CN101639460A - 一种红树木榄中总黄酮含量的测定方法 - Google Patents
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Abstract
一种红树木榄中总黄酮含量的测定方法,取芦丁标准工作液,以硼砂缓冲溶液为底液,进行线性扫描得到极谱图,峰电流的大小随芦丁含量的增大而增大,并呈良好的线性关系。取不同量芦丁标准工作液,配制成梯度系列标准溶液,以硼砂为底液,分别测定标准系列溶液的峰电流,以芦丁溶液浓度为横坐标,峰电流为纵坐标,绘制标准曲线。取一定量由红树木榄样制得的待测液,在与芦丁对照品相同的极谱条件下扫描该待测液的极谱波,并测定其峰电流值,利用标准曲线查得与此峰电流值对应的待测液中总黄酮的浓度,进而即可求得试样中总黄酮的含量。本发明具有操作简单、体系稳定、线性范围宽等特点,用于红树木榄中总黄酮含量的测定,选择性强,干扰少,测定结果准确度高。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄酮类物质含量的测定方法,特别是一种红树木榄中总黄酮含量的测定方法。
背景技术
黄酮类化合物是自然界广泛存在的一大类物质,广泛分布于植物界。绝大多数植物都能合成黄酮类化合物。黄酮类化合物的结构特点是具有C6-C3-C6的基本骨架,并根据中间吡喃环的不同氧化水平和两侧A、B环上的各种取代基的不同,分为不同类型,主要包括黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、黄烷酮类、查耳酮、异黄烷酮、双黄酮类等。在天然植物中,绝大多数黄酮类化合物以苷的形式存在,少数以游离形式存在。
黄酮类化合物具有多种重要的生理功能。如清除自由基作用、延缓衰老作用、抗菌作用、抑制癌细胞的生长或抗癌作用、解痉挛作用、降低血压作用、女性激素样作用、抑制胆碱酯酶作用、扩张冠状动脉的作用等。此外,大量研究还表明黄酮类化合物有降血脂、止血、镇咳祛痰、降低血管脆性、抑制血小板聚集等作用。基于黄酮类化合物的诸多重要生理功能,对黄酮类化合物的研究备受关注,显示出活跃的研究领域,尤其其分析测定方法的研究。
目前分析黄酮类化合物的方法主要有:分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、化学发光法、极谱法和色谱-质谱联用法等。使用光度法测定不同试样中黄酮含量的最多。但光度法中存在显色稳定性问题,影响测定结果的准确度。其他方法如高效液相色谱法等,具有分离效果好、分析速度快、灵敏度高等优点,但设备昂贵,不容易普及,使用受到限制。所以寻找探索操作相对简单、容易普及的有效的黄酮类化合物的测定方法具有重要的意义。
我们在研究中发现,采用单扫描示波极谱法测定黄酮类化合物,其极谱波峰形完整、体系稳定,灵敏度高,操作简单,应用于木榄叶黄酮类物质提取液中总黄酮的测定,选择性强,干扰少,重复性好,测定结果准确可靠。
发明内容
本发明的目的是提供一种准确、简单、可操作性强的测定红树木榄中总黄酮含量的方法。
本发明可由以下方法来实现:
(1)采集红树木榄叶,清水洗净,置阴凉通风处晾干,粉碎,以60%的乙醇为提取剂,料液比1∶20,在85℃下水浴提取2h,连续重复提取2次,合并提取液。(2)将提取液经聚酰胺柱层析分离,分离液进行旋转蒸发浓缩制得待测液,供总黄酮含量测定。(3)以芦丁为对照品,用甲醇配制成芦丁储备液,再适当稀释作为芦丁标准工作液。以硼砂缓冲溶液(pH=9.18)为底液,分别对芦丁标准工作液和由(2)制得的待测液在该底液中进行极谱线性扫描,得到极谱图,比较二者的极谱图,从而得到其极谱特性。(4)配制芦丁梯度系列标准溶液,以硼砂为底液,在与(3)相同的条件下,分别测定标准系列溶液的峰电流,以芦丁溶液浓度为横坐标,峰电流为纵坐标,绘制标准曲线。(5)取一定量由(2)制得的待测液,在与以上相同的条件下测定其极谱波的峰电流,利用标准曲线,得到对应此待测液中总黄酮的浓度,进而求得木榄叶中总黄酮的含量。
本发明具有如下特点:
1、方法操作简单。在使用本发明测定黄酮含量中,除了底液硼砂外,不需另加其他任何试剂,步骤少,简捷方便。
2、选择性好,干扰少。在样品的极谱波附件无其他杂峰,且峰形完整。
3、体系稳定,极谱波峰形稳定。
4、线性范围较宽。
附图说明
图1为本发明红树木榄叶总黄酮提取液的极谱图。
具体实施方式
实施实例1
红树木榄中总黄酮的测定
(1)将采集来的红树木榄叶,清水洗净,置阴凉通风处晾干,粉碎,作为木榄叶分析试样。以60%的乙醇为提取剂,料液比1∶20,在85℃下水浴提取2h,连续重复提取2次,合并提取液经聚酰胺柱层析分离,旋转蒸发浓缩制得待测液,供总黄酮含量测定用。
(2)以芦丁为对照品,用甲醇配制成10.0mg/ml的芦丁储备液,再稀释至1.0mg/ml,作为芦丁标准工作液。以硼砂缓冲溶液(pH=9.18)为底液,分别对芦丁标准工作液和由(1)制得的待测液在该底液中进行极谱线性扫描,得到极谱图,极谱波峰电位为-1.636V(vs·SCE),而且峰电流的大小随芦丁含量的增大而增大,并呈良好线性关系。
(3)取不同量1.0mg/ml芦丁标准工作液,配制成梯度系列标准溶液,以硼砂为底液,在与(2)相同的条件下,分别测定标准系列溶液的峰电流,以芦丁溶液浓度为横坐标,峰电流为纵坐标,绘制标准曲线。
(4)取一定量由(1)制得的待测液,在与以上相同的条件下测定其极谱波的峰电流,利用标准曲线,得到对应此待测液中总黄酮的浓度,进而求得木榄叶中总黄酮的含量。
Claims (4)
1、一种红树木榄中总黄酮的测定方法,其特征在于:
(1)以干燥粉碎的木榄叶为分析试样,60%的乙醇为提取剂,料液比1∶20,在85℃下水浴提取2h,连续重复提取2次,提取液经聚酰胺柱层析分离后,以芦丁为对照品,考察其极谱特性;
(2)以芦丁为对照品,配制标准系列,采用标准曲线法测定木榄叶提取分离液中总黄酮的含量。
2、据权利要求1所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法,其特征在于:对芦丁对照品及提取液分别进行单扫描示波极谱特性考察,峰电位为-1.636V(vs·SCE)。
3、据权利要求2所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法,其特征在于:其特征在于该极谱特性要求的介质为pH=9.18的硼砂缓冲溶液。
4、据权利要求2所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法,其特征在于:极谱波峰电流与芦丁含量在0.06~1.2mg·L-1范围内呈良好的线性关系。
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2009
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