CN101340892A - 用于口腔粘膜给药的液体变态反应性疫苗制剂的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及变应原用于制备液体疫苗制剂的作用，所述疫苗制剂用于在不包括增加剂量的给药方案中通过口腔粘膜给药来预防或治疗受试者的变态反应症。

Description

用于口腔粘膜给药的液体变态反应性疫苗制剂的用途

技术领域

本发明涉及用于口腔粘膜给药的变态反应性疫苗制剂。

发明背景

变态反应症在是适应西方生活方式的国家中的严重健康问题。此外，变应性疾病的流行率在这些国家中日益增加。尽管通常不认为变态反应症是威胁生命的疾病，但哮喘每年引起大量的死亡。青少年中大约30％的异常流行率引起了生活质量、工作日和金钱的重大损失，从而成为西方国家中的严重健康问题中的一类。

变态反应症是复杂的疾病。许多因素促成致敏事件。其中一个因素是由至今仍未充分理解的几个基因之间的相互作用确定的个体的易感性。另一个重要因素是高于某些阈值的变应原的暴露。几个环境因子在致敏过程中可以是重要的，包括污染、儿童期感染、寄生虫感染、肠内微生物等。一旦个体被致敏和变应性免疫反应建立后，仅仅少量变应原的存在就可有效地转化成症状。

变应性疾病的自然病程通常伴随着两个水平上的加重。首先，症状和疾病严重度的进展，以及疾病的进展，例如从花粉症至哮喘。第二，攻击性变应原(offending allergen)的传播最频繁发生，从而导致变应性多反应性。慢性炎症导致粘膜防御机制的普遍衰弱，从而导致非特异性刺激和最终破坏粘膜组织。婴儿可能主要对食物即奶过敏，从而导致湿疹或胃肠道病症；然而，最常见地他们自发地过度生长这些症状。这些婴儿在他们后来的生活中处于发生吸入性变态反应症的危险中。

在我们呼吸的空气中的某些最普遍大小的颗粒中发现了最重要的变应原来源。这些来源非常普遍，包括草的花粉和房尘螨的粪便颗粒，所述物质一起负责形成所有变应原的大约50％。动物毛发皮屑即猫和狗的毛发皮屑、其他花粉例如艾属植物的花粉和小型真菌例如支链孢属(Alternaria)也具有全球重要性。然而以地区为基础，其他花粉可占优势，例如在北欧和中欧桦树花粉，在美国东部和中部豕草，在日本的日本柳杉花粉占优势。昆虫，即蜜蜂和黄蜂毒液，和食物各自占所有变应原的大约2％。

变态反应症，即I型超敏反应，由对外来非病原物质的不恰当免疫反应引起。变态反应症的重要临床表现包括哮喘、花粉症、湿疹和胃肠病症。变应性反应是瞬间暴发的且在接触攻击性变应原后20分钟内达到高峰。此外，变应性反应在特定的个体对特定的变性原过敏这个意义上是特异性的，然而个体不一定对已知引起变应性疾病的其他物质显示变应性反应。变应性表型的特征在于靶器官的粘膜的显著炎症和在于循环中和肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面上存在IgE类型的变应原特异性抗体。

当抗体结合肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面上的高亲和力IgE特异性受体时，外来变应原与变应原特异性IgE抗体的反应引发变应性攻击。肥大细胞和嗜碱性粒细胞包含现成的介质，即组胺、类胰蛋白酶和其他物质，所述介质在两种或更多种受体结合的IgE抗体交联后立即被释放。IgE抗体通过同时结合一个变应原分子而被交联。因此推断只具有一个抗体结合表位的外来变应原不引发变应性反应。肥大细胞表面上的受体结合的IgE的交联还导致负责将嗜酸粒细胞、变应原特异性T细胞和其他类型细胞吸引至变应性反应的位置的信号转导分子的释放。与变应原、IgE和效应细胞相互作用的此类细胞在遭遇变应原后12至24小时导致症状的重新闪现发生(迟发性反应)。

变态反应疾病的治疗方案包括诊断和治疗(包括预防疗法)。变态反应症的诊断涉及变应原特异性IgE的证实和变应源来源的鉴定。在许多情况下既往病历对于变态反应症的诊断和攻击性变应原的来源材料的鉴定可以是足够的。然而，最常见地，诊断由客观测量例如皮肤单刺试验、血液测试或激发试验支持。

治疗选项落在3个主要范畴内。第一可能性是躲避变应原或减少暴露。虽然在例如食物变应原的情况下，躲避变应原是很显然的，但对于房尘螨变应原，其可以是非常困难的或昂贵的，对于花粉变应原，则是不可能的。第二和最广泛使用的治疗选项是开具经典的针对症状的药物如抗组胺类和类固醇的处方。针对症状的药物是安全的和有效的；然而，它们不能改变疾病的自然原因，它们也不能控制疾病的传播。第三治疗选项是在大多数情况下减少或减轻由所述变应原引起的变应性症状的特异性变态反应性接种。

常规的特异性变态反应性接种是对变应性疾病的病因疗法。其干扰基础免疫机制，从而导致患者的免疫状态的持续改善。因此，特异性变态反应性接种的保护效应，与对症治疗药物疗法相反，延长超过治疗期。一些接受治疗的患者被治愈，此外，大多数患者经历体验到的疾病严重度和症状的减轻，或至少疾病发展的停止。因此，特异性变态反应性接种具有减少花粉症发展成哮喘的危险和减少发生新的敏感性的风险的预防性效果。

成功的变态反应性接种背后的免疫学机制的细节不清楚。特异性免疫反应，例如抗特定病原体的抗体的产生，已知为适应性免疫反应。该反应可与先天性免疫反应区别开，先天性免疫反应是针对病原体的非特异性反应。变态反应性疫苗针对适应性免疫反应，其包括具有抗原特异性的细胞和分子例如T细胞和抗体产生性的B细胞。B细胞在没有相应特异性的T细胞的帮助下不能成熟为抗体产生性细胞。参与变应原免疫反应的刺激的T细胞主要是Th2类型。已提出Th1和Th2细胞之间的新平衡的建立对于特异性变态反应性接种的免疫机制是有益的和至关重要的。这是由于Th2细胞的减少、从Th2至Th1细胞的转变产生的还是由于Th1细胞的上调产生的仍有争论。最近，已提出调节性T细胞对于变态反应性接种的机制是非常重要的。根据该模型，调节性T细胞即Th3或Tr1细胞，都下调相应于抗原特异性的Th1和Th2细胞。尽管存在这些不明确性，但通常认为活性疫苗必须具有刺激变应原特异性T细胞优选TH1细胞的能力。

尽管存在其价值，但主要因为两个原因，特异性变态反应性接种未得到广泛使用。一个原因是与包括在数个月内反复接种例如(i.a.)注射的常规接种程序相关的不方便性。另一个原因(更重要的)是变应性副反应的风险。使用单次或少数几次高剂量的免疫接种可有效地进行抗传染剂的普通接种。然而，该策略不能用于变态反应性接种，因为病理免疫反应已在进行中。

因而使用在长时间期限内使用的多次皮下免疫接种进行常规的特异性变态反应性接种。该过程分成两个时期，增加剂量期和维持期。在增加剂量期中，通常在16周的时期内从小剂量开始使用不断增加的剂量。当达到推荐的维持剂量时，将该剂量用于维持期，通常每6周注射1次。在各次注射后，由于过敏性副反应的风险，患者必须在医疗护理下保持30分钟，所述过敏性副反应原则上尽管相当罕见，但可威胁生命。此外，应当配备好临床以支持急救处理。毫无疑问，基于不同给药途径的疫苗可清除或减少目前基于皮下的疫苗所固有的变应性副反应的风险和有助于其更广泛的使用，甚至可能使得能够在家中自我接种。

30多年来一直进行着改善用于特异性变态反应性接种的疫苗的努力，且包括多种方法。几个方法已通过改变IgE的反应性而针对变应原本身。其他方法针对给药途径。

通过变应原的口腔和舌下给药可到达免疫系统是已知的给药途径。可通过将疫苗制剂置于舌下，然后使其保持在该处短暂时间例如大约2分钟来进行给药。

使用口腔粘膜途径的常规变态反应性疫苗由达到日剂量的变应原溶液组成。通过比较，给定的治疗性(累积的)维持剂量比皮下治疗的维持剂量高出许多倍。已知口腔粘膜给药不引起或只引起小的副作用，主要以口中搔痒和有时眼和耳中搔痒的形式存在的副作用。

WO 04/047794公开了用于变态反应性疫苗的舌下给药的快速分散剂型。

用于以液滴形式舌下给药的一种商购可获得的变态反应性疫苗包含溶解在50％甘油和50％水的液体混合物中的变应原。

使用给药方案常规施用商购可获得的用于舌下给药的液体变态反应性疫苗，所述给药方案包括增加剂量期，通常为10至20天的每日给药，其中剂量逐渐提高至维持剂量水平，然后是维持期，其中患者接受维持剂量。最近，许多研究已研究了通过在数天内、一天内或甚至数小时内实现的所谓的冲击增加剂量疗法进行增加剂量的可能性，其中施用不断增加的剂量，每一次给药之间只通过很短的时间例如1小时或2小时。然而，这样的冲击增加剂量疗法具有不利方面：不能排除严重的副作用的发生，从而与皮下给药一样，其需要变态反应症专家的监护。

本发明的目的是通过口腔粘膜给药提供预防或治疗受试者的变态反应症的改良方法。

发明概述

通常本发明获得该目的，该目的涉及变应原用于制备液体疫苗制剂的用途，所述疫苗制剂用于通过给药方案中的口腔粘膜给药来预防或治疗受试者的变态反应症，所述给药方案不包括增加剂量，即可通过例如使用维持期的标准给药方案施用维持剂量来起始治疗。

本发明基于临床试验，所述临床试验已令人吃惊地显示可在不使用增加剂量的情况下进行使用液体制剂的口腔粘膜给药的变态反应性接种，同时保持可接受水平的副反应。该发现在至今一直认为一些类型的增加剂量期间是避免严重的副作用所必需的意义上是令人吃惊的。

避免增加剂量期的可能性在使用液体疫苗制剂的口腔粘膜疗法的同时还一起提供了具有使得给药方案简单得多的有利方面。此外，简单的给药方案增加了患者的治疗顺从性。

发明详述

变应原

本发明的制剂的变应原可以是已报导在其反复对个体暴露后诱导变应性反应即IgE介导的反应的任何天然存在的蛋白质。天然存在的变应原的实例包括花粉变应原(树、草药、杂草和草的花粉变应原)、昆虫变应原(吸入剂、唾液和毒液变应原，例如螨变应原、蟑螂和蠓变应原、膜翅目昆虫(hymenopthera)毒液变应原)、动物毛发和皮屑变应原(来处例如狗、猫、马、大鼠、小鼠等)和食物变应原。来自树、草和草药的花粉的重要变应原是来源于壳斗目、木犀目、松杉目和悬铃木科(包括例如桦树(桦属)，桤木(桤木属)、榛树(榛属)、角树(鹅耳枥属)和橄榄(木犀榄属)、柳杉(柳杉属和刺柏属)、悬铃(悬铃木属))、禾本目(包括例如黑麦草属、梯牧草属、早熟禾(Poa)、狗牙根属、鸭茅属、绒毛草属、虉草属、黑麦和高粱属的草)、菊目和荨麻目(包括例如Ambrosia、黄花蒿和墙草属的草药)的分类学目的花粉。其他重要的吸入性变应原是来自表皮螨属和嗜霉螨属、储藏室尘螨例如嗜渣螨属(Lepidoglyphys)、甜食螨属和食酪螨属的房尘螨的变应原、来自蟑螂、蠓和蚤例如小蠊属、大蠊属、摇蚊属和栉头蚤属的变应原和来自哺乳动物例如猫、狗和马的变应原、毒液变应原(包括来源于针刺或叮咬昆虫的毒液例如来自膜翅目分类包括蜜蜂(蜜蜂总科)、黄蜂(胡蜂总科)，和蚂蚁(蚁总科)的毒液)。重要的来自真菌和霉菌的吸入性变应原是例如来源于支链孢属和分支孢子菌属的吸入性变应原。

在本发明的特定实施方案中，变应原是Bet v 1、Aln g 1、Cor a1和Car b 1、Que a 1、Cry j 1、Cry j 2、Cup a 1、Cup s 1、Juna 1、Jun a 2、jun a 3、Ole e 1、Lig v 1、Pla l 1、Pla a 2、Amb a 1、Amb a 2、Amb t 5、Art v 1、Art v 2 Par j 1、Par j2、Par j 3、Sal k 1、Ave e 1、Cyn d 1、Cyn d 7、Dac g 1、Fesp 1、Hol l 1、Lol p 1和5、Pha a 1、Pas n 1、Phl p 1、Phl p 5、Phl p 6、Poa p 1、Poa p 5、Sec c 1、Sec c 5、Sor h 1、Der f1、Der f 2、Der p 1、Der p 2、、Der p 7、Der m 1、Eur m 2、Gly d 1、Lep d 2、Blo t 1、Tyr p 2、Bla g 1、Bla g 2、Per a1、Fel d 1、Can f 1、Can f 2、Bos d 2、Equ c 1、Equ c 2、Equc 3、Mus m 1、Rat n 1、Apis m 1、Api m  2、Ves v 1、Ves v 2、Ves v 5、Dol m 1、Dil m 2、Dol m 5、Pol a 1、Pol a 2、Pol a 5、Sol i 1、Sol i  2、Sol i 3 and Sol i 4、Alt a 1、Cla h 1、Asp f 1、Bos d 4、Mal d 1、Gly m 1、Gly m 2、Gly m 3、Ara h 1、Ara h 2、Ara h 3、Ara h 4、Ara h 5或来自任何这些变应原的分子育种的改组(shufflant)杂种。

在本发明的优选实施方案中，变应原选自树的花粉变应原、草的花粉变应原、房尘螨变应原、储藏室尘螨变应原、杂草变应原、霉菌变应原、猫变应原和狗变应原。

在本发明的另一个实施方案中，制剂包含至少两种不同种类的来源于相同的变应原来源或来源于不同的变应原来源的变应原，例如分别来自不同的螨和草品种的第1组草变应原和第5组草变应原或第1组螨变应原和第2组螨变应原、杂草抗原如短的和巨大的豕草变应原、不同真菌变应原如支链孢属和分支孢子菌属变应原、树变应原如桦树、榛子、角树、橡树和桤木变应原、食物变应原如花生、大豆和奶变应原。

整合入制剂中的变应原可以以提取物、纯化的变应原、改良的变应原、重组变应原或重组变应原的突变体的形式存在。变应原提取物可天然包含相同变应原的一种或更多种同种型，然而重组变应原通常只代表变异原的一种同种型。在优选实施方案中变应原以提取物的形式存在。在另一个优选实施方案中，变应原是重组变应原。在本发明的进一步优选实施方案中，变应原是天然存在的低IgE结合突变体或重组低IgE结合突变体。此外，变应原可以是许多变应原例如2至10种变应原，特别地3至9种变应原，更特别地4至8种和最特别地5至7种变应原的混合物。

变应原可以以等摩尔量存在或存在的变应原的比例可变化，优选等于1∶20。

在本发明的进一步实施方案中，低IgE结合变应原是WO 99/47680、WO 02/40676或WO 03/096869 A2的变应原。

希望用于每日给药的单一剂量制剂的优选效能是1至2000 STU，更优选50至1000 STU，更优选100至500 STU，更优选130至350 STU和最优选150至250 STU。

希望用于每日给药的单一剂量制剂的优选效能是100至500000SQ-u，更优选200至300000 SQ-u，更优选500至200000 SQ-u，更优选1000至100000 SQ-u，更优选1500至80000 SQ-u和最优选2000至50000SQ-u。

相应于给定的有效水平的变应原的量强烈地依赖于变应原的种类的变化而变化。在本发明的进一步实施方案中，希望用于每日给药的单一剂量中的主要变应原的浓度是0.05至50μg，更优选0.05μg至30μg，更优选0.06μg至25μg，更优选0.07μg至20μg，更优选0.08μg至15μg，更优选0.09μg至10μg和更优选0.1μg至7μg。

口腔粘膜给药法

通过口腔和舌下进行变应原给药可到达免疫系统是已知的给药途径。可通过将疫苗制剂置于舌下并让其保留在该处进行短暂时间例如30至300秒，优选45至240秒，更优选60至180秒，更优选90至150秒和最优选90至120秒来进行给药。

口腔粘膜给药法包括任何给药方法，其中制剂部分或完全与患者的口腔和/或喉咽部的粘膜接触。口腔粘膜给药方法包括舌下给药法和口腔含化给药法。

在本发明的一个实施方案中，将受试者经历包括每天一次疫苗给药的接种方案。在本发明的另一个实施方案中，接种方案包括每2天一次、每3天一次或每4天一次疫苗给药。例如，接种方案包括超过4周时间，优选超过8周，更优选超过12周，更优选超过16周，更优选超过20周，更优选超过24周，更优选超过30周和最优选超过36周的疫苗给药。

给药期可以是连续的时期。可选择地，给药期是由一个或更多个非给药期间断的不连续时期。优选，(总的)非给短于(总的)给药期。

在本发明的进一步实施方案中，每天一次对患者施用疫苗。可选择地，每天两次对患者施用疫苗。疫苗可以是单剂疫苗。

液体疫苗制剂

本发明的液体疫苗制剂可进一步包含适合于此类制剂的任何佐剂和其他赋形剂。此类赋形剂对于本领域技术人员来说是熟知的，其包括例如溶剂、乳化剂、湿润剂、增塑剂、着色物质、充填剂、防腐剂、粘性调节剂、缓冲剂、pH调节剂、等渗调节剂、粘膜粘着物质等。配制策略的实例对于本领域技术人员来说是熟知的。

佐剂可以是任何常规佐剂，包括含氧金属盐，例如氢氧化铝、不耐热肠毒素(LT)、霍乱毒素(CT)、霍乱毒素B亚单位(CTB)、聚合的脂质体、突变体毒素例如LTK63和LTR72、微囊、白细胞介素(例如IL-1β、IL-2、IL-7、IL-12、INFγ)、GM-CSF、MDF衍生物、CpG寡核苷酸、LPS、MPL、偶磷氮(phosphophazene)、Adju-Phos

葡聚糖、抗原制剂、脂质体、DDE、DHEA、DMPC、DMPG、DOC/明矾复合物、氟氏不完全佐剂、ISCOMs

LT Oral佐剂、胞壁酰二肽、单磷酰脂质A、胞壁酰三肽和磷脂酰乙醇胺。

含氧金属盐的水溶液通常具有凝胶形式。制剂中氢氧化铝的浓度优选是0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml和最优选0.5-5mg/ml。然而，本发明的制剂还可具有高度浓缩的凝胶形式或凝胶样制剂。

在本发明的特定实施方案中，本发明的制剂还包含增强剂。增强剂是增加药物活性物质的生物利用度的物质，其通过i)通过打开旁细胞途径(紧密连接)增加活性物质穿过生物膜，即增加活生物质的吸收和/或ii)通过增加吸收时间的增强剂的生物粘附效应来增加生物利用度。

增强剂的实例是醇类例如乙醇、壳聚糖、壳多糖、丙二醇、甘油、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、二甲乙酰胺优选甘油。增强剂优选以20％至80％(v/v)，更优选30％(v/v)至70％(v/v)，和最优选40％(v/v)至60％(v/v)的量存在。

可通过将佐剂和其他赋形剂(如果需要的话)溶解在溶剂优选水中，加入变应原，然后让变应原和佐剂以及其他赋形剂反应一段时间来制备本发明的制剂。反应时间可以是0.1至48小时，优选12至24小时。优选在4至45℃，更优选4至20℃的温度下进行反应。

含氧金属盐

在本发明的优选实施方案中，本发明的液体疫苗制剂包含含氧金属盐佐剂。优选，含氧金属盐的金属阳离子选自Al、K、Ca、Mg、Zn、Ba、Na、Li、B、Be、Fe、Si、Co、Cu、Ni、Ag、Au和Cr。

含氧化合物的阴离子可以是任何含氧阴离子，包括有机或无机阴离子或有机或无机阴离子的混合物。合适的含氧金属盐的实例是例如其中阴离子选自硫酸根、氢氧根、磷酸根、硝酸根、碘酸根、溴酸根、碳酸根、水合物(hydrate)、醋酸根、柠檬酸根、草酸根和酒石酸根以及其混合形式的含氧金属盐。含氧金属盐还包括配位络合物。在例如The Handbook of Chemistry and Physics第56版，Section B，Chapter 7(197576)中给出了配位络合物的定义。

在本说明书内，表达“混合形式”希望包括不同的阴离子的混合物以及与例如氯化物和硫化物的混合物。

本发明的含氧金属盐的实例是氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝、醋酸铝、硫酸铝钾、磷酸钙、酒石酸钙、Maalox(氢氧化铝和氢氧化镁的混合物)、氢氧化铍、氢氧化锌、碳酸锌、硫酸锌和硫酸钡。

最优选是氢氧化铝、磷酸铝、醋酸铝、磷酸钙、酒石酸钙和硫酸锌。

含氧金属盐的pI通常在2-11的范围内。变应原蛋白的pI通常在4-9的范围内。优选，这样选择变应原和含氧金属盐以使变应原的pI低于含氧金属盐的pI。

当使用例如氢氧化铝作为含氧金属盐时，制剂中氢氧化铝的浓度优选是0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml和最优选0.5-5mg/ml。对于其他含氧金属盐，金属盐的浓度优选是0.035-1000mg/ml，更优选0.35-100mg/ml，更优选0.7-50mg/ml和最优选1.0-20mg/ml。制剂中变应原的浓度优选是0.01-100mg/ml，更优选0.1-10mg/ml。含氧金属盐对变应原的比例优选是0.1至100，更优选1至20。变应原被吸附至含氧金属盐的程度通常为加入量的5至99％，更优选10至99％。变应原至含氧金属盐的吸附依赖于缓冲系统和吸附发生所处的反应条件，包括温度和反应时间。

可通过许多物理化学参数如吸附、可溶性和溶散性性质、以等电点pI(对于可离解化合物来说，物质的净电荷为0时的pH)的形式测量的离子电荷、解离常数、络合物的配位作用、电子构型、化合价、成键轨道和反键轨道、贮藏性质、粘着特性、表面特征、颗粒特征和佐剂性来表征含氧金属盐。

据认为生物学活性物质被吸附(或偶联)至含氧金属盐，该吸附促进疫苗的功效。几个因素对于活性物质和含氧金属盐之间的吸附是重要的或影响该吸附(参见例如P.M.Callahan等人，Pharmaceutical Research第8卷，No.7，851-858(1991)，和Vaccine Design.The Subunit and Adjuvant Approach)。此类因素包括pH、吸附反应进行的时间长度、混合条件、疫苗中不同组分的浓度、容器、温度、贮藏、缓冲剂和赋形剂。已进一步发现活性物质的吸附可受到金属盐的净电荷/总电荷以及活性物质的电荷(两者都是pH依赖性的)影响。据认为重要的进一步特征是含氧金属盐的可溶性。

含氧盐的另一个特征是通过为微环境中的活性物质保持理想的pH从而防止酸降解或通过保护活性物质抵抗酶降解从而使物质能够被递送而产生的对活性物质的保护作用。

此外，一些含氧金属盐具有缓冲容量。这可导致产生保护活性物质免受可降解环境降解的疫苗制剂内的体内微环境。

含氧金属盐的进一步特征是其附着至粘膜的能力。该能力据认为增加变应原通过粘膜的吸收。

对于几种含氧金属盐(例如Al(OH)₃、AlPO₄、Ca₃PO₄)，颗粒大小范围在0.5和15μm之间。

定义

术语“口腔粘膜给药”是指这样的给药途径，在该给药途径中，将剂型置于舌下或口腔中的任何其他地方以使活性成分与患者的口腔或喉咽部的粘膜接触，从而获得活性成分的局部或全身性效应。口腔粘膜给药途径的实例是舌下给药。

术语“舌下给药”是指其中为了获得活性成分的局部或全身性效应将剂型置于舌下的给药途径。

术语“非增加剂量”是指从一开始给药就使用全量并且以后继续使用全量，其中术语“全量”是指用于继续治疗的剂量。

术语“液体疫苗制剂”是指任何液体或流体制剂，包括溶液、悬浮液和具有低和高粘性的凝胶。

术语“SQ-u”是指标准化的质量单位(StandardisedQuality-Unit)：按照ALK-AbellóA/S s”SQ biopotency”-标准化方法定义SQ-u，其中100,000 SQ单位等于标准皮下维持剂量。通常1mg提取物包含100,000至1,000,000 SQ-单位，依赖于它们起源的变应原来源和使用的制备方法。可通过免疫测定法确定精确变应原含量即总的主要变应原和总的变应原活性。

术语“治疗”是指部分或完全治愈、减轻症状或抑制症状的病因。

术语“预防”是指任何的类型的预防疗法。

在变态反应性提取物的领域内，没有国际接受的标准化方法。存在许多不同的提取物强度单位即生物效能。使用的方法和使用的单位通常测量变应原含量和生物学活性。关于该一点的实例是SQ-单位(标准化质量单位)、BAU(生物学变应源单位)、BU(生物学单位)、UM(质量单位)、IU(国际单位)和IR(反应性指数)。因此，如果使用非此处公开的来源的提取物，那么需要将它们对此处公开的提取物标准化以确定其以SQ单位或上面提及的任一种单位表示的效能。本发明的主题是关于“变应原提取物”，H.Ipsen等人，chapter 20 in Allergy，principle and practise(Ed.S.Manning)1993，Mosby-Year Book，St.Louis和H.(1980)Arb Paul Ehrlich Inst 75：122。

给定的提取物的生物效能(即体内变应原活性)依赖于许多因素，最重要的是提取物中主要变应原的含量，所述含量随生物学来源材料的组成变化而变化。

以克表示的用于获得想要的生物效能的变应原提取物的量随所述提取物的类型变化而变化，且对于给定类型的提取物，变应原提取物的量在提取物的实际生物效能方面随批次的不同而变化。

对于给定的提取物批次，可使用下列方法确定用于获得想要的生物效能的以克表示的变应原提取物的量：

a)通过使用一种或更多种免疫学体内试验建立参照提取物的生物效能和量之间的关系来确定不同量的参照提取物的生物效能。所述免疫学体内试验的实例是皮肤单刺试验(SPT)、结膜激发试验(CPT)、使用变应原的支气管激发试验(Bronchial Challenge with Allergen)(BCA)和其中一种或更多种变态反应症状受到监控的各种临床试验，参见例如Haugaard等人，J Allergy Clin Immunol，第91卷，No.3，pp709-722，March 1993。

b)基于建立的生物效能和参照提取物之间的关系，兼顾i)治疗或减轻变态反应症的症状的作用、ii)免疫学体内试验中记录的副作用和iii)i)和ii)的个体之间的变异性的因素的平衡来选择用于本发明的剂型的一种或更多种相关剂量的生物效能。进行平衡以获得最大的足够的治疗效应而不经历不可接受的副作用水平。平衡所述因素的方法对于本领域技术人员来说是熟知的。

可以以任何可获得的生物效能单位(例如SQ单位、BAU、IR单位、IU，参照上面)来表示发现的一个或更多个相关剂量的生物效能。

c)从参照提取物制备一种或更多种生物效能参照标准提取物和，如果使用，基于分配至一个或更多个相关剂量的生物效能单位值计算参照标准提取物的生物效能单位值，例如，这样的BAU的标准可如下面举例说明的从FDA获得。

d)对于各提取物类型的参照标准提取物，选择许多用于评价提取物的生物效能的参数。此类评价参数的实例是总变态反应性活性、确定的主要变应原的量和提取物的总体分子组成。可使用体外竞争免疫测定法例如ELISA和MagicLite

发光免疫测定法(LIA)，使用用通过标准方法获得的提取物产生的标准化的抗体混合物(例如在小鼠或兔子中产生的抗体)或变应性患者血清的混合物来测量总变应原活性。可以例如通过火箭免疫电泳(RIE)定量主要变应原的含量，然后将该含量与参照标准比较。可使用例如交叉免疫电泳(CIE)和十二烷基硫酸钠：聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检查总的分子组成。

e)对于给定批次的生物效能未知的提取物(受试提取物)，可如下确定用于获得想要的生物效能水平的提取物的量(用于本发明的固体剂型的有效剂量)：对于选择的各评价参数，使用上述的相关测量方法将受试提取物与参照标准提取物比较，然后基于测量结果计算具有想要的生物效能的提取物的量。

SQ-单位：按照ALK-AbellóA/S s”SQ biopotency”-标准化方法确定SQ-单位，其中100,000个SQ单位等于标准皮下维持剂量。通常1mg的提取物包含100,000至1,000,000 SQ-单位，依赖于它们衍自的变应原来源和使用的制备方法，可通过免疫测法确定精确的变应原的量，即总的主要变应原含量和总变应原活性。

STU代表特异疗法单位，且STU是基于用于变应原特异性变态反应性接种的各自变应原提取物的生物学活性的经验单位。1000 STU相应于用于液体剂型(用于SLIT)的最高维持剂量的效能，其中维持剂量是特异性变态反应性接种中推荐的在变应性患者的平均群体中获得最佳安全性/功效比的剂量。

BAU(生物学变应原单位)是按照FDA对于“Quantitativedetermination of relative potency of allergenic extracts”(“Methods of the allergen products testing Laboratory”“ELISAcompetition assay”.Page 15，#49N-0012，FDA，October 1993)中描述的变应原产物的要求确定的生物学效能单位。包含100,000个SQ-单位的草提取物的剂量等于按照上述方法获得的2600-4700 BAU的含量。同样，可按照上述方法评估其他提取物。

具体实施方式

实施例1：无需增加剂量的舌下免疫疗法(SLIT)

-新的治疗方案

导论

在过去的数年中，已进行了几个研究，使用舌下免疫疗法(SLIT)产生了结合有利的安全特征的功效的证据(1)。

为了使患者获得高水平的自我给药疗法如

的效应，顺应性必须很高(2)。假定顺应性的基础是方便性的话，相关地要提高产品的该性质。SLIT的优良耐受性已导致考虑消除增加剂量期的可能性。这将提高患者的方便性，从而可增加顺应性和潜在地增加治疗效率。本研究设计用于评估在不进行增加剂量的情况下在具有对螨或草敏感的患者中的耐受性。

材料和方法

药剂

SLITone

(ALK-Abelló)是包含0.2ml含有200STU的变应原剂量的溶液的单剂液体制剂，其中溶液是50％(v/v)甘油和50％(v/v)水。

患者

总共包括135位患者(66草和69螨变应性患者)，年龄在7和55岁之间，由于对螨或草的敏感性，其全都被诊断患有具有/不具有哮喘症状的中等严重的鼻炎或鼻结合膜炎。通过阳性皮肤单刺试验(单刺试验，ALK-Abelló，S.A.，100BU/ml)和/或阳性IgE(CAP≥药学2级品(pharmacy class 2)进行诊断。根据WHO推荐(3)，试验不包括其中禁忌使用免疫疗法进行治疗的患者、对除了在本试验中评估的变应原外的变应原敏感的患者和之前已接受了免疫疗法的患者。

研究设计

研究是随机、多中心、双盲、安慰剂作对照的、平行组研究。总持续时间为80天。

将患者分成2组。组1(N＝69)在整个研究过程中接受活性治疗。该研究包括10天的增加剂量(T1)、20天的维持治疗(T2)和在维持治疗中的两个30天持续时间的连续阶段(T3和T4)。组2(N＝66)在T1期间接受安慰剂增加剂量，在T2的安慰剂维持，和在T3开始时开始进行活性治疗和继续进行活性治疗直至研究结束(T4)。在基线时和在T1至T4时收集数据。各患者收到其中记录了与各治疗剂量相关的任何临床事件的卡。研究者在病例报告表上指出了不利事件。

研究是双盲的，盲性在任何时候都不能被打断，直至研究完成后。所有患者在他们开始参与试验前签署了试服志愿书。研究获得了参与中心的伦理委员会以及卫生当局的批准。

治疗

将

(ALK-Abelló)进行舌下给药，其由螨提取物(屋尘螨或羽刺皮癣螨(Dermatophagoides pteronyssinus)+美洲尘螨)或草(鸭茅、草甸羊茅、黑麦草、梯牧草、草地早熟禾、黑麦)的混合物的提取物组成。治疗由使用多次剂量瓶的10天增加剂量(始于1滴，增加至10滴)和使用单剂量容器的维持期组成。每天进行一次给药。各单剂容器中施用的主要变应原的剂量是2μg的主要变应剂5(对于草)和0.8/0.4μg的Der 1/Der 2(对于螨)。

安慰治疗剂的外观、气味和味道与活性的治疗剂相似。

统计

使用描述统计学。描述包括报告不利事件(AE)的患者数目(N)，经历的AE的患者的百分数(％)和AE的人目(E)。

结果

加入的135位患者中，123位完成了研究。患者的特征显示于表1中。患者的年龄从7至55岁，两个治疗组的平均年龄为22岁。

与组2中33位接受草提取物和33位接受螨提取物相比，在组1中，36位患者接受草提取物，33位接受螨提取物。总共报告了229例AE；157例AE(组1和组2中分别有68位和89位)由研究者评估为与治疗相关，从而包括在分析中。最常报告的与治疗相关的AE(在任何组中＞5％的患者)是口痒、眼痒、鼻炎和舌下水肿(表2)；这些事件总共占据了所有相关AE的57.3％。口痒是最常报告的与治疗相关的AE；与组2中21位患者(31.8％)报告了39例口痒事件相比，组1中16位患者(23.2％)报告了28例口痒事件。口痒是任一组中超过10％的患者报告的唯一的AE，其总共占据所有事件的42.7％。

组1和组2中施用的SLIT剂量的总次数分别为6258和6081次。按时间(T1-T4)每施用剂量的的口痒比率显示于表3中。

关于≤14岁(儿童)的患者和＞14岁(青少年和成人)的患者的最常报告的与治疗相关的AE显示表4中。

总共5位患者由于不利事件退出。在组1中3位受试者分别由于在T1阶段头痛、在T1阶段哮喘、鼻炎和瘙痒和在T4阶段舌下水肿而退出。在组2中2位受试者分别由于在T2阶段中呼吸困难和咳嗽和在T4阶段舌和口水肿而退出。

讨论

该随机化的双盲安慰剂对照的平行组研究的目的是调查在无起始增加剂量期的情况下每日施用的SLIT的耐受性。此处提供的结果表明

(草和螨)被良好地耐受，且耐受性不受增加剂量期的省略的影响。与组1(接受活性增加剂量)相比，组2(接受安慰剂增加剂量)中报告AE的患者人数稍微多些，对事件的数目情况也是这样。然而应当指出，在组2中，在安慰剂治疗期间(T1和T2)，报告了大量事件。最常报告的AE是口痒。口痒是舌下免疫疗法的预期的和熟知的副作用，且报告的口痒程度与其他作者(4-7)报导的相同或口痒频率在其他作者报导的更高。

SLIT中增加剂量的使用是经验性的和基于惯例，且可能根据用于皮下免疫疗法所必需的逐步剂量增加改造而来。来自之前的临床试验(4；6)和药物警戒性研究(7)的数据表明SLIT的优良的耐受性，但直到最近才将增加剂量期对耐受性的影响提出讨论。SLIT中增加剂量的可能影响是推测的。假设SLIT中增加剂量的作用是针对能够在增加剂量后安全施用维持剂量的患者的，那么此处提供的数据证明该假设是错误的。在T3阶段(当以维持剂量开始活性治疗时)组2中报告口痒的患者人数比组1在T1阶段的人多，但与在T2阶段组1中报告口痒的患者人数相似，在该T2阶段时间上，增加剂量期对患者的耐受性的假定的作用应当保证更少的人数报告口痒。每施用剂量的口痒比率也显示这些事件报告的频率在T2阶段的组1中和在T3阶段的组2中相同。此外，当在两个组中比较活性治疗的前30天(对于组1，T1+T2和对于组2，T3)，每施用剂量的口痒累积率对于组1和组2分别为0.83％和0.74％。该研究的较短持续时间不允许对口痒的报告是否随时间流逝而减少作出任何确定的结论。然而，观察到的相对少的退出表明患者并不认为口痒的强度和持续时间令人烦恼。

舌下水肿在组2中报导的频率比组1中多。当实施活性治疗时(T3和T4)在组2中报告了该类型的事件，且在1小时至3天内得到解决。一位患者在最少30天的活性治疗后在T4阶段由于该AE而退出研究。组1中在T4阶段也报告了舌下水肿。

当将儿童和青少年以及成人中的口痒比较时，根据数据，似乎儿童中口痒的报导比青少年和成人中更频繁。其原因不清楚，但其为进一步研究的课题。然而，儿童中退出的人数与青少年和成人的退出人数没有差别。此外，儿童中的退出(N＝2)与口痒无关。

总之，这些研究结果表明

(螨和草)具有良好的耐受性，和可安全地进行起始治疗而无需增加剂量期。

参考文献

(1)Wilson DR，Torres LM，Durham SR.Sublingualimmunotherapy for allergic rhinitis：systematic review andmeta-analysis.Allergy 2005；60(1)：4-12.

(2)Osterberg L，Blaschke T.Adherence to medication.NEngl J Med 2005；353(5)：487-497.

(3)Bousquet J，Lockey RF，Malling HJ.WHO Position Paper.Allergen immunotherapy：Therapeutic vaccines for allergicdiseases.Allergy 1998；53(44)：1-42.

(4)Pajno GB，Morabito L，Barberio G，Parmiani S.Clinical and immunologic effects of long-term sublingualimmunotherapy in as thmatic children sensitized to mites：adouble-blind，placebo-controlled study.Allergy 2000；55(9)：842-849.

(5)Canonica GW，Passalacqua G.Noninjection routes forimmunotherapy.J Allergy Clin Immunol 2003；111(3)：437-448.

(6)Quirino T，Iemoli E，Siciliani E，Parmiani S，MilazzoF.Sublingual versus injective immunotherapy in grass pollenallergic patients：a double blind(double dummy)study.ClinExp Allergy 1996；26(11)：1253-1261.

(7)Di Rienzo V，Pagani A，Parmiani S，Passalacqua G，Canonica GW.Post-marketing surveillance study on the safetyof sublingual immunotherapy in pediatric patients.Allergy 1999；54(10)：1110-1113.

表1：患者特征

表2：最常报告的治疗相关的AE(在任何组中＞5％)

两个治疗组中报告最常报导的不利事件的患者的人数(按照任何组中＞5％的患者)、组群体的百分数(％)、事件的数目(E)和报告的时间。组1从T1-T4接受活性治疗，组2在T1和T2期间接受安慰剂。就反复报告相同类型的不利事件的患者修正患者的总数。

表3.按报告时间的每施用剂量的口痒比率(％)

E：口痒事件的数目

按照报告时间，最常报告的不利事件(口痒)中的每施用剂量的口痒比率(％)。

表4.按照年龄，具有最常报导的与治疗相关的不利事件的患者的人数

按照年龄，具有最常报导的与治疗相关的不利事件的患者的数目。

Claims (11)

1.变应原用于制备液体疫苗制剂的用途，所述疫苗制剂用于在不包括增加剂量的给药方案中通过口腔粘膜给药来预防或治疗患者中的变态反应症。

2.权利要求1的用途，其中希望用于每日给药的单一剂量中的主要变应原的浓度是0.05至50μg，更优选0.05μg至30μg，更优选0.06μg至25μg，更优选0.07μg至20μg，更优选0.08μg至15μg，更优选0.09μg至10μg和最优选0.1μg至7μg。

3.权利要求1或2的用途，其中变应原选自树的花粉变应原、草的花粉变应原、房尘螨变应原、储藏室尘螨变应原、杂草变应原、霉菌变应原、猫变应原和狗变应原。

4.前述权利要求任一项的用途，其中口腔粘膜给药是舌下给药。

5.前述权利要求任一项的用途，其中制剂进一步包含增强剂。

6.权利要求6的用途，其中增强剂是甘油。

7.前述权利要求任一项的用途，其中疫苗进一步包含选自含氧金属盐的佐剂。

8.权利要求7的用途，其中含氧金属盐选自氢氧化铝、磷酸铝和磷酸钙。

9.权利要求8的用途，其中含氧金属盐是氢氧化铝。

10.权利要求9的用途，其中含氧金属盐的浓度是0.035-1000mg/ml，更优选0.10-100mg/ml，更优选0.25-10mg/ml和最优选0.5-5mg/ml。

11.预防或治疗受试者中的变态反应症的方法，其包括在不包括增加剂量的给药方案中对受试者进行液体疫苗制剂的口腔粘膜给药。