CN101543208A - 猪精液稀释和常温保存用粉及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种猪精液稀释和常温保存用粉及其制备方法和应用。所述猪精液稀释和保存用粉包括26.0～30.0重量份的葡萄糖、0.8～2.0重量份的碳酸氢钠、6.0～8.0重量份的柠檬酸钠、2.0～3.0重量份的EDTA、2.5～3.5重量份的柠檬酸、5.0～6.0重量份的Tris、2.0～4.0重量份的Hepes和杀菌剂，使用蒸馏水溶解后得到pH值为6.8～7.0的稀释液，应用于猪精液常温长效保存或猪精液的常规或高倍稀释，于 17℃下保存，5天后精子活力在0.7以上，本发明配方成分简单，成本低，保存精液时间长，保存效果好，可有效地延长精液的保存时间，扩大优良种公猪的利用效率，能够满足养猪生产需要。
Description
技术领域
本发明属于家畜人工授精技术领域，具体涉及一种猪精液稀释和常温保存用粉、其制备方法以及在猪精液低温长效保存和稀释方面的应用。
背景技术
猪是畜牧业的重要组成部分，是我国肉类消费的主要来源，约占总消费肉类的70～80％。中国的猪存栏数和人均猪肉产量居世界第一位，但我国的人均猪肉消费水平与发达国家之间的差距较大。我国的养猪业对于国民经济建设和提高人民生活水平都具有重要意义。猪的繁殖力对养猪业的生产效益有重要影响。因此，人们不断努力提高猪的繁殖力。
人工授精是家畜扩大生产和优良育种的一项最有成效的常规技术，对促进养猪业的发展至关重要。在生产实践中，人工授精可以有效提高种公猪的利用率，节省饲养公猪的费用；有利于品种布局，充分发挥优良瘦肉型公猪的作用，加快商品瘦肉型猪生产步伐，从公猪遗传品质方面可迅速加快品种改良；采用人工授精技术，可以避免疾病相互传染，尤其是避免生殖道传染病的相互传播；可以克服因公母猪体型悬殊太大、不容易本交的困难；可以适时给发情母猪配种，从而有效提高母猪受胎率和增加产仔数。因此，人工授精技术的普及必定是未来发展的趋势，对其进行深入的研究具有重要的现实意义。
为了有效地开展猪人工授精，精液的稀释保存是关键技术。由于猪的冷冻精液受胎率仍然偏低，加之冷冻技术难度大，还不能在生产中广泛应用。而公猪精液的低温保存不如常温保存效果好，因此，公猪精液常温保存在生产上具有很大的实用价值。而其中，稀释液配方的研制是猪精液常温保存研究的重中之重。然而，我国常温保存精液的有效时间一般仅为2～3d，大多数猪场采用的稀释液保存48h后其活力就明显下降，严重地影响了猪的受精率和受胎率。农业部近期出台猪良种补贴政策，采用人工授精的母猪每头每年补贴40元。由于猪常温精液保存一般仅有2～3天，使上述政策的实施存在一定难度。研发一种新的猪常温精液长效保存稀释配方成为了猪人工授精推广应用的关键。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种新的猪精液稀释和常温保存用粉，可有效实现精液保存时间的延长，从而扩大优良种公猪的利用效率，减少公猪的饲养量，降低猪场生产成本，显著增加经济效益。
本发明另一个目的是提供所述猪精液稀释和常温保存用粉简单易行的的制备方法。
本发明还有一个目的是提供了所述猪精液稀释和常温保存用粉的应用。
本发明的目的通过以下技术方案来予以实现：
提供一种猪精液稀释和常温保存用粉，包括以下重量份的组分：
葡萄糖 26.0～30.0重量份；
碳酸氢钠 0.8～2.0重量份；
柠檬酸钠 6.0～8.0重量份；
EDTA(乙二胺四乙酸) 2.0～3.0重量份；
柠檬酸 2.5～3.5重量份；
Tris(三羟甲基氨基甲烷) 5.0～6.0重量份；
Hepes(4-羟乙基哌嗪乙磺酸) 2.0～4.0重量份。
上述组分可以溶解于蒸馏水中，按照常规加入杀菌剂，杀菌剂可以采用医药学上常规使用的杀菌剂或者杀菌剂的组合，杀菌剂参考浓度为1000UI/毫升。杀菌剂也可以作为其中一个组分与上述组分一起包装。
上述各组分为过80目筛的分析纯化学药品。
本发明同时提供所述精液稀释和保存用粉的制备方法，准确称量上述各组分，按照比例进行混合，搅匀，真空包装即得。
所述称量、混合、搅匀和包装的操作温度为18～26℃，相对湿度为45～65％。
所述精液稀释和保存用粉的使用方法包括以下步骤：
(1)将包装好的稀释粉按比例完全溶解于蒸馏水中得pH值为6.8～7.0的稀释液；
(2)经稀释后的精液分装入瓶，密封瓶盖，避光，平放，置于17℃冰箱作常温保存；
最好每隔12小时翻动精液一次，以防精子长期静止放置，互相堆压造成的伤害。
可以在精液稀释前半小时才开始配制稀释液。
所述猪精液稀释和常温保存用粉配制成稀释液可应用于猪精液常温长效保存或猪精液的常规或高倍稀释。
应用于猪精液的高倍稀释时，包括以下步骤：
(1)按照1∶1的稀释比例将稀释液缓缓加入精液中；
(2)将步骤(1)稀释的液体按照高倍稀释比例逐步稀释得到。
进行高倍稀释(例如1∶5)需要分两步稀释，即先进行1∶1稀释，然后再逐步稀释。
本发明的有益效果是：
本发明提供了一种全新的猪精液稀释和常温保存用粉的配方，可有效地延长精液的保存时间，以扩大优良种公猪的利用效率。猪精液采用本配方猪精液稀释和分装，于17℃下保存，5天后精子活力在0.7以上，能够满足养猪生产需要。本发明成分简单，成本低，保存时间长，保存效果好，预期能够提高猪场的经济效益，推动我国养猪业的进一步发展，同时丰富了鸡精液稀释及低温保存方面的研究成果，可进一步促进了动物遗传育种与繁殖学科的发展。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明。
实施例1 按照表1给出的稀释粉配方，准备原料：
表1 稀释粉配方
| 试剂 | 含量 |
| 葡萄糖 | 27g |
| 碳酸氢钠 | 1.0g |
| 柠檬酸钠 | 6.0g |
| EDTA | 2.15g |
| 柠檬酸 | 2.8g |
| Tris | 5.5g |
| Hepes | 4.0g |
| 青霉素 | 0.6g |
| 链霉素 | 1g |
采购配方中的各种化学药品(分析纯)，大颗粒或已经结块的成分需要经过破碎和80目筛子过筛形成粉末。
准确称量各种成分，按照配方中的比例进行混合，并作充分的搅拌，然后包装入袋，抽真空并封口得到一包猪精液稀释粉，以上过程一般要求温度控制在18～26℃，相对湿度控制在45～65％。
通常情况下，在进行精液稀释前的半小时就应该开始配制稀释液，一包猪精液稀释粉经双蒸蒸馏水溶解至1000ml，经磁力搅拌机进行不断的搅拌至完全溶解，调PH值为6.8，加热至37℃。根据精子活力和密度，调整稀释比例，将稀释液缓缓加入精液中，若进行高倍稀释(例如1∶5)需要分两步稀释：
(1)按照1∶1的稀释比例将稀释液缓缓加入精液中；
(2)将步骤(1)稀释的液体按照高倍稀释比例逐步稀释。
经稀释后的精液分装入瓶，拧紧，避光，平放，置于17℃冰箱作常温保存。
每隔12小时翻动精液一次，以防精子长期静止放置，互相堆压造成的伤害。
实施例2 按照表2给出的稀释粉配方，准备原料：
表2 稀释粉配方
| 试剂 | 含量 |
| 葡萄糖 | 26.0g |
| 碳酸氢钠 | 2.0g |
| 柠檬酸钠 | 8.0g |
| EDTA | 2.00g |
| 柠檬酸 | 3.5g |
| Tris | 5.0g |
| Hepes | 2.0g |
| 青霉素 | 0.8g |
| 氯霉素 | 0.8g |
其他操作同实施例1。在进行精液稀释前的半小时开始配制稀释液，一包猪精液稀释粉经双蒸蒸馏水溶解至1000ml，经磁力搅拌机进行不断的搅拌至完全溶解，调PH值为7.0，加热至37℃。根据精子活力和密度，调整稀释比例，将稀释液缓缓加入精液中。
实施例3 按照表3给出的稀释粉配方，准备原料：
表3 稀释粉配方
| 试剂 | 含量 |
| 葡萄糖 | 30.0g |
| 碳酸氢钠 | 0.8g |
| 柠檬酸钠 | 6.0g |
| EDTA | 3.00g |
| 柠檬酸 | 2.0g |
| Tris | 6.0g |
| Hepes | 2.35g |
| 青霉素 | 1.0g |
| 链霉素 | 0.5g |
其他操作同实施例1。在进行精液稀释前的半小时就应该开始配制稀释液，一包猪精液稀释粉经双蒸蒸馏水溶解至1000ml，经磁力搅拌机进行不断的搅拌至完全溶解，调PH值为6.9，加热至37℃。根据精子活力和密度，调整稀释比例，将稀释液缓缓加入精液中。
实施例4 采用实施例1～3所述稀释液将猪精液稀释后于17℃下保存的活力变化情况试验
实施方案：
取猪精液先按照1：1的比例稀释后再按照1:5的要求稀释，并于17℃保存，每隔24小时观察精子活力，记录活力变化情况(10次重复)。结果见表4所示：
表4 稀释精液常温(17℃)保存活力的变化
从表4可以看出，保存144小时(6天)后精子活力仍在0.7以上，表明该配方对猪精液稀释保存的效果很好。
实施例5
本发明稀释液对不同品种猪精液常温(17℃)保存活力的影响试验。
实施方案：
取三种不同的纯种公猪精液(各5头)，分别用实施例1稀释配方1：5稀释，并于17℃保存，每隔24小时观察精子活力，记录活力变化情况。结果见表5所示：
表5 不同公猪精液用该配方稀释后常温保存的活力变化
| 保存时间(h) | 大白 | 长白 | 杜洛克 |
| 24 | 0.93 | 0.90 | 0.95 |
| 48 | 0.88 | 0.86 | 0.93 |
| 72 | 0.85 | 0.81 | 0.90 |
| 96 | 0.81 | 0.76 | 0.87 |
| 120 | 0.76 | 0.72 | 0.80 |
| 144 | 0.71 | 0.69 | 0.76 |
| 168 | 0.65 | 0.63 | 0.72 |
由表5可以看出，不同品种的公猪精液经该稀释配方稀释，常温保存5天后都有0.7以上的活力，表明该配方对不同品种猪精液稀释保存的效果都很好，可有效地延长精液的保存时间，为猪人工授精推广应用提供技术保障。
Claims (9)
1、一种猪精液稀释和常温保存用粉，其特征在于包括以下重量份的组分：
葡萄糖 26.0～30.0重量份；
碳酸氢钠 0.8～2.0重量份；
柠檬酸钠 6.0～8.0重量份；
EDTA 2.0～3.0重量份；
柠檬酸 2.5～3.5重量份；
Tris 5.0～6.0重量份；
Hepes 2.0～4.0重量份。
2、根据权利要求1所述猪精液稀释和常温保存用粉，其特征在于还包括医药学上常规使用的杀菌剂组分。
3、根据权利要求1或2所述猪精液稀释和常温保存用粉，其特征在于所述各组分为过80目筛的分析纯化学药品。
4、一种权利要求1或2所述猪精液稀释和常温保存用粉的制备方法，其特征在于准确称量各组分，按照比例进行混合，搅匀，真空包装即得。
5、根据权利要求4所述猪精液稀释和常温保存用粉的制备方法，其特征在于所述称量、混合、搅匀和包装的操作温度为18～26℃，相对湿度为45～65％。
6、一种权利要求1或2所述猪精液稀释和常温保存用粉的使用方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将包装好的稀释粉按比例完全溶解于蒸馏水中得pH值为6.8～7.0的稀释液；
(2)经稀释后的精液装瓶，密封避光平放，置于冰箱保存。
7、根据权利要求6所述猪精液稀释和常温保存用粉的使用方法，其特征在于每隔12小时翻动精液一次。
8、一种权利要求1或2所猪精液稀释和常温保存用粉的应用，其特征在于配制成稀释液应用于猪精液常温长效保存或猪精液的常规或高倍稀释。
9、根据权利要求8所述猪精液稀释和常温保存用粉的应用，其特征在于应用于猪精液的高倍稀释时，包括以下步骤：
(1)按照1：1的稀释比例将稀释液缓缓加入精液中；
(2)将步骤(1)稀释的液体按照高倍稀释比例逐步稀释得到。
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