.3493(100，[M+H]⁺，C₃₀H₅₂N₅O₁₄ ⁺；计算值706.3511)。

反应路线4

i)NaH，p-MeOBnCl，Bu₄NI，THF，0-26°，48％；ii)NaCNBH₃，0.7M HCl在Et₂O中，4

MS，THF，0°，33％；iii)DDQ，CH₂Cl₂/H₂O/i-PrOH 20∶1∶1，0-26°，59％；iv)0.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，50°，85％。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’，6’-O-亚苄基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-(4-甲氧苯甲基)巴龙霉素(12)。在Ar氛围中，将4.1(810mg，0.97mmol)的THF(20ml)溶液用NaH(637mg，50-60％悬浮液，在油中，大约13.3mmol)、p-MeOBnCl(0.90ml，6.66mmol)和Bu₄NI(110mg)处理，在0℃搅拌4小时，在26℃搅拌20小时，冷却至0℃，分批地用水稀释。蒸发之后，用AcOEt(3x20ml)提取水溶液层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(AcOEt/环己烷1∶4)得到12(722mg，48％)。白色固体。R_f(AcOEt/环己烷1∶1)0.46。M.p.54.6-56.4℃(在46℃软化)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+75.8$ (c＝0.40，CHCl₃)。IR(CHCl₃)：3021w，3006w，2937w，2839w，2867w，2106s，1612m，1586w，1514s，1465w，1442w，1368w，1302w，1250s，1174m，1091m，1035m，847w，823w。HR-ESI-MS：(100，[M+Na]⁺，C₇₈H₈₇N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1576.6149)。C₇₈H₈₇N₁₅O₂₀的分析计算值(1554.61)：C 60.26，H 5.64，N13.51；实测值：C 60.23，H 5.81，N 13.31。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6’-O-苄基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-(4-甲氧苯甲基)巴龙霉素(13)。在N₂氛围中，将12(677mg，0.44mmol)的THF(15ml)溶液用4

分子筛处理，搅拌1小时，冷却至0℃，在0℃用NaCNBH₃(443mg，7.05mmol)处理，而后在1小时之内滴加0.7M HCl/Et₂O(14ml，9.80mmol)(加入甲基橙，表示溶液的pH值)，搅拌4小时。用饱和NaHCO₃溶液中和之后，蒸发，用AcOEt(3x25ml)提取水溶液层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(AcOEt/环己烷3∶7)得到13(219mg，33％)。白色固体。R_f(AcOEt/环己烷1∶1)0.42.M.p.52-55℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+66.9$ (c＝0.37，CHCl₃)。IR(CHCl₃)：3673w，3020s，2937w，2839w，2106s，1612m，1583w，1514m，1465w，1438w，1366w，1302w，1250m，1174w，1118w，1072w，1035m，901w。HR-ESI-MS：1578.6274(100，[M+Na]⁺，C₇₈H₈₉N₁₅NaO₂₀ ⁺；计算值1578.6306)；1529.6556(84，[M-N₂+2H]⁺，C₇₈H₉₁N₁₃NaO₂₀ ⁺；计算值1529.6503)；1528.6536(94，[M-N₂+H]⁺，C₇₈H₉₀N₁₃NaO₂₀ ⁺；计算值1528.6425)。C₇₈H₈₉N₁₅O₂₀的分析计算值(1556.65)：C 60.18，H 5.76，N13.50；实测值：C 60.05，H 5.64，N 13.47。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6’-O-苄基巴龙霉素(14)。在N₂氛围中，在0℃将13(107mg，0.07mmol)的CH₂Cl₂/水/i-PrOH20∶1∶1(7ml)溶液用DDQ(103mg，0.45mmol)处理，搅拌2小时，在26℃搅拌24小时。混合物的颜色从无色变为绿色，而后变为淡橙色。用饱和NaHCO₃溶液中和之后，用AcOEt(3x20ml)提取水溶液层。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤，蒸发。FC(CHCl₃/AcOEt/MeOH 10∶17.5∶2))得到14(34mg，59％)。白色固体。R_f(CHCl₃/AcOEt/MeOH 4∶9∶1)0.68。M.p.89.1-92.9℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+97.2$ (c＝0.12，MeOH)。IR(KBr)：3434s，2929w，2107s，1635w，1500w，1401w，1384m，1331w，1262m，1140m，1077m，1036m，743w。HR-ESI-MS：858.2836(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₄₁N₁₅NaO₁₄ ⁺；计算值858.2855)。C₃₀H₄₁N₁₅O₁₄的分析计算值CH₃OH(867.78)：C 42.91，H 5.23，N 24.21；实测值：C 42.73，H 4.96，N 24.25。

6’-O-苄基巴龙霉素(15)。将14(25mg，0.03mmol)的THF(3ml)溶液用0.1M NaOH水溶液(1ml)和1M PMe₃/THF(0.22ml，0.22mmol)处理，并加热到50℃，保持2小时。蒸发和FC(MeOH/25％aq.NH₃ 4∶3)得到15(18mg，85％)。白色固体。R_f(CHCl₃/MeOH/25％aq.NH₃ 1∶4∶3)0.56。M.p.165℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+28.1$ (c＝0.08，H₂O)。IR(KBr)：3420s，2925m，1633m，1595m，1491w，1454w，1397w，1384m，1252w，1151m，1092m，1026s，1051s，741w。HR-ESI-MS：728.3269(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₅₁N₅NaO₁₄ ⁺；计算值728.3330)；706.3493(100，[M+H]⁺，C₃₀H₅₂N₅O₁₄ ⁺；计算值706.3511)。C₃₀H₅₁N₅O₁₄.6AcOH.3H₂O的分析计算值(1120.11)±：C 45.04，H 7.29，N 6.25；实测值：C 44.85，H 6.72，N 6.68。

反应路线5

i)a)TsOH.H₂O，CH₂Cl₂，CH₃OH，N₂，25°，79％；b)MMTrCl，NaH，DMF，N₂，25°，65％；

ii)R²Cl，NaH，DMF，N₂，25°；iii)DDQ，CH₂Cl₂/H2O/MeOH 20∶1∶0.4，25°；iv)0.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，N₂，65°。

形成醚16、17a-d的典型方法(反应路线5)。(GP 1)：在N₂氛围中，将乙醇(1equ)的DMF(c＝0.1)溶液用NaH(每个羟基1.5equ.，50-60％悬浮液，在油中)处理，而后用烷基氯(或溴)(每个羟基1.5equ.)和Bu₄NI(0.1equ)处理，在25℃搅拌4-24小时，用水和Et₂O稀释。分离各相之后，用Et₂O(3x)提取水溶液层。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，蒸发。FC。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基-4’-羟基-6’-O-单甲氧基三苯甲基巴龙霉素(16)。在N₂氛围中，将12(400mg，0.256mmol)的MeOH/CH₂Cl₂(10∶1，5.5ml)溶液用TsOH·H₂O(49mg，0.3mmol)处理，在25℃搅拌3小时，用1N NaOH稀释。分离各相之后，用CH₂Cl₂(3x5ml)提取水溶液层。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，蒸发。FC，得到白色固体1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6’，4’-二羟基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基巴龙霉素(296mg，79％)，R_f(AcOEt/环己烷 1∶1)0.37，将其按照GP 1进行反应。反应得到16(1.319mg，65％)。R_f(AcOEt/环己烷 3∶7)0.58。白色固体，m.p.60-65℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+96.4$ (c＝0.12，CHCl₃)。IR(ATR)：2927w，2103s，1611m，1581w，1513s，1460w，1362w，1303w，1249s，1173m，1033s。HR-Maldi-MS：1776.6813(92，[M+K]⁺，C₉₁H₉₉N₁₅KO₂₁ ⁺；计算值1776.6777)；1760.7034(82，[M+Na]⁺，C₉₁H₉₉N₁₅NaO₂₁ ⁺；计算值1760.7038).C₉₁H₉₉N₁₅O₂₁的分析计算值(1738.85)：C 62.86，H 5.74，N 12.08；实测值：C 63.25，H 6.06，N 11.55。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基-4’-O-对氯苄基-6’-O-单甲氧基三苯甲基巴龙霉素(17a)。16的(GP 1)反应得到17a(518mg，96％)。R_f(AcOEt/环己烷 3∶7)0.54.白色固体，m.p.66-71℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+94.1$ (c＝0.08，ChCl3)。IR(atr)：2932w，2099s，1611m，1585w，1512s，1462w，1359w，1301w，1245s，1173m，1110m，1068m，1031s。HRMaldi-MS：1900.6892(57，[M+K]⁺，C₉₈H₁₀₄ClN₁₅KO₂₁ ⁺；计算值1900.6857)；1884.7151(84，[M+Na]⁺，C₉₈H₁₀₄N₁₅ClNaO₂₁ ⁺；计算值1884.7117)。C₁₀₀H₁₀₉N₁₅O₂₁·1.5H₂O的分析计算值(1890.44)：C 62.26，H 5.71，N 11.11；实测值：C 62.39，H 5.83，N 10.73。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基-4’-O-对(三氟甲基)苄基-6’-O-单甲氧基三苯甲基巴龙霉素(17b)。16的(GP 1)反应得到17b(441mg，85％)。R_f(AcOEt/环己烷 3∶7x2)0.54。白色固体，m.p.60-76℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+70.3$ (c＝0.26，ChCl3).IR(ATR)：2934w，2100s，1611m，1586w，1512s，1463w，1362w，1325m，1302m，1245s，1173m，1111m，1065s，1030s。HR-Maldi-MS：1934.7083(84，[M+K]⁺，C₉₉H₁₀₄F₃N₁₅KO₂₁ ⁺；计算值1934.7120)；1918.7333(80，[M+Na]⁺，C₉₉H₁₀₄N₁₅F₃NaO₂₁ ⁺；计算值1918.7381)。C₉₉H₁₀₄N₁₅O₂₁F₃的分析计算值(1896.97)：C 62.68，H 5.53，N11.08；实测值：C 62.42，H 5.62，N 10.66。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基-4’-O-丙基苯基-6’-O-单甲氧基三苯甲基巴龙霉素(17c)。16的(GP 1)反应得到17c(459mg，86％)。R_f(AcOEt/环己烷3∶7)0.6。白色固体，m.p.63-78℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+56.9$ (c＝0.65，CHCl₃)。IR(ATR)：2933w，2099s，1672w，1611m，1585w，1512s，1454w，1363w，1301w，1245s，1174m，1029s。HR-Maldi-MS：1894.7513(72，[M+K]⁺，C₁₀₀H₁₀₉N₁₅KO₂₁ ⁺；计算值1894.7560)；1878.7773(82，[M+Na]⁺，C₉₁H₉₉N₁₅NaO₂₁ ⁺；计算值1878.7820).C₁₀₀H₁₀₉N₁₅O₂₁的分析计算值(1857.02)：C 64.68，H 5.92，N 11.31；实测值：C 65.08，H 5.71，N 10.86。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-6，3’，2”，5”，3”’，4”’-六-O-对甲氧苯甲基-4’-O-苄氧基甲基-6’-O-单甲氧基三苯甲基巴龙霉素(17d)。16的(GP 1)反应得到17d(442mg，83％)。R_f(AcOEt/环己烷 3∶7)0.54。白色固体，m.p.52-55℃。IR(ATR)：2933w，2001s，1611m，1585w，1513s，1463w，1361w，1301m，1247s，1174m，1111m，1068m，1033s。HR-Maldi-MS：1896.7326(16，[M+Na]⁺，C₉₉H₁₀₇N₁₅KO₂₂ ⁺；计算值1896.7352)；1880.7566(22，[M+Na]⁺，C₉₉H₁₀₇N₁₅NaO₂₂ ⁺；计算值1880.7613)；1866.7181(65，[M-CH₃O+K]⁺，C₉₈H₁₀₅N₁₅KO₂₁ ⁺；计算值1866.7247)；1850.7403(89，[M-CH₃O+Na]⁺，C₉₈H₁₀₅N₁₅NaO₂₁ ⁺；计算值1850.7507)。

对保护的衍生物进行脱保护以得到化合物19a-d的一般方法：(GP2)：在N₂氛围中，将保护衍生物17(1当量)的CH₂Cl₂/MeOH/H₂O(20∶1∶0.4)(c＝0.02)用DDQ(每个基团1.1当量)处理，在25℃搅拌12-24小时，用1N NaOH中和，用AcOEt稀释。分离各相之后，用AcOEt(3x)提取水溶液层。将合并的有机层干燥(MgSO₄)，蒸发。FC。将叠氮基化合物(1当量)的THF/0.1M NaOH 4∶1(c＝0.03)溶液用1M PMe₃/THF处理(每个叠氮基1.2当量)，在50℃搅拌4-8小时。蒸发之后，进行FC。

4’-对氯苄基巴龙霉素(19a)。17a的(GP 2)反应得到叠氮基中间体18a(120mg，54％)白色固体。R_f(MeOH/CHCl₃/AcOEt 0.5∶2∶2)0.29。最终化合物19a(47mg，86％)。R_f(MeOH/NH_3aq. 8∶2)0.27。白色固体，m.p.145℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{27}=+60.3$ (c＝0.27，H₂O).IR(atr)：3358m，2915m，1590w，1454w，1366w，1088s，1014s。HR-Maldi-MS：762.2921(100，[M+Na]⁺，C₃₀H₅₀ClN₅NaO₁₄ ⁺；计算值762.2940)；740.3110(86，[M+H]⁺，C₃₀H₅₁ClN₅O₁₄ ⁺；计算值740.3121)。

4’-对(三氟甲基)苄基巴龙霉素(19b)。17b(GP 2)的反应得到叠氮基中间体18b(130mg，80％)白色固体。R_f(MeOH/CHCl₃/AcOEt 0.5∶2∶2)0.26。最终化合物19b(84mg，87％)。R_f(MeOH/NH_3aq.8∶2)0.30。白色固体，m.p.148℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+65.4$ (c＝0.16，H₂O)。IR(ATR)：3156m，2921m，1551m，1403m，1326s，1107s，1064s，1016s.HR-Maldi-MS：796.3201(72，[M+Na]⁺，C₃₁H₅₀F₃N₅NaO₁₄ ⁺；计算值796.3204)；774.3366(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₁F₃N₅O₁₄ ⁺；计算值774.3385)。

4’-对(3-苯丙基)巴龙霉素(19c)。17c的(GP 2)反应得到叠氮基中间体18c(105mg，74％)白色固体。R_f(MeOH/CHCl₃/AcOEt 0.5∶2∶2)0.40。最终化合物19c(64mg，92％)。R_f(CHCl₃/MeOH/NH_3aq.1∶3∶2)0.47。白色固体，m.p.179℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+63.0$ (c＝0.12，H₂O)。IR(ATR)：3191w，2920w，1572w，1495w，1454w，1381w，1339w，1015s。HR-Maldi-MS：756.3648(37，[M+Na]⁺，C₃₂H₅₅N₅NaO₁₄ ⁺；计算值756.3643)；734.3805(100，[M+H]⁺，C₃₂H₅₆N₅O₁₄ ⁺；计算值734.3824)。

4’-苄氧基甲基巴龙霉素(19d)。17d的(GP 2)反应得到叠氮基中间体18d(70mg，72％)白色固体。R_f(MeOH/CHCl₃/AcOEt 0.5∶2∶2)0.31。最终化合物19d(36mg，72％)。R_f(CHCl₃/MeOH/NH_3aq.1∶3∶2)0.36。白色固体，m.p.143℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{27}=+48.9$ (c＝0.24，H₂O)。IR(ATR)：3031m，1622w，1525w，1429m，1043s。HR-Maldi-MS：758.3428(20，[M+Na]⁺，C₃₁H₅₃N₅NaO₁₅ ⁺；计算值758.3436)；736.3598(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₄N₅O₁₅ ⁺；计算值736.3616)。

反应路线6

i)1M BH₃·THF，1M Bu₂BOTf在CH₂Cl₂中，-5°，59％；ii)0.1M aq.NaOH，1M PMe₃在THF中，THF，50°；74％。

1，3，2’，2”’，6”’-五去氨基-1，3，2’，2”’，6”’-五叠氮基-4’-O-对甲氧基苄基巴龙霉素(18e)。在N₂氛围中，将冷却至-5℃的4.2(204mg，0.236mmol)用1M BH₃·THF(2.36ml)和1M Bu₂BOTf/CH₂Cl₂(0.236ml)处理，在-5℃-0℃搅拌50分钟。完成加入Et₃N(0.1ml)之后，加入MeOH(0.1ml)。将反应混合物与MeOH一起蒸发三次。进行FC，得到18e(120mg，59％)。R_f(AcOEt/CHCl₃/MeOH 2∶2∶0.25)0.55。白色固体，m.p.65-68℃。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+99.3$ (c＝1.63，MeOH)。IR(ATR)：3374m，2942w，2874w，2102s，1770w，1631w，1612w，1514w，1453w，1369w，1331w，1248m，1143w，1101m，1075m，1027s。HR-Maldi-MS：888.2942(100，[M+Na]⁺，C₃₁H₄₃N₁₅NaO₁₅ ⁺；计算值888.2961)；456.0339(91，[M+H]²⁺+Na，C_15.5H₂₂N_7.5NaO_7.5 ²⁺；计算值456.1468)。

4’-对甲氧基苄基巴龙霉素(19e)。将18e(60mg，0.058mmol)的THF(2ml)溶液用0.1M NaOH溶液(0.5ml)和1M PMe₃/THF(0.346ml)处理，在50℃搅拌4小时。蒸发之后，进行FC，与10％AcOH一起蒸发，得到19e的乙酸盐(44mg，74％)。R_f(MeOH/CHCl₃/NH_3aq.1∶3∶2)0.33。白色固体，m.p.190℃(分解)。 ${\left[\mathrm{\α}\right]}_D^{25}=+48.93$ (c＝0.32，H₂O)。IR(ATR)：3115m(br)，2874w，1609w，1513m，1405m，1333w，1248w，1050s，1031s。HR-Maldi-MS：736.3597(100，[M+H]⁺，C₃₁H₅₄N₅O₁₅ ⁺；计算值736.3616)。

实施例：2-生物学试验

在下面中，详细描述了生物学试验，其用于测定本发明化合物(如上面实施例1中所举例说明)选择性地靶向细菌16S核糖体RNA、和根本不靶向真核胞液和/或线粒体核糖体或显著更小程度靶向的活性。

重组体M.smegmatis菌株的制备

用于突变变异的引入/选择的菌株是解皂菌状杆菌(Mycobacteriumsmegmatis)的遗传性修饰衍生物(携带单一功能性染色体的rRNA操纵子)(Sander等人Mol.Microbiol.1996，22：841-848)。使用携带rRNA基因(具有相应的突变变异)的质粒，使这种菌株(称为M.smegmatis rrn-)选择突变的rRNA基因变异。

质粒上携带的rRNA基因编码完整的rRNA操纵子(Prammananan等人Antimicrob.Agents Chemother.1999，43：447-453)或大约1.0kb的非功能化的rRNA基因片段(Pfister等，Antimicrob.Agents Chemother.2003，47：1496-1502)。PCR-体外诱变用于产生诱变的rRNA基因片段。在部分rRNA基因片段的情况下，诱变的rRNA基因片段克隆到载体pMV261或pMV361中(Sander等人Mol.Microbiol.2002，46：1295-1304；Pfister等，Antimicrob.Agents Chemother.2003，47：1496-1502)，产生载体，其携带大约1.0kb的部分rRNA基因片段，具有引入的突变变异。在携带完整rRNA操纵子的质粒的情况下，使用合适的限制位点，通过PCR获得的诱变的rRNA基因片段克隆到载体pMV361 rRNA或pMV261rRNA中(Prammananan等人Antimicrob.Agents Chemother.1999，43：447-453)。载体pMV361 rRNA和pMV261 rRNA携带完整的rRNA操纵子(得自于M.smegmatis)的复制品(Sander等人Mol.Microbiol.1997，26：469-480)。由序列可证实突变引入到质粒编码的rRNA中。

M.smegmatis的单一rRNA等位基因衍生物，即M.smegmatis rrn-，用于质粒的转化。使菌株具有电转感受态，并且按照标准技术转化，如先前所描述(Sander等人Mol.Microbiol.1997，26：469-484)。在初步选择之后，利用RecA-介导的源重组，将质粒编码的突变的rRNA基因变异转移到单一染色体的rRNA操纵子中(Prammananan等人Antimicrob.Agents Chemother.1999，43：447-453)。由序列测定可以证实突变的rRNA基因变异通过基因转换而引入到了单一功能性染色体的rRNA操纵子中。

在该技术的另一个方面，使单一功能性染色体的rRNA操纵子失活，并且仅仅通过突变的质粒编码的rRNA操纵子来驱动核糖体RNA的合成。

下列显示了生产菌株的一种方法(除掉了所有的内原性rrn基因，并且具有通过质粒编码的rRNA操纵子产生的功能性核糖体RNA)。

正选择性标记例如aph和负-选择性标记例如sacB用于无标记的缺失诱变。简言之，sacB基因克隆到分支杆菌表达载体pMV361中(Stover等人Nature 1991，351：456-460)，产生pMS32a。在pMS32a中，sacB位于hsp60启动子的下游。携带hsp60p-sacB结构的pMS32a的限制片段转移到克隆载体pGEM-7(Promega)中，产生质粒pZ130，其在rrnA和rrnB置换型载体的结构中用作骨架。通过PCR获得位于(flanking)每个rrn操纵子的5’和3’区域的染色体DNA序列，并克隆到pZ130中。在进一步的改变之后，获得rrn置换型载体。如实施例所述，本文描述了rrnB置换型载体的产生，在图1中举例说明了rrnB的灭活策略。

为了互补，将功能性的rrnB操纵子克隆到整合很好的载体中。按照图2列出的策略，获得M.smegmatis的衍生物(即菌株ΔrrnAΔrrnBattB::prrnB)，其中两个内原性的染色体rRNA操纵子通过横穿整个16S、23S和5S rRNA基因(rrs、rrl和rrf；参见图1)的基因消除而失活。这种菌株完全无染色体的rRNA基因，rRNA仅仅从质粒DNA中转录。

这种菌株是特别有用的，因为它们可避免细菌细胞自身天然存在的核醣体活性的干扰，同时在本发明的试验方法中至少部分地引入异源的线粒体或胞液的细菌核糖体。

通过测定最小抑菌浓度，研究了核醣体的药物敏感性，如Pfister等人2003和2005中详细描述的内容(参见上面)。

在功能性的rRNA操纵子中，携带相应突变变异的重组体被集落性纯化，并且测定最小抑菌浓度(MIC)，以确定核醣体的药物敏感性。使培养物(得自于单一菌落)在LB介质(补充有0.05％Tween 80)中生长，并在微孔板格式中用于MIC试验。在0.025的吸光度(在600nm)下，起始培养物含有200μl细菌细胞，以两倍系列稀释物的形式加入相应的药物。将MIC定义为：在37℃培养72小时之后培养物的生长被完全抑制时的药物浓度，对应于24代。

区分原核与真核解码位点的关键核苷酸是16S rRNA位置1408(细菌核糖体：A，真核胞液核糖体：G)和1491(细菌核糖体：G，真核胞液核糖体：A，真核线粒体核蛋白体：C)。

如下面表1结果所示，本发明的化合物对于细菌核糖体RNA具有高度选择性。因此，它们在哺乳动物(尤其是人)中的细菌感染的抗生素疗法中高度有效，并且可以比现行的非选择性抗生素的剂量更高，非选择性抗生素的剂量必须很低，以免破坏哺乳动物的线粒体和胞液的RNA。

表1：通过探究最小抑菌浓度(mg/ml)所测定的针对细菌和突变株核糖体(携带解码位点的关键核苷酸)的所选择化合物和对比物的活性

	ΔrrnBμg/ml	ΔrrnB 1408Gμg/ml	ΔrrnB 1491Aμg/ml	ΔrrnB 1491Cμg/ml
					巴龙霉素新霉素B	10.5-1	64＞512	644	≥51216-32
5.15.25.35.45.55.65.75.85.95.105.115.125.135.145.155.165.175.185.195.205.215.225.235.245.255.265.275.285.29111519a19b19c19d19e	444-88-164-842-44416-32642-43232-642-44-162-42-44-82-48-168-16326412-432-6444-8432-64288-16168	512＞512256-512＞512≥512512256-512＞512128-256＞512128＞512＞512＞512256-512512＞512256-512512＞512＞512＞512＞512256512≥512＞512512＞512＞512＞512≥512＞512≥512＞512＞512	512＞512512＞512＞512＞512256＞512128-256＞51264-128＞512＞512＞512512512512256256-512512＞512＞512＞512256≥512≥512＞512512＞512≥512＞512≥512＞512≥512＞512＞512	＞512＞512＞512＞512＞512＞512＞512＞512128＞51264＞512＞512＞512512＞512512＞512256512＞512＞512＞512128-256≥512≥512＞512＞512＞512＞512＞512＞512≥512512＞512＞512

实施例3-抗菌素耐药性

使用携带确定耐药性决定子的葡萄球菌(Staphylococci)、肠道球菌(Enterococci)和大肠杆菌(Escherichia coli)的临床分离物以及菌株来测试所选择的本发明化合物的抗菌敏感性，并与众所周知的现有抗生素相比较。在标准MIC试验中测定药物敏感性，即测定体外抑制细菌繁殖所要求的最小药物浓度。

结果表明：

1.所选择化合物针对临床分离物(其对标准氨基糖苷具有抗性)是活性的。

2.所选择化合物没有被定义的氨基糖苷耐药性决定子例如ANT4’，AAC6’，APH2”，AAC3，ANT2”修饰。

结果概括在下面表2中，其中数字相当于MIC值(μg/ml)。

表2：比较化合物针对具有定义的耐药性决定子的临床细菌分离物和菌株的最小抑菌浓度(mg/l)

			庆大霉素	卡那霉素A	托普霉素	新霉素	巴龙霉素
AG011	金色葡萄球菌Staph.aureus	临床分离物	4	16	8	4	8
								AG013	表皮葡萄球菌Staph.epi.	临床分离物	≥256	≥256	≥256	64-128	≥256
AG014	表皮葡萄球菌Staph.epi.	临床分离物	≥256	≥256	256	32	≥256
								AG016	金黄色酿脓葡萄球菌S.aureus	BM3002	1	4-8	0.5-1	1-2	2-4
AG015	金黄色酿脓葡萄球菌S.aureus	BM3002(ANT4′)	4	256	≥256	128	＞256
								AG017	粪肠球菌E.faecalis	JH2-2	8-16	32-64	16-32	64	128-256
AG019	粪肠球菌E.faecalis	JH2-2(APH2”AAC6′)	＞256	＞256	＞256	＞256	＞256
								AG001	大肠杆菌E.coli	临床分离物	4	16	4
AG002	大肠杆菌E.coli	临床分离物	2	16	4
								AG003	大肠杆菌E.coli	临床分离物	≥256	32	32
AG004	大肠杆菌E.coli	临床分离物	＞256	64	64
								AG006	大肠杆菌E.coli	BM13	4	8	2
AG007	大肠杆菌E.coli	BM13(AAC3)	128	8	8
								AG008	大肠杆菌E.coli	BM13(ANT2”)	64	128	64
AG009	大肠杆菌E.coli	BM13AAC(6′)-1B	32	＞256	128-256

表2继续：所选择化合物针对具有所定义耐药性决定子的临床细菌分离物和菌株的最小抑菌浓度(mg/l)

			11	5.1	5.8	5.25	5.17
AG011	金黄葡萄球菌Staphylococcusaureus	临床分离物	8	8	4-8	4	4
								AG013	表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis	临床分离物	16	8-16	8	4-8	4-8
AG014	表皮葡萄球菌Staph.epi.	临床分离物	8	8	8-16	4	4
								AG016	金色葡萄球菌Staph.aureus	BM3002	16-32	16-32	8	8	8
AG015	金色葡萄球菌Staph.aureus	BM3002(ANT4′)	32	32-64	16	8-16	32
								AG017	粪肠球菌Enterococcusfaecalis	JH2-2	32-64	32-64	16-32	8	32
AG019	粪肠球菌E.faecalis	JH2-2(APH2”AAC6′)	＞256	256	64	32	128
								AG001	大肠杆菌E.coli	临床分离物	64	64	32	32-64	32-64
AG002	大肠杆菌E.coli	临床分离物	32-64	64	-	32-64	32-64
								AG003	大肠杆菌E.coli	临床分离物	32-64	32	-	32	32-64
AG004	大肠杆菌E.coli	临床分离物	64	32-64	16-32	32	32
								AG006	大肠杆菌E.coli	BM13	32	32	64	16-32	32
AG007	大肠杆菌E.coli	BM13(AAC3)	32	32	64	16-32	32
								AG008	大肠杆菌E.coli	BM13(ANT2”)	64-128	32	64	32	32
AG009	大肠杆菌E.coli	BM13AAC(6′)-1B	64-128	128	64	64-128	64-128

表2继续

			5.26	5.20	19c	19a
AG011	金黄葡萄球菌Staphylococcusaureus	临床分离物	4	1-2	-	2
								AG013	表皮葡萄球菌Staphylococcusepidermidis.	临床分离物	4-8	1	4-8	4
AG014	表皮葡萄球菌Staph.epi	临床分离物	4	1	2	2
								AG016	金色葡萄球菌Staph.aureus	BM3002	8	4	4	4
AG015	金色葡萄球菌Staph.aureus	BM3002(ANT4′)	16-32	8-16	16	8-16
								AG017	粪肠球菌Enterococcusfaecalis	JH2-2	16-32	8-16	8-16	8-16
AG019	粪肠球菌E.faecalis	JH2-2(APH2”AAC6′)	64-128	8-16	32	32-64
								AG001	大肠杆菌E.coli	临床分离物	32-64	8	16-32	8-16
AG002	大肠杆菌E.coli	临床分离物	64	-	16	16
								AG003	大肠杆菌E.coli	临床分离物	32	-	8-16	8-16
AG004	大肠杆菌E.coli	临床分离物	32	8	16	8-16
								AG006	大肠杆菌E.coli	BM13	32	8-16	8-16	8-16
AG007	大肠杆菌E.coli	BM13(AAC3)	32	16-32	8-16	8-16
								AG008	大肠杆菌E.coli	BM13(ANT2”)	32	16	8-16	8-16
AG009	大肠杆菌E.coli	BM13AAC(6′)-1B	128	16-32	32	32

Claims (56)

1.式(I)的化合物：

其中：

在所有情况下，X、Y和Z彼此独立地表示-O-、-NH-、-S-、取代的或未取代的-CH₂-或连接R¹和/或R²的直接键；

在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示氢，直链或支链的、取代的或非取代的烷基，烯基，炔基，亚烷基，碳环，或YR¹和ZR²一起形成取代的或非取代的环烷基或相应的杂环，条件是，R¹和R²不都是氢，

在所有情况下，R³和R⁴彼此独立地表示氢，氨基或羟基；

在所有情况下，R⁵和R⁶彼此独立地表示氢或糖基残基；

和它们的非对映异构体或对映体，以它们的碱形式或生理学相容的酸的盐形式。

2.按照权利要求1的化合物，其中在所有情况下，R¹和R²彼此独立地表示氢，直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₁₂烷基，C₂-C₁₂烯基、炔基或亚烷基，C₃-C₁₂环烷基，C₃-C₂₀芳基，优选芳烷基，C₃-C₂₀杂芳基或C₃-C₂₀杂环。

3.按照权利要求1或2的化合物，其中YR¹不是NH₂。

4.按照权利要求1至3的任一项的化合物，其中ZR²不是OH。

5.按照权利要求1至4的任一项的化合物，其中R¹和/或R²不包含肽核酸部分。

6.按照权利要求1至5的任一项的化合物，其中R¹包括、优选是取代或非取代的(C₁-C₅烷基)芳基，和R²是氢。

7.按照权利要求1至5的任一项的化合物，其中R²是直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₇烷基，C₂-C₇烯基、炔基或亚烷基，C₃-C₇环烷基，C₃-C₇芳基，优选芳烷基，C₃-C₇杂芳基或C₃-C₇杂环，和R¹是氢。

8.按照权利要求1至7的任一项的化合物，其中R³是羟基。

9.按照权利要求1至8的任一项的化合物，其中R⁴是氨基。

10.按照权利要求1至9的任一项的化合物，其中R⁵是氢。

11.按照权利要求1至9的任一项的化合物，其中R⁵选自单和多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选二糖，特别优选2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分。

12.按照权利要求1至11的任一项的化合物，其中R⁶是氢。

13.按照权利要求1至11的任一项的化合物，其中R⁶选自单和多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选单糖，特别优选3-氨基-3-脱氧-α-D-吡喃葡糖基部分。

14.按照权利要求1至13的任一项的化合物，其中R⁶是2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-(-D-呋喃核糖基部分。

15.按照权利要求1至13的任一项的化合物，其中R⁵是3-氨基-3-脱氧-α-D-吡喃葡糖基部分。

16.按照权利要求1至15的任一项的化合物，其中YR¹和ZR²一起形成取代或非取代的环烷基或相应的杂环。

17.按照权利要求1至16的任一项的化合物，其中YR¹和ZR²一起形成6元的4’，6’-环烷基或取代的4’，6’-环烷基环。

18.按照权利要求1至17的任一项的化合物，其中Y和Z是氧，优选X、Y和Z是氧。

19.具有式(II)的按照权利要求1至18的任一项的化合物：

其中：

在所有情况下，X、Y和Z彼此独立地表示-O-、-NH-、-S-、取代的或未取代的-CH₂-；

R⁷表示氢，直链或支链的、取代或非取代的烷基，烯基，炔基，亚烷基或碳环；

R⁸表示氢，该化合物是稳定的条件下OH，NH₂，NR_aR_b，SH，SR_a，OR_a或直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基，其中R_a和R_b在所有情况下彼此独立地是C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基；

R³表示氢，氨基或羟基，优选氨基或羟基；

R⁴表示氢，氨基或羟基，优选氨基或羟基；

R⁵表示氢，单或多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选二糖，特别优选2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分；

R⁶表示氢，单或多糖，优选单、二或三糖，更优选单或二糖，最优选单糖，特别优选3-氨基-3-脱氧-α-D-吡喃葡糖基部分。

20.按照权利要求19的化合物，其中X、Y和Z都是氧。

21.按照权利要求19或20的化合物，其中R⁷表示氢，直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，C₃-C₈环烷基，C₅-C₂₀芳基，C₅-C₂₀杂芳基，优选C₅-C₁₂杂芳基。

22.按照权利要求19至21的任一项的化合物，其中R⁷表示直链、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选取代的直链C₁-C₃烷基，更优选芳基取代的C₁-C₃烷基；取代或非取代的C₃-C₈环烷基，C₅-C₁₂芳基，C₅-C₁₂杂芳基，优选取代的C₅-C₁₂杂芳基。

23.按照权利要求19至22的任一项的化合物，其中R⁷表示C₅-C₁₂芳基或杂芳基，优选(C₁-C₇烷基)芳基。

24.按照权利要求19至23的任一项的化合物，其中R⁷是芳基取代的乙基。

25.按照权利要求19至24的任一项的化合物，其中R⁷包含卤素，优选氯、溴、氟或碘，更优选氟。

26.按照权利要求19至25的任一项的化合物，其中R⁸选自氢，卤素或直链或支链的、取代或非取代的C₁-C₈烷基，优选C₁-C₄烷基，最优选氢。

27.按照权利要求19至26的任一项的化合物，其中R⁵或R⁶是氢。

28.按照权利要求19至27的任一项的化合物，其中R⁶是2，6-二氨基-2，6-二脱氧-β-L-艾杜吡喃糖基-(1→3)-β-D-呋喃核糖基部分。

29.按照权利要求19至28的任一项的化合物，其中R¹和R²表示直链或支链的、取代或非取代的烷基或环烷基，其中一个或多个碳原子彼此独立地被氧、硫或氮取代。

30.按照权利要求19至29的任一项的化合物，其中X、Y和Z是氧。

31.按照权利要求1至30的任一项的化合物，选自

4’，6’-O-亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间甲氧基亚苄基巴龙霉素四乙酸盐，

4’，6’-O-邻甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-2，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对硝基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间硝基亚苄基巴龙霉素三乙酸盐，

4’，6’-O-对氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-3，5-二氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对氰基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对苯基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对氟亚苄基巴龙霉素，

4’，6’O-3，5-二甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’O-3，4，5-三甲氧基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-间氯亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-邻硝基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对三氟甲基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-对二甲基氨基亚苄基巴龙霉素，

4’，6’-O-1-亚萘基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚萘基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚呋喃基巴龙霉素，

4’，6’-O-2-亚噻吩基巴龙霉素和

4’，6’-O-亚乙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(2-苯基)-亚乙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙基巴龙霉素，

4’，6’-O-(3-苯基)-亚丙烯基巴龙霉素，

4’，6’-O-环己基亚甲基巴龙霉素，

4’-O-苄基巴龙霉素，

6’-O-苄基巴龙霉素，

4’-对氯苄基巴龙霉素，

4’-对(三氟甲基)苄基巴龙霉素，

4’-苄氧基甲基巴龙霉素和

4’-对甲氧基苄基巴龙霉素。

32.按照权利要求1至31的任一项的一或多种化合物用于制备药物的用途。

33.按照权利要求1至31的任一项的一或多种化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗和/或预防微生物感染，优选细菌感染。

34.按照权利要求1至31的任一项的一或多种化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗和/或预防锥虫病。

35.按照权利要求1至31的任一项的一或多种化合物用于制备药物的用途，该药物用于治疗和/或预防利什曼病。

36.药物组合物，其包含作为活性物质的一或多种按照权利要求1至31的任一项的化合物或其药学可接受的衍生物或前体药物，任选与常规赋形剂和/或载体组合。

37.制备按照权利要求1至31的任一项化合物的方法，所述方法包括一个或多个下列步骤：

a)提供按照式III的化合物：

其中：

在所有情况下，V和W彼此独立地表示-O-、-NH-和-S-；

在所有情况下，R³和R⁴彼此独立地表示氢，氨基或羟基；

在所有情况下，R⁵和R⁶彼此独立地表示氢或糖基残基；

b)保护一个或多个、优选所有的氨基；

c)任选保护一个或多个、优选所有的羟基；

d1)将任选保护的4’-和/或6’-羟基选择性地转化为式I的YR¹和/或ZR²基团或式II的环系；或

d2)将保护的4’-和/或6’-羟基选择性地去保护，并且将脱保护的4’-和/或6’-羟基选择性地转化为式I的YR¹和/或ZR²基团或式II的环系；

e)将一个或多个氨基去保护；

f)将一个或多个羟基去保护；

其中步骤b)和c)以及e)和f)的顺序可以颠倒，b)和c)以及e)和f)的顺序是优选的。

38.按照权利要求37的方法，其中通过将氨基转化为叠氮基、氨基甲酰基或N-酰基胺基来保护该氨基。

39.按照权利要求37或38的方法，其中利用重氮转移，通过将氨基转化为叠氮基来保护该氨基。

40.按照权利要求37至39的任一项的方法，其中通过将羟基转化为醚，优选烷基和/或甲硅烷基醚，和/或酯，优选磺酸酯或缩醛，将该羟基进行保护。

41.按照权利要求40的方法，其中用酰基转移试剂，优选乙酸酐，优选在碱和/或催化剂的存在下，通过将羟基转化为乙酰氧基来保护该羟基。

42.按照权利要求37至41的任一项的方法，其中通过碱或酸催化的溶剂分解，或用氢供体例如二异丁基氢化铝、LiAlH₄或LiBH₄进行还原来将乙酰氧基脱保护。

43.按照权利要求37至42的任一项的方法，其中通过式III的羟基化合物与R⁷CHO或R⁷CH(OR^a)(OR^b)的反应来制备式III的4’，6’-缩醛，其中R^a和R^b是烷基残基，优选甲基，在合适有机和/或无机酸的存在下，如果需要的话，在合适溶剂中。

44.按照权利要求37至42的任一项的方法，其中式III的4’，6’-缩醛是通过式III的羟基化合物与进行反应来制备的，其中X是离去基团，优选卤素原子，更优选溴，在碱的存在下，如果需要的话，在合适溶剂中。

45.按照权利要求37至44的任一项的方法，其中利用选自下列的方法将叠氮基脱保护：

还原氢化，

与氢化物试剂反应，优选氢化铝锂，

电子转移，优选在碱的存在下与双硫醇反应，和

与膦试剂的Staudinger反应，优选与三甲基膦反应。

46.按照权利要求27至35的任一项的方法，其中4’-和6’-羟基被选择性脱保护。

47.按照权利要求46的方法，其中以亚苄基缩醛的形式将4’-和6’-羟基进行保护。

48.按照权利要求47的方法，其中利用选自催化氢化、Birch还原和酸催化的水解的方法，将4’，6’-亚苄基缩醛脱保护。

49.按照权利要求46至48的任一项的方法，包括：通过在合适路易斯酸的存在下，与合适氢化物试剂，优选硼烷-二甲硫醚复合物，进行反应，4’，6’-缩醛的区域选择性还原裂解，产生较大位阻的醚衍生物。

50.按照权利要求46至48的任一项的方法，包括：通过在合适酸的存在下，与合适氢化物试剂，优选氰基硼氢化钠，进行反应，4’，6’-缩醛的区域选择性还原裂解，产生较小位阻的醚衍生物。

51.按照权利要求37至50的任一项的方法，其中以苄氧基形式保护羟基，优选，苄基部分是取代或未取代的芳甲基或杂芳基甲基。

52.按照权利要求51的方法，其中苄氧基是对甲氧基苄氧基。

53.按照权利要求52的方法，其中通过用合适试剂，优选用二氯二氰基醌，进行氧化裂解，将对甲氧基苄氧基脱保护。

54.按照权利要求37至52的任一项的方法，其中通过将原始6’-羟基以醚形式进行选择性保护，优选烷基和/或甲硅烷基醚，或酯形式，优选磺酸酯或缩醛。

55.按照权利要求54的方法，其中原始6’-羟基是单甲氧基三苯甲基氧基。

56.按照权利要求37至55的任一项的方法，其中以醚形式保护4’-羟基，优选，在合适碱的存在下，通过与合适烷氧基转移试剂，优选烷基卤，进行反应。

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