CN101672781A - 硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物中的应用，该应用首次利用硫酸铁铵可与三种喹诺酮类药物母核分别发生螯合反应，生成淡橙红色至橙红色复合物，该反应专属性强，且显色现象直观易于观察，可用于喹诺酮类药物及其制剂的鉴别以及化妆品、保健品、保健食品、消毒产品或中成药中掺杂喹诺酮类药物的检测。本发明的应用中，还引入荧光检测对大批量待测样品进行初筛，操作简单可快速挑选出疑似阳性样品，继而结合硫酸铁铵可与喹诺酮类药物生成螯合物的性质，对疑似阳性样品进行更加精确地检测，检测准确率99％以上。
Description
技术领域
本发明涉及药物检测领域，具体涉及喹诺酮类药物的检测，尤其涉及硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物中的应用。
背景技术
喹诺酮类(4-quinolones)抗菌药，又称吡酮酸类或吡啶酮酸类，是一类较新的合成抗菌药，该类药物的开发始于1962年的萘啶酸，自1978年诺氟沙星的问世以来，已开发及正在开发的超过五十种。
喹诺酮类抗菌药和其他抗菌药的作用点不同，它们以细菌的脱氧核糖核酸(DNA)为靶，造成染色体的不可逆损害，而使细菌细胞不再分裂。喹诺酮类抗菌药是主要作用于革兰阴性菌的抗菌药物，对革兰阳性菌的作用较弱(某些品种对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌作用)。
喹诺酮类抗菌药按发明先后及其抗菌性能的不同，分为一、二、三、四代，第一代喹诺酮类的品种有萘啶酸(Nalidixic acid)和吡咯酸(Piromidic acid)等，第二代喹诺酮类的品种有新恶酸(Cinoxacin)和甲氧恶喹酸(Miloxacin)等，第三代喹诺酮类的品种有诺氟沙星(Norfloxaicin)、氧氟沙星(Ofloxacin)、培氟沙星(Perfloxacin)、依诺沙星(Enoxacin)和环丙沙星(Ciprofloxacin)等，第四代喹诺酮类的品种有加替沙星(Gatifloxacin)与莫昔沙星(Moxifloxacin)等。
喹诺酮类药物可用于治疗呼吸道感染、泌尿生殖系统感染、消化系统感染及其他类的各种感染，还可用于抗肿瘤和抗病毒作用，但该类药物对人体也存在很大的不良反应，如胃肠道反应、中枢反应、可诱发癫痫、影响软骨发育、易产生结晶尿及易导致肝损伤等。
目前在抗感染药物市场中，喹诺酮类抗菌药在临床上的用量已超过青霉素类，成为第二大类抗菌药物，因其良好的抗感染作用，喹诺酮类药物在各种领域中被大量非法添加，尤其是在化妆品和保健品中，造成大规模的滥用，并引发抗菌素耐药性等一系列问题。因此，快速检测化妆品和保健品中的喹诺酮抗菌素成为社会的迫切需求。
目前对于非法添加喹诺酮类药物的检测，我国药典主要是采用液相色谱、红外光谱法，《药品快速鉴别手册》采用丙二酸、醋酐；枸橼酸醋酐；酒石酸、醋酐；碘铋酸钾/醋酸试液鉴别法，国外药典(USP32、BP2009)采用红外及薄层色谱法，然而现有技术中的酸/酸酐法操作复杂，需水浴，不适合现场检测及推广，另外，碘化铋钾醋酸或盐酸溶液，属于生物碱试剂，大多数生物碱可与该试剂反应生成橙红色沉淀，专属性差。
药品快速检验是WHO倡导推广使用的打击假药的有效方法，但这些方法只适用于某些原料药和成分简单西药制剂中药效成分真假的鉴别，目前针对化妆品、保健品中非法掺杂喹诺酮类药物的检测尚无相关研究报道。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物中的应用，利用硫酸铁铵与喹诺酮类药物能形成明显的淡橙红色至橙红色复合物，从而实现对喹诺酮类药物专属性强、操作简单、灵敏度高、结果直观的检测。
本发明的上述目的是通过如下方案予以实现的：
本发明人对比各类喹诺酮类药物的分子结构式发现，喹诺酮类药物具有三种母核：喹啉羧酸、萘啶酸和曾啉羧酸，喹啉羧酸的结构式如式(I)所示，萘啶酸的结构式如式(II)所示，曾啉羧酸的结构式如式(III)所示。
本发明人通过研究发现，硫酸铁铵可与上述三种母核分别发生螯合反应，生成淡橙红色至橙红色复合物，该反应专属性强，且显色现象直观易于观察，因此可将硫酸铁铵用于喹诺酮类药物及其制剂的鉴别，还可以用于检测非法添加喹诺酮类药物，尤其是化妆品、保健品、保健食品、消毒产品或中成药中非法添加喹诺酮类药物的检测。
本发明在采用硫酸铁铵进行喹诺酮类药物检测时，硫酸铁铵是以硫酸铁铵水溶液的形式作为显色剂，硫酸铁铵水溶液就是将硫酸铁铵固体【NH4Fe(SO4)2·12H2O】溶解于溶剂水中配制而成，硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度为0.1～400mg/ml；当硫酸铁铵在溶液中浓度增大的时候，会存在溶解困难的问题，且长期保存有水解趋势，浓度会降低，因此本发明的硫酸铁铵溶液，当硫酸铁铵在溶液中的浓度为0.1～20mg/ml时，采用将硫酸铁铵直接溶于溶剂水中，此时硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度优选2mg/ml，而当硫酸铁铵在溶液中的浓度大于20mg/ml时，需要向硫酸铁铵溶液中加入硫酸，硫酸的加入量为溶液总体积的5～35％，此时硫酸铁铵溶液中硫酸铁铵的浓度优选200mg/ml；硫酸有利于硫酸铁铵的溶解性，而且促进硫酸铁铵溶液的稳定。
本发明人对比各种喹诺酮类药物的分子结构，发现喹诺酮类药物均具有如下结构特征：
(1)大的共轭π键结构；
(2)刚性的平面结构；
(3)取代基团为给电子取代基；
(4)最低的激发单重态S1为π，π*型，而不是n，π*型。
上述四个结构特征说明喹诺酮类药物具有荧光物质特性，紫外灯下366/254nm均有检视结果也证明，喹诺酮类药物确实具有强荧光现象。
因此，本发明在采用硫酸铁铵进行喹诺酮类药物检测前，可先用荧光对待测物质进行初筛，对有荧光反应的样品再进行硫酸铁铵的专属性鉴别检测，从而能够快速在大量样品中将非法添加有喹诺酮类药物的样品筛选出来。
由于待测样品成分复杂，所以本领域技术人员在对待测样品进行检测前，先进行萃取或柱色谱分离、净化等预处理步骤，将待测样品中的干扰物去除，然后再对预处理后的待测样品进行检测。
本发明采用本领域技术人员对待测样品进行预处理时的常规操作，然后对预处理的样品采用硫酸铁铵进行喹诺酮类药物检测，或采用荧光检测结合硫酸铁铵进行喹诺酮类药物检测，均可实现本发明。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明首次利用硫酸铁铵直接与喹诺酮类药物发生螯合反应，根据反应产物的颜色从而实现了喹诺酮类药物的检测，硫酸铁铵与喹诺酮类药物的螯合反应具有高专属性和高灵敏度，保证了检测结果的准确率可高达99％；
2.本发明将荧光检测和硫酸铁铵显色检测两个方法结合起来，开创了物理、化学试剂法成功对非法添加喹诺酮类药物的检测，在分析化学、药物分析学和化妆品监督检验等领域均属首创；
3.本发明运用荧光发光检测对大批量待测样品进行初筛，操作简单可快速挑选出疑似阳性样品，继而结合硫酸铁铵可与喹诺酮类药物生成螯合物的性质，对疑似阳性样品进行更加精确地检测，两步检测方法的结合，使得检测正确率高达99％，同时也为物理化学试剂法在非法添加化合物的检测领域提供了重要的方法参考。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步地描述，但具体实施例并不对本发明做任何限定。
实施例1 专属性试验
本实施例选择甲硝唑对照品、氯霉素标准品、头孢泊肟酯对照品、地塞米松片、水杨酸对照品、盐酸小檗碱片、氧氟沙星对照品、加替沙星对照品、诺氟沙星对照品、环丙沙星对照品和培氟沙星对照品作为待测样品，对这十一种样品进行检测，检测方法分为如下两种：
方法一：
(1)将待测样品分别配制成大于1mg/ml浓度的溶液；
(2)配置100mg/ml硫酸铁铵溶液，该溶液中包含20％硫酸；
(3)向步骤(1)配制好的各待测样品溶液中分别加入一滴步骤(2)制备的硫酸铁铵溶液，观察显色结果。
方法二：
(1)将待测样品分别配制成大于1mg/ml浓度的溶液；
(2)配置200mg/ml硫酸铁铵溶液，该溶液中包含9％硫酸；
(3)将步骤(1)制备的各待测样品溶液，分别用塑料管吸取1滴滴入白瓷板孔A、B中；
(4)在紫外灯下观察各待测样品的孔A中液体是否有荧光，如果有荧光，则继续向个待测样品的孔B中加入步骤(2)制备的硫酸铁铵溶液，观察显色结果。
方法一的实验结果：
甲硝唑对照品的显色结果是无色，为阴性；
氯霉素标准品的显色结果是无色，为阴性；
头孢泊肟酯对照品的显色结果是无色，为阴性；
地塞米松片的显色结果是无色，为阴性；
水杨酸对照品的显色结果是紫红色，为阴性；
盐酸小檗碱片的显色结果是黄色，为阴性；
氧氟沙星、加替沙星、诺氟沙星、环丙沙星和培氟沙星的显色结果均为橙红色，为阳性。
方法二的实验结果：
本实施例中的11个样品中，除了甲硝唑对照品、氯霉素标准品和头孢泊肟酯对照品无荧光外，其余样品均有荧光，其中：地塞米松片有微黄色荧光，水杨酸对照品有蓝色荧光，盐酸小檗碱片有暗黄色荧光，氧氟沙星、加替沙星、诺氟沙星和培氟沙星均有黄绿色荧光出现，环丙沙星出现蓝色荧光，因此将无荧光出现的甲硝唑对照品、氯霉素标准品和头孢泊肟酯对照品判定为阴性样品，不再进行后续的显色反应，而其他8种样品均有荧光出现，判定为疑似阳性样品，进行后续的显色反应。
显色结果为：
地塞米松片的显色结果是无色，为阴性；
水杨酸对照品的显色结果是紫红色，为阴性；
盐酸小檗碱片的显色结果是黄色，为阴性；
氧氟沙星、加替沙星、诺氟沙星、环丙沙星和培氟沙星的显色结果均为橙红色，为阳性。
根据方法一和方法二的实验结果可以看出，硫酸铁铵溶液能够专一性地检测喹诺酮类药物，且荧光检测也可以实现对喹诺酮类药物的初筛，继而搭配硫酸铁铵溶液检测，可简化检测操作，提高检测效率。
实施例2 最低检测限试验
本实施例选择氧氟沙星、洛美沙星、依诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星、氟罗沙星、培氟沙星、帕珠沙星、加替沙星、甲苯磺酸托氟沙星和盐酸恩诺沙星作为待测样品，先分别制备这十二样品的系列浓度溶液，所述浓度为：0.04、0.09、0.15、0.20、0.25、0.30、0.38、0.76、1.52和3.00mg/ml；
按照实施例1中方法一的操作步骤，分别向各待测样品的系列浓度溶液中加入一滴硫酸铁铵溶液，观察显色结果。
从显色结果可以看出，这十二个待测样品的最低检测限均为0.20mg/ml(肉眼可见)，显色结果为淡橙红色至橙红色。
实施例3 消痘无痕精华液的检测
本实施例选择市售的消痘无痕套装中的消痘无痕精华液作为待测样品，对其是否非法添加有喹诺酮类药物进行检测。
待测样品：消痘无痕精华液，水剂，规格为20ml；
显色剂：0.1mg/ml硫酸铁铵溶液(不含硫酸)；
预处理：取消痘无痕精华液2ml经二氯甲烷，0.05mol/LHCl溶液萃取去除杂质，过滤后用于后续检测；
检测：将经过预处理的消痘无痕精华液中加入1滴0.1mg/ml硫酸铁铵溶液，即显橙红色，判定为阳性，说明本实施例的消痘无痕精华液中含有喹诺酮类药物。
验证试验：将经过预处理的消痘无痕精华液采用本领域常规操作进行高效液相色谱检测，结果证实该消痘无痕精华液中含有氧氟沙星，该结果和本实施例的硫酸铁铵检测一致。
实施例4 明信祛痘螨灵霜的检测
本实施例选择市售的明信祛痘螨灵霜作为待测样品，对其是否非法添加有喹诺酮类药物进行检测。
待测样品：明信祛痘螨灵霜，霜剂，规格为23g；
显色剂：2mg/ml硫酸铁铵溶液(不含硫酸)；
预处理：取明信祛痘螨灵霜1g经0.05mol/LHCl溶液溶解，滤纸过滤后用于后续检测；
检测：将经过预处理的明信祛痘螨灵霜中加入1滴2mg/ml硫酸铁铵溶液，即显橙红色，判定为阳性，说明本实施例的明信祛痘螨灵霜中含有喹诺酮类药物。
验证试验：将经过预处理的祛痘消印精华霜采用本领域常规操作进行高效液相色谱检测，结果证实该消痘无痕精华液中含有氧氟沙星和环丙沙星，该结果和本实施例的硫酸铁铵检测一致。
实施例5 痘痘消皮肤调理修复液的检测
本实施例选择市售的痘痘消皮肤调理修复液作为待测样品，对其是否非法添加有喹诺酮类药物进行检测。
待测样品：痘痘消皮肤调理修复液，水剂，规格为30ml；
显色剂：200mg/ml硫酸铁铵溶液(含5％硫酸)；
预处理：取痘痘消皮肤调理修复液2ml经乙腈-水(0.1％甲酸)(体积比为5∶95)提取，正己烷净化后，用于后续检测；
检测：将经过预处理的痘痘消皮肤调理修复液中加入1滴200mg/ml硫酸铁铵溶液，不显橙红色，判定为阴性，说明本实施例的痘痘消皮肤调理修复液中不含有喹诺酮类药物。
验证试验：将经过预处理的痘痘消皮肤调理修复液采用本领域常规操作进行高效液相色谱检测，结果证实该痘痘消皮肤调理修复液中不含有喹诺酮类药物，该结果和本实施例的硫酸铁铵检测一致。
实施例6 保列康离子态软膏的检测
本实施例选择市售的保列康离子态软膏(保健品)作为待测样品，对其是否非法添加有喹诺酮类药物进行检测。
待测样品：保列康离子态软膏，膏剂，规格为5ml；
显色剂：400mg/ml硫酸铁铵溶液(含9％硫酸)；
预处理：取保列康离子态软膏0.1g经乙腈饱和的正己烷萃取去除杂质，滤纸过滤后用于后续检测；
检测：将经过预处理的保列康离子态软膏中加入1滴400mg/ml硫酸铁铵溶液，即显橙红色，判定为阴性，说明本实施例的保列康离子态软膏中含有喹诺酮类药物。
验证试验：将经过预处理的保列康离子态软膏采用本领域常规操作进行高效液相色谱检测，结果证实该痘痘消皮肤调理修复液中含有氧氟沙星，该结果和本实施例的硫酸铁铵检测一致。
实施例7 金列保雄健胶囊的检测
本实施例选择市售的金列保雄健胶囊(保健食品)作为待测样品，对其是否非法添加有喹诺酮类药物进行检测。
待测样品：金列保雄健胶囊，胶囊，规格为0.45g×12粒/板×2板；
显色剂：10mg/ml硫酸铁铵溶液(含35％硫酸)；
预处理：取金列保雄健胶囊0.1g经乙腈饱和的正己烷萃取去除杂质，滤纸过滤后用于后续检测；
检测：将上述上层液体中加入1滴10mg/ml硫酸铁铵溶液，即显橙红色，判定为阴性，说明本实施例的金列保雄健胶囊中含有喹诺酮类药物。
验证试验：将经过预处理的列保雄健胶囊采用本领域常规操作进行高效液相色谱检测，结果证实金列保雄健胶囊中含有氧氟沙星，该结果和本实施例的硫酸铁铵检测一致。
实施例8
本实施例的待测样品有祛痘螨灵霜、醋疗套装消痘无痕精华液、藏药速效逗消膏、痘宁平疤消痕霜和祛痘无痕原液，五种市售产品。
将上述五种待测样品分别经经乙腈-水(0.1％甲酸)(体积比为5∶95)提取，正己烷净化后，用于后续检测。
首先将经过上述预处理的五个待测样品进行荧光照射：
祛痘螨灵霜有强荧光，黄绿色；
醋疗套装消痘无痕精华液有强荧光，黄绿色；
藏药速效逗消膏有荧光，黄绿色；
痘宁平疤消痕霜有荧光，黄绿色；
祛痘无痕原液有荧光，黄绿色。
五个样品均出现荧光，因此判定为疑似阳性样品，进行后续的硫酸铁铵溶液检测。
向五个样品中分别滴入一滴200mg/ml硫酸铁铵溶液(含9％硫酸)，祛痘螨灵霜即显淡橙红色，醋疗套装消痘无痕精华液即显橙红色，藏药速效逗消膏即显橙红色，痘宁平疤消痕霜即显淡橙红色，祛痘无痕原液即显橙红色。
说明本实施例的五个待测样品均为阳性样品，都含有喹诺酮类药物。
Claims (8)
1、硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物中的应用。
2、根据权利要求1所述应用，其特征在于硫酸铁铵为硫酸铁铵溶液，其浓度为0.1～400mg/ml。
3、根据权利要求2所述应用，其特征在于当硫酸铁铵溶液的浓度大于20mg/ml时，所述硫酸铁铵溶液中加有硫酸。
4、根据权利要求3所述应用，其特征在于所述硫酸铁铵溶液中硫酸的体积百分比浓度为5～35％。
5、根据权利要求3所述应用，其特征在于当硫酸铁铵溶液中不加有硫酸时，硫酸铁铵溶液的浓度为2mg/ml，当硫酸铁铵溶液中加有硫酸时，硫酸铁铵溶液的浓度为200mg/ml。
6、根据权利要求1所述应用，其特征在于硫酸铁铵在检测喹诺酮类药物前，先采用紫外灯下检视荧光对喹诺酮类药物进行初筛。
7、根据权利要求1所述应用，其特征在于所述应用为硫酸铁铵对化妆品、保健品、保健食品、消毒产品或中成药中喹诺酮类药物的检测。
8、根据权利要求1所述应用，其特征在于所述应用为硫酸铁铵对喹诺酮类药物及其制剂的鉴别。
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20100317 |