CN101653561A - 神经酰胺产生促进剂 - Google Patents
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Abstract
本发明提供用于促进细胞内神经酰胺产生的医药品、化妆品。本发明的神经酰胺产生促进剂是以选自白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的植物或其提取物为有效成分的神经酰胺产生促进剂。
Description
技术领域
本发明涉及使神经酰胺增加的神经酰胺产生促进剂。
背景技术
神经鞘脂类之一的神经酰胺在生物体整体中是微量的脂质,但近年来报告了通过促进细胞内神经酰胺的产生而诱导细胞凋亡、分化诱导、增殖抑制这样的现象,作为控制细胞的增殖、分化、凋亡等的细胞内信号分子而受到注目。因此,关于促进神经酰胺的产生的物质,被认为可以期待诱导动物细胞的增殖抑制、分化诱导、细胞凋亡等效果,进而被认为能够期待对炎症性疾病、恶性肿瘤等起因于细胞的增殖或分化的异常的疾病的治疗效果(非专利文献1)。
另外,关于神经酰胺,报告了具有骨吸收抑制作用、骨强化作用、牙槽骨减少抑制作用,在骨疏松症、骨折、腰痛、风湿病等骨关节疾病的预防和改善方面有用(专利文献1),在牙周病预防方面有效(专利文献2)。因此,关于神经酰胺产生促进物质,也可以期待对这样的疾病的治疗效果。
而且,关于神经酰胺,还报告了具有赋予毛发张力、浓密和改善触感的作用(专利文献3),关于神经酰胺产生促进物质也可以期待这样的效果。
白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗都是作为传统中草药自古以来被使用的药用植物。即,白芷在中药中是以解热、镇痛、解毒、排脓等为目的而使用的,关于其醚提取物,报告有血压上升、呼吸运动兴奋作用(非专利文献2)。地黄作为强身·解热药被应用在糖尿病、前列腺肥大症、老年性腰痛、白内障等,在中药中以补血、强身、解热、缓下等目的使用。另外,关于地黄的水或乙醇提取物,报告有血糖下降或高血糖抑制作用、缓下、利尿作用(非专利文献3)。白术是以健脾、益气、利尿、止汗等为目的而使用,报告具有增加尿量作用和增加血糖作用。甘草被已知作为甘草酸的制造原料,被作为镇咳·祛痰药、消化性器官溃疡治疗药而通用,在中药中以镇痛、解毒等为目的被使用。另外,关于甘草提取物,报告具有显著的胃酸分泌抑制作用、消化道溃疡愈合作用、镇痉、镇咳作用等(非专利文献4)。大黄被用作为泻药、健胃药,在中药中以消炎、泻下、解毒作为目的使用。白及在中药中以止血、镇痛、慢性胃炎作为目的使用(非专利文献5)。何首乌在中药中有补肝肾、益精血作用,针对由贫血引起的头晕和头痛、失眠而使用。桔梗作为镇咳祛痰药使用,已知具有唾液分泌和气管分泌促进作用。
但是,关于这些植物具有神经酰胺产生促进效果,至今完全未知。
专利文献1:日本特开2001-158736号
专利文献2:日本特开2001-158735号
专利文献3:日本特开平10-152421号
非专利文献1:Sphingolipid targets in cancer therapy,David E.Modrak等,Molecular Cancer Therapeutics 20065(2):200-8
非专利文献2:天然医药资源学(第2版,竹田忠纮等编辑,广川书店),215~216页
非专利文献3:天然医药资源学(第2版,竹田忠纮等编辑,广川书店),132~133页
非专利文献4:和汉药物学(第1版,高木敬次郎等编辑,南山堂),72~73页
非专利文献5:天然医药资源学(第2版,竹田忠纮等编辑,广川书店),263~264页
发明内容
本发明是涉及以下1)~2)的发明。
1)以选自白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的植物或其提取物为有效成分的神经酰胺产生促进剂。
2)选自白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的植物或其提取物的用于制造神经酰胺产生促进剂的用途。
具体实施方式
本发明涉及提供用于促进细胞内神经酰胺产生的医药品、化妆品等。
本发明人等探索安全性高的天然物原材料时发现,关于白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的提取物具有神经酰胺产生促进作用,可以作为神经酰胺产生促进剂使用。
本发明的神经酰胺产生促进剂使细胞内的神经酰胺增加,作为用于预防或改善炎症性疾病、骨关节疾病、牙周病等的医药品等、或用于赋予毛发的张力、浓密和触感改善的化妆品等是有用的。
在本发明中,白芷(Radix Angelicae Dahuricae)以伞形科(Umbelliferae)的白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss.)Shan et Yuan为来源植物,地黄(RadixRehmanniae)以玄参科(Scrophulariaceae)的地黄Rehmannia glutinosaLibosch.为来源植物,白术(Rhizoma Atractylodis macrocephalae)以菊科(Compositae)的白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)为来源植物,甘草(Radix Et Rhizoma Glycyrrhizae)以豆科(Leguminosae)的甘草Glycyrrhiza uralensis Fisher或胀果甘草(Glycyrrhiza inflata Bat.)或光果甘草(Glycyrrhiza glabra L.)为来源植物,大黄(Radix Et Rhizoma Rhei)以蓼科(Polygonaceae)的掌叶大黄(Rheum palmatum L.)或唐古特大黄(Rheum tanguticum Maxin.Cx Balf.)或药用大黄(Rheum officinale Baill.)为来源植物,白及(Rhizoma Bletillae)以兰科(Orchidaceae)的白及Bletilla striata_(Thunb.)Reichb.f.为来源植物,何首乌(Radix PolygoniMultiflori)以蓼科(Polygonaceae)的何首乌Polygonum multiflorumThunb.为来源植物,桔梗(Radix Platycodonis)以桔梗科(Campanulaceae)的桔梗Platycodon grandiflorum(Jacq.)A.De.为来源植物。
上述植物可以将其植物的全草、叶、皮、枝、果实或根等原样使用或粉碎后使用,但对于白芷、地黄优选使用根,对于白术优选使用根、茎,对于甘草、大黄优选使用根、根茎,对于白及优选使用块茎,对于何首乌优选使用根,对于桔梗优选使用根。
作为本发明的植物提取物,包含将上述植物的使用部分直接或干燥后切断为适当大小或粉碎加工物而得到的部分进行提取而得到的提取物,除此以外还包含进一步分离精制而得到的活性更高的组分(成分)。
提取可以是在室温或加热状态下使之在溶剂中含浸或使用索式提取器(Soxhlet extractor)等提取器具进行溶剂提取,除此以外,还可以使用利用水蒸汽蒸馏等蒸馏法进行提取的方法、使二氧化碳气体成为超临界状态而进行的超临界提取法或压榨而得到提取物的压榨法等。
作为在溶剂提取中使用的提取溶剂,可以使用极性溶剂、非极性溶剂的任意一种,也可以将它们混合使用。例如,可以列举:水;甲醇、乙醇、丙醇、丁醇等醇类;乙二醇、丙二醇、丁二醇等多元醇类;丙酮、甲基乙基酮等酮类;醋酸甲酯、醋酸乙酯等酯类;四氢呋喃、二乙醚等链状和环状醚类;聚乙二醇等聚醚类;二氯甲烷、氯仿、四氯化碳等卤化烃类;己烷、环己烷、石油醚等烃类;苯、甲苯等芳香族烃类;吡啶类;超临界二氧化碳;油脂、蜡、其它油等,这些可以单独或组合2种以上使用,也可以改变溶剂而反复进行。其中,优选使用水、乙醇、丙二醇、丁二醇、石油醚等,特别优选使用水·乙醇混合液、石油醚。
对于提取而言,例如由水、醇类、烃类或水·醇混合液进行提取时,优选相对1质量份植物使用1~50质量份溶剂,在4~100℃、优选在20~80℃的温度下,以1小时~30日、更优选以1小时~10日进行提取。
另外,作为提取物的分离精制手段,例如,可以列举将提取物进行活性碳处理、液液分配、柱色谱、液相色谱、凝胶过滤、精密蒸馏等。根据需要,还可以以公知的方法进一步实施脱臭、脱色等处理。
本发明的植物提取物,既可以直接使用这样得到的提取液和组分,也可以使用以适当溶剂稀释后得到的稀释液,或也可以为制成为在加热下或减压下浓缩的提取物和干燥粉末或调制成为膏状的提取物。另外,也可以进行冷冻干燥,在使用时以通常用于提取的溶剂,例如以水、乙醇、丙二醇、丁二醇、水·乙醇混合液、水·丙二醇混合液、水·丁二醇混合液等溶剂进行稀释后使用。另外,也可以在脂质体(liposome)等囊泡和微胶囊等中内包使用。
如在后述实施例中所示,本发明的植物或其提取物在正常人角化细胞中具有使神经酰胺量增加的作用。
因此,本发明的植物或其提取物可以作为神经酰胺产生促进剂使用,另外,可以用于制造神经酰胺产生促进剂。该神经酰胺产生促进剂可以期待诱导动物细胞的增殖抑制、分化诱导、细胞凋亡等效果,所以,可以作为用于预防或治疗炎症性疾病、恶性肿瘤等起因于细胞增殖或分化异常的疾病的医药品、日本的医药部外品等使用(上述非专利文献1),另外,可以作为用于预防或改善骨疏松症、骨折、腰痛、风湿病等骨关节疾病、预防或改善牙周病的医药品、日本的医药部外品等使用(上述专利文献1和2)。另外,还可以作为用于给毛发赋予张力、浓密的改善毛发触感的日本的医药部外品、化妆品使用(上述专利文献3)。该神经酰胺产生促进剂也可以作为以神经酰胺产生促进为概念并根据需要表示其宗旨的日本的医药部外品、化妆品使用。作为将本发明的神经酰胺产生促进剂用作医药品时的给药方式,例如,可以为片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、糖浆剂等经口给药或注射剂、外用剂、坐剂、经皮吸收剂等非经口给药的任一种。在配制该医药制剂时,可以单独地使用本发明的植物或其提取物,或适当组合其它在药学上被允许的赋形剂、粘合剂、增量剂、粉碎剂、表面活性剂、润滑剂、分散剂、缓冲剂、保存剂、矫味剂、香料、覆膜剂、载体、稀释剂等使用。该制剂中的本发明植物的含量,作为干燥固体成分优选含有0.01~20质量%,特别优选含有0.05~10质量%,作为植物提取物,按照固体成分换算优选含有0.0001~10质量%,特别优选含有0.001~5质量%。另外,在将本发明的神经酰胺产生促进剂作为医药品使用时,成人每人每日的给药量,作为本发明的植物或其提取物(换算为干燥固体成分),例如优选是0.001~1000mg,特别优选是0.01~100mg。
另外,将本发明的神经酰胺产生促进剂作为日本的医药部外品和化妆品使用时,可以制成为皮肤外用剂、洗净剂、美容用化妆品,根据使用方法,可以以洗液、乳液、凝胶、乳脂、软膏剂、粉剂、颗粒剂等各种剂型进行提供。这样的各种剂型的日本的医药部外品和化妆品,可以将本发明的植物或其提取物单独地进行调制,或通过适当组合被配合在日本的医药部外品、皮肤化妆品和洗净品中的油性成分、保湿剂、粉体、色素、乳化剂、增溶剂、洗净剂、紫外线吸收剂、增粘剂、药效成分、香料、树脂、防菌防霉剂、植物提取物、醇类等而调制。另外,作为药效成分,可以列举透明质酸钠等其它保湿成分。
该日本的医药部外品、化妆品中的本发明植物的含量,作为干燥固体成分,优选为0.01~100质量%、特别优选0.05~70质量%。另一方面,提取物的含量一般按照固体成分换算优选为0.00001~100质量%、特别优选为0.0001~70质量%。
以上所述的“日本的医药部外品”(quasi drug)是指由日本药事法第2条第2項所规定的具有特殊功效的化妆品,但相对于医药品而言其功效比较缓和。
【实施例】
制造例1白芷提取物的制造
相对100g白芷加入5倍量的石油醚,在50℃回流提取1小时,过滤,得到石油醚提取液,再将该石油醚提取液蒸发后,得到白芷的石油醚提取物约0.9克。
制造例2地黄提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g地黄,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液。再在石油醚提取后的残渣中加入5倍量的95%乙醇,在78℃加热回流提取1小时,过滤,得到乙醇提取液,再将该乙醇提取液蒸发后,得到地黄的乙醇提取物约5.0克。
制造例3白术提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g白术,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液,再将该石油醚提取液蒸发后,得到白术的石油醚提取物约0.8克。
制造例4甘草提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g甘草,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液。再在石油醚提取后的残渣中加入5倍量的95%乙醇,在78℃加热回流,提取1小时,过滤,得到乙醇提取液,再将该乙醇提取液蒸发后,得到甘草的乙醇提取物约9.1克。
制造例5大黄提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g大黄,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液。再在石油醚提取后的残渣中加入5倍量的95%乙醇,在78℃加热回流提取1小时,过滤,得到乙醇提取液,在乙醇提取后的残渣中加入5倍量的水,在60℃温水浴中超声提取1小时,过滤,得到水提取液再将该水提取液蒸发后,得到大黄的水提取物约6.9克。
制造例6白及提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g白及,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液,再将该石油醚提取液蒸发后,得到白及的石油醚提取液物0.4克。
制造例7何首乌提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g何首乌,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液,再将该石油醚提取液蒸发后,得到何首乌的石油醚提取物约0.2克。
制造例8桔梗提取物的制造
将制造例1的100g白芷取代为100g桔梗,进行同样方法的提取,得到石油醚提取液,再将该石油醚提取液蒸发后,得到桔梗的石油醚提取物约0.5克。
实施例1神经酰胺产生促进试验
<试验用溶液和对照溶液>
制造例 | 试验用溶液 | 对照溶液 |
1,3,6,7,8(石油醚提取物) | 以乙醇为溶剂制备各自含1%w/v的该等石油醚提取物的乙醇溶液。 | 乙醇 |
2,4(乙醇提取物) | 以乙醇为溶剂制备各自含1%w/v的该等乙醇提取物的乙醇溶液。 | 乙醇 |
5(水提取物) | 以10%乙醇为溶剂制备含1%w/v的该水提取物的乙醇溶液。 | 10%乙醇 |
<培养条件>
在EpiLife-KG2(KURABO公司)6孔板上播种正常人表皮角化细胞(NHEK(F)),培养到成为聚集(confluent)状态。此后,变换为EpiLife-KG2(无增殖添加因子),分别添加上述试验用溶液及对照液。培养3日后,从每个孔回收细胞。
<脂质提取>
由Bligh and Dyer法从回收的细胞中提取脂质。将提取液进行氮气干燥后,将在氯仿·甲醇混合液中再溶解物制作为脂质样品。另外,蛋白质量由BCA法进行定量。
<神经酰胺量解析>
以薄层色谱(TLC)法在提取的脂质中进行解析。以氯仿∶甲醇∶醋酸=190∶9∶1水平方向展开2次,吹干并喷硫酸铜显色溶液,以加热板烘烤并检测神经酰胺,所得值以各自的蛋白量相除得神经酰胺量(表1),表中数值表示以(添加了上述对照液的)对照品的神经酰胺量为1时的相对值。
【表1】
植物提取物 | 神经酰胺量(相对值) |
白芷(石油醚提取物) | 4.3 |
地黄(乙醇提取物) | 3.3 |
白术(石油醚提取物) | 2.0 |
甘草(乙醇提取物) | 7.9 |
大黄(水提取物) | 4.7 |
白及(石油醚提取物) | 2.0 |
何首乌(石油醚提取物) | 5.1 |
桔梗(石油醚提取物) | 2.4 |
如表1中所示,对于本发明的植物提取物,确认了人角化细胞的神经酰胺产生促进效果。
Claims (2)
1.一种神经酰胺产生促进剂,其特征在于,
以选自白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的植物或其提取物为有效成分。
2.选自白芷、地黄、白术、甘草、大黄、白及、何首乌和桔梗的植物或其提取物用于制造神经酰胺产生促进剂的用途。
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