CN101563351B

CN101563351B - 取代的吡唑并-喹唑啉衍生物、它们的制备方法和它们作为激酶抑制剂的用途

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Publication number: CN101563351B
Application number: CN200780047100.8A
Authority: CN
Inventors: M·卡鲁索; I·贝里亚; M·G·布拉斯卡; R·弗格森; H·波斯泰里; B·瓦尔茨西纳
Original assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Current assignee: Nerviano Medical Sciences SRL
Priority date: 2006-12-21
Filing date: 2007-12-17
Publication date: 2013-06-05
Anticipated expiration: 2027-12-17
Also published as: CN101563351A; UA102219C2; ZA200904912B

Abstract

本发明公开了如说明书定义的式(I)的吡唑并-喹唑啉衍生物及其药学可接受的盐，它们的制备方法和包含它们的药物组合物；在治疗中，本发明的化合物可以用于治疗与蛋白激酶活性失调有关的疾病，例如癌症。

Description

取代的吡唑并-喹唑啉衍生物、它们的制备方法和它们作为激酶抑制剂的用途

技术领域

本发明涉及某些调节蛋白激酶活性的取代的吡唑并-喹唑啉化合物。因此，本发明的化合物可以用于治疗由蛋白激酶活性失调导致的疾病。本发明也提供制备这些化合物的方法，包含这些化合物的药物组合物，以及使用包含这些化合物的药物组合物治疗疾病的方法。在癌症治疗中使用有丝分裂抑制剂是用于治疗范围广泛的人癌症的一种广泛接受的临床策略。紫杉烷类(紫杉醇和多西紫杉醇)和长春花生物碱类(长春新碱和长春碱)通过将微管稳定化或去稳定化来发挥作用，从而在细胞整个有丝分裂的过程中带来严重的后果。它们是某些肿瘤类型的一线治疗剂，并且是顺铂-耐受性卵巢、乳腺、肺、膀胱和食道癌的二线治疗剂(紫杉烷类)。但是，由于微管在细胞分裂过程例如细胞运动、吞噬和轴突转运中发挥作用，使用这些药剂时经常会观察到某些毒性例如外周神经病。整个有丝分裂的过程是所有繁殖细胞所需的，因此靶向有丝分裂的癌症治疗一般可以用于范围广泛的肿瘤类型。数种蛋白激酶在细胞周期的编排中发挥作用，其中一些已经用于肿瘤调节包括Cdk-2和Aurora-A的靶向治疗。有丝分裂的精确度是非常重要的，在正常细胞中存在数个“检查点”以在细胞周期中保持染色体的完整性。在致癌性转化期间通常会去除这些检查点，这使得癌细胞可以耐受非整倍性和染色体的不稳定性。在“缺乏检查点”的肿瘤细胞中抑制有丝分裂应当会有严重的后果，因为癌症细胞试图推进畸形有丝分裂。

背景技术

包含4种丝氨酸/苏氨酸激酶(Plk-1-4)的Polo-样激酶家族主要涉及进入有丝分裂的过程以及从其中退出。这些激酶的特征在于，具有N-末端激酶区域和独特的C-末端“Polo-Box”区域。该区域负责将激酶靶向于数种有丝分裂结构(中心体、着丝点、纺锤极、中间体)，Plk的时间和空间调节对于整个有丝分裂的正常过程是重要的(综述于van Vugt和Medema，Oncogene 2005，24(17)：2844-59；Barr等人，Nat Rev Mol Cell Biol.2004，5(6)：429-40；Dai和Cogswell，Prog Cell Cycle Res.2003，5：327-34；Glover等人，Genes Dev.1998，12(24)：3777-87)。该家族最特征性的成员是Plk-1，其活性涉及有丝分裂中的数个过程，包括通过多种途径调节Cdk-1活性来进行G2/M转变(Cdc25c的活化，细胞周期蛋白B的核转运，Myt-1和Wee-1的失活)(Inoue等人，EMBO J.2005，24(5)：1057-67；van Vugt等人，J Biol Chem.2004，9(35)：36841-54；Watanabe等人，Proc NatlAcad Sci USA.2004，101(13)：4419-24 2004；Nakajima等人，J BiolChem.2003，278(28)：25277-80；Toyoshima-Morimoto等人，J BiolChem.2002，277(50)：48884-8；Bartholomew等人，Mol Cell Biol.，2001 21(15)：4949-59；Qian等人，Mol Biol Cell.2001，12(6)：1791-9；Roshak等人，Cell Signal.2000，12(6)：405-11)；中心体成熟和分离；在前期调节染色体-臂的内聚以及在中期/后期转变中姊妹染色单体的分离；活化后期促进复合物以开启有丝分裂出口；胞质分裂。Plk-1在多种肿瘤细胞包括乳腺、卵巢、肺非小细胞、结肠、头和颈、子宫内膜和食管癌中过度表达，其过度表达通常与预后不良有关。

在肿瘤细胞中通过数种途径(siRNA和反义切除，显性负相蛋白和免疫耗竭)使Plk-1功能被破坏而导致畸形有丝分裂，然后导致有丝分裂突变，同时在正常细胞中导致“检查点-介导的”细胞周期停滞。因此，Plk-1功能的药理学衰减可以在治疗数种不同的癌症中具有治疗性益处。

发明内容

在Pfizer公司的WO 96/40042中披露了稠合的双环嘧啶衍生物，用于治疗过度增殖性疾病。

在Celltech Therapeutics Ltd.的WO 98/58926和WO 98/28281中也披露了稠合的多环嘧啶衍生物，作为蛋白激酶抑制剂。

在分别为Pharmacia Italia S.P.A.和Pharmacia Corp.的WO03/070236和WO 03/070706中披露了本领域已知的稠合的三环吡唑化合物，作为蛋白激酶抑制剂。

在本申请人的WO 04/104007中也已经公开了具有激酶抑制活性的吡唑并-喹唑啉衍生物。从本发明的通式中排除了上述WO 04/104007中的某些具体化合物。

尽管有这些进展，仍然需要所述疾病的有效药剂。本发明人现在公开了下列式(I)的化合物是激酶抑制剂，因此可以作为抗肿瘤剂用于治疗，在毒性和副作用方面，其没有与当前使用的抗肿瘤药相关的上述缺点。

因此，本发明的第一个目的是提供式(I)表示的取代的吡唑并-喹唑啉化合物：

其中

R1是邻位取代的-芳基氨基；

R2是氢或选自直链或支链C₁-C₆烷基、直链或支链C₂-C₆烯基、直链或支链C₂-C₆炔基、C₃-C₆环烷基和杂环基的任选取代的基团；

R3是CO-OR′或CO-NR′R″，其中R′和R″各自独立地是氢或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基和杂环基的任选取代的基团，或者R′和R″与和它们所连接的氮原子一起可以形成任选包含一个选自N、O或S的其他杂原子的任选取代的杂环基、条件是：

排除1-甲基-8-(2-甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯和1-甲基-8-(2-甲氧基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺；

及其异构体、互变异构体、水合物、溶剂化物、络合物、代谢产物、前药、载体、N-氧化物和药学可接受的盐。

本发明也提供了合成式(I)表示的取代的吡唑并-喹唑啉化合物的方法，通过包含标准合成转化的方法来合成。

本发明也提供一种治疗由蛋白激酶活性失调导致和/或与之相关的疾病的方法，所述蛋白激酶特别是PLK家族、不同同I型的蛋白激酶C、Met、PAK-4、PAK-5、ZC-1、STLK-2、DDR-2、Aurora 1、Aurora2、Bub-1、Chk1、Chk2、HER2、raf1、MEK1、MAPK、EGF-R、PDGF-R、FGF-R、IGF-R、PI3K、weel激酶、Src、Ab1、Akt、MAPK、ILK、MK-2、IKK-2、Cdc7、Nek、Cdk/细胞周期蛋白激酶家族，更特别地是PLK-1和PLK-3，该方法包括给有此需要的哺乳动物施用有效量的如上定义的式(I)表示的取代的吡唑并-喹唑啉化合物。

本发明的一种优选的方法是治疗由蛋白激酶活性失调导致和/或与之有关的疾病，所述疾病选自癌症、细胞增殖性疾病、病毒感染、自身免疫性和神经变性疾病。

本发明的另一种优选的方法是治疗特定类型的癌，包括但不限于：癌瘤例如膀胱、乳腺、结肠、肾、肝、肺(包括小细胞肺癌)、食道、胆囊、卵巢、胰腺、胃、子宫颈、甲状腺、前列腺和皮肤(包括鳞状细胞癌)；淋巴系的造血性肿瘤，包括白血病、急性淋巴细胞性白血病、急性成淋巴细胞性白血病、B-细胞淋巴瘤、T-细胞淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤、非-何杰金氏淋巴瘤、毛细胞淋巴瘤和Burkett氏淋巴瘤；骨髓系的造血性肿瘤，包括急性和慢性髓性白血病、骨髓增生异常综合征和前髓细胞性白血病；间质来源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；中枢和外周神经系统的肿瘤，包括星形细胞瘤、成神经细胞瘤、神经胶质瘤和神经鞘瘤；其他肿瘤，包括黑素瘤、精原细胞瘤、畸胎瘤、骨肉瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、甲状腺滤泡癌和卡波西氏肉瘤。

本发明的另一种优选的方法是治疗特定的细胞增殖性疾病，例如良性前列腺增生、家族性腺瘤、息肉病、神经纤维瘤、牛皮癣、与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球性肾炎以及手术后狭窄和再狭窄。

本发明的另一种优选的方法是治疗病毒感染，特别是在感染HIV的个体中预防AIDS发生。

此外，本发明的方法还提供了肿瘤血管生成和转移的抑制作用，以及对器官移植排斥以及宿主对抗移植物的疾病的治疗作用。

本发明也提供了一种药物组合物，包含一种或多种式(I)的化合物或其药学可接受的盐和药学可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

本发明还提供了一种包含式(I)的化合物与已知抗癌治疗例如放射疗法或化疗方案的组合的药物组合物，所述化疗方案可与细胞生长抑制剂或细胞毒性剂、抗生素型药剂、烷化剂、抗代谢剂、激素类药剂、免疫制剂、干扰素型药剂、环氧合酶抑制剂(例如，COX-2抑制剂)、间质金属蛋白酶抑制剂、端粒酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体剂、抗-HER剂、抗-EGFR剂、抗-血管生成剂(例如，血管生成抑制剂)、法尼基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导途径抑制剂、细胞周期抑制剂、其他cdks抑制剂、微管蛋白结合抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等组合。

具体实施方式

除非另有特定说明，当涉及式(I)的化合物本身或其任何药物组合物或包含它们的治疗剂时，本发明包括本发明的化合物的所有水合物、溶剂化物、复合物、代谢产物、前药、载体、N-氧化物和药学可接受的盐。

式(I)的化合物的代谢产物是例如在施用于有此需要的哺乳动物后，相同的式(I)化合物在体内转化的任何化合物。典型地，尽管不代表一个限制性的实例，当施用式(I)的化合物时，相同的衍生物可以转化为不同的化合物，例如包括易于排泄的溶解性更大的衍生物，例如羟基化衍生物。因此，根据所经历的代谢途径，所有这些羟基化衍生物可以被视为式(I)的化合物的代谢产物。

前药是任意的共价结合的化合物，其在体内释放式(I)的活性母体药物。

N-氧化物是其中氮和氧通过配价键连接的式(I)的化合物。

如果在本发明的化合物中存在手性中心或另一种形式的异构中心时，一种或多种异构体的所有形式，包括对映体和非对映体都意欲包括在内。包含手性中心的化合物可以用作外消旋混合物、富含对映体的混合物，或者可以用公知的技术分离外消旋混合物并单独使用对映体个体。在其中化合物具有不饱和碳-碳双键的情况中，顺式(Z)和反式(E)异构体都在本发明的范围内。

在化合物存在互变异构形式例如酮-烯醇互变异构体的情况中，每种互变异构形式都考虑包括在本发明内，不管是存在平衡的还是主要为一种形式。

在本说明书中，除非另有特定说明，表示R1的术语“邻位取代的-芳基氨基”，是指通过-(NH)-部分与分子的剩余部分连接的任意芳基、所述芳基氨基在邻位被取代，同时在其他自由位置被任选取代。

术语“芳基”，是指包含1至2个环部分的碳环或杂环基、所述环稠合或通过单键彼此相连，其中至少一个环是芳香环；如果存在，芳香杂环也称作杂芳基、其包含5到6元环，含有1到3个选自N、NH、O或S的杂原子。根据本发明的芳基的例子是，例如，苯基、联苯基、α-或β-萘基、二氢萘基、噻吩基、苯并噻吩基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吲哚基、异吲哚基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、二氢喹啉基、喹噁啉基、苯并间二氧杂环戊烯基、茚满基、茚基、三唑基等。

术语“直链或支链C₁-C₆烷基”，也包括C₁-C₄烷基、是指任意的基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、正己基等。

术语“直链或支链C₂-C₆烯基”，是指任意的基团，例如，乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基等。

术语“直链或支链C₂-C₆炔基”，是指任意的基团，例如，乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等。

除非另外提供，术语“C₃-C₆环烷基”是指3-到6-元全碳单环，其可以包含一个或多个双键，但是不具有完全共轭的π-电子系统。环烷基的例子是，但不限于，环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷、环己烯和环己二烯。

术语“杂环基”(也称作“杂环烷基”)，是指3-到7-元，饱和或部分不饱和的碳环，其中一个或多个碳原子被杂原子例如氮、氧和硫取代。杂环基的非限制性的例子是，例如，吡喃、吡咯烷、吡咯啉、咪唑啉、咪唑烷、吡唑烷、吡唑啉、噻唑啉、噻唑烷、二氢呋喃、四氢呋喃、1，3-二噁烷、哌啶、哌嗪、吗啉等。

根据本发明，除非另有提供，任意的上述R₁，R₂，R₃，R′，和R″基可以在它们的任何自由位置被一个或多个基团(例如1-6个基团)任选取代，这些取代基独立地选自：卤素、硝基、氧代基(＝O)、氰基、C₁-C₆烷基、多氟烷基、多氟烷氧基、烯基、炔基、羟基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、C₃-C₆环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂环氧基、亚甲二氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、环烯氧基、杂环基羰氧基、亚烷基氨基氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、杂环基氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧基羰基氨基、羟基氨基羰基烷氧基亚胺基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸基和烷基膦酸基。

接着，当适当时，上述任意取代基可以再被一个或多个上述基团取代。

在这个方面，术语卤素原子，是指氟、氯、溴或碘原子。

术语氰基，是指-CN残基。

术语硝基，是指-NO₂基。

术语烯基或炔基，是指还具有双或三键的任意的上述直链或支链C₂-C₆烷基。烯基或炔基的非限制性例子是，例如乙烯基、烯丙基、1-丙烯基、异丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-戊烯基、1-己烯基、乙炔基、2-丙炔基、4-戊炔基等。

术语多氟烷基或烷氧基，是指被一个以上的氟原子取代的任意的上述直链或支链C₁-C₆烷基或烷氧基，例如三氟甲基、三氟乙基、1，1，1，3，3，3-六氟丙基、三氟甲氧基等。

术语烷氧基、芳氧基、杂环氧基及其衍生物，是指通过氧原子(-O-)与分子的剩余部分连接的上述C₁-C₆烷基、芳基或杂环基。

由上述所有定义，技术人员了解，名称为合成命名的任何基团，例如芳基氨基按常规解释为，例如它是由被芳基取代的氨基衍生的部分，其中芳基如上定义。

此外，任意这些术语，例如烷硫基、烷基氨基、二烷基氨基、烷氧基羰基、烷氧基羰基氨基、杂环基羰基、杂环基羰基氨基、环烷氧基羰基等，所包含的基团，其中烷基、烷氧基、芳基、C₃-C₆环烷基和杂环基部分如上定义。

式(I)的化合物的药学可接受的盐包括与无机或有机酸例如硝酸、盐酸、氢溴酸、硫酸、高氯酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乙醇酸、乳酸、草酸、丙二酸、苹果酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、羟乙磺酸和水杨酸的酸加成盐。优选地，本发明的化合物的酸加成盐选自盐酸盐或甲磺酸盐。

本发明的式(I)的化合物的药学可接受的盐也包括与无机或有机碱的盐，例如碱或碱土金属，特别是钠、钾、钙、铵或镁的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，非环状或环状胺，优选甲胺、乙胺、二乙胺、三乙胺、哌啶等。

一类优选的式(I)的化合物是下列化合物，其中：R3是CO-OH或CO-NR′R″，其中R′和R″如上定义。

另一类优选的式(I)的化合物是下列化合物，其中：R1是下式的邻位取代的-芳基氨基：

其中R′₄、R″₄和R″′₄独立地选自：卤素、硝基、氰基、C₁-C₆烷基、多氟烷基、多氟烷氧基、烯基、炔基、羟基烷基、芳基、芳烷基、杂环基、C₃-C₆环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、杂环氧基、亚甲二氧基、烷基羰氧基、芳基羰氧基、环烯氧基、杂环基羰氧基、亚烷基氨氧基、羧基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、环烷氧基羰基、杂环氧基羰基、氨基、脲基、烷基氨基、二烷基氨基、芳基氨基、二芳基氨基、杂环氨基、甲酰基氨基、烷基羰基氨基、芳基羰基氨基、杂环基羰基氨基、氨基羰基、烷基氨基羰基、二烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、杂环基氨基羰基、烷氧基羰基氨基、羟基氨基羰基、烷氧基亚胺基、烷基磺酰基氨基、芳基磺酰基氨基、杂环基磺酰基氨基、甲酰基、烷基羰基、芳基羰基、环烷基羰基、杂环基羰基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、氨基磺酰基、烷基氨基磺酰基、二烷基氨基磺酰基、芳基氨基磺酰基、杂环基氨基磺酰基、芳硫基、烷硫基、膦酸基和烷基膦酸基。

其中R′₄和R″₄如上定义，和

R2是任选取代的直链或支链C₁-C₆烷基或C₂-C₆烯基。

特别优选的一类式(I)的化合物是下列化合物

其中：

R3是CO-NR′R″，其中R′和R″如上定义。

优选的具体的式(I)的化合物是下列的化合物(代码的含义，参见实施例部分)：

1)1-甲基-8-(2-甲基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A4B1C1Z)；

2)1-甲基-8-(2-甲基氨基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A27B1C1Z)；

3)8-(2-乙酰基-苯基氨基)-1-(2-氟-乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A2B2C1Z)；

4)8-[2-乙酰基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A39B1C1Z)；

5)8-[2-乙酰基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-1-(2-氟-乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A39B2C1Z)；

6)1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A45B1C1Z)；

7)1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B1C1Z)；

8)1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A51B1C2Z)；

9)1-甲基-8-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A85B1C1Z)；

10)8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-(2-氟-乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B2C1Z)；

11)1-甲基-8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A48B1C1Z)；

12)1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-5-哌嗪-1-基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A97B1C1Z)；

13)1-甲基-8-[2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A98B1C1Z)；

14)1-甲基-8-[5-(4-吡咯烷-1-基-哌啶-1-基)-2-三氟甲氧基苯基氨基]-4，5-二氢-1H-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A99B1C1Z)；

15)1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸甲酰胺(A51B1C4Z)；

16)1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸甲酰胺(A85B1C4Z)；

17)1-甲基-8-[2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A87B1C1Z)；

18)1-甲基-8-[2-甲基-4-(4-甲基-哌嗪-1-羰基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A86B1C1Z)；

19)1-甲基-8-{2-三氟甲氧基-5-[(1-甲基-哌啶-4-羰基)-氨基]-苯基氨基}-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A82B1C1Z)；

20)1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A45B1C2Z)；

21)8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A51B1C3Z)；

22)8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A45B8C3Z)；

23)1-(2-羟基-乙基)-8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A45B5C1Z)；

24)1-乙基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B7C1Z)；

25)1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸(2，2，2-三氟-乙基)-酰胺(A51B1C7Z)；

26)1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B5C1Z)；

27)8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-乙烯基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B10C1Z)；

28)1-(2-氯-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B9C1Z)；

29)8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B8C1Z)；

30)1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A51B5C3Z)；

31)1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A51B5C2Z)；

32)1-甲基-8-[5-(1-甲基-1，2，3，6-四氢-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A113B1C1Z)；

33)1-甲基-8-[5-(1-甲基-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A114B1C1Z)；

34)8-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A49B1C1Z)，和

35)8-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A49B8C1Z)。

对于本发明的式(I)化合物，任选的药学可接受的盐的形式的参考，参见实验部分和权利要求。

本发明也提供一种制备如上定义的式(I)的化合物的方法，其特征在于该方法包括：

步骤1)在乙酸存在下将式(II)的化合物：

与式(III)的肼衍生物反应：

R2-NHNH₂ (III)

其中R2如上定义，得到式(IV)的化合物：

其中R2如上定义；或

用式(V)的化合物将其中R2是氢的式(IV)的化合物烷基化：

R2-Y (V)

其中Y是适当的离去基团，例如甲磺酰基、甲苯磺酰基、卤素，并且R2如上定义但不是氢，得到式(IV)的化合物，其中R2如上定义但不是氢；

步骤2)将式(IV)的化合物与二甲基甲酰胺-二叔丁基乙缩醛或二甲基甲酰胺-二异丙基乙缩醛反应，得到式(VI)的化合物：

其中R2如上定义；和

步骤3)按照备选的步骤(步骤3a)或(步骤3b)的任一个将式(VI)的化合物：

步骤3a)与胍反应，得到式(VII)的化合物，其中R2如上定义；将所得到的式(VII)的化合物的氨基转化为碘，然后将所得到的式(VIII)的碘-衍生物与其中R1如上定义的式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺反应，得到式(I)的化合物：

其中R1和R2如上定义；

步骤3b)与式(X)的胍衍生物反应：

R1-C(＝NH)NH₂ (X)

其中R1如上定义，得到式(I)的化合物：

其中R1和R2如上定义，和

任选将其转化为式(I)的其他衍生物和/或其药学可接受的盐。

本发明还提供一种制备如上定义的式(I)的化合物的方法，其特征在于该方法包括：

步骤4)通过酸或碱水解将如上定义的式(VIII)的化合物的乙氧基羰基转化为式(XIII)的化合物或相应的盐；用其中R′和R ″如上定义的式R′R″-NH(XI)的胺，通过在碱性条件下并在适当的缩合剂的存在下反应，将所得到的式(XIII)的化合物或相应的盐转化为式(XIV)的化合物；将式(XIV)的化合物与其中R1如上定义的式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺反应，得到式(I)的化合物：

其中R1和R2如上定义，和

任选将其转化为式(I)的其他衍生物和/或其药学可接受的盐。

如上定义，根据本发明的方法制备的式(I)的化合物可以通过根据公知的合成条件的操作方便地转化成其他式(I)的化合物，下面是可能的转化的例子：

a)通过用氢氧化铵处理，将其中R3是乙氧基羰基的式(I)的化合物转化为其中R3是氨基羰基的式(I)的化合物：

b)通过用其中R′和R″如上定义的式R′R″-NH(XI)的胺处理，将其中R3是乙氧基羰基的式(I)的化合物转化为其中R3是基团CO-NR′R″的式(I)的化合物：

c)通过酸或碱水解将其中R3是乙氧基羰基的式(I)的化合物转化为其中R3是基团CO-OH的式(I)的化合物或相应的盐：

d)通过在碱性条件和在适当缩合剂的存在下与其中R和R″如上定义的式R′R″-NH(XI)的胺反应，将其中R3是CO-OH的式(I)的化合物或相应的盐转化为其中R3是基团CO-NR′R″的式(I)的化合物：

e)在酸性条件下，将其中R2是三苯甲基的式(I)的化合物转化为其中R2是氢的式(I)的化合物：

f)通过与其中R2如上定义但不是氢的式R2-OH(XII)的醇反应，将其中R2是氢的式(I)的化合物转化为其中R2如上定义但不是氢的式(I)的化合物：

g)通过与其中R2如上定义但不是氢并且X是卤素的式R2-X(XV)的化合物反应，将其中R2是氢的式(I)的化合物转化为其中R2如上定义但不是氢的式(I)的化合物：

h)将其中R2是卤代乙基的式(I)的化合物转化为其中R2是乙烯基的式(I)的化合物：

i)通过用其中R′和R″如上定义的式R′R″-NH(XI)的胺处理，将其中R1是下式邻位取代的-芳基氨基的式(I)的化合物

其中R′₄，或R″₄或R″′₄是溴，转化为其中R′₄，或R″₄或R″′₄是基团-NR′R″的式(I)的化合物。

任一上述变体形式的上述方法是可以根据本领域公知的方法进行的类似方法。

根据该方法的步骤(步骤1)，在乙酸存在下式(II)的化合物与式(III)的肼衍生物反应，以得到式(IV)的化合物。该反应优选是在室温下进行的。

任选地，在室温到100℃的温度范围内，在碱例如氢化钠或三乙胺或碳酸铯存在下，在适当的溶剂例如二氯甲烷、四氢呋喃、二噁烷或二甲基甲酰胺中，使其中R2是氢的式(IV)的化合物与式(V)的适当化合物反应，以得到其中R2如上定义但不是氢的化合物(IV)。

根据该方法的步骤(步骤2)，在适当的溶剂例如二甲基甲酰胺的存在下，使式(IV)的化合物与二甲基甲酰胺-二叔丁基乙缩醛或二甲基甲酰胺-二异丙基乙缩醛反应，以得到式(VI)的化合物。优选地，该反应是在室温至约80℃的温度范围内进行的。

根据该方法的步骤(步骤3a)，式(VI)的化合物与胍或胍的盐反应，以通过形成嘧啶环来获得式(VII)的化合物。R1代表邻位取代的-芳基氨基的式(I)的化合物可以通过式(VIII)的相应的碘-衍生物来获得，接着可以通过式(VII)的相应化合物来制备。

可以在适当的溶剂例如四氢呋喃、乙醚或二甲氧基乙烷中，在室温至约80℃的温度范围内，在约2至约48小时的时间里进行式(VIII)的碘-衍生物的制备。

随后将式(VIII)的碘-衍生物转化成式(I)的化合物，包括在式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺存在下，在适当的溶剂例如二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷或乙腈中，在催化量的乙酸钯、(2，2′-双(二苯膦)-1，1′-联萘(BINAP)和碱例如碳酸钾、磷酸钾或碳酸铯存在下，在室温至110℃的温度范围内，在约2至约24小时的时间里进行。

根据该方法的步骤(步骤3b)，式(VI)的化合物与式(X)的胍衍生物反应，以通过形成嘧啶环而得到式(I)的相应化合物。根据常规方法进行上述任意的反应。例如，与胍或其盐例如盐酸盐、碳酸盐或硝酸盐反应，或如步骤(步骤3a)或(步骤3b)的任一个所述，与式(X)的胍衍生物反应是在二甲基甲酰胺中，在碳酸钾存在下，在80℃到最终的回流温度的温度范围内进行的。

根据该方法的步骤(步骤4)，通过本领域广泛公知的碱或酸水解条件，可以将式(VIII)的化合物转化为式(XIII)的羧酸衍生物或相应的盐。

可以将式(XIII)的化合物转化为其中R′和R″如上定义的式(XIV)的羧酰胺衍生物。该反应是在氯化铵或适当的式(XI)的伯或仲胺存在下，在碱性条件下，优选用N，N-二异丙基-N-乙胺或三乙胺，在适当的溶剂例如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、或二噁烷中，在适当的缩合剂例如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基异脲四氟硼酸盐(TBTU)的存在下进行的；还可能需要催化量的(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)或N-羟基苯并三唑。

随后将式(XIV)的化合物转化成式(I)的化合物，包括在适当的溶剂例如二甲基甲酰胺、二甲氧基乙烷或乙腈中，在式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺存在下，在催化量的乙酸钯、(2，2′-双(二苯膦)-1，1′-联萘(BINAP)和碱例如碳酸钾、磷酸钾或碳酸铯存在下，在室温至110℃的温度范围内，在约2至约24小时的时间里进行。如前所示，先前制备的式(I)的化合物可以容易地转化成本发明的数种其他式(I)的化合物。

例如，可以根据本领域公知的方法将具有作为乙氧基羰基或甚至烷氧基羰基的R3的式(I)的化合物转化为各种衍生物，以将羧基酯基(-COOR′)转化为羧酰胺(-CONH₂)、N-取代的羧酰胺(-CONHR′)、N，N-二取代的羧酰胺(-CONR′R″)和羧酸(-COOH)，例如如转化(a)，(b)和(c)所定义。

操作条件是本领域广泛公知的，例如羧基酯基向羧酰胺的转化，可以包括，与氨水或氢氧化铵在适当溶剂例如低级醇、二甲基甲酰胺或其混合物存在下反应；优选该反应是与氢氧化铵在甲醇/二甲基甲酰胺混合物中，在约50℃至约100℃的温度范围内进行的。

使用类似的操作条件来制备N-取代的羧酰胺或N，N-二取代的羧酰胺，其中使用适当的伯或仲胺来替代氨水或氢氧化铵。

可替代地，可以在碱性条件下例如在二-三甲基甲硅烷基氨基锂1N的THF溶液中，使用氯化铵或适当的伯或仲胺将羧基酯基团转化为羧酰胺或N-取代的羧酰胺或N，N-二取代的羧酰胺；优选该反应是在四氢呋喃中，在20℃至回流的温度范围内进行的。

同样，可以通过本领域广泛公知的碱或酸水解条件将羧基酯基团转化为羧酸衍生物。

根据该方法的转化(d)，可以将其中R3是羧酸(-COOH)的式(I)的化合物转化为其中R′和R″为如前述所示的羧酰胺衍生物(-CONR′R″)。

该反应是在氯化铵或适当的式(XI)的伯或仲胺存在下，在碱性条件下，优选用N，N-二异丙基-N-乙胺或三乙胺，在适当的溶剂例如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氢呋喃、或二噁烷中，在适当的缩合剂例如N，N′-二环己基碳二亚胺(DCC)、盐酸N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(EDCI)或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基异脲四氟硼酸盐(TBTU)存在下进行的；也可能需要催化量的(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBOP)或N-羟基苯并三唑。

根据转化(e)，在酸性条件下例如用三氟乙酸，在适当的溶剂例如二氯甲烷存在下除去式(I)的化合物的三苯甲基，以得到相应的其中R2是氢的式(I)的化合物

根据该方法的转化(f)，在二-叔丁基氮杂二羧酸酯和三苯基膦或者树脂载体上的三苯基膦存在下，在适当的溶剂例如四氢呋喃中，将其中R2是氢的式(I)的化合物与其中R2如上定义但不是氢的式R2-OH(XII)的醇反应，以得到相应的式(I)的化合物。

根据该方法的转化(g)，在碱例如碳酸铯存在下，在适当的溶剂例如二甲基甲酰胺中将其中R2是氢的式(I)的化合物与其中R2如上定义但不是氢且X是卤素优选氯、溴或碘的式R2-X(XV)的化合物反应，以得到相应的式(I)的化合物。

根据该方法的转化(h)，在20℃至80℃的温度范围内用碱，优选DBU处理其中R2是卤代乙基，优选氯乙基的式(I)的化合物，以得到其中R2是乙烯基的相应的式(I)的化合物。

根据该方法的转化(i)，可以根据常规方法，以各种途径将其中R1是在任意位置具有溴的邻位取代的-芳基氨基的式(I)的化合物转化为其中R1是在任意位置具有基团-NR′R″的邻位取代的-芳基氨基的式(I)的化合物。优选地，它是在适当的溶剂例如四氢呋喃或二噁烷中，通过用式R′R″-NH(XI)的胺处理，在催化量的三(二亚苄基丙酮)二钯，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯和碱例如LiN(TMS)₂存在下进行的，温度范围为室温至回流，时间为1至约24小时。

由上述所有内容，技术人员应当清楚，通过根据本领域公知的技术处理，具有可以进一步衍生为另一种官能团的官能团的任意的式(I)的化合物也意欲包括在本发明的范围内。

根据制备式(I)的化合物的方法的任意变形，起始原料和任何其他的反应试剂都是已知的或可以容易地根据已知方法制备。例如，式(II)的化合物的起始原料是商业可购得的，可以如上述WO 04/104007所述制备式(II)的化合物。式(III)、(V)、(XII)和(XV)的化合物是商业可购得的。式(IX)、(X)和(XI)的某些化合物是商业可购得的，其他物质的制备参见下列实施例28-35和43-44。

由上述所有内容，技术人员应当清楚，当根据上述任一种方法的变形制备式(I)的化合物时，需要根据常规技术适当地保护起始原料或其中间体中会产生不希望有的副反应的任选官能团。同时，可以根据已知方法将这些受保护的物质转化为游离的脱保护的化合物。

容易理解的是，如果根据上述方法制备的式(I)的化合物是以异构体的混合物获得的，用常规技术将它们分离成式(I)的单个异构体也在本发明的范围内。

拆分外消旋化合物的常规技术包括，例如，非对映体盐衍生物的分级结晶或制备型手性HPLC。

此外，也可以根据本领域广泛已知的组合化学技术来制备本发明的式(I)的化合物，例如，以平行和/或一系列方式完成数种中间体之间的上述反应，或在固相-合成条件(SPS)下处理。

根据组合化学技术制备本发明的式(I)的化合物的一般参考，参见实验部分。

参见任意特定实施例的实验部分，关注的是本发明的式(I)的化合物的制备以及将它们转化为其他式(I)的化合物。

因此，本发明的其他目的是两种或多种式(I)的化合物的库，

其中

R1是邻位取代的-芳基氨基；

R3是CO-OR′或CO-NR′R″，其中R′和R″各自独立地是氢或选自直链或支链C₁-C₆烷基、C₃-C₆环烷基和杂环基的任选取代的基团，或者R′和R″与和它们所连接的氮原子一起可以形成包含一个选自N、O或S的其他杂原子的任选取代的杂环基、条件是：

本发明的另一个目的是提供式(X′)的中间体：

R1′-C(＝NH)NH₂ (X′)

或式(IX′)的中间体：

R1′-H (IX′)

其中R1′是

药理学

式(I)的化合物作为蛋白激酶抑制剂是具有活性的，因此，可以用于限制肿瘤细胞的失调增殖。

在治疗中，它们可以用于治疗各种肿瘤，例如前述定义的那些，以及可以治疗其他细胞增殖性疾病例如良性前列腺增生、家族性腺瘤病、息肉病、神经纤维瘤、牛皮癣、与动脉粥样硬化有关的血管平滑细胞增殖、肺纤维化、关节炎、肾小球性肾炎以及手术后狭窄和再狭窄。

通过下述分析测定推定的PLK-1抑制剂的抑制活性和所选择的化合物的效力。

本文使用的短语和缩写具有下列含义：

Ci 居里

DMSO 二甲亚砜

KDa 千道尔顿

microCi 微居里

mg 毫克

microg 微克

ng 毫微克

L 升

mL 毫升

microL 微升

M 摩尔

mM 毫摩尔

microM 微摩尔

nM 纳摩尔

Et 乙基

重组PLK1激酶区域的克隆、表达和精制

PLK1激酶区域(对应于全长序列的残基2-345，参见Swiss-Prot登录号P53350)是从购自imaGenes的全长人PLK1基因中PCR放大的，作为克隆IRATp970A078D。

用正向寡核苷酸：5′GGGGACAAGTTTGTACAAAAAAGCAGGCTTATTCGAAAACCTGTATTTTCAGGGCCCTAGTGCTGCAGTGACTGCAGGGAAG3′[SEQ IDNO：1]和反向寡核苷酸：5′GGGGACCACTTTGTACAAGAAAGCTGGGTTTCACTATTTATTGAGGACTGTGAGGGGCTT-3′[SEQ ID NO：2]进行放大。

出于克隆目的，寡核苷酸包括attB位点，以获得适合用

技术(Invitrogen)克隆的侧面为attB的PCR产物。此外，出于精制目的，正向引物包括

分裂位点(Amersham Biosciences)。将所得的PCR产物在pDONR221质粒中克隆，然后转移到

-修饰的杆状病毒表达载体pVL1393(Invitrogen)中。对于表达和精制目的，将His标记从N-末端加入到PLK激酶区域，根据在

手册中所述的方案进行克隆。

通过使用

转染试剂盒(Pharmingen)，用表达载体和病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞来产生杆状病毒。在5天后回收病毒上清液，并进行3倍扩大以提高病毒滴定度。通过感染High5昆虫细胞来产生重组蛋白质。在感染48小时后，回收细胞，沉淀并在-80℃下冷冻。对于重组蛋白质的精制，解冻沉淀，并再混悬于溶胞缓冲液(PBS，NaCl 150mM，CHAPS 0.1％，DTT 20mM，甘油10％，蛋白酶抑制剂)并通过声处理溶解。通过离心使溶解产物变澄清，并填充到Nichel亲和柱上。在广泛洗涤后，分离重组蛋白质并通过用

蛋白酶培养来洗脱。

PLK-1激酶活性的抑制剂的生化分析

用转磷酸化分析来测定推定的激酶抑制剂的抑制活性和所选择的化合物的效力。

在用³³P-γ-ATP示踪的ATP存在下，在它们本身的最佳缓冲液和辅助因子存在下，通过它们的特异性丝氨酸-苏氨酸或酪氨酸激酶将特定的肽或蛋白质底物转磷酸化。

在磷酸化反应结束时，通过过量的离子交换dowex树脂捕获超过98％的冷ATP和放射性ATP；然后通过重力将树脂置于反应板的底部。

然后分离包含磷酸化底物的上清液，并转移到计数板中，然后通过β-计数来评价。

反应试剂/分析条件

i.Dowex树脂的制备

称出500g的湿润树脂(SIGMA，定制的树脂DOWEX 1x8 200-400目，2.5Kg)，在150mM甲酸钠，pH 3.00中稀释成2L。

将该树脂静置(数小时)，然后除去上清液。

在数天里如上洗涤3次后，将树脂静置，除去上清液，向1体积的沉淀中加入2体积的150mM甲酸钠缓冲液。然后测定pH，应当是约3.00。洗涤后的树脂可以稳定一周以上；在使用前将原树脂保存在4℃下。

ii.激酶缓冲液(KB)

激酶缓冲液由50mM HEPES，pH 7.9组成，其包含10mM MgCl₂，1mM DTT，3microM NaVO₃，和0.2mg/mL BSA，10mM β-甘油磷酸酯。

iii分析条件

在40microM ATP，3nM ³³P-γ-ATP和85microM底物α-酪蛋白，SIGMA，#C-3240的存在下以最终PLK-1酶浓度为3nM进行激酶分析。

自动化的Dowex分析

1)3x酶混合物(在激酶缓冲液3X中完成)，5microL/孔

2)3x底物和ATP混合物(在ddH₂O中完成)，和³³P-γ-ATP，5_microL/孔一起

3)3x受试化合物(稀释到ddH₂O-3％DMSO中)-5microL/孔

化合物的稀释和分析方案如下定义。

i.化合物的稀释

将10mM受试化合物的100％DMSO母液分配到96孔12x8式微量滴定板中。

对于％抑制研究，在100％DMSO中制备1mM，100microM和10microM的个体稀释板，然后在ddH₂O，3％DMSO中以3X浓度(30，3和0.3microM)稀释。Multimek 96(Beckman)用于稀释和将化合物吸取到受试板中。

对于IC₅₀确定，接受作为1mM，100％DMSO溶液的化合物，置于微量滴定板的第一栏(A1至G1)中，100microL。

Biomek 2000(Beckman)用于A1至A10栏的在水，3％DMSO中的系列1∶3稀释，并用于板中所有的7种化合物。在标准实验中，所有化合物的最高浓度是30microM，然后在最终受试混合物中稀释成10microM。

ii.分析方案

用5microL的化合物稀释液(3X)制备384孔板，V型底(受试板)，然后与酶混合物的一个载体(3X)和ATP混合物的一个载体(3X)一起放置到PlateTrak 12自动化站(Perkin Elmer；该自动设备具有启动分析的384-尖头的吸液头，以及调配树脂的96-尖头的吸液头)上。在开始运行时，该自动设备吸取5microL的ATP混合物，在尖头中形成了气口(3microL)，并吸取5microL的PLK1混合物。接着分配到板中，通过该自动设备本身完成的3个混合循环启动了激酶反应。

在该时间点，恢复了所有反应试剂的校正浓度。

在室温下，该自动设备培养该板60分钟，然后通过将70microL的dowex树脂混悬液吸取到反应混合物中来停止反应。在加入树脂后立即完成3个混合循环。

在所有板都停止后进行另一个混合循环，这次使用正常的尖头，然后将这些板静置约1小时以最大程度地捕获ATP。在该时间点，将20microL的上清液转移到含有70microL Microscint40(Perkin-Elmer)的384-Optiplates(Perkin-Elmer)板中；在沿轨道振荡这些板5分钟后，将这些板在Perkin-Elmer Top Count放射性计数器上读数。

iii.数据分析

通过内部专用版的SW程序包“Assay ExploreR″分析数据，提供了初级分析的％抑制或用于确定IC₅₀的10-倍稀释曲线的S形拟合，用于次级分析/hit证实途径。

Aurora-2激酶活性抑制剂的生化分析

以与PLK-1酶所述的相同方法进行体外激酶抑制分析。

i.Aurora-2的激酶缓冲液(KB)

激酶缓冲液由50mM HEPES，pH 7.0，10mM MgCl₂，1mM DTT，3microM NaVO₃，和0.2mg/mL BSA组成

ii.Aurora-2的分析条件(最终浓度)

用2.5nM的酶浓度，10microM ATP，1nM ³³P-γ-ATP，和包含4LRRWSLG的8microM底物进行激酶分析。

Cdk2/细胞周期蛋白A活性的抑制分析

激酶反应：向U型底的96孔板的各孔中加入1.5microM组蛋白H1底物，25microM ATP(0.2microCi P33γ-ATP)，30ng的杆状病毒共表达的Cdk2/细胞周期蛋白A，最终体积100microL缓冲液的10microM抑制剂(TRIS HCl 10mM pH 7.5，MgCl₂ 10mM，7.5mM DTT)。在37℃下培养10分钟后，通过20microL EDTA 120mM停止反应。

捕获：将100microL从各孔转移到MultiScreen板中，以使底物与磷酸纤维素过滤器结合。然后将板用含游离Ca⁺⁺/Mg⁺⁺的150microL/孔PBS洗涤3次，再通过MultiScreen过滤系统过滤。

体外细胞增殖分析

将A2780人卵巢和MCF7人乳腺癌细胞(1250个细胞/孔)植入到完全培养基(RPMI 1640或EMEM和10％胎牛血清)中的白384孔-板中，在植入24小时后，用溶于0.1％DMSO的化合物处理。将细胞在37℃和5％CO₂下培养，72小时后，根据制造商的说明书，用CellTiter-Gloassay(Promega)处理这些板。

CellTiter-Glo是基于定量存在的ATP的同质方法，ATP是代谢活性细胞的指示剂。用基于产生光的荧光素酶和D-荧光素的系统来定量ATP。发光信号与培养基中存在的细胞的数量成比例。

简言之，向各孔中加入25microL/孔的试剂溶液，振荡5分钟后，通过光度计读取微量板。发光信号与培养基中存在的细胞的数量成比例

进行上述抑制分析时，本发明的式(I)的化合物具有显著的PLK抑制活性，典型地IC₅₀小于0.07microM。

参见，例如，下表A报道了本发明的式(I)的某些代表性化合物的实验数据(代码的含义参见实施例部分)，这些化合物在生化分析中作为PLK-1抑制剂并在A2780细胞增殖分析(IC₅₀microM)中进行了实验，并与本领域最接近的化合物进行了比较，所述最接近的化合物是在上述WO 04/104007，第105页，表IX的化合物B08-X00-M00(C01)-D03。

表A

代码	PLK-1 IC₅₀(microM)生化分析	A2780 IC₅₀(microM)细胞增殖分析
			参照化合物	0.070	1.1
A85B1C1Z	0.010	0.010
			A97B1C1Z	0.002	0.020
A51B5C1Z	0.003	0.042
			A4B1C1Z	0.014	0.80
A51B2C1Z	0.005	0.013
			A51B10C1Z	0.001	0.010
A45B2C1Z	0.026	0.50
			A98B1C3Z	0.005	1.30
A51B1C1Z	0.001	0.008
			A51B1C3Z	0.010	0.086
A51B9C1Z	0.013	0.031
			A85B1C4Z	0.026	0.10
A113B1C1Z	0.008	0.036
			A101B1C1Z	0.046	0.520
A47B1C1Z	0.007	0.147

令人惊奇地，本发明的化合物的PLK-1抑制活性显著优于参照化合物的活性。

迄今为止，本发明的新化合物出人意料地提供了显著高于上述WO04/104007的结构最接近的现有技术的化合物的PLK-1抑制活性，因此在与细胞周期依赖性激酶活性的改变有关的增殖性疾病的治疗中是特别有利的。

本发明化合物可以作为单一药物施用，或者作为替代选择，可以与已知抗癌治疗联合施用，例如放射疗法或者或者提供了一种与细胞生长抑制剂或细胞毒性剂、抗生素型药剂、烷化剂、抗代谢剂、激素类药剂、免疫制剂、干扰素型药剂、环氧合酶抑制剂(例如，COX-2抑制剂)、间质金属蛋白酶抑制剂、端粒末端转移酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、抗生长因子受体剂、抗-HER剂、抗-EGFR剂、抗-血管生成剂(例如，血管生成抑制剂)、法尼基转移酶抑制剂、ras-raf信号转导途径抑制剂、细胞周期抑制剂、其他cdks抑制剂、微管蛋白结合抑制剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂等组合的化疗方案。

如果配制成固定剂量，这类组合产品采用在下述剂量范围内的本发明化合物和在所许可的剂量范围内的其他药学活性剂。

在不适用组合制剂时，式(I)化合物可以与已知抗癌剂先后使用。

适合于对哺乳动物、例如人类施用的本发明的式(I)化合物可以通过常用途径施用，剂量水平依赖于患者的年龄、体重、状况和给药途径。例如，适合于口服给药式(I)化合物的剂量可以从约10至约500mg/剂量，每天1至5次。本发明化合物可以以多种剂型施用，例如以片剂、胶囊剂、糖衣或膜衣片、液体溶液或混悬液口服；直肠栓剂；肠胃外，例如肌内，或者通过静脉内和/或鞘内和/或脊柱内注射或输注。

本发明也包括药物组合物，其包含式(I)化合物或者其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂，该赋形剂可以是载体或稀释剂。含有本发明化合物的药物组合物通常是遵照常规方法制备的，在适合的药物剂型中给药。例如，固体口服剂型可以含有活性化合物以及稀释剂，例如乳糖、右旋糖、蔗糖(saccharose)、蔗糖(sucrose)、纤维素、玉米淀粉或马铃薯淀粉；润滑剂，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸镁或硬脂酸钙和/或聚乙二醇；粘合剂，例如淀粉、阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂，例如淀粉、藻酸、藻酸盐或淀粉羟乙酸钠；泡腾混合物；染剂；甜味剂；湿润剂，例如卵磷脂、聚山梨酸酯、月桂基硫酸盐；和一般在药物制剂中使用的无毒性和无药理活性的物质。这些药物制剂可以按已知方式制造，例如通过混合、造粒、压片、包糖衣或包薄膜衣的方法。

口服的液体分散体例如可以是糖浆剂、乳剂和悬液。例如，糖浆剂可以包含作为载体的蔗糖或者蔗糖与甘油和/或甘露糖醇和山梨糖醇。

作为载体的实例，混悬液和乳剂可以包含天然树胶、琼脂、藻酸钠、果胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素或聚乙烯醇。肌内注射的悬液或溶液可以包含活性化合物以及药学上可接受的载体，例如无菌水、橄榄油、油酸乙酯、二醇例如丙二醇和如果需要，适量的盐酸利多卡因。

静脉内注射或输注的溶液可以含有无菌水作为载体，或者优选地，它们可以是无菌、含水、等渗的盐水溶液，或者它们可以包含丙二醇作为载体。

栓剂可以包含活性化合物以及药学上可接受的载体，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯表面活性剂或卵磷脂。

为了更好地阐述本发明，而不对其强加任何限制，现在给出下列实施例。

实施例

在下列实施例中描述了本发明的一些式(I)的化合物的合成制备。所有化合物都通过代码系统(参见下表IV)方便和明确地鉴别，它们当中的一些根据它们的化学名称列出和标明，而另一些则通过代码系统方便和明确地鉴别出来，并一起标出它们的¹H-NMR数据或HPLC/质谱数据(参见下表V至XX)。每个代码仅明确表示一种具体的式(I)化合物，由四个单元A-B-C-Z组成。

代码A代表式(I)中的任意的R1取代基，其将该分子的其余部分连接到8位；每个A基团都通过下表I的适当化学式表示，也指示与该分子的其余部分相连的位点。

代码B代表式(I)中通过吡唑的氮原子与该分子的其余部分相连的R2基。每个B基团都通过下表II的适当化学式表示，也指示与该分子的其余部分相连的位点

代码C代表式(I)中的R3基团，其将该分子的其余部分连接到3位。每个C基团都通过下表III的适当化学式表示，也指示与该分子的其余部分相连的位点。

在下表I、II和III中分别示出和连续地编码了各具体的A、B和C基团。

最后，代码Z是指分子(I)的中心核。由上述所有内容，技术人员清楚，Z被式(I)中定义的R1(代码A)，R2(代码B)，和R3(代码C)取代，也指示其他取代基的位置。

因此，目前用于某些式(I)的化合物的代码系统可以简述如下：

仅作为例子而不是意欲限制本发明的范围，化合物A45B8C2Z(参见实施例)所代表的式(I)的吡唑并-喹唑啉衍生物，其中中心核如部分Z所表示，R1是表1的式A45的基团，R2是表II的式B8的基团，R3是表III的式C2的基团，其具有下式

表1

表II

表III

表IV

如下列实施例制备的本发明的化合物也通过¹H NMR或HPLC/MS分析数据表征；根据1，2，3和4的任一方法收集HPLC/MS数据。

HPLC/MS分析方法1

HPLC设备包括配有2996 Waters PDA检测器和Micromass mod的Waters Acquity^TM UPLC系统。ZQ单一四极质谱仪配有电喷射(ESI)离子源。通过Empower和MassLynx 4.0软件提供设备控制、数据采集和数据处理。

在45℃下，使用BEH C18 1.7microm Waters Acquity UPLC(2.1x50mm)柱，以0.8mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是甲酸0.1％pH＝3.3的缓冲液，含乙腈(98∶2)，流动相B是H₂O/乙腈(5∶95)；梯度为2分钟内从5％至95％的B，然后保持95％B 0.1分钟。注射体积是2microL。以阳离子和负离子模式操作质谱仪，毛细管电压设置为3.5KV(ES⁺)和28V(ES^-)；源温度是120℃；椎体是14V(ES⁺)和2.8KV(ES^-)；设置的全扫描质量范围是100到800amu。

HPLC/MS分析方法2

HPLC设备包括配有2996 Waters PDA检测器和Micromass mod的Waters 2795 Alliance HT系统。ZQ单一四极质谱仪配有电喷射(ESI)离子源。通过Empower和MassLynx 4.0软件提供设备控制、数据采集和数据处理。

在30℃下，使用C18，3microm Phenomenex(4.6x50mm)柱，以1.0mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是乙酸铵5mM pH＝5.2的缓冲液，含乙腈(95∶5)，流动相B是H₂O/乙腈(5∶95)；梯度为8分钟内从10％到90％的B，然后保持100％B 1.0分钟。注射体积是10microL。以阳离子和负离子模式操作质谱仪，毛细管电压设置为3.5KV(ES⁺)和28V(ES^-)；源温度是120℃；椎体是14V(ES⁺)和2.8KV(ES^-)；设置的全扫描质量范围是100到800amu。

HPLC/MS分析方法3

在45℃下，使用BEH C18 1.7microm Waters Acquity UPLC(2.1x50mm)柱，以0.8mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是氢氧化铵0.05％pH＝10的缓冲液，含乙腈(95∶5)，流动相B是H₂O/乙腈(5∶95)；梯度为2分钟内从5％至95％的B，然后保持95％B 0.1分钟。注射体积是2microL。以阳离子和负离子模式操作质谱仪，毛细管电压设置为3.5KV(ES⁺)和28V(ES^-)；源温度是120℃；椎体是14V(ES⁺)和2.8KV(ES^-)；设置的全扫描质量范围是100到800amu。

HPLC/MS分析方法4

HPLC设备包括配有996 Waters PDA检测器和Micromass mod的Waters 2790 HPLC系统。ZQ单一四极质谱仪配有电喷射(ESI)离子源。通过Empower和MassLynx 4.0软件提供设备控制、数据采集和数据处理。

在25℃下，使用RP 18 Waters X Terra(3.0x20mm)柱，以1mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是氢氧化铵0.05％pH＝10的缓冲液，含乙腈(95∶5)，流动相B是H₂O/乙腈(5∶95)；梯度为4分钟内从10％到90％的B，然后保持90％ B1分钟。注射体积是10microL。以阳离子和负离子模式操作质谱仪，毛细管电压设置为2.5KV；源温度是120℃；椎体是10V；设置的全扫描质量范围是100到800amu。

通过制备型HPLC精制数种根据下列实施例制备的本发明的式(I)的化合物。

操作条件如下定义：

HPLC/MS制备方法1

在25℃下，使用RP 18 Waters X Terra(19x250mm)柱，以20mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是氢氧化铵0.05％pH＝10的缓冲液，含乙腈(95∶5)，流动相B是乙腈；梯度为15分钟内从10％到90％的B，然后保持90％ B3分钟。注射体积是10microL。

以阳离子和负离子模式操作质谱仪，毛细管电压设置为2.5KV；源温度是120℃；椎体是10V；设置的全扫描质量范围是100到800amu。

HPLC/MS制备方法2

在25℃下，使用RP18 Waters X Terra 10microm(19x250mm)柱，以20mL/分钟的流速进行HPLC。流动相A是0.1％三氟乙酸的水/乙腈(95∶5)溶液，流动相B是乙腈；梯度为15分钟内从10％到90％的B，然后保持90％ B3分钟。注射体积是10microL。

实施例1

1-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

将30g(0.125mol)的(3-乙氧基-2-氧代环己-3-烯-1-基)(氧代)乙酸乙酯溶于150mL的冰醋酸，加入6.5mL的甲基肼(0.125mol)。混合物在室温下搅拌6小时。然后蒸发溶剂，粗产物再溶于水，用30％NH₄OH成碱性，并用二氯甲烷萃取。然后用Na₂SO₄干燥有机层并浓缩。残留物在乙醚中结晶，得到19.2g(68％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.12(t，J＝6.89Hz，3H)1.51(t，J＝6.94Hz，3H)2.06-2.58(m，4H)3.57(m，1H)3.86(q，J＝6.83Hz，2H)4.38(q，J＝6.94Hz，2H)6.09(m，1H)。

根据相同的方法，但使用适当取代的肼衍生物，制备下列化合物：

1-(2-羟基乙基)-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.3(t，J＝7.20Hz，3H)1.9-2.9(3m，6H)3.7(m，2H)4.3(q，J＝7.20Hz，2H)4.53(t，J＝5.85，2H)4.77(t，J＝5.73，OH)；

1-(2-氟乙基)-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯；

1-乙基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.13Hz，3H)1.38-1.42(m，3H)2.73-2.79(m，2H)2.90-2.96(m，2H)4.30(q，J＝7.07Hz，2H)4.81(q，J＝7.19Hz，2H)6.59(bs，2H)8.19(s，1H)；

1-异丙基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯。

实施例2

7-氧代-1-三苯甲基-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

步骤1.7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

将10.0g(42mmol)的(3-乙氧基-2-氧代环己-3-烯-1-基)(氧代)乙酸乙酯溶于100mL的乙醇，加入2.1mL的水合肼，溶液在回流下搅拌1天。然后蒸发溶剂，用二氯甲烷再溶解残留物。用水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥并浓缩。用乙醚研磨粗产物并过滤，得到6.0g的标题化合物(70％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.28(t，J＝7.07Hz，3H)2.04(m，2H)2.51(m，2H)2.87(t，J＝6.10Hz，2H)4.27(q，J＝7.11Hz，2H)14.39(s，1H)。

步骤2.7-氧代-1-三苯甲基-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

将2.08g(10.0mmol)的7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯溶于100mL的二氯甲烷，加入0.76mL的三乙胺和3.07g(11.0mmol)的三苯基甲基氯。将该溶液在室温下搅拌6小时。然后用二氯甲烷稀释该溶液并用水洗涤。用无水Na₂SO₄处理有机层，并蒸发至干燥。通过在乙醚中结晶获得最终产物(3.24g，72％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(t，J＝7.01Hz，3H)2.16(m，2H)2.48(m，2H)2.98(t，J＝6.10Hz，2H)4.25(q，J＝7.01Hz，2H)6.92-7.33(2m，15H)。

实施例3

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

将16g(72mmol)的1-甲基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯溶于100mL的二甲基甲酰胺并加入32mL的二甲基甲酰胺二叔丁基乙缩醛。该混合物在60℃下搅拌8小时。然后真空蒸发溶剂，产品在乙醇中结晶，得到标题化合物(17.96g，90％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.07Hz，3H)2.83(m，2H)2.92(m，2H)3.13(s，6H)4.14(s，3H)4.24(q，J＝7.07Hz，2H)7.49和7.52(2s，1H)。

根据相同的方法操作，制备下列化合物：

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-1-三苯甲基-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.07Hz，3H)2.75(m，2H)2.91(m，2H)2.94(s，6H)4.21(q，J＝7.07Hz，2H)6.90-7.30(m，15H)7.47和7.54(2s，1H)；

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-(2-羟基乙基)-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz)，DMSO-d₆)δppm 2.80(t，J＝6.34Hz，2H)2.88(t，J＝6.21，2H)3.70(m，2H)4.24(q，J＝7.07Hz，3H)4.58(t，J＝5.97Hz，2H)4.79(bs，0H)7.47(bs，1H)；

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-(2-氟乙基)-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-乙基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯

6-[(二甲基氨基)亚甲基]-1-异丙基-7-氧代-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯。

实施例4

8-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

向16.62g(60mmol)的6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-1-甲基-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯的0.5L DMF溶液中，加入27g(150mmol)的碳酸胍。该混合物在110℃下搅拌过夜。在冷却后，将混合物倒入水(2.5L)中，并搅拌30分钟。过滤沉淀，用水洗涤并干燥，得到26.83g的标题化合物(91％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.76(m，2H)2.93(m，2H)4.25(q，J＝7.07Hz，2H)4.30(s，3H)6.57(bs，2H)8.19(m，1H)。

根据相同的方法操作，制备下列化合物：

8-氨基-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.29(t，J＝7.07Hz，3H)2.62(m，2H)2.98(m，2H)4.26(q，J＝7.07Hz，2H)6.45(bs，2H)7.06-7.45(m，15H)7.94(s，1H)；

8-氨基-1-(2-羟基乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.76(t，J＝7.68Hz，2H)2.94(t，J＝7.50Hz，2H)3.79-3.88(m，2H)4.30(q，J＝7.07Hz，2H)4.80(t，J＝5.79Hz，1H)4.84(t，J＝5.97Hz，2H)6.55(s，2H)8.19(s，1H)；

8-氨基-1-(2-氟乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

8-氨基-1-乙基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.13Hz，3H)1.38-1.42(m，3H)2.73-2.79(m，2H)2.90-2.96(m，2H)4.30(q，J＝7.07Hz，2H)4.81(q，J＝7.19Hz，2H)6.59(bs，2H)8.19(s，1H)；

8-氨基-1-异丙基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

8-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A49B8C2Z)

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.34(t，J＝7.13Hz，3H)2.89(m，2H)2.99(m，2H)4.33(q，J＝7.13Hz，2H)7.34(m，2H)8.31(s，1H)8.43(m，1H)8.70(s，1H)9.06(s，1H)14.28(br.s.，1H)；

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A51B8C2Z)

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.1Hz，3H)2.25(s，3H)2.46(m，4H)2.84(m，2H)2.98(m，2H)3.15(m，4H)4.19(s，3H)4.31(q，J＝7.1Hz，2H)6.79(m，1H)7.20(m，1H)7.30(m，1H)8.38(bs，1H)8.94(s，1H)；

8-[2-甲氧基-5-溴-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A118B1C2Z)

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.88(d，J＝7.93Hz，2H)2.96-3.03(m，2H)3.88(s，3H)4.30(q，J＝7.15Hz，2H)4.34(s，3H)7.03(d，J＝8.78Hz，1H)7.19(dd，J＝8.66，2.44Hz，1H)8.26(s，1H)8.37(d，J＝2.44Hz，1H)8.47(s，1H)。

实施例5

8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

在N₂下，向8-氨基-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(9.0g，33mmol)的二甲氧基乙烷(0.7L)的良好搅拌的混悬液中，依次加入碘化铯(8.6g，33mmol)，二次升华的碘(4.19g，16.5mmol)，碘化铜(2.0g，10mmol)和亚硝酸异戊酯(6.62mL，49.5mmol)。反应混合物在65-70℃下剧烈搅拌3小时。在冰-水浴中冷却后，滤除固体。用二氯甲烷(2.0L)稀释滤液，用30％氢氧化铵(150mL)、硫代硫酸钠(300mL)、盐水洗涤，用无水Na₂SO₄干燥并浓缩，得到5.69g的标题化合物(46％收率)。

¹H NMR(400MHz)，DMSO-d₆)，δppm 1.28(t，J＝7.07Hz，3H)2.81-3.07(2t，J＝8.90Hz，4H)4.24(s，3H)4.27(q，J＝7.07Hz，2H)8.5(bs，1H)。

根据相同的方法操作，制备下列化合物：

8-碘-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：1.28(t，J＝7.07Hz，3H)2.77(m，2H)3.06(m，2H)4.28(q，J＝7.07Hz，2H)7.06-7.28(m，15H)8.21(s，1H)；

8-碘-1-(2-羟基乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

8-碘-1-(2-氟乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

8-碘-1-乙基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯

1H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.28-1.35(m，3H)1.42(t，J＝7.19Hz，3H)2.89-2.97(m，2H)2.99-3.05(m，2H)4.26-4.34(m，2H)4.69(q，J＝7.19Hz，2H)8.48(s，1H)；

8-碘-1-异丙基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯。

实施例6

1-甲基-8-(2-(叔丁氧基羰基氨基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A12B1C2Z)

将乙酸钯[Pd(OAc)₂](101mg，0.45mmol)，(±)-BINAP(280mg，0.45mmol)和二甲基甲酰胺(65mL)装入用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将烧瓶抽真空，并用氩气装填。混合物在氩气下搅拌30分钟，并加入到2-(叔丁氧基羰基氨基)苯胺(2.6g，12.5mmol)、8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(1.6g，4.16mmol)和碳酸钾(5.74g，41.6mmol)在二甲基甲酰胺(50mL)中的混合物中。在氩气下，将所得混合物在70℃下搅拌6小时。在冷却至室温后，在硅藻土垫上过滤反应混合物。浓缩溶剂，在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：己烷/乙酸乙酯60/40)精制粗固体，得到1.18g(61％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.1Hz，3H)1.46(s，9H)2.84(m，4H)2.96(m，2H)4.20(s，3H)4.30(q，J＝7.1Hz，2H)7.12(m，2H)7.51(m，1H)7.71(m，1H)8.38(s，1H)8.65(s，1H)8.60(s，1H)。

根据上述方法操作，制备下列化合物：

表V

代码	NMR数据
		A45B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.1Hz，3H)2.84(m，2H)2.97(m，2H)4.18(s，3H)4.29(q，J＝7.1Hz，2H)7.23(m，1H)7.40(m，2H)7.85(m，1H)8.38(s，1H)9.08(s，1H)
A43B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.07Hz，3H)2.86(m，2H)2.99(m，2H)4.23(s，3H)4.30(q，J＝7.07Hz，2H)7.61(m，1H)7.64(m，1H)7.91(m，1H)8.41(s，1H)9.25(s，1H)
		A48B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.1Hz，3H)2.23(s，3H)2.47(m，4H)2.80(m，2H)2.95(m，2H)3.15(m，4H)4.16(s，3H)4.28(q，J＝7.1Hz，2H)6.87(d，J＝2.7Hz，1H)6.96(dd，J＝9.1和2.7Hz，1H)7.48(d，J＝9.11H)8.30(bs，1H)8.79(s，1H)
A51B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.1Hz，3H)2.25(s，3H)2.46(m，4H)2.84(m，2H)2.98(m，2H)3.15(m，4H)4.19(s，3H)4.31(q，J＝7.1Hz，2H)6.79(m，1H)7.20(m，1H)7.30(m，1H)8.38(bs，1H)8.94(s，1H)
		A39B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.1Hz，3H)2.25(s，3H)2.47(m，4H)2.54(s，3H)2.90(m，2H)2.99(m，2H)3.37(m，4H)4.30(q，J＝7.1Hz，2H)4.36(s，3H)6.61(dd，J＝9.27和2.56Hz，1H)7.86(d，J＝9.27Hz，1H)8.28(d，J＝2.56Hz，1H)8.53(bs，1H)12.12(s，1H)
A85B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.07Hz，3H)2.23(s，3H)2.44-2.48(m，4H)2.83(t，J＝7.62Hz，2H)2.97(t，J＝7.87Hz，2H)2.99-3.02(m，4H)3.78(s，3H)4.29(q，J＝7.07Hz，2H)4.28(s，3H)6.59(dd，J＝8.78，2.93Hz，1H)6.91(d，J＝8.90Hz，1H)7.68(d，J＝2.80Hz，

	1H)8.11(s，1H)8.39(s，1H)
		A90B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.07Hz，3H)2.28(bs，3H)2.83(t，J＝7.68Hz，2H)2.96(t，J＝7.38Hz，2H)3.20(bs，2H)4.17(s，3H)4.28(q，J＝7.15Hz，2H)7.25-7.30(m，1H)7.29(bs，1H)7.41(d，J＝9.75Hz，1H)8.34(s，1H)9.31(s，1H)
A45B6C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.28(t，J＝7.07Hz，3H)2.77(m，2H)3.06(m，2H)4.28(q，J＝7.07Hz，2H)7.06-7.28(m，16H)7.40(m，2H)7.85(m，1H)8.38(s，1H)9.08(s，1H)
		A49B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.13Hz，3H)2.83-2.89(m，2H)2.94-3.01(m，2H)4.26(s，3H)4.30(q，J＝7.13Hz，2H)7.37(d，J＝0.85Hz，2H)8.26(t，J＝1.28Hz，1H)8.45(s，1H)9.29(s，1H)
A98B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.07Hz，3H)2.12(s，3H)2.22(s，3H)2.42-2.47(m，4H)2.80(t，J＝7.68Hz，2H)2.92-2.97(m，2H)3.03-3.08(m，4H)4.14(s，3H)4.28(q，J＝7.15Hz，1H)6.67(dd，J＝8.29，2.56Hz，1H)7.01(d，J＝2.56Hz，1H)7.05(d，J＝8.78Hz，1H)8.30(s，1H)8.68(s，1H)
		A49B7C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(t，J＝7.13Hz，3H)1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.84-2.89(m，2H)2.95-3.01(m，2H)4.30(q，J＝7.15Hz，2H)4.64(q，J＝7.19Hz，2H)7.37-7.41(m，1H)7.41-7.45(m，1H)8.07(d，J＝2.20Hz，1H)8.45(s，1H)9.29(s，1H)
A49B6C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.29(t，J＝7.07Hz，3H)2.77(m，2H)3.06(m，2H)4.28(q，J＝7.07Hz，2H)7.06-7.28(m，15H)7.28-7.38(m，2H)8.33(s，1H)8.58(s，1H)
		A113B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.07Hz，3H)2.29(s，3H)2.43-2.49(m，2H)2.55-2.60(m，2H)

	2.80-2.88(m，2H)2.94-3.00(m，2H)3.00-3.05(m，2H)4.15(s，3H)4.29(q，J＝7.07Hz，2H)6.13-6.21(m，1H)7.25-7.31(m，1H)7.32-7.38(m，1H)7.83(d，J＝2.19Hz，1H)8.39(s，1H)9.10(s，1H)
		A114B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.13Hz，3H)1.74-1.87(m，2H)1.99-2.08(m，2H)2.80-2.89(m，6H)2.95-3.01(m，2H)3.02-3.14(m，2H)3.49-3.56(m，2H)4.20(s，3H)4.29(q，J＝7.11Hz，2H)7.10(dd，J＝8.29，2.32Hz，1H)7.36-7.41(m，1H)7.71(d，J＝2.19Hz，1H)8.40(s，1H)9.12(s，1H)

实施例7

1-甲基-8-(2-氨基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯的盐酸盐(A7B1C2Z)

将0.85g(1.83mmol)的1-甲基-8-(2-(叔丁氧基羰基氨基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯溶于50mL的二氯甲烷中，向其中加入30mL的HCl 4N的二噁烷溶液。将该溶液在室温下搅拌2小时，真空除去溶剂。残留物在乙醚中结晶，得到0.70g的标题化合物(96％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm(作为游离碱)1.32(t，J＝7.1Hz，3H)2.82(m，4H)2.96(m，2H)4.19(s，3H)4.28(q，J＝7.1Hz，2H)4.85(bs，2H)6.58(m，1H)6.76(m，1H)6.90(m，1H)7.32(m，1H)8.32(s，1H)8.52(s，1H)。

实施例8

1-甲基-8-[2-(3-甲基-丁酰氨基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A35B1C2Z)

氮气下，向1-甲基-8-(2-氨基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯的盐酸盐(0.25g，0.62mmol)和DIPEA(0.44mL，2.56mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入溶于二氯甲烷(1mL)的异戊酰氯(0.076mL，0.62mmol)。在1小时后，浓缩反应混合物。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：二氯甲烷/甲醇98∶2)精制，得到140mg的标题化合物(44％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.93(d，J＝6.6Hz，6H)1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.06(m，1H)2.24(d，J＝7.2Hz，2H)2.84(m，2H)2.97(m，2H)4.18(s，3H)4.30(q，J＝7.12Hz，1H)7.21(m，1H)7.23(m，1H)7.43(d，J 7.7Hz，1H)7.80(d，J＝7.7Hz，1H)8.37(s，1H)8.47(bs，1H)9.68(bs，1H)。

根据上述方法操作，在由相应羧酸制备酰氯后，制备下列化合物：

表VI

代码	NMR数据
		A21B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.30(t，J＝7.07Hz，3H)2.07(s，3H)2.83(m，2H)2.95(m，2H)4.18(s，3H)4.28(q，J＝7.07Hz，1H)7.09(m，1H)7.17(m，1H)7.48(d，J＝7.7Hz，1H)7.77(d，J＝7.7Hz，1H)8.37(s，1H)8.58(bs，1H)9.62(bs，1H)
A38B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J7.19Hz，3H)2.07(s，3H)2.85(m，2H)2.97(m，2H)3.55(q，J＝1.22Hz，2H)4.16(s，3H)4.29(q，J＝7.19Hz，1H)7.15(m，1H)7.22(m，1H)7.60(dd，J＝7.931.46Hz，1H)7.73(dd，J＝7.931.46Hz，1H)8.39(s，1H)8.59(bs，1H)9.82(bs，

	1H)
		A37B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.84(m，2H)2.96(m，2H)3.38(s，3H)4.20(s，3H)4.30(q，J＝7.07Hz，1H)6.09(m，1H)6.89(m，1H)7.02(m，1H)7.16(m，1H)7.23(m，1H)7.53(m，1H)7.80(m，1H)8.38(s，1H)8.70(s，1H)9.56(s，1H)
A8B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)2.84(m，2H)2.97(m，2H)4.21(s，3H)4.29(q，J＝7.07Hz，1H)6.17(m，1H)6.89(m，1H)6.98(m，1H)7.17(m，1H)7.25(m，1H)7.52(m，1H)7.83(m，1H)8.37(s，1H)8.72(s，1H)9.68(s，1H)11.78(s，1H)
		A23B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)1.82(m，2H)1.98(m，1H)2.28(m，1H)2.66(m，2H)2.74(m，2H)2.87(m，2H)3.99(s，3H)4.10(s，2H)4.18(s，3H)4.29(q，J＝7.07Hz，1H)4.52(m，1H)7.09(m，1H)7.0-7.91(m，12H)8.08，8.26(s，1H)8.58，8.70(s，1H)9.50，9.70(s，1H)
A104B1C2Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.32(t，J＝7.07Hz，3H)1.82(m，2H)1.98(m，1H)2.28(m，1H)2.66(m，2H)2.74(m，2H)2.87(m，2H)3.99(s，3H)4.10(s，2H)4.18(s，3H)4.29(q，J＝7.07Hz，1H)4.52(m，1H)7.09(m，1H)7.0-7.91(m，12H)8.08，8.26(s，1H)8.58，8.70(s，1H)9.50，9.70(s，1H)

实施例9

8-(2-(三氟甲氧基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A45B8C2Z)

用三氟乙酸(1mL)处理1-三苯甲基-8-(2-(三氟甲氧基苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(140mg，0.21mmol)的DCM(10mL)溶液。将所得混合物在室温下搅拌1小时，真空除去溶剂。残留物再溶于二氯甲烷，用NaHCO₃的饱和溶液洗涤。然后用Na₂SO₄干燥有机层，溶剂蒸发至干燥。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：己烷/乙酸乙酯60/40)精制粗固体，以一定收率得到88mg的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.33(t，J＝7.1Hz，3H)2.87(m，2H)2.99(m，2H)4.32(q，J＝7.1Hz，2H)7.17(m，1H)7.40(m，2H)8.20(m，1H)8.37(s，1H)8.70(s，1H)。

实施例10

8-{2-[((S)-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-苯基氨基}-1-甲基-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A25B1C1Z)

将8-{2-[((S)-N-FMOC-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-苯基氨基}-1-甲基-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(200mg，0.29mmol)混悬于20mL的乙醇和20mL的NH₄OH 30％的混合物中。在密封的瓶中，混合物在65℃下搅拌12小时。然后蒸发溶剂至干燥，用二氯甲烷再溶解残留物并用水洗涤。用Na₂SO₄干燥有机层并蒸发。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：二氯甲烷/甲醇94/6)精制粗产物，得到60mg(47％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(m，1H)1.45(m，1H)1.61(m，1H)1.92(m，1H)2.21(m，1H)2.69(m，1H)2.80(m，2H)2.95(m，2H)3.64(m，1H)3.98(s，3H)7.12(m，1H)7.23(m，2H)7.33(m，1H)7.45(m，1H)8.02(m，1H)8.36(s，1H)。

根据相同的方法操作，制备下列化合物：

表VII

代码	NMR数据
		A36B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.25(m，1H)1.45(m，1H)1.61(m，1H)1.92(m，1H)2.21(m，1H)2.69(m，1H)2.80(m，2H)2.95(m，2H)3.64(m，1H)3.98(s，3H)7.12(m，1H)7.23(m，2H)7.33(m，1H)7.45(m，1H)8.02(m，1H)8.36(s，1H)
A45B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.82(m，2H)2.99(m，2H)4.17(s，3H)7.23(m，2H)7.39(m，2H)7.46(bs，1H)7.89(m，1H)8.38(s，1H)9.05(s，1H)
		A7B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79(m，4H)2.97(m，2H)4.16(s，3H)4.85(bs，2H)6.58(m，1H)6.75(m，1H)6.90(m，1H)7.23(bs，1H)7.34(m，1H)7.44(bs，1H)8.31(s，1H)8.49(s，1H)

实施例11

1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-4-溴苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A43B1C1Z)

将1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-4-溴苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(330mg，0.64mmol)混悬于10mL的四氢呋喃中。加入氯化铵(106mg 2.0mmol)和LiN(TMS)₂1N的THF(4.0mL，4.0mmol)溶液。该混合物在室温下搅拌0.5小时。然后蒸发溶剂至干燥，残留物混悬于水中，并过滤，得到288mg(93％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.81(m，2H)2.98(m，2H)4.19(s，3H)7.24(bs，1H)7.42(bs，1H)7.60(m，1H)7.62(m，1H)7.92(m，1H)8.39(s，1H)9.19(s，1H)。

根据相同的方法操作，制备下列化合物：

表VIII

代码	NMR数据
		A43B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.73(d，J＝4.76Hz，3H)2.82(m，2H)2.98(m，2H)4.19(s，3H)7.60(m，1H)7.62(m，1H)7.92(m，1H)8.08(q，J＝4.76Hz，1H)8.39(s，1H)9.20(s，1H)
A43B1C5Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.24(s，3H)2.38(m，4H)3.31(m，4H)3.62(m，2H)3.80(m，2H)4.17(s，3H)7.59(dd，J＝8.78和2.32Hz，1H)7.62(m，1H)7.91(d，J＝8.78Hz，1H)8.08(q，J＝4.76Hz，1H)8.39(s，1H)9.20(s，1H)
		A48B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.77(m，2H)2.95(m，2H)3.15(m，4H)4.13(s，3H)6.86(d，J＝2.7Hz，1H)6.96(dd，J＝9.1和2.7Hz，1H)7.23(bs，1H)7.42(bs，1H)7.51(d，J＝9.11H)8.28(bs，1H)8.75(s，1H)

实施例12

8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾

将8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(384mg，1mmol)混悬于无水乙醇(10mL)中并在室温下用1.5M氢氧化钾的乙醇(6.6mL，10mmol)溶液处理过夜。通过过滤收集所得到的沉淀，得到呈白色固体状的标题化合物(323mg，82％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79(m，2H)2.96(m，2H)4.10(s，3H)8.34(s，1H)。

根据上述方法操作，制备下列化合物：

8-碘-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.66(m，2H)3.04(m，2H)7.15-7.25(m，15H)8.10(s，1H)；

8-氨基-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.54(m，2H)2.94(m，2H)4.99(bs 2H)7.12-7.18(m，15H)8.57(s，1H)；

8-氨基-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.70(m，2H)2.94(m，2H)4.10(s，3H)4.98(bs 2H)8.55(s，1H)。

表IX

代码	NMR数据
		A21B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.1(s，3H)2.72(m，2H)2.94(m，2H)4.06(s，3H)7.07(m，1H)7.17(m，1H)7.47(d，J＝7.7Hz，1H)7.81(d，J＝7.7Hz，1H)8.26(s，1H)8.48(bs，1H)9.73(bs，1H)
A35B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.94(d，J＝6.6Hz，6H)2.09(m，1H)2.25(d，J＝7.3Hz，2H)2.72(m，2H)2.93(m，2H)4.06(s，3H)7.08(m，1H)7.23(m，1H)7.40(d，J＝7.7Hz，1H)7.84(d，J＝7.7Hz，1H)8.26(s，1H)8.32(bs，1H)9.72(bs，1H)
		A37B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.72(m，2H)2.94(m，2H)3.90(s，3H)4.10(s，3H)6.06(m，1H)6.83(m，1H)6.97(m，1H)7.08(m，1H)7.20(m，1H)7.59(m，1H)7.85(m，1H)8.27(s，1H)8.58(s，3H)9.61(s，1H)12.10(s，1H)
A8B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.70(m，2H)2.92(m，2H)4.05(s，3H)6.17(m，1H)6.91(bd，1H)6.98(bd，1H)7.13(m，1H)7.22(m，1H)7.52(d，J＝7.7Hz，1H)7.87(d，J＝7.7Hz，1H)8.25(s，1H)8.58(s，1H)9.98(s，

	1H)12.10(s，1H)
		A39B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.32(s，3H)2.45(m，4H)2.76(m，2H)2.95(m，2H)3.34(m，4H)4.20(s，3H)6.57(d，J＝8.5Hz，1H)7.83(bd，J＝8.5Hz，1H)8.32(bs，1H)8.41(s，1H)12.04(s，1H)
A45B8C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.74(m，2H)2.89(m，2H)7.12(m，1H)7.36(m，2H)8.26(s，1H)8.28(bs，1H)8.54(bs，1H)12.10(s，1H)
		A51B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.44(m，4H)2.71(m，2H)2.91(m，2H)3.13(m，4H)4.04(s，3H)6.72(dd，J＝8.5和3.0Hz，1H)7.18(dd J＝8.5和3.0Hz，1H)7.36(d，J＝3.0Hz，1H)8.26(bs，1H)8.65(s，1H)
A85B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.46(m，4H)2.72(m，2H)2.93(m，2H)3.01(m，4H)3.79(s，3H)4.15(s，3H)6.56(dd，J＝8.9和2.7Hz，1H)6.90(dJ＝8.9，1H)7.81(d，J＝2.7Hz，1H)8.30(bs，1H)8.55(s，1H)
		A48B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(m，3H)2.42-2.49(m，4H)2.60(br s，2H)2.87(t，J＝7.87Hz，2H)3.08(br s，4H)4.04(s，3H)6.76(br s，1H)6.87(br s，1H)7.49-7.56(m，1H)8.02(br s，1H)8.57(br s，1H)
A90B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.24(m，3H)2.45(m，4H)2.60(m，2H)2.87(m，2H)3.08(m，4H)4.03(s，3H)7.01-7.34(m，2H)8.23(br s，1H)8.55(br s，1H)
		A49B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.78(t，2H)2.96(t，2H)4.16(s，3H)7.35(m，2H)8.34(d，J＝1.83Hz，1H)8.38(s，1H)9.11(s，1H)
A98B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.13(s，3H)2.21(s，3H)2.41-2.46(m，4H)2.69(t，J＝7.62Hz，2H)2.92(t，J＝7.62Hz，2H)3.02-3.08(m，4H)4.02(s，3H)6.65(dd，J＝8.41，2.56Hz，1H)7.04(d，J＝8.78Hz，1H)7.07(d，J＝2.44Hz，1H)8.21(s，1H)8.47(s，1H)
		A80B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.35(s，9H)2.78(t，J＝7.68Hz，2H)2.94(t，J＝7.44Hz，2H)3.96(s，3H)7.17-7.26(m，3H)7.42-7.46(m，1H)8.27(s，1H)8.51(s，1H)12.77(bs，1H)
A81B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.76(t，J＝7.68Hz，2H)

	2.92(t，J＝7.74Hz，2H)4.11(s，3H)7.20(dd，J＝8.90Hz，2H)7.27(ddd，J＝7.44，1.22Hz，1H)7.35(dd，J＝7.80，1.60Hz，1H)7.40(ddd，J＝7.62，1.71Hz，1H)7.45(dd，J＝8.78，5.61Hz，2H)7.64(d，J＝7.07Hz，1H)8.24(s，1H)8.56(s，1H)12.78(bs，1H)
		A49B8C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.73(m，2H)2.90(m，2H)7.23(m，1H)7.28(m，1H)8.28(bs，1H)8.52(s，1H)8.77(bs，1H)
A51B8C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.44(m，4H)2.71(m，2H)2.91(m，2H)3.13(m，4H)6.72(dd，J＝8.5和3.0Hz，1H)7.18(dd J＝8.5和3.0Hz，1H)7.36(d，J＝3.0Hz，1H)8.26(bs，1H)8.65(s，1H)
		A118B1C3Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.76(t，J＝7.62Hz，2H)2.96(t，J＝7.62Hz，2H)3.89(s，3H)4.21(s，3H)7.02(d，J＝8.78Hz，1H)7.15(dd，J＝8.66，2.56Hz，1H)8.03(s，1H)8.37(s，1H)8.48(d，J＝2.44Hz，1H)

实施例13

8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

用N-乙基-N′，N′-二异丙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(287mg，1.5mmol)和1H-1，2，3-苯并三唑-1-酸铵(304mg，2mmol)处理8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(394mg，1.0mmol)的无水二甲基甲酰胺(10mL)混悬液。该反应在室温下搅拌过夜。用水稀释该反应，通过过滤收集所得到的沉淀，得到标题化合物(320mg，90％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.99(m，4H)4.25(s，3H)7.31(s，1H)7.51(s，1H)8.47(s，1H)。

根据上述方法操作并使用适当的胺，制备下列化合物：

8-氨基-1-甲基-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.68和2.90(2m，4H)4.28(s，3H)6.50(bs，2H)7.32(bs，2H)8.15(s，1H)。

8-碘-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.76(m，2H)3.08(m，2H)6.63(s，1H)7.08-7.30(m，15H)7.43(s，1H)8.21(s，1H)。

8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸甲酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.75(d，J＝4.63Hz，3H)2.90(m，2H)3.03(m，2H)4.24(s，3H)6.14(q，J＝4.63Hz，1H))8.47(s，1H)。

表X

代码	NMR数据
		A8B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80(m，2H)2.98(m，2H)4.19(s，3H)6.17(m，1H)6.941(m，1H)6.96(m，1H)7.16(m，1H)7.25(m，2H)7.45(m，1H)7.52(dd，J＝7.7和1.4Hz，1H)7.84(dd，J＝7.7和1.4Hz，1H)8.36(s，1H)8.69(s，1H)9.66(s，1H)11.75(s，1H)
A45B8C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.87(m，2H)3.02(m，2H)7.10(m，1H)7.26(bs，1H)7.40(m，2H)7.52(bs，1H)8.31(m，1H)8.39(s，1H)8.48(s，1H)14.02(s，1H)
		A21B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.09(s，3H)2.81(m，2H)2.99(m，2H)4.18(s，3H)7.10(m，1H)7.19(m，1H)7.25(bs，1H)7.46(bs，1H)7.49(d，J＝7.7Hz，1H)7.80(d，J＝7.7Hz，1H)8.37(s，1H)8.57(bs，1H)9.64(bs，1H)
A35B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.94(d，J＝6.6Hz，6H)2.09(m，1H)2.25(d，J＝7.3Hz，2H)2.81(m，2H)2.98(m，2H)4.16(s，3H)7.11(m，1H)7.23(m，1H)7.24(bs，1H)7.42(d，J＝7.7Hz，1H)7.46(bs，1H)7.81(d，J＝7.7Hz，1H)8.36(s，1H)8.46(s，1H)9.67(bs，1H)
		A37B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80(m，2H)2.97(m，2H)3.88(s，3H)4.18(s，3H)6.10(m，1H)6.89(m，1H)7.02(m，1H)7.15(m，1H)7.24(m，1H)7.25(m，1H)7.46(m，1H)7.52(m，1H)7.81(m，1H)8.36(s，1H)8.68(s，3H)9.56(s，1H)
A51B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.44(m，4H)2.80(m，2H)2.97(m，2H)3.12(m，4H)4.16(s，3H)6.75(dd，J＝9.2和3.0Hz，1H)7.19(dd J＝9.2和3.0Hz，1H)

	7.24(bs，1H)7.30(d，J＝3.0Hz，1H)7.43(bs，1H)8.35(s，1H)8.87(s，1H)
		A51B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.26(s，3H)2.46-2.52(m，4H)2.74(d，J＝4.76Hz，3H)2.81(t，J＝7.74Hz，2H)2.98(t，J＝7.74Hz，2H)3.13-3.18(m，4H)4.17(s，3H)6.77(dd，J＝9.02，3.05Hz，1H)7.19-7.23(m，1H)7.31(d，J＝2.93Hz，1H)8.07(q，J＝4.59Hz，1H)8.36(s，1H)8.89(s，1H)
A51B1C7Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.42-2.46(m，4H)2.82(t，J＝7.68Hz，2H)2.98(t，J＝7.62Hz，2H)3.11-3.16(m，4H)3.93-4.05(m，2H)4.19(s，3H)6.76(dd，J＝9.02，2.80Hz，1H)7.20(d，J＝8.54Hz，1H)7.30(d，J＝2.80Hz，1H)8.36(s，1H)8.71(t，J＝6.46Hz，1H)8.91(s，1H)
		A85B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.81(m，2H)2.99(m，2H)3.02(m，4H)3.79(s，3H)4.27(s，3H)6.59(dd，J＝8.9和2.9Hz，1H)6.92(dJ＝8.9，1H)7.26(bs，1H)7.46(bs，1H)7.73(d，J＝2.9Hz，1H)8.07(s，1H)8.39(s，1H)
A85B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.35(m，3H)2.62(m，4H)2.75(d，J＝4.76Hz，3H)2.81(t，J＝7.62Hz，2H)2.99(t，J＝7.74Hz，2H)3.06(m，4H)3.79(s，3H)4.27(s，3H)6.61(dd，J＝8.84，2.87Hz，1H)6.93(d，J＝8.90Hz，1H)7.73(d，J＝2.80Hz，1H)8.07(m，1H)8.09(s，1H)8.39(s，1H)
		A39B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.29(s，3H)2.45(m，4H)2.75(d，J＝4.76Hz，3H)2.85(t，J＝7.8Hz，2H)3.00(t，J＝7.8Hz，2H)3.41(m，4H)4.33(s，3H)6.60(dd，J＝9.2和2.3Hz，1H)7.85(d，J＝9.2Hz，1H)8.10(m，1H)8.32(d，J＝2.3Hz，1H)8.51(s，1H)
A48B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.77(t，J＝7.68Hz，2H)2.95(t，J＝7.68Hz，2H)3.15(m，4H)4.13(s，3H)6.86(bs，1H)6.96(dd，J＝8.62，2.50Hz，1H)7.23(bs，1H)7.42(s，1H)7.51(d，J＝8.62Hz，1H)8.28(s，1H)
		A48B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.27(s，3H)2.52(m，4H)2.74(d，J＝4.76Hz，3H)2.78(t，J＝7.62Hz，2H)2.97(t，J＝7.62Hz，2H)3.17(m，4H)4.15(s，3H)6.88(m，1H)6.98(dd，J＝8.96，2.74Hz，1H)7.53(d，J＝9.02Hz，1H)8.05(q，J＝4.67Hz，1H)8.29(s，1H)8.77(s，1H)

A89B1C6Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.77(m，4H)2.97(s，3H)3.12(m，4H)3.21(s，3H)3.80(s，3H)4.20(s，3H)6.49(dd，J＝8.78，2.56Hz，1H)6.63(d，J＝2.56Hz，1H)7.65(d，J＝8.78Hz，1H)7.99(s，1H)8.28(s，1H)
		A89B1C4Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.27(s，3H)2.52(m，4H)2.74(d，J＝4.76Hz，3H)2.78(t，J＝7.62Hz，2H)2.97(t，J＝7.62Hz，2H)3.17(m，4H)3.80(s，3H)4.15(s，3H)6.49(dd，J＝8.78，2.56Hz，1H)6.63(d，J＝2.56Hz，1H)7.65(d，J＝8.78Hz，1H)7.99(s，1H)8.05(q，J＝4.67Hz，1H)8.28(s，1H)8.77(s，1H)
A89B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.31(bs，3H)2.54-2.62(m，4H)2.78(t，J＝7.68Hz，2H)2.94-3.00(m，2H)3.12-3.19(m，4H)3.82(s，3H)4.23(s，3H)6.51(dd，J8.72，2.50Hz，1H)6.65(d，J＝2.44Hz，1H)7.24(bs，1H)7.44(s，1H)7.66(d，J＝8.78Hz，1H)8.01(s，1H)8.30(s，1H)
		A49B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.83(t，J＝7.74Hz，2H)2.96-3.02(m，2H)4.24(s，3H)7.26(br s，1H)7.36(d，J＝1.10Hz，1H)7.46(bs，1H)8.29(dd，J＝1.59，0.98Hz，1H)8.44(s，1H)9.26(s，1H)
A98B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.13(s，3H)2.21(s，3H)2.41-2.45(m，4H)2.77(t，J＝7.82Hz，2H)2.96(t，J＝7.82Hz，2H)3.03-3.07(m，4H)4.11-4.14(m，3H)6.67(dd，J＝8.35，2.62Hz，1H)7.06(d，J＝8.30Hz，1H)7.04(d，J＝2.40Hz，1H)7.23(bs，1H)7.42(bs，1H)8.30(s，1H)8.64(s，1H)
		A49B7C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.27(t，J＝7.13Hz，3H)2.83(t，J＝7.62Hz，2H)2.93-3.06(m，2H)4.61(q，J＝7.07Hz，2H)7.26(bs，1H)7.39-7.46(m，3H)8.09(d，J＝2.20Hz，1H)8.43(s，1H)9.25(s，1H)
A49B8C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.83(t，J 7.74Hz，2H)2.98(m，2H)7.26(bs，1H)7.36(d，J 1.10Hz，1H)7.46(bs，1H)8.29(dd，J 1.59，0.98Hz，1H)8.44(s，1H)9.26(s，1H)
		A118B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.84(t，J＝7.68Hz，2H)3.00(t，J＝7.68Hz，2H)3.88(s，3H)4.32(s，3H)7.03(d，J＝8.78Hz，1H)7.18(dd，J＝8.66，2.56Hz，1H)7.27(br.s.，1H)7.47(br.s.，1H)8.22(s，1H)8.40(d，J＝2.56Hz，

	1H)8.46(s，1H)
		A118B1C8Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.84(t，J＝7.72Hz，2H)3.00(t，J＝7.72Hz，2H)3.75(s，3H)3.82(s，3H)3.88(s，3H)4.32-4.36(m，2H)4.33(s，3H)6.48(dd，J＝8.35，2.38Hz，1H)6.57(d，J＝2.44Hz，1H)7.03(d，J＝8.78Hz，1H)7.09(d，J＝8.29Hz，1H)7.18(dd，J＝8.66，2.44Hz，1H)8.20-8.23(m，1H)8.23(s，1H)8.39(d，J＝2.44Hz，1H)8.46(s，1H)
A85B1C8Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.43-2.49(m，4H)2.77-2.85(m，2H)2.96-3.00(m，2H)3.01-3.04(m，4H)4.28(s，3H)4.34(d，J＝6.22Hz，2H)6.48(dd，J＝8.35，2.38Hz，1H)6.57(d，J＝2.32Hz，1H)6.60(dd，J＝8.90，2.93Hz，1H)6.92(d，J＝8.78Hz，1H)7.09(d，J＝8.41Hz，1H)7.72(d，J＝2.80Hz，1H)8.08(s，1H)8.20(t，J＝6.10Hz，1H)8.40(s，1H)

实施例14

8-碘-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

用三氟乙酸(0.5mL)处理8-碘-1-三苯甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(291mg，0.5mmol)的DCM(10mL)溶液。所得混合物在室温下搅拌1小时。加入DCM(40mL)，将有机相用碳酸氢钠的饱和溶液洗涤，然后用盐水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到143mg的标题化合物(84％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.93(m，2H)3.04(m，2H)7.27(s，1H)7.58(s，1H)8.44(s，1H)14.25(s，1H)。

根据该方法操作，制备下列化合物：

表XI

代码	NMR数据
		A51B8C1Z	¹HNMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.22(s，3H)2.45(m，4H)2.84(m，2H)2.99(m，2H)3.17(m，4H)6.71(m，1H)7.17(m，1H)7.22(bs，1H)7.29(m，1H)7.49(bs，1H)7.61(bs，1H)8.31(bs，1H)8.36(s，1H)13.94(bs，1H)

实施例15

8-碘-1-(2-氟乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

在室温下，用在树脂载体上的三苯基膦(0.4g，3mmol/g，1.2mmol)，二叔丁基氮杂二甲酸酯(276mg，1.2mmol)，2-氟乙醇(70microL，1.2mmol)处理8-碘-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(104mg，0.3mmo)的THF(3mL)混合液1小时。滤除树脂，并浓缩溶液。在乙醚中结晶，得到74mg的标题化合物(62％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.92(m，2H)3.05(m，2H)4.86(m，1H)4.96(m，2H)5.05(m，1H)7.36(s，1H)7.55(s，1H)8.49(s，1H)。

根据上述方法操作并使用适当的胺，制备下列化合物：

表XII

代码	NMR数据
		A45B2C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.82(m，2H)2.99(m，2H)4.57(m，1H)4.69(m，1H)4.85(m，1H)4.91(m，1H)7.26(m，1H)7.29(bs，1H)7.40(m，2H)7.45(bs，1H)7.76(m，1H)8.38(s，1H)9.10(s，1H)
A45B3C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.29(d，J＝6.71Hz，6H)2.78(m，2H)2.95(m，2H)4.60(m，1H)7.23(bs，1H)7.27(m，

	1H)7.31(bs，1H)7.40(m，2H)7.73(m，1H)8.36(s，1H)9.06(s，1H)
		A45B4C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.33(m，6H)2.79(m，2H)2.98(m，2H)3.26(m，1H)3.39(m，1H)3.64(m，1H)3.80(m，1H)4.41(m，1H)4.74(m，1H)4.90(m，1H)7.22(m，1H)7.25(bs，1H)7.39(m，2H)7.42(bs，1H)7.87(m，1H)8.38(s，1H)9.03(s，1H)
A51B2C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.42(s，3H)2.68(m，4H)2.82(m，2H)2.99(m，2H)3.22(m，4H)4.54(m，1H)4.66(m，1H)4.83(m，1H)4.90(m，1H)6.83(m，1H)7.20(m，1H)7.25(m，1H)7.29(bs，1H)7.43(bs，1H)8.36(s，1H)8.99(s，1H)
		A51B7C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.15(t，3H)2.42(s，3H)2.64(m，4H)2.82(m，2H)2.97(m，2H)3.22(m，4H)4.54(q，2H)6.86(m，1H)7.22(m，1H)7.25(m，1H)7.28(bs，1H)7.38(bs，1H)8.35(s，1H)8.98(s，1H)
A49B4C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.33(m，6H)2.79(m，2H)2.98(m，2H)3.27(m，2H)3.71(m，1H)3.87(m，1H)4.42(m，1H)4.80(m，1H)4.98(m，1H)7.28(m，1H)7.38(bs，2H)7.45(m，2H)8.19(s，1H)8.45(s，1H)9.25(s，1H)
		A51B4C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.33(m，6H)2.54(m，5H)2.77-2.81(m，2H)2.93-3.03(m，2H)3.12-3.27(m，5H)3.37-3.46(m，1H)3.55-3.65(m，1H)3.71-3.82(m，1H)4.37(t，J＝2.87Hz，1H)4.66-4.77(m，1H)4.84-4.94(m，1H)6.80(dd，J＝9.21，2.99Hz，1H)7.22(d，J＝9.02Hz，1H)7.25-7.28(m，2H)7.36-7.43(m，1H)8.36(s，1H)8.88(s，1H)

实施例16

8-[(2-乙酰基苯基)氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A2B1C1Z)

将乙酸钯Pd(OAc)₂(20mg，0.09mmol)，(±)-BINAP(55mg，0.09mmol)和二甲基甲酰胺(5mL)填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。混合物在氩气下搅拌30分钟，并加入到2-乙酰基苯胺(0.162ml，1.35mmol)、8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(319mg，0.9mmol)、碳酸钾(1.24g，9mmol)的混合物的二甲基甲酰胺(10mL)溶液中。所得混合物在80℃和氩气下搅拌4小时。在冷却至室温后，反应混合物在硅藻土垫上过滤.浓缩溶剂，在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到153mg(47％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.69(s，3H)2.87(t，J＝7.68Hz，2H)3.02(t，J＝7.68Hz，2H)4.36(s，3H)7.10(ddd，J＝8.08，7.10，1.16Hz，1H)7.28(s，1H)7.51(s，1H)7.65(ddd，J＝8.54，7.19，1.46Hz，1H)8.08(dd，J＝7.99，1.52Hz，1H)8.52(s，1H)8.75(dd，J＝8.54，0.98Hz，1H)11.61(s，1H)

根据相同方法操作，制备下列化合物：

表XIII

代码	NMR数据
		A1B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.04(t，J＝7.70Hz，2H)3.01(t，J＝7.70Hz，2H)4.21(s，3H)7.26(m，1H)7.27(bs，1H)7.47(bs，1H)7.73(m，1H)7.89(m，1H)8.12(m，2H)10.02(s，1H)
A34B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.87(t，J＝7.70Hz，2H)3.01(t，J＝7.70Hz，2H)3.27(s，3H)4.27(s，3H)7.25-7-30(bs，1H)7.27(m，1H)7.47-7.52(bs，1H)7.74(m，1H)7.89(m，1H)8.49(m，1H)8.51(m，1H)9.23(s，

	1H)
		A39B2C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.45(m，4H)2.54(s，3H)2.86(m，2H)3.02(m，2H)3.34(m，4H)4.87(m，1H)4.99(m，1H)5.06(m，1H)5.13(m，1H)6.61(dd，J＝9.2和2.5Hz，1H)7.33(bs，1H)7.50(bs，1H)7.88(bd，J＝9.2Hz，1H)8.33(d，2.5Hz，1H)8.53(s，1H)12.13(s，1H)
A40B2C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.52(s，3H)2.82(m，2H)2.93(m，4H)3.01(m，2H)4.66(m，1H)4.78(m，1H)4.91(m，1H)4.97(m，1H)7.01(d，J＝8.0Hz，1H)7.31(bs，1H)7.42(t，J＝8.0Hz，1H)7.47(bs，1H)7.53(d，J＝8.0Hz，1H)8.37(s，1H)9.01(s，1H)
		A2B2C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.68(s，3H)2.87(m，2H)3.02(m，2H)4.88(m，1H)4.99(m，1H)5.08(m，1H)5.13(m，1H)7.10(m，1H)7.33(bs，1H)7.50(bs，1H)7.65(m，1H)8.07(dd，J＝8.05和1.5Hz，1H)8.51(s，1H)8.62(dd，J＝8.54和0.9Hz，1H)11.54(s，1H)
A84B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.26(s，3H)2.47-2.55(m，4H)2.66(s，3H)2.83(t，J＝7.68Hz，2H)3.00(t，J＝7.68Hz，2H)3.14-3.19(m，4H)4.32(s，3H)7.27(bs，1H)7.32(dd，J＝9.15，2.68Hz，1H)7.45(d，J＝2.80Hz，1H)7.48(bs，1H)8.43(s，1H)8.49(d，J＝9.15Hz，1H)11.04(s，1H)
		A39B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.45(m，4H)2.55(s，3H)2.85(t，J＝7.8Hz，2H)3.00(t，J＝7.8Hz，2H)3.35(m，4H)4.35(s，3H)6.63(dd，J＝9.2和2.5Hz，1H)7.29(bs，1H)7.49(bs，1H)7.88(bd，J＝9.2Hz，1H)8.33(d，J＝2.5Hz，1H)8.53(s，1H)12.13(s，1H)
A40B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.46(m，4H)2.57(s，3H)2.81(t，J＝7.32Hz，2H)2.93(m，4H)3.99(t，J＝7.68Hz，2H)4.24(s，3H)6.96(dd，J＝8.17Hz，1H)7.27(bs，1H)7.41(t，J＝8.17Hz 1H)7.46(bs，1H)7.71(bd，J＝8.17Hz，1H)8.37(s，1H)9.05(s，1H)
		A51B6C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.45(m，4H)2.72(t，J＝7.50Hz，2H)3.06(m，2H)3.09(m，4H)6.55(m，2H)7.08(m，6H)7.14(d，J＝9.02Hz，1H)7.23(m，

	9H)7.40(bs，1H)7.96(d，J＝2.93Hz，1H)8.26(s，1H)
		A41B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.62(m，2H)1.78(m，2H)2.02(m，2H)2.21(bs，3H)2.81(m，2H)2.84(t，J＝7.74Hz 2H)2.99(t，J＝7.68Hz 2H)3.75(m，1H)4.24(s，3H)7.25(bs，1H)7.46(bs，1H)7.88(m，2H)8.13(d，J＝8.54Hz，1H)8.31(d，J＝7.68Hz，1H)8.44(s，1H)9.25(s，1H)
A42B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.70(m，2H)1.91(m，2H)2.50(s，3H)2.84(t，J＝7.80Hz，1H)3.01(t，J＝7.80Hz，2H)3.88(m，1H)3.94(s，3H)4.32(s，3H)7.26(bs，1H)7.46(bs，1H)7.52(m，2H)8.20(m，1H)8.25(m，1H)8.45(s，1H)9.22(s，1H)
		A44B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.86(t，J＝7.68Hz，2H)3.00(t，J＝7.8Hz 2H)4.24(s，3H)7.26(bs，1H)7.47(bs，1H)7.70(dq，J＝9.08和2.87Hz，1H)8.01(dd，J＝9.07和1.61Hz，1H)8.50(s，1H)8.99(d，J＝2.80Hz，1H)9.53(s，1H)
A47B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.81(t，J＝7.74Hz，2H)2.97(t，J＝7.8Hz，2H)3.84(s，3H)4.28(s，3H)4.44(d，J＝5.37Hz，2H)5.05(t，J＝5.55Hz，1H)6.94-6.97(m，1H)6.99(m，1H)7.25(bs，1H)7.45(bs，1H)8.07(m，2H)8.39(s，1H)
		A113B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.76(br.s.，2H)2.80-2.85(m，2H)2.91(d，J＝4.51Hz，3H)2.95-3.02(m，2H)3.21-3.34(m，1H)3.63(d，J＝10.36Hz，1H)3.73-3.82(m，1H)3.96-4.05(m，1H)4.14(s，3H)6.22(br.s.，1H)7.28(br.s.，1H)7.32-7.35(m，1H)7.37(br.s.，1H)7.40-7.45(m，1H)7.93(d，J＝2.19Hz，1H)8.38(s，0H)9.15(s，1H)
A114B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.73-1.89(m，2H)1.99-2.08(m，2H)2.78-2.86(m，2H)2.82(d，J＝4.63Hz，3H)2.99(t，J＝7.50Hz，2H)3.03-3.15(m，2H)3.49-3.57(m，2H)4.17(s，3H)7.09(dd，J＝8.54，2.11Hz，1H)7.28(br.s.，1H)7.38(dd，J＝9.45，1.04Hz，1H)7.40(br.s.，1H)7.72(d，J＝2.11Hz，1H)8.38(s，1H)9.07(s，1H)

A49B6C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.72-2.78(m，2H)3.06-3.12(m，2H)6.26(s，1H)6.56(br.s.，1H)7.08(m，6H)7.23(m，10H)7.33(m，1H)7.41(br.s.，1H)8.33(s，1H)8.59(d，J＝2.44Hz，1H)
		A116B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.04(s，3H)2.22(s，3H)2.45(br.s.，4H)2.78-2.85(m，2H)2.95-3.03(m，2H)3.05-3.12(m，4H)4.19(s，3H)6.70(dd，J＝8.72，2.74Hz，1H)7.22(d，J＝9.02Hz，1H)7.25(br.s.，1H)7.34(d，J＝2.80Hz，1H)7.45(br.s.，1H)8.35(s，1H)8.46(s，1H)9.50(s，1H)
A119B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79-2.84(m，2H)2.87(s，3H)2.95-3.02(m，2H)4.17(s，3H)4.47(s，2H)6.82(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.25-7.29(m，1H)7.32(d，J＝3.05Hz，1H)7.23-7.40(m，5H)8.36(s，1H)9.00(s，1H)
		A120B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79-2.84(m，2H)2.87(s，3H)2.95-3.02(m，2H)4.17(s，3H)4.47(s，2H)6.82(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.25-7.29(m，1H)7.32(d，J＝3.05Hz，1H)7.23-7.40(m，5H)8.36(s，1H)9.00(s，1H)

下表列出了本发明的某些代表性化合物的分析HPLC/质谱数据。

表XIV

代码	M+H	RT	方法
				A3B1C1Z	389.13	2.2	4
A4B1C1Z	335.16	2.0	4
				A5B1C1Z	339.14	2.0	4
A6B1C1Z	351.16	1.5	4
				A9B1C1Z	425.17	2.7	4
A19B1C1Z	364.15	1.5	4
				A18B1C1Z	419.23	2.1	4
A10B1C1Z	397.18	2.5	4
				A11B1C1Z	346.14	1.7	4
A13B1C1Z	400.12	1.5	4
				A14B1C1Z	446.27	3.8	4
A15B1C1Z	440.18	2.3	4
				A16B1C1Z	406.20	2.1	4
A17B1C1Z	386.17	2.3	4
				A22B1C1Z	411.19	2.6	4
A26B1C1Z	436.19	1.38	3
				A20B1C1Z	429.15	1.65	3
A24B1C1Z	345.14	1.8	4
				A27B1C1Z	350.17	1.8	4
A28B1C1Z	363.19	2.4	4
				A29B1C1Z	367.13	2.2	4
A45B1C1Z	405.13	2.4	4
				A33B1C1Z	379.15	2.4	4
A32B1C1Z	413.17	2.7	4
				A30B1C1Z	412.19	2.5	4
A31B1C1Z	357.13	1.8	4
				A105B1C1Z	351.37	2.4	4
A106B1C1Z	353.36	2.3	4

实施例17

8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-(2-羟基乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A45B5C1Z)

将0.085g(0.15mmol)的8-(2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-[2-(四氢-吡喃-2-基氧基)-乙基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺溶于10mL的乙醇，加入28mg的对甲苯磺酸(0.15mmol)。该溶液在室温下搅拌过夜，真空除去溶剂。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：乙酸乙酯/己烷80/20)精制残留物，得到59mg(90％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80(m，2H)2.98(m，2H)3.67(m，2H)4.66(m，2H)7.22(m，1H)7.24(bs，1H)7.39(m，2H)7.43(bs，1H)7.87(m，1H)8.36(s，1H)9.0(s，1H)。

根据上述方法操作，制备下列化合物：

1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B5C1Z)

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.24(s，3H)2.46(br.s.，4H)2.80(t，J＝7.62Hz，2H)2.98(t，J＝7.62Hz，2H)3.15(br.s.，4H)3.64(q，J＝5.49Hz，2H)4.59(t，J＝5.79Hz，1H)4.63(t，J＝5.37Hz，2H)6.79(dd，J＝8.96，2.99Hz，1H)7.19-7.24(m，1H)7.24(br.s.，1H)7.25(d，J＝2.93Hz，1H)7.43(s，1H)8.34(s，1H)8.85(s，1H)。

实施例18

8-[5-(4-乙基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A94B1C1Z)

将三(二亚苄基丙酮)二钯，Pd₂(dba)₃(9.1mg，0.01mmol)，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯(7.8mg，0.02mmo l)，8-[2-三氟甲氧基-5-溴-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(200mg，0.41mmol)的THF(4.5mL)溶液填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。加入LiN(TMS)₂溶液(1M，在THF中，2.7mL)和N-乙基哌嗪(0.125mL，0.98mmol)，将反应混合物回流3小时。然后将反应混合物冷却至室温并浓缩。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到46mg(52％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.02-1.07(m，3H)2.32-2.64(m，6H)2.77-2.83(m，2H)2.97(t，J＝7.80Hz，2H)3.14(bs，4H)4.16(s，3H)6.76(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.17-7.22(m，1H)7.24(bs，1H)7.31(d，J＝2.93Hz，1H)7.43(br.s，1H)8.35(s，1H)8.88(s，1H)。

根据相同方法操作，制备下列化合物：

表XV

代码	NMR数据
		A95B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.87(d，J＝12.68Hz，2H)2.02(t，J＝10.79Hz，2H)2.17(s，3H)2.73(d，J＝10.97Hz，2H)2.80(t，J＝7.68Hz，2H)2.97(t，J＝7.62Hz，2H)4.18(s，3H)5.66(d，J＝8.05Hz，1H)6.36(dd，J＝8.90，2.80Hz，1H)7.00(d，J＝2.68Hz，1H)7.04(dd，J＝8.90，1.22Hz，1H)7.23(bs，1H)7.44(s，1H)8.33(s，1H)8.71(s，1H)
A96B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.42(s，9H)2.80(t，J＝7.74Hz，2H)2.97(t，J＝7.68Hz，2H)3.07-3.14(m，2H)3.41-3.47(m，2H)4.16(s，3H)6.77(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.22(dq，J＝9.02，1.34Hz，1H)7.24(bs，1H)7.33(none，1H)7.42(bs，1H)8.35(s，1H)8.35(none，1H)8.90(s，1H)
		A99B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.65(m，2H)1.90(bs，4H)2.08(m，2H)2.74(m，2H)2.80(m，2H)2.98(m，2H)3.05-3.34(m，5H)3.78(d，J＝13.90Hz，2H)4.18(s，3H)6.80(dd，J＝9.21，2.99Hz，1H)7.22(dd，J＝9.02，1.34Hz，1H)7.27(s，1H)7.36(d，J＝2.93Hz，1H)7.40(s，1H)8.36(s，1H)8.91(s，1H)

A100B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.67(t，J＝6.89Hz，2H)2.12(s，3H)2.29(m，4H)2.33(m，2H)2.80(t，J＝7.62Hz，2H)2.97(t，J＝7.80Hz，2H)3.02(d，J＝5.73Hz，2H)4.19(s，3H)5.86(t，J＝5.61Hz，1H)6.34(dd，J＝8.90，2.80Hz，1H)6.98(d，J＝2.80Hz，1H)7.06(dd，J＝8.84，1.28Hz，1H)7.24(s，1H)7.43(s，1H)8.35(s，1H)8.71(s，1H)
		A101B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.67(m，2H)2.37(m，8H)2.59(bs，2H)2.81(t，J＝7.74Hz，2H)2.98(t，J＝7.50Hz，2H)3.15(m，4H)4.17(s，3H)6.76(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.21(dd，J＝9.08，1.28Hz，1H)7.25(bs，1H)7.32(d，J＝2.80Hz，1H)7.43(s，1H)8.36(s，1H)8.89(s，1H)
A107B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.60(m，4H)1.93(m，4H)2.37(m，6H)2.80(m，2H)2.95(m，2H)3.04(m，2H)3.76(bs，1H)4.17(s，3H)6.35(d，J＝8.41Hz，1H)6.98(d，J＝2.80Hz，1H)7.15(dd，J＝9.15，1.10Hz，1H)7.24(bs，1H)7.43(bs，1H)8.33(s，1H)8.81(s，1H)
		A108B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 0.90(t，J＝7.07Hz，6H)2.45(m，4H)2.79(m，2H)2.91(s，3H)2.96(m，2H)3.37(m，2H)4.16(s，3H)6.48(dd，J＝9.15，3.05Hz，1H)7.02(d，J＝3.05Hz，1H)7.14(m，1H)7.23(br.s.，1H)7.43(s，1H)8.32(s，1H)8.79(s，1H)
A109B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.47(m，2H)1.65(m，2H)1.92(m，2H)2.25(m，6H)2.81(m，2H)2.98(m，2H)3.02(m，2H)4.19(s，3H)5.81(m，1H)6.35(dd，J＝8.90，2.80Hz，1H)7.00(d，J＝2.80Hz，1H)7.08(dd，J＝8.84，1.28Hz，1H)7.25(bs，1H)7.44(bs，1H)8.35(s，1H)8.71(s，1H)
		A110B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.04(s，6H)1.08(s，6H)1.22(m，3H)1.81(d，J＝11.34Hz，1H)2.19(s，3H)2.81(t，J＝7.74Hz，2H)2.98(t，J＝7.56Hz，2H)3.47(m，1H)4.19(s，3H)5.59(d，J＝7.44Hz，1H)6.37(dd，J＝8.90，2.44Hz，1H)7.04-7.09(m，2H)7.25(bs，1H)7.44(bs，1H)8.34(s，1H)8.72(s，1H)
A111B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.03(m，2H)2.79(m，2H)2.96(m，2H)3.41(m，2H)3.60(m，2H)4.17(s，3H)6.55(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.03(d，J＝2.56Hz，1H)7.16(d，J＝8.05Hz，1H)7.24(bs，1H)7.41(s，1H)8.32(s，1H)8.84(s，1H)
		A112B1C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.65(m，1H)2.05(m，1H)2.79(m，2H)2.98(m，2H)3.86(m，1H)4.19(s，3H)5.95(d，J＝6.22Hz，1H)6.37(dd，J＝8.90，2.80Hz，1H)7.03(d，J＝2.80

	Hz，1H)7.11(m，1H)7.26(bs，1H)7.44(bs，1H)8.35(s，1H)8.77(s，1H)
		A51B11C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.42-2.47(m，4H)2.78(t，J＝7.80Hz，2H)2.97(t，J＝7.68Hz，2H)3.10-3.16(m，4H)3.67(s，3H)5.73(s，2H)6.69(d，J＝8.54Hz，2H)6.76(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)6.98(d，J＝8.54Hz，2H)7.20(dd，J＝9.08，1.28Hz，1H)7.25(d，J＝2.93Hz，1H)7.28(s，1H)7.47(s，1H)8.33(s，1H)9.01(s，1H)

实施例19

8-(5-哌嗪-1-基-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A97B1C1Z)

向8-[5-(4-叔丁氧基羰基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(94mg，0.16mmol)的二噁烷(3ml)溶液中加入4M HCl的二噁烷(0.89ml，3.42mmol)溶液。该混合液在室温下搅拌3小时。减压除去溶剂，用Et₂O稀释粗产物。以一定收率得到盐酸盐形式的最终化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80(t，J＝7.68Hz，2H)2.97(t，J＝7.44Hz，2H)3.19-3.43(m，8H)4.17(s，3H)6.83(dd，J＝9.02，3.05Hz，1H)7.25-7.29(m，2H)7.38(d，J＝3.05Hz，1H)7.39(bs，1H)8.35(s，1H)8.97(bs，2H)9.02(s，1H)。

实施例20

8-(2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A102B1C1Z)

向8-(2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(50mg，0.1mmol)的(1∶1)DCM/丙酮(10ml)混合物溶液中加入0.1M 3，3-二甲基-双环氧乙烷(2ml，0.2mmol)。该混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂，通过快速色谱法(在甲醇中的DCM/MeOH/7N NH₃，9∶1∶0.2)精制粗产物，得到呈白色固状的最终化合物(16mg，30％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.81(t，J＝7.68Hz，2H)2.98(t，J＝7.68Hz，2H)3.03(d，J＝7.68Hz，2H)3.14(s，3H)3.44-3.53(m，6H)4.18(s，3H)6.83(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.23(d，J＝1.34Hz，1H)7.25(bs，1H)7.39(d，J＝3.05Hz，1H)7.43(s，1H)8.37(s，1H)8.94(s，1H)。

实施例21

8-(2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A103B1C1Z)

向8-(2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(50mg，0.1mmol)的DCM/丙酮(10ml)(1∶1)混合物溶液中加入0.1M 3，3-二甲基-双环氧乙烷(5ml，0.5mmol)。该混合物在室温下搅拌1小时。减压除去溶剂通过快速色谱法(在甲醇中的DCM/MeOH/7N NH₃ 9∶1∶0.2)精制粗产物，得到呈白色固状的最终化合物(21mg，40％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 4.24(s，3H)7.54(dd，J＝2.07，1.46Hz，1H)7.84(dd，J＝3.78，3.41Hz，1H)8.44(s，1H)8.94(d，J＝2.56Hz，1H)9.29(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

1-(2-羟基-乙基)-8-(2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-1，4-二氧基-哌嗪-1-基)-苯基氨基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A103B5C1Z)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.82(t，J＝7.62Hz，2H)2.97(t，J＝7.56Hz，2H)3.08(t，J＝9.57Hz，4H)3.23(s，3H)3.68(q，J＝6.38Hz，2H)4.25(td，J＝11.67，2.01Hz，2H)4.52-4.76(m，4H)6.53(t，J＝5.30Hz，1H)7.25(br.s.，1H)7.42(br.s.，1H)7.56(dq，J＝9.08，1.40Hz，1H)7.78(dd，J＝9.14，2.80Hz，1H)8.44(s，1H)8.77(d，J＝2.80Hz，1H)9.26(s，1H)。

实施例22

8-(5-氨基-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A46B1C1Z)

向8-(5-硝基-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(630mg，1.4mmol)的甲醇(6mL)混悬液中加入氯化铵(240mg，4.3mmol)的水(25mL)溶液和铁(397mg，7.4mmol)。该混合物在回流下加热3小时，直至HPLC证明已无起始原料。除去溶剂，用三氟乙醇稀释粗产物。除去铁，浓缩滤液，以一定收率得到成浅褐色固状的最终化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80(t，J 7.74Hz，2H)2.97(t，J＝7.56Hz，2H)4.20(s，3H)5.31(bs，2H)6.34(dd，J＝8.78和2.68Hz，1H)7.00(dq，J＝8.79，1.37和1.33Hz，1H)7.07(d，J＝2.70Hz，1H)7.23(bs，1H)7.44(bs，1H)8.35(s，1H)8.65(s，1H)。

实施例23

8-{5-[(吡咯烷-2-羰基)-氨基]-2-三氟甲氧基-苯基氨基}-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A50B1C1Z)

向8-(5-氨基-2-三氟甲氧基-苯基氨基)-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(146mg，0.4mmol)的无水二甲基甲酰胺(5mL)混悬液中加入TBTU(190g，0.6mmol)、HOBT(81mg，0.6mmol)和DIPEA(0.104ml，0.6mmol)。该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入BOC-L-脯氨酸(129mg，0.6mmol)，将该反应再搅拌3小时。用水稀释反应混合物并收集沉淀，用DCM(10mL)稀释并用TFA(1mL)处理。蒸发溶剂，得到三氟乙酸盐形式的标题化合物(113mg，44％收率)。

代码	M+H	RT	方法
				A50B1C1Z	517.19	3.7	2
A82B1C1Z	545.21	3.4	2

实施例24

步骤1.用8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-羰基氟化物酰化固体载体上的胺

在该情况下，“树脂”是Rink Amide树脂，4-(2′，4′-二甲氧基苯基-fmoc-氨基甲基)苯氧基(共聚苯乙烯-1％DVB)：

将8.8g(4.8mmol)的上述树脂填充到100mL的Argonaut Quest205反应管中。除去Fmoc保护基是通过用60mL的20％哌啶的DMF溶液处理5分钟，然后在室温下进行第二次处理30分钟来实现的。用DMF(3x50mL，5分钟)、甲醇(3x50mL，5分钟)，最后用二氯甲烷(3x50mL，5分钟)洗涤该树脂。

向8.8g(4.8mmol)的上述脱保护的树脂中加入下列预活化的羧酸氟化物试剂。在50mL的1，4-二噁烷中，溶解2.78g(7.81mmol，1.6倍当量)的8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸酯，2.41g(9.12mmol，1.9倍当量)的四甲基氟甲脒六氟磷酸盐和1.59mL(9.12mmol，1.9倍当量)的N，N-二异丙基乙胺。向该溶液中滴加N，N-二甲基乙酰胺，直至用声处理溶解了所有试剂。将该反应系统在室温下搅拌30分钟。向该溶液中再加入1.59mL(9.12mmol，1.9倍当量)的N，N-二异丙基乙胺，将所有内容物都填充到Quest210合成器的树脂上。在60℃下将该树脂混合6小时，然后在室温下再混合12小时。从酰化混合物中排出树脂，用1，4-二噁烷(3x50mL，5分钟)洗涤，用前述方法将酰化过程再重复一次。在完成第二个酰化循环后，从酰化混合物中再次排出树脂并用1，4-二噁烷(3x50mL，5分钟)，DMF(3x50mL，5分钟)，最后用DCM(3x50mL，5分钟)洗涤。树脂在真空中由DCM干燥。用茚三酮测定法定性测定树脂，以确定酰化反应是否完全。

4-(2′，4′-二甲氧基苯基-fmoc-氨基甲基)苯氧基(共聚苯乙烯-1％DVB)

步骤2.固体载体上的8-碘-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺的催化氨基化

使用4mL Argonaut Trident合成盒，将上述步骤1的200mg(0.11mmol)的树脂填充到不同的瓶中。用氩气冲洗各个反应瓶，加入精细分离的碳酸钾(0.15g，1.1mmol)，乙酸钯[Pd(OAc)₂](2.5mg，0.011mmol，10％)，(±)-BINAP(6.8mg，0.011mmol，10％)和相应的胺(0.22mmol，2倍当量)的脱气(氩气)二甲基乙酰胺(2mL)溶液。在60℃下将所得混合物在Argonaut Trident自动实验室合成(ALS)站上搅拌10小时。Trident ALS站的程序设计为在60℃下连续机械搅拌，同时掺入氮气“喷雾”以使几乎不溶的碳酸钾再混悬。在整个16小时的加热周期中，每小时掺入一次氮气喷雾，持续30秒。

从合成混合物中排出树脂，并使用Argonaut Trident外部搅拌热单元(EATU)合成站，用DMA(3x2mL，5分钟)洗涤。用上述方法将上个催化氨基化循环再重复一次。

当第二个氨基化循环完成时，从合成混合物中排出树脂，并使用Argonaut Trident EATU合成站，用DMA(1x2mL，5分钟)，水(1x2mL，5分钟)，DMF/水(1∶1)(3x2mL，5分钟)，DMF(3x2mL，5分钟)，甲醇(3x2mL，5分钟)和DCM(3x2mL，5分钟)洗涤。

步骤3.从固体载体中分离不同取代的8-氨基-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺

向每个Argonaut Trident反应瓶中加入2mL的下列树脂分离混合物：二氯甲烷(100mL)，三氟乙酸(98mL)和水(2mL)。在室温下，将混悬于分离混合物中的树脂在Argonaut Trident EATU合成站上振荡2小时。将包含粗产物的溶液捕获到不同的瓶中。处理树脂以进行第二个上述分离混合物循环，将用二氯甲烷(分别为2mL)洗涤的另外三个树脂也捕获到相同的相应的瓶中。

通过类似操作，合成下列化合物：

表XVI

代码	M+H	RT	方法
				A52B1C1Z	403.3	1.444	1
A53B1C1Z	390.2	0.951	1
				A66B1C1Z	464.3	0.943	1
A65B1C1Z	447.3	1.141	1
				A54B1C1Z	387.2	0.739	1
A55B1C1Z	377.2	1.477	1
				A56B1C1Z	427.3	1.6	1
A57B1C1Z	463.7	1.845	1
				A58B1C1Z	446.7	1.592	1
A59B1C1Z	461.3	1.361	1
				A60B1C1Z	361.3	1.443	1
A61B1C1Z	437.1	1.47	1
				A62B1C1Z	455.3	1.413	1
A63B1C1Z	431.7	1.617	1
				A64B1C1Z	400.3	1.525	1
A67B1C1Z	415.3	1.508	1
				A79B1C1Z	404.3	1.369	1
A68B1C1Z	387.2	1.273	1
				A69B1C1Z	439.3	1.311	1
A70B1C1Z	411.3	1.634	1
				A71B1C1Z	431.7	1.615	1
A72B1C1Z	384.1	1.279	1
				A73B1C1Z	380.2	1.282	1
A74B1C1Z	393.2	1.255	1
				A75B1C1Z	393.2	1.228	1
A76B1C1Z	363.2	0.919	1
				A77B1C1Z	378.2	0.832	1
A78B1C1Z	421.2	1.577	1

实施例25

步骤1.固体载体上的甲基4-[(3-氨基甲酰-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-8-基)氨基]-3-甲基苯甲酸酯的甲基酯的直接酰化

将Weinreb酰胺酰化化学(Tetrahedron Lett.1977，48，4171)的改进方案用于由固定于固体载体上的甲基酯化合物直接产生所需的羧酰胺。对于Biotage/Personal Chemistry，在Smith Creator 0.5-2mL微波反应瓶中填充200mg(1.1mmol)的上述步骤2(催化氨基化)中制备的干树脂。用氩气清洗该瓶，并放在一边。为进行氩气清洗，在包含2mL干燥DCM的1个瓶中装入0.045g(0.44mmol，4倍当量)的适当的胺，然后装入225microL的三甲基铝溶液(2M，在甲苯中)。该瓶在涡旋混合器上搅拌30秒，并在室温下静置15分钟，然后将所有内容物填充到包含干燥树脂的微波反应瓶中。将该微波瓶放置在Smith Creator微波系统中，该系统的程序设计为在110℃下照射该瓶10分钟，并同时冷却。在加热和冷却循环完成后，用甲醇/水(1∶1)使反应停止，并用DMF(3x2mL，5分钟)、甲醇(3x2mL，5分钟)和DCM(3x2mL，5分钟)洗涤。

步骤2.从固体载体中分离不同取代的8-[(5-氨基甲酰-2-甲基苯基)氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺化合物

向每个反应瓶中加入2mL的下列树脂分离混合物：二氯甲烷(100mL)，三氟乙酸(98mL)和水(2mL)。在室温下，将混悬于分离混合物中的树脂振荡2小时。将包含粗产物的溶液捕获到不同的瓶中。处理树脂以进行第二个上述分离混合物循环，将用二氯甲烷(分别为2mL)洗涤的另外三个树脂也捕获到相同的相应的瓶中。

表XVII

代码	M+H	RT	方法
				A86B1C1Z	378.2	0.832	1
A87B1C1Z	378.1	0.705	1
				A83B1C1Z	394.1	0.764	1
A93B1C1Z	394.4	0.792	1

实施例26

步骤1.固体载体上的甲基4-[(3-氨基甲酰-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-8-基)氨基]-3-甲基苯甲酸酯的甲基酯的直接乙酰化

向4mL Argonaut Trident合成盒中装入上述步骤2(催化氨基化)中制备的200mg(0.11mmol)的干燥树脂。用氩气冲洗这些瓶，并加入1mL的干燥THF以使树脂预溶胀。向混悬的树脂中负载1.1mL(1.1mmol，10倍当量)的二(三甲基甲硅烷基)氨基锂(1.0M，在THF中)，然后负载0.058g的氯化铵(1.1mol，10倍当量)。将该盒在室温下搅拌60分钟，然后排出盒中的内容物，并用DMF(3x2mL，5分钟)，甲醇(3x2mL，5分钟)和DCM(3x2mL，5分钟)洗涤。

表XVIII

代码	M+H	RT	方法
				A77B1C1Z	378.2	0.832	1
A88B1C1Z	378.1	0.705	1

实施例27

步骤1.固体载体上的8-{[5-(羟基甲基)-2-甲基苯基]氨基}-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺的甲磺酰化

在将羟甲基转变为具有不同取代基的氨基甲基的情况中，使用包含上述步骤2(催化氨基化)中制备的200mg(0.11mmol)树脂的4mLArgonaut Trident合成盒。向各反应瓶中加入甲磺酰氯(0.085mL，1.1mmol，10倍当量)，和三乙胺(0.11mL，1.1mmol，10倍当量)的二氯甲烷(2mL)溶液。在环境温度下将所得混合物在ArgonautTrident自动实验室合成(ALS)站上搅拌2小时。在反应循环完成后，从合成混合物中排出树脂，并使用Argonaut Trident EATU合成站，用DMF(3x2mL，5分钟)，甲醇(3x2mL，5分钟)，DCM(3x2mL，5分钟)和TMF(3x2mL，5分钟)洗涤。

步骤2.固体载体上的8-{[5-(羟基甲基)-2-甲基苯基]氨基}-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺的甲磺酸酯的亲核置换

向上述步骤1中制备的甲磺酸酯化合物中加入适当的胺(0.11mL，1.1mmol，10倍当量)的2mL的THF溶液。在60℃下所得混合物在Argonaut Trident自动实验室合成(ALS)站上搅拌5小时。在反应循环完成后，从合成混合物中排出树脂，并使用Argonaut Trident EATU合成站，用DMF(3x2mL，5分钟)，甲醇(3x2mL，5分钟)，和DCM(3x2mL，5分钟)洗涤。

步骤3.从固体载体中分离不同取代的8-{[5-(氨基甲基)-2-甲基苯基]氨基}-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺化合物

向每个Argonaut Triden t反应瓶中加入2mL的下列树脂分离混合物：二氯甲烷(100mL)，三氟乙酸(98mL)和水(2mL)。在室温下，将混悬于分离混合物中的树脂在Argonaut Trident EATU合成站上振荡2小时。将包含粗产物的溶液捕获到不同的瓶中。处理树脂以进行第二个上述分离混合物循环，将用二氯甲烷(分别为2mL)洗涤的另外三个树脂也捕获到相同的相应的瓶中。

下面定义的是某些代表性化合物的分析HPLC/质谱数据：

表XIX

代码	M+H	RT	方法
				A91B1C1Z	447.5	3.26	2
A92B1C1Z	420.5	3.30	2

实施例28

4-氨基-N-(1-甲基-哌啶-4-基)-3-三氟甲氧基-苯甲酰胺

向4-氨基-3-(三氟甲氧基)苯甲酸(900mg，4mmol)的二氯甲烷(60ml)混悬液中加入TBTU(1.9g，6mmol)和DIPEA(1.04ml，6mmol)。该混合物在室温下搅拌30分钟。然后加入1-甲基哌啶-4-胺(513mg，4.5mmol)，将该反应再搅拌3小时。用水洗涤该溶液，用无水Na₂SO₄干燥有机相。通过快速色谱法(DCM/MeOH/NH₃aq，9∶1∶0.5)精制粗产物，得到橙色固状的标题化合物(900mg，71％)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.55(dq，J＝3.90，3.54Hz，2H)1.73(d，J＝14.51Hz，2H)1.92-2.03(m，2H)2.19(bs，3H)2.79(d，J＝10.73Hz，2H)3.69(m，1H)5.89(bs，1H)6.78(d，J＝8.54Hz，1H)7.61(dd，J＝1.95Hz，1H)7.64(m，1H)7.93(d，J＝7.56Hz，1H)。

实施例29

5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺三盐酸盐

步骤1.N-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺

在0℃下，向5-溴-2-三氟甲氧基-苯胺(5.12g，20mmol)的EtOH(50mL)溶液中加入乙酸酐(4.7mL，50mmol)的EtOH(10mL)溶液。该混合物在室温下搅拌过夜。蒸发溶剂至干燥，用乙醚研磨该固体并过滤，得到5.64g(95％收率)的N-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm：2.11(s，3H)7.39(m，2H)8.21(s，1H)9.87(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

N-(4-溴-2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.09(s，3H)7.57(dd，J＝8.8和2.2Hz，1H)7.63(m，1H)7.90(d，J＝8.8Hz，1H)9.80(s，1H)；

N-(4-溴-2-甲氧基-苯基)-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.07(s，3H)3.84(s，3H)7.07(dd，J＝8.5和2.2Hz，1H)7.20(d，J＝2.2Hz，1H)7.89(d，J＝8.5Hz，1H)9.17(s，1H)；

N-(2-乙酰基-4-溴-苯基)-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.10(s，3H)2.60(s，3H)7.75(dd，J＝8.9和2.4Hz，1H)8.04(d，J＝2.4Hz，1H)8.11(d，J＝8.9Hz，1H)10.94(s，1H)。

步骤2.N-[2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺

将Pd₂(dba)₃(155mg，0.17mmol)，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯(133mg，0.34mmol)，N-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基)-乙酰胺(5.05g，17mmol))填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。加入LiN(TMS)₂溶液(1M，在THF中，37.6mL)和N-甲基哌嗪(2.3mL，20.5mmol)，将反应混合物回流3小时。然后将反应混合物冷却至室温并浓缩。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到4.78g(88％收率)的N-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-乙酰胺。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.06(s，3H)2.22(s，3H)2.45(m，4H)3.11(m，4H)6.75(dd，J＝9.15和3.05Hz，1H)7.17(dd，J＝9.15和1.46Hz，1H)7.41(bs，1H)9.54(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

N-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.01(s，3H)2.31(s，3H)2.54(m，4H)3.18(m，4H)6.85(bs，1H)6.93(dd，J＝8.90和2.68Hz，1H)7.51(d，J＝8.90Hz，1H)9.43(s，1H)；

N-[2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.01(s，3H)2.26(s，3H)2.52(m，4H)3.12(m，4H)3.80(s，3H)6.42(dd，J＝8.66和2.56Hz，1H)6.58(d，J＝2.56Hz，1H)7.59(d，J＝8.66，1H)8.89(s，1H)。

步骤3.5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺三盐酸盐

用HCl 37％(35mL)处理N-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-乙酰胺(4.75g，15mmol)的EtOH(100mL)溶液。在回流下1小时后，浓缩该混合物并用己烷研磨，以一定收率得到5.74g的5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺三盐酸盐。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.82(d，J＝4.76Hz，3H)3.1(m，4H)3.48(m，4H)6.24(dd，J＝8.90和2.93Hz，1H)6.40(d，J＝2.93Hz，1H)6.98(dd，J＝8.90和1.34Hz，1H)10.31(bs，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺三盐酸盐

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.83(d，J＝4.02Hz，3H)3.01(m，4H)3.47(m，4H)6.90(m，2H)7.01(m，1H)10.44(bs，1H)；

2-甲氧基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯胺二盐酸盐

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.83(bs，3H)3.13(m，4H)3.47(m，4H)3.91(s，3H)6.62(dd，J＝8.78和2.56Hz，1H)6.80(d，J＝2.56Hz，1H)7.27(d，J＝8.78Hz，1H)9.77(bs，3H)10.72(bs，1H)；

1-[2-氨基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮盐酸盐

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.53(s，3H)2.82(bs，3H)2.98(m，4H)3.61(m，4H)6.84(d，J＝8.54Hz，1H)7.15(dd，J＝8.54和2.56Hz，1H)7.27(d，J＝2.56Hz，1H)10.40(bs，1H)。

实施例30

1-[2-氨基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮

步骤1.1-[2-羟基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮

在130℃下用N-甲基哌嗪(5mL)处理1-(4-氟-2-羟基-苯基)-乙酮(4.5g，29.22mmol)3小时，以一定收率得到1-[2-羟基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.20(s，3H)2.39(m，4H)2.47(s，3H)3.35(m，4H)6.27(d，J＝2.6Hz，1H)6.52(dd，J＝9.15和2.6Hz，1H)7.66(d，J＝9.15Hz，1H)12.73(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-硝基-苄腈

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.43(m，4H)3.55(m，4H)7.28(d，J＝9.63和2.93Hz，1H)7.56(d，J＝2.93Hz，1H)8.18(d，J＝9.63Hz，1H)。

步骤2.1-[2-氨基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮

向1-[2-羟基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮(5.22g，22.2mmo l)的DMA(50mL)溶液中加入NaOH(2.67g，66.6mmol)。该混合物在室温下搅拌1小时，然后加入11.1g(66.7mmol)的2-溴-2-甲基丙酰胺，该混合物在室温下搅拌过夜。加入8.01g(200mmol)的NaOH并将所得混合物在100℃下搅拌2小时，然后加入50mL的水，将该混合物在100℃下搅拌1小时。在冷却至室温后，浓缩该混合物，然后用DCM稀释并用水洗涤，用硫酸钠干燥并浓缩。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 95/5)精制粗固体，得到1.51g的标题化合物(30％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 2.22(s，3H)2.37(m，4H)2.42(s，3H)3.23(m，4H)6.09(d，J＝2.56Hz，1H)6.23(dd，J＝9.15和2.56Hz，1H)7.08(bs，2H)7.53(d，J＝9.15Hz，1H)。

实施例31

2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯胺

步骤1.1-(4-甲氧基-3-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪

将Pd(OAc)₂(85mg，0.38mmol)，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯(225mg，0.57mmol)，K₃PO₄(2.26g，10.68mmol)，4-溴-1-甲氧基-2-硝基-苯(1.77g，7.63mmol)的THF(50mL)溶液填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。加入N-甲基哌嗪(1.01mL，9.15mmol)，将反应混合物回流72小时。然后将反应混合物冷却至室温并浓缩。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到1.05g(55％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.45(m，4H)3.09(m，4H)3.83(s，3H)7.22(d，J＝9.27Hz，1H)7.26(dd，J＝9.27和2.93Hz，1H)7.35(d，J＝2.93Hz，1H)。

步骤2.2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯胺

在Pd/C 10％(150mg)存在下，在35psi下将1-(4-甲氧基-3-硝基-苯基)-4-甲基-哌嗪(1.0g，4.0mmol)的MeOH(100mL)溶液氢化2小时。在硅藻土垫上过滤该混合物，浓缩溶液，得到0.8g(90％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.21(s，3H)2.43(m，4H)2.94(m，4H)3.68(s，3H)4.55(s，2H)6.09(dd，J＝8.66和2.80Hz，1H)6.30(d，J＝2.80Hz，1H)6.64(d，J＝8.66Hz，1H)。

实施例32

1-[2-氨基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮

步骤1.1-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-硝基-苯基]-乙酮。

在圆柱状石英管中装入1-(2-氯-6-硝基-苯基)-乙酮(300mg，1.5mmol)和N-甲基-哌嗪(12ml，180mmol)。该反应在120℃下加热40小时。减压除去溶剂，并将残留物溶于DCM。用水洗涤该溶液2次，并用无水Na₂SO₄干燥有机相。通过快速色谱法(丙酮/MeOH 75∶25)精制粗产物，得到黄色固状的所需化合物(272mg，46％收率)。

步骤2.1-[2-氨基-6-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酮。

向1-[2-(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-硝基-苯基]-乙酮(270mg，1.02mmol)的环己烯∶THF∶H₂O∶EtOH(12ml)(1∶1∶1.5∶2.5)的混合物的溶液中加入Pd/C 10％(328mg)和2滴HCl 37％。将该混合物在70℃下加热3小时。从反应液中滤出Pd，从滤液中减压除去溶剂。通过快速色谱法(甲醇中的DCM/MeOH/7N NH₃ 9∶1∶1)精制粗产物，得到橘色油状的最终化合物(225mg，95％收率)。将其用HCl的二噁烷溶液处理，以得到更易处理/控制的固体。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-氨基-苄腈

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.25(bs，3H)2.95(bs，4H)5.49(s，2H)6.74(d，J＝9.02Hz，1H)6.85(d，J＝2.80Hz，1H)7.10(dd，J＝9.08，2.87Hz，1H)。

实施例33

2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯胺盐酸盐

步骤1.甲基-4-(4-甲基-3-硝基-苯基)-哌嗪。

在圆柱状石英管中装入4-氟-1-甲基-2-硝基-苯(20.0g，129mmol)和N-甲基-哌嗪(26g，258mmol)。该反应在200℃下加热48小时。减压除去溶剂，并将残留物溶于DCM。用水洗涤该溶液2次，并用无水Na₂SO₄干燥有机相。得到褐色油状的最终化合物(14.65g，48％收率)。

步骤2.2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯胺。

向1-甲基-4-(4-甲基-3-硝基-苯基)-哌嗪(9.0g，38.29mmol)的乙醇(100mL)和环己烯(7ml)溶液中加入Pd/C 10％(1.5g)。将该混合物在80℃下加热6小时。从反应液中滤出Pd，从滤液中减压除去溶剂。用DCM稀释粗产物并用HCl的二噁烷溶液处理；收集沉淀并用乙醚洗涤，以一定收率得到褐色油状的最终化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.10(s，3H)2.82(s，3H)2.91-3.01(m，2H)3.06-3.21(m，2H)3.49(d，J＝14.02Hz，2H)3.66(d，J＝12.44Hz，2H)6.57(bs，1H)6.63(bs，1H)7.01(d，J＝7.68Hz，1H)10.21(bs，1H)。

实施例34

N-(5-溴-2-三氟甲氧基-苯基)-胍

向5-溴-2-三氟甲氧基-苯胺(5.0g，19.5mmol)的EtOH(15mL)混悬液中加入溶于5mL的EtOH和1mL H₂O的氰胺(1.64g，39mmol)，搅拌下将稀释在10mL EtOH中的HCl 37％(3.25mL)滴入该混合物中。该混合物回流72小时。将该混合物冷却至到室温，浓缩，然后用水稀释；加入NaOH 1N至碱性pH，用乙酸乙酯萃取几次，用硫酸钠干燥并浓缩，得到5.2g的标题化合物(89％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 5.40(s，4H)6.98(dd，J＝8.72，2.38Hz，1H)7.05(d，J＝I.83Hz，1H)7.11(m，1H)。

实施例35

N-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-胍

步骤1.5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

将三(二亚苄基丙酮)二钯，Pd₂(dba)₃(1.1g，1.2mmol)，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯(0.94g，2.4mmol)，5-溴-2-三氟甲氧基-苯胺(30.7g，120mmol)的THF(50mL)溶液填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。加入LiN(TMS)₂溶液(1M，在THF中，288mL)和N-甲基哌嗪(26.7mL，194mmol)，将反应液回流1小时。然后将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤。浓缩有机相，残留物溶于DCM(200ml)并用水洗涤(1x100ml)。用无水Na₂SO₄干燥有机相，真空蒸发溶剂，在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/EtOH 90/10)精制粗固体，得到浅褐色粉末状的21.1g的5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺(64％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.42-2.47(m，4H)3.02-3.08(m，4H)5.10(s，2H)6.16(dd，J＝8.90，2.93Hz，1H)6.33(d，J＝2.93Hz，1H)6.90(dd，J＝8.90，1.46Hz，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

N-[2-氨基-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基]-乙酰胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.03(s，3H)2.23(s，3H)2.42-2.47(m，4H)3.02-3.08(m，4H)5.10(s，2H)6.70(dd，J＝8.72，2.74Hz，1H)7.22(d，J＝9.02Hz，1H)7.34(d，J＝2.80Hz，1H)；

5-((S)-2-苄氧基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.87(s，3H)4.46-4.50(m，1H)4.52-4.56(m，1H)6.21(dd，J＝9.02，2.93Hz，1H)6.37(d，J＝3.05Hz，1H)6.93-6.97(m，1H)7.22-7.38(m，5H)10.19(br.s.，1H)；

5-((R)-2-苄氧基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺。

步骤2.N-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-胍

向5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺(275mg，1mmol)的HCl 6N(1mL)溶液中加入氰胺(336mg，8.0mmol)，反应液在60℃下搅拌1小时。将该混合物冷却至室温，用水(3mL)稀释，用DCM(10mL)萃取。加入NaOH 2N至pH＞11。用Et₂O(3x10mL)萃取水相，用硫酸钠干燥并浓缩。残留物在乙醚中结晶，得到白色固状的标题化合物(240mg，76％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.21(s，3H)2.39-2.45(m，4H)3.05-3.11(m，4H)6.40(br.s.，1H)6.45(dd，J＝8.90，3.05Hz，1H)6.99(dd，J＝8.96，1.16Hz，1H)。

实施例36

1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(A51B5C2Z)

向2.66g(8.34mmol)的6-[(二甲基氨基)亚甲基]-7-氧代-1-(2-羟基-乙基)-4，5，6，7-四氢-1H-吲唑-3-甲酸乙酯的15mL DMF溶液中加入2.64g(8.34mmol)的N-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基]-胍。该混合物在110℃下搅拌4小时。在冷却后，将该混合物倒入水(100mL)中并搅拌30分钟。过滤沉淀，用水洗涤并干燥，得到2.86g的标题化合物(61％)。

¹H NMR(401MHz，DMSO-d₆)δppm 1.31(t，J＝7.07Hz，3H)2.23(s，3H)2.43-2.48(m，4H)2.83(t，J＝7.68Hz，2H)2.94-3.00(m，2H)3.12-3.18(m，4H)3.55-3.64(m，2H)4.29(q，J＝7.15Hz，2H)4.59(t，J＝5.67Hz，1H)4.65(t，J＝5.37Hz，2H)6.80(dd，J＝9.15，3.05Hz，1H)7.21(s，1H)7.21-7.24(m，1H)8.36(s，1H)8.90(s，1H)。

实施例37

1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A51B5C3Z)

将1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸乙酯(1.7g，3.03mmol)混悬于乙醇96％(50mL)中，在室温下用1.5M氢氧化钾的乙醇(8mL，12mmol)溶液处理过夜。过滤收集沉淀，得到白色固状的标题化合物(1.54g，89％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)βppm 2.22(s，3H)2.42-2.48(m，4H)2.72(t，J＝7.74Hz，2H)2.93(t，J＝7.62Hz，2H)3.12-3.17(m，4H)3.57-3.63(m，2H)4.53-4.59(m，3H)6.76(dd，J＝9.15，3.05Hz，1H)7.20(dd，J＝9.02，1.34Hz，1H)7.32(d，J＝2.93Hz，1H)8.26(s，1H)8.65(s，1H)。

实施例38

用N-乙基-N′，N′-二异丙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(1.03g，5.38mmol)和1H-1，2，3-苯并三唑-1-酸铵(0.819g，5.38mmol)处理1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(1.54g，2.69mmol)的无水DMA(40mL)混悬液。反应液在室温下搅拌过夜。用水稀释该反应液，通过过滤收集所得到的沉淀，得到标题化合物(1.32g，88％收率)。

实施例39

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B8C1Z)

将三(二亚苄基丙酮)二钯，Pd₂(dba)₃(2.3g，2.5mmol)，2-二环己基膦-2′-(N，N-二甲基氨基)-联苯(950mg，2.4mmol)，8-[5-溴-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(14.8g，31.54mmol)的THF(160mL)溶液填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。加入LiN(TMS)₂溶液(1M，在THF中，630mL)和N-甲基哌嗪(69mL，50.64mmol)，将反应混合物回流1小时。然后将反应混合物冷却至室温并通过硅藻土垫过滤。浓缩有机相。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/MeOH 95/5)精制粗固体，得到9.2g(60％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.45-2.48(m，4H)2.84(t，J＝7.62Hz，2H)3.00(t，J＝7.50Hz，2H)3.16-3.20(m，4H)6.71(br.s.，1H)7.19(dd，J＝9.02，1.34Hz，1H)7.32(br.s.，1H)7.49(br.s.，1H)8.34(br.s.，1H)8.36(s，1H)。

实施例40

1-(2-氯-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B9C1Z)

将8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(488mg，1.0mmol)和CS₂CO₃(490mg，1.5mmol)的混悬液混悬于DMF(1mL)中并在室温下用1-溴-2-氯-乙烷(0.1mL，1.2mmol)处理。2小时后，将反应混合物倒入水中并过滤，用水洗涤并干燥，得到呈白色固状的标题化合物(529mg，96％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.42-2.48(m，4H)2.81(t，J＝7.68Hz，2H)2.99(t，J＝7.80Hz，2H)3.12-3.18(m，4H)3.84(t，J＝5.91Hz，2H)4.87(t，J＝5.91Hz，2H)6.81(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.19(d，J＝2.93Hz，1H)7.21-7.26(m，1H)7.29-7.33(m，1H)7.46(s，1H)8.36(s，1H)8.92(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

表XX

代码	NMR数据
		A51B14C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.65-1.74(m，2H)1.92(t，J＝6.95Hz，2H)1.99(s，6H)2.22(s，3H)2.42-2.46(m，4H)2.77-2.84(m，2H)2.94-3.01(m，2H)3.12-3.18(m，4H)4.54(t，J＝7.26Hz，2H)6.80(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.20-7.23(m，2H)7.24(br.s.，1H)7.40(s，1H)8.36(s，1H)8.85(s，1H)
A51B15C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.23(s，3H)2.43-2.47(m，4H)2.77-2.83(m，2H)2.95-3.01(m，2H)3.06(s，3H)3.13-3.17(m，4H)3.54(t，J＝5.43Hz，2H)4.72(t，J＝5.43Hz，2H)6.81(dd，J＝9.02，2.93Hz，1H)7.20(d，J＝3.29Hz，1H)7.23(d，J＝1.10Hz，1H)7.26(br.s.，1H)7.40(s，1H)8.35(s，1H)8.91(s，1H)
		A49B11C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.78-2.85(m，2H)2.96-3.03(m，2H)3.67(s，3H)5.80(s，2H)6.70-6.75(m，2H)6.99-7.06(m，2H)7.30(s，1H)7.36(s，2H)7.48(s，1H)8.14(s，1H)8.41(s，1H)9.33(s，1H)
A45B5C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79(m，2H)2.98(m，2H)3.64(m，1H)3.80(m，1H)4.74(m，1H)4.90(m，1H)7.22(m，1H)7.25(bs，1H)7.39(m，2H)7.42(bs，1H)7.87(m，1H)8.38(s，1H)9.03(s，1H)
		A51B5C1Z	¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.24(s，3H)2.46(br.s.，4H)2.80(t，J＝7.62Hz，2H)2.98(t，J＝7.62Hz，2H)3.15(br.s.，4H)3.64(q，J＝5.49Hz，2H)4.59(t，J＝5.79Hz，1H)4.63(t，J＝5.37Hz，2H)6.79(dd，J＝8.96，2.99Hz，1H)7.19-7.24(m，1H)7.24(br.s.，1H)7.25(d，J＝2.93Hz，1H)7.43(s，1H)8.34(s，1H)8.85(s，1H)

实施例41

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-乙烯基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B10C1Z)

将1-(2-氯-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(350mg，0.63mmol)和DBU(3.5mL)的混合物加热至80℃1小时。在冷却后，将反应混合物倒入水中并过滤。在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/MeOH95/5)精制粗固体，得到234mg(71％收率)的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.22(s，3H)2.39-2.47(m，4H)2.83(t，J＝7.80Hz，2H)3.01(t，J＝7.74Hz，2H)3.12-3.20(m，4H)4.90(d，J＝8.7Hz，1H)5.89(d，J＝15.4Hz，1H)6.81(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.18-7.32(m，2H)7.43(s，1H)7.66(s，1H)8.33(dd，J＝15.4，8.7Hz，1H)8.39(s，1H)9.05(s，1H)。

实施例42

1-(3-氨基-丙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐(A51B13C1Z)

将8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(100mg，0.2mmol)和Cs₂CO₃(97.5mg，0.3mmol)的混悬液混悬于DMF(0.5mL)中，在室温下用(3-溴-丙基)-氨基甲酸叔丁酯(71mg，0.3mmol)处理。2小时后，将反应混合物倒入水中并过滤，用水洗涤并干燥。将残留物混悬于二噁烷(1mL)中并用HCl 4N的二噁烷(0.1mL)溶液处理1小时。过滤沉淀并干燥，得到呈白色固状的标题化合物(52mg，45％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.89-2.01(m，2H)2.63-2.72(m，2H)2.79-2.86(m，2H)2.84(d，J＝4.63Hz，3H)2.96-3.04(m，2H)3.07-3.24(m，4H)3.38-3.42(m，2H)3.84(d，J＝11.83Hz，2H)4.71(t，J＝6.46Hz，2H)6.89(dd，J＝9.21，2.99Hz，1H)7.30(dd，J＝8.96，1.16Hz，1H)7.33-7.37(m，2H)7.46(br.s.，1H)7.92(br.s.，3H)8.38(s，1H)9.09(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

1-(3-氨基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺盐酸盐(A51B12C1Z)

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.80-2.84(m，2H)2.86(d，J＝4.76Hz，3H)2.97-3.03(m，2H)3.06-3.28(m，4H)3.81(d，J＝0.61Hz，2H)4.90-4.96(m，2H)6.87(dd，J＝9.08，2.99Hz，2H)7.28-7.33(m，2H)7.38(br.s.，2H)7.41(d，J＝2.68Hz，1H)7.75(br.s.，1H)8.19(br.s.，3H)8.38(s，1H)9.17(s，1H)。

实施例43

5-(1-甲基-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

步骤1.5-(1-甲基-1，2，3，6-四氢-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

将5-溴-2-三氟甲氧基-苯胺(0.43g，1.68mmol)，碳酸铯(1.65g，5.06mmol)，与干燥DMF(20mL)中的二氯甲烷(1∶1)(0.08g，0.1mmol)络合的二氯1，1′-二(二苯基膦)二茂铁钯(ii)填充到用氩气冲洗的圆底烧瓶中。将该烧瓶抽真空并用氩气装填。向该混悬液中加入1-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-[1，3，2]二氧杂环戊硼烷-2-基)-1，2，3，6-四氢-哌啶(0.45g，2.01mmol)的干燥DMF(10mL)溶液，将反应混合物在80℃下加热3小时。然后使反应混合物冷却至室温，用水(100mL)稀释并用DCM(2x50mL)萃取，用1N HCl溶液(50mL)萃取合并的有机相。加入碳酸氢钠使水层碱性化，并用EtOAc(2x50mL)萃取。用无水Na₂SO₄干燥合并的有机相，减压除去溶剂，在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/MeOH 90/10)精制粗固体，得到呈浅褐色固状的中间体(0.3g，65％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.29(s，3H)2.38-2.44(m，2H)2.58(t，J＝5.55Hz，2H)3.02(d，J＝2.32Hz，2H)5.29(s，2H)6.03(t，J＝3.48Hz，1H)6.64(dd，J＝8.54，2.19Hz，1H)6.86(d，J＝2.32Hz，1H)7.03(dd，J＝8.54，1.34Hz，1H)。

步骤2.5-(1-甲基-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

在40psi下将5-(1-甲基-1，2，3，6-四氢-哌啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯胺(0.3g，1.10mmol)，10％Pd/C催化剂(100mg)的EtOH(20mL)混悬液氢化6小时，进入Parr装置。在硅藻土垫上过滤该混合物，真空除去溶剂，在硅胶上通过快速色谱法(洗脱液：DCM/MeOH/NH₃95/05/005)精制粗残留物，得到呈浅褐色固状的标题化合物(0.17g，56％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.56(qd，J＝12.32，3.54Hz，2H)1.68(d，J＝11.80Hz，2H)1.93(t，J＝11.20Hz，2H)2.18(s，3H)2.30(tt，J＝12.00，3.66Hz，1H)2.84(d，J＝11.34Hz，2H)5.22(s，2H)6.43(dd，J＝8.41，2.07Hz，1H)6.67(d，J＝2.19Hz，1H)6.98(dq，J＝8.37，1.50Hz，1H)。

实施例44

5-((R)-2-苄氧基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯胺

步骤1.(R)-3-苄氧基甲基-1-甲基-哌嗪-2，5-二酮

向肌氨酸甲酯盐酸盐(2.8g，18.6mmol)的干燥DMF(43mL)溶液中加入DIPEA(3ml，16.9mmol)，该混合物在室温下搅拌20分钟，然后加入THF(160mL)，EDDQ盐酸盐(3.2g，16.9mmol)和BOC-D-丝氨酸(5.0g，16.9mmol)，将反应混合物在相同温度下搅拌2小时。减压除去溶剂，将残留物溶解于AcOEt。用水、1N HCl和NaHCO₃饱和溶液洗涤该溶液，并用无水Na₂SO₄干燥有机相。浓缩该溶液得到5g(75％收率)的无色油，将其在DCM(325mL)中稀释。加入TFA(325mL)并将该混合物在室温下搅拌2小时。减压除去溶剂并将残留物溶于MeOH(400mL)。加入TEA(21.5mL，149mmol)，将该溶液在N₂气氛下回流2小时。减压除去溶剂并将残留物溶于DCM。用水将该溶液洗涤2次，并用无水Na₂SO₄干燥有机相。减压除去溶剂并用Et₂O稀释粗产物，倾析，得到呈白色固状的最终化合物(1.93g，63％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.83(s，3H)3.56(dd，J＝9.63，2.80Hz，1H)3.77-3.83(m，2H)3.87-3.92(m，1H)3.95(q，J＝2.68Hz，1H)4.45-4.53(m，2H)7.25-7.31(m，3H)7.33-7.38(m，2H)8.23(br.s.，1H)。

通过相同方法操作，但使用BOC-L-丝氨酸，制备下列化合物：

(S)-3-苄氧基甲基-1-甲基-哌嗪-2，5-二酮。

步骤2.(S)-3-苄氧基甲基-1-甲基-哌嗪

在30分钟里向(R)-3-苄氧基甲基-1-甲基-哌嗪-2，5-二酮(1.93g，7.78mmol)的THF(30mL)溶液中滴加LiAlH₄ 1M的THF(15mL，15.5mmol)溶液，将该溶液在N₂气氛下回流3小时。将反应液冷却至0℃并用水(100mL)稀释。然后加入4mL的15％NaOH水溶液。在1小时后，加入100mL的水，将该反应液搅拌过夜。滤出白色沉淀并用DCM洗涤。减压除去溶剂并用Et₂O稀释残留物，倾析。通过快速色谱法(在甲醇中的DCM/MeOH/7N NH₃，90∶9∶1)精制粗产物，得到呈黄色油状的所需化合物(1.43g，83.5％收率)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 1.61(t，J＝10.12Hz，1H)1.85(td，J＝10.82，3.23Hz，1H)2.13(s，3H)2.57-2.67(m，4H)2.83-2.89(m，1H)3.29-3.34(m，2H)4.47(s，2H)7.23-7.40(m，5H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

(R)-3-苄氧基甲基-1-甲基-哌嗪。

实施例45

8-[5-((S)-2-羟基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A117B1C1Z)

在N₂气氛和-78℃下向8-[5-((S)-2-苄氧基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(53mg，0.08mmol)的DCM(1.7mL)溶液中滴加1M BCl₃的DCM(0.17mL)溶液。在滴加完成后，将该溶液在0℃下搅拌30分钟，并在室温下过夜。然后加入2mL的MeOH。减压除去溶剂，并用Et₂O稀释残留物，倾析，以一定收率得到呈褐色固状的所需化合物(46mg)。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79-2.84(m，2H)2.87(s，3H)2.95-3.02(m，2H)4.17(s，3H)6.82(dd，J＝9.15，2.93Hz，1H)7.25-7.29(m，1H)7.32(d，J＝3.05Hz，1H)8.36(s，1H)9.00(s，1H)。

通过相同方法操作，制备下列化合物：

8-[5-((R)-2-羟基甲基-4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A115B1C1Z)。

实施例46

1-(2-羟基-乙基)-8-[2-三氟甲氧基-5-(4-甲基-4-氧基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A102B5C1Z)

向400mg(0.751mmol)的1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺的溶液中加入17.4mg(1.1mmol)的3-氯过苯甲酸，将该混合物在室温下搅拌。45分钟后，加入NaHCO₃的水溶液并除去有机相。通过烧结玻璃过滤器过滤水溶液，用(20mL)水洗涤固体，最后通过快速色谱法(洗脱液DCM/MeOH/NH₃ 80/20/02)精制，得到170mg(41％收率)呈浅褐色固状的标题化合物。

¹H NMR(400MHz，DMSO-d₆)δppm 2.79(t，J＝7.68Hz，2H)2.97(t，J＝7.68Hz，2H)3.34(t，J＝11.50Hz，2H)3.50(s，3H)3.65(t，J＝5.42Hz，2H)3.69(t，J＝11.70Hz，2H)3.71-3.75(m，2H)3.77(t，J＝10.30Hz，2H)4.63(t，J＝5.42Hz，2H)6.88(dd，J＝9.08，2.99Hz，1H)7.24(br.s.，1H)7.28(dq，J＝9.02，1.10Hz，1H)7.36(d，J＝2.93Hz，1H)7.39(m，1H)8.34(s，1H)8.95(s，1H)。

Claims

1.式(I)的化合物，及其药学可接受的盐，

其中

R1是下式的邻位取代的-芳基氨基：

其中R′₄是C₁-C₆烷基、多氟C₁-C₆烷氧基或C₁-C₆烷氧基；

R″₄是羟基C₁-C₆烷基或3-到7-元杂环基；

R2是选自直链或支链C₁-C₆烷基和直链或支链C₂-C₆烯基的基团，并且在它的任何自由位置任选被一个或多个基团取代，所述基团独立地选自卤素和羟基；

R3是CO-OR′或CO-NR′R″，其中R′和R″各自独立地是氢或直链或支链C₁-C₆烷基。

2.如权利要求1定义的式(I)的化合物，其中：R3是CO-OH或CO-NR′R″，其中R′和R″如权利要求1定义。

3.如权利要求1或2定义的式(I)的化合物，其中：R3是CO-NR′R″，其中R′和R″如权利要求1定义。

4.一种化合物或其药学可接受的盐，所述化合物选自：

1-甲基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B1C1Z)；

1-甲基-8-[2-甲氧基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A85B1C1Z)；

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-(2-氟-乙基)-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B2C1Z)；

1-甲基-8-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A48B1C1Z)；

1-甲基-8-(2-三氟甲氧基-5-哌嗪-1-基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A97B1C1Z)；

1-甲基-8-[2-甲基-5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A98B1C1Z)；

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-甲基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A51B1C3Z)；

1-乙基-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B7C1Z)；

1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B5C1Z)；

8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-1-乙烯基-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B10C1Z)；

1-(2-氯-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A51B9C1Z)；

1-(2-羟基-乙基)-8-[5-(4-甲基-哌嗪-1-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酸钾(A51B5C3Z)；和

1-甲基-8-[5-(1-甲基-1，2，3，6-四氢-吡啶-4-基)-2-三氟甲氧基-苯基氨基]-4，5-二氢-1H-吡唑并[4，3-h]喹唑啉-3-甲酰胺(A113B1C1Z)。

5.制备如权利要求1定义的式(I)的化合物的方法，其包括：

步骤1)在乙酸存在下将式(II)的化合物：

与式(III)的肼衍生物反应：

R2-NHNH₂ (III)

其中R2如权利要求1所定义或是氢，得到式(IV)的化合物：

其中R2如权利要求1所定义或是氢；

任选用式(V)的化合物将其中R2是氢的式(IV)的化合物烷基化：

R2-Y (V)

其中Y是适当的离去基团，并且R2如权利要求1所定义，得到式(IV)的化合物，其中R2如权利要求1所定义；

其中R2如上定义；和

步骤3)按照备选的步骤(步骤3a)或(步骤3b)的任一个，将式(VI)的化合物：

步骤3a)与胍反应，得到式(VII)的化合物，其中R2如上定义；将所得到的式(VII)的化合物的氨基转化为碘，然后将所得到的式(VIII)的碘-衍生物与其中R1如权利要求1定义的式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺反应，得到式(I)的化合物：

其中R1和R2如上定义；

步骤3b)与式(X)的胍衍生物反应：

R1-C(＝NH)NH₂ (X)

其中R1如上定义，得到式(I)的化合物：

其中R1和R2如上定义，和

任选将其转化为式(I)的其他化合物和/或其药学可接受的盐。

6.根据权利要求5的制备式(I)的化合物的方法，其中在步骤1)的式(V)中，Y是甲磺酰基、甲苯磺酰基或卤素。

7.根据权利要求5的制备式(I)的化合物的方法，其特征在于根据下述方法制备式(I)的化合物，该方法包括：

步骤4)通过酸或碱水解将如权利要求5定义的式(VIII)的化合物的乙氧基羰基转化为式(XIII)的化合物或相应的盐；用其中R′和R″如权利要求1定义的式R′R″-NH(XI)的胺，通过在碱性条件下并在适当的缩合剂的存在下反应，将所得到的式(XIII)的化合物或相应的盐转化为式(XIV)的化合物；将式(XIV)的化合物与其中R1如权利要求1定义的式R1-H(IX)的邻位取代的-芳胺反应，得到式(I)的化合物：

其中R1，R2，R′和R″如上定义，和

任选将其转化为式(I)的其他化合物和/或其药学可接受的盐。

8.根据权利要求5或7的制备式(I)的化合物的方法，其特征在于通过下列一个或多个反应将式(I)或(I-2)的化合物任选转化为式(I)的另一种化合物：

a)通过用氢氧化铵处理，将其中R3是乙氧基羰基的式(I)的化合物转化为其中R 3是氨基羰基的式(I)的化合物：

b)通过用其中R′和R″如权利要求1定义的式R′R″-NH(XI)的胺处理，将其中R 3是乙氧基羰基的式(I)的化合物转化为其中R3是基团CO-NR′R″的式(I)的化合物：

d)通过在碱性条件和在适当缩合剂存在下与式R′R″-NH(XI)的胺反应，将其中R3是CO-OH的式(I)的化合物或相应的盐转化为其中R3是基团CO-NR′R″的式(I)的化合物，其中R′和R″如上定义：

f)通过与其中R2如上定义的式R2-OH(XII)的醇反应，将其中R1和R3如权利要求1定义的式(I-2)的化合物转化为其中R2如权利要求1定义的式(I)的化合物：

g)通过与其中R2如上定义并且X是卤素的式R2-X(XV)的化合物反应，将其中R1和R3如权利要求1定义的式(I-2)的化合物转化为其中R2如权利要求1定义的式(I)的化合物：

9.根据权利要求8的方法，其中在酸性条件下，所述其中R1和R3如权利要求1定义的式(I-2)的化合物由其中R1和R3如权利要求1定义的式(I-1)的化合物转化：

10.制备式(I-3)的化合物的方法，其特征在于通过用其中R′和R″如权利要求1定义的式R′R″-NH(XI)的胺处理，将式(I-3)的化合物

其中R′₄，或R″₄或R″′₄是溴且R2和R 3如权利要求1所定义，转化为其中R′₄，或R″₄或R″′₄是基团-NR′R″且R2和R3如权利要求1所定义的式(I-3)的化合物。

11.两种或多种式(I)的化合物，及其药学可接受的盐的集合，

其中

R1是下式的邻位取代的-芳基氨基：

R″₄是羟基C₁-C₆烷基或3-到7-元杂环基；

R2如权利要求1所定义；

R3如权利要求1所定义。

12.如权利要求1定义的式(I)的化合物在制备药物中的用途，所述药物用于治疗由PLK-1蛋白激酶活性失调导致和/或与之有关的疾病。

13.一种药物组合物，包含治疗有效量的如权利要求1定义的式(I)的化合物或其药学可接受的盐和至少一种药学可接受的赋形剂。

14.权利要求13的药物组合物，包含治疗有效量的如权利要求1定义的式(I)的化合物或其药学可接受的盐和至少一种药学可接受的载体和/或稀释剂。

15.一种产品或试剂盒，包含如权利要求1定义的式(I)的化合物或其药学可接受的盐或如权利要求13定义的药物组合物和一种或多种化疗剂，作为组合制剂用于在癌症治疗中同时、分别或连续使用。

16.如权利要求1定义的式(I)的化合物或其药学可接受的盐在制备药物中的应用，所述药物具有抗卵巢癌、结肠癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨髓系的造血性肿瘤、淋巴系的造血性肿瘤、白血病、骨肉瘤和黑素瘤活性。

17.权利要求16的应用，所述药物具有抗急性髓性白血病活性。

18.式(X′)的中间体：

R1′-C(＝NH)NH₂ (X′)

其中R1′是

或式(IX′)的中间体：

R1′-H (IX′)

其中R1′是