CN101674845A - 用于胃肠外给药的佐剂疫苗制剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及季节变应原组合物用于制备通过胃肠外给药预防或治疗受试者中对所述变应原组合物的变态反应的用途，其中将疫苗制剂以包含剂量递增阶段的给药方案给药，其中剂量递增阶段部分地或完全覆盖变应原组合物的变应原季节。

Description

用于胃肠外给药的佐剂疫苗制剂的用途

技术领域

本发明涉及季节性变应原组合物用于制备通过胃肠外给药用于预防或治疗受试者中的变态反应的疫苗制剂，其中所述疫苗制剂以包括剂量递增阶段和维持剂量阶段的给药方案给药。

背景技术

变态反应是采用西方生活方式的国家的主要健康问题。此外，变态反应性疾病的流行性在这些国家逐渐上升。尽管变态反应性疾病通常并不被视为威胁生命的疾病，但是其可以发展为每年造成大量死亡的哮喘。在西方国家，在青少年中占约30％的的特殊流行性致使生命质量、工作日和收入的显著损失，并是主要健康问题中的一类。

变态反应是一种复杂的疾病。很多因素促成致敏事件。其中一个是由至今尚未充分了解的数个基因的相互作用决定的个体的易感性。另一个重要因素是变应原暴露于一定的阈值之上。在致敏过程中某些环境因素可能很重要，包括污染、儿童期感染、寄生虫感染、肠内微生物等。个体一旦过敏并建立变态反应免疫应答，仅仅少量变应原的存在就有效地转变为症状。

变态反应疾病的自然病程通常伴随着两种恶化程度。首先，症状和疾病严重性的发展，以及疾病的发展，例如由枯草热至哮喘。其次，令人厌恶的变应原的传播经常发生，导致变态反应的多反应性。慢性炎症导致粘膜防御机制总体减弱，造成非特异性刺激并最终损伤粘膜组织。婴儿可能变得主要对食物，即乳类过敏，造成湿疹或胃肠功能紊乱；然而，他们最常见的是使这些症状自发地过度发展。这些婴儿在其以后的生命中有发展为吸入性变态反应的危险。

在我们呼吸的空气中最流行的一定粒度的颗粒中发现了最重要的变应原根源。这些根源非常普遍并包括花粉和尘螨排泄物颗粒，它们一起导致约占变态反应总量的50％。在全世界范围内重要的还有动物皮屑，例如猫和狗的皮屑，其它花粉，例如艾蒿花粉，和微真菌，例如链格孢属。然而基于地区而言，其它变应原也可能占据主导地位，例如北部和中部欧洲的桦树的花粉、美国东部和中部的豚草，日本的柳杉花粉。昆虫，例如蜜蜂和胡蜂毒液，和食物，各是全部变态反应的约2％的原因。

变态反应，例如I型过度敏感，由对异源的非致病物质的不适当免疫反应引起。变态反应的重要临床表现包括哮喘、枯草热、湿疹和胃肠道功能紊乱。在与令人厌恶的变应原接触的情况下变态反应迅速发生并在20分钟内达峰值。此外，变态反应是特异性的意味着特定的个体对特定的变应原敏感，而该个体对其它已知的引起变态反应疾病的物质并不必然显示变态反应。变态反应的表型的特征为靶器官粘膜的明显炎症并在循环中和在肥大细胞和嗜碱粒细胞表面上存在变应原IgE类特异性抗体。

当抗体结合于高亲和性的肥大细胞和嗜碱粒细胞表面的IgE特异性受体时，通过异源变应原与变应原特异性IgE抗体的反应引发变态反应攻击。所述肥大细胞和嗜碱粒细胞包含预先形成的介质，例如组胺、类胰蛋白酶和其它物质，它们在两个或多个受体结合的IgE抗体交联时释放。IgE抗体在结合一个变应原分子的同时交联。因此，结果是只具有一个抗体结合表位的异源物质不引发变态反应。肥大细胞表面的受体结合IgE的交联还导致信号分子的释放，所述信号分子负责将嗜酸细胞、变应原特异性T-细胞和其它类型的细胞吸引至变态反应位点。这些与变应原、IgE和效应细胞相互作用的细胞导致在遭遇变应原后12-24小时发生症状的骤变(后期反应)。

变态反应性疾病管理包括诊断和治疗，包括预防性治疗。变态反应的诊断涉及变应原特异性IgE的证实和变应原根源的识别。在很多情况下，详细的既往病历对变态反应的诊断和令人厌恶的变应原根源物质的识别可能就足够了。然而，通常，诊断由阳性检查，如皮肤单刺试验、血液试验或激发试验来支持。

治疗选择主要包括三大类。第一种可能性是避开变应原或减少暴露。尽管避开变应原是明显有效的，例如在血液变应原的情况下，但是这可能很困难或很耗费，如对于尘螨变应原来说；或可能是不可能的，如对于花粉变应原。第二种并最广泛使用的治疗选择是典型的对症药物处方如抗组胺和甾类药物。对症药物是安全并有效的；然而，它们不改变疾病的本质起因，也不控制疾病的传播。第三种治疗选择是特异性变态反应疫苗接种，其在大多数情况下减轻或缓解了由所述变应原引起的变态反应症状。

传统的特异性变态反应疫苗接种是变态反应疾病的对因治疗。其干扰基础免疫机制导致患者免疫状况的持久改善。因此，相比对症药物治疗，特异性变态反应疫苗接种的保护作用延长至超过治疗期。有些接受治疗的患者被治愈，且此外，大多数患者感受到疾病的严重性和过往症状得以缓解，或至少遏制了疾病恶化。因此特异性的变态反应疫苗接种具有预防作用，降低枯草热发展为哮喘的风险，和降低发展新敏感性的风险。

变态反应疫苗接种成功所基于的免疫基质并未充分知晓。特异性免疫应答，如针对特定病原体的抗体的产生，已知为适应性免疫应答。该应答可以区别于固有免疫应答，固有免疫应答是针对病原体的非特异性反应。变态反应疫苗结合以提供适应性免疫应答，其包括具有抗原特异性的细胞和分子，如T-细胞和产生抗体的B-细胞。没有相应的特异性T-细胞的协助，B细胞不能成熟发育为产生抗体的细胞。参与刺激变态反应免疫应答的T细胞主要是Th2型。在Th1和Th2细胞之间建立新的平衡已经被认为对于特异性变态反应疫苗接种的免疫机制是有利和重要的。这是由Th2细胞的减少，从Th2转换为Th1，还是Th1细胞的增量调节带来的，是有争议的。最近，调节性T细胞被认为对于变态反应疫苗接种很重要。根据该模拟调节性T细胞，例如Th3或Tr1细胞，减量调节相应抗原特异性的Th1和Th2细胞。尽管这些不明确性，通常认为活性疫苗必需具有刺激变应原特异性T细胞，优选TH1细胞的能力。

特异性变态反应的疫苗接种，尽管有效，但未广泛使用，主要因为两个原因。一个原因是关于传统的疫苗接种不方便，包括在数月期间动脉注射重复疫苗接种。另一个原因是，也更重要的是过敏性副反应的风险。针对传染性病原体的常规疫苗接种使用单剂量或数个高剂量的免疫。然而，由于已经进行了病理免疫应答，该措施不能用于变态反应疫苗接种。

因此传统的特异性变态反应疫苗接种使用长时间施用的皮下免疫进行。该过程分为两个阶段，剂量递增阶段和维持阶段。在剂量递增阶段施用逐渐增加的剂量，典型地在十六周内，自微量开始。当达到推荐维持剂量，该剂量在维持阶段施用，典型地每六周注射一次。在每次注射后，由于过敏副反应的危险，患者必需根据医疗规定逗留30分钟，其原则上可能是威胁生命的，尽管是及其罕见的。此外，临床应该配备为支持急救治疗的。

对于季节性变应原，如来自树木花粉、牧草花粉、杂草花粉和真菌，通常自剂量递增开始并有利地在季节来临之前结束以避免诱发患者正在发生的症状的治疗并因此将副作用的危险最小。

改进特异性变态反应疫苗接种的尝试已经进行了超过30年并包括多种途径。通过改变I gE反应性，数个途径已经说明了变应原本身。其它的说明了给药途径和使用的治疗方案。

Seidenberg等人(Clinical and Experimental Allergy，36，1201-1212，British Society for Allergy and Clinical Immunology，Annual Conference-July 2006，Abstract S17)描述了一项用液体变态反应疫苗舌下给药治疗儿童的免疫疗法研究，其中在季节来临之前不久或在所述季节期间启动所述治疗。

本发明的目的在于提供使用胃肠外给药的佐剂疫苗制剂用于预防或治疗受试者中的变态反应的改进的方法。

发明概述

该目的通过本发明实现，其涉及用于制备在受试者中通过胃肠外给药用于预防或治疗对变应原组分起变态反应的季节性变应原组合物的用途，其中所述疫苗制剂以包含剂量递增阶段的给药方案给药，其中，剂量递增阶段部分或完全覆盖变应原组合物的变态反应季节。

本发明基于临床结果，其令人惊讶地显示通过胃肠外给药用于治疗对季节性变应原的变态反应的变态反应疫苗接种可以在变应原季节启动而保持可接受的副作用水平。在至今仍认为对于季节性变应原重要的是在季节来临之前完成整个剂量递增阶段以避免严重的副作用的意义上来讲，该发现非常令人惊讶。

已经发现，需要变态反应疫苗接种的高百分比的患者除非他们感觉到变态反应症状，例如在季节性变应原的季节中，才会去见医生。迄今为止，还不能在季节内启动胃肠外变态反应疫苗接种，因此具有正在发生的症状的患者在季节内的治疗不得不推迟到季节过后的时间，结果患者不得不较长期忍受症状并冒着变态反应恶化的风险。此外，很多患者在所述季节之外他们没有体验到变态反应的不便，没有开始治疗的动力，因此他们不会在下一变应原季节来临之前及时启动治疗。

在变应原季节内或直至变应原季节启动胃肠外变态反应疫苗接种的可能性使得治疗方案对于患者和治疗患者的医生和变态反应学家来说大大简化并促使更多人接受变态反应疫苗接种。

发明详述

变应原组合物

在本发明的优选实施方案中，构入制剂中的变应原组合物选自变应原提取物、变应原提取物的纯级分、经修饰的变应原、重组变应原和重组变应原突变体。变应原提取物可以自然包含相同变应原的一种或多种亚型，而重组变应原典型地只代表变应原的一种亚型。突变变应原可以是低IgE-结合突变体，例如根据WO99/47680，WO 02/40676或WO 03/096869A2的低IgE-结合变应原。经修饰的变应原可以是任何通过例如化学、物理或酶处理而修饰的变应原衍生物，包括例如类变应原。在优选的实施方案中，所述变应原是提取物形式的。在另一个优选的实施方案中所述变应原是重组变应原。在进一步优选的实施方案中所述变应原是类变应原。在进一步优选的实施方案中所述变应原是天然出现的低IgE-结合突变体或重组低IgE结合突变体。此外，所述变应原可以是多种变应原的混合物，例如2至10种变应原，特别是3至9种变应原，更特别地4至8种变应原，和最特别地5至7种变应原。

变应原组合物中的变应原可以是源自产生生物变应原的根源的生物任何季节性的、吸入式、环境的变应原。这种变应原的实例包括花粉变应原(树木-、草药-、杂草-、和牧草-花粉类变应原)和真菌以及霉菌类变应原。

来自树木、草和草药的重要花粉变应原是起源于分类学的以下目的那些：山毛榉目、木犀目、松目和悬铃木科，尤其是包括桦树(桦木属)，桤木(桤木属)、榛(榛属)、鹅耳枥(鹅耳枥属)和橄榄树(洋橄榄属)、雪松(日本柳衫和刺柏属)、悬铃木(悬铃木属)，禾本目，尤其包括以下属的牧草：黑麦草属、梯牧草属、早熟禾属、狗牙根属、鸭茅属(Dactylis)、绒毛草属、虉草属(Phalaris)、黑麦属和高梁属，菊目(Asterales)和蕁麻目尤其包括豚草属(Ambrosia)、蒿属(Artemisia)和墙草属(Parietaria)的草药。

来自真菌和霉菌的重要吸入变应原尤其是源自链格孢属和分枝孢子菌属的那些。

在本发明的特别优选的实施方案中，变应原为来自MolecularBreeding的Bet v 1，Aln g 1，Cor a 1和Car b 1，Que a 1，Cryj 1，Cry j 2，Cup a 1，Cup s 1，Jun a 1，Jun a 2，Jun a 3，Olee 1，Lig v 1，Pla I 1，Pla a 2，Amb a 1，Amb a 2，Amb t 5，Artv 1，Art v 2，Par j 1，Par j 2，Par j 3，Sal k 1，Ave e 1，Cyn d 1，Cyn d 7，Dac g 1，Fes p 1，Hol I 1，Lol p 1和5，Phaa 1，Pas n 1，Phl p 1，Phl p 5，Phl p 6，Poa p 1，Poa p 5，Secc 1，Sec c 5，Sor h 1，Alt a 1，Cla h 1，Asp f 1，Mal d 1，Gly m 1，Gly m 2，Gly m 3，Ara h 1，Ara h 2，Ara h 3，Ara h 4，Ara h 5或shufflant hybrids或这些中的任一种。

在本发明的优选实施方案中，所述变应原选自树木花粉变应原、牧草花粉变应原、杂草变应原、草药变应原、霉菌变应原和真菌变应原。

在本发明的还另一个实施方案中，所述组合物包含至少两种不同类型的变应原，它们或起源于相同的过敏源或起源于不同的变应原根源，例如来自不同的牧草种属的牧草组1和牧草组5变应原，来自短豚草和巨豚草的杂草变应原、来自链格孢属和分枝孢子菌属的真菌变应原和来自桦树、榛、角树、栎树和桤木的树木变应原。

当变应原组合物包含多于一种变应原时，所述变应原可以当量摩尔量存在或者所述变应原的比例可以优选变化至最多1∶20。

优选维持阶段的单剂量的制剂的效能为100至1000000SQ-u，更优选500至500000SQ-u，更优选1000至300000SQ-u，更优选10000至200000SQ-u，更优选50000至150000SQ-u和最优选75000至125000SQ-u。

变应原的量，其相应于给定的效能水平，强烈取决于变应原的种类而变化。在本发明的优选实施方案中，主要变应原的浓度在单剂量的情况下为0.05至50μg，更优选0.05μg至30μg，更优选0.06μg至25μg，更优选0.07μg至20μg，更优选0.08μg至15μg，更优选0.09μg至10μg和最优选0.1μg至7μg。

胃肠外给药

在本发明特别优选的实施方案中，胃肠外给药选自静脉内、肌内、关节内、皮下、真皮内、上皮/透皮、腹膜内和淋巴管内给药，优选皮下给药。术语“淋巴管内”包括所有淋巴组织，包括扁桃体。

在剂量递增期间和维持期间的给药周期可以是连续的周期。可替代地，给药周期是可以被一个或多个不给药的周期间断的非连续周期。优选地，不给药的(整个)周期短于给药的(整个)周期。

剂量递增阶段和维持阶段

在本发明中使用的给药方案可以是关于剂量和次数、给药周期和频率的任何常规给药方案。

在本发明的一个方面，给药方案包括继剂量递增阶段之后的维持阶段。

在本发明的特别的实施方案中，剂量递增阶段的持续时间为1周至30周，优选6周至25周，更优选10周至20周，和最优选13周至17周。

在另一个本发明特别的实施方案中，在剂量递增阶段的给药次数为1至30次、优选5至25次，更优选10至20次，和最优选13至18次。

在另一个本发明的特别的实施方案中，在剂量递增阶段给药间隔为1至14天，优选1至11天，更优选1至9天，更优选1至8天，和最优选2至8天。

优选，剂量递增阶段包括多个剂量水平，1次至8次，优选2至7次，更优选3至6次，和最优选4至5次。

在本发明的另一个特别的实施方案中，在变应原季节结束之前，剂量递增进展到以下水平，其中给予的剂量为至少1％，优选至少2％，优选至少5％，优选至少10％，优选至少20％，优选至少30％，优选至少40％，优选至少50％，优选至少60％，优选至少70％，优选至少80％和最优选至少90％的维持剂量。在本发明的优选实施方案中，在变应原季节结束之前，剂量递增进展至维持剂量水平，即剂量递增阶段在变应原季节内完成。

在另一个本发明特别的实施方案中，维持阶段的持续时间为12个月至48个月，优选24个月至42个月，更优选30个月至40个月，和最优选34个月至38个月。

在本发明的另一个特别的实施方案中，在维持阶段的给药次数为9次至34次，优选18次至32次，更优选22次至30次，最优选24次至28次。

在本发明的另一个特别的实施方案中，维持阶段的给药间隔为1至14周，优选3至10周，更优选4至8周，最优选5至7周。

在本发明的一个特别的实施方案中，剂量递增阶段在变应原季节启动。剂量递增阶段可以在变应原季节开始时启动和在所述季节开始后启动。特别是，剂量递增阶段在变应原季节来临多于1周，更特别地多于2周、更特别地多于3周，更特别地多于4周，更特别地多于5周，更特别地多于6周，更特别地多于10周后启动。

在本发明的第二个特别的实施方案中，剂量递增阶段在变应原季节前启动并延续至变应原季节内。特别是，剂量递增阶段在变应原季节来临多于1周，更特别地多于2周，更特别地多于3周，更特别地多于4周，更特别地多于5周，更特别地多于6周，更特别地多于10周前启动。

在本发明的还进一步的实施方案中剂量递增阶段作为所谓的快速剂量递增来实施，还已知为超快速剂量递增。在这种快速治疗中，递增的剂量优选给药间隔为5至180分钟，优选10至120分钟，更优选15至60分钟，和最优选20至40分钟。优选，快速剂量递增包括多个剂量水平，1至8个，优选2至7个，更优选3至6个和最优选4至5个。

在本发明的第二个方面，给药方案不包括继剂量递增阶段之后的维持阶段。在该方面，给药方案优选包括1至10个剂量递增阶段，更优选2-8个剂量递增阶段和最优选3至6个剂量递增阶段。

在本发明的第二方面的特别的实施方案中，各个剂量递增阶段的持续时间为1周至15周，优选3周至12周，更优选4周至10周，和最优选5周至9周。在本发明的另一个特别的实施方案中，各个剂量递增阶段的给药次数为1至15次，优选3至12次，更优选4至10次和最优选5至9次。在本发明的另一个特别的实施方案中，在剂量递增阶段的给药间隔为1至14天，优选2至12天，更优选3至11天，更优选4至10天，和最优选5至9天。优选，剂量递增包括多个剂量水平，1至14个，优选3至12个，更优选4至10个和最优选5至9个。

疫苗制剂

本发明的疫苗制剂可以是适于胃肠外给药的任何制剂，包括混合剂、溶液、悬浮液、分散液、乳液、凝胶、糊剂、糖浆剂、乳膏、软膏、植入物、储库式和可再溶解的粉末、颗粒或冻干物(lyophilisate)，优选溶液或可再溶解的冻干物。

在本发明的疫苗制剂的特别实施方案中，疫苗制剂通过冻干变应原组合物的溶液来制备，其中所述疫苗制剂适用于在给药之前再溶解。

本发明的疫苗制剂可以进一步包含适合于这样的制剂类型的任何佐剂和其它赋形剂。这样的赋形剂是本领域技术人员所熟知的并包括尤其是溶剂、乳化剂、润湿剂、增塑剂、着色物质、填料、防腐剂、粘度调节剂、缓冲剂、pH调节剂、等渗性调节剂、粘膜粘着性物质等。制剂设计的实例是本领域技术人员所熟知的。

所述佐剂可以是任何常规佐剂，包括含氧金属盐，例如氢氧化铝，不耐热肠毒素(LT)，霍乱毒素(CT)，霍乱毒素B亚基(CTB)，聚合脂质体，突变体毒素，例如LTK63和LTR72，微囊，白介素(例如IL-1[β]，IL-2，IL-7，IL-12，INFγ)，GM-CSF，MDF衍生物，CpG寡核苷酸，LPS，MPL，膦腈(phosphophazene)，聚葡糖，抗原制剂，脂质体，DDE，DHEA，DMPC，DMPG，DOC/Alum络合物，弗氏不完全佐剂，

LT口服佐剂，胞壁酰二肽，单磷酰脂质A，胞壁酰三肽，和磷脂酰乙醇胺。

含氧金属盐的水溶液典型地具有凝胶状。氢氧化铝在制剂中的浓度优选0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml，和最优选0.5-5mg/ml。然而，本发明的制剂也可以具有高度浓缩的凝胶或凝胶样制剂的形态。

本发明的制剂可以通过将佐剂和其它赋形剂溶解在，任选地，溶剂，优选水中，添加变应原，并允许变应原和佐剂以及其它赋形剂反应一段时间来制备。反应时间可以是0.1至48小时，优选12至24小时。所述反应优选在4至45℃，更优选在4至20℃的温度下进行。

含氧金属盐

在本发明的优选实施方案中，本发明的疫苗制剂包含含氧金属盐佐剂。优选，选自含氧金属盐的金属阳离子选自Al，K，Ca，Mg，Zn，Ba，Na，Li，B，Be，Fe，Si，Co，Cu，Ni，Ag，Au和Cr。

含氧化合物的阴离子可以是任何含氧阴离子，包括有机和无机阴离子，或有机和无机阴离子的组合。适合的含氧金属盐的实例为例如其中阴离子选自以下的那些：硫酸盐、氢氧化物、磷酸盐、硝酸盐、碘化物、溴化物、碳酸盐、水合物、乙酸盐、柠檬酸盐、草酸盐和酒石酸盐，及其混合形式。含氧金属盐进一步包含配合物。配合物的定义在例如The Handbook of Chemistry and Physics 56 Ed.，SectionB，Chapter 7(197576)中提供。

在本发明的上下文中，表达式“混合形式”旨在包括不同阴离子的组合以及与例如氯化物和硫化物的组合。

根据本发明，含氧金属盐的实例为氢氧化铝，磷酸铝，硫酸铝，乙酸铝，硫酸铝钾，磷酸钙，酒石酸钙，Maalox(氢氧化铝和氢氧化镁的混合物)，氢氧化铍，氢氧化锌，碳酸锌，硫酸锌，和硫酸钡。

最优选的是氢氧化铝，磷酸铝，乙酸铝，磷酸钙，酒石酸钙和硫酸锌。

含氧金属盐的pI典型地在2-11的范围内。变应原蛋白质的pI典型地在4-9的范围内。优选，选择变应原和含氧金属盐使得变应原的pI低于含氧金属盐的pI。

当使用例如氢氧化铝作为含氧金属盐时，氢氧化铝在制剂中的浓度优选0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml，和最优选0.5-5mg/ml。对于其他含氧金属盐，金属盐的浓度优选0.035-1000mg/ml，更优选0.35-100mg/ml，更优选0.7-50mg/ml，和最优选1.0-20mg/ml。变应原在制剂中的浓度优选0.01-100mg/ml，更优选0.1-10mg/ml。含氧金属盐与变应原的比例优选为0.1至100，更优选1至20。变应原吸附于含氧金属盐的程度典型地为添加量的5至99％，更优选为10至99％。变应原在含氧金属盐上的吸附取决于缓冲体系和吸附发生的反应条件，包括温度和反应时间。

含氧金属盐可以表征为多种物理-化学参数如吸附作用，溶解性和分散性，测定为等电点pI(对于可离解的化合物，物质的净电荷为零的pH)的离子电荷、解离常数、络合物配位、电子构型、化合价、成键轨道和反键轨道、储库特性、粘合性、表面特性、颗粒特性和佐剂活性。

认为生物活性物质吸附于(或偶合于)含氧金属盐，且该吸附有助于疫苗的效能。数个因素可能是重要的或影响活性物质和含氧金属盐之间的吸附(参见例如P.M.Callahan等人，PharmaceuticalResearch第8卷，No.7，851-858(1991)，and Vaccine Design.TheSubunit and Adjuvant Approach)。这些因素包括pH、吸附反应进行的时间长度、混合条件、疫苗中不同组分的浓度、容器、温度、储存、缓冲剂和赋形剂。进一步发现活性物质的吸附可以被金属盐的净/总电荷和活性物质的电荷影响，两者都是pH依赖性的。认为重要的进一步的特征为含氧金属盐的溶解性。

含氧金属盐的另一个特征为保护活性物质，或者通过保持对于活性物质在微环境中理想的pH，从而预防酸降解，或者通过保护活性物质抗酶解从而允许所述物质的递送。

此外，有些含氧金属盐具有缓冲能力。这可能导致在疫苗制剂中的体内微环境，其保护活性物质逃避可降解的环境。

含氧金属盐进一步的特征为其粘附于粘膜的能力。这被认为提高病原体透过粘膜的吸收。

对于数种含氧金属盐(例如Al(OH)₃、AlPO₄、Ca₃PO₄)，粒度范围为在0.5和15μm之间。

定义

关于本发明使用了以下定义：

术语“胃肠外”表示通过非粘膜途径，尤其包括舌下、口腔粘膜和胃肠黏膜。

术语“季节性变应原”表示源自产生生物变应原的根源的任何吸入环境的变应原，其每年至少在一段时期内在至少某些患者中在周围环境中具有足以诱发变态反应症状的水平，并且其每年在至少一段时期在周围环境中在至少某些患者中具有不足以诱发变态反应症状的水平。

术语“变应原组合物”表示包含一种或多种变应原的任何组合物，包括生物和生物学地衍生的组合物和包含合成变应原的组合物。

术语“剂量递增阶段”表示其中给予的变应原组合物的剂量逐渐增加直至达到足量水平，该水平用在随后的维持阶段，并且剂量递增阶段在所述足量水平达到后终止，即在第一次足量给药后即刻终止。

术语“维持阶段”表示继剂量递增的后续治疗期并且在此期间给予足量的变应原组合物，维持阶段在第一次足量给药后即刻启动。

术语“变应原季节”表示这样的时间段，其自空气传播的含变应原的颗粒第一次连续3天超过阈值开始，所述阈值为在先10年的平均峰值的5％，在地区或国家的一个或多个测量区域，且至空气传播的含变应原的颗粒水平最终连续三天低于阈值结束，所述阈值为在先10年的平均峰值的5％，在地区或国家的一个或多个测量区域。术语“空气传播的含变应原的颗粒”表示源自产生生物变应原的根源的任何空气传播的含变应原的颗粒，包括变应原例如来自牧草、杂草、植物和树木、真菌的孢子或来自产生生物变应原的根源的任何其它的生物残骸，其在监测周围环境中的变应原水平时由主管当局使用。表达词“地区或国家”表示在监测周围环境中的变应原水平时由主管当局使用的地区或国家。术语“峰值”表示季节中三天最高值的平均值。

术语“SQ-u”表示标准化的质量单位：SQ-u根据ALK-AbellóA/S′s“SQ生物效能”-标准化法测定，其中，100,000SQ单位等于标准的皮下维持剂量。通常1mg提取物包含在100,000和1,000,000之间的SQ-单位，取决于它们起源的变应原根源和使用的制备方法。精确的变应原量可以借助免疫测定来测定，例如总主要变应原含量和总变应原活性。

术语“治疗”表示部分治愈或完全治愈、缓解症状或抑制症状的起因。

术语“预防”表示任何类型的预防性治疗。

术语“变态反应”表示对由免疫机制介导的环境变应原任何类型的超敏反应，包括I-IV型超敏反应，包括过敏性鼻炎、哮喘和特应性皮炎。

术语“变应原”表示能够诱发变态反应的任何化合物。

在变态反应的提取物领域，不存在国际上接受的标准化方法。存在很多不同的提取物浓度即生物效能单位。所使用的方法和所使用的单位通常测量变应原的含量和生物活性。在此的实例为SQ-单位(标准化质量单位)，BAU(生物学的变应原单位)，BU(生物学的单位)，UM(质量单位)，IU(国际单位)和IR(反应性指数)。因此，如果使用除了本文所揭示的起源物的提取物，那么需要将它们针对本文中所揭示的提取物进行标准化以便确定它们以SQ单位或任何以上提及的单位计的效能。该主题在下文中涉及″Allergenic extracts″，H.lpsen等人，chapter 20 in Allergy，principle and practise(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis和Lφwenstein H.(1980)ArbPaul Ehrlich Inst 75：122。

给定的提取物的生物效能，即体内变应原活性，取决于很多因素，最重要的是在提取物中主要变应原的含量，其随着生物原料的组成而变化。

用以获得所需的生物效能、以克计的变应原提取物的量随着提及的提取物的类型而变化，并且对于给定的提取物类型，变应原提取物的量各个批次互不相同，提取物的实际生物效能也不同。

对于给定批次的提取物，用于获得需要的生物效能的以克计的变应原提取物的量可以使用以下步骤测定：

a)使用一种或多种免疫学体内检验测定不同量的参考提取物的生物效能以建立生物效能和参考提取物的量之间的关系。所述免疫学体内检测的实例为用变应原的皮肤单刺试验(SPT)，眼结膜激发试验(CPT)，支气管激发试验(BCA)和多种临床试验，其中监测一种或多种变态反应症状，参见例如Haugaard等人，J Allergy Clin Immunol，第91卷，第3期，第709-722页，March 1993。

b)基于在生物效能和参考提取物之间建立的关系，在本发明的剂型中使用的一种或多种相关剂量的生物效能优先考虑与以下因素平衡来选择：i)治疗或缓解变态反应症状的效果ii)免疫学体内检验中记录的副作用和iii)i)和ii)在个体之间的差异性。建立该平衡是为了在不经历不可接受程度的副作用的情况下，获得最大的适当的治疗效果。使所述因素平衡的方法是本领域技术人员所熟知的。

所找到的一种或多种相关剂量的生物效能可以任何可利用的生物效能单位表达，诸如上述的SQ单位，BAU，IR单位，IU。

c)从参考提取物制备一种或多种生物效能参考标准提取物并且，如果使用的话，参考标准提取物的生物效能单位的值基于分配为一个或多个相关剂量的生物效能单位来计算，例如对于BAU这类标准可以如下所述获自FDA。

d)对于各提取物类型的参考标准提取物，选择很多评估提取物的生物效能的参数。这种评估参数的实例为总变应原活性、确定的主要变应原的量和提取物的总分子组成。总变应原活性可以使用体外竞争免疫测定如ELISA和MagicLite

荧光免疫测定(LIA)，使用产生的对抗提取物、使用标准方法获得的标准化抗体混合物来测量，例如在小鼠或家兔中或变态反应患者血清池中产生的抗体。主要的变应原含量可以例如通过火箭免疫电泳(RIE)量化并与参考标准比较。总分子组成可以使用例如交叉免疫电泳(CIE)和十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测量。

e)对于给定批次的生物效能未知的提取物(检测提取物)，用于获得需要的生物效能水平的的提取物的量(根据本发明，用在固体剂型中的有效剂量)可以如下测定：对于各个所选的评估参数，使用上述相关测量方法将检测提取物与参考标准比较，并基于测量结果计算具有需要的生物效能的提取物的量。

SQ-单位：SQ-单位根据ALK-AbellóA/S′s“SQ生物效能”一标准化法测定，其中100,000SQ单位等于标准皮下维持剂量。通常1mg提取物包含100,000和1,000,000之间的SQ-单位，取决于它们起源的变应原根源和使用的制备方法。精确的变应原量可以借助免疫测定来测定，例如总主要变应原含量和总变应原活性。

BAU(生物学的变应原单位)是根据FDA在”Quantitativedetermination of relative potency of allergenic extracts”(″Methods of the allergen products testing Laboratory″″ELISAcompetition assay”.Page 15，#49N-0012，FDA，October 1993)中描述的对变应原产品的要求所确定的生物效能单位。根据上述方法，含牧草提取物100,000 SQ-单位的剂量等于2600-4700 BAU的含量。同样，其它提取物也可以根据上述方法评估。

实施例

实施例1：在季节内剂量递增，用皮下变态反应疫苗

引言

通常，在季节性变应原，例如花粉方面，推荐季节来临前的免疫疗法，其意味着免疫疗法不得不在变应原季节来临前例如11-16周启动。这导致以下事实，患者不得不在他(她)完全无症状并没有感觉必需治疗的情况下开始治疗。因此，很多患者不启动免疫治疗，因为他们通常不会去看医生，除非他们已经有症状。相比用症状缓解性药物治疗变态反应，治疗的季节内启动将允许更多的患者步入变态反应疾病的对因治疗，即免疫治疗。

在该实施例中研究了对于皮下变态反应疫苗季节内启动免疫治疗的安全性。

研究设计

该研究基于关于花粉变态反应的患者在树木变应原季节2005/06和牧草变应原季节2006的季节内剂量递增的数据。所述数据包括患者数据，患者的变态反应史，使用用于治疗花粉变态反应的疫苗的剂量递增、注射方案的临床结果和注射后记录的变态反应。使用了两类变态反应疫苗，1)氢氧化铝佐剂的储库式疫苗用于长期治疗(ALK-depot_SQ)和2)氢氧化铝佐剂的储库式(depot)疫苗用于短期治疗(ALK7)。

变应原季节的到来根据来自27个德国脱粉器(StiftungDeutscher Polleninformationsdienst)的花粉数据测定，第一次连续三天花粉数≥10/m³确定季节来临。通过描述性统计法分析大局部反应(LLR)和全身反应(SR)。此外将LLR和SR的数据与另一项用ALK-depot_SQ治疗针对不同牧草和裸麦起变态反应的患者小组的配对分析研究中的季节前治疗的患者比较。年龄组≤15，16-50，＞50岁，有鼻炎或鼻炎结膜炎无哮喘的患者以及有哮喘有或无鼻炎或鼻炎结膜炎的患者用于比较。将患者根据年龄和疾病性质进行配对。通过Wilcoxon-检验和X²-检验对数据进行统计分析。

获得并评估了用ALK-depot_SQ变应原产品季节内治疗的134位患者与12位用ALK7季节内治疗的患者(总共146位)的数据。有些患者用两种不同的变应原治疗使得治疗者总数为152。23位患者(17.2％)15岁或更小。患者平均年龄为32.1±16.0(范围为6-76)岁，55.4％为女性；在患者中99.3％诊断出鼻炎，87.7％的结膜炎，10.3％哮喘和6.8％特应性皮炎；58.2％用牧草和裸麦变应原治疗，42.5％用树木变应原治疗和3.4％用艾蒿变应原治疗；90.3％在先未接受特异性免疫治疗。患者中大多数不是严重的过敏。

93位治疗者(61.2％)在临近季节前启动治疗且在季节期间持续治疗(以下称为季节前启动)，对59位治疗者(38.8％；以下称为剂量递增)季节内给予第一次注射。季节内注射的次数在1和18次之间(中位数9)，中位数最大剂量对于ALK-depot SQ变应原疫苗为100000SQ-U和对于ALK7变应原疫苗为1000SE。在该实施例中，术语“季节前”和“季节内”分别表示在患者对其过敏和患者用其进行治疗的特异性变应原的季节之前和在季节之内。

对于季节前启动的治疗，季节前和季节内都是每周给予注射。季节前注射的次数在1和14次之间(中位数5)和季节内注射的次数在1和17次之间(中位数7)。

结果

大局部反应(LLR)

仅在用ALK-depot SQ变应原疫苗治疗的患者组中记录到LLR(在季节前注射中，89位治疗者中8例(9.0％)；和在季节内剂量递增期间，140位治疗者中17例(12.1％))。

表1：大局部反应的发生率

注射周期	LLR数/注射次数	％注射次数
			季节前启动	14/521	2.7
季节内(剂量递增)	39/1248	3.1
			季节内(维持)	-/316	0.0
总计	53/2085	2.5

全身反应(SR)

总计在两例患者中记录到SR，在季节内剂量递增中仅1例患者有全身反应(在季节内剂量递增期间6次恶心)。

表2：全身反应的发生率

注射周期	SR数/注射次数	％注射次数
			季节前启动	3/521	0.6
季节内(剂量递增)	6/1248	0.5
			季节内(维持)	-/316	0.0
总计	9/2085	0.4

在季节内剂量递增中，记录了1例患者6次SR(6次恶心)。

需要治疗的过敏反应

仅在用ALK-depot SQ变应原产品治疗的患者组中观察到需要治疗的过敏反应(局部和全身反应)(在季节前注射期间，89位患者中6例(6.7％)和在季节内剂量递增期间，140位患者中6例(4.3％))。

表3：需要治疗的过敏(局部和全身)反应的发生率

注射周期	SR数/注射次数	％注射次数
			季节前启动	12/521	2.3
季节内(剂量递增)	16/1248	1.3
			季节内(维持)	-/316	0.0
总计	28/2085	1.3

用来治疗LLR和SR的药物为抗组胺药和一种情况为软膏形式的局部皮质类固醇。无需全身性皮质类固醇或肾上腺素。

用ALK-depot SQ牧草和裸麦疫苗的季节内剂量递增的配对比较

用ALK-depot SQ牧草和裸麦疫苗的季节内剂量递增与季节前剂量递增的配对患者80例进行比较。在配对内的比较结果为，关于SR(p＝0.0313)，但不是关于局部反应(p＝0.0219)，优选季节内剂量递增。基于多次注射的综合比较证实了该倾向。

过敏反应的发生率为：

表4：季节前与季节内剂量递增中LLR发生率的比较。LLR在季节内剂量递增中更频繁(p＝0.0015)。

注射周期	LLR数/注射次数	％注射次数
			季节前剂量递增	10/641	1.6
季节内剂量递增	30/647	4.6

SR的发生率(p＝0.0025)

表5：在季节前与季节内剂量递增的SR发生率的比较。在季节前剂量递增中SR较频繁(p＝0.0025)。

注射周期	SR数/注射次数	％注射次数
			季节前剂量递增	9/641	1.4
季节内剂量递增	-/647	0.0

结论

该研究的数据显示在季节内剂量递增中146位患者中仅1例记录了弱全身反应(1例患者中6次注射恶心)。在0.5％的注射次数中观察到全身反应。如果需要治疗，所有在季节内剂量递增中的反应(局部或全身)可以用局部皮质类固醇或局部/全身抗组胺药。绝不需要全身性皮质类固醇或肾上腺素。在注射后没有观察到哮喘，尽管在所述研究中10％的患者是哮喘症。

用ALK-depot SQ牧草和裸麦疫苗季节内剂量递增的患者与季节前剂量递增的患者的比较，通过配对分析80位患者，显示用季节内剂量递增局部反应发生率较高(4.6％比1.6％)，但是用季节内剂量递增无全身反应，相比之下，在季节前剂量递增组中有9例全身反应(0.0％比1.4％)。

关于皮下免疫治疗的季节内启动的安全性的在先研究尚未知晓。本研究表明了，对于基于氢氧化铝的皮下变态反应疫苗，免疫治疗的季节内启动是安全的。

Claims (23)

1.季节性变应原组合物用于制备通过胃肠外给药用于在受试者中预防或治疗对变应原组合物的变态反应的疫苗制剂的用途，其中所述疫苗制剂以包含剂量递增阶段的给药方案给药，其中剂量递增阶段部分或完全覆盖变应原组合物的变应原季节。

2.根据权利要求1的用途，其中所述给药方案包括继剂量递增阶段后的维持阶段。

3.根据权利要求2的用途，其中剂量递增阶段持续时间为1周至30周，优选6周至25周，更优选10周至20周，和最优选13周至17周。

4.根据权利要求2-3任一项的用途，其中在剂量递增阶段的给药次数为2至30次，优选5至25次，更优选10至20次，和最优选13至18次。

5.根据权利要求2-4任一项的用途，其中在剂量递增阶段的给药间隔为1至14天，优选3至11天，更优选5至9天，最优选6至8天。

6.根据权利要求2-5任一项的用途，其中维持阶段的持续时间为12个月至48个月，优选24个月至42个月，更优选30个月至40个月，并最优选34个月至38个月。

7.根据权利要求2-6任一项的用途，其中在维持阶段的给药次数为9至34次，优选18至32次，更优选22至30次，最优选24至28次。

8.根据权利要求2-7任一项的用途，其中在维持阶段给药间隔为1至14周，优选3至10周，更优选4至8周，最优选5至7周。

9.根据前述权利要求任一项的用途，其中剂量递增阶段在变应原季节启动。

10.根据权利要求1-8任一项的用途，其中剂量递增阶段在变应原季节之前启动，并延续到变应原季节。

11.根据前述权利要求任一项的用途，其中季节性变应原组合物的变应原选自树木花粉变应原、牧草花粉变应原、杂草变应原、草药变应原、霉菌变应原和真菌变应原。

12.根据前述权利要求任一项的用途，其中胃肠外给药选自静脉内、肌内、关节内、皮下、真皮内、上皮/透皮、腹膜内和淋巴管内给药。

13.根据权利要求12的用途，其中胃肠外给药为皮下给药。

14.根据前述权利要求任一项的用途，其中疫苗制剂通过冻干变应原组合物的溶液来制备，其中疫苗制剂适于在给药前重新溶解。

15.根据前述权利要求任一项的用途，其中所述疫苗制剂进一步包含选自含氧金属盐的佐剂。

16.根据权利要求15的用途，其中含氧金属盐为氢氧化铝、磷酸铝和磷酸钙。

17.根据权利要求16的用途，其中含氧金属盐为氢氧化铝。

18.根据权利要求17的用途，其中含氧金属盐的浓度为0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml，和最优选0.5-5mg/ml。

19.根据前述权利要求任一项的用途，其中旨在每日给药的单剂量中主要变应原的浓度为0.05至50μg，更优选0.05μg至30μg，更优选0.06μg至25μg，更优选0.07μg至20μg，更优选0.08μg至15μg，更优选0.09μg至10μg和最优选0.1μg至7μg。

20.根据前述权利要求任一项的用途，其中变应原组合物选自变应原提取物、变应原提取物的纯化级分、经修饰的变应原、重组变应原和重组变应原的突变体。

21.根据权利要求20的用途，其中经修饰的变应原为类变应原。

22.包含季节性变应原组合物的疫苗制剂，其通过胃肠外给药用于在受试者中预防或治疗对变应原组合物的变态反应，其中所述疫苗制剂以包含剂量递增阶段的给药方案给药，其中剂量递增阶段部分或完全覆盖变应原组合物的变应原季节。

23.在受试者中预防或治疗对季节性变应原组合物的变态反应的方法，其包括胃肠外给予受试者包含所述变应原组合物的疫苗制剂，其中该疫苗制剂以包含剂量递增阶段的给药方案给药，其中剂量递增阶段部分或完全覆盖变应原组合物的变应原季节。