CN101578267A - 17-烯丙氨基-17-脱甲氧格尔德霉素多晶型物和制剂 - Google Patents

Abstract

17－烯丙氨基－17－脱甲氧格尔德霉素多晶型物和制剂。本发明涉及17－烯丙氨基－17－脱甲氧格尔德霉素(17－AAG)的多晶型物和药物制剂。

Description

17-烯丙氨基-17-脱甲氧格尔德霉素多晶型物和制剂

发明技术领域

[0001]本发明涉及新的17-烯丙氨基-17-脱甲氧格尔德霉素(17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin)(“17-AAG”)多晶型物(polymorph)、制备这样的新的多晶型物的方法、含有17-AAG的药物制剂(尤其是含有这样的新的多晶型物的制剂)及制备和使用这样的药物制剂的方法。

发明背景

[0002]格尔德霉素(geldanamycin)属于安沙霉素(Ansamycin)天然产物家族，该家族成员的特征在于大环内酰胺(macrolactam)环跨过苯核上两个相互间位的位置。除了格尔德霉素，安沙霉素类还包括macbecins、除莠霉素类(herbimycins)、TAN-420(多种)和reblastatin。

[0003]格尔德霉素及其衍生物是得到最广泛研究的安沙霉素类。尽管格尔德霉素最初是作为筛选抗生素活性的结果而被鉴别，但是目前的关注主要在其作为抗癌药物的潜力上。它是热休克蛋白-90(heat shockprotein-90)(“Hsp90”)的抑制剂，Hsp90参与许多蛋白(“客户蛋白(clientproteins)”)的折叠和激活，所述蛋白包括参与信号转导、细胞周期控制和转录调节的关键蛋白。格尔德霉素与Hsp90的结合破坏了Hsp90-客户蛋白的相互作用，阻止了客户蛋白的正确折叠，致使它们易遭受蛋白酶体介导的破坏。在Hsp90客户蛋白中，有牵涉癌的许多突变的或过表达的蛋白：p53、Bcr-Abl激酶、Raf-1激酶、Akt激酶、Npm-Alk激酶、Cdk4、Cdk6、Wee1、HER2/Neu(ErbB2)和缺氧诱导因子(hypoxiainducible factor)-1α(HIF-1α)。然而，格尔德霉素的肝毒性和不良的生物利用率(bioavailability)已经导致其停止作为临床候选。

[0004]然而，关注持续于具有格尔德霉素样生物活性、但具有更加可接受的特性范围的格尔德霉素衍生物或类似物的开发。从化学上说，格尔德霉素的位置17已成为合成格尔德霉素衍生物的有吸引力的焦点，因为其甲氧基容易被亲核体取代，这提供了17-取代的-17-脱甲氧格尔德霉素(17-substituted-17-demethoxygeldanamycins)的方便的合成途径。结构-活性关系(Structure-activity relationship)(SAR)研究已经表明，可以引入化学上和立体上不同的17-取代基，而不破坏抗肿瘤活性。见，例如Sasaki等人，US 4,261,989(1981)(下文称为“Sasaki”)；Schnur等人，US 5,932,566(1999)；Schnur等人，J.Med.Chem.1995，38(19)，3806-3812；Schnur等人，J.Med.Chem.199538(19)，3813-3820；和Santi等人，US 6,872,715B2(2005)；它们的公开内容通过引用被包括。SAR推论得到Hsp90和格尔德霉素衍生物之间的复合物的X-射线晶体共构(co-constructure)的支持，这表明17-取代基从结合袋(binding pocket)突出并进入溶剂(Jez等人，Chemistry & Biology 2003，10，361-368)。最著名的17-取代的格尔德霉素衍生物是17-AAG，其首先在Sasaki中公开，目前正在进行临床试验。另一个值得注意的衍生物是17-(2-二甲氨基乙基)氨基-17-脱甲氧格尔德霉素(17-(2-dimethylaminoethyl)amino-17-demethoxygeldanamycin)(“17-DMAG”，Snader等人，6,890,917B2(2005))，也在进行临床试验。

[0005]在制备药物制剂时，必须考虑正在配制的药物的多晶型物的可能存在。如果它们存在，它们的药学上相关的性质可能不同，包括溶解度、贮存稳定性、吸湿性(hygroscopicity)、密度和生物利用率。在贮存期间，一种多晶型物可能或多或少地自发地转化为另一种多晶型物。这种转化的结果是，设计以输送特定多晶型物的制剂可能最后含有与该制剂不相容的不同的多晶型物。在储存过程中，吸湿性的多晶型物可能吸收水分，错误引入称量操作，并影响可操作性。设计的用于特定的多晶型物的制备程序可能不适于用于不同的多晶型物。即使没有相互转化发生，一种多晶型物可能比另一种多晶型物更容易配制，这使得正确的多晶型物的选择成为关键。因此，多晶型物选择是设计药物制剂的重要因素(如本文所用，术语“多晶型物”包括非晶形和非溶剂化的和溶剂化的晶形，如ICH(人用药物注册技术要求国际协调会议)(International Conference on Harmonization of Technical Requirements forRegistration of Pharmaceuticals for Human Use)指南Q6A(2)所说明)。

[0006]现在已经知道17-AAG是多晶型的。Sasaki最初公开了在212-214℃熔化的17-AAG的单一形式。Zhang等人，US 2005/0176695A1(2005)(下文称为“Zhang”)和Mansfield等人，US 2006/0067953A1(2006)(下文称为“Mansfield”)后来报道17-AAG具有“高熔点”的形式(mp 206-212℃)和“低熔点”的形式(mp 147-153℃)。高熔点的形式是最初由Zhang和Mansfield在其合成物17-AAG中获得的，基于熔点的接近，其似乎与Sasaki报道的形式相同。Zhang和Mansfield接着报道了通过从异丙醇重结晶从高熔点形式制备低熔点形式。Mansfield包括了两种形式的X-射线粉末衍射(X-ray powder diffraction)(XRPD)和示差扫描量热法(differential scanning calorimetry)(DSC)数据，并公开了用它们制备的口服药物制剂。Mansfield进一步公开，低熔点形式实际上是两种多晶型物的混合物，且低熔点形式是他在药物制剂中使用的优选形式。

[0007]在制备安沙霉素类如格尔德霉素和17-AAG药物制剂，尤其是用于肠胃外给药的药物制剂的困难，在于它们很低的水溶解度。(17-DMAG，具有其烷基氨基，是更加可溶的)。迄今为止，配制17-AAG或格尔德霉素的不同技术已经被公开：

(a)Tabibi等人，US 6,682,758 B1(2004)公开了在水混溶性有机溶剂、(c)表面活性剂和(d)水中配制的17-AAG。所述水混溶性有机溶剂可以是二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺、乙醇、甘油、丙二醇或聚乙二醇。所述表面活性剂可以是卵磷脂(egg phospholipid)。

(b)Ulm等人，US 2006/0014730 A1(2006)公开了基于中链甘油三酯、乳化剂(例如，磷脂酰胆碱)和稳定剂(例如，蔗糖)的安沙霉素乳液基药物制剂。

(c)Ulm等人，US 2006/0148776(2006)公开了药物组合物，其包括17-AAG、乳化剂和包括中链和长链甘油三酯的油。

(d)Zhong等人，US 2005/0256097 A1(2005)公开了17-AAG在载体中的制剂，包括(i)第一组分，其为乙醇；(ii)第二组分，其为聚乙氧基化蓖麻油(plolyethoxylated castor oil)(例如，Cremophor^TM)；和(iii)可选地，第三组分，其选自丙二醇、PEG 300、PEG 400、甘油和它们的组合。

(e)Isaacs等人，WO 2006/094029 A2(2006)公开了包括溶解在载体中的17-AAG的药物制剂，所述载体包括无质子极性溶剂以及长链甘油三酯类的水混合物。

(f)Mansfield公开了用于口服给药的药物制剂，包括安沙霉素和一种或多种药学上可接受的增溶剂，附带条件是，当增溶剂是磷脂时，其以至少制剂的5％w/w的浓度存在。其它公开的增溶剂包括不同分子量的聚乙二醇、乙醇、十二烷基硫酸钠、Tween 80、

HS15、碳酸丙烯酯(propylene carbonate)等。分散液和溶液实施方式都被公开。

(g)Desai等人，WO 2006/034147 A2(2006)公开了山梨醇二甲醚(dimethylsorbide)作为配制弱水溶性药物如安沙霉素的溶剂的用途。

[0008]对于弱水溶性药物，如17-AAG，溶剂基制剂的替代物是很小的药物颗粒——有时称为纳米颗粒——分散在介质中的制剂。一般地，见Wermuth，ed.，The Practice of Medicinal Chemistry，第2版，第645-646页(Academic Press 2003)；Ribnow等人，Nature Reviews DrugDiscovery 2004 3，785-795；Peters等人，J.Anti-microbial.Chemotherapy2000 45，77-83；Itoh等人，Chem.Pharm.Bull.2003 51(2)，171-174；Burgess等人，AAPS Journal 2004，6(3)，Article 20；Bosch等人，US5,510,118(1996)；De Castro，US 5,534,270(1996)；和Bagchi等人，US5,662,883(1997)，其公开内容通过引用被包含在此。

[0009]具体关于17-AAG，基于白蛋白的纳米颗粒制剂已经被公开：Tao等人，Am.Assoc.Cancer Res.，96th Annual Meeting(Apr.16-20，2005)，abstract no.1435。然而，白蛋白对于静脉制剂可能是药学上不期望的。Mansfield，如上所述，公开了17-AAG的分散液制剂。其它的专利文件一般地参考制备安沙霉素的纳米颗粒制剂的构思(在某些情况下，包括17-AAG)，但未提供具体的实施例：Santi等人，US 6,872,715B2(2005)；Tian等人，US 6,887,993 B1(2005)；Johnson，Jr.等人，US2005/0020534 A1(2005)；Johnson，Jr.等人，US 2005/0020556 A1(2005)；Johnson，Jr.等人，US 2005/0020557 A1(2005)；Johnson，Jr.等人，US2005/0020558 A1(2005)；Johnson，Jr.等人，US 2005/0026893 A1(2005)；Johnson，Jr.等人，US 2005/0054589 A1(2005)；和Johnson，Jr.等人，US2005/0054625 A1(2005)；它们的公开内容通过引用被包括在此。

[0010]本发明提供了17-AAG的新的多晶型物和由其制备的药物制剂，尤其是特别期望的多晶型物，其用于制备基于分散的药物制剂(dispersion-based pharmaceutical formulations)是优越的。

发明简述

[0011]本发明提供了17-AAG的新的多晶型物，包括尤其适用于悬浮制剂的一些17-AAG多晶型物。两种这样的合适的多晶型物被命名为多晶型物C和多晶型物G，尤其是当它们以纯化的形式使用时。它们的制备和特点在下面更具体地描述。

[0012]在另一个实施方式中，提供了药物悬浮制剂(suspensionformulation)，其包括(a)17-AAG，包括选自纯化的多晶型物C、纯化的多晶型物G和它们的组合的多晶型物，和(b)至少一种药学上可接受的赋形剂。

[0013]在前述的悬浮制剂中，优选地

(A)所述17-AAG以大约2.5到大约75重量百分数之间的量作为悬浮于水介质中的颗粒存在，所述17-AAG具有大约50nm与大约3.0微米之间的颗粒大小分布，其中中值(体积分布)颗粒大小为大约200到大约400nm之间，并且

(B)至少一种药学上可接受的赋形剂包括表面活性剂，所述表面活性剂选自(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯，所述酯与17-AAG的重量比在大约0.20和大约1.0之间，(ii)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，所述嵌段共聚物与17-AAG的重量比在大约0.5到大约1.0之间，(iii)磷脂酰胆碱，所述磷脂酰胆碱与17-AAG的重量比在大约0.04到大约0.1之间；和(iv)它们的组合。

[0014]在本发明的另一个实施方式中，提供了制备药物悬浮制剂的方法，包括均化下列的混合物：

(a)17-AAG，其包括选自纯化的多晶型物C、纯化的G和其组合的多晶型物，所述多晶型物的量在大约2.5和大约10重量百分数之间，和

(b)选自下列的表面活性剂：

(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯，所述酯与17-AAG的重量比在大约0.20和大约1.0之间，

(ii)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，所述嵌段共聚物与17-AAG的重量比在大约0.5和大约1.0之间，

(iii)磷脂酰胆碱，所述磷脂酰胆碱与17-AAG的重量比在大约0.04和大约0.1之间；和

(iv)它们的组合，

直到17-AAG的颗粒大小减小到大约50nm和大约3.0微米之间并且中值(体积分布)颗粒大小在大约200和大约400nm之间的颗粒大小分布。

[0015]在本发明的另一个实施方式中，提供了制备无菌的药物制剂的方法，包括步骤：

(a)提供包括17-AAG的无菌组合物；

(b)无菌混合包括17-AAG的无菌组合物和表面活性剂的无菌溶液，以形成无菌混合物，所述表面活性剂选自(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯、(ii)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、(iii)磷脂酰胆碱、和(iv)它们的组合；和

(c)无菌均化所述无菌混合物，直到17-AAG的颗粒大小减小到大约50nm和大约3.0微米之间并且中值(体积分布)颗粒大小在大约200和大约400nm之间的颗粒大小分布。

[0016]在以上的制剂和方法中，基于总制剂重量，17-AAG的量优选在大约2.5和20重量百分数之间，更优选地在大约2.5和10重量百分数之间，和最优选地在大约4和大约6重量百分数之间。

[0017]在发明的另一个方面中，提供了对需要用17-AAG治疗的对象给予17-AAG的方法，包括向这样的对象静脉给予本发明的药物制剂。

[0018]在本发明的另一个实施方式中，提供了制备纯化的17-AAG的方法，包括步骤：(a)在回流的丙酮中制备17-AAG的溶液；(b)冷却溶液至大约18和大约30℃范围内的温度；(c)通过分批添加抗溶剂来沉淀所述17-AAG；和(d)收集沉淀的17-AAG。这样纯化的17-AAG会显著地清除非17-AAG杂质，并能够用于制备多晶型物C或G。

[0019]在另一个实施方式中，提供了制备纯化的17-AAG的多晶型物C的方法，包括步骤：

(a)提供回流下的17-AAG丙酮溶液；

(b)以允许溶液保持回流的速度，向溶液加入体积与溶液的体积基本相等的水；

(c)蒸馏除去丙酮，直至基本上所有的丙酮被蒸馏除去，在这个过程中，蒸馏纯化多晶型物C沉淀物；和

(d)收集纯化的多晶型物C。

[0020]在另一个实施方式中，提供了通过上述方法制备的纯化的17-AAG的多晶型物C。

附图简述

[0021]图1和2分别是纯化的17-AAG多晶型物C的XRPD图和红外光谱。图3a和3b是纯化的17-AAG多晶型物C的两个不同样品的DSC扫描。

[0022]图4、5和6分别是纯化的17-AAG多晶型物G的XRPD图、IR光谱和DSC扫描。

[0023]图7是本发明的制剂中的17-AAG纳米颗粒的扫描电子显微镜(scanning electron microscope)(SEM)照片。

[0024]图8是对于含有200mg/g 17-AAG的均化批次，颗粒大小作为通过次数的函数的图。

发明详述

17-AAG多晶型物

[0025]格尔德霉素是公知的天然产物，通过培养吸湿链霉菌去势变体(Streptomyces hygroscopicus var.geldanus)NRRL 3602可获得。通过烯丙胺与格尔德霉素反应，17-AAG半合成制备，如在Sasaki中所述。格尔德霉素和17-AAG也都是商业可得的。

[0026]17-AAG是多晶型的，并且存在多种形式，其中许多是溶剂化物。利用不同的溶剂和结晶条件，我们已经产生了许多多晶型物。多晶型物通过如XRPD、DSC、红外光谱法、重量蒸气吸附法(gravimetric vaporsorption)(GVS)、¹H-NMR、偏振光显微术(polarized light microscopy)(PLM)和热重量分析法(thermogravimetric analysis)(TGA)技术进行表征。根据XRPD数据的相似性，我们对多晶型物进行分组，总结性描述提供如下。溶剂化的多晶型物通过组名和溶剂化物名，如以“多晶型物A(DMF溶剂化物)”或“多晶型物A的DMF溶剂化物”被提及。

组A多晶型物A的N，N-二甲基甲酰胺(DMF)、乙酸乙酯(EtOAc)和甲基·异丁基酮(MIBK)溶剂化物在大约5.6、7.0、9.2、11.2、16.4和17.9度2θ处都有XRPD峰(前面的四个是其最低的角峰(angle peak))。DSC显示了起始温度在介于EtOAc溶剂化物的144℃到DMF溶剂化物的168℃下的转变(可能是去溶剂化)。加热后，变温XRPD(VT-XRPD)和DSC表明多晶型物A转化为更稳定的多晶型物C。

组B多晶型物B在大约5.9、6.3、7.2、7.5、9.3、9.8、11.6和12.5度2θ处具有其前八个最低的角XRPD峰。VT-XRPD表明，加热后，多晶型物B转化为多晶型物C。

组C多晶型物C是非溶剂化的多晶型物。在我们鉴定的17-AAG多晶型物中，它是对湿度和热最稳定的。它在大约6.4、8.3、9.6、13.3、14.9、15.7、19.1和20.8度2θ处具有特征XRPD峰。多晶型物C的DSC差示热分析图表明了在大约188到大约205℃的起始温度下的吸热，在更低的温度下没有任何显著的热事件发生。加热后，多晶型物C不转化为任何其它的多晶型物。

组D多晶型物D(二氯甲烷溶剂化物)在大约3.9、4.6、5.7和7.9度2θ处具有XRPD峰，前三个是其最低的角峰。加热后，它转化为多晶型物C。

组E多晶型物E的苯甲醚、叔-丁甲醚和二甲亚砜溶剂化物在大约4.2、5.8、7.8、8.8、9.2、13.1和13.7度2θ处具有特征XRPD峰，前5个是其最低的角峰。DSC差示热分析图显示了分别具有大约143、147和145℃的起始温度的吸热转化(endothermictransitions)。典型地，该多晶型物组用高沸点溶剂制备。熔化后，这些多晶型物以熔融态存在，直到在大约220℃下分解。然而，在40℃和70％相对湿度(RH)下观察到向多晶型物C的转化。

组G在大约5.4、6.8、7.7、8.9、9.6、10.7和13.6度的2θ下，多晶型物G组具有特征XRPD峰，前六个是其最低的角峰。加热将多晶型物G转化为多晶型物C。

[0027]在这些多晶型物中，多晶型物C是对热和湿最稳定的。许多其它的多晶型物是不稳定的，或被热和/或湿转化为多晶型物C。由于这些原因，多晶型物C是用于药物制剂的特别优选的多晶型物。而且，我们已经发现，多晶型物C产生最稳定的纳米颗粒悬浮液制剂，如下面所述。如以下数据所示，多晶型物G也产生稳定的纳米颗粒悬浮液制剂，因此也是优选的多晶型物。

[0028]高纯的17-AAG，其通常具有95％以上的纯度，并且优选97％以上的纯度(没有化学杂质，即，不是17-AAG的组分)并适于转化为纯化的多晶型物C或纯化的多晶型物G，可以通过如下进行制备：首先制备17-AAG的回流丙酮溶液，冷却溶液到大约室温(即大约18到大约30℃)，通过在大约1h的期间内加入抗溶剂如水来沉淀17-AAG(但是可以使用更短的或更长的时间，例如15分钟到24h)，和收集沉淀的17-AAG。

[0029]在制备纯化的17-AAG的可选方法中，制备17-AAG的丙酮溶液。在大约18到大约30℃之间的温度下，加入体积约等于所述溶液体积的水。在搅拌下，使纯化的17-AAG从溶液中沉淀出来，并收集。搅拌可以维持大约15min到大约24h的时间。

[0030]制备纯化的多晶型物C的优选方法(即，将另一种17-AAG多晶型物转化为多晶型物C)包括步骤：

(a)提供17-AAG的回流丙酮溶液；

(b)以允许保持溶液回流的速度，向溶液加入体积与溶液体积基本相等的水；

(c)蒸馏除去丙酮，直至罐温达到或超过95℃，在这个过程中，多晶型物C晶体在溶液中形成；和

(d)收集多晶型物C晶体，为纯化的多晶型物C。

[0031]17-AAG的回流丙酮溶液可以通过将17-AAG溶解于一定体积的回流丙酮或通过在室温下将17-AAG溶解于一定体积的丙酮中并使溶液回流来加以制备。加入大约等体积的水后，在大气压下通过蒸馏除去丙酮。继续蒸馏直到罐温和蒸汽温度都在大约为水的沸点(即，在海平面处进行操作时大约100℃)或者恰低于水的沸点(例如，大约95℃)，在该温度下，基本上所有的丙酮都将被除去。当丙酮蒸馏时，17-AAG相以悬浮的多晶型物C从溶液中分离出(沉淀或晶体)。多晶型物C晶体可通过冷却悬浮液至室温、过滤和用1∶1的丙酮水洗涤来收集。收集的晶体可以真空干燥，例如在40℃下在真空炉中干燥12h。

[0032]制备多晶型物C的另一个方法——尽管非如所期望的，因为产物的结晶度低——包括在大约70℃和大约100℃之间的温度下加热17-AAG 1到18h之间的时间。

[0033]纯化的多晶型物C的代表性XRPD图示于图1中，该具体图是高度结晶的和纯的样品。表I用数字概括了图1的XRPD的数据，包括其三个最低的2θ角峰和几个用于表征多晶型物C的另外的峰。多晶型物C可以通过其在6.4±0.3、8.3±0.3、9.6±0.3、13.3±0.3、14.9±0.3、15.7±0.3、19.1±0.3和20.8±0.3度2θ下的XRPD峰加以定义，其中前三个是其最低的角峰，其余的是接下来的少数几个最强峰，这样的峰是定义多晶型物C的最相关的峰。在21.3±0.3度的2θ下的峰可被用作进一步的诊断峰(或特征峰，diagnostic peak)。

[0034]图2显示了多晶型物C的高度结晶的和纯的样品的红外光谱。

[0035]纯化的多晶型物C的代表性DSC描记线再现于于图3a中，显示了具有大约193℃的起始温度的吸热转变(熔点)，在更低的温度下没有任何去溶剂化转变，这与其被鉴定为非溶剂化多晶型物一致。本领域技术人员将理解，取决于因素如样品纯度和加热速度，DSC转变将会在实验之间稍微有所变化。举例来说，图3b显示了多晶型物C的特别高纯度的样品(在不含非17-AAG材料和不含17-AAG的其它多晶型物两方面)的DSC扫描，其中吸热转变具有大约205℃的起始温度。因此，多晶型物C可以通过具有范围在大约188和大约205℃之间的起始温度、而在更低的温度下不发生任何其它DSC热事件(如，去溶剂化)的吸热转变以DSC方式进行表征。相反，Mansfield报道了其低熔点形式的在156和172℃下的DSC熔融转变和其高熔点形式的在204℃下的熔融转变，这表明其形式与本发明的多晶型物不同。

[0036]纯化的多晶型物G可以通过几条不同的路线制备。在一条路线中，17-AAG的丙酮溶液在搅拌下被倒进水中，连续搅拌几分钟。过滤收获晶体并真空干燥。在另一个方法中，在一段时间如50min内将水逐步加入。晶体被类似地收获和干燥。图4显示了纯化的多晶型物G的XRPD图，其可以被它在5.4±0.3、6.8±0.3、7.7±0.3、8.9±0.3、9.6±0.3和10.7±0.3度的2θ处的六个最低角峰和在13.6±0.3度的2θ处的峰定义。图5是纯化的多晶型物G的红外光谱，而图6是纯化的多晶型物G的DSC扫描，显示了具有大约196℃的起始温度的吸热转变，但在更低的温度下也有几个转变。

[0037]为了提供在本发明的多晶型物和现有技术多晶型物之间的比较，表II并列了多晶型物C和G的XRPD数据对Mansfield报道的其高熔点形式和低熔点形式的XRPD数据，列出了每个的前十个显著峰。如表所明示，多晶型物C和G与Mansfield的形式具有显著不同XRPD图，表明多晶型物C和G是新的。尤其值得注意的是前几个最低角峰的不同，在现有技术中其一般被认为是在诊断上(或表征上，diagnostically)最有用的峰。

[0038]一般地，作为将17-AAG的另一种多晶型物转变为多晶型物C或G的制备过程的结果，或作为除去17-AAG的其它多晶型物的分离过程的结果，多晶型物C或G可以被纯化。另外，作为这类纯化的结果，其它杂质可能已经被除去。优选地，纯化的多晶型物C含有主要量的多晶型物C，排除了其它的17-AAG多晶型物。类似地，纯化的多晶型物G优选含有主要量的多晶型物G，排除了其它的17-AAG多晶型物。更优选地，纯化的多晶型物C(或多晶型物G，根据情况而定)基本上不含有17-AAG的其它多晶型物，意味着很少或没有其它的多晶型物被XRPD检测到。还优选地，纯化的多晶型物C或多晶型物G是基本上化学纯的，指它们含有5％或以下的化学杂质(不是17-AAG的成分)。

[0039]在一个实施方式中，纯化的多晶型物C是包括17-AAG的组分，所述组分由XRPD图表征，该XRPD图在6.4±0.3、8.3±0.3和9.6±0.3度的2θ下具有它的三个最低的角峰，且在13.3±0.3、14.9±0.3、15.7±0.3、19.1±0.3和20.8±0.3度的2θ下进一步具有峰。

[0040]在另一个实施方式中，纯化的多晶型物C是包括17-AAG的组分，其中所述17-AAG在所述组分中主要以多晶型物C的形式存在，其由XRPD图表征，该XRPD图在6.4±0.3、8.3±0.3和9.6±0.3度的2θ处具有它的三个最低的角峰，且在13.3±0.3、14.9±0.3、15.7±0.3、19.1±0.3和20.8±0.3度的2θ处进一步具有峰。

[0041]在一个实施方式中，纯化的多晶型物G是包括17-AAG的组分，其中所述组分由XRPD图表征，该XRPD图在5.4±0.3、6.8±0.3、7.7±0.3、8.9±0.3、9.6±0.3和10.7±0.3度的2θ处具有它的六个最低的角峰，并在13.6±0.3度的2θ处进一步具有峰。

[0042]在另一个实施方式中，纯化的多晶型物G是包括17-AAG的组分，其中所述17-AAG在所述组分中主要以多晶型物G的形式存在，其由XRPD图表征，该XRPD图在5.4±0.3、6.8±0.3、7.7±0.3、8.9±0.3、9.6±0.3和10.7±0.3度的2θ处具有它的六个最低的角峰，并在13.6±0.3度的2θ处进一步具有峰。

制剂

[0043]一般地，我们已经发现，利用纯化的多晶型物C或G制备成功的纳米颗粒制剂的能力不依赖于初始颗粒大小——也就是说，不必在均化前通过微粉化作用或其它相似的工艺预减小17-AAG的颗粒大小。所述17-AAG颗粒仅仅必须足够的小，以通过均化流动路程中的最窄点，通常在小于大约500μm的级别。

[0044]本发明的纳米颗粒制剂具有在大约50nm和大约3.0微米之间，优选地，大约50nm和大约2.0微米之间，更优选地，大约50nm和大约1.2微米之间的17-AAG颗粒大小分布。中值(体积分布)颗粒大小为大约200和大约400nm之间，优选地大约250和大约350nm之间。颗粒大小分布可以通过合适的粒径分析仪如Nanotrac 250(Microtrac，Inc.，Montgomeryville，PA，USA)或Zetasizer Nano(Malvern InstrumentsLtd.，Worcestershire，UK)测量。

[0045]当表面活性剂是聚氧乙烯山梨糖醇酐与C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯时，后者可以是饱和的或不饱和的。合适的脂肪酸的例子包括月桂酸、亚油酸、亚麻酸、油酸、棕榈酸、棕榈油酸和硬脂酸。聚氧乙烯山梨糖醇酐可以与C₁₂-C₂₀脂肪酸单酯化或多酯化。聚氧乙烯山梨糖醇酐与C₁₂-C₂₀脂肪酸的合适的酯包括：聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯(聚乙二醇脱水山梨醇单油酸酯(polyethylene glycol sorbitan monooleate)，聚山梨醇酯80(polysorbate 80)或

80)；聚氧乙烯山梨糖醇酐单十二烷酸酯(聚乙二醇脱水山梨醇单十二烷酸酯(polyethylene glycolsorbitan monolaurate)或

20)；聚氧乙烯山梨糖醇酐单棕榈酸酯(聚乙二醇脱水山梨醇单棕榈酸酯酯(polyethylene glycol sorbitanmonopalmitate)或

40)；聚氧乙烯山梨糖醇酐单硬脂酸酯(聚乙二醇脱水山梨醇单硬脂酸酯)(polyethylene glycol sorbitanmonostearate)或

60)；聚氧乙烯山梨糖醇酐三油酸酯(聚乙二醇三油酸酯或

85)；和聚氧乙烯山梨糖醇酐三硬脂酸酯(聚乙二醇脱水山梨醇三硬脂酸酯(polyethylene glycol sorbitan tristearate)或

65)；前两个是优选的，第一个是特别优选的。所述酯与17-AAG的重量比优选地在大约0.20和大约1.0之间，更优选地在大约0.20和大约0.35之间。

[0046]当所述表面活性剂是聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物时，商业可得的形式是

F-68。所述共聚物与17-AAG的重量比优选地在大约0.5到大约1.0之间。

[0047]当表面活性剂是磷脂酰胆碱(也称为卵磷脂)时，它可以从来源如大豆或蛋获得，前者是优选的。磷脂酰胆碱与17-AAG的重量比优选地在大约0.04和大约0.1之间，更优选地在大约0.04和大约0.06之间。可以使用的具体的磷脂酰胆碱是

90G，它是大豆来源的磷脂酰胆碱。

[0048]两种或以上的不同表面活性剂的组合可以被使用，例如，聚氧乙烯山梨糖醇酐与C₁₂-C₂₀脂肪酸的两种不同的酯或一种这样的酯和聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物。表面活性剂的优选组合是(A)聚氧乙烯山梨糖醇酐与C₁₂-C₂₀脂肪酸或聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和(B)磷脂酰胆碱。

[0049]优选地，均化步骤受在高剪切条件下通过高压均化来实现，如在1,000和45,000psi之间的压力下，优选地在大约18,000到大约23,000psi的压力下，根据需要采用多程，通过强制混合物通过小孔(例如，直径50到125微米，优选地80到100微米)。任何数量的装置可以被使用，包括微流化器(microfluidizers)、磨机等。

[0050]任选地，本发明的制剂进一步包括碳水化合物，如单糖和/或二糖或它们的组合。如果使用，最终的制剂优选地含有按重量计大约5和大约15wt％的总碳水化合物。作为举例说明，最终的制剂可以含有10wt％的蔗糖，或者4wt％的甘露醇和1wt％的蔗糖的组合(5wt％的总碳水化合物含量)。碳水化合物可以选自蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、右旋糖和它们的组合，优选蔗糖。

[0051]本发明的制剂可以被冷冻干燥(冻干)，并作为冻干物贮存，用于以后的重(reconstitution)。在这样的情况下，碳水化合物的使用是优选的，以作为冷冻保护剂(cryoprotectant)和/或冻干保护剂(lyoprotectant)。关于药物制剂的冻干的示例性公开包括Konan等人，Int.J.Pharm.2002 233(1-2)，293-52；Quintanar-Guerreo等人，J.Microencapsulation 1998 15(1)，107-119；Johnson等人，J.Pharmaceutical Sci.2002，91(4)，914-922；和Tang等人，Pharmaceutical Res.2004，21(4)，191-200；其公开内容通过引用被包括在此。

[0052]作为冻干的替代选择，本发明的制剂可以是冷冻贮存，然后融化、重建和给药前稀释。在这样的情况下，碳水化合物如蔗糖用作冻干保护剂是优选的。

[0053]当最终的纳米颗粒制剂需要是无菌时，我们已发现加热灭菌(高压灭菌器)制剂本身是不切实际的，因为该程序导致颗粒大小分布发生变化。由于17-AAG颗粒大小的缘故，过滤除菌制剂也不是可行的。通过单独或组合使用本领域中建立的技术，如无菌过滤或高压灭菌，分开灭菌17-AAG(例如，通过高压灭菌17-AAG的水悬浮液或通过无菌结晶)和其它组分(例如，聚山梨醇酯80、磷脂酰胆碱、碳水化合物等)，接着无菌组合制剂组分并进行加工步骤，我们解决了这个问题。

[0054]我们已经发现，以比实际给药浓度更加浓缩的起始浓度制备制剂更方便，这减小了贮存和运输过程中将要处理的材料的体积。然后，在给药前不久稀释制剂——例如以大约10×到20×稀释到合适的载体中，如注射用水(WFI)或5％右旋糖水溶液(D5W)——并给药，一般地在稀释的12到24h内。然而，如果需要，制剂可以直接以最终的给药浓度直接制备。

[0055]制剂可以通过合适的方法被给予对象，如肠胃外地(尤其是静脉)。可选地，也可以考虑经口给药。因为它不需要使用潜在地导致患者超敏反应的赋形剂(如，)，它代表了更安全的产品。准备用于输注的稀释制剂的重量克分子渗透浓度(大约260mmol/kg)与生理条件相似。因为制剂含有更高浓度的17-AAG，更小的体积被给予，伴随更短的给药时间。

工业实用性

[0056]17-AAG可以被用于治疗多种增生疾病，如但不限于过度增生疾病，包括：头颈癌，其包括头、颈、鼻腔、鼻窦、鼻咽、口腔、口咽、喉、喉咽、唾液腺和副神经节瘤的肿瘤；肝和胆管癌，尤其是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma)；肠癌，尤其是结肠直肠癌；治疗卵巢癌；小细胞和非小细胞性肺癌(small cell and non-small cell lung cancer)；乳腺癌肉瘤，如纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞肉瘤(malignant fibroushistiocytoma)、胚胎性横纹肌肉瘤(embryonal rhabdomysocarcoma)、平滑肌肉瘤(leiomysosarcoma)、神经纤维肉瘤(neurofibrosarcoma)、骨肉瘤(osteosarcoma)、滑膜肉瘤(synovial sarcoma)、脂肉瘤(liposarcoma)和软组织腺泡状肉瘤(alveolar soft part sarcoma)；中枢神经系统肿瘤(neoplasms of the central nervous systems)，尤其是脑癌；淋巴瘤如霍奇金淋巴瘤(Hodgkin’s lymphoma)、淋巴浆细胞性淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)、滤泡淋巴瘤(follicular lymphoma)、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(mucosa-associated lymphoid tissue lymphoma)、套细胞淋巴瘤(mantle cell lymphoma)、B系大细胞淋巴瘤(B-lineage largecell lymphoma)、伯基特淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)和T细胞间变性大细胞淋巴瘤(T-cell anaplastic large cell lymphoma)。更尤其是，可以被17-AAG靶向治疗的癌，包括乳腺癌、多发性骨髓瘤(multiple myeloma)、黑素瘤(melanoma)、结肠癌、肺癌(特别是非小细胞性肺癌(non-smallcell lung cancer)(NSCLC))、前列腺癌、甲状腺癌、卵巢癌、淋巴瘤、胰腺癌和白血病(特别是慢性髓性白血病(chronic myelogenous leukemia)(CML)和慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia)或(CLL))。

[0057]特征在于细胞过度增生的非癌疾病表征也可以被根据本发明施用的17-AAG治疗。这样的疾病的说明性例子包括但不限于：萎缩性胃炎(atrophic gastritis)、炎性溶血性贫血(inflammatory hemolytic anemia)、移植物排斥(graft rejection)、炎性粒细胞缺乏(inflammatoryneutropenia)、大疱性类天疱疮(bullous pemphigoid)、乳糜泻(coeliacdisease)、脱髓鞘神经病变(demyelinating neuropathies)、皮肌炎(dermatomyositis)、炎症性肠病(inflammatory bowel disease)(溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)和克罗恩病(Crohn’s disease))、多发性硬化(multiplesclerosis)、心肌炎(myocarditis)、肌炎(myositis)、鼻息肉(nasal polyps)、慢性鼻窦炎(chronic sinusitis)、寻常天疱疮(pemphigus vulgaris)、原发性肾小球性肾炎(primary glomerulonephritis)、牛皮癣(psoriasis)、手术粘连(surgical adhesions)、狭窄(stenosis)或再狭窄(restenosis)、巩膜炎(scleritis)、硬皮病(scleroderma)、湿疹(包括特应性皮炎(atopicdermatitis)、刺激性皮炎(irritant dermatitis)、过敏性皮炎(allergicdermatitis))、牙周病(periodontal disease)(即，牙周炎(periodontitis))、多囊肾病(polycystic kidney disease)和I型糖尿病。其它的例子包括血管炎(vasculitis)(例如，巨细胞动脉炎(Giant cell arteritis)(颞动脉炎(temporal arteritis)、高安(氏)动脉炎(Takayasu’s arteritis))、结节性多动脉炎(polyarteritis nodosa)、过敏性脉管炎(allergic angiitis)和肉芽肿病(granulomatosis)(丘-施二氏病(Churg-Strauss disease))、小血管炎重叠综合症(polyangitis overlap syndrome)、超敏性血管炎(hypersensitivityvasculitis)(过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura))、血清病(serumsickness)、药物诱发性血管炎(drug-induced vasculitis)、传染性血管炎(infectious vasculitis)、肿瘤性血管炎(neoplastic vasculitis)、结缔组织病(connective tissue disorders)相关的血管炎、补体系统(complement system)先天不足(congenital deficiencies)相关的血管炎、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)、川崎氏病(Kawasaki’s disease)、中枢神经系统血管炎(vasculitis of the central nervous system)、伯格氏病(Buerger’sdisease)和系统性硬化症(systemic sclerosis))；胃肠道病(gastrointestinaltract diseases)(例如，胰腺炎、克罗恩病、溃疡性结肠炎、溃疡性直肠炎(ulcerative proctitis)、原发性硬化胆管炎(primary sclerosingcholangitis)、包括特发性的(ideopathic)任何原因引起的良性狭窄(benignstrictures)(例如，胆管狭窄、食管狭窄、十二指肠狭窄、小肠狭窄或结肠狭窄)；呼吸道疾病(例如哮喘、超敏性肺炎(hypersensitivitypneumonitis)、石棉沉着病(asbestosis)、矽肺(silicosis)和其它形式的尘肺病(pneumoconiosis)、慢性支气管炎(chronic bronchitis)和慢性阻塞性气道病(chronic obstructive airway disease))；鼻泪管病(nasolacrimal ductdiseases)(例如，包括特发性的所有原因的狭窄)；和咽鼓管病(eustachean tube diseases)(例如，包括特发性的所有原因的狭窄)。

[0058]17-AAG可以联合另一种活性药物成分(active pharmaceuticalingredient)(API)给药，所述活性药物成分如其它的抗癌药或细胞毒性药物(cytotoxic agents)，包括烷基化剂(alkylating agents)、血管生成抑制剂(angiogenesis inhibitors)、抗代谢药(antimetabolites)、DNA裂解剂、DNA交联剂、DNA嵌入剂(intercalators)、DNA小沟结合剂(minor groovebinders)、烯二炔(enediynes)、热休克蛋白90抑制剂、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(histone deacetylase inhibitors)、微管稳定剂、核苷(嘌呤或嘧啶)类似物、核输出抑制剂(nuclear export inhibitors)、蛋白酶体抑制剂、拓扑异构酶(I或II)抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂。具体的抗癌药或细胞毒性药物包括β-拉帕醌(β-lapachone)、柄型菌素P3(ansamitocin P3)、auristatin、比卡鲁胺(bicalutamide)、博来霉素(bleomycin)、硼替佐米(bortezomib)、白消安(busulfan)、激肽释放酶结合蛋白A(callistatin A)、喜树碱(camptothecin)、希罗达(capecitabine)、CC-1065、顺铂(cisplatin)、隐藻素(cryptophycins)、柔红霉素(daunorubicin)、disorazole、多西紫杉醇(docetaxel)、阿霉素(doxorubicin)、duocarmycin、dynemycin A、埃博霉素(epothilones)、依托泊苷(etoposide)、氟尿苷(floxuridine)、氟达拉宾(floxuridine)、氟尿嘧啶(fluoruracil)、吉非替尼(gefitinib)、格尔德霉素、17-DMAG、吉西他滨(gemcitabine)、羟基脲(hydroxyurea)、伊马替尼(imatinib)、干扰素、白细胞介素、伊立替康(irinotecan)、美登素(maytansine)、氨甲喋呤、丝裂霉素C、草酸铂(oxaliplatin)、紫杉醇(paclitaxel)、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanilide hydroxamic acid)(SAHA)、噻替派(thiotepa)、拓扑替康(topotecan)、曲古菌素A(trichostatinA)、长春碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)和长春碱酰胺(vindesine)。优选的联合是与吉非替尼(

)、硼替佐米(

)、紫杉醇(

)、多西紫杉醇、沙利度胺(thalidomide)(

)、来那度胺(lenalidomide)(

)和

[0059]当疗程需要涉及17-AAG和另一种API的联合治疗时，这种其它的API可以在其自己的制剂中单独给药，或当可行时，可以作为加到本发明的制剂中的附加成分给药。

[0060]使用本发明的药物溶液制剂，17-AAG可以以大约4mg/m²到大约4000mg/m²的范围的剂量给药，这取决于给药的频率。17-AAG优选的给药方案是每周大约450mg/m²(Banerji等人，Proc.Am.Soc.Clin.Oncol.22，199(2003，摘要797))。可选地，可以以每周大约308mg/m²的剂量给药。见Goetz等人，Eur.J.Cancer 38(Supp.7)，S54-S55(2002)。另一个给药方案是每周两次，剂量范围在220mg/m²到340mg/m²(优选地，或220mg/m²或340mg/m²)。可以用于与另一种药物如多西紫杉醇联合治疗的给药方案是每三周给予这两种药，其中每次给药的17-AAG的剂量达650mg/m²。

[0061]本发明的制剂可以含有另外的赋形剂。合适的赋形剂包括载体、表面活性剂、增稠剂或乳化剂、固体粘结剂、分散或悬浮助剂、增溶剂、色料、增香剂、涂料、冷冻保护剂、冻干保护剂、崩解剂、润滑剂、增甜剂、防腐剂、等渗剂和它们的组合。合适的赋形剂的选择和使用在Gennaro，ed.，Remington：The Science and Practice of Pharmacy，20th Ed.(Lippincott Williams & Wilkins 2003)中被教导，其公开内容通过应用被包含在此。

[0062]所述对象通常是人类，尽管本发明的方法可以被作为兽药的目的实施，其中合适调节用于具体的目的哺乳动物(包括猫、牛、狗、马等)的单位剂量。

[0063]通过参考下面以说明性而非限制性的方式提供的实施例，本发明的实践可以被进一步理解。

实施例1-纯化的17-AAG的制备

[0064]通过利用大约环境温度下从丙酮-水中慢结晶来除去极性杂质，本方法产生高纯的17-AAG。含有粗17-AAG(21g)的烧瓶被设立，用于回流。丙酮(20mL每克固体)被加入到烧瓶中。使浆液回流并在该温度下维持5min。在1h的时间内将混合物冷却至25℃。在1h的时间内将水(体积等于丙酮的体积)加入。20min后，过滤浆液。滤饼用1∶1的丙酮∶水(40mL)洗涤。湿饼被过滤并保存，以用于进一步的加工。这样产生的17-AAG具有99.7％的色谱纯度，为多晶型物B。

实施例2-纯化的多晶型物C的制备

[0065]本方案产生主要包括具有高结晶度的多晶型物C的17-AAG。如果高纯17-AAG(如根据前述实施例制备的)被使用，那么获得的多晶型物C既是高纯的又是高晶态的。

[0066]使17-AAG(1g，根据实施例1纯化的)在丙酮(100mL)中的溶液回流。水(100mL)以保持罐回流或者接近回流的速度加入。丙酮被蒸馏除去直至罐温达到100℃。收集另外的馏分(20mL，主要是水)。罐内容物被冷却并用配置有Whatman#52滤纸的Buchner漏斗通过过滤收集固体，并用1∶1丙酮∶水(20mL)洗涤。晶体在＞20℃下真空干燥＞2h，取样，并在85℃下真空干燥大约12h，产生多晶型物C。

实施例3-纯化的多晶型物G的制备

[0067]室温下，17-AAG(10.0g)在丙酮(750mL)中的溶液在搅拌下被倒入水(1.05L)中。搅拌溶液另外的70min。多晶型物G晶体通过过滤被收集，并在45℃下干燥18h。

[0068]在可选的方法中，17-AAG(1.0g)在丙酮(117mL)中溶解并在室温下搅拌。水(117mL)以15mL/min的速度加入。将混合物搅拌另外的50min，并过滤收集多晶型物G晶体，在70℃下干燥44h。

实施例4-17-AAG多晶型物的分析和表征

[0069]17-AAG多晶型物的纯度通过高效液相色谱法(HPLC)测量，参数如下：Zorbax C8柱(4.6×50mm，3.5微米)，UV(237nm)检测器，1.25mL/min的流速，5μL注射量，乙腈为溶剂A，10mM乙酸铵(pH 5.8)为溶剂B，用45∶55(v∶v)溶剂A∶溶剂B的流动相等度洗脱，15min的运行时间。

[0070]XRPD图通过Pharmorphix Ltd.(Cambridge，United Kingdom)获得。在相同的条件下，在Siemens D5000衍射计上获得纯17-AAG多晶型物C和与硅粉(Aldrich，60目，Cat.No.267414-5G)混合的17-AAG多晶型物C的XRPD图：CuKα射线(40kV，40mA)、θ-θ测角计、自动发散和接收狭缝、石墨次级单色仪和闪烁计数仪。在2°到42°的2θ角度范围内用0.02°2θ的步长和1秒的步长时间以持续的扫描模式收集数据。样品在环境条件下运行，并用收到时的未经碾磨的粉末制备为平板样本。大约25-50mg的样品被轻轻地包装入直径12mm、0.5mm深的腔中，其被切成抛光的、零背景(510)硅片(The Gem Dugout，1652Princeton Drive，Pennsylvania State College，PA 16803，USA)中。在分析过程中，所用的样品都在其各自的平面中固定地和旋转地运行。

[0071]在使用EVA评价程序(Brucker Diffrac)将Kα₂成分剥离后，用Cu Kα₁(λ＝1.5406

)报道XRPD数据。第二衍射图样(或花样)(seconddiffraction pattern)被内标于(internally referenced to)在2θ＝28.44°下的111硅反射(silicon reflection)。从该图，衍射计的零位误差被确定为+0.04°。代表性的数据提供在本说明书中前面讨论的图1和4与表I和II中。本领域技术人员将理解，根据参数如样品纯度和制备，一些以测量的2θ角表示的散射可以在±0.3度的水平被预期。

[0072]红外光谱用配有ATR附件的Perkin-Elmer Model 1600获得。代表性的红外光谱示于本说明书前面讨论的图2和5中。

[0073]DSC数据在TA仪器Q100或Q1000设备上收集。能量和温度校准标准是铟。在氮气吹扫下，在20和250℃之间以10℃/min的速度加热样品。所有的样品在非密封性封闭的铝盘中被扫描。代表性的扫描示于本说明书前面讨论的图3和6中。

实施例5-含有聚山梨醇酯80的制剂

[0074]17-AAG(纯化的多晶型物C，1.25g)晶体与WFI(13g)和聚山梨醇酯80的WFI溶液(3.75g的10wt％的WFI溶液)混合。所述混合物被装载入Microfluidics Model 110S微流化器的储蓄器中，该储蓄器含有7g WFI并配有G10Z相互作用室，该相互作用室配有没入冰水浴中的冷却旋管，所述混合物在23kpsi下、在以100psi的压力供应压缩空气下、以再循环模式被加工13min(640冲程)。本方案产生在水介质中具有约50mg/mL(更精确地，52.6mg/mL)的17-AAG浓度的制剂，所述制剂具有大约1.5wt％的聚山梨醇酯80，具有1微米以下的17-AAG颗粒大小分布(体积分布)，中值颗粒大小为300nm(体积分布)。

[0075]颗粒大小分布通过动态光散射用Nanotract 250粒径分析仪(Microtrac Inc.，Montgomeryville，Pennsylvania)测定。Nanotrac 250装置被配置用于测量在具有水的特征的流体(折射率：1.333，在20℃下的粘度：0.797cP，在30℃下的粘度：1.002cP)中具有“吸收”透明度的“异常”形状颗粒的PSD(体积分布)。背景信号用5％注射用右旋糖(D5W)测量。接着，该纳米颗粒制剂以10到20倍稀释到D5W中并充分混合。稀释的样品的PSD被测量为5个重复的5-分钟分析的平均值并作为颗粒大小的函数以柱状图的形式报告。PSD反映了颗粒大小的范围和频率，而PSD的其它特征用于定量。D50是对应于大于50％的总颗粒体积(即中值颗粒大小)的颗粒大小的体积百分数。D90是对应于大于90％的总颗粒体积的颗粒大小的体积百分数，并且是分散体中最大颗粒的量度。通过动态光散射技术测量的颗粒大小分布用SEM图像补充，所述SEM图像通过本领域已建立的技术获得。通过SEM图像测定的颗粒大小一般与通过光散射测定的颗粒大小一致。图7显示了我们的一个制剂中17-AAG纳米颗粒的代表性SEM图像。

[0076]利用下面的关系，选择加工时间以对应于大约150次通过：

其中

t＝总加工时间

V_批＝制剂批次体积

r＝速度(活塞冲程/时间)

V_冲程＝活塞冲程位移的体积

[0077]一般地，通过的次数在大约50和200次通过之间，优选地，在大约100和大约150次通过之间。更大数目的通过虽然无害，但不必要地延长了加工时间。

[0078]可选地，加工时间可以通过评价在中间时间点的颗粒大小分布并加工直到获得期望的颗粒大小分布来确定。

实施例6-具有聚山梨醇酯80和磷脂酰胆碱的制剂

[0079]17-AAG(纯化的多晶型物C，1.25g)与WFI(13.62g)以及在WFI中的聚山梨醇酯80溶液(2.5g，10wt％的WFI溶液)和大豆磷脂酰胆碱的水悬浮液(0.63g，10wt％的WFI悬浮液)混合。所述混合物被装载入含有7g WFI的Microfluidics Model 110S微流化器的储蓄器中，并如前面的实施例所述进行装配，并在相同的条件下加工。本方案产生在水介质中具有约50mg/mL的17-AAG浓度的制剂，所述制剂具有大约1.0wt％的聚山梨醇酯80和0.25wt％的大豆磷脂酰胆碱，具有1微米以下的17-AAG颗粒大小分布，中值颗粒大小为300nm(体积分布)。

实施例7-具有聚山梨醇酯80、磷脂酰胆碱和蔗糖的制剂

[0080]17-AAG(纯化的多晶型物C，1.25g)与WFI(3.62g)以及聚山梨醇酯80溶液(2.5g，10wt％的WFI溶液)、大豆磷脂酰胆碱的水悬浮液(0.63g，10wt％的WFI悬浮液)和蔗糖溶液(10g，25wt％的WFI溶液)混合。所述混合物被装载入含有7g WFI的Microfluidics Model 110S微流化器的储蓄器中，如前面的实施例所述进行装配，并在相同的条件下加工。本方案产生在水介质中具有大约50mg/mL的17-AAG浓度的制剂，所述制剂具有大约1.0wt％的聚山梨醇酯80、0.25wt％的大豆磷脂酰胆碱和10wt％的蔗糖，具有1微米以下的17-AAG颗粒大小分布，中值颗粒大小为300nm(体积分布)。

[0081]当需要无菌制剂时，聚山梨醇酯80和蔗糖溶液用WFI制备并过滤灭菌，或作为单独的溶液或作为二者结合的溶液进行。磷脂酰胆碱悬浮液被制备，接着高压灭菌。17-AAG与一部分WFI混合，并高压灭菌。磷脂酰胆碱悬浮液和17-AAG浆液作为单独的混合物或结合为单一的混合物被高压灭菌。灭菌后，17-AAG、聚山梨醇

80和蔗糖溶液以及磷脂酰胆碱混合物被无菌结合，以获得期望的最终组合物。微流化器被灭菌(例如通过高压灭菌)，且转移和加工步骤无菌进行，而其它如实施例5所述。

[0082]当期望除去一些较大的颗粒时，离心是被推荐的技术。然而，离心可造成颗粒大小分布的相应变化，并损失达40％的17-AAG。过滤可以被用于除去异常值——大的但罕见的颗粒——这样的过滤不显著影响17-AAG颗粒大小分布或分析。

实施例8-浓度对均化器通过量的影响

[0083]均化器中的加工时间是批次体积和通过次数的函数。因此，对于给定的均化操作，给定的颗粒应该经历同样次数的通过，不依赖于颗粒浓度，这提出了这样的可能性：均化器通过量可通过采用相同的通过次数、但是使用更浓的17-AAG起始悬浮液而被增加。

[0084]通过推迟蔗糖的加入直至均化后稀释以及最小化用于过滤灭菌聚山梨醇酯80的水的量，用50mg/mL浓度所需的相似通过次数均化含有多达200mg/mL的17-AAG的制剂到可接受的颗粒大小分布是可行的。图8显示了对于含有200mg/mL 17-AAG的批次，作为通过次数的函数的颗粒大小分布(都基于D50和D90)。数据说明，50次通过以后，颗粒大小分布已经稳定，并且通过用具有200mg/mL的17-AAG浓度的批次，均化器通过量可以为四倍。

[0085]因此，以下可选的方案可以被使用，以产生具有更高均化器通过量的本发明制剂：

(a)制备预均化批次，其含有200mg/mL 17-AAG(多晶型物C)、40mg/mL聚山梨醇酯80、10mg/mL

90G和余量WFI，总批次规模为75g。

(b)17-AAG和Phospholipon 90G通过在水中高压60min而被灭菌。

(c)聚山梨醇酯80作为25％w/w溶液被过滤除菌到灭菌的17-AAG混合物中。

(d)均化设备(Microfluidics MS110)通过高压60min进行灭菌。

(e)经灭菌的材料被加入到经灭菌的均化器中并被加工(压力20-23kpsi，通过数115-150次，相互作用室G10Z，具有冷却旋管和冷却浴)。

(f)经均化的悬浮液被四倍稀释到无菌的13％w/w蔗糖中，以产生最终产物，其包括50mg/mL 17-AAG、10mg/mL聚山梨醇酯80、2.5mg/mL

90G和100mg/mL蔗糖，以及余量WFI。

实施例9-含有

F-68的制剂

[0086]17-AAG与

F68聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物的纳米颗粒制剂如实施例5所述被制备，只是包括5wt％17-AAG和1.25和5wt％之间的

F68。包括2.5和5wt％之间的

F68的所述制剂产生含有大约50mg/mL 17-AAG、颗粒大小分布低于1.2微米的制剂。虽然具有可能的最大颗粒生长(24h内出现不一致的D90波动)，但两种制剂都显示稳定的中值颗粒大小。

[0087]所述2.5％和5％制剂在室温下储存8到9个月，并重新评价分散稳定性。两种制剂通过涡旋大约3min重新混合。在2.5％

F-68制剂中的沉淀物不能被完全地重悬，一些材料保持结合到小瓶的底部。在5％

F-68制剂的沉淀物确实完全重悬，但是一些聚集体是可见的。颗粒大小测量表明，两种制剂主要由100到1,000nm大小范围并具有相似的总大小分布的颗粒组成，虽然它们含有不能用Nanotrac 250仪器测量的大聚集体。对2.5％

F-68和5％

F-68，测量的D50分别是360nm和390nm。

实施例10-含有其它多晶型物的制剂

[0088]采用实施例7的方法，用其它多晶型物制备不灭菌的17-AAG制剂，并与用纯化的多晶型物C制备的制剂比较。提供在表III的结果表明，其它形式的17-AAG导致了差的制剂，而纯化的多晶型物G除外(尽管产生了具有更高D50的制剂)。

实施例11-冻干

[0089]为了制备待冻干的制剂，一部分WFI用相应量的碳水化合物冷冻保护剂溶液取代，如前面实施例所述。例如，WFI的一部分可以用蔗糖水溶液取代，以产生如在前实施例所述最终制剂，但是进一步含有10wt％的蔗糖。可选地，除了进一步含有4wt％甘露醇和1wt％蔗糖外，在其它方面与实施例4和5所述的那些制剂相同的制剂可以通过用相应量的甘露醇-蔗糖溶液取代一部分WFI加以制备。

[0090]为了冻干，以下步骤顺序可以使用：

冷冻：

(a)冷却制剂到+5℃并维持0.5h

(b)使架子逐渐冷却至-5℃并维持另一个0.5h

(c)以大约1℃/min使架子逐渐冷却至-40℃并维持1.5h

初级干燥

(d)抽空到60mTorr的压力

(e)以1℃/min使架子逐渐冷却至-25℃

(f)在-25℃维持15h

(g)使架子逐渐冷却至-28℃并维持该温度，直到初级干燥结束，初级干燥结束基于(i)所有的产物热电偶读数均高于-30℃，随后延迟5h或(ii)初级干燥的终点由差压法指示(Pirani v.差示电容压力计)

(h)以0.2℃/min使架子逐渐升温至40℃

(i)在40℃维持6h

实施例12-储存稳定性

[0091]本发明的纳米颗粒制剂在5℃或25℃下贮存几个月的时间，以评价它们的稳定性。通过比较制备时测量的PSD和储存后测量的PSD，评价制剂的稳定性。在任一的储存条件下经过几个月的时间，没有观察到显著的PSD变化。而且，在任一的储存条件下，没有观察到化学组分(17-AAG分析和杂质分布)的显著改变。正在进行的研究显示出至少9个月内的物理和化学稳定性。

[0092]纳米颗粒制剂的稳定性也在临床应用的条件下进行了检测。在这种情况下，制剂在D5W中被稀释10倍，在环境光线和温度条件下维持，并经过72h的时间后取样。在稀释的制剂中，在外观、化学组分、颗粒大小分布、重量克分子渗透浓度和pH方面，没有观察到显著的变化。这些稳定性研究表明，稀释的材料在典型的临床应用条件下是完全稳定的。

实施例13-光稳定性

[0093]同用

制备的制剂(Zhong等人，US 2005/0256097A1(2005))比较，本实施例比较了根据实施例7的17-AAG分散制剂的光稳定性。

[0094]在装配有60瓦特的柔和白光灯泡(soft-white light bulb)的单独的灯下，每种制剂(20mL)放在小瓶中。所述小瓶距灯一定距离水平放置，这样落在每个小瓶上的光强为1080光烛光(light candles)，其通过校准的光度计测量。每种制剂暴露于光中三天。每天取每种制剂的等份(1mL)用于分析，其中17-AAG的含量用HPLC分析。表IV比较了两种制剂的光稳定性。

[0095]上述结果表明，根据本发明所述的分散制剂意想不到地是更加光稳定的，暴露于光三天后基本上保留了全部的17-AAG滴度，而基于

的制剂已经损失了其17-AAG滴度的大约10％。

实施例14-药物动力学

[0096]该实施例比较了两种制剂的药物动力学参数：根据本发明的纳米悬浮制剂(制剂A)和基于

的制剂(制剂B)。制剂A的组分是：另外含有聚山梨醇酯80(1％)、卵磷脂(0.25％)和蔗糖(10％)的17-AAG(50mg/mL)水纳米悬浮液。制剂B的组分是：在

EL(20％)、丙二醇(30％)和乙醇(50％)中的17-AAG。每种制剂被10X稀释(制剂A稀释到D5W中；制剂B稀释到盐水中)并通过60min静脉输注或经口管饲法给予雄性猎犬，在每种情况剂量为1.0mg/kg。

[0097]结果示于表V(输注)和表VI(管饲法)。

[0098]上述结果表明，通过1h的静脉输注，两种制剂获得非常相似的血浆暴露量(plasma exposures)。当17-AAG通过经口管饲法给药时，观察到较大的生物利用率和血浆暴露量方面的差异(例如，制剂A的3.0％的生物利用率相比于制剂B的5.9％的生物利用率)。

[0100]本发明的前面的详细描述包括与本发明的具体部分或方面主要或专门相关的段落。可以理解，这是为了清楚和方便，具体的特征可以不止与其被公开的段落相关，并且本文的公开内容包括在不同段落发现的信息的所有合适的组合。同样地，虽然本文的各个图和描述涉及本发明的具体实施方式，但是可以理解的是，当具体特征在具体的附图或实施方式的上下文中被公开时，这样的特征也可以在另一个附图或实施方式的上下文中以合适的程度与另一个特征组合使用，或在本发明中总体被应用。

Claims (22)

1.17-烯丙氨基-17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)的纯化的多晶型物C。

2.17-烯丙氨基-17-脱甲氧格尔德霉素(17-AAG)的纯化的多晶型物G。

3.药物悬浮液制剂，其包括(a)17-AAG，其包括选自纯化的多晶型物C、纯化的多晶型物G和它们的组合的多晶型物，和(b)至少一种药学上可接受的赋形剂。

4.权利要求3所述的药物悬浮液制剂，其中17-AAG的多晶型物是纯化的多晶型物C。

5.权利要求3所述的药物悬浮液制剂，其中17-AAG的多晶型物是纯化的多晶型物G。

6.权利要求4所述的药物悬浮液制剂，其中

(A)所述17-AAG以大约2.5到大约75重量百分数之间的量作为悬浮于水介质中的颗粒存在，所述17-AAG具有大约50nm与大约3.0微米之间的颗粒大小分布，其中中值(体积分布)颗粒大小为大约200到大约400nm之间，并且

(B)所述至少一种药学上可接受的赋形剂包括表面活性剂，所述表面活性剂选自(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯，所述酯与17-AAG的重量比在大约0.20和大约1.0之间，(ii)聚氧乙烯和聚氧丙烯嵌段共聚物，所述嵌段共聚物与17-AAG的重量比在大约0.5和大约1.0之间，(iii)磷脂酰胆碱，所述磷脂酰胆碱与17-AAG的重量比在大约0.04到大约0.1之间；和(iv)它们的组合。

7.权利要求6所述的药物悬浮液制剂，其中17-AAG的多晶型物是纯化的多晶型物C。

8.权利要求6所述的药物悬浮液制剂，其中17-AAG的多晶型物是纯化的多晶型物G。

9.权利要求6所述的药物悬浮液制剂，其中所述至少一种药学上可接受的赋形剂进一步包括碳水化合物。

10.权利要求7所述的药物悬浮液制剂，其中所述碳水化合物是蔗糖。

11.权利要求5所述的药物悬浮液制剂，其中所述表面活性剂包括聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯与磷脂酰胆碱的组合。

12.权利要求11所述的药物悬浮液制剂，其中所述聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯是聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。

13.权利要求6所述的药物悬浮液制剂，其中所述表面活性剂包括聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和磷脂酰胆碱的组合。

14.向需要用17-AAG治疗的对象给予17-AAG的方法，包括静脉给予这样的对象权利要求3所述的药物悬浮液制剂。

15.给予需要用17-AAG治疗的对象17-AAG的方法，包括静脉给予这样的对象权利要求6所述的药物悬浮液制剂。

16.制备药物悬浮液制剂的方法，包括均化下列的混合物：

(a)17-AAG，其包括选自纯化的多晶型物C、纯化的G和其组合的多晶型物，所述多晶型物的量在大约2.5和大约10重量百分数之间，和

(b)选自下列的表面活性剂：

(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯，所述酯与17-AAG的重量比在大约0.20和大约1.0之间，

(ii)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物，所述嵌段共聚物与17-AAG的重量比在大约0.5和大约1.0之间，

(iii)磷脂酰胆碱，所述磷脂酰胆碱与17-AAG的重量比在大约0.04和大约0.1之间；和

(iv)它们的组合，

直到所述17-AAG的颗粒大小减小到大约50nm和大约3.0微米之间并且中值(体积分布)颗粒大小在大约200和大约400nm之间的颗粒大小分布。

17.权利要求16所述的方法，其中所述17-AAG的多晶型物是纯化的多晶型物C。

18.制备无菌的药物制剂的方法，包括步骤：

(a)提供包括17-AAG的无菌组合物；

(b)无菌混合包括17-AAG的无菌组合物和表面活性剂的无菌溶液，以形成无菌混合物，所述表面活性剂选自(i)聚氧乙烯山梨糖醇酐和C₁₂-C₂₀脂肪酸的酯、(ii)聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物、(iii)磷脂酰胆碱、和(iv)它们的组合；和

(c)无菌均化所述无菌混合物，直到所述17-AAG的颗粒大小减小到大约50nm和大约3.0微米之间并且中值(体积分布)颗粒大小在大约200和大约400nm之间的颗粒大小分布。

19.权利要求18所述的方法，其中所述17-AAG是纯化的多晶型物C或多晶型物G。

20.制备纯化的17-AAG的方法，包括步骤：(a)在回流的丙酮中制备17-AAG的溶液；(b)冷却所述溶液至大约18和大约30℃范围内的温度；(c)通过分批添加抗溶剂来沉淀所述17-AAG；和(d)收集该沉淀的17-AAG。

21.制备纯化的17-AAG多晶型物C的方法，包括步骤：

(a)提供17-AAG的回流丙酮溶液；

(b)以允许保持所述溶液回流的速度，向所述溶液加入体积与所述溶液的体积基本相等的水；

(c)蒸馏除去丙酮，直至基本上所有的所述丙酮被蒸馏除去，在这个过程中，蒸馏纯化多晶型物C沉淀物；和

(d)收集该纯化的多晶型物C。

22.纯化的17-AAG多晶型物C，其通过权利要求21所述的方法制备。

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