CN101668520A - 使用特定基质金属蛋白酶(mmp)抑制剂治疗肝脏疾病的方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了通过施用基质金属蛋白酶抑制剂治疗肝脏疾病的方法。本发明还提供了通过施用本文描述的基质金属蛋白酶抑制剂来减少肝脏疾病所伴随的肝损伤的方法。本发明进一步提供通过施用基质金属蛋白酶抑制剂来降低升高的肝酶水平的方法。

Description

使用特定基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂治疗肝脏疾病的方法

1.优先权要求

本申请对Alfred P.Spada分别在2007年2月28日和2007年6月26日提交的美国临时申请序列号60/904,322和60/937,301主张优先权。以上提及的申请的内容被全文引入作为参考。

2.领域

本发明提供通过施用基质金属蛋白酶抑制剂治疗肝脏疾病的方法。

3.背景

肝脏疾病是对肝脏的急性或慢性损害，通常由感染、受伤、暴露于药物或有毒化合物、酒精、食物中的杂质、以及血液中正常物质的异常升高、自体免疫过程、或由遗传缺陷(例如血色素沉着症)引起。有时损害的确切原因可能是未知的。基于疾病的持续时间，肝脏疾病可以分为急性或慢性肝脏疾病。在急性肝脏疾病例如急性肝炎和急性肝功能衰竭(ALF)中，疾病史不超过六个月。持续时间更长的肝脏疾病被归类为慢性肝脏疾病。

常见的肝脏疾病包括肝硬化、肝纤维化、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝缺血再灌注损伤、原发性胆汁性肝硬化(PBC)、肝炎(包括病毒性和酒精性肝炎)。病毒性肝炎的最为常见的形式是乙肝和丙肝(分别称作HBV和HCV)。慢性肝炎可能导致肝硬化。由慢性丙肝感染引起的肝硬化每年在美国导致8,000-12,000例死亡，并且HCV感染是肝脏移植的首要指标。

在所有类型的肝脏疾病中，肝细胞通过被称作凋亡的过程而死亡是常见的。肝细胞的凋亡与肝纤维化和其它肝脏疾病相关。预防肝细胞过度凋亡是急性和慢性肝脏疾病治疗中的一个重要组成部分(参见Guicciardi等，Gut，2005：54，1024-1033和Ghavami等，Med.Sci.Monit.，2005：11(11)：RA337-345)。

活性肝脏疾病的出现经常通过存在血液中酶水平升高来检测。具体来说，ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)的血液水平超过临床可接受的正常范围，已知是进行中肝损伤的指征。临床上通过常规监控肝脏疾病患者的ALT和AST血液水平来测量医学治疗期间肝脏疾病的进展。将升高的ALT和AST的降低到可接受的正常范围之内，被认为是反映患者进行中的肝损伤的严重程度减轻的临床证据。(Kim W.R.等，Hepatology，2008，在线接受预印，可在出版商网址进入2/20/2008)。

鉴于肝脏疾病在世界范围内影响了巨大的患者群体，而且对感染的患者具有悲剧性的影响，所以对提供治疗肝脏疾病的新的有效药剂，仍然存在强烈需求。

4.概述

一方面，本发明提供通过施用基质金属蛋白酶抑制剂治疗各种肝脏疾病的方法。在一些实施方案中，所述方法包括急性和/或慢性肝脏疾病的治疗。在一个实施方案中，所述肝脏疾病是由对肝脏的损害引起的病症。在一个实施方案中，对肝脏的损害是由毒素引起的，包括酒精、某些药物、食物中的杂质、和血液中正常物质的异常升高。在另一个实施方案中，对肝脏的损害是由感染或自体免疫病症引起的。在一些实施方案中，所述损害的确切原因是未知的。在一些实施方案中，由对肝脏的损害引起的肝脏疾病包括但不限于脂肪肝、肝硬化、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、和α1-抗胰蛋白酶缺乏。

在一个实施方案中，所述肝脏疾病包括但不限于肝硬化、肝纤维化、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝缺血再灌注损伤、肝炎(包括病毒性和酒精性肝炎)、和原发性胆汁性肝硬化(PBC)。

在一些实施方案中，所述肝脏疾病不是继发脂肪肝疾病。在一些实施方案中，所述基质金属蛋白酶抑制剂不是马立马司他。

在一些实施方案中，本发明提供为经历过肝脏疾病失败治疗的患者治疗肝脏疾病的方法。在一些实施方案中，本发明提供治疗丙肝的方法。在一些实施方案中，本发明提供为经历丙肝失败治疗的患者治疗丙肝的方法。在一个实施方案中，本发明提供的方法减少了慢性和/或急性肝脏疾病伴随的肝损伤。在一个实施方案中，本发明提供的方法降低了升高的肝酶水平，例如升高的ALT(丙氨酸转氨酶)和AST(天冬氨酸转氨酶)水平。

在一些实施方案中，本发明提供通过施用本发明提供的化合物在感染了丙肝病毒的细胞中抑制丙肝病毒(HCV)复制的方法。在一些实施方案中，本发明提供通过施用本发明提供的化合物在感染了HCV的患者中抑制丙肝病毒(HCV)复制的方法。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的基质金属蛋白酶抑制剂化合物选自：

以及其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物是

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物是

或其药学上可接受的衍生物。

本发明还提供了药物组合物，其包含治疗有效量的一种或多种本发明提供的化合物和药学上可接受的载体，其中所述药物组合物在预防、治疗或改善肝脏疾病的一种或多种症状中是有用的。

本发明进一步提供制品，其包括包装材料，用于治疗、预防或改善肝脏疾病伴随的一种或多种症状的本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物，以及标示所述化合物或其药学上可接受的衍生物是用于治疗、预防或改善肝脏疾病的一种或多种症状的标签。

5.优选实施方案的详细描述

5.1定义

除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语与本领域普通技术人员通常的理解具有一致含义。所有的专利、申请、申请公开和其它公开物被全文引入作为参考。如果本文的术语具有多个定义，则除非另外规定，以本章节中的定义为准。

本文使用的“个体”是动物，例如哺乳动物，包括人，例如患者。

本文使用的生物活性指化合物的体内活性，或者化合物、组合物或其它混合物在体内施用时得到的生理反应。因此，生物活性包括上述化合物、组合物和混合物的治疗效果和药物动力学行为。可以在被设计用来测试生物活性的体外系统中观察这样的活性。

本文使用的化合物的药学上可接受的衍生物包括其盐、酯、缩醛、缩酮、原酸酯、半缩醛、半缩酮、酸、碱、溶剂化物、水合物、或前药。这样的衍生物可以被这一领域技术人员使用已知供如此衍生化的方法轻易制备。制备的化合物可以对动物或人施用，没有实质性的毒性作用，而且所述制备的化合物具有药物活性或者是前药。药学上可接受的盐包括但不限于胺盐，例如但不限于N，N′-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、氨、二乙醇胺和其它羟烷基胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺、普鲁卡因、N-苄基苯乙基胺、1-对位-氯苄基-2-吡咯烷-1′-基甲基苯并咪唑、二乙基胺和其它烷基胺、哌嗪和三(羟甲基)氨基甲烷；碱金属盐例如但不限于锂盐、钾盐和钠盐；碱土金属盐例如但不限于钡盐、钙盐和镁盐；过渡金属元素盐例如但不限于锌盐；以及无机盐例如但不限于磷酸氢钠和磷酸氢二钠；而且也包括但不限于无机酸的盐，例如但不限于盐酸盐和硫酸盐；以及有机酸的盐，例如但不限于醋酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、丁酸盐、戊酸盐、甲磺酸盐和延胡索酸盐。药学上可接受的酯包括但不限于酸性基团的烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基和环烷基酯，所述酸性基团包括但不限于羧酸、磷酸、膦酸、磺酸、亚磺酸和硼酸。药学上可接受的溶剂化物和水合物是化合物与一或多个溶剂或水分子，或1到约100个，或1到约10个，或1到约2、3或4个溶剂或水分子的复合物。

本文使用的治疗指任何改善或有益地改变疾病或病症的一种或多种症状的方式。治疗也包括本文组合物的任何药学应用，例如用来治疗肝脏疾病。

本文使用的通过施用特定化合物或药物组合物来改善特定病症的症状，指施用该组合物所导致或伴随的任何减轻，不管是永久的减轻还是临时的减轻，持续的减轻还是短暂的减轻。

本文使用的术语“控制”，除非另外指出，包括预防具体疾病或病症在已经经受过该疾病或病症的患者身上复发，和/或使患有该疾病或病症的患者停留在缓解期的时间延长。该术语包含调节该疾病或病症的阀值、发展、和/或持续时间，或者改变患者对该疾病或病症的反应方式。

可以理解，本文提供的化合物可以包含手性中心。这样的手性中心可以是(R)或(S)构型，或者可以是它们的混合物。因此，本文提供的化合物可以是对映体纯的，或者是立体异构或非对映异构的混合物。同样的，本领域技术人员将认可，对于在体内经历差向异构的化合物，以(R)形式施用该化合物和以(S)形式施用该化合物是等同的。

本文使用的基本纯的，指足够同质，通过用本领域技术人员用于评估这样纯度的标准分析方法例如薄层色谱(TLC)、凝胶电泳、高效液相色谱(HPLC)和质谱(MS)检测，显示没有容易检测到的杂质；或者足够纯，使得进一步纯化不能可检测地改变其物理和化学性质，例如该物质的酶活性和生物活性。纯化化合物以制备基本化学纯的化合物的方法是本领域技术人员已知的。但是，基本化学纯的化合物可以是立体异构体的混合物。在这样的情况下，进一步的纯化可能会增加化合物的比活性。本文的公开将包括所有这样的可能异构体，以及它们的外消旋和光学纯形式。光学活性(+)和(-)、(R)-和(S)-、或者(D)-和(L)-异构体，可以使用手性合成子或手性试剂制备，或者使用常规技术例如反相HPLC分离。当本文描述的化合物包含烯烃双键或其它几何不对称中心时，除非另外指定，指的是化合物包含E和Z两种几何异构体。同样地，所有的互变异构形式也被包含。

在一些实施方案中，本文提供的方法中使用的化合物是“立体化学纯”的。立体化学纯的化合物具有会被本领域技术人员认可为“纯”的立体化学纯度水平。在一些实施方案中，“立体化学纯”指基本不含其它异构体的化合物。在特定的实施方案中，化合物是85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％的不含其它异构体。

本文使用的“治疗肝脏疾病”指用任何已知并在市场上可得到或正在被开发的供治疗肝脏疾病的药物治疗。举例来说，治疗丙肝指用市场上可得到的供治疗HCV的药物治疗患者。在下文“联合治疗”部分中描述了数种代表性的药物。

本文使用的“经历过失败治疗的患者”指在下面4.3部分中描述的患者群体，包括之前已经用目前市场上可得到的任何药物治疗过肝脏疾病，而且对该治疗无反应或肝脏疾病暂时缓解的患者。

本文使用的“肝损伤”指肝脏的急性或慢性损伤，通常由感染、受伤、暴露于药物或有毒化合物、酒精、食物中的杂质、以及血液中正常物质的异常升高、自体免疫过程、移植相关的移植排斥、或由遗传缺陷(例如血色素沉着症)引起。对肝脏的损伤包括但不限于炎症、肝组织瘢痕和纤维化。

本文使用的术语“联合”指使用超过一种治疗(例如MMP和干扰素)。术语“联合”的使用并不限定对患有病症的个体施用治疗(例如MMP和干扰素)的顺序。第一治疗(例如MMP抑制剂)可以在第二治疗(例如干扰素)对患有病症的个体施用之前(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期、或12星期前)、同时或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1星期、2星期、3星期、4星期、5星期、6星期、8星期、或12星期后)施用。

本文使用的术语“协同”指MMP抑制剂和第二药剂例如干扰素的组合，它比单独施用这两种化合物治疗的累加效应更有效。治疗组合(例如MMP和干扰素的组合)的协同效应，允许对患有病症的个体使用较低剂量的一种或多种治疗和/或较低频率地施用治疗。使用较低剂量的治疗(例如MMP和干扰素)和/或以较低频率施用该治疗的能力，减少了对个体施用该治疗伴随的毒性，但没有减少该治疗在病症的预防或治疗中的功效。另外，协同效应可以在病症的预防或治疗中引起药剂功效的改善。最后，治疗组合(例如MMP和干扰素的组合)的协同效应，可以避免或减少单独使用其中一种治疗时伴随的不良作用或不想要的副作用。

本文使用的术语“其它药剂”或“第二药剂”指可以用来与本文描述的MMP抑制剂联合治疗肝脏疾病的任何药剂或药剂组合。在一些实施方案中，所述其它药剂或第二药剂是抗丙肝病毒干扰素、抗丙肝病毒聚合酶抑制剂、抗丙肝病毒蛋白酶抑制剂或它们的组合。

本文使用的术语“肝酶水平升高”或“肝酶水平的升高”指血液中的肝酶水平超出了血液中肝酶的正常临床可接受的范围。本文提供的化合物将肝酶水平的升高减少到血液中肝酶的正常临床可接受水平。测量肝酶水平的方法是本领域熟知的(参见例如Jeong S.Y.等，Sandwich ELISA for measurement ofcytosolic aspartate aminotransferase in sera from patients with liver diseases，ClinChem.，2003；49(5)：8269和Burin des Roziers N.等，A microtiter plate assay formeasurement of serum alanine aminotransferase in blood donors，Transfusion.，1995；35(4)：3314，它们每个都被全文引入本文作为参考)。

5.2方法中使用的化合物

本发明提供的方法中使用的化合物是基质金属蛋白酶抑制剂(MMP抑制剂)。文献中已经报道了数种MMP抑制剂。本发明方法中使用的某些代表性的MMP抑制剂被Fisher等在Cancer Metastasis Rev.，(2006)25：115-136中；Rao在Current Pharmaceutical Design，2005，11，295-322295中；Bender等在美国专利号5,932,595中；Watanabe在美国专利号6,207,698和6,831,178中；Levin等在美国专利号6,225,311中；Purder等在WO 2007/016390中；以及Alwayn等在Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 291：G1011-G1019，2006中描述。这些文献的内容特此被全文引入作为参考。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物选自

XL784和其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物选自

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物是

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，在本发明提供的方法中使用的化合物是

或其药学上可接受的衍生物。

在一个实施方案中，所述化合物是

或其药学上可接受的衍生物。

在一些实施方案中，本文描述的化合物在急性肝脏疾病模型中口服施用0.001-1000mg/Kg后具有功效。在一些实施方案中，本文描述的化合物在急性肝脏疾病模型中口服施用0.01-100mg/Kg后具有功效。

5.3治疗方法

在一些实施方案中，本发明提供的方法包括急性和/或慢性肝脏疾病的治疗。在一个实施方案中，所述方法是用来治疗急性肝脏疾病的。在一个实施方案中，所述方法是用来治疗慢性肝脏疾病的。在一个实施方案中，所述方法是用来减少慢性和/或急性肝脏疾病伴随的肝损伤的。不受限于任何特定的理论，相信本发明提供的方法中使用的MMP抑制剂可以部分地通过抑制TNF-α信号级联来起作用。因此，在一个实施方案中，本发明提供通过施用本文描述的化合物抑制来TNF-α的信号级联的方法。

在一个实施方案中，所述肝脏疾病是由对肝脏的损害引起的病症。在一个实施方案中，对肝脏的损害是由毒素引起的，包括酒精、一些药物、食物中的杂质、和血液中正常物质的异常升高。在另一个实施方案中，对肝脏的损害是由感染或自体免疫病症引起的。在一些实施方案中，损害的确切原因是未知的。

在一个实施方案中，所述肝脏疾病包括但不限于肝硬化、肝纤维化、非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)、非酒精性脂肪性肝炎(NASH)、肝缺血再灌注损伤、肝炎(包括病毒性和酒精性肝炎)、和原发性胆汁性肝硬化。在一个实施方案中，所述肝脏疾病表现为肝酶(例如ALT和AST)升高，或者作为脂肪变性(脂肪肝)、纤维化和/或肝硬化的结果存在的进行性肝损伤的病理学证据。在一个实施方案中，NASH表现为肝酶(例如ALT和AST)升高，或者脂肪变性(脂肪肝)、纤维化、和/或肝硬化的病理学证据。

在一些实施方案中，本发明提供的是治疗脂肪肝(也叫做肝脏脂肪变性)的方法，包括非酒精性脂肪肝疾病。脂肪肝被定义为甘油三酸酯在肝细胞内的过度累积。在一些实施方案中，在患有非酒精性脂肪肝疾病的患者中，肝脏包含超过约5％肝总重量的脂肪或肝小叶中超过30％的肝细胞具有脂肪沉积。非酒精性脂肪肝的最常见原因是肥胖、糖尿病、和血清甘油三酸酯水平升高。其它原因包括营养不良、遗传性代谢病症(例如糖原贮积症)、和药物(例如皮质类固醇、四环素和阿司匹林)。在一些实施方案中，脂肪肝不产生症状。在其它实施方案中，脂肪肝引起黄疸(皮肤和眼白变黄)、恶心、呕吐、疼痛、和腹部压痛。在一个实施方案中，本发明提供的方法对治疗非酒精性脂肪肝疾病的一种或多种症状是有用的。

不是由酒精引起的伴有肝脏炎症的脂肪肝被称作非酒精性脂肪性肝炎或NASH。在一些实施方案中，NASH可以由作为非酒精性脂肪肝疾病的可能原因的上述任何原因而引起的。在一个实施方案中，本发明提供治疗NASH的方法。

在一个实施方案中，本发明提供的方法是治疗肝炎或肝脏炎症的，包括病毒性和酒精性肝炎。所述病毒性肝炎可以是急性或慢性的。在一些实施方案中，所述急性病毒性肝炎是由甲肝、乙肝、丙肝、丁肝或戊肝病毒引起的。在其它实施方案中，所述急性病毒性肝炎是由乙肝或丙肝病毒引起的。在一些实施方案中，所提供的方法是治疗慢性病毒性肝炎的。在一个实施方案中，慢性病毒性肝炎是由乙肝或丙肝病毒引起的。在一些实施方案中，所提供的是治疗经历过丙肝失败治疗的丙肝患者的方法。治疗丙肝的代表性方法由Strader等在Hepatology，39(4)，2004中描述。

在一些实施方案中，患者从未接受过对HCV感染的治疗或预防。在进一步的实施方案中，患者先前接受了对HCV感染的治疗或预防。例如，在一些实施方案中，患者对HCV治疗无反应。如本领域已知的，在当前干扰素治疗下，多达50％或更多的HCV患者对治疗无反应。在一些实施方案中，患者可以是接受了治疗但依旧具有HCV或其一种或多种症状的患者。在一些实施方案中，患者可以是接受了治疗但未能实现持续反应的患者。在一些实施方案中，患者接受了对HCV感染的治疗，但在治疗12星期后未能显示HCV RNA水平的2log₁₀下降。相信，在治疗12星期后血清HCV RNA没有显示超过2log₁₀减少的患者，有97-100％的机会无反应。

在一些实施方案中，患者是因为治疗伴随的一种或多种不良事件而终止了HCV治疗的患者。在一些实施方案中，患者不适合当前治疗。例如，对HCV的某些治疗伴随神经精神病学事件。干扰素(IFN)-α+利巴韦林伴随着很高比率的抑郁。抑郁症状在许多医学病症中与更糟的结果相关连。有生命危险或致命性的神经精神病学事件包括自杀、自杀意念和杀人意念、抑郁、药物依赖/过量用药的复发、以及攻击行为，在HCV治疗期间在先前患有和不曾患有精神病学病症的患者中出现。干扰素诱导的抑郁是对慢性丙肝治疗的一种限制，特别是对患有精神病学病症的患者。精神病学副作用对干扰素治疗是常见的，而且是约10％到20％的对HCV感染的当前治疗终止的原因。

因此，本发明提供治疗或预防下述患者的丙肝的方法，所述患者由于神经精神病学事件的风险例如抑郁风险而禁忌使用现有HCV治疗。本发明还提供治疗或预防下述患者的丙肝的方法，所述患者由于神经精神病学事件例如抑郁或这样的风险而需要终止现有HCV治疗。本发明进一步提供治疗或预防下述患者的丙肝的方法，所述患者由于神经精神病学事件例如抑郁或这样的风险而需要减少现有HCV治疗的剂量。

在对干扰素、或利巴韦林、或它们两者、或供施用干扰素或利巴韦林的药物产品的任何其它成分过敏的患者中，现有治疗也是禁忌的。现有的治疗在患有血红蛋白病(例如重型地中海贫血、镰状细胞性贫血)的患者和对当前的治疗有血液病学副作用风险的其它患者中是不合适的。常见的血液病学副作用包括骨髓抑制、嗜中性白血球减少和血小板减少。此外，利巴韦林对血红细胞是有毒的，而且伴随溶血。因此，本发明提供的方法在对干扰素、或利巴韦林、或它们两者过敏的患者，患有血红蛋白病的患者(例如重型地中海贫血患者和镰状细胞性贫血患者)，以及对现有治疗有血液病学副作用风险的其它患者中是有用的。

在一些实施方案中，患者接受了HCV治疗，而且在施用本发明提供的方法前终止了该治疗。在进一步的实施方案中，患者接受了治疗，而且除了施用本发明提供的方法以外，还继续接受该治疗。依照本领域技术人员的判断，本发明方法可以与其它对HCV的治疗联合施用。在一些实施方案中，本发明方法或组合物可以与剂量减少的其它对HCV治疗联合施用。

在一些实施方案中，本发明提供治疗对干扰素治疗是难治性的患者的方法。例如，在一些实施方案中，所述患者可以是对一种或多种药剂的治疗未能反应的患者，这些药剂选自干扰素、干扰素α、聚乙二醇干扰素α、干扰素+利巴韦林、干扰素α+利巴韦林、和聚乙二醇干扰素α+利巴韦林。在一些实施方案中，所述患者可以是对一种或多种药剂的治疗反应不佳的患者，这些药剂选自干扰素、干扰素α、聚乙二醇干扰素α、干扰素+利巴韦林、干扰素α+利巴韦林、和聚乙二醇干扰素α+利巴韦林。

在一个实施方案中，慢性HCV感染表现为肝酶(例如ALT、AST)升高，HCV RNA水平持续(例如大于六个月)，和/或肝损伤、纤维化、和/或肝硬化的组织学证据。在一个实施方案中，本发明提供的方法降低了肝酶水平例如ALT和AST水平的升高。测量肝酶水平的方法是本领域熟知的(参见例如JeongS.Y.等，Sandwich ELISA for measurement of cytosolic aspartate aminotransferasein sera from patients with liver diseases，Clin Chem.，2003；49(5)：8269和Burindes Roziers N.等，A microtiter plate assay for measurement of serum alanineaminotransferase in blood donors，Transfusion.，1995；35(4)：3314，它们每个都被全文引入本文作为参考)。在一个实施方案中，一种或多种肝酶例如ALT或AST水平的升高，或肝酶总量水平超出正常范围的升高，被减少了超过约90％或超过95％。在一个实施方案中，一种或多种肝酶水平升高，例如ALT或AST水平升高，或肝酶总量升高被减少了至少95％、至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％、至少2％或至少1％。

在一些实施方案中，本发明提供了治疗感染了丙肝病毒而且血清转氨酶水平正常的患者的方法。已经报道过，多达60％感染了HCV的初次献血者和药物注射使用者具有正常的ALT水平(参见Strader等，Hepatology，39(4)，2004)。在一个实施方案中，在六个月或更多个月内已经有两次或多次的检测被认为在被批准的正常检验范围内的人被认为ALT水平正常。本领域已知，对转氨酶值正常的那些人进行活组织检查，发现1％到10％显示桥样纤维化或肝硬化，而且更大部分的人至少门静脉纤维化(Strader等，Hepatology，39(4)，2004)。在一个实施方案中，本发明提供的化合物在治疗这样的患者中是有用的。

在一些实施方案中，本发明提供通过施用治疗有效量的本发明提供的化合物在感染了丙肝病毒(HCV)的细胞中抑制丙肝病毒复制的方法。在一些实施方案中，所述化合物的治疗有效量是足以可检测地减少HCV复制的量。在一个实施方案中，在这样的方法中使用的化合物是RO-113-0830。检测HCV复制的方法是本领域技术人员已知的，包括HCV复制子测试。Pietschmann，T.等，J.Virol.76，2002，4008-4021描述了一个代表性的测试。在一些实施方案中，HCV复制被抑制了至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约75％、至少约90％或更多。

另一方面，本发明提供在感染了丙肝病毒的患者中抑制HCV复制的方法。所述方法包括对患者施用有效量的本发明提供的化合物的步骤。在一个实施方案中，所述方法包括对患者施用有效量的RO-113-0830的步骤。

在一些实施方案中，本发明提供治疗酒精性肝炎的方法。酒精性肝炎(脂肪性肝炎)是脂肪肝、弥漫性肝脏炎症和肝坏死(在一些实施方案中为局灶性坏死)的组合，它们的严重程度处于各种等级。

在一个实施方案中，本发明提供在患者中治疗肝纤维化、小叶性肝炎和/或汇管桥接坏死的方法。肝纤维化是细胞外基质蛋白包括胶原蛋白的过度积累，存在于大多数类型的慢性肝脏疾病中。在一些实施方案中，重度肝纤维化引起肝硬化和肝功能衰竭。在一个实施方案中，本发明提供在患者中降低纤维化、小叶性肝炎和/或汇管桥接坏死水平的方法。肝组织学例如纤维化、小叶性肝炎和汇管桥接坏死的程度变化的测量方法是本领域熟知的。例如，在Hepatology，2006，43(2)：S113-S120中描述了数种肝纤维化的非侵入性测试。Hepatology，2007，45(1)：242-249描述了肝纤维化的测量和治疗。WrightM.等在hepatitis C virus infection：a cross sectional and longitudinal study，Gut.2003；52(4)：5749中描述了肝纤维化的自然历史的测量和决定因素。这些文献中的每个都被全文引入本文作为参考。在一些实施方案中，肝纤维化是由肝炎、化学暴露、胆管梗阻、自体免疫疾病、血液从肝脏流出障碍、心脏和血管失调、α1-抗胰蛋白酶缺乏、血半乳糖水平高、血酪氨酸水平高、糖原贮积症、糖尿病、营养不良、Wilson疾病或血色素沉着症引起的。

在一个实施方案中，纤维性组织、纤维瘤或纤维变性形式的纤维化的水平被减少了超过约90％。在一个实施方案中，纤维化的水平被减少了至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％或至少2％。

在一个实施方案中，本文提供的化合物减少了纤维增生水平。肝纤维增生是引起细胞外基质成分在肝脏中过度沉积的被叫做纤维化的过程。在许多状况中观察到肝纤维增生，例如慢性乙型病毒性肝炎和丙肝、酒精性肝脏疾病、药物诱导的肝脏疾病、血色素沉着症、自体免疫性肝炎、Wilson疾病、原发性胆汁性肝硬化、硬化性胆管炎、肝血吸虫病及其它。在一个实施方案中，纤维增生水平被减少了超过约90％。在一个实施方案中，纤维增生水平被减少了至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％或至少2％。

在一个实施方案中，其中炎症细胞病灶也存在于小叶窦状隙中的小叶性肝炎的水平被减少了超过约99％或95％。在另一个实施方案中，小叶性肝炎的水平被减少了至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％、至少2％或至少1％。在另一个实施方案中，汇管桥接坏死的水平被减少了超过约90％。在另一个实施方案中，汇管桥接坏死的水平被减少了至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％、至少2％或至少1％。

在一个实施方案中，本发明提供治疗肝硬化的方法。在一些实施方案中，肝硬化的症状包括但不限于门静脉高压、异常神经功能、腹水(液体在腹腔中积累)、男性乳房肥大、咳血或呕血、手指变形(手掌的腱膜挛缩)、胆结石、毛发丧失、发痒、黄疸、肾衰竭、肝脑病、肌肉丧失、食欲不良、手掌变红、面颊中唾液腺肥大、睾丸萎缩、皮肤中有小的蜘蛛样静脉、虚弱、体重丧失、蜘蛛痣(放射出许多小分枝血管的中心小动脉)、脑病、和扑翼样震颤(扑动状震颤)。肝硬化的症状取决于严重程度和个体而变化。在一些实施方案中，轻度肝硬化可能根本不显示任何症状。

在一个实施方案中，肝硬化的原因是丙肝。在其它实施方案中，肝硬化的原因包括某些药物的使用、化学暴露、胆管梗阻、自体免疫疾病、血液从肝脏流出障碍(即肝静脉阻塞综合症)、心脏和血管失调、α1-抗胰蛋白酶缺乏、血半乳糖水平高、血酪氨酸水平高、糖原贮积症、糖尿病、营养不良、过多的铜(Wilson疾病)或铁(血色素沉着症)的遗传性积累。在一个实施方案中，肝硬化的起因是滥用酒精。

在一个实施方案中，本发明提供减少肝硬化水平的方法。在一个实施方案中，肝硬化的病理学特征是正常微观小叶结构的丧失，伴有纤维化和结节再生。测量肝硬化程度的方法是本领域熟知的。在一个实施方案中，肝硬化水平被减少了约5％-100％。在一个实施方案中，肝硬化水平在患者中被减少了至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％、至少45％、至少50％、至少55％、至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、或100％。

在一些实施方案中，治疗肝硬化的方法包括施用本发明提供的MMP抑制剂，条件是该MMP抑制剂不是TMI-005。

在一些实施方案中，本发明提供治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)的方法。原发性胆汁性肝硬化由肝脏内部的胆管炎症开始。该炎症阻碍了胆汁从肝脏流出；因此，胆汁停留在肝细胞中或外溢到血流中。随着炎症从胆管扩散到肝脏的其余部分，疤痕组织的网格发展到遍及肝脏。在一个实施方案中，所述方法用于治疗35到60岁的女性中的PBC。在一些实施方案中，PBC是由自体免疫病症引起的。在一个实施方案中，原发性胆汁性肝硬化伴随类风湿性关节炎、硬皮病或自体免疫性甲状腺炎发生。本发明提供的方法在原发性胆汁性肝硬化的一种或多种症状的治疗中是有用的。

在一个实施方案中，本发明提供治疗肝缺血再灌注损伤的方法。缺血可以由于数种病理学状况在肝脏中发生，例如肝移植、心源性休克或血液动力学休克、以及因为外伤或肿瘤而切除肝脏。当血液循环被重建(再灌注)，氧浓度的快速增加引起多种活性氧的形成，而这又引起肝细胞的广泛损伤(坏死和凋亡)，在肝脏中引起缺血再灌注(IR)损伤。在一些实施方案中，治疗肝缺血再灌注损伤的方法包括施用本发明提供的MMP抑制剂，条件是该MMP抑制剂不是ONO-4817。在一些实施方案中，治疗肝缺血再灌注损伤的方法包括施用RO-113-0830。

如本领域技术人员已知的，肝细胞的过度凋亡与肝纤维化和其它肝脏疾病相关。因此，预防或抑制肝细胞过度凋亡是急性和慢性肝脏疾病治疗中的一个重要组成部分。凋亡主要通过两个信号途径发生：死亡受体介导的外源性途径或线粒体介导的内源性途径。被称为死亡受体的细胞因子受体家族(例如肿瘤坏死因子受体1(TNF-R1)、Fas/CD95、以及肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体受体1和2(TRAIL-R1和TRAIL-R2))与它们的同源配体(TNF-、Fas配体(FasL)/CD95L、TRAIL)结合后，外源性途径在质膜上开始。参见Guicciardi等Gut，2005：54，1024-1033和Ghavami等，Med.Sci.Monit.，2005：11(11)：RA337-345。在一些实施方案中，本发明提供的MMP抑制剂通过预防或抑制凋亡而阻断肝细胞的损伤。在一些实施方案中，本发明提供的化合物抑制了α-Fas的信号级联。在一些实施方案中，本发明提供的化合物抑制了由TNF-α开始的信号级联。不受限于任何特定的理论，相信在一些实施方案中，通过本文提供的化合物预防或抑制肝细胞的过度凋亡，有助于减少急性和/或慢性肝脏疾病伴随的肝损伤。

5.4化合物的制备

在本发明提供的方法中使用的化合物，可以使用常规合成步骤制备，包括Bender等在美国专利号5,932,595中和Watanabe在美国专利号6,207,698和6,831,178中描述的方法。制备RO-113-0830的代表性方法在实施例1中描述。

5.5药物组合物制剂

本文提供的药物组合物包含治疗有效量的一种或多种本发明提供的可用于预防、治疗或改善肝脏疾病的一种或多种症状的化合物，和药学上可接受的载体。

所述化合物被配制为合适的药物制剂，例如溶液、悬浮液、片剂、分散片、丸剂、胶囊、粉末、持续释放制剂或酏剂供口服施用，或者在无菌的溶液或悬浮液中供肠胃外施用，以及透皮贴片制剂和干粉吸入剂。在一个实施方案中，使用本领域熟知的技术和步骤，将上面描述的化合物配制为药物组合物(参见例如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第20版，Mack Publishing，Easton PA(2000))。

在所述组合物中，有效浓度的一种或多种化合物或药学上可接受的衍生物，与合适的药物载体或运载体混合。在配制前，所述化合物可以如上所述衍生化为对应的盐、酯、酸、碱、溶剂化物、水合物或前药。所述化合物在组合物中的浓度是通过施用能有效治疗、预防或改善肝脏疾病的一种或多种症状的给药量。

在一个实施方案中，所述组合物被配制供单一剂量施用。为了配制组合物，以缓解或改善被治疗病况的有效浓度，将重量百分比的化合物溶解、悬浮、分散、或混合在所选的运载体中。适合施用本文提供的化合物的药物载体或运载体，包括本领域技术人员已知的任何适合特定施用模式的载体。

另外，所述化合物可以被配制为组合物中的唯一药物学活性成分，或者可以与其它活性成分组合。脂质体悬浮液，包括组织靶向脂质体，例如肿瘤靶向脂质体，也可以适合作为药学上可接受的载体。这些可以依照本领域技术人员已知的方法制备。例如，脂质体制剂可以如本领域已知般制备。简单地说，脂质体例如多层囊泡(MLV′s)，可以通过在烧瓶内壁上干燥鸡蛋磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸(摩尔比7∶3)而形成。加入本发明提供的化合物在缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲液(PBS)中的溶液，并摇晃烧瓶直到脂质膜分散。洗涤所得到的囊泡，以去除未装入的化合物，离心沉淀，然后在PBS中重悬。

活性化合物以对治疗的患者足以发挥治疗有用效果而不存在不希望的副作用的量，被包含在药学上可接受的载体中。治疗有效浓度可以凭经验决定，通过在本领域已知的体外和体内系统中测试化合物，然后从中推出对人类的剂量。

药物组合物中活性化合物的浓度，将取决于活性化合物的吸收、失活和排泄速率，化合物的物理化学性质，剂量时间表，施用的量，以及本领域技术人员已知的其它因素。例如，给药量是足以改善肝脏疾病的一种或多种症状的。

在一个实施方案中，治疗有效剂量应当产生约0.1ng/ml到约50-100μg/ml的活性成分血清浓度。药物组合物，在一些实施方案中，应当提供每天每千克体重约0.001mg到约2000mg化合物的剂量。药物剂量单位形式被制备为每剂量单位形式提供约1mg到约1000mg和约10到约500mg的主要活性成分或主要成分的组合。

所述活性成分可以被一次性施用，也可以被分成许多较小的剂量，间隔时间施用。可以理解，精确剂量和治疗的持续时间是被治疗疾病的函数，而且可以使用已知的测试方案凭经验决定，或者通过体内或体外测试数据推出。应当注意到，浓度和剂量值也可以随着需要缓解的状况的严重程度而变化。应当进一步理解，对任何具体患者，具体剂量方案应当依照个人需要和施用或监督组合物的施用的人的专业判断，随时间而调节，而且本文阐述的浓度范围仅仅是示范性的，并不意在限制权利要求的组合物的范围或实践。

药学上可接受的衍生物包括酸、碱、盐、酯、水合物、溶剂化物和前药形式。选择衍生物，使得其药物动力学性质比相应的中性化合物优越。

因此，有效浓度或数量的本文所述一种或多种化合物或其药学上可接受的衍生物，与供全身、局部或区域施用的合适药物载体或运载体混合，以形成药物组合物。包含有效治疗或预防肝脏疾病或改善其一种或多种症状的量的化合物。所述组合物中活性化合物的浓度将取决于活性化合物的吸收、失活和排泄速率，剂量时间表，施用的量，具体制剂和本领域技术人员已知的其它因素。

所述组合物将通过合适的途径被施用，包括口服、肠胃外、直肠、局部和区域。对于口服施用，可以使用胶囊和片剂。所述组合物是液体、半流体或固体形式，而且以适合每种施用途径的方式被配制。在一个实施方案中，施用模式包括肠胃外和口服施用模式。在一些实施方案中，预期是口服施用。

用于肠胃外、皮内、皮下或局部应用的溶液或悬浮液，可以包含以下任何成分：无菌稀释剂，例如注射用水、盐溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇、二甲基乙酰胺、或其它合成溶剂；抗微生物剂，例如苯甲醇和对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂，例如抗坏血酸和亚硫酸氢钠；螯合剂，例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲液，例如醋酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐；以及张力调节剂，例如氯化钠或右旋糖。肠胃外制剂可以被封装在安瓿、一次性注射器、或者由玻璃、塑料或其它合适的材料制造的单一剂量或多次剂量的小瓶中。

在化合物溶解性不足的情况下，可以使用增溶化合物的方法。这样的方法是这一领域技术人员已知的，包括但不限于使用助溶剂例如二甲基亚砜(DMSO)，使用表面活性剂例如TWEEN

或在碳酸氢钠水溶液中溶解。

混合或添加所述化合物后，得到的混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等。得到的混合物的形式取决于多种因素，包括预期的施用模式和所述化合物在所选载体或运载体中的溶解性。所述有效浓度足以改善治疗的疾病、病症或状况的症状，可以凭经验决定。

为施用于人类和动物，以单位剂型提供所述药物组合物，例如片剂、胶囊、丸剂、粉末、颗粒、无菌的肠胃外溶液或悬浮液、和口服溶液或悬浮液、以及油-水乳液，其中包含了适量的化合物或其药学上可接受的衍生物。药学上的治疗活性化合物及其衍生物，以单位剂型或多次剂型被配制和施用。在这里，单位剂型指适合人类和动物患者并如本领域已知独立包装的物理上不连续的单位。每个单位剂量包含预先确定量的足以产生希望治疗效果的治疗活性化合物，与需要的药物载体、运载体或稀释剂组合。单位剂型的实例包括安瓿和注射器，以及独立包装的片剂或胶囊。单位剂型可以被部分或多倍施用。多次剂型是多个同样的单位剂型被包装在单一容器中，以分开的单位剂型施用。多次剂量的实施例包括小瓶、瓶装片剂或胶囊、或者瓶装品脱或加仑。因此，多次剂型是没有在包装中分开的多个单位剂量。

也可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的实施例包括，包含了本发明提供的化合物的固体疏水性聚合物的半透性基质，其中所述基质是成形的商品形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的实施例包括聚酯、水凝胶(例如聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯、L-谷氨酸和乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯、可降解的乳酸-羟基乙酸共聚物例如LUPRON DEPOT^TM(由乳酸-羟基乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成的可注射微球体)、和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。聚合物例如乙烯-醋酸乙烯和乳酸-羟基乙酸，能够在100天内释放分子，而一些水凝胶释放蛋白的时间段较短。当装入的化合物在体内停留很长时间时，在37℃暴露于水分导致它们可能变性或聚合，使得生物活性的丧失并且它们结构的可能改变。根据相关作用机制，可以设计合理策略以实现稳定性。例如，如果发现聚合机制是通过硫代-二硫化物交换而形成分子间S--S键，那么可以通过修饰巯基残基、从酸性溶液中冻干、控制含水量、使用适当的添加剂、和开发特定聚合物基质组合物，以实现稳定性。

可以制备包含0.005％到100％的活性成分、其余是无毒载体的剂型或组合物。对于口服施用，通过加入任何常用的赋形剂，例如，医药级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、滑石、纤维素衍生物、交联羧甲基纤维素钠、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁、或糖精钠，形成药学上可接受的无毒组合物。这样的组合物包括溶液、悬浮液、片剂、胶囊、粉末、和持续释放制剂，例如但不限于植入物和微胶囊给药系统，以及可生物降解的生物相容的聚合物，例如胶原、乙烯醋酸乙烯、聚酸酐、聚羟基乙酸、聚原酸酯、聚乳酸及其它。制备这些组合物的方法是本领域技术人员已知的。预期的组合物可以包含0.001％-100％的活性成分，在一个实施方案中，包含0.1-85％或75-95％的活性成分。

所述活性化合物或药学上可接受的衍生物，可以与保护化合物使其不会被身体快速排除的载体一起制备，例如延时释放制剂或包衣。

所述组合物可以包含其它活性化合物，以获得希望的性质组合。如这里所述，本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物，也可以为了治疗或预防目的，与一般领域中已知的对治疗肝脏疾病具有价值的另一种药剂一起被有利地施用。可以理解，这样的联合治疗，构成了本发明提供的组合物和治疗方法的另一方面。

5.5.1供口服施用的组合物

口服药物剂型是固体、凝胶或液体。固体剂型是片剂、胶囊、颗粒和散装粉末。口服片剂的类型包括压制的、可咀嚼的锭剂和可以包肠溶衣、糖衣、或薄膜衣的片剂。胶囊可以是硬胶囊或软明胶胶囊，而颗粒和粉末可以与本领域技术人员已知的其它成分联合，以非泡腾或泡腾形式提供。

在一些实施方案中，制剂是固体剂型，例如胶囊或片剂。片剂、丸剂、胶囊、含片等，可以包含以下任何成分或类似性质的化合物：粘合剂；稀释剂；崩解剂；润滑剂；助流剂；甜味剂；和调味剂。

粘合剂的实施例包括微晶纤维素、黄蓍胶、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶溶液、蔗糖和淀粉糊。润滑剂包括滑石、淀粉、硬脂酸镁或钙、石松粉和硬脂酸。稀释剂包括例如乳糖、蔗糖、淀粉、高岭土、盐、甘露醇和磷酸氢钙。助流剂包括但不限于二氧化硅胶体。崩解剂包括交联羧甲基纤维素钠、羟基乙酸淀粉钠、褐藻酸、玉米淀粉、土豆淀粉、膨润土、甲基纤维素、琼脂和羧甲基纤维素。着色剂包括例如任何批准认证的水溶性FD和C染料，及其混合物；以及悬浮在氧化铝水合物中的水不溶性FD和C染料。甜味剂包括蔗糖、乳糖、甘露醇、和人造甜味剂例如糖精，以及任意数量的喷雾干燥的调味剂。调味剂包括从植物例如水果中萃取的天然调味剂，和产生愉快感觉的化合物的合成混合物，例如但不限于薄荷和水杨酸甲酯。润湿剂包括丙二醇单硬脂酸酯、山梨醇酐单油酸酯、二甘醇单月桂酸酯、和聚氧乙烯月桂醚。肠溶衣包括脂肪酸、脂肪、蜡、虫胶、氨化虫胶、和邻苯二甲酸醋酸纤维素。薄膜衣包括羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000、和邻苯二甲酸醋酸纤维素。

如果希望口服施用，所述化合物可以在能在胃的酸性环境中保护它的组合物中被提供。例如，组合物可以被配制在肠溶衣中，肠溶衣在胃中保持它的完整性，而在肠中释放活性化合物。组合物也可以与抗酸剂或其它这样的成分联合配制。

当剂量单位形式是胶囊时，除了以上类型的材料外，它还可以包含液体载体，例如脂肪油。另外，剂量单位形式可以包含改变剂量单位物理形式的各种其它材料，例如糖衣和其它肠溶剂包衣。所述化合物也可以作为酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂、喷雾剂、咀嚼胶等的组分施用。除了活性化合物外，糖浆还可以包含作为甜味剂的蔗糖和一些防腐剂、染料和色素、及调味剂。

所述活性材料也可以与不损害所期望的作用的其它活性材料或补充所期望的作用的材料混合，例如抗酸剂、H2阻断剂和利尿剂。所述活性成分是如本文描述的化合物或其药学上可接受的衍生物。较高浓度的，多达重量的约98％的所述活性成分可以被包含。

片剂中包含的药学上可接受的载体是粘合剂、润滑剂、稀释剂、崩解剂、着色剂、调味剂和润湿剂。肠溶衣片剂因为肠溶包衣而有抵抗胃酸的作用，并在中性或碱性的肠中溶解或崩解。糖衣片剂是压制的片剂，应用了不同层的药学上可接受的物质。薄膜衣片剂是压制的片剂，包有聚合物或其它合适的包衣。多次压制片剂是压制的片剂，使用上述药学上可接受的物质，通过超过一个压制循环来制造的。着色剂也可以在以上剂型中使用。调味剂和甜味剂在压制的片剂、糖衣片剂、多次压制的片剂和可咀嚼的片剂中使用。调味剂和甜味剂在可咀嚼的片剂和锭剂的形成中是特别有用的。

液体口服剂型包括水溶液、乳液、悬浮液、溶液、和/或由非泡腾颗粒重新形成的悬浮液和由泡腾颗粒重新形成的泡腾制剂。水溶液包括例如酏剂和糖浆。乳液是水包油或油包水的。

酏剂是澄清的甜的水醇制剂。在酏剂中使用的药学上可接受的载体包括溶剂。糖浆是糖例如蔗糖的浓缩水溶液，而且可以包含防腐剂。乳液是一种液体以小珠形式散布在另一种液体中的两相系统。在乳液中使用的药学上可接受的载体是非水液体、乳化剂和防腐剂。悬浮液使用药学上可接受的悬浮剂和防腐剂。在重新形成液体口服剂型的非泡腾颗粒中，使用的药学上可接受的物质包括稀释剂、甜味剂和润湿剂。在重新形成液体口服剂型的泡腾颗粒中，使用的药学上可接受的物质包括有机酸和二氧化碳源。以上所有剂型中都使用着色剂和调味剂。

溶剂包括甘油、山梨糖醇、酒精和糖浆。防腐剂的实施例包括甘油、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、苯甲酸、苯甲酸钠和酒精。在乳液中使用的非水液体的实施例包括矿物油和棉籽油。乳化剂的实施例包括明胶、阿拉伯树胶、黄蓍胶、膨润土，和表面活性剂例如聚氧乙烯山梨醇酐单油酸酯。悬浮剂包括羧甲基纤维素钠、果胶、黄蓍胶、硅酸镁铝、和阿拉伯树胶。稀释剂包括乳糖和蔗糖。甜味剂包括蔗糖、糖浆、甘油、和人造甜味剂例如糖精。润温剂包括丙二醇单硬脂酸酯、山梨醇酐单油酸酯、二甘醇单月桂酸酯、和聚氧乙烯月桂醚。有机酸包括柠檬酸和酒石酸。二氧化碳源包括碳酸氢钠和碳酸钠。着色剂包括任何批准认证的水溶性FD和C染料，及其混合物。调味剂包括从植物例如水果中萃取的天然调味剂，和产生愉快味觉的化合物的合成混合物。

对于固体剂型，在例如碳酸丙烯酯、植物油、或甘油三酸酯中的溶液或悬浮液可以被装入明胶胶囊。这样的溶液以及其制剂和封装，在美国专利号4,328,245；4,409,239；和4,410,545中公开。对于液体剂型，溶液，例如聚乙二醇中的溶液，可以用足量的药学上可接受的液体载体例如水稀释，以便于测量施用。

或者，液体或半固体口服制剂，可以通过在植物油、乙二醇、甘油三酸酯、丙二醇酯(例如碳酸丙烯酯)和其它这样的载体中溶解或分散所述活性化合物或盐，并把这些溶液或悬浮液装入硬或软的明胶胶囊壳中来制备。其它有用的制剂，包括但不限于下述制剂，其包含本发明提供的化合物、二烷基化的单-或多-烷撑乙二醇(包括但不限于1，2-二甲氧基甲烷、二甘醇二甲醚、三甘醇二甲醚、四甘醇二甲醚、聚乙二醇-350-二甲醚、聚乙二醇-550-二甲醚、聚乙二醇-750-二甲醚，其中350、550和750指聚乙二醇的近似平均分子量)，以及一种或多种抗氧化剂(例如丁羟甲苯(BHT)、丁羟苯甲醚(BHA)、没食子酸丙酯、维生素E、对苯二酚、羟基香豆素、乙醇胺、卵磷脂、脑磷脂、抗坏血酸、苹果酸、山梨糖醇、磷酸、硫代二丙酸及其酯、和二硫代氨基甲酸盐)。

其它制剂包括但不限于包含药学上可接受的缩醛的含水醇溶液。在这些制剂中使用的醇，是任何药学上可接受的具有一个或多个羟基的易与水混合的溶剂，包括但不限于丙二醇和乙醇。缩醛包括但不限于低碳数烷基醛的二(低碳数烷基)缩醛，例如乙醛二乙缩醛。

在所有的实施方案中，为了改变或维持活性成分的溶解，片剂和胶囊制剂可以如本领域技术人员已知般包衣。因此，举例来说，它们可以被通常可被肠消化的包衣包裹，例如水杨酸苯酯、蜡和邻苯二甲酸醋酸纤维素。

5.5.2注射剂、溶液和乳液

本文也预期了肠胃外施用，通常为皮下、肌肉或静脉注射。注射剂可以用常规形式制备成液体溶液或悬浮液、适合在注射前在液体中转变成溶液或悬浮液的固体形式、或乳液。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。另外，如果希望的话，将被施用的药物组合物也可以包含少量无毒辅助物质，例如润湿或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解性增强剂、和其它这样的试剂，例如，醋酸钠、山梨醇酐单月桂酸酯、三乙醇胺油酸盐和环糊精。本发明也预期缓释或者持续释放系统的植入，使剂量维持恒定水平。简单地说，本发明提供的化合物被分散在固体内部基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑过的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、硅碳酸酯共聚物、亲水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇、和交联的部分水解的聚醋酸乙烯，其被外部聚合膜包围，例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/醋酸乙烯共聚物，硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯和醋酸乙烯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯离聚物、丁基橡胶表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/醋酸乙烯/乙烯醇三元共聚物、和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物，其不能在体液中溶解。在释放速率控制步骤中，化合物通过外部聚合膜扩散。在这样的肠胃外组合物中包含的活性化合物的百分比，高度取决于其具体性质，以及化合物的活性和患者的需求。

组合物的肠胃外施用包括静脉、皮下和肌肉施用。供肠胃外施用的制剂包括准备供注射的无菌溶液、无菌干燥的可溶产品例如冻干粉(其在使用前与溶剂结合)，包括皮下注射片剂、准备供注射的无菌悬浮液、无菌的干燥不可溶产品(易于在使用前与运载体结合)、和无菌的乳液。溶液可以是水溶液或非水溶液。

如果静脉施用，合适的载体包括生理盐水或磷酸盐缓冲液(PBS)，和包含增稠剂和增溶剂的溶液，例如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇，及其混合物。

在肠胃外制剂中使用的药学上可接受的载体，包括水性运载体、非水性运载体、抗微生物剂、等渗剂、缓冲液、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮和分散剂、乳化剂、多价螯合剂或螯合剂，和其它药学上可接受的物质。

水性运载体的实施例包括氯化钠注射液、Ringers注射液、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液、右旋糖和乳酸盐Ringers注射液。非水性肠胃外运载体包括来自植物的不挥发性油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。以多次剂量容器包装的肠胃外制剂，必须添加细菌抑制浓度或真菌抑制浓度的抗微生物剂，包括苯酚或甲酚、汞剂、苯甲醇、三氯叔丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵、和苄索氯胺。等渗剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲液包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨醇酯80(TWEEN

80)。金属离子的多价螯合剂或螯合剂包括EDTA。药物载体也包括易与水混合的运载体如酒精、聚乙二醇和丙二醇，和调节pH值的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸、或乳酸。

调节有药学活性的化合物的浓度，以便注射剂提供产生所期望药理学效果的有效量。如本领域已知的，精确的剂量取决于患者或动物的年龄、重量和状况。

单位剂量的肠胃外制剂，被包装在安瓿、小瓶或带针头的注射器中。如本领域已知并实践的，供肠胃外施用的所有制剂都必须是无菌的。

例证性的，包含活性化合物的无菌水溶液的静脉或动脉输液，是有效的施用模式。另一个实施方案是，包含活性材料的无菌水溶液或油溶液或悬浮液，其被注射以产生期望的药理学效果。

注射剂被设计成供区域和全身施用。在一些实施方案中，治疗有效剂量被配制为包含相对于被治疗的组织，浓度至少约0.1％w/w直至约90％w/w或更多，或超过1％w/w的所述活性化合物。活性成分可以被一次性施用，也可以被分成许多较小的剂量，间隔时间施用。可以理解，精确剂量和治疗的持续时间是被治疗组织的函数，而且可以使用已知的测试方案凭经验决定，或者通过体内或体外测试数据推出。应当注意，浓度和剂量值也可以随着被治疗个体的年龄而变化。应当进一步理解，对任何具体患者，具体剂量方案应当依照个人需要和施用或监督制剂的施用的人的专业判断，随时间而调节，而且本文阐述的浓度范围仅仅是示范性的，并不意在限制权利要求的制剂的范围或实践。

所述化合物可以用微粉化或其它合适的形式悬浮，或者可以被衍生化，以制备更可溶的活性产品，或制备前药。得到的混合物的形式取决于多种因素，包括预期的施用模式，以及所述化合物在所选的载体或运载体中的溶解性。有效浓度足以改善状况的症状，而且可以凭经验决定。

5.5.3冻干粉

冻干粉也是本发明感兴趣的，它们可以重新形成溶液、乳液和其它混合物以被施用。它们也可以被重组并配制成固体或凝胶。

通过将本文提供的化合物或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂，制备无菌的冻干粉。溶剂可以包含赋形剂，其改善了粉末或由粉末制备的重组溶液的稳定性或其它药理学组分。可以使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其它适合的试剂。溶剂也可以包含缓冲液，例如柠檬酸盐、磷酸钠或钾、或本领域技术人员已知的其它这样的缓冲液，pH值约为中性。溶液随后无菌过滤，接着在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，提供期望的制剂。通常，得到的溶液将被分配到小瓶中冻干。每个小瓶将包含单一剂量(10-1000mg或100-500mg)或多次剂量的化合物。冻干粉可以在适当条件下储存，例如在约4℃到室温。

用注射用水复原该冻干粉，提供了在肠胃外施用中使用的制剂。对复原而言，在每毫升无菌水或其它合适的载体中，加入约1-50mg、5-35mg或约9-30mg冻干粉。精确数量取决于所选的化合物。这样的量可以凭经验决定。

5.5.4局部施用

局部用的混合物按照对区域和全身施用的描述来制备。得到的混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等，而且被配制为乳膏、凝胶、软膏、乳液、溶液、酏剂、洗剂、悬浮液、酊剂、糊剂、泡沫剂、气溶胶、冲洗剂、喷雾剂、栓剂、绷带、皮肤贴片、或者适合局部施用的其它任何制剂。

所述化合物或其药学上可接受的衍生物，可以被配制为供局部应用的气溶胶，例如通过吸入(参见例如美国专利号4,044,126、4,414,209和4,364,923，其中描述了供递送可用于治疗炎症性疾病特别是哮喘的类固醇气溶胶)。这些供呼吸道施用的制剂，可以单独或与惰性载体例如乳糖组合，以气溶胶或溶液形式供喷雾器使用，或者以微细粉形式供吹入法使用。在这样的情况下，制剂的微粒直径将小于50微米或小于10微米。

所述化合物可以被配制供区域或局部应用，例如供皮肤和粘膜局部应用，例如在眼睛中，以凝胶、乳膏和洗剂形式，应用于眼睛或者供脑池内或脊柱内应用。局部施用预期是透皮给药，以及对眼睛或粘膜的施用，或者是吸入治疗。所述活性化合物单独或与其它药学上可接受的赋形剂组合的鼻溶液，也可以被施用。

这些溶液，特别是要供眼科用途的那部分，可以用适当的盐配制成0.01％-10％的等渗溶液，pH值约5-7。

5.5.5供其它施用途径的组合物

本发明也包括其它施用途径，例如局部应用、透皮贴片和直肠施用。

举例来说，供直肠施用的药物剂型是具有全身效果的直肠栓剂、胶囊和片剂。本发明使用的直肠栓剂指供插入直肠的固体，它在体温下融化或变软，释放出一种或多种药学或治疗上的活性成分。在直肠栓剂中使用的药学上可接受的物质是基质或运载体、和升高熔点的试剂。基质的实施例包括可可脂(可可油)、甘油-明胶、聚乙二醇(聚氧乙二醇)、以及脂肪酸单甘油酯、脂肪酸二甘油酯和脂肪酸三甘油酯的适当混合物。可以使用多种基质的组合。升高栓剂熔点的试剂包括鲸蜡和蜡。直肠栓剂可以通过压制方法或模制来制备。在一些实施方案中，直肠栓剂的重量是约2到3克。

使用与供口服施用的制剂相同的药学上可接受的物质，通过相同的方法制造供直肠施用的片剂和胶囊。

5.5.6持续释放的组合物

活性成分例如本文提供的化合物可以通过控制释放方式或本领域普通技术人员熟知的递送装置来施用。实施例包括但不限于美国专利号3,845,770；3,916,899；3,536,809；3,598,123；4,008,719；5,674,533；5,059,595；5,591,767；5,120,548；5,073,543；5,639,476；5,354,556；5,639,480；5,733,566；5,739,108；5,891,474；5,922,356；5,972,891；5,980,945；5,993,855；6,045,830；6,087,324；6,113,943；6,197,350；6,248,363；6,264,970；6,267,981；6,376,461；6,419,961；6,589,548；6,613,358和6,699,500中描述的那些，它们每个都被引入本文作为参考。这样的剂型可以用来提供一种或多种活性成分的缓慢或控制释放，使用例如羟丙甲基纤维素、其它聚合物基质、凝胶、可渗透膜、渗透系统、多层包衣、微粒、脂质体、微球体或它们的组合，以不同的比例提供希望的释放特征。本领域普通技术人员已知的合适的控制释放制剂，包括本文描述的那些，可以被容易地选择，与本发明提供的活性成分一起使用。因此，提供的组合物包含适合口服施用的单一单位剂型，例如但不限于片剂、胶囊、软胶囊和囊片，它们适合控制释放。

所有控制释放的药物产品都具有共同目标：改善药物的治疗，超过非控释的对应药物所能达到的疗效。理想地，最佳设计的控制释放制剂在医学治疗中的使用特征是应用最小量的药物，在最短的时间里治愈或控制病况。控制释放制剂的优点包括延长药物的活性、减少给药频率，并增加患者的顺应性。另外，控制释放制剂可以用来影响作用的起效时间或其它特征，例如药物的血液水平，并因此可以影响副作用(例如不良作用)的发生。

大多数控制释放制剂被设计为最初释放一定量的药物(活性成分)，其迅速地产生希望的治疗效果，并逐步和连续地释放其它量的药物，以在延长的时间段内保持这个水平的治疗或预防效果。为了在体内保持这一恒定的药物水平，药物必须从剂型中以一定速率释放，该速率将替换被新陈代谢和从体内排出的药物量。活性成分的控制释放可以被各种条件刺激，包括但不限于pH、温度、酶、水、或其它生理条件或化合物。

在一些实施方案中，可以使用静脉注入、可植入的渗透泵、透皮贴片、脂质体、或其它施用模式来施用药物。在一个实施方案中，可以使用泵(参见，Sefton，CRC Crit.Ref.Biomed Eng.14：201(1987)；Buchwald等，Surgery 88：507(1980)；Saudek等，N.Engl.J.Med.321：574(1989))。在另一个实施方案中，可以使用聚合材料。在又一个实施方案中，控释系统可以被放置在患者中由专业技术人员确定的适当位置，即因此仅仅需要全身剂量的一小部分(参见例如Goodson，Medical Applications of Controlled Release，第2卷，115-138页(1984))。其它控释系统在Langer的综述(Science 249：1527-1533(1990))中有论述。活性成分可以散布在固体内部基质中，例如聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸丁酯、增塑或未增塑过的聚氯乙烯、增塑的尼龙、增塑的聚对苯二甲酸乙二醇酯、天然橡胶、聚异戊二烯、聚异丁烯、聚丁二烯、聚乙烯、乙烯-醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、硅碳酸酯共聚物、亲水聚合物例如丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的水凝胶、胶原、交联聚乙烯醇和交联的部分水解的聚醋酸乙烯，其被外部聚合膜包围，例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯/丙烯共聚物、乙烯/丙烯酸乙酯共聚物、乙烯/醋酸乙烯共聚物、硅橡胶、聚二甲基硅氧烷、氯丁橡胶、氯化聚乙烯、聚氯乙烯、氯乙烯和醋酸乙烯共聚物、偏二氯乙烯、乙烯和丙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯离聚物、丁基橡胶表氯醇橡胶、乙烯/乙烯醇共聚物、乙烯/醋酸乙烯/乙烯醇三元共聚物、和乙烯/乙烯氧基乙醇共聚物，其不能在体液中溶解。然后，在释放速率控制步骤中，活性成分通过外部聚合膜扩散。在这样的肠胃外组合物中，活性成分的百分比高度取决于其具体性质和患者的需求。

5.5.7靶向制剂

本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物，也可以被配制成靶向特定的组织、受体、或者待治疗患者的其它身体区域。许多这样的靶向方法是本领域技术人员熟知的。所有这样的靶向方法都可以在本发明中被预期在本发明组合物中使用。对于靶向方法的非限制性实施例，参见例如美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874。

在一个实施方案中，脂质体悬浮液，包括组织靶向脂质体，例如肿瘤靶向脂质体，也可以适合作为药学上可接受的载体。这些可以依照本领域技术人员已知的方法来制备。例如，脂质体制剂可以如美国专利号4,522,811中描述的制备。简单地说，脂质体例如多层囊泡(MLV′s)，可以通过在烧瓶内壁上干燥鸡蛋磷脂酰胆碱和脑磷脂酰丝氨酸(摩尔比7∶3)而形成。加入本发明提供的化合物在缺乏二价阳离子的磷酸盐缓冲液(PBS)中的溶液，并摇晃烧瓶直到脂质膜分散。洗涤得到的囊泡，以去除未装入的化合物，通过离心沉淀，然后在PBS中重悬。

5.5.8剂量和单位剂型

在人类治疗学中，医生将决定剂量，他最适当地依照预防或治疗性处理并依照被治疗患者的年龄、体重、疾病阶段和特有的其它因素来考虑。一般来说，剂量对于成人是每天约1到约1000mg，或每天约5到约250mg，或每天约10到50mg。在一些实施方案中，剂量对于每个成年人每天约5到约400mg或每天25到200mg。每天约50到约500mg的给药速率也是被预期的。

在一些实施方案中，将有效预防或治疗肝脏疾病或其一种或多种症状的化合物或组合物的量，将随疾病或状况的性质和严重程度，以及活性成分的施用途径而变化。频率和剂量也将依照每个患者特有的因素而变化，取决于施用的具体治疗(例如治疗剂或预防剂)，病症、疾病或病状的严重程度，施用途径，以及患者的年龄、身体、重量、反应和过往病史。有效剂量可以由源自体外或动物模型测试系统的剂量反应曲线推出。

组合物的代表性剂量包括每千克患者或样本重量的毫克或微克量的MMP抑制剂(例如，每千克约10微克到每千克约50毫克，每千克约100微克到每千克约25毫克，或每千克约100微克到每千克约10毫克)。在一些实施方案中，对患者施用的剂量是0.20mg/kg和2.00mg/kg患者体重之间，或0.30mg/kg和1.50mg/kg患者体重之间。

在一些实施方案中，对这里描述的病状，本发明描述的MMP抑制剂的每日推荐剂量范围在每天约0.1mg到约1000mg范围内，作为单一的一日一次剂量给予，或作为分开的剂量在一天期间给予。在一个实施方案中，每日剂量每天以等分的剂量施用两次。具体地说，每日剂量范围应当是每天约10mg到约200mg，更加具体地，在每天约10mg和约150mg之间，或甚至更加具体地，在每天约25和约100mg之间。在一些情况下，在本发明公开的范围外使用活性成分的剂量可能是必要的，这对本领域普通技术人员将是显然的。此外，临床医师或治疗医生结合患者的反应，将懂得怎样和何时中断、调整或终止治疗。

不同的治疗有效量可以被应用于不同的疾病和病状，如本领域普通技术人员将轻易了解的。类似地，足以预防、控制、治疗或改善这样的病症，但不足以引起或足以减少本文描述的化合物伴随的不良作用的量，也包含于上述给药量和给药频率时间表。此外，当患者被施用了多重剂量的本发明描述的化合物时，所有的剂量并不需要是相同的。例如，可以增加对患者施用的剂量，以提高化合物的预防或治疗效果，也可以减少对患者施用的剂量，以减少特定患者经历的一种或多种副作用。

在一个实施方案中，在患者中施用以预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状的本发明所述化合物的剂量，是0.1mg/kg、1mg/kg、2mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg、或15mg/kg患者体重或更多。在另一个实施方案中，在患者中施用预防、治疗、控制或改善病症或其一种或多种症状的本发明提供的化合物的剂量，是0.1mg到200mg、0.1mg到100mg、0.1mg到50mg、0.1mg到25mg、0.1mg到20mg、0.1mg到15mg、0.1mg到10mg、0.1mg到7.5mg、0.1mg到5mg、0.1到2.5mg、0.25mg到20mg、0.25到15mg、0.25到12mg、0.25到10mg、0.25mg到7.5mg、0.25mg到5mg、0.5mg到2.5mg、1mg到20mg、1mg到15mg、1mg到12mg、1mg到10mg、1mg到7.5mg、1mg到5mg、或1mg到2.5mg单位剂量。

在一些实施方案中，可以从本发明提供的MMP抑制剂和/或半胱天冬酶抑制剂的一个或多个负荷剂量开始进行治疗或预防，接着是一个或多个维持剂量。在这样的实施方案中，负荷剂量可以是例如每天约60到约400mg或每天约100到约200mg，一天到五星期。负荷剂量后可以是一个或多个维持剂量。在另一个实施方案中，各个维持剂量可以独立地是约每天约0.1mg到约200mg，在一个实施方案中，每天约5mg和约150mg之间，在另一个实施方案中，每天约10和约80mg之间，在另一个实施方案中，每天约10mg到约200mg，在另一个实施方案中，每天约25mg和约150mg之间，或在又一个实施方案中，每天约25和约80mg之间。维持剂量可以每天施用，而且可以作为单一剂量或分开剂量施用。

在一些实施方案中，可以施用一剂本发明提供的MMP抑制剂，以在患者的血液或血清中达到活性成分的稳定浓度。稳定浓度可以通过依照技术人员可用的测量技术来测定，或可以基于患者的物理特征，例如身高、体重和年龄。在一些实施方案中，施用足量的本发明提供的化合物，以在患者的血液或血清中达到稳定浓度约300到约4000ng/mL、约400到约1600ng/mL，或约600到约1200ng/mL。可以施用负荷剂量一到五天，以达到稳定的血液或血清浓度约1200到约8000ng/mL或约2000到约4000ng/mL。可以施用维持剂量，以在患者的血液或血清中达到稳定浓度约300到约4000ng/mL，约400到约1600ng/mL，或约600到约1200ng/mL。

在一些实施方案中，同样化合物可以重复施用，而且可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月施用。在其它实施方案中，同样的预防或治疗剂可以重复施用，而且可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月施用。

在某些方面，本发明提供的是单位剂量，以适合施用的形式包含化合物或其药学上可接受的衍生物。这样的形式在上文中被详细描述。在一些实施方案中，单位剂量包含1到1000mg、5到250mg或10到50mg的活性成分。在特定的实施方案中，所述单位剂量包含约1、5、10、25、50、100、125、250、500或1000mg的活性成分。这样的单位剂量可以依照本领域技术人员熟悉的技术制备。

5.5.9制造的商品

所述化合物或药学上可接受的衍生物可以被包装为制造的商品，其包含包装材料、用于治疗、预防或改善肝脏疾病伴随的一种或多种症状的本发明提供的化合物或其药学上可接受的衍生物、和标示化合物或其药学上可接受的衍生物是用于治疗、预防或改善肝脏疾病的一种或多种症状的标签。

本发明提供的制造的商品包括包装材料。在包装药物产品中使用的包装材料是本领域技术人员熟知的。参见例如美国专利号5,323,907、5,052,558和5,033,252。药物包装材料的实施例包括但不限于吸塑包装、瓶子、管子、吸入器、泵、袋子、小瓶、容器、注射器、瓶子、以及适合所选制剂及预期施用和治疗模式的任何包装材料。本发明包括所提供化合物和组合物的各种制剂。

5.6化合物活性的评估

所述化合物的生物活性可以通过本领域技术人员已知的方法证明。举例来说，Neil Kaplowitz在American Association for the Study of Liver Diseases(2006)公开的Mechanisms in Liver Injury and Emerging Therapeutics中描述了急性肝损伤的小鼠模型，它被全文引入本文作为参考。

TNF-α是在多种急性和慢性肝脏疾病中涉及的诱导肝损伤的细胞因子，例如慢性HCV和急性肝功能衰竭。测试药理学试剂针对TNF-α诱导损伤的一个代表性体内模型是小鼠的TNF-α/D-Gal肝损伤模型。在这个模型中，用TNF-α/D-Gal处理小鼠，并施用化合物以评估其保护肝免于损伤的能力。化合物在用TNF-α/D-Gal处理之前、同时或之后施用，并接着约6小时的时间。让这个模型持续度过6小时是用来检测化合物治疗导致的存活改善。

多种结果测量值被用来进行这种评估。其中之一是血液中肝酶ALT水平的测量值。在患有各种肝脏疾病的患者的血液中，常规观察到ALT水平升高。ALT测量是对于患者肝脏疾病程度的非常普遍且相关的临床检验测试。另一个测量值包括肝损伤的总评估和组织学评估。肝损伤程度可以通过由经训练的观察者检查为显微镜观察制备和评估的肝样本来分级。在一些实施方案中，肝损伤可以严重到足以致死。在一些实施方案中，如通过这些参数所检测的，本发明所述化合物对TNF-α/D-Gal诱导的肝损伤有保护作用。在一些实施方案中，如通过这些参数所检测的，本发明所述化合物对Fas诱导的肝损伤有保护作用。在一些实施方案中，本发明提供的化合物在胆总管结扎模型中显示减少肝损伤和肝纤维化。

肝损伤的其它模型包括LPS/D-Gal模型、α-Fas诱导的肝损伤模型和肝损伤的ConA模型。这些模型也与人类疾病相关。这三种模型是彼此互补的。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物在HCV复制子测试中显示出抑制HCV的复制。

6.联合治疗

在一些实施方案中，本发明提供的MMP抑制剂与一种或多种已知治疗肝脏疾病的第二药剂联合施用。联合治疗中使用的第二药剂的剂量是本领域已知的。在一些实施方案中，在本发明提供的联合治疗中，使用比已经或目前正在用于预防或治疗肝脏疾病例如乙肝或丙肝的剂量更低的剂量。第二药剂的推荐剂量可以由技术人员的知识获得。对批准供临床用途的那些第二药剂，推荐剂量在例如Schiff′s Diseases of the Liver第10版(2006)，Lippincott，Williams and Wilkins，Hardman等编辑，1996，Goodman & Gilman′s ThePharmacological Basis Of Basis Of Therapeutics第九版，Mc-Graw-Hill，NewYork；Physician′s Desk Reference(PDR)第57版，2003，Medical Economics Co.公司，Montvale，NJ中描述，它们被全文引入本文作为参考。

在各种实施方案中，治疗(例如本发明提供的化合物和第二药剂)的施用相隔少于5分钟、相隔少于30分钟、相隔1小时、相隔约1小时、相隔约1到约2小时、相隔约2小时到约3小时、相隔约3小时到约4小时、相隔约4小时到约5小时、相隔约5小时到约6小时、相隔约6小时到约7小时、相隔约7小时到约8小时、相隔约8小时到约9小时、相隔约9小时到约10小时、相隔约10小时到约11小时、相隔约11小时到约12小时、相隔约12小时到18小时、相隔18小时到24小时、相隔24小时到36小时、相隔36小时到48小时、相隔48小时到52小时、相隔52小时到60小时、相隔60小时到72小时、相隔72小时到84小时、相隔84小时到96小时、或相隔96小时到120小时。在一些实施方案中，在单次患者来访内施用两种或多种治疗。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物和第二药剂被循环施用。循环治疗包括施用第一治疗(例如第一预防或治疗剂)一段时间，接着施用第二治疗(例如第二预防或治疗剂)一段时间，接着施用第三治疗(例如第三预防或治疗剂)一段时间，等等，并重复这种依次施用，即，循环的目的是减少对其中一种药剂发展的抗性，避免或减少其中一种药剂的副作用，和/或提高治疗的功效。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物和第二药剂以这样的次序在这样的时间间隔内对患者例如哺乳动物例如人施用，使得本发明提供的化合物可以与其它药剂一起作用，比用别的方法施用它们提供增加的益处。例如，第二活性剂可以在同一时间施用或依序以任何次序在不同时间点施用；但是，如果没有在同一时间施用，为了提供希望的治疗或预防效果，它们应当被施用得时间上足够接近。在一个实施方案中，本发明提供的化合物和第二活性剂在部分重叠的时间内发挥它们的效果。每个第二活性剂可以用任何适当的形式并通过任何合适的途径分开施用。在其它实施方案中，本发明提供的化合物在施用第二活性剂之前、同时或之后施用。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物和第二活性剂在少于约3星期的循环中施用，约每两个星期施用一次、约每10天施用一次或约每星期施用一次。一个循环可以包含通过输液每个循环在约90分钟内，每个循环在约1小时内，每个循环在约45分钟内施用本发明提供的化合物和第二药剂。每个循环可以包含至少1星期的休息，至少2星期的休息，和至少3星期的休息。施用的循环数量是约1到约12个循环，更典型地约2到约10个循环，而更典型地约2到约8个循环。

在一些实施方案中，同一药剂可以重复施用，而且施用可以相隔至少1天、2天、3天、5天、10天、15天、30天、45天、2个月、75天、3个月或6个月。在其它实施方案中，本发明提供的化合物和第二药剂的施用相隔约2到4天、相隔约4到6天、相隔约1星期、相隔约1到2星期、或相隔超过2星期。

在其它实施方案中，治疗过程是对患者同时施用的，即独立剂量的第二药剂被分开施用，但在这样的时间间隔内施用，使得本发明提供的化合物可以与第二活性剂一同起效。例如，一种成分可以每星期施用一次，它与可以每两个星期施用一次或每三个星期一次的其它成分联合。换句话说，给药方案是同时执行的，即使治疗没有同时施用或在同一天期间施用。

第二药剂可以与本发明提供的化合物累加或协同作用。在一个实施方案中，本发明提供的化合物与一种或多种第二药剂在同一药物组合物中同时施用。在另一个实施方案中，本发明提供的化合物与一种或多种第二药剂在不同的药物组合物中同时施用。在又一个实施方案中，本发明提供的化合物在施用第二药剂之前或之后施用。也可以是，本发明提供的化合物和第二药剂通过相同或不同的施用途径施用，例如口服和肠胃外。在一些实施方案中，当本发明提供的化合物与潜在地产生不良副作用包括但不限于毒性的第二药剂同时施用时，第二活性剂可以有利地以低于引发不良副作用的阀值的剂量施用。

在一些实施方案中，本发明提供的化合物与一种第二药剂联合施用。在进一步的实施方案中，第二药剂是与两种第二药剂联合施用。在更进一步的实施方案中，第二药剂是与两种或多种第二药剂联合施用。

在联合治疗中，两种或多种药剂的有效剂量被一起施用，而在交替或有序分步治疗中，各种药剂的有效剂量被连续或依序施用。规定的剂量将取决于药物的吸收、失活和排泄速率，以及本领域技术人员已知的其它因素。应当注意到，剂量值也将随着需要缓解的状况的严重程度而变化。应当进一步理解，对任何特定的患者，具体剂量方案和时间表应当依照个人需要和施用或监督组合物的施用的人的专业判断，随时间而调节。

在一些实施方案中，本发明提供的方法包含与其它药剂联合施用本发明描述的MMP抑制剂，例如Intron A、聚乙二醇干扰素α-2a(派罗欣R)、聚乙二醇干扰素α-2a+利巴韦林(派罗欣和Copegus，参见例如Hoofnagle等，N.enel.J.Med.355：23)、拉米夫定、阿德福韦、恩替卡韦、恩曲他滨(FTC)、替比夫定(L-dT)、伐托他滨(VaI-LdC)、艾夫他滨(L-Fd4C)、克拉夫定、Racivir、BAM 205、NOV-205(BAM 205)、HepeX-B、氨多索韦(DAPD)、ANA 380(LB80380)、帕拉德福韦(瑞莫夫韦)、EHT 899、帕拉德福韦、日达仙(胸腺素-α)、UT 231-B、EP-HBS、HBV Core、MIV 210、SpecifEx-HepB、Pentacept(L-3′-FD4C)、Bay41-4109INTM-191或VX-950(telaprevir)。

在一些实施方案中，第二药剂选自以下：

蛋白酶抑制剂：实施例包括Medivir HCV蛋白酶抑制剂(Medivir/Tobotec)；ITMN-191(InterMune)、SCH 503034(Schering)和VX950(Vertex)。蛋白酶抑制剂的进一步实施例包括基于底物的NS3蛋白酶抑制剂(Attwood等，Antiviralpeptide derivatives，PCT WO 98/22496，1998；Attwood等，Antiviral Chemistryand Chemotherapy 1999，10，259-273；Attwood等，Preparation and use of aminoacid derivatives as anti-viral agents，德国专利公开DE 19914474；Tung等，Inhibitors of serine proteases，particularly hepatitis C virus NS3 protease，PCT WO98/17679)，包括α酮酰胺和肼基脲，和在亲电子试剂例如硼酸或膦酸酯中终止的抑制剂(Llinas-Brunet等，Hepatitis C inhibitor peptide analogues，PCT WO99/07734)；不基于底物的NS3蛋白酶抑制剂例如2，4，6-三羟基-3-硝基-苯甲酰胺衍生物(Sudo K.等，Biochemical and Biophysical Research Communications，1997，238，643-647；Sudo K.等，Antiviral Chemistry and Chemotherapy，1998，9，186)，包括RD3-4082和RD3-4078，前一个在酰胺上有14个碳的碳链取代，而后一个具有一个对苯氧基苯基；以及Sch 68631，菲醌，HCV蛋白酶抑制剂(Chu M.等，Tetrahedron Letters 37：7229-7232，1996)。

从真菌灰黄青霉(Penicillium griseofulvum)中分离的SCH 351633被识别为蛋白酶抑制剂(Chu M.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9：1949-1952)。从水蛭中分离的Eglin c是数种丝氨酸蛋白酶的强效抑制剂，例如S.griseus蛋白酶A和B、α-糜蛋白酶、糜酶和枯草杆菌蛋白酶。Qasim M.A.等，Biochemistry36：1598-1607，1997。

公开了供治疗HCV的蛋白酶抑制剂的美国专利包括，例如，Spruce等的美国专利号6,004,933，它公开了一类抑制HCV肽链内切酶2的半胱氨酸蛋白酶抑制剂；Zhang等的美国专利号5,990,276，它公开了丙肝病毒NS3蛋白酶的合成抑制剂；Reyes等的美国专利号5,538,865；Corvas International公司的WO 02/008251，以及Schering公司的US 7,169,760、US2005/176648、WO02/08187和WO 02/008256。Boehringer Ingelheim的美国专利号6,534,523、6,410,531和6,420,380以及Bristol Myers Squibb的WO 02/060926中公开了HCV抑制剂三肽。Schering公司的WO 02/48172和US 6,911,428中公开了作为HCV的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的二芳基肽。在Schering公司的WO02/08198和US 6,838,475，以及Bristol Myers Squibb的WO 02/48157和US6,727,366中公开了作为HCV的NS3丝氨酸蛋白酶抑制剂的咪唑烷酮。VertexPharmaceuticals的美国专利7,109,172；6,909,000；6,617,390；6,608,067；6,265,380和国际公开号WO 98/17679，以及Bristol Myers Squibb的WO02/48116中也公开了HCV蛋白酶抑制剂。HCV蛋白酶抑制剂的进一步实施例在InterMune公司的美国专利号7,153,848；7,138,376；7,135,462；7,132,504；7,112,601；和美国公开号2007/0010455；2006/0276511；2006/0257980；2006/0258720；2006/0252715中公开。

在具有NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物的反相HPLC测试中显示了相应抑制的噻唑烷衍生物(Sudo K.等，Antiviral Research，1996，32，9-18)，特别是化合物RD-1-6250，它具有被长烷基链取代的稠合肉桂酰基部分，RD46205和RD4 6193；

在Kakiuchi N.等J.EBS Letters 421，217-220；和Takeshita N.等AnalyticalBiochemistry，1997，247，242-246中指出的噻唑烷和苯甲酰苯胺；

从链霉菌属的种的发酵液体培养基中分离的菲醌，Sch 68631，它在SDS-PAGE和放射自显影测试中具有针对蛋白酶的活性(Chu M.等，Tetrahedron Letters，1996，37，7229-7232)，和从真菌灰黄青霉(Penicilliumgriseofulvum)中分离的Sch 351633，它在闪烁接近测试中证明了活性(Chu M.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 9，1949-1952)；

解螺旋酶抑制剂(Diana G.D.等，Compounds，compositions and methods fortreatment of hepatitis C，美国专利号5,633,358；Diana G.D.等，Piperidinederivatives，pharmaceutical compositions thereof and their use in the treatment ofhepatitis C，PCT WO 97/36554)；

核苷酸聚合酶抑制剂和胶霉毒素(Ferrari R.等Journal of Virology，1999，73，1649-1654)，以及天然产物浅蓝菌素(Lohmann V.等，Virology，1998，249，108-118)；

以干扰RNA(iRNA)为基础的抗病毒药，包括以短干扰RNA(siRNA)为基础的抗病毒药，例如Sirna-034和国际专利公开号WO/03/070750和WO2005/012525，以及美国专利公开号US 2004/0209831中描述的其它抗病毒药。

反义硫代磷酸寡聚脱氧核苷酸(S-ODN)，它与病毒的5′非编码区(NCR)中的序列延伸互补(Alt M.等，Hepatology，1995，22，707-717)，或核苷酸326-348，它包含NCR的3′端，和核苷酸371-388，位于HCV RNA的核心编码区(Alt M.等，Archives of Virology，1997，142，589-599；Galderisi U.等，Journal of Cellular Physiology，1999，181，251-257)；

IRES依赖性翻译的抑制剂(Ikeda N等，Agent for the prevention andtreatment of hepatitis C，日本专利公开JP-08268890；Kai Y.等Prevention andtreatment of viral diseases，日本专利公开JP-10101591)；

核酶，例如核酸酶抵抗性核酶(Maccjak，D.J.等，Hepatology 1999，30，摘要995)以及Barber等的美国专利号6,043,077和Draper等的美国专利号5,869,253、5,610,054中公开的那些；还有

在国际公开号WO 01/90121和WO 01/92282；WO 01/32153；WO01/60315；WO 02/057425；WO 02/057287；WO 02/18404；WO 01/79246；WO 02/32920和WO 02/48165中描述的核苷类似物。公开了核苷类似物的用途(可以用作治疗丙肝病毒的第二药剂)的一些美国专利和专利申请包括：Merck & Co.公司的US 7,202,224、7,125,855、7,105,499和6,777,395；Roche的US 2006/0040890、2005/0038240、2004/0121980、6,846,810、6,784,166和6,660,721；Pharmasset有限公司的US 2005/0009737、US 2005/0009737、7,094,770和6,927,291。

Emory大学的题为“2′-Fluoronucleosides”的PCT公开号WO 99/43691公开了一些2′-氟核苷的治疗HCV的用途。

其它的各种化合物包括1-氨基-烷基环己烷(Gold等的美国专利号6,034,134)、烷基脂类(Chojkier等的美国专利号5,922,757)、维生素E和其它抗氧化剂(Chojkier等的美国专利号5,922,757)、鲨烯、金刚烷胺、胆汁酸(Ozeki等的美国专利号5,846,964)、N-(膦酰基乙酰基)-L-天冬氨酸(Diana等的美国专利号5,830,905)、苯二甲酰胺(Diana等的美国专利号5,633,388)、多聚腺苷酸衍生物(Wang等的美国专利号5,496,546)、2′，3′-二脱氧肌苷(Yarchoan等的美国专利号5,026,687)、苯并咪唑(Colacino等的美国专利号5,891,874)、植物提取物(Tsai等的美国专利号5,837,257、Omer等的美国专利号5,725,859、和美国专利号6,056,961)、和哌啶(Diana等的美国专利号5,830,905)。

目前处于临床前期或临床期开发的供治疗丙肝病毒的任何其它化合物都可以与本发明提供的化合物联合使用。在一些实施方案中，可以与这里描述的MMP抑制剂联合使用的化合物包括：Schering-Plough的白细胞介素-10，Interneuron的IP-501，Vertex的Merimebodib(VX-497)，Endo Labs Solvay的金刚烷胺

(Symmetrel)，RPI的HEPTAZYMEXTL.的XTL-002，Chiron的HCV/MF59，NABI的CIVACIR(丙肝免疫球蛋白)，ICN/Ribapharm的LEVOVIRIN

ICN/Ribapharm的VIRAMIDINE

Sci Clone的日达仙

(胸腺素α-1)，Sci Clone的胸腺素+聚乙二醇干扰素，Maxim的CEPLENE

(组胺二盐酸盐)，Vertex/Eli Lilly的VX 950/LY 570310，Isis Pharmaceutical/Elan的ISIS 14803，AKROS Pharma的JTK 003，Boehringer Ingelheim的BILN-2061，Roche的骁悉(吗替麦考酚酯)，Tularik的β-微管蛋白抑制剂T67，Innogenetics的用于E2的治疗疫苗，Fujisawa Healthcare公司的FK788，IdB 1016(Siliphos，口服水飞蓟宾-磷脂复合物)，ViroPharma/Wyeth的RNA复制抑制剂(VP50406)，Intercell的治疗疫苗，Epimmune/Genencor的治疗疫苗，Anadys的IRES抑制剂，Anadys的ANA 245和ANA 246，Avant的免疫治疗(Therapore)，Corvas/SChering的蛋白酶抑制剂，Vertex的解螺旋酶抑制剂，Trimeris的融合抑制剂，CellExSys的T细胞治疗，Biocryst的聚合酶抑制剂，PTC Therapeutics的靶向RNA化学，Immtech，Int.的二阳离子，Agouron的蛋白酶抑制剂，Chiron/Medivir的蛋白酶抑制剂，AVI BioPharma的反义治疗，Hybridon的反义治疗，Aethlon Medical的血液过滤器，Merix的治疗疫苗，Bristol-MyersSquibb/Axys的蛋白酶抑制剂，Tripep的治疗疫苗Chron-VacC，UnitedTherapeutics的UT 231B，Genelabs Technologies的蛋白酶、解螺旋酶和聚合酶抑制剂，Immusol的IRES抑制剂，Rigel Pharmaceuticals的R803，InterMune的干复津

(干扰素αcon-1)，Viragen的OMNIFERON

(天然干扰素)，HumanGenome Sciences的ALBUFERON

Ares-Serono的REBIF

(干扰素β-1a)，BioMedicine的ω干扰素，InterMune的干扰素γ、干扰素τ和干扰素γ-1b。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与目前可用的或目前正在开发的丙肝治疗联合或交替施用。在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒干扰素联合或交替施用，例如IntronA干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)；Roferon A

重组干扰素α-2a)、干复津

复合干扰素；干扰素αcon-1)、聚乙二醇-Intron聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)。

在一个实施方案中，抗丙肝病毒干扰素是干复津、IL-29(聚乙二醇干扰素λ)、R7025(Maxy-α)、Belerofon、口服干扰素α、BLX-883(Locteron)、ω干扰素、multiferon、medusa干扰素、Albuferon或REBIF

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒聚合酶抑制剂联合或交替施用，例如利巴韦林、viramidine、NM283(valopicitabine)、R7128/PSI-6130、R1626、HCV-796或R1479。

在一些实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与利巴韦林和抗丙肝病毒干扰素联合施用，例如Intron A

干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)；Roferon A

重组干扰素α-2a)、干复津

复合干扰素；干扰素αcon-1)、聚乙二醇-Intron

聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)。

在一些实施方案中，RO-113-0830与抗丙肝病毒干扰素联合施用，例如Intron A

干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)；Roferon A

重组干扰素α-2a)、干复津复合干扰素；干扰素αcon-1)、聚乙二醇-Intron

聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)。在一些实施方案中，RO-113-0830与利巴韦林联合施用。在一些实施方案中，RO-113-0830与利巴韦林和抗丙肝病毒干扰素联合施用，例如IntronA

干扰素α-2b)和派罗欣聚乙二醇干扰素α-2a)；RoferonA

重组干扰素α-2a)、干复津

复合干扰素；干扰素αcon-1)、聚乙二醇-Intron

聚乙二醇干扰素α-2b)和派罗欣

聚乙二醇干扰素α-2a)。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒蛋白酶抑制剂联合或交替施用，例如ITMN-191、SCH 503034、VX950(telaprevir)或Medivir HCV蛋白酶抑制剂。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒疫苗联合或交替施用，例如TG4040、PeviPROTM、CGI-5005、HCV/MF59、GV1001、IC41或INNO0101(E1)。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒单克隆抗体例如AB68或XTL-6865(以前的HepX-C)；或者抗丙肝病毒多克隆抗体例如cicavir联合或交替施用。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与抗丙肝病毒免疫调节剂联合或交替施用，例如日达仙

胸腺法新)、NOV-205或Oglufanide。

在一个实施方案中，本发明提供的一种或多种化合物可以与多吉美、多柔比星、PI-88、金刚烷胺、JBK-122、VGX-410C、MX-3253(Ceglosivir)、Suvus(BIVN-401或virostat)、PF-03491390(以前的IDN-6556)、G126270、UT-231B、DEBIO-025、EMZ702、ACH-0137171、MitoQ、ANA975、AVI-4065、Bavituxinab(Tarvacin)、Alinia(硝唑尼特)或PYN17联合或交替施用。

已经认识到，用抗病毒剂长时间治疗后，可能出现HBV的耐药变种。药物抗性最典型地通过病毒生命周期中所用酶的编码基因突变而产生，就HBV而言，最典型地是DNA聚合酶。最近，已经证明了，通过与第二或和第三抗病毒化合物联合或交替施用化合物，针对HBV感染的药物功效可以被延长、提高或重建，所述抗病毒化合物诱导与主药物引起的突变不同的突变。或者，药物的药物动力学、生物分布或其他参数可以通过这样的联合或交替治疗而改变。一般来说，联合治疗通常优于交替治疗，因为它导致对病毒同时存在的多重压力。

通过联合或交替施用两种或多种这些化合物，本发明提供的化合物的抗乙肝病毒活性可以被提高。或者，例如，本发明提供的一种或多种化合物可以与其它任何已知抗乙肝病毒剂联合或交替施用，例如恩替卡韦、顺式-2-羟甲基-5-(5-氟胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫杂环戊烷，优选地基本为(-)-光学异构体形式(“FTC”，参见WO 92/14743)；顺式-2-羟甲基-5-(胞嘧啶-1-基)-1，3-氧硫杂环戊烷(3TC)的(-)-对映体；β-D-1，3-二氧戊环嘌呤核苷，如美国专利号5,444,063和5,684,010中描述的；β-D-二氧戊环核苷例如β-D-二氧戊环基-鸟嘌呤(DXG)、β-D-二氧戊环基-2，6-二氨基嘌呤(DAPD)、和β-D-二氧戊环基-6-氯嘌呤(ACP)；L-FDDC(5-氟-3′-硫杂-2′，3′-双脱氧胞苷)、3′-氟-修饰的.β.-2′-脱氧核苷5′-三磷酸盐的L-对映体、卡波佛、干扰素、喷昔洛韦和泛昔洛韦、L-FMAU、泛昔洛韦、喷昔洛韦、BMS-200475、bis pom PMEA(阿德福韦酯)；洛布卡韦、更昔洛韦、利巴韦林、INTM-191、VX-950(telaprevir)、或在2.2.15细胞中显示低于15微摩尔的EC₅₀值的任何其它化合物；或它们的前药或药学上可接受的盐。在美国申请公开号20050080034中提供了抗HBV药剂的其它数个实施例，它被全文引入作为参考。

在另一个实施方案中，本发明提供的化合物与免疫调节剂或病毒复制的其它药物活性调节剂联合或交替施用，包括生物材料例如蛋白、肽、寡核苷酸、或γ球蛋白，包括但不限于干扰素、白细胞介素、或表达或调节乙肝复制的基因的反义寡核苷酸。

对患者提供治疗的任何交替方法都可以被使用。交替模式的非限制性实施例包括施用有效量的一种药剂1-6星期，接着施用有效量的第二药剂1-6星期。交替时间表可以包含无治疗的时期。联合治疗通常包括同时施用剂量有效比的两种或多种活性剂。

本发明提供的化合物也可以与抗生素、其它抗病毒化合物、抗真菌剂、或施用供治疗继发感染的其它药剂联合施用。

可以理解，前面的详细描述和伴随的实施例仅仅是例证性的，并不能被认为是对主题范围的限制。对公开的实施方案的各种改变和修正，对本领域技术人员将是显而易见的。这样的改变和修正，包括但不限于与本发明提供的化学结构、取代基、衍生物、中间体、合成体、制剂和/或使用方法相关的那些，可以在不背离本发明精神和范围的情况下进行。本文引用的美国专利和公开物被引入作为参考。

7.实施例

7.1RO-113-0830的制备

可以如美国专利号5,932,595中所述制备2，7-二氧杂-螺[3.5]壬烷-1-酮(10.8g)，在N，N-二甲基甲酰胺(95mL)中溶解，并在10-15分钟时间内缓慢加入到含有4-(4-氯苯氧基)硫代苯酚钠盐的溶液(通过氢化钠粉末(2.14g，89.2mmol)在0℃加入到4-(4-氯苯氧基)硫代苯酚(15.83g，66.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(19mL)溶液中并搅拌30分钟而生成)中，然后再搅拌15分钟。得到的浆加热到40℃，搅拌5分钟，加入叔丁醇(2mL)，混合物在20分钟内冷却到室温。在真空中去除大部分N，N-二甲基甲酰胺，调节pH值为9.2，得到的浆用30％二乙醚-己烷(120mL)稀释并过滤。滤饼用额外部分的乙醚(3次70mL)洗涤，用2N盐酸溶液酸化到pH 3.5，用二氯甲烷(4×350mL)萃取。合并的有机层用硫酸镁干燥，在真空中浓缩。固体残余物用最低量的二氯甲烷-己烷重结晶，以提供纯的4-[4-(4-氯苯氧基)苯基硫代甲基]四氢吡喃-4-羧酸。

7.2RO-113-0830的体内评估

使用雄性C57B1/6小鼠(Simonsen实验室)在两种公认的肝损伤模型中评估RO-113-0830的体内功效。让小鼠适应环境至少三天。

在TNF-α肝损伤模型中，腹腔注射D-半乳糖胺(D-Gln)(800mg/kg)和TNFα(20或40μg/kg)。RO-113-0830(0.001-30mg/kg)在损害前30分钟经口强饲施用。六小时后，动物用戊巴比妥钠(50mg/kg腹腔)麻醉，并通过心脏穿刺取血。使用来自Sigma-Aldrich的试剂盒检测血浆ALT活性。RO-113-0830在TNF-α模型中剂量依赖性地降低了血浆ALT活性。4次研究的平均ED₅₀值是0.26±0.08mg/kg。

为了检测对存活的益处，TNF-α模型，腹腔注射D-半乳糖胺(D-Gln)(800mg/kg)和TNF-α(20或40μg/kg)，小鼠在损害后继续存活24小时。所有致病的小鼠用腹腔125mg/kg戊巴比妥钠安乐死。在TNFα/D-Gln对照小鼠和RO-113-0830-治疗小鼠中，3次研究的平均24小时存活率分别是27±7.3％和.55±7.6％(p＝0.03)。

在Fas驱动的肝损伤模型中，静脉施用Fas(Jo-2)的活化抗体。六小时后，动物用戊巴比妥钠(50mg/kg腹腔)麻醉，并通过心脏穿刺取血。使用来自Sigma-Aldrich的试剂盒检测血浆ALT活性。RO-113-0830(10mg/kg；口服)显著减少了Fas诱导的血浆ALT活性升高，两次研究中平均减少50％(每次研究p＜0.05)。

这些研究的结果表明，在一些实施方案中，在肝脏疾病中涉及的两种重要的促炎细胞因子的存在下，RO-113-0830是保护性的。通过与对照动物相比血浆ALT水平减少来检测肝损伤的减少和炎症的减少。ALT是肝损伤的临床相关标记，而且被常规用来评估患者中进行性肝损伤和炎症的程度。另外，RO-113-0830显示了在施用TNF-α后的存活益处。

7.3复制子测试中HCV复制的抑制

在这一研究中，使用Huh7人肝肿瘤细胞系(21-5细胞系)，参见Pietschmann，T.等，J.Virol.76，2002，4008-4021，它含有全长HCV复制子和三个细胞培养适应性突变，以证明RO-113-0830在细胞中抑制HCV RNA复制子复制的能力。测试如上文Pietschmann，T.等所述的进行。

在HCV RNA复制子抗病毒评估测试中检测RO-113-0830在六个半对数浓度(每个一式四份)的效果。每次测试都包括人干扰素α-2b作为阳性对照化合物。ET系的次汇合培养被接种到专用于细胞数量(细胞毒性)或抗病毒活性分析的96孔板中，第二天向适当的孔中加入药物。72小时后在细胞仍然为次汇合时处理细胞。通过TaqMan RT-PCR来评估HCV RNA复制子水平和减少细胞数量(如宿主细胞核糖体RNA(rRNA)水平所指示的)的药物有毒浓度。计算EC₅₀(抑制50％病毒复制的浓度)、IC₅₀(降低50％细胞生存能力的浓度)和SI₅₀(选择性指数：IC₅₀/EC₅₀)值。

RO113-0830剂量依赖性地抑制HCV复制，在浓度70nM达到50％抑制(EC₅₀)。这一测试中细胞毒性的IC₅₀值是约25μm，因此选择性指数(IC₅₀/EC₅₀)约为350。这些数据表明，在一些实施方案中，RO113-0830在不影响细胞生存能力的剂量下达到强效抑制丙肝病毒复制的效果。

7.4胆总管结扎模型中的体外研究

胆总管结扎模型是肝纤维化的良好特征模型。简单地说，6到8星期大的C57/BL6野生型小鼠被胆总管结扎(BDL)14天。假手术的野生型小鼠被用作对照。通过强饲施用RO113-0830或CMC(羧甲基纤维素)，剂量为10mg/kg体重，每日一次。肝细胞凋亡通过TUNEL测试和激活的半胱天冬酶3/7免疫荧光来定量。肝损伤通过组织病理学和胆汁梗塞量来评估。肝纤维化通过天狼星红染色和定量形态测定来评估。用实时聚合酶链式反应(PCR)来测量胶原蛋白1α(I)和α-平滑肌肌动蛋白的mRNA转录。

BDL14天后，用RO113-0830治疗过的野生型小鼠与用运载体处理的动物相比，TUNEL减少3倍，半胱天冬酶3/7-阳性肝细胞减少5倍(p＜0.01)。肝组织学检测用RO113-0830治疗过的BDL野生型动物，与运载体处理的BDL小鼠相比，胆汁梗死量减少了＞70％。与假手术的对照组相比，在BDL14天的小鼠中，α-平滑肌肌动蛋白(星形细胞活化标记)和胶原蛋白I的肝转录增加了6和8倍。RO113-0830处理的BDL动物与运载体处理的BDL动物比较，这些转录的mRNA减少＞60％。在用RO113-0830治疗过的BDL野生型小鼠中，肝胶原蛋白的天狼星红染色也减少了3倍。最后，BDL14天后，在接受了活性药物的组中，总动物存活也显著提高(p＜0.05)。这些数据表明，在一些实施方案中，用MMP抑制剂RO113-0830治疗后，肝损伤和肝纤维化减少。

上面描述的实施方案仅仅是示范性的，本领域技术人员用常规实验即可认识到或者将能够确定许多等同的具体化合物、材料和方法。所有这样的等同物被认为是在本申请权利要求的主题范围之内，并被所附权利要求涵盖。

Claims (39)

1.治疗肝脏疾病的方法，所述肝脏疾病选自酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化、原发性胆汁性肝硬化、肝缺血再灌注损伤、乙型病毒性肝炎、丙型病毒性肝炎、和酒精性肝炎，所述方法包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物，条件是当MMP抑制剂是ONO-4817时，所述肝脏疾病不是肝缺血再灌注损伤。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

和其药学上可接受的衍生物。

3.如权利要求1所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是：

或其药学上可接受的衍生物。

4.如权利要求1所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是：

或其药学上可接受的衍生物。

5.如权利要求1所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是：

或其药学上可接受的衍生物。

6.如权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是急性肝脏疾病。

7.如权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是慢性肝脏疾病。

8.如权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂被施用于已经用肝脏疾病的其它药物预先治疗过的患者。

9.如权利要求1-7中任意一项所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂被施用于正在用肝脏疾病的其它药物治疗的患者。

10.如权利要求8所述的方法，其中所述患者经历过肝脏疾病的失败治疗。

11.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病选自酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪肝疾病、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化、和原发性胆汁性肝硬化。

12.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是乙型病毒性肝炎。

13.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是丙型病毒性肝炎。

14.如权利要求13所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂被施用于经历过丙肝的失败治疗的患者。

15.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是酒精性肝炎。

16.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是非酒精性脂肪肝疾病。

17.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是非酒精性脂肪性肝炎。

18.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述肝脏疾病是肝纤维化。

19.如权利要求18所述的方法，其中所述肝纤维化是由肝炎、化学暴露、胆管梗阻、自体免疫疾病、血液从肝脏流出障碍、心脏和血管失调、α1-抗胰蛋白酶缺乏、血半乳糖水平高、血酪氨酸水平高、糖原贮积症、糖尿病、营养不良、Wilson疾病或血色素沉着症引起的。

20.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述疾病是肝硬化。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述肝硬化是由滥用酒精引起的。

22.如权利要求20所述的方法，其中所述肝硬化是由肝炎、化学暴露、胆管梗阻、自体免疫疾病、血液从肝脏流出障碍、心脏和血管失调、α1-抗胰蛋白酶缺乏、血半乳糖水平高、血酪氨酸水平高、糖原贮积症、糖尿病、营养不良、Wilson疾病或血色素沉着症引起的。

23.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述疾病是原发性胆汁性肝硬化。

24.如权利要求1-10中任意一项所述的方法，其中所述疾病是肝缺血再灌注损伤。

25.降低升高的肝酶水平的方法，所述方法包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

26.如权利要求25所述的方法，其中所述肝酶是丙氨酸转氨酶或天冬氨酸转氨酶。

27.如权利要求25或26所述的方法，其中所述升高的肝酶水平被降低了约100％到约1％。

28.如权利要求25或26所述的方法，其中所述升高的肝酶水平被降低了至少99％、至少90％、至少80％、至少70％、至少60％、至少50％、至少40％、至少30％、至少20％、至少10％、至少5％、至少2％或至少1％。

29.如权利要求25-28中任意一项所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是

或其药学上可接受的衍生物。

30.抑制TNF-α的信号级联的方法，其包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，

其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

31.如权利要求30所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是

或其药学上可接受的衍生物。

32.减少肝脏疾病伴随的肝损伤的方法，其包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

33.抑制α-Fas的信号级联的方法，其包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

34.在肝细胞中抑制过度凋亡的方法，其包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

35.在感染了丙肝病毒的细胞中抑制丙肝病毒复制的方法，其包括施用基质金属蛋白酶抑制剂，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

36.在感染了丙肝病毒的患者中抑制丙肝病毒复制的方法，其包括对该患者施用基质金属蛋白酶抑制剂，所述基质金属蛋白酶抑制剂选自：

XL784和其药学上可接受的衍生物。

37.如权利要求35或36所述的方法，其中所述基质金属蛋白酶抑制剂是

38.如权利要求13所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的第二药剂。

39.如权利要求38所述的方法，其中所述第二药剂选自抗丙肝病毒干扰素、利巴韦林或它们的组合物。