CN101528666B - (r，r)-非诺特罗和(r，r)-或(r，s)-非诺特罗类似物的制备及其在治疗充血性心力衰竭中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开涉及发现了高度有效地结合与β2-肾上腺素能受体的(R，R)-和(R，S)-非诺特罗。提供了这些类似物的示例性化学结构。还提供了包含本公开的(R，R)-非诺特罗和非诺特罗类似物的药物组合物，和使用这种化合物和组合物用于治疗心脏病症例如充血性心力衰竭和肺病症例如哮喘或慢性阻塞性肺病的方法。

Description

(R,R)-非诺特罗和(R,R)-或(R,S)-非诺特罗类似物的制备及其在治疗充血性心力衰竭中的应用

技术领域

本公开涉及药物组合物领域，并且特别涉及(R，R)-非诺特罗和(R，R)-或(R，S)-非诺特罗类似物的制备及其在治疗充血性心力衰竭中的应用。

背景技术

非诺特罗，5-[1-羟基-2[[2-(4-羟基苯基)-1-甲基乙基]-氨基]乙基]-1，2-苯二醇，是β2-肾上腺素能受体激动剂，其传统地用于治疗肺病症例如哮喘。该药物具有两个手性(不对称)碳，其各自可独立地以R或S构型布置，从而该药物以不同的已知的立体异构体形式(R，R)、(R，S)、(S，R)或(S，S)存在。非诺特罗的市售形式为(R，R)-和(S，S)-化合物的外消旋混合物。

非诺特罗已知作为激动剂与β2-肾上腺素能受体结合并激活β2-肾上腺素能受体。这一活性导致其在治疗哮喘中具有临床应用，因为这一激动剂的活性使收缩气道舒张。非诺特罗的另外的治疗学应用仍有待进行彻底探索。包括非诺特罗在内的这类药物的药理学研究已经表明对映体中仅一种负责产生支气管舒张作用。例如，研究已显示外消旋的(±)-非诺特罗的主要的支气管舒张活性在于非诺特罗的(R，R)-异构体。另外，非活性的对映体可能与副作用有关在最近变得明显。例如，非对映体(S，S)-非诺特罗已显示导致不良副作用或与β2-肾上腺素能受体激动剂治疗有关的耐受性的发展

因此提供在治疗诸如哮喘、慢性阻塞性肺病或充血性心力衰竭的病症中是有效的但是具有减少的副作用例如超敏性和耐药性(耐受性)的非诺特罗组合物是有利的。

发明概述

本公开涉及的是发现了在结合β2-肾上腺素能受体方面是高度有效的非诺特罗类似物。这些类似物的示例性的化学结构在本公开的通篇中被提供。例如，这种化合物由以下通式表示：

其中R₁-R₃独立地是氢，酰基，烷氧基羰基，氨基羰基(氨甲酰基)或其组合；

R₄是氢或低级烷基；

R₅是低级烷基，

其中X、Y¹、Y²和Y³独立地是氢，-OR₆和-NR₇R₈；

R₆独立地是氢，低级烷基，酰基，烷氧基羰基或氨基羰基；和

R₇和R₈独立地是氢，低级烷基，烷氧基羰基，酰基或氨基羰基。

还提供了包含(R，R)-非诺特罗和非诺特罗类似物的药物组合物以及使用(R，R)-非诺特罗和非诺特罗类似物的用法。例如，公开的(R，R)-非诺特罗和(R，R)-或(R，S)-非诺特罗类似物(例如(R，R)-甲氧基非诺特罗，(R，R)-萘基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗)有效用在治疗心脏的病症或肺病症方面。

上述和其它的特征和优点从以下若干实施方案的详细说明中将变得明显，继续参考附图进行说明。

附图说明

图1表示(S，S)-和(R，R)-非诺特罗的色谱分离。

图2A提供了(R，R)-和(S，S)-非诺特罗的紫外光谱。

图2B说明了(R，R)-和(S，S)-非诺特罗的圆二色谱。

图3提供了通过添加(R，R)-非诺特罗到流动缓冲液中生成的[+H]-(±)-非诺特罗的前沿(frontal)色谱洗脱曲线。

图4A是包括通过使用(±)-非诺特罗、(R，R)-非诺特罗或(S，S)-非诺特罗治疗新分离的大鼠心室肌细胞产生的剂量-应答曲线的图表。

图4B是包括通过使用(±)-非诺特罗、(R，R)-非诺特罗或(S，S)-非诺特罗进行治疗在新分离的大鼠心室肌细胞内产生的T_50％松弛的剂量-应答曲线的图表。

图5说明非诺特罗和非诺特罗类似物(化合物2-7)的立体异构体的化学结构。

图6说明化合物47-51的化学结构。

图7说明非诺特罗和非诺特罗类似物对单个心室肌细胞内细胞收缩的影响。

图8是说明在给药(5mg/mL)后(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗的时间依赖性平均血浆浓度的曲线。

若干实施方案的详细说明

I.引言

本公开提供了与β2-肾上腺素能受体结合的非诺特罗类似物，其活性可与非诺特罗相比或比非诺特罗具有更大活性的。在一个实施方案，光学活性非诺特罗类似物实质上从外消旋混合物中纯化。例如，光学活性非诺特罗类似物经过纯化以占组合物的大于90％，通常大于95％。这些类似物可用于治疗先前已用(±)-非诺特罗进行治疗的肺病症例如哮喘和慢性阻塞性肺病。具有与(±)-非诺特罗相等效力到更高效力的本公开的非诺特罗类似物的使用可减少先前使用(±)-非诺特罗时所观察到的副作用。例如，使用更低浓度的非诺特罗类似物以获得治疗学有效应答预计降低使用市售的(±)-非诺特罗时所观察到的副作用例如超敏性和耐药性(耐受性)。另外，类似物的纯化除去了杂质，诸如可引起这些副作用的非活性的对映体。

本公开还表明(R，R)-非诺特罗是市售的(±)-非诺特罗的有效成分。特别考虑了(R，R)-非诺特罗以及公开的(R，R)-和(R，S)-非诺特罗类似物可用于治疗心脏病症例如充血性心力衰竭。使用大体上光学纯的(R，R)-非诺特罗或(R，R)-或(R，S)-非诺特罗类似物用于治疗充血性心力衰竭预计降低由生理学活性较差形式的药物引起的副作用的发生率。

II.缩写和术语

AR：肾上腺素能受体

CD：圆二色性

CoMFA：比较分子场分析

HPLC：高效液相色谱法

IAM-PC：固定化人工膜色谱载体

ICYP：[¹²⁵I]氰基吲哚洛尔

UV：紫外线

除非另有说明，否则本文使用的全部的专业术语和科技术语具有本公开主题所属领域内的普通技术人员通常已知的含义。化学术语中常用术语的定义可参见The McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms，1985和The Condensed Chemical Dictionary，1981。本文使用的单数术语“一”、“一种”和“所述”包括复数所指，除非上下文清楚地指出并非如此。类似地，措辞“或”意在包括“和”，除非上下文清楚地指出并非如此。另外，本文使用的术语“包括”是指“包含”，因此，“A或B”是指包含A，包含B，或包含A和B。

除非另有说明，否则无论是否用措辞“约”或“大约”来阐述，任何数值是指近似殖。本文描述的材料、方法和实施例仅仅是示例性的，并非用于限制性目的。任何分子量值或分子质量值是近似的并且仅为了描述目的被提供。除非另有说明，否则本发明的方法和技术一般根据本领域公知的和在本说明书通篇中所引述和讨论的各种一般的和更具体的参考文献中描述的常规方法实施。例如，参见Loudon，Organic Chemistry，Fourth Edition，New York：Oxford University Press，2002，pp.360-361，1084-1085；Smith和March，March′s AdvancedOrganic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，Fifth Edition，Wiley-Interscience，2001；或Vogel，A Textbook of Practical OrganicChemistry，Including Qualitative Organic Analysis，Fourth Edition，NewYork：Longman，1978。

为了帮助评述本文公开的各种实施方案，以下提供了专业术语的说明：

酰基：式RC(O)-的基团，其中R是有机基。

酰基氧基：具有结构-OC(O)R的基团，其中R可为任选被取代的烷基或任选被取代的芳基。“低级酰基氧基”是其中R包含1-10个(如1-6个)碳原子的那些基团。

烷氧基：具有结构-O-R的基团(或取代基)，其中R是被取代的或未被取代的烷基。甲氧基(-OCH₃)是示例性的烷氧基。在被取代的烷氧基中，R是被非干扰性取代基取代的烷基。“硫代烷氧基”是指-S-R，其中R是被取代的或未被取代的烷基。“卤代烷氧基”是指基团-OR，其中R是卤代烷基。

烷氧基羰基：式-C(O)OR的基团，其中R可为任选被取代的烷基或任选被取代的芳基。“低级烷氧基羰基”是其中R包含1-10个(如1-6个)碳原子的那些基团。

烷基：非环的、饱和的、支链的或直链的烃基，除非另有说明，否则其包含1-15个碳原子；例如，包含1-10个、1-6个或1-4个碳原子。该术语包括例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、异丁基、叔丁基、戊基、庚基、辛基、壬基、癸基或十二烷基的基团。术语“低级烷基”是指包含1-10个碳原子的烷基。除非清楚地指出是“未被取代的烷基”，否则“烷基”可以是未被取代的或被取代的。烷基可被一个或多个取代基取代(例如，对于烷基链中的每个亚甲基具有最多两个取代基)。示例性的烷基取代基包括例如氨基、酰胺、磺酰胺、卤素、氰基、羧基、羟基、巯基、三氟甲基、烷基、烷氧基(例如甲氧基)、烷硫基、硫代烷氧基、芳基烷基、杂芳基、烷基氨基、二烷基氨基、烷基硫烷基(sulfano)、酮基、或其它官能度。

氨基羰基(氨甲酰基)：式-OCN(R)R′-的基团，其中R和R′彼此独立地是氢或低级烷基。

哮喘：哮喘是一种呼吸系统疾病，其中气道通常响应一种或多种“诱因”而收缩、发炎、并衬满过量的粘液，所述诱因为诸如暴露于环境刺激物(或过敏原)、冷空气、运动或情志过极(emotional stress)。这一气道变窄引起诸如哮鸣音、呼吸浅短、胸闷和咳嗽的症状。该病症是其中气道对各种刺激发展为增加的应答的慢性或复发性炎性病况，以支气管超应答、炎症、粘液生成增加和间歇性气道阻塞为特征。

氨甲酸酯：式-OC(O)N(R)-的基团，其中R是H或脂族基，如低级烷基或芳烷基。

心脏病症或疾病：通常，心脏病症/疾病是一类牵涉心脏和/或血管(动脉和静脉)的病症/疾病。在具体的实施例中，心脏病症/疾病包括充血性心力衰竭。

慢性阻塞性肺病：一组呼吸道疾病，包括慢性支气管炎、气肿和支气管扩张，其特征在于不完全可逆的气流阻塞或受限。气流受限通常是进行性的并且与肺对毒性粒子或气体的异常炎性响应有关。

充血性心力衰竭：其中心脏不能维持身体组织内的足够的血液循环或不能泵出通过静脉返回心脏的静脉血的心力衰竭。

衍生物：通过一个或多个官能团而与其它化学物质区别开的化学物质。优选地，衍生物(例如非诺特罗类似物)保持了其所衍生而来的分子(诸如非诺特罗)的生物活性。

异构体：具有相同分子式但是在其原子的键合性质或键合顺序或其原子空间排列方面有区别的化合物被称作“异构体”。在其原子空间排列方面不同的异构体被称作“立体异构体”。彼此为非镜象的立体异构体被称作“非对映体”，彼此为不重叠镜像的那些被称作“对映体”。当化合物具有不对称中心时，例如，如果碳原子与四个不同基团键合时，可能存在一对对映体。对映体可以其不对称中心的绝对构型为特征并且通过Cahn和Prelog的R和S-顺序规则进行描述，或通过其中分子使偏振光平面旋转并被指定为右旋或左旋(即，分别为(+)或(-)异构体)的方式进行描述。手性化合物可以单独的对映体存在或作为对映体的混合物存在。包含相等比例的对映体的混合物被称作“外消旋混合物”。

本文描述的化合物可具有一个或多个不对称中心；因此这种化合物可以(R)-或(S)-立体异构体或其混合物的形式得到。除非另有说明，否则在本说明书和权利要求书中对具体化合物的说明或命名意在包括其单独的对映体和混合物、外消旋物等。确定立体化学的方法和分离立体异构体的方法是本领域公知的(例如，参见March，AdvancedOrganic Chemistry，4th edition，New York：John Wiley and Sons，1992，Chapter 4)。

任选：“任选的”或“任选地”是指随后描述的事件或环境可能不必发生，并且该描述包括其中所述事件或环境发生的情况和其中所述事件或环境不发生的情况。

可药用载体：用于本公开中的可药用载体(媒介物)是常规的。Remington′s Pharmaceutical Sciences，E.W.Martin，Mack Publishing Co.，Easton，PA，19th Edition(1995)描述了适于一种或多种治疗学化合物或分子诸如一种或多种核酸分子、蛋白质或与这些蛋白质结合的抗体和其它药剂的药物递送的组合物和制剂。

通常，载体的性质根据所用的具体给药方式的不同而异。例如，非肠道制剂通常包括注射液，该注射液包括药学和生理学可接受的液体诸如水，生理盐水，平衡盐液，含水葡萄糖，甘油等作为媒介物。对于固体组合物(例如粉剂，丸剂，片剂或胶囊形式)，常规的无毒的固体载体可包括例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物学中性载体之外，待给药的药物组合物可包含少量的无毒的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂，防腐剂，和pH缓冲剂等，例如乙酸钠或单月桂酸山梨醇酐酯。

苯基：苯基可是未被取代的或被一个、两个或三个取代基取代，所述取代基独立地选自：烷基，杂烷基基，脂族基，杂脂族基，硫代烷氧基，卤基，卤代烷基(诸如-CF₃)，硝基，氰基，-OR(其中R是氢或烷基)，-N(R)R′(其中R和R′彼此独立地是氢或烷基)，-COOR(其中R是氢或烷基)或-C(O)N(R′)R″(其中R′和R″独立地选自氢或烷基)。

肺病症或疾病：通常，肺病症/疾病包括任何与肺有关的病症/疾病。在具体实施例中，肺病症/疾病包括哮喘和慢性阻塞性肺病。

纯化的：术语“纯化的”不要求绝对纯；而是包括相对术语。因此，例如，纯化制剂是一种其中所需组分如非诺特罗的(R，R)-对映体比其在之前环境如(±)-非诺特罗混合物中更富集的制剂。所需组分如非诺特罗的(R，R)-对映体，例如样品当按重量计的至少约70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％由所需组分构成时，被认为是纯的。化合物的纯度可通过例如高效液相色谱法(HPLC)或其它常规方法来测定。在一实施例中，特定的非诺特罗类似物对映体经过纯化表现为相对于纯化制剂中存在的另外的对映体为大于90％，经常大于95％。在其它情况下，纯化制剂可大体上是同质的，其中其它立体异构体低于1％。

本文描述的化合物可以纯化形式获得，或者通过本领域已知的包括硅胶和/或氧化铝色谱法在内的任何手段进行纯化。例如，参见Introduction to Modern Liquid Chromatography，2nd Edition，Snyder和Kirkland编，New York：John Wiley和Sons，1979；和Thin LayerChromatography，Stahl编，New York：Springer Verlag，1969。在一实施例中，化合物包括纯化的非诺特罗或非诺特罗类似物，其纯度按重量计相对于其它杂质占样品的至少约70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％。在另一个实施例中，化合物包括至少两个纯化的立体异构体，各自的纯度按重量计相对于其它杂质占样品的至少约70％、80％、85％、90％、92％、95％、97％、98％或99％。例如，化合物可包括大体上纯化的(R，R)-非诺特罗类似物和大体上纯化的(R，S)-非诺特罗类似物。

受试者：术语“受试者”包括人类和兽类受试者，例如人，非人灵长类，狗、猫、马、大鼠、小鼠和牛。类似地，术语哺乳动物包括人类和非人类哺乳动物。

治疗：关于疾病，术语包括(1)预防疾病，例如，引起可能暴露于或倾向于暴露在疾病下但是尚未经历或显示疾病症状的受试者中的疾病的临床症状不发展，(2)抑制疾病，例如，阻碍疾病或其临床症状的发展，或(3)缓解疾病，例如，引起疾病或其临床症状退行。

治疗有效量：特定药剂的能够在用该药剂治疗的受试者中实现所需效果的量。例如，该治疗有效量可以是可用于预防、减少、和/或抑制、和/或治疗心脏病症例如充血性心力衰竭的(R，R)-非诺特罗或(R，R)-或(R，S)-非诺特罗类似物的量。理想地，药剂的治疗有效量是足够预防、减少、和/或抑制、和/或治疗受试者的病症而不引起受试者的显著的细胞毒作用的量。药剂的可用于预防、减少、和/或抑制、和/或治疗受试者的病症的量根据被治疗的受试者、病症的严重性和治疗组合物的给药方法的不同而异。

III.(R，R)-非诺特罗和非诺特罗类似物

A.化学结构

本文公开的一些示例性的非诺特罗类似物具有下式结构：

其中R₁-R₃独立地是氢，酰基，烷氧基羰基，氨基羰基或其组合；

R₄是氢或低级烷基；

R₅是低级烷基，

其中X和Y独立地选自氢，低级-OR₆和-NR₇R₈；

R₆是低级烷基或酰基；和

R₇和R₈独立地是氢，低级烷基，烷氧基羰基，酰基或氨基羰基。

继续参见上面非诺特罗类似物的通式，Y可为-OH。

在一个实施方案中，R₅是任选地具有1、2或3个取代基的1-萘基或2-萘基衍生物。这种R₅基团的实例由下式表示：

其中Y¹、Y²和Y³独立地是氢，低级-OR₆和-NR₇R₈；

R₆每次出现时独立地选自低级烷基和酰基；和

R₇和R₈独立地是氢，低级烷基，烷氧基羰基，酰基或氨基羰基(氨甲酰基)。在具体化合物中，Y¹、Y²和Y³中的至少一个是-OCH₃。

特别地，R₅基团包括下式表示的那些：

其中R₆是低级烷基，诸如甲基、乙基、丙基或异丙基，或酰基，诸如乙酰基。

示例性的R₅基团包括：

在一实施例中，R₄是低级烷基且R₅是：

其中X和Y独立地选自H，低级烷基-OR₆和-NR₇R₈；

R₆是低级烷基；和

R₇和R₈独立地是氢或低级烷基。

在另外的实施例中，R₄选自乙基、正丙基和异丙基且R₅具有下式结构：

其中X是H，-OR₆或-NR₇R₈。例如，R₆可为甲基或R₇和R₈是氢。

在另外的实施例中，R₅具有下式结构：

在另外的实施方案中，R₄选自甲基、乙基、正丙基和异丙基且R₅表示：

对于R₁-R₃的可在体内裂解以提供羟基的适当基团的实例包括但不限于酰基，酰基氧基和烷氧基羰基。具有这种可裂解基团的化合物被称作“前体药物”。本文使用的术语“前体药物”是指这样的化合物，该化合物包括可在体内转化(例如通过水解)为羟基的取代基。前体药物的多种形式是本领域的已知，例如，如下讨论：Bundgaard，(编)，Design of Prodrugs，Elsevier(1985)；Widder等(编)，Methods inEnzymology，Vol.4，Academic Press(1985)；Krogsgaard-Larsen等(编)，Design and Application of Prodrugs，Textbook of Drug Design andDevelopment，Chapter 5，113 191(1991)；Bundgaard等，Journal of DrugDelivery Reviews，8：138(1992)；Bundgaard，Pharmaceutical Sciences，77：285 et seq.(1988)；以及Higuchi和Stella(编)Prodrugs as Novel DrugDelivery Systems，American Chemical Society(1975)。

示例性的(R，R)-化合物具有以下的化学结构：

X和R₁-R₃如上定义。

另外的示例性的(R，R)-化合物具有以下的化学结构：

示例性的(R，S)-化合物具有以下的化学结构：

其中X和R₁-R₃如上定义。

另外的示例性的(R，S)-化合物具有以下的化学结构：

示例性的(S，R)-化合物具有以下的化学结构：

其中X和R₁-R₃如上定义。

示例性的(S，S)-化合物具有以下的化学结构：

其中X和R₁-R₃如上定义。

说明非诺特罗的各种立体异构体的化学结构的实例提供如下。

(R，R)-非诺特罗

(R，S)-非诺特罗

(S，R)-非诺特罗

(S，S)-非诺特罗

具体的方法实施方案考虑了使用本文描述的(R，R)-非诺特罗和任何非诺特罗类似物的溶剂合物(例如水合物)，可药用盐和/或不同的物理形式。

1.溶剂合物、盐和物理形式

“溶剂合物”是指化合物与一个或多个溶剂分子的物理结合物。该物理结合物包括不同程度的离子键和共价键，包括例如共价加合物和氢键合溶剂合物。在某些情况下，溶剂合物能够分离，例如当一个或多个溶剂分子被并入结晶固体的晶格内时。“溶剂合物”包括溶液相和可分离的溶剂合物。典型的溶剂合物包括与乙醇结合的化合物，与甲醇结合的化合物等。“水合物”是其中溶剂分子是水的溶剂合物。

如果存在若干成盐基团的话，则公开的化合物还包括盐，包括混合盐和/或内盐。盐通常是无毒的可药用的盐。盐可为任何类型(无机盐和无机盐)，如富马酸盐，氢溴酸盐，盐酸盐，硫酸盐和磷酸盐。在一实施例中，盐包括得自元素周期表第VII族中的非金属(例如卤素)。例如，化合物可以氢溴酸盐的形式被提供。

成盐基团的另外的实例包括但不限于羧基，膦酸基或硼酸基，其可与适当的碱形成盐。这些盐可包括例如得自元素周期表的第IA、IB、IIA和IIB族的金属的无毒的金属阳离子。在一个实施方案中，可使用碱金属阳离子例如锂、钠或钾离子，或碱土金属阳离子例如镁或钙离子。盐还可是锌或铵阳离子。还可与适当的有机胺形成盐，有机胺为诸如未被取代的或被羟基取代的一-、二-或三-烷基胺，特别是一-、二-或三-烷基胺，或者是与季铵化合物形成的盐，例如与N-甲基-N-乙基胺，二乙胺，三乙胺，一-、二-或三-(2-羟基-低级烷基)胺如一-、二-或三-(2-羟基乙基)胺、2-羟基-叔丁基胺或三(羟基甲基)甲基胺，N，N-二-低级烷基-N-(羟基-低级烷基)胺如N，N-二甲基-N-(2-羟基乙基)胺或三-(2-羟基乙基)胺或N-甲基-D-谷氨酰胺或季铵化合物例如四丁铵盐形成的盐。

本文公开的示例性化合物具有至少一个碱性基团，其可与无机酸形成酸-碱。碱性基团的实例包括但不限于氨基或亚氨基。可与这些碱性基团成盐的无机酸的实例包括但不限于无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸或磷酸。碱性基团还可以有机羧酸、磺酸(sulfonic acids)、磺酸(sulfoacids)或膦酸或被N-取代的氨基磺酸成盐，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、琥珀酸、马来酸、羟基马来酸、甲基马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、葡糖酸、葡糖二酸、葡糖醛酸、枸橼酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水杨酸、4-氨基水杨酸、2-苯氧基苯甲酸、2-乙酰氧基苯甲酸、4，4′-亚甲双(3-羟基-2-萘酸)、烟酸或异烟酸，并且，另外，与氨基酸例如与α-氨基酸成盐，还与甲磺酸、乙磺酸、2-羟基甲磺酸、乙烷-1，2-二磺酸，苯二磺酸、4-甲基苯磺酸、萘-2-磺酸、2-或3-磷酸甘油酸、葡糖-6-磷酸或N-环己基氨基磺酸(具有环己氨基磺酸的结构)成盐或与其它的酸性有机化合物例如抗坏血酸成盐。在本发明的优选方案中，非诺特罗以氢溴酸盐形式被提供，且示例性的非诺特罗类似物以其富马酸盐的形式被提供。

用于形成可药用盐的另外的平衡离子可参见Remington′sPharmaceutical Sciences，19th Edition，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995。在一个方面，采用可药用盐还可用于调节组合物的渗透压力。

在某些实施方案中，在该方法中使用的化合物以多晶型形式被提供。因此，该化合物可以两种或更多种物理形式诸如不同的晶形、结晶、液晶或非晶(无定形)形式被提供。

2.制药用途

任何上述的化合物(例如(R，R)-非诺特罗或非诺特罗类似物或其水合物或可药用盐)或其组合计划用于制备用于在受试者内刺激β2-肾上腺素能受体或用于治疗肺和心脏的病症(如哮喘和充血性心力衰竭)的药物中。适于这种药物的制剂，可受益于所述的和其它相关特征的受试者在本文别处描述。

B.合成方法

公开的非诺特罗类似物可通过本领域已知的任何方法合成。可以获得许多提供常规已知的用于合成该公开的化合物的化学合成路线和条件的一般参考文献。(例如，参见Smith和March，March′s AdvancedOrganic Chemistry：Reactions，Mechanisms，and Structure，Fifth Edition，Wiley-Interscience，2001；或Vogel，A Textbook of Practical OrganicChemistry，Including Qualitative Organic Analysis，Fourth Edition，NewYork：Longman，1978)。

本文描述的化合物可以本领域任何已知的手段进行纯化，包括色谱法，诸如HPLC、制备性薄层色谱法、闪柱色谱法和离子交换色谱法。可使用任何适当的固定相，包括正相和反相以及离子树脂。最典型的公开的化合物通过空柱色谱法和制备性色谱法纯化。

非诺特罗类似物的适当的示例性合成如下提供：

路线I：1-6的4种立体异构体的示例性合成包括从(R)-或(S)-3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇形成的环氧化物与适当的被苄基保护的2-氨基-3-苄基丙烷(1-5)的(R)-或(S)-异构体或与N-苄基-2-氨基庚烷(6)的(R)-或(S)-异构体的偶联。

路线II：使用2-苯乙基胺的(R)-7和(S)-7的示例性合成。所得的化合物可通过用Pd/C进行氢化进行脱保护并纯化为富马酸盐。

路线III描述了在路线II中使用的手性砌块的示例性合成。(R)-和(S)-3′，5′-二苄氧基苯基-溴代醇对映体通过使用硼-二甲硫醚复合物(BH₃SCH₃)和(1R，2S)-或(1S，2R)-顺式-1-氨基-2-茚满醇进行3，5-二苄氧基-α-溴代苯乙酮的对映体特异性还原，通过使用(R)-或(S)-扁桃酸作为抗衡离子进行消旋-2-苄基氨基丙烷的对映体选择性结晶来制备所需的(R)-和(S)-1-苄基氨基丙烷。

IV.药物组合物

公开的(R，R)-非诺特罗和非诺特罗类似物可至少用于治疗肺病症例如哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)和心脏病症例如充血性心力衰竭。因此，本文还描述了包含至少一种公开的非诺特罗化合物或类似物的药物组合物。

药物组合物的配制是本领域公知的。例如，Remington′sPharmaceutical Sciences，E.W.Martin，Mack Publishing Co.，Easton，PA，19th Edition，1995描述了示例性的适用于(R，R)-非诺特罗和公开的非诺特罗类似物的药物递送的示例性制剂(将其组分)。包括这些化合物中至少一种的药物组合物被配制用于人医学或兽医学。公开的药物组合物的具体制剂可根据例如给药方式(例如经口或非肠道)和/或待治疗疾病(例如肺病症或心脏病症例如充血性心力衰竭)的不同而异。在一些实施方案中，制剂除包括至少一种活性成分例如非诺特罗化合物之外还包括可药用的载体。

用于所公开的方法和组合物的可药用载体是本领域常见的。药物载体的性质根据所采用的具体给药方式的不同而异。例如，非肠道制剂通常包括可注射液体，该液体包括药学可接受的和生理学可接受的液体，例如水、生理盐水、平衡盐液、含水葡萄糖、甘油等作为媒介物。对于固体组合物如粉剂、丸剂、片剂或胶囊形式，可包括常规的无毒的固体载体，例如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉或硬脂酸镁。除了生物学中性载体之外，待给药的药物组合物可任选地包含少量的无毒的辅助物质或赋形剂，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等；例如，乙酸钠或单月桂酸山梨醇酐酯。其它的非限制性赋形剂包括非离子型增溶剂如聚氧乙烯蓖麻油或蛋白质如人血清白蛋白或血浆制剂。

公开的药物组合物可被配制为可药用盐。可药用盐是具有所需的游离碱的药理学活性的游离碱形式的化合物的无毒盐。这些盐可得自无机酸或有机酸。适当的无机酸的非限制性实例是盐酸、硝酸、氢溴酸、硫酸、氢碘酸和磷酸。适当的有机酸的非限制性实例是乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、枸橼酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、水杨酸、甲酸、三氯乙酸、三氟乙酸、葡糖酸、天门冬氨酸、门冬氨酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、萘磺酸等等。其它适当的可药用盐的列表参见Remington′s Pharmaceutical Sciences，19th Edition，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995。可药用盐还可用于调节组合物的渗透压力。

公开的药物组合物的剂型可通过所选择的给药方式进行确定。例如，除了可注射液体之外，可采用口服剂型。口服剂型可为液体剂型如糖浆剂、溶液剂或悬浮剂，或为固体剂型如粉剂、丸剂、片剂或胶囊。制备这种剂型的方法是本领域技术人员已知的和显而易见的。

包括所公开化合物的药物组合物的某些实施方案可被配制在适于精确剂量的单独给药的单位剂型中。活性成分如(R，R)-非诺特罗的给药量将根据被治疗的受试者、病症的严重性和给药方式的不同而异，并且是本领域技术人员已知的。在这些范围内，待给药的制剂包含为了在被治疗的受试者中实现所需效果的量的本文所公开的一些提取物或化合物。在具体的实施例中，对于口服给药，组合物以包含约1.0到约50毫克的活性成分、特别是包含约2.0毫克、约2.5毫克、5毫克、约10毫克、或约50毫克的活性形式的片剂形式被提供，用于对被治疗的受试者进行症状调节。在一个示例性的口服剂量给药方案中，包含约1毫克到约50毫克(例如约2毫克到约10毫克)活性成分的片剂每天给药2-4次，诸如2次、3次或4次。

V.用法

本公开包括治疗包括肺和心脏病症在内的病症的方法。在一些实施例中，肺病症是哮喘或慢性阻塞性肺病。在其它实施例中，心脏病症是充血性心力衰竭。

公开的方法包括给药处在可药用载体内并以有效治疗肺和/或心脏病症的量的(R，R)-非诺特罗或所公开的非诺特罗类似物(和任选的一种或多种其它药剂)至受试者。可用于所公开方法中的给药途径包括但不限于经口途径和非肠道途径，诸如静脉内(iv)，腹膜内(ip)，直肠，局部，眼、鼻和透皮途径。用于这些剂型的制剂如上所述。

(R，R)-非诺特罗或所公开的非诺特罗类似物的有效量至少随着特定用法、被治疗受试者、病症的严重性和治疗组合物的给药方式的不同而异。组合物的“治疗有效量”是特定化合物的足够在被治疗受试者中实现所需效果的量。例如，该治疗有效量可以是(R，R)-非诺特罗的为预防、抑制、减少或缓解受试者的肺和/或心脏病症和/或病症的一种或多种症状所必需的量。理想地，(R，R)-非诺特罗或所公开的非诺特罗类似物的治疗有效量是足够预防、抑制、减少或缓解肺和/或心脏病症和/或病症的一种或多种症状而不引起显著的对寄主细胞的细胞毒作用的量。

所公开的非诺特罗或药物组合物的治疗有效剂量可由本领域技术人员来决定，目的是实现所公开的可应用的化合物在本文实施例中达最少高达EC₅₀的浓度。剂量范围的实例为约0.001到约10毫克/千克体重，经口给药，以单一剂量或分剂量给药。在具体实施例中，剂量范围为约0.005到约5毫克/千克体重，经口给药，以单一剂量或分剂量给药(假定平均体重为约70千克；对于体重比平均体重或多或少的人相应地调整该值)。对于口服给药，组合物以例如包含约1.0到约50毫克的活性成分、特别是约约2.5毫克、5毫克、约10毫克、或约50毫克的活性成分的片剂形式被提供，用于对被治疗的受试者的剂量根据症状进行调整。在一个示例性的经口剂量给药方案中，包含约1毫克到约50毫克的活性成分的片剂，每天给药2-4次，诸如2次、3次或4次。

对于特定受试者的剂量给药的特定剂量水平和频率是变化的并且根据多种因素的不同而异，所述因素包括具体化合物的活性，化合物的代谢稳定性和作用时间，受试者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食，给药方式和时间，排泄速率，药物组合，以及被治疗受试者的病况的严重性。

本公开的主题进一步通过以下的非限制性实施例来说明。

实施例

实施例1

材料和方法

试剂。苯基甲基磺酰氟(PMSF)、苄脒、亮肽素、胃酶抑素A、MgCl₂、EDTA、Trizma-盐酸盐(Tris-HCl)、(±)-普萘洛尔和最低必需培养基(MEM)从Sigma Aldrich(St.Louis，MO)获得。蛋卵磷脂脂质(PC)得自Avanti Polar Lipids(Alabaster，AL)。(±)-非诺特罗购自Sigma Aldrich，以及[³H]-(+)-非诺特罗得自Amersham Biosciences(Boston，MA)。有机溶剂正己烷、异丙醇和三乙胺以特纯HPLC级溶剂得自CarloErba(Milan，Italy)。胎牛血清和青霉素-链霉素购自LifeTechnologies(Gaithersburg，MD)，和[¹²⁵I]-(±)-碘氰基吲哚洛尔(ICYP)购自NEN Life Science Products，Inc.(Boston，MA)。

(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗的制备和鉴定。(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗使用HPLC技术从(±)-非诺特罗制备，该HPLC技术使用HPLC柱(25cm×0.46cm i.d.)，该柱包含三-(3，5-二甲基苯基氨甲酸酯)手性固定相(CHIRALPAKAD CSP，Chiral Technologies，WestChester，PA；CHIRALPAK是Daicel Chemical Industries Ltd.，Exton，PA的商标)。色谱系统组成如下：JASCOPU-980溶剂输送系统，和JASCO

MD-910多波长监测器，其设定在λ＝230nm并与电脑工作站连接；JASCO是JASCO，Inc.，Tokyo，Japan的注册商标。使用具有20μl样品回路管的Rheodyne型7125注射器用于注射到0.2-0.3毫克(±)-非诺特罗到色谱系统上。流动相是含0.1％三乙胺的正己烷/异丙醇(88/12v/v)，流速是1毫升/分钟，且系统的温度使用柱加热器/冷却器(型号7955，Jones Chromatography Ltd.，UK)保持在25℃。分离的(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗当其各自的峰从色谱柱上被洗脱时以10毫升记分被收集。收集2毫升中间级分并丢弃以改善被收集的异构体的对映体纯。

被拆分的(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗的立体化学构型使用在JASCOJ-800分光偏振计获得的圆二色性(CD)测量进行确定。将(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗溶解在异丙醇中并使用在室温下1厘米通路长度获得测量值。

固定化β2-AR前沿色谱法。使用上述技术制备包含固定化β2-AR的液相色谱柱(Beigid等人，Anal.Chem.，76：7187-7193，2004)。总而言之，从HEK 293细胞系获得细胞膜，该HEK 293细胞系已被编码人β2-AR的cDNA转染。使用根据micro BCA方法测定的相当于5-7毫克总蛋白的小份细胞小球悬浮液来构建柱。在10毫升缓冲液中制备膜，该缓冲液组成如下：包含MgCl₂(2mM)的Tris-HCl[50mM，pH 7.4]，苄脒(1mM)，亮肽素(0.03mM)，胃酶抑素(0.005mM)和EDTA(1mM)。

将180毫克小份的固定化人工膜色谱载体(IAM-PC，12微米粒子大小，300孔径大小，得自Regis Chemical Co.，Morton Grove，IL)和80μM PC加入到膜制备物中，并将所得混合物在室温下搅拌3小时，转移到(5厘米长度)硝化纤维透析膜(MW截断值10,000Da，PierceChemical，Rockford，IL)并置于处在40℃的1L的透渗析缓冲液中24小时，该透渗析缓冲液组成如下：包含EDTA(1mM)的Tris-HCl[50mM，pH 7.4]，MgCl₂(2mM)，NaCl(300mM)和PMSF(0.2mM)。使用新鲜的缓冲液重复透渗析步骤两次。

在透渗析之后，将混合物在120xg下离心3分钟，弃去上清液并收集包含带有固定化受体的膜的IAM载体小球。将小球再悬浮在2毫升的色谱流动缓冲液中，该缓冲液由包含EDTA(1mM)和MgCl₂(2mM)的Tris-HCl[10mM，pH 7.4]组成，并使用蠕动泵以0.3毫升/分钟的流速将悬浮液泵出HR 5/2色谱玻璃柱(Amersham Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)。装配末端适配器得到0.4毫升的总凝胶柱床体积。当不使用时将柱在4℃下保存。

将包含固定化β2-AR固定相的柱置于色谱系统中，该色谱系统组成如下HPLC泵(10-AD，Shimadzu Inc.，Columbia，MD)、带有50μL样品回路管的手控FPLC注射器(Amersham Biotechnology，Uppsala，Sweden)，填塞的固定化受体柱和在线放射性流检测器(IN/US，Tampa，FL)，所有部件顺序地连接。在前沿色谱研究中，连续地使用5-7毫升的样品提及直到洗脱曲线显示平台区域。流动缓冲液组成如下：包含EDTA(1mM)和MgCl₂(2mM)以及0.05nM[³H]-(+)-非诺特罗(作为标记配体)的Tris-HCl[10mM，pH 7.4]。将(R，R)-非诺特罗或(S，S)-非诺特罗以0.1、80.0、240和700nM的连续浓度加入到流动缓冲液中并施加到柱上。在每个注射试样之间，固定化受体柱用约80毫升的流动缓冲液平衡，不分别添加(R，R)-非诺特罗或(S，S)-非诺特罗。所有的色谱研究在室温下在0.2毫升/分钟的流速进行。

采用非线性方程(1)对数据进行分析以测定结合部位数和离解常数，

其中Vi是溶质的洗脱体积，Vmin是在饱和点的洗脱体积，P是可获得的结合部位的数目，M是标志配体的浓度，以及Kd是配体的离解常数。

配体-置换结合。在用人β2-AR进行腺病毒感染24小时后，在细胞裂解缓冲液中收获HEK293细胞，该缓冲液是包含EGTA[5mM]的Tris-HCl[5mM，pH 7.4]，并在冰上均化15次，样品在30,000xg下离心15分钟以使细胞成小球，将膜再悬浮在结合缓冲液中，该缓冲液是包含NaCl(120mM)、KCl(5.4mM)、CaCl₂(1.8mM)、MgCl₂(0.8mM)和葡萄糖(5mM)的Tris-HCl[20mM，pH 7.4]，并在-80℃下分小份保存。使用饱和量(1-300pM)的β-AR特异性配体[¹²⁵I]氰基吲哚洛尔(ICYP)在5-10μg的膜蛋白上进行结合测定。关于竞争性结合，5-10μg的膜蛋白用50μM的GTPγs(不可水解的鸟苷三磷酸)预先处理，然后与¹²⁵ICYP(50pM)以及不同浓度的非诺特罗或其异构体在250μL的总体积中温育。在20μM普萘洛尔存在的条件下测定非特异性结合。反应在37℃下的250μL的结合缓冲液中进行1小时。结合反应的终止如下进行：添加用冰冷却的Tris-HCl[10mM，pH 7.4]到膜悬浮液中，然后迅速真空过滤通过玻璃纤维纤维过滤器(Whatman GF/C)。每个过滤器用另外7mL用冰冷却的Tris-HCl[10mM，pH 7.4]洗涤三次。在γ粒子计数管中测定湿过滤器的放射性。所有测定一式两份进行，并且将受体密度归一化为膜蛋白的毫克数。通过对饱和结合等势线进行Scatchard分析来测定ICYP的Ka和最大结合部位数(Bmax)。得自竞争性结合研究的数据采用GRAPHPAD PRISM

软件(GRAPHPAD PRISM是GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA的注册商标)，用1位点或2位点竞争结合曲线进行分析。

实施例2

(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗的纯化和鉴定

本实施例说明了从(±)-非诺特罗拆分出(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗到高的对映体纯度。

采用实施例1中所述的色谱分析条件，在AD-CSP上将(±)-非诺特罗分离成其组分对映体(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗。如图1所示，采用对映体选择因子(α)1.21和拆分因子(Rs)1.06来拆分两种立体异构体。因为观察到色谱峰有脱尾，收集和丢弃2毫升中间级分。采用相同的色谱分析条件分析收集的峰并且数据显示两个对映体都以＞97％的立体化学纯度被制得。

被分离的级分绝对构型的归属采用其手性光学(chiroptical)性质完成。两个级分的紫外线(UV)光谱在约280和230都包含相同的最大值，表明两个对映体具有相同的UV发色团。对于较少的被保留的对映体级分而言，圆二色性(CD)光谱在约280和215nm显示负CD带，而该光谱在230和200纳米处显示正值。CD带的符号对于大部分的被保留的非诺特罗级分而言是相反的，这证实了两种级分的对映体性质。两种对映体级分的最低能量UV和圆二色性谱分别如图2A和2B所示。较少的被保留的色谱级分显示在约280纳米处的负CD带，而大部分被保留的色谱级分的圆二色性谱在相同波长下包含正CD带(图2B)。这些结果指出每个级分包含非诺特罗的对映体之一。

最低能量CD带的符号通过采用对于手性苄基衍生物的Brewster-Buta/Smith-Fontana sector规则用于对分离的非诺特罗对映体进行绝对构型的归属(Brewster和Buta，J.Am.Chem.Soc，88：2233-2240，1996)。这一sector规则用于预测与带有羟基或氨基部分的苄基化合物的¹L_b电子跃迁有关的CD带的符号，并且已经主要被应用于包含单个产生立体异构中心的构象可变的芳族化合物。在非诺特罗的情况下，存在两个产生立体形成中心，然而，据信观察到的旋光度主要由芳基甲醇部分来确定，因为在芳环和立体形成中心之间的距离所导致。应用这一规则允许归属得出：包含在较少被保留的级分(其在280纳米下显示负CD带)中所包含的非诺特罗对映体的绝对构型为(S，S)，和包含在大部分被保留的级分(其在280纳米下显示正CD带)中所包含的非诺特罗对映体的绝对构型为(R，R)。这一归属被单独合成的(S，S)-非诺特罗和(R，R)-非诺特罗所证实。

这些研究指出(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗可从(±)-非诺特罗中被分离达到高的对映体纯度。

实施例3

(R，R)-非诺特罗和(5，5)-非诺特罗与固定化β2-AR结合的色谱测定

本实施例说明了(R，R)-非诺特罗负责临床上使用的药物(±)-非诺特罗的β2-AR结合。

先前已经报告了包含从β2-AR HEK-293细胞系获得的固定化膜的液相色谱固定相的制备、表征和应用(Beigi等人，Anal.Chem.，76：7187-7193，2004)。例如，Beigi等人(Anal.Chem.，76：7187-7193，2004)阐述了前沿置换色谱法可用于测定两种β2AR拮抗剂(S)-普萘洛尔和CGP 12177A对固定化β2-AR的结合的解离常数(K_d)。采用CGP12177A作为标志配体的Zonal置换色谱法表明了固定化β2-AR保持其对映体选择性，因为加入(S)-普萘洛尔到流动相比加入(R)-普萘洛尔获得更大置换(同上)。加入(±)-非诺特罗到流动相也显示在固定化β2-AR中发生构型改变(同上)。已有文献记载了激动剂诱导的β2-AR以及大部分G蛋白偶联受体从静止态到激活态的构象变化(Ghanoui等人，Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.，98：5997-6002，2001)。

现在，固定化β2-AR柱用包含作为标志的[³H]-非诺特罗的流动缓冲液平衡，然后开始置换研究。据假设采用前沿置换色谱法计算的结合数据反应出(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗对受体激活态的结合。在前沿色谱法中，色谱描图的最初的平坦部分代表对于固定化靶标具有特异性的标志配体的结合(在该研究中是β2-AR)以及与固定化膜片段上的其它部分的非特异性结合。特异性结合部位的饱和导致在表示建立新平衡的平台后产生突破前沿。加入第二种化合物到流动相中将使色谱描图向左侧移动，如果化合物与标志配体竞争性与β2-AR结合。在该移动的幅度和标记配体浓度之间的关系可用于计算置换剂对靶标的结合亲合力和活性结合部位的数目。最近已综述了该方法(Moaddel和Wainer，Anal.Chem.Acata，546：97-105，2006)。

如图3(曲线1)所示，向流动缓冲液中加入[³H]-非诺特罗得到预期的前沿色谱法描图。顺序地加入浓度增加的(R，R)-非诺特罗到流动缓冲液中产生色谱描图向更小保留体积方向的相应偏移(图3，曲线2-4)。使用等式1分析了(R，R)-非诺特罗的相应浓度的幅度和偏移，计算的离解常数K_d为472nM并且可用的结合部位数[P]为176皮摩尔/柱，r²＝0.9999(n＝T)。

顺序地添加浓度增加的(S，S)-非诺特罗到流动缓冲液中不发生色谱描图向更短保留时间方向的相应偏移。因此，(S，S)-非诺特罗对固定化β2-AR没有显著的亲合性。

为了证实色谱结果，使用从相同的HEK-293细胞系获得的膜(以构建固定化β2-AR柱)进行了标准的膜结合研究。数据反映了对于(R，R)-非诺特罗存在单个结合位点，具有的(平均值±SD)K_d＝457±55nM(n＝4)，对于(S，S)-非诺特罗，K_d＝109,000±10,400nM(n＝4)。这些数据显示了在固定化细胞膜上进行的前沿亲和色谱法可用于测定与目标受体的配体结合的对映体选择性的幅度。另外，得自前沿亲和色谱法和配体竞争性结合研究的结果都表明(R，R)-非诺特罗负责临床上使用的药物(+)-非诺特罗的β2-AR结合。

实施例4

(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗对心肌收缩性的影响

本实施例说明了(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗差别性激活牵涉细胞收缩性信号转导的β2-肾上腺素能受体/刺激性杂三聚体G蛋白(AR/G_s)。

为了确定是否(R，R)-非诺特罗和(S，S)-非诺特罗差别性激活在细胞收缩性的调节中的β2-AR/GS信号转导，使用各种浓度的(R，R)-非诺特罗或(S，S)-非诺特罗对新分离的成年大鼠心肌细胞进行灌注。这些研究使用先前描述的方法进行(Zhou等人，MoI.Pharmacol.，200，58：887-894)。总而言之，通过标准的酶技术从2-4月龄的大鼠心脏中分离出单个的心室肌细胞。将分离的细胞再悬浮在HEPES缓冲溶液[20mM，pH 7.4]，该缓冲液包含NaCl(137mM)，KCl(5.4mM)，MgCl₂(1.2mM)，NaH₂PO₄(1.0mM)，CaCl₂(1.0mM)和葡萄糖(20mM)。在细胞分离物中在8小时内进行所有研究。

将细胞置于倒置显微镜(Zeiss model IM-35，Zeiss，Thornwood，NY)的载物台上，以1.8毫升/分钟的流速灌注HEPES-缓冲液，并在0.5Hz下在230℃下进行电刺激。通过采用时间分辨率为3毫秒的光电二极管阵列(Model 1024 SAQ，Reticon，Boston，MA)的光学边缘-跟踪方法监控细胞长度。在电刺激后通过测量细胞长度的缩短的百分数测量细胞收缩。

加入(R，R)-非诺特罗(10^-8到10^-5M)，相对于(±)-非诺特罗，产生显著提高的正性肌力作用和显著的剂量-应答曲线向上偏移，(图4A)。着通过最大收缩应答从265±11.6％增加到306±11.8％休止细胞长度(p＜0.05)和EC₅₀从-7.0±0.2降低到-7.1±0.2log[M](p＜0.05)进行说明。相比之下，(S，S)-非诺特罗只有较小的正性肌力作用(图4B)。

心肌细胞收缩性研究指出(R，R)-非诺特罗负责在心肌细胞中观察到的β2-AR激动剂活性。

实施例5

合成

一般过程：所有反应采用商品级的试剂和溶剂进行。四氢呋喃(THF)通过与钠和二苯甲酮回流进行干燥。二氯甲烷通过与氢化钙回流进行干燥。在Cary 50 Concentration分光光度计上记录紫外光谱。在RudolphResearch Autopol IV上进行旋光度测定。在Varian Mercury VMX300-MHz分光光度计上采用四甲基硅烷作为内标记录NMR谱。使用以下缩写报导NMR峰裂数：s，单峰；d，双重线；t，三重峰；q，四重峰；p，五重峰；m，多重峰；apt.，明显；和br，宽峰。低分辨率质谱在装备有电喷射(ESI)和大气压力化学电离(APCI)探针的FinniganLCQ^Duo LC MS/MS大气压力化学电离(API)四极离子阱MS系统上获得。分析性HPLC数据采用具有PDA检测的Waters 2690 SeparationsModule获得。方法(a)：ThermoHypersil BDS 100×4.6mm C18柱，H₂O/CH₃CN/TFA。方法(b)：Brownlee Phenyl Spheri-5 100×4.6mm，水/乙腈/TFA。方法(c)：Vydac 150×4mm C18柱，H₂O/异丙醇/TFA。方法(d)：CHIRALPAK

AD-H 250×10mm，95/5/0.05 CH₃CN/异丙醇/二乙胺。使用Merck硅胶(230-400目)用于开放式柱色谱法(open columnchromatography)。

3′，5′-二苄氧基-α-溴代苯乙酮(46)。将2.4mL(46mmol)的Br₂在45mL的CHCl₃中的溶液在1小时内滴加到搅拌的9.66g(29mmol)的3′，5′-二苄氧基苯乙酮(45)在40mL的CHCl₃中的溶液中，所得溶液在良好搅拌下在1小时内回温到室温，然后倾入到100mL的冷水中并被转移到分液漏斗中，在分液漏斗中分离CHCl₃级分，用盐水溶液洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩到10.8g，该材料被施加到500g硅胶上，用CHCl₃洗脱获得2.65g(22％)的化合物46，为白色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ4.39(s，2H)，5.08(s，4H)，6.85(t，1H，J＝2.1Hz)，7.20(d，2H，J＝2.4Hz)，7.31-7.44(m，10H)。

用于将化合物46进行对映体选择性还原得到3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇[(R)-8，(S)-8]的一般过程。在氩气氛下，将～0.06mL(0.316mmol，10mol％)的在乙醚中的5.0M硼-二甲硫醚复合物(BH₃SCH₃)一次性加入到25mg(0.16mmol，5mol％)的适当的顺式-1-氨基-2-茚满醇在3mL的无水THF中的溶液中，该材料在氩气氛下在30分钟内被加入到1.3g(3.16mmol)的3′，5′-二苄氧基-α-溴代苯乙酮在20mL的无水THF中的溶液中，同时以每次～0.05mL加入0.45mL的5.0M硼-的二甲硫醚复合物。所得溶液在氩气氛下搅拌2小时，然后用3mL甲醇淬灭，控制气体放出。真空除去溶剂，将所得残余物集聚在30mL CHCl₃中并用25mL的0.2M硫酸洗涤，然后用20mL盐水洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。

(R)-(-)-3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇[R-8]。使用(1R，2S)-(+)-顺式-1-氨基-2-茚满醇作为对映体选择性还原催化剂制备，得到1.02g(78％)的(R)-8，为白色细粉末。¹H NMR(CDCl₃)δ3.44(dd，1H，J＝9.0，10.5Hz)，3.55(dd，1H，J＝3.3，10.5Hz)，4.79(dd，1H，J＝3.3，8.7Hz)，4.97(s，4H)，6.51(t，1H，J＝2.4Hz)，6.57(d，2H，J＝1.8Hz)，7.21-7.38(m，10H)；[α]_D＝-12.1°(c＝1.0MeOH)。

(S)-(+)-3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇[(S)-8]。使用(1S，2R)-(-)-顺式-1-氨基-2-茚满醇作为对映体选择性还原催化剂制备，得到1.07g(82％)的(S)-8，为白色细粉末。¹H NMR(CDCl₃)δ3.43(dd，1H，J＝9.0，10.5Hz)，3.55(dd，1H，J＝3.3，10.5Hz)，4.78(dd，1H，J＝3.3，8.7Hz)，4.96(s，4H)，6.50(t，1H，J＝2.4Hz)，6.57(d，2H，J＝1.8Hz)，7.21-7.39(m，10H)；[α]_D＝+11.8°(c＝0.90MeOH)。

4-苄氧基苯乙酮(34)。向10.0g(41.3mmol)的4-苄氧基苯基乙酸(31)中加入20mL的乙酸酐和20mL的吡啶，其在搅拌下在氩气氛下加热回流6小时，蒸发溶剂，将残余物溶解在CHCl₃(50mL)中，并用1NNaOH(2×50mL)洗涤，干燥有机层(MgSO₄)，过滤并蒸发得到11.8g的琥珀色油状物。在设置在170℃的油浴中进行0.1mm Hg的真空蒸馏，然后进行用8/2的CH₂Cl₂-己烷洗脱的硅胶色谱法，得到2.68g(27％)。¹H NMR(CDCl₃)δ2.14(s，3H)，3.63(s，2H)，5.05(s，2H)，6.94(d，2H，J＝8.7Hz)，7.10(d，2H，J＝8.7Hz)，7.26-7.47(m，5H)。

苯乙酮(35)。将20.4g(0.15mol)的苯基乙酸、乙酸酐(70mL)和吡啶(70mL)的溶液在搅拌下在氩气氛下加热回流6小时，蒸发溶剂并将残余物溶于CHCl₃(100mL)中，用1N NaOH(2×100mL)洗涤并干燥有机层(MgSO₄)，过滤并蒸发得到20.4g。在设置在160℃的油浴中进行0.1mm Hg的真空蒸馏，然后进行用1/1的己烷/CH₂Cl₂洗脱的硅胶色谱法，得到5.5g(27％)。¹H NMR(CDCl₃)δ2.15(s，3H)，3.70(s，2H)，7.20-7.36(m，5H)。

1-萘-1-基-丙烷-2-酮(36)。将37.2g(20mmol)的萘甲酸(33)、乙酸酐(100mL)和吡啶(100mL)的溶液在搅拌下在氩气氛下加热回流6小时，蒸发溶剂，将残余物溶解在CHCl₃(200mL)中，用1N NaOH(2×150mL)洗涤并干燥有机层(MgSO₄)，过滤并蒸发得到34.6g。在设置在170℃的油浴中进行0.5mm Hg的真空蒸馏，然后进行用1/1的己烷/CH₂Cl₂洗脱的硅胶色谱法，得到9.7g(26％)。¹H NMR(CDCl₃)δ2.11(s，3H)，4.12(s，2H)，7.40-7.53(m，4H)，7.81(d，1H，J＝8.4Hz)，7.87-7.90(m，2H)。

制备2-苄基氨基丙烷(37-39，42，43)的一般过程。向冷却到0℃的在CH₂Cl₂(c＝0.5M)中的适当的酮(1eq)中加入冰醋酸(1eq)，然后加入苄基胺(1eq)和NaBH(AcO)₃(1.4eq)，将反应混合物回温到室温并在氩气氛下搅拌20小时，将反应混合物冷却(冰浴)，滴加10％NaOH(5eq)，然后提取到CH₂Cl₂中，用盐水洗涤，然后将产物干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。

1-(4-苄氧基)-2-苄基氨基丙烷(37)。从4-苄氧基-苯乙酮(34；2.0g，8.3mmol)制备，得到2.61g(95％)，为黄褐色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.50-2.58(m，1H)，2.68-2.77(m，1H)，2.82-2.89(m，1H)，3.75(dd，2H，J＝12Hz，J＝30Hz)，5.05(s，2H)，6.90(d，2H，J＝8.7Hz)，7.04(d，2H，J＝8.7Hz)，7.17-7.42(m，10H)；MS(APCI+)m/z(rel)：332(100)。

1-苯基-2-苄基氨基丙烷(38)。从苯乙酮(35；5.5g，41mmol)制备，得到8.4g(91％)，为黄褐色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.09(d，3H，J＝6.3Hz)，2.61-2.81(m，2H)，2.92(m，1H)，3.80(dd，2H)，7.14-7.30(m，10H)；MS(APCI+)m/z(rel)：226(100)。

1-(1′-萘基)-2-苄基氨基丙烷(39)。从1-萘-1-基-丙烷-2-酮(36；5.0g，27.1mmol)制备，得到7.0g(94％)，为黄褐色固体。¹H NMR(CDCl₃)δ1.14(d，3H，J＝6.0Hz)，3.02-3.18(m，2H)，3.27(m，1H)，3.80(dd，2H，J＝13.2，43.8Hz)，7.13-7.23(m，5H)，7.31-7.48(m，4H)，7.73(d，1H，J＝7.8Hz)，7.83-7.86(m，1H)，7.96-7.99(m，1H)；MS(APCI+)m/z(rel)：276(100)。

1-(4′-甲氧基苯基)-2-苄基氨基丙烷(42)。从4-甲氧基苯乙酮(40；2.75g，13.1mmol)制备，得到2.31g(97％)。¹H NMR(CDCl₃)δ1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.56-2.75(m，2H)，2.90(m，1H)，3.79(s，1H)，3.79(m，2H，J＝13.2Hz)，6.82(d，2H，J＝8.7Hz)，7.07(d，2H，J＝8.7Hz)，7.18-7.32(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：256(100)。

1-(4′-硝基苯基)-2-苄基氨基丙烷(43)。从4-硝基苯乙酮(41；4.95g，28mmol)制备，得到7.32g(98％)，为琥珀色油状物。¹H NMR(CDCl₃)δ1.60(d，3H，J＝6.3Hz)，2.73-2.85(m，1H)，3.00-3.12(m，2H)，3.86(dd，2H，J＝26Hz，J＝60Hz)，7.23-7.40(m，5H)，7.30(d，2H，J＝9.0Hz)，8.14(d，2H，J＝8.7Hz).MS(APCI+)m/z(rel)：271(100)。

2-苄基氨基丙烷[(R)-10-14，(S)-10-14]的对映体分离的一般过程。将适当的外消旋的2-苄基氨基丙烷(1eq)与适当的光学活性的扁桃酸(1eq)在甲醇(c＝0.5M)中合并并回流直到溶液变均匀，然后冷却到室温，晶体被过滤、收集、结晶，并从甲醇(c＝0.3M)中重结晶两次，得到光学活性的2-苄基氨基丙烷扁桃酸盐，通过在10％K₂CO₃和CHCl₃之间分配扁桃酸盐将盐转化为游离胺，用于收集NMR和旋光数据，干燥有机提取物(Na₂SO₄)并蒸发。

(R)-(-)-1-(4′-苄氧基)-2-苄基氨基丙烷[(R)-10]。将2.13g(6.42mmol)的1-(4-苄氧基)-2-苄基氨基丙烷(37)与972mg(6.42mmol)的(R)-(-)-扁桃酸反应，在后处理后得到295mg(28％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.12(d，3H，J＝6.3Hz)，2.58-2.78(m，2H)，2.82-2.91(m，1H)，3.75(dd，2H，J＝12Hz，J＝30Hz))，5.07(s，2H)，6.93(d，2H，J＝8.7Hz)，7.10(d，2H，J＝8.7Hz)，7.21-7.42(m，10H)；MS(APCI+)m/z(rel)：332(100)；[α]_D＝-19.1°(c＝1.4，MeOH)。

(S)-(+)-1-(4′-苄氧基)-2-苄基氨基丙烷[(S)-10]。将从(R)-10的分离时所得的洗液浓缩并在50mL氯仿和50mL的10％的K₂CO₃的水溶液中分配，有机物用盐水洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发达到1.70g(5.1mmol)，有机物与782mg(5.1mmol)的(S)-(+)-扁桃酸(如前所述)回流并结晶3次，获得670mg的(S)-胺·(S)-扁桃酸盐。(S)-胺·(S)-扁桃酸盐在醚中研磨，然后在30mL氯仿和20mL 10％的K₂CO₃的水溶液中分配，有机分离物用盐水洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发，得到366mg的游离胺(33％，基于对映体丰度)。¹H NMR(CDCl₃)δ1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.58-2.78(m，2H)，2.82-2.91(m，1H)，3.76(dd，2H，J＝12，30Hz)，5.06(s，2H)，6.93(d，2H，J＝8.7Hz)，7.09(d，2H，J＝8.7Hz)，7.21-7.42(m，10H)；MS(APCI+)m/z(rel)：332(100)；[α]_D＝+19.2°(c＝1.5MeOH)。

(R)-(-)-1-(4′-甲氧基苯基)-2-苄基氨基丙烷[(R)-11]。将3.02g(11.8mmol)的1-(4′-甲氧基苯基)-2-苄基氨基丙烷(42)的样品与1.8g(11.8mmol)的(R)-(+)-扁桃酸反应，在后处理后得到530mg(35％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.10(d，3H，J＝6.3Hz)，2.57-2.76(m，2H)，2.88-2.94(m，1H)，3.79(s，3H)，3.72-3.88(m，2H)，6.82(d，2H，J＝8.7Hz)，7.07(d，2H，J＝8.4Hz)，7.15-7.31(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：256(100)；[α]_D＝-30.4°(c＝1.25MeOH)。

(S)-(+)-1-(4′-甲氧基苯基)-2-苄基氨基丙烷[(S)-11]。将3.36g(13.2mmol)的外消旋物1-(4′-甲氧基苯基)-2-苄基氨基丙烷(42)的样品与2.0g(13.2mmol)的(R)-(-)-扁桃酸反应，在后处理后得到740mg(44％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR，(CDCl₃)δ1.10(d，3H，J＝6.2Hz)，2.55-2.76(m，2H)，2.88-2.95(m，1H)，3.73-3.88(m，2H)，3.79(s，3H)，6.80(d，2H，J＝8.7Hz)，7.08(d，2H，J＝8.4Hz)，7.15-7.30(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：256(100)；[α]_D＝+30.5°(c＝1.1MeOH)。

(R)-(-)-1-(4′-硝基苯基)-2-苄基氨基丙烷[(R)-12]。将2.0g(7.3mmol)的1-(4′-硝基苯基)-2-苄基氨基丙烷(43)的样品与1.13g(7.3mmol)的(S)-(+)-扁桃酸反应，在后处理后得到486mg(49％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.60(d，3H，J＝6.3Hz)，2.73-2.85(m，1H)，3.00-3.12(m，2H)，3.86(dd，2H，J＝26Hz，J＝60Hz)，7.23-7.40(m，5H)，7.30(d，2H，J＝9.0Hz)，8.14(d，2H，J＝8.7Hz)；MS(APCI+)m/z(rel)：271(100)；[α]_D＝-9.3°(c＝1.0MeOH)。

(S)-(+)-1-(4′-硝基苯基)-2-苄基氨基丙烷[(S)-12]。将2.0g(7.3mmol)的1-(4′-硝基苯基)-2-苄基氨基丙烷(43)的样品与1.13g(7.3mmol)的(R)-(-)-扁桃酸反应，在后处理后得到640mg(65％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.60(d，3H，J＝6.3Hz)，2.73-2.85(m，1H)，3.00-3.12(m，2H)，3.86(dd，2H，J＝26，60Hz)，7.23-7.40(m，5H)，7.30(d，2H，J＝9.0Hz)，8.14(d，2H，J＝8.7Hz)；MS(APCI+)m/z(rel)：271(100)；[α]_D＝+8.2°(c＝1.0MeOH)。

(R)-(-)-1-苯基-2-苄基氨基丙烷[(R)-13]。将2.62g(11.6mmol)的1-苯基-2-苄基氨基丙烷(38)的样品与1.77g(11.6mmol)的(S)-(+)-扁桃酸反应，在后处理后得到747mg(57％，基于对映体丰度)的游离胺。¹HNMR(CDCl₃)δ1.13(d，3H，J＝6.0Hz)，2.62-2.84(m，2H)，2.92-2.99(m，1H)，3.81(dd，2H，J＝13.2，34.5Hz)7.14-7.29(m，10H)；MS(APCI+)m/z(rel)：226(100)；[α]_D＝-24.5°(c＝1.10MeOH)。

(S)-(+)-1-苯基-2-苄基氨基丙烷[(S)-13]。将5.0g(22.2mmol)的外消旋的1-苯基-2-苄基氨基丙烷(38)的样品与3.4g(22.2mmol)的(R)-(-)-扁桃酸反应，在后处理后得到2.15g(86％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.11(d，3H，J＝6.0Hz)，2.62-2.84(m，2H)，2.92-2.99(m，1H)，3.81(dd，2H，J＝13.2，34.5Hz)，7.14-7.29(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：226(100)；[α]_D＝+18.2°(c＝0.85MeOH)。

(R)-(-)-1-(1′-萘基)-2-苄基氨基丙烷[(R)-14]。将从(S)-14的分离中回收的洗液浓缩并在40mL三氯甲烷和40mL 10％的K₂CO₃的水溶液之间分配，有机分离物用20mL盐水洗涤，然后干燥(Na₂SO₄)，得到1.16g(4.2mmol)的游离胺，其与640mg(4.2mmol)的(S)-(+)-扁桃酸反应，得到588mg(46％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.07(d，3H，J＝6.0Hz)，3.02-3.18(m，2H)，3.27(m，1H)，3.74(dd，2H，J＝13.2，30.9Hz)，7.13-7.23(m，5H)，7.31-7.48(m，4H)，7.73(d，1H，J＝7.8Hz)，7.83-7.86(m，1H)，7.96-7.99(m，1H)；MS(APCI+)m/z(rel)：276(100)；[α]_D＝-5.8°(c＝1.0MeOH)。

(S)-(+)-1-(1′-萘基)-2-苄基氨基丙烷[(S)-14]。将2.6g(9.4mmol)的1-(1′-萘基)-2-苄基氨基丙烷(39)的样品与1.44g(9.4mmol)的(R)-(-)-扁桃酸反应，在后处理后得到420mg(21％，基于对映体丰度)的游离胺。¹H NMR(CDCl₃)δ1.07(d，3H，J＝6.0Hz)，3.02-3.18(m，2H)，3.27(m，1H)，3.74(dd，2H，J＝13.2，30.9Hz)，7.13-7.23(m，5H)，7.31-7.48(m，4H)，7.73(d，1H，J＝7.8Hz)，7.83-7.86(m，1H)，7.96-7.99(m，1H)；MS(APCI+)m/z(rel)：276(100)；[α]_D＝+6.3°(c＝1.0MeOH)。

(R)-(-)-2-苄基氨基庚烷[(R)-15]。将0.65mL(4.4mmol)的(R)-(-)-2-氨基庚烷(R-44)的样品、0.44mL(4.4mmol)的苯甲醛和0.1mL的HOAc在40mL的CH₂Cl₂中合并，然后冷却到0℃，向反应混合物中一次性加入2.75mg(13mmol)的三乙酰氧基硼氢化钠，其在室温下在氩气氛下搅拌28小时，反应混合物用30mL CH₂Cl₂稀释，在冰浴中冷却并加入80mL的5％NaOH(在水中)，分离级分，有机物经干燥(Na₂SO₄)和蒸发，得到638mg(71％)的(R)-15。¹H NMR(CDCl₃)δ0.88(m，3H)，1.08(d，3HJ＝6.6Hz)，1.20-1.39(m，6H)，1.41-1.67(m，2H)，3.62-3.77(m，1H)，3.75(p，2H，J＝12Hz)，7.17-7.41(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：206(100)；[α]_D＝+6.9°(c＝1.0，MeOH)。

(S)-(+)-2-苄基氨基庚烷[(S)-15]。将0.15mL(1mmol)的(S)-(+)-2-氨基庚烷((S)-44)的样品、0.1mL(1mmol)的苯甲醛和0.1mL的HOAc在10mL的CH₂Cl₂中合并，并冷却到0℃，然后一次性加入650mg(3mmol)的三乙酰氧基硼氢化钠，反应混合物在室温下在氩气氛下搅拌28小时，混合物用10mL的二氯甲烷稀释，在冰浴中冷却并加入20mL的5％NaOH(在水中)，分离级分，有机物经干燥(Na₂SO₄)和蒸发，得到154mg(70％)。¹H NMR(CDCl₃)δ0.88(m，3H)，1.08(d，3H J＝6.6Hz)，1.19-1.37(m，6H)，1.41-1.67(m，2H)，3.62-3.77(m，1H)，3.75(p，2H，J＝12Hz)，7.17-7.41(m，5H)；MS(APCI+)m/z(rel)：206(100)；[α]_D＝+7.8°(c＝1.0，MeOH)。

非诺特罗类似物的制备，过程A。为了形成环氧化物，将适当的3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇((R)-8)或(S)-8(1eq)与K₂CO₃(1.4eq)在1∶1的THF/MeOH(c＝0.3M)中合并并在室温下在氩气氛下搅拌2小时，除去溶剂，残余物在甲苯和水之间分配，分离甲苯级分，干燥(Na₂SO₄)，过滤并蒸发。将残余物用适当的游离苄基胺(R)-或(S)-10-15，28(0.95eq)在足够量的甲苯中溶解，并再次真空蒸发以除去痕量的水，所得的无色的残余物在氩气氛下被加热到120℃达20小时，冷却并通过¹H NMR和质谱学检测以确认连接。在加热下将残余物溶于EtOH(c＝0.07M)中并转移到Parr烧瓶中，在烧瓶中在50psi的氢气下使用10％(wt)Pd/C(10mg催化剂/65mg溴代醇)进行氢化24小时，通过质谱学证实完成脱苄基化。将混合物过滤通过硅藻土，滤饼用异丙醇漂洗，将滤液浓缩，将残余物溶于1∶1的异丙醇/EtOH(c＝0.2M)中，并与0.5eq的富马酸回流30分钟，将反应冷却并除去溶剂，粗物质通过开放式柱色谱仪或制备型色谱法纯化。

(R，R)-1和(S，S)-1的柱分离，过程B。将75mg的非诺特罗HBr的样品溶于1.5mL的95/5/0.05CH₃CN/异丙醇/HNEt₂中并注射100μL到CHIRALPAKAD-H 10×250mm 5μm半制备柱中，该半制备柱采用Waters 2690 Separations Module，PDA设置在280nm。洗脱溶剂为95/5/0.05的CH₃CN/异丙醇/HNEt₂，5mL/min。(S，S)和(R，R)异构体的保留时间分别是4.8分钟和7.8分钟。

(R，R)-(-)-非诺特罗[(R，R)-1]。根据过程B获得，蒸发后收集，得到40mg。¹H NMR(CD₃OD)δ1.05(d，3H，J＝6.3Hz)，2.49(q，1H，J＝6.9Hz)，2.62-2.74(m，2H)，2.80-2.91(m，2H)，4.55(dd，1H，J＝5.1，J＝3.3Hz)，6.16(t，1H，J＝2.4Hz)，6.27(d，2H，J＝2.1Hz)，6.68(d，2H，J＝8.4Hz)，6.94(d，2H，J＝8.4Hz)；¹³C NMR(CD₃CN)δ20.3，43.2，55.1，55.2，72.4，102.2，105.4，116.0，131.3，131.8，147.4，156.2，159.0；UV(MeOH)λmax279nm(ε2,760)，225(12,900)，204(32,600)；MS(APCI+)m/z(rel)：304(100，M+H)；[α]_D＝-29.0°(浓度＝0.2％MeOH)；HPLC：(a)0.1％二乙胺在H₂O中，0.50mL/min，254nm，t_R 2.90min，99％纯；(d)t_R 7.8min，＞99％纯。

(S，S)-(+)-非诺特罗[(S，S)-1]。根据过程B获得，蒸发后得到35mg。¹H NMR(CD₃OD)δ1.05(d，3H，J＝6.6Hz)，2.49(q，1H，J＝7.2Hz)，2.62-2.76(m，2H)，2.80-2.94(m，2H)，4.55(dd，1H，J＝4.8，J＝3.3Hz)，6.16(t，1H，J＝2.1Hz)，6.27(d，2H，J＝2.4Hz)，6.68(d，2H，J＝8.4Hz)，6.94(d，2H，J＝8.4Hz)；¹³C(CD₃CN)δ20.3，43.2，55.0，55.2，72.4，102.2，105.4，116.0，131.3，131.8，147.4，156.2，159.0；UV(MeOH)λmax 279nm(ε2,680)，224(12,700)，204(32,800)；MS(APCI+)m/z(rel)：304(100，M+H)；[α]_D＝+28.5°(浓度＝0.20％MeOH)；HPLC：(a)0.1％二乙胺，在H₂O中，0.50mL/min，254nm，t_R 2.72min，＞99％纯；(d)t_R 4.8min，＞99％纯。

(R，S)-(-)-非诺特罗富马酸盐[(R，S)-1]。根据过程A从(R)-8和(S)-10制备，得到168mg(64％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.22(d，3H，J＝6.6Hz)，2.64(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝13.2Hz)，3.01-3.51(m，4H)，4.79(dd，1H，J＝3.0Hz，J＝9.9Hz)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.36(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，1H)，6.76(d，2H，J＝8.4Hz)，7.05(d，2H，J＝8.1Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.2，39.1，52.5，57.4，70.4，103.4，105.3，116.7，127.8，131.4，135.2，144.6，157.7，160.0，168.2；UV(MeOH)λmax 278nm(ε2,520)，205(27,900)；MS(ESI+)m/z(rel)：304(100，M+H)；[α]_D＝-7.5°(浓度＝0.75％MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05.1.00mL/min，282nm，t_R 1.35min，＞99％纯；(b)50/50/0.05.1.0ml，0.50mL/min，254nm，t_R 2.72min，＞99％纯；(d)t_R4.8min，1.00mL/min，280nm，t_R 2.10min，97.5％纯。

(S，R)-(+)-非诺特罗富马酸盐[(S，R)-1]。根据过程A从(S)-8和(R)-10制备，得到104mg(39％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.22(d，3H，J＝6.6Hz)，2.64(dd，1H，J＝9.9Hz，J＝13.5Hz)，3.47-3.04(m，4H)，4.80(dd，1H，J＝2.7，J＝9.6Hz)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.36(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，1H)，6.76(d，2H，J＝8.4Hz)，7.05(d，2H，J＝8.4Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.2，39.1，52.5，57.4，70.4，103.4，105.3，116.7，127.8，131.4，135.2，144.6，157.7，159.9，168.2；UV(MeOH)λmax 278nm(ε2,640)，202(36,600)；MS(ESI+)m/z(rel)：304(100，M+H)，413(10)；[α]_D＝+6.4°(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.00mL/min，282nm，t_R 1.35min，95.9％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，280nm，t_R 2.06min，99％纯。

(R，R)-(-)-1-对-甲氧基苯基-2-(β-3′，5′-二羟基-苯基-β-氧基)乙基氨基-丙烷富马酸盐[(R，R)-2]。根据过程A，从(R)-8和(R)-11制备，得到172mg(38％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.08(d，3H，J＝6.3Hz)，3.05-2.56(m，5H)，4.57(dd.IH，J＝8.4，5.4Hz)，6.16(m，1H)，6.26(d，2H，J＝2.7Hz)，6.81(d，2H，J＝8.7Hz)，7.03(d，2H J＝8.7Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ18.8，42.3，54.5，55.6，56.0，72.6，103.0，105.4，115.0，131.1，131.2，131.3，146.2，159.8，159.9；UV(MeOH)λmax  277nm(ε3,590)，224(17,700)，207(29,500)；MS(ESI+)m/z(rel)：318(100，M+H)；[α]_D＝-24.9°(c＝0.8MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.0mL/min，282nm，t_R 1.54min，96.5％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，t_R 1.51min，95.9％纯。

(S，S)-(+)-1-对-甲氧基苯基-2-(β-3′，5′-二羟基-苯基-β-氧基)乙基氨基-丙烷富马酸盐[(S，S)-2]。根据过程A，从(S)-8和(S)-11制备，得到318mg(53％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.15(d，3H，J＝6.0Hz)，2.58-3.22(m，5H)，3.77(s，3H)，4.68(dd，1H，J＝4.8，8.4Hz)，6.18(t，1H，J＝2.1Hz)，6.31(d，2H，J＝2.1Hz)，2.23(s，0.5H，富马酸盐)，6.84(d，2H，J＝8.7Hz)，7.10(d，2H，J＝9.0Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.1，39.9，52.4，54.5，55.3，70.4，101.9，104.2，114.0，129.2，130.1，144.4，158.7，158.9；UV(MeOH)λmax 277nm(ε2,100)，224(11,00)，205(22,700)；MS(ESI+)m/z(rel)：318(100，M+H)；[α]_D＝+28.6°(c＝0.95 MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.0mL/min，282nm，制备1.67min，96.0％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.51min，97.1％纯。

(R，S)-(-)-1-对-甲氧基苯基-2-(β-3′，5′-二羟基-苯基-β-氧基)乙基氨基丙烷富马酸盐[(R，S)-2]。根据过程A，从(R)-8和(S)-11制备，得到160mg(38％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.20(d，3H，J＝6.6Hz)，2.62-2.71(m，1H)，2.98-3.20(m，3H)，3.30-3.42(m，2H)，4.73-4.81(m，1H)，6.21(m，2H)，3.35(m，2H)，6.71(s，0.5H，富马酸盐)，6.56-6.89(m，2H)，7.11-7.19(m，2H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ15.6，38.5，51.8，54.5，55.9，69.7，102.1，104.1，114.1，128.5，130.2，136.0，143.8，158.8，159.1；UV(MeOH)λmax 277nm(ε4,100)，224(21,400)，203(50,600)；MS(ESI+)m/z(rel)：318(100，M+H)；[α]_D＝-7.2°(c＝1.5MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.00mL/min，282nm，t_R1.40min，99％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，t_R 1.51min，96.1％纯。

(S，R)-(+)-1-对-甲氧基苯基-2-(β-3′，5′-二羟基苯基-β-氧基)乙基氨基丙烷富马酸盐[(S，R)-2]。根据过程A，从(S)-8和(R)-11制备，得到200mg(51％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.12(d，3H，J＝6.0Hz)，2.58-3.13(m，5H)，3.77(s，3H)，4.62(dd，1H，J＝3.6，9.0Hz)，6.15(m，1H)，6.30(d，2H，J＝1.8Hz)，6.85(d，2H，J＝8.7Hz)，7.11(d，2H，J＝8.7Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ18.2，41.4，54.1，55.7，56.5，64.7，103.0，105.3，115.1，130.7，131.3，145.9，159.8，160.0；UV(MeOH)λmax 277nm(ε3,150)，224(3,310)，205(30,600)；MS(ESI+)m/z(rel)：318(100，M+H)；[α]_D＝+14.1°(c＝0.95MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.00mL/min，282nm，制备1.42min，97.7％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.52min，97.8％纯。

(R，R)-(-)-5-{2-[2-(4-氨基苯基)-1-甲基乙基氨基]-1-羟基乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，R)-3]。根据过程A，从(R)-8和(R)-12制备，得到88mg(42％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.23(m，3H)，2.70-3.24(m，4H)，3.54(m，1H)，4.84(dd，1H，J＝3.3，9.6Hz)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.38(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，2H，富马酸盐)，7.35(dd，4H，J＝8.1，21.0Hz)；13C(CD₃OD)δ15.5，39.6，52.7，56.6，70.3，103.4，105.3，123.8，132.0，132.1，135.2，137.5，144.7，160.0，168.1；UV(MeOH)λmax 284nm(ε1,520)，206(21,700)；MS(ESI+)m/z(rel)：303(100，M+H)；[α]_D＝-6.8°(浓度＝1.0％MeOH)；HPLC：(a)80/20/0.05，0.70mL/min，276nm，t_R 2.07min，95.5％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，282nm，t_R 2.60，97.16％纯。

(S，S)-(+)-5-{2-[2-(4-氨基苯基)-1-甲基乙基氨基]-1-羟基乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(5，5)-3]。根据过程A，从(S)-8和(S)-12制备，得到56mg(25％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.23(m，3H)，2.62-3.27(m，4H)，3.55(m，1H)，4.74-4.88(m，1H)，6.22(t，1H，J＝1.8Hz)，6.37(d，2H，J＝2.4Hz)，6.75(s，2H，富马酸盐)，7.32(dd，4H，J＝8.7，25.8Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ15.5，39.6，52.5，56.7，70.7，103.4，105.3，123.3，131.8，132.0，135.2，136.9，144.7，160.0，168.1；UV(MeOH)λmax 284nm(ε1,720)，207(28,400)；MS(ESI+)m/z(rel)：303(100，M+H)，329(20)；[α]_D＝+11.1°(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(a)80/20/0.05，0.7mL/min，276nm，制备2.01min，＜99％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，282nm，制备2.50min，99.4％纯。

(R，S)-(-)-5-{2-[2-(4-氨基苯基)-1-甲基乙基氨基]-1-羟基乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，S)-3]。根据过程A，从(R)-8和(S)-12制备，得到72mg(35％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.23(m，3H)，2.73-3.24(m，4H)，3.51(m，1H)，4.80(dd，1H，J＝2.7，9.6Hz)，6.22(t，1H，J＝2.1Hz)，6.36(d，2H，J＝2.4Hz)，6.75(s，2H，富马酸盐)，7.32(dd，4H，J＝8.4，25.2Hz)；¹³CNMR(CD₃OD)δ16.1，39.12，5.16，56.9，70.4，103.4，105.3，123.4，132.0，132.0，135.2，136.8，144.6，160.，168.10；UV(MeOH)λmax 284nm(ε1,620)，205(27,200)；MS(ESI+)m/z(rel)：303(100，M+H)，134(14)；[α]_D＝-7.5°(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(a)80/20/0.05，0.7mL/min，276nm，t_R 2.08min，95.0％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，282nm，t_R 2.51min，97.4％纯。

(S，R)-(+)-5-{2-[2-(4-氨基苯基)-1-甲基乙基氨基]-1-羟基乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，R)-3]。根据过程A，从(S)-8和(R)-12制备，得到93mg(42％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.23(d，3H，J＝6.3Hz)，2.70-3.78(m，4H)，3.42-3.62(m，1H)，4.80(dd，1H，J＝3.0，9.9Hz)，6.22(t，1H，J＝2.1Hz)，6.37(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，2H，富马酸盐)，7.33(dd，4H，J＝8.4，26.7Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.2，39.1，52.6，56.9，70.5，103.4，105.3，123.5，132.1，133.7，135.2，137.1，144.7，160.0，168.1UV(MeOH)λmax284nm(ε8,230)，207(100,000)；MS(ESI+)m/z(rel)：303(100，M+H)，134(18)；[CC]D＝+11.4°(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(a)70/30/0.05，1.00mL/min，280nm，t_R 1.45min，99％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，282nm，t_R 2.63min，95.33％纯。

(R，R)-(-)-5-[1-羟基-2-(1-甲基-2-苯基乙基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，R)-4]。根据过程A，从(R)-8和(R)-13制备，得到92mg(26％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.22(m，3H)，2.68-3.28(m，2H)，3.10-3.28(m，2H)，3.53(br-m，1H)，4.75-4.80(m，1H)，6.24(t，1H，J＝2.4Hz)，6.38(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，1H，富马酸盐)，7.22-7.33(m，5H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ15.5，40.3，56.9，70.2，103.4，105.3，128.3，129.9，130.3，135.2，137.3，144.6，144.6，159.9，168.1；UV(MeOH)λmax 277nm(ε926)，204(18,700)；MS(APCI+)m/z 288(100，M+H)；[α]_D＝-21.2°(浓度＝0.85％MeOH)；HPLC：(a)50/50/0.05，1.00mL/min，282nm；制备1.73min；99％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.46min，97.5％纯。

(S，S)-(+)-5-[1-羟基-2-(1-甲基-2-苯基乙基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，S)-4]。根据过程A，从(S)-8和(S)-13制备，得到184mg(51％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.21(m，3H)，2.70-3.13(m，2H)，3.15-3.23(m，2H)，3.54(br-m，1H)，4.79-4.86(m，1H)，6.24(t，1H，J＝2.1Hz)，6.39(t，2H，J＝2.7Hz)，6.76(s，1H，富马酸盐)，7.22-7.32(m，5H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ15.5，40.3，56.9，70.2，103.4，105.3，128.3，129.9，130.3，135.1，137.3，144.6，144.6，159.9，168.1UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,510)，207(26,600)；MS(APCI+)m/z 288(100，M+H)；[α]_D＝+19.3°(浓度＝0.90％MeOH)；HPLC：(a)50/50/0.05，1.00mL/min，282nm，制备1.49min；98.4％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.35min，99％纯。

(R，S)-(-)-5-[1-羟基-2-(1-甲基-2-苯基乙基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，S)-4]。根据过程A，从(R)-8和(S)-13制备，得到170mg(45％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.22(m，3H)，2.68-3.28(m，2H)，3.13-3.28(m，2H)，3.53(br-m，1H)，4.76-4.80(m，1H)，6.23(t，1H，J＝2.1Hz)，6.37(t，2H，J＝3.0Hz)，6.75(s，1H，富马酸盐)，7.24-7.37(m，5H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.3，24.2，39.8，57.2，70.5，103.4，105.3，128.4，130.0，130.4，135.2，137.4，144.6，160.1UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,110)，205(31,000)；MS(APCI+)m/z(rel)：288(100，M+H)；[α]_D＝-6.9°(浓度＝0.85％MeOH)；HPLC：(a)50/50/0.05，1.00mL/min，282nm，制备1.53min，99％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.46min，98.5％纯。

(S，R)-(+)-5-[1-羟基-2-(1-甲基-2-苯基乙基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，R)-4]。根据过程A，从(S)-8和(R)-13制备，得到212mg(59％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.22(m，3H)，2.72(dd，1H J＝10.2，13.2Hz)，3.11(dd，1H，J＝10.2，12.6Hz)，3.18-3.27(m，2H)，3.48-3.61(m，1H)，4.83(dd，1H，J＝3.3，9.9Hz)，6.22(t，1H，J＝2.4Hz)，6.36(d，2H，J＝2.4Hz)，6.75(s，1H，富马酸盐)，7.24-7.37(m，5H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.3，24.2，39.8，57.2，70.5，103.4，105.3，128.4，130.0，130.4，135.2，137.4，144.6，160.1；UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,680)，206(35,500)；MS(APCI+)m/z(rel)：288(100，M+H)，270(19，M-OH)；[α]_D＝+9.1°(浓度＝1.1％，MeOH)；HPLC：(a)50/50/0.05，1.00mL/min，282nm，制备1.51min，99％纯；(b)50/50/0.05，2.0mL/min，276nm，制备1.43min，99％纯。

(R，R)-(-)-5-{1-羟基-2-[1-甲基-2-(1-萘基)乙基氨基]乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，R)-5]。根据过程A，从(R)-8和(R)-14制备，得到135mg(46％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.18-1.23(m，3H)，3.16-3.34(m，1H，2H)，3.69-3.74(m，2H)，4.78-4.80(m，1H)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.38(m，2H)，7.41-7.61(m，4H)，7.83(d，1H，J＝7.5Hz)，7.90(d，1H，J＝7.8Hz)，8.10(m，1H)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.2，37.2，54.5，56.1，70.3，103.4，105.3，124.3，126.5，127.0，127.7，129.3，130.1，133.2，135.2，135.6，144.7，160.1，168.2；UV(MeOH)λmax 282nm(ε5,860)，224(50,900)，208(35,500)；MS(APCI+)m/z(rel)：338(100，M+H)，169(15，片段)；[α]_D＝-20.4(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(a)60/40/0.05，1.00mL/min，282nm，制备2.08min，95.7％纯；(b)50/50/0.05，1.5mL/min，282nm，制备2.20min，99％纯。

(S，S)-(+)-5-{1-羟基-2-[1-甲基-2-(1-萘基)乙基氨基]乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，S)-5]。根据过程A，从(S)-8和(S)-14制备，得到118mg(40％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.13-1.17(m，3H)，3.14-3.26(m，1H，2H)，3.61-3.76(m，2H)，4.44-4.75(m，1H)，6.18(t，1H，J＝2.4Hz)，6.33(m，2H)，7.36-7.52(m，4H)，7.77(dd，1H，J＝1.8，7.5Hz)，7.84(d，1H，J＝8.1Hz)，8.04(t，1H，J＝8.4Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.1，37.1，54.4，56.0，70.3，103.3，105.3，124.3，126.5，127.0，127.7，129.2，130.0，133.2，135.2，135.7，144.5，160.0，168.1；UV(MeOH)λmax 282nm(ε6,210)，223(56,400)，208(42,700)；MS(APCI+)m/z(rel)：338(100，M+H)，169(8，片段)；[α]_D＝+20.0°(浓度＝1.1％MeOH)；HPLC：(a)60/40/0.05，1.00mL/min，282nm，制备2.35min，98.9％纯；(b)50/50/0.05，1.5mL/min，282nm，制备2.26min，97.2％纯。

(R，S)-(-)-5-{1-羟基-2-[1-甲基-2-(1-萘基)乙基氨基]乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，S)-5]。根据过程A，从(R)-8和(S)-14制备，得到114mg(39％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.08-1.11(m，3H)，3.02-3.24(m，1H，2H)，3.54-3.68(m，2H)，4.45-4.75(m，1H)，6.11(t，1H，J＝1.8Hz)，6.26(m，2H)，6.63(s，2H富马酸盐)，7.28-7.48(m，4H)，7.70(d，1H，J＝7.5Hz)，7.77(d，1H，J＝7.8Hz)，7.97(t，1H，J＝7.8Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.0，37.1，52.5，56.0，70，4，103.4，105.3，124.4，126.5，127.0，127.6，129.2，130.1，133.1，135.2，135.5，144.7，159.9，168.2；UV(MeOH)λmax 281nm(ε12,600)，224(61,900)，204(47,200)；MS(APCI+)m/z(rel)：338(100，M+H)，190(15，片段)；[α]_D＝-11.3°(浓度＝0.85％MeOH)；HPLC：(a)60/40/0.05，1.00mL/min，282nm，t_R 2.30min，98.6％纯；(b)50/50/0.05，1.5mL/min，282nm，t_R 2.36min，99％纯。

(S，R)-(+)-5-{1-羟基-2-[1-甲基-2-(1-萘基)乙基氨基]乙基}-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，R)-5]。根据过程A，从(S)-8和(R)-14制备，得到123mg(42％)。¹H NMR(CD₃OD)δ1.18-1.22(m，3H)，3.10-3.28(m，1H，2H)，3.69-3.78(m，2H)，4.45-4.75(m，1H)，6.23(t，1H，J＝2.1Hz)，6.39(m，2H)，6.73(s，2H富马酸盐)，7.39-7.59(m，4H)，7.80(d，1H，J＝7.5Hz)，7.88(d，1H，J＝7.8Hz)，8.01(t，1H，J＝9.0Hz)；¹³C NMR(CD₃OD)δ16.4，37.4，52.5，56.2，70.6，103.4，105.3，124.4，126.5，127.0，129.3，130.1，133.1，133.4，135.6，136.3，144.8，160.0，171.4；UV(MeOH)λmax 282nm(ε7,740)，224(70,900)，206(55,800)；MS(ESI+)m/z(rel)：338(100，M+H)；[α]_D＝+15.5(浓度＝1.0％MeOH)HPLC：(a)60/40/0.05，1.0mL/min，282nm，t_R1.95，95.7％纯；(b)50/50/0.05，1.5mL/min，282nm，t_R 2.29min，95.7％纯。

(R，R)-(-)-5-[1-羟基-2-(1-甲基己基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，R)-6]。根据过程A，从(R)-8和(R)-15制备，得到45mg(29％)。¹HNMR(CD₃OD)δ0.920(t，3H，J＝6.9Hz)，1.30(d，3H，J＝6.9Hz)，1.29-1.64(m，8H)，3.01-3.18(m，2H)，3.14-3.30(m，1H)，4.80(dd，1H，J＝3.3，9.6Hz)，6.22(t，1H，J＝2.1Hz)，6.36(d，2H，J＝2.4Hz)，6.75(s，1H，富马酸盐)；¹³C NMR(CD₃OD)δ14.3，16.0，23.5，26.2，32.6，34.2，52.1，55.7，70.2，103.3，105.3，135.2，144.7，160.0，168.0；UV(MeOH)λmax 278nm(ε931)，203nm(20,100)；MS(ESI+)m/z(rel)：268(100，M+H)；[α]_D＝-8.8°(浓度＝1.1％MeOH)；HPLC：(c)70/30/0.1，1.0mL/min，276nm，t_R 2.18min，96.6％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，279nm，t_R 2.06min，98.9％纯。

(S，S)-(+)-5-[1-羟基-2-(1-甲基己基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，S)-6]。根据过程A，从(S)-8和(S)-15制备，得到96mg(43％)。¹HNMR(CD₃OD)δ0.923(t，3H，J＝6.6Hz)；1.31(d，3H，J＝6.6Hz)，1.26-1.84(m，8H)，2.01-3.18(m，2H)，3.14-3.30(m，1H)，4.81(dd，1H，J＝3.3，9.6Hz)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.39(d，2H，J＝2.1Hz)，6.76(s，1H，富马酸盐)：¹³C NMR(CD₃OD)δ14.2，16.0，23.4，26.3，32.6，34.1，52.1，55.8，70.2，103.4，105.3，135.2，144.7，159.9，168.2；UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,340)，203(28,800)；MS(APCI+)m/z(rel)：268(100，M+H)；[α]_D＝+10.8°(浓度＝0.50％MeOH)；HPLC：(c)70/30/0.1，1.0mL/min，276nm，t_R2.16min，97.0％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，279nm，t_R 2.11min，99％纯。

(R，S)-(-)-5-[1-羟基-2-(1-甲基己基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(R，S)-6]。根据过程A，从(R)-8和(S)-15制备，得到83mg(38％)。¹HNMR(CD₃OD)δ0.924(m，3H)；1.32(d，3H，J＝6.6Hz)，1.26-1.84(m，8H)，2.98-3.20(m，2H)，3.32-3.22(m，1H)，4.78(dd，1H，J＝3.0，9.9Hz)，6.23(t，1H，J＝2.1Hz)，6.37(d，2H，J＝1.8Hz)，6.76(s，1H，富马酸盐)；¹³CNMR(CD₃OD)δ14.2，16.4，23.4，26.2，32.6，33.5，52.2，56.0，70.4，103.4，105.3，135.2，144.7，160.0，168.1；UV(MeOH)λmax 276nm(ε2,770)，203(35,900)；MS(APCI+)m/z(rel)：268(100，M+H)；[α]_D＝-15.9°(浓度＝0.70％MeOH)；HPLC：(c)70/30/0.1，1.0mL/min，276nm，t_R 2.16min，97.0％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，279nm，t_R 2.07min，96.2％纯。

(S，R)-(+)-5-[1-羟基-2-(1-甲基己基氨基)乙基]-1，3-苯二醇富马酸盐[(S，R)-6]。根据过程A，从(S)-8和(R)-15制备，得到81mg(38％)。¹HNMR(CD₃OD)δ0.920(t，3H，J＝6.3Hz)，1.32(d，3H，J＝6.9Hz)，1.30-1.77(m，8H)，2.99-3.17(m，2H)，3.23-3.26(m，1H)，4.76(dd，1H，J＝3.0，9.6Hz)，6.22(t，1H，J＝2.4Hz)，6.36(d，2H，J＝2.1Hz)，6.75(s，1H，富马酸盐)；¹³C NMR(CD₃OD)δ14.2，16.5，23.5，26.2，32.6，39.5，52.2，56.0，70.4，103.4，105.3，135.2，144.7，160.0，168.0；UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,440)，204(29,900)；MS(APCI+)m/z(rel)：268(100，M+H)；[α]_D＝+12.7°(浓度＝1.0％MeOH)；HPLC：(c)70/30/0.1，1.0mL/min，276nm，t_R2.16min，99％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，279nm，t_R 2.02min，95.7％纯。

(R)-(-)-5-(1-羟基-2-苯乙基氨基乙基)-1，3-苯二醇富马酸盐[(R)-7]。从(R)-8和28制备，得到37mg(15％)。¹H NMR(CD₃OD)δ2.94-3.23(m，6H)，4.73(dd，1H，J＝3.3，9.9Hz)，6.15(t，1H，J＝2.4Hz)，6.29(d，2H，J＝1.8Hz)，7.19-7.28(m，5H)，6.69(s，1H)；UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,360)，205(32,600)；MS(APCI+)m/z(rel)：274(100，M+H)；[α]_D＝-13.0°(浓度＝1.0％MeOH)；HPLC：(a)80/20/0.05，1.00mL/min，282nm，t_R 1.47min，96.7％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，272nm，t_R 2.78min，95.1％纯。

(S)-(+)-5-(1-羟基-2-苯乙基氨基乙基)-1，3-苯二醇富马酸盐[(S)-7]。从(S)-8和28制备，得到51mg(17％)。¹HNMR(CD₃OD)δ2.87-3.21(m，6H)，4.68(dd，1H，J＝3.6，9.9Hz)，6.10(t，1H，J＝2.4Hz)，6.24(d，2H，J＝2.1Hz)，6.63(s，1H)，7.12-7.21(m，5H)；UV(MeOH)λmax 278nm(ε1,280)，204(33,700)；MS(APCI+)m/z(rel)：274(100，M+H)；[α]_D＝+14.64°(浓度＝1.1％MeOH)；HPLC：(a)80/20/0.05，1.00mL/min，282nm，t_R 1.47min，98.6％纯；(b)50/50/0.05，1.0mL/min，272nm，t_R 2.74min，98.8％纯。

(R，R)-(-)-乙基非诺特罗。

¹H NMR：(300MHz，CD₃OD)：δ0.950(t，3H，J＝7.5Hz)，1.67(m，2H)，2.83-3.18(m，4H)，3.33-3.40(m，1H)，3.37(s，4H)，4.82(m，1H)，6.24(d，1H，J＝2.1Hz)，6.37(d，2H，J＝1.8Hz)，6.73(s，2H，fum)，6.76(d，2H，J＝8.4Hz)，7.05(d，2H，J＝8.7Hz)ppm.CMR：¹³C(75MHz，CD₃OD)：δ9.43，23.28，36.56，52.29，62.16，70.02，103.4，105.3，116.7，127.8，131.3，136.5，144.6，157.6，159.9，172.3ppm.UV：(甲醇)，λmax(ε)：206nm(22,500)，223(12,300)，278(2,460).MS：(1CQ DUO ESI正离子质谱)M/z(rel)：318(100，M+H).HPLC 1：柱：Varian Sunfire C18 100x4.6；70/30/0.1水/乙腈/TFA；1.0mL/min；检测：278nm；2.76min(富马酸盐，6.99％)，3.57min(90.11％)；纯度：97.1％.HPLC 2：柱：Chiralpak IA 250x10；90/10/0.05乙腈/甲醇/TFA；2.0mL/min；检测：278nm；5.26(RR异构体，92.37％)，7.11min(富马酸盐，5.02％)；纯度97.5％.比旋度：[α]_D＝-15.6(游离胺，0.5％MeOH)。

(R，S)-(-)-乙基非诺特罗。

¹H NMR：(300MHz，CD₃OD)：δ0.972(t，3H，J＝7.5Hz)，1.70(p，2H，J＝6.9Hz))，2.86-3.22(m，4H)，3.32-3.37(m，1H)，3.34(s，4H)，4.82(m，1H)，6.25(t，1H，J＝2.1Hz)，6.36(d，2H，J＝1.8Hz)，6.74(s，2H，fum)，6.77(d，2H，J＝8.4Hz)，7.08(d，2H，J＝8.7Hz)ppm.CMR：¹³C(75MHz，CD₃OD)：δ9.820，24.16，36.48，52.30，62.32，69.92，103.3，105.3，116.8，127.7，131.3，136.1，144.4，157.6，159.8，171.3ppm.UV：(甲醇)，λmax(ε)：204nm(26,900)，224(11,500)，278(2,320).MS：(LCQ DUO ESI正离子质谱)M/z(rel)：318(100，M+H).HPLC l：柱：Varian Sunfire C18 100x4.6；70/30/0.1 水/乙腈/TFA；1.0mL/min；检测：278nm；2.79min(富马酸盐，3.34％)，3.56min(96.11％)；纯度：99.5％HPLC 2：柱：Chiralpak IA250x10；90/10/0.05乙腈/甲醇/TFA；2.0mL/min；检测：278nm；5.88(RS异构体，97.08％)，7.12min(富马酸盐，2.92％)；Purity＞99％.比旋度：[α]_D＝-7.2(游离胺，0.5％MeOH)。

C₂₂H₂₅NO₄·0.5C₄H₄O₄

·0.5HO₂CCH＝CHCO₂H

¹H NMR：(300MHz，CD₃OD)：δ1.22(t，3H，J＝6.6Hz)，3.09-3.21(m，3H)，3.59-3.69(m，2H)，3.99(s，3H)，4.74-4.83(m，1H)，6.23(t，1H，J＝2.4Hz)，6.37(dd，2H，J＝2.4，5.7Hz)，6.74(s，1H)，6.86(d，1H，J＝7.8Hz)，7.32(d，1H，J＝7.8Hz)，7.48(t，1H，J＝6.9Hz)，7.56(t，1H，J＝6.9Hz)，8.02(dd，1H，J＝8.4，12.0Hz)，8.27(d，1H，J＝8.7Hz)ppm.CMR：¹³C(75MHz，CD₃OD)：δ15.78，36.66，52.39，55.96，70.20，103.4，104.5，105.3，123.8，124.3，124.9，126.2，127.4，128.1，129.5，133.8，135.2，144.6，156.6，160.0，168.3ppm.UV：(甲醇)，λmax(ε)：298nm(4,970)，286(9,920)，234(22,600)，210(42,500).MS：(1CQ DUO ESI正离子质谱)M/z(rel)：368(100，M+H).比旋度：[α]_D＝-28.8(游离胺；0.5％MeOH)。

C₂₂H₂₅NO₄·0.5C₄H₄O₄

·O.5HO₂CCH＝CHCO₂H

¹H NMR：(300MHz，CD₃OD)：δ1.20(t，3H，J＝6.6Hz)，3.07-3.21(m，3H)，3.52-3.75(m，2H)，3.97(s，3H)，4.69-4.83(m，1H)，6.24(t，1H，J＝2.1Hz)，6.39(dd，2H，J＝2.4，5.4Hz)，6.74(s，1H)，6.84(d，1H，J＝7.8Hz)，7.31(d，1H，J＝8.1Hz)，7.48(t，1H，J＝6.9Hz)，7.56(t，1H，J＝6.9Hz)，8.01(dd，1H，J＝8.4，13.5Hz)，8.27(d，1H，J＝7.8Hz)ppm.CMR：¹³C(75MHz，CD₃OD)：δ15.77，36.64，52.37，55.94，70.46，103.4，104.5，105.3，123.8，124.3，124.9，126.2，127.4，128.1，129.4，133.8，135.5，144.7，156.6，160.0，169.0ppm.UV：(甲醇)，λmax(ε)：298nm(5,430)，286(5,710)，233(25,100)，210(43,200).MS：(1CQ DUO ESI正离子质谱)M/z(rel)：368(100，M+H)。比旋度：[α]_D＝-15.8(游离胺；0.5％MeOH)。

在1-6的4种立体异构体的合成中的步骤是从(R)-或(S)-3′，5′-二苄氧基苯基溴代醇形成的环氧化物与适当的被苄基保护的2-氨基-3-苄基丙烷(1-5)的(R)-或(S)-异构体或与N-苄基-2-氨基庚烷(6)的(R)-或(S)-异构体的偶联，路线I。

路线I

(R)-7和(S)-7的合成使用2-苯乙基胺，路线II完成。该路线类似于由Trofast等人(Chirality 3：443-450，1991)开发的用于合成福莫特罗的立体异构体(化合物47)的路线，图6。所得化合物然后使用Pd/C进行氢化进行脱保护，并纯化为富马酸盐。

路线II

在合成中使用的手性砌块使用路线III得到。(R)-和(S)-3′，5′-二苄氧基苯基-溴代醇异构体如下获得：使用硼-二甲硫醚复合物(BH₃SCH₃)和(1R，2S)-或(1S，2R)-顺式-1-氨基-2-茚满醇进行3，5-二苄氧基-α-溴代苯乙酮的对映体选择性还原。所需的(R)-和(S)-2-苄基氨基丙烷如下制备：使用(R)-或(S)-扁桃酸作为抗衡离子进行消旋2-苄基氨基丙烷的对映体选择性结晶。

路线III

实施例6

示例性的非诺特罗类似物对β1和β2肾上腺素能受体的结合亲合性。

本实施例说明了非诺特罗类似物与非诺特罗相比对β2-肾上腺素能受体即使不具有更大的亲合性也具有相等的结合亲合性。

每个化合物检测高达三次以确定其在β₁-和β₂-肾上腺素能受体的结合亲合性。带有标准化合物和未知化合物的竞争曲线包括至少六个浓度(一式三份)。对于每个化合物，为供试化合物制备了包含单独竞争曲线的曲线图。使用GraphPad Prism

软件计算IC₅₀值和Hill系数。使用Cheng-Prusoff变换(Biochem Pharmacol 22：3099-3108，1973)计算Ki值。在每个实验中，同时在96孔板上进行标准化合物实验。如果标准化合物的IC₅₀值不接近该化合物的确立平均值，则放弃整个实验并再次重复整个实验。

根据先前所述过程在大鼠皮质膜上进行β₁-肾上腺素能受体结合(Beer等人，Biochem.Pharmacol.37：1145-1151，1988)。简单地说，处死重250-350克的雄性Sprague-Dawley大鼠并迅速地取出其脑。在冰上解剖出大脑皮质，称重并迅速地转移到包含大约30毫升的50mMTris-HCl(pH 7.8，在室温下)的50毫升试管中。使用polytron将该组织匀化并在20,000xg下在4℃离心12分钟。小球再次以同样方式进行洗涤并以每毫升试验缓冲剂(20mM Tris-HCl，10mM MgCl₂，1mMEDTA，0.1mM抗坏血酸，pH 7.8)含20毫克(初始湿重)的浓度进行再悬浮。为了阻断在皮质膜制备物中存在的β₂位点，还向试验缓冲剂中加入30nM ICI 118-551。向包含100μl供试药物和100μl[³H]CGP-12177(1.4nM的最终浓度)的孔中加入0.8毫升的组织匀浆。在25℃下2小时后，通过快速过滤终止培养。通过10μM普萘洛尔测定非特异性结合。

用编码人β₂-AR的cDNA稳定转染的HEK 293细胞(由Dr.BrianKobilka，Stanford Medical Center，Palo Alto，CA提供)在先前所述的Dulbecco改进的Eagle培养基(DMEM)中生长，该培养基包含10％牛血清(FBS)，0.05％青霉素-链霉素和400μg/ml G418(Pauwels等人，Biochem.Pharmacol.42：1683-1689，1991)。细胞从150×25mm板上刮下并在500xg下离心5分钟。用Polytron将小珠在50mM Tris-HCl，pH 7.7中匀化，在27,000xg下离心，并再悬浮在相同的缓冲液中。重复后一过程，并将小球再悬浮在25mM的包含120mM NaCl，5.4mM KCl，1.8mMCaCl₂，0.8mM MgCl₂和5mM葡萄糖的Tris-HCl(pH 7.4)中。结合试验包含在1.0毫升体积中的0.3nM[³H]CGP-12177。通过1μM普萘洛尔测定非特异性结合。

根据上述方法，用Ki值表示的结合亲合性如下测定：采用从用编码人β₂-AR的cDNA稳定转染的HEK 293细胞系获得的膜(Pauwels等若，Biochem.Pharmacol.42：1683-1689，1991)，使用[³H]CGP-12177作为标记配体。使用GraphPad Prism软件计算每个供试化合物的所得的IC₅₀值和Hill系数，并使用Cheng-Prusoff变换计算Ki(BiochemPharmacol 22：3099-3108，1973)：

Ki＝IC₅₀/(1+L/Kd)+Eqn.1.

其中：L是[³H]CGP-12177的浓度，和Kd是[³H]CGP-12177的结合亲合性。每个供试化合物实验三次。

化合物1-4和6的立体异构体对β₂-AR的相对结合亲合性是R，R＞R，S＞S，R≈S，S(图5；下表1)。这一立体选择性与先前报导的福莫特罗立体异构体的功效(Trofast等人，Chiralty 3：443-450，1991)和采用异丙肾上腺素衍生物PTFAM化合物48的结合研究的结果(图6)是一致的(Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987)。关于化合物5，未发现在R，R和R，S异构体的Ki值之间具有显著差异，因此，顺序是R，R＝R，S＞S，R＞S，S。(R)-7的Ki值大于(S)-7的Ki值，这与在立体形成中心包含β-OH部分的R-构型的确立的对β₂-AR的对映体选择性结合优先性是一致的，参见(Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987；Wieland等人，Proc.Natl.Acad.ScL USA 93：9276-9281，1996；Kikkawa等人，MoI.Pharmacol.53：128-134，1998；和Zuurmond等人，MoI.Pharmacol.56：909-916，1999).

表1.在该研究中合成的化合物对β₂-AR的换算成Ki±SEM(nM)的结合亲合性，n＝3。非诺特罗异构体的β₁-和β₂-肾上腺素能结合亲合性的比较。

化合物	Kiβ1	Kiβ2	Kiβ1/Kiβ2
				(R，R)-1	14750+2510	345+34	43
(R，S)-1	18910+2367	3695+246	5
				(S，R)-1	＞100,000	10330+1406	NC
(S，S)-1	＞100,000	27749+6816	NC
				(R，R)-2	21992+3096	474+35	46
(R，S)-2	30747+6499	1930+135	16
				(S，R)-2	33378+9170	5269+509	6
(S，S)-2	＞100,000	15881+2723	NC
				(R，R)-3	24956+2100	2934+168	9
(R，S)-3	31324+3485	7937+397	4
				(S，R)-3	77491+3583	23125+2093	3
(S，S)-3	31440+1681	28624+906	1
				(R，R)-4	17218+1270	1864+175	9
(R，S)-4	33047+2779	6035+434	4
				(S，R)-4	＞100,000	30773+3259	NC
(S，S)-4	＞100,000	28749+1811	NC
				(R，R)-5	3349+125	241+38	14
(R，S)-5	15791+6269	341+23	46
				(S，R)-5	34715+9092	1784+148	19
(S，S)-5	＞100,000	2535+209	NC
				(R，R)-6	10185+499	9275+902	1
(R，S)-6	＞100,000	31440+1681	NC
				(S，R)-6	61295+5821	＞100,000	NC
(S，S)-6	52609+1434	56420+5186	1
				(R)-7	42466+3466	10466+1461	4
(S)-7	52178+3006	20562+3721	3

当仅仅比较R，R异构体时，(R，R)-5在供试化合物中具有最高的相对亲合性，尽管在(R，R)-5和(R，R)-1之间的差异未达到统计显著性，见表1。具有亚微摩尔亲合性的唯一的其它(R，R)立体异构体是(R，R)-2，其显著低于(R，R)-5(p＝0.0051)和(R，R)-1(p＝0.0291)的结合亲合性，尽管(R，R)-2的平均Ki值比(R，R)-1只大23％。将对-OH部分变换成甲基醚的最小效果与先前的得自Schirrmacher等人的数据是一致的(Bioorg.Med.Chem.Lett.13：2687-92，2003)。在先前的研究中，消旋物-1被转化成[¹⁸F]-氟乙氧基醚时不发生体外活性的显著丧失，并且得出结论：在实验测量的精确范围内，衍生化不改变消旋物-1对β₂-AR的结合亲合性。

用Ki值表示的对β₁-AR的结合亲合性采用大鼠皮质膜进行，使用[³H]-CGP-12177作为标记物配体(Beer等人，Biochem.Pharmacol.37：1145-1151，1988.)。(R，R)-5的计算的Ki值为3,349nM并且所有其余的供试化合物的结合亲合性＞10,000nM，见表1。与得自β₂-AR结合研究的数据不同，关于化合物的立体化学没有明显趋势。

化合物对β₂-AR和β₁-AR的相对选择性采用Kiβ₁/Kiβ₂的比测定，见表1。特别感兴趣的是具有对β₂-AR为亚微摩尔亲合性的四种化合物(R，R)-1、(R，R)-2、(R，R)-和(R，S)-5的比，四种化合物分别为46、43、14和46。(R，R)-1和(R，R)-2的结果与先前报导的关于β₂-AR-选择性激动剂(R，R)-TA-2005(化合物49)的Kiβ₁/Kiβ₂比为53是一致的，见图6。

观察到的(R，R)-5的β₂-AR选择性发生丧失是意想不到的，因为由(R，S)-5显示的选择性相对于(R，R)-5增加3倍。使用47的立体异构体的先前的研究表明，(R，R)-异构体和(R，S)-异构体二者对β₂-AR相对于对β₁-AR都具有高度选择性，(R，R)-异构体的选择性大于(R，S)-异构体的选择性(Trofast等人，Chirality 3：443-450，1991)。该情形对于化合物1和2是如此的，但是对于5是相反的。还令人感兴趣的是注意到(S，R)-5具有相似的选择性(19倍)并且其对β₂-AR的亲合性仅仅是(R，R)-5的七分之一，分别为1783nM和241nM。

这些研究显示(R，R)-或(R，S)-萘基非诺特罗类似物比任何非诺特罗的同工型对β₂-肾上腺素能受体都具有更高的结合亲合性。(R，R)-甲氧基非诺特罗类似物对β₂-肾上腺素能受体的Ki与(R，R)-非诺特罗相似。因此，这些类似物是β₂-肾上腺素能受体激动剂的可行的候选物，并且可能用于治疗目前用市售的(±)-非诺特罗治疗的病症。

实施例7

使用非诺特罗类似物进行心肌收缩性研究

本实施例说明了对β₂-AR具有亚微摩尔亲合性的化合物以及(R，S)-1和(S，S)-1的药理学活性。

在这些研究中，在暴露于单剂量的供试化合物之前和之后，在单个心室肌细胞内测量通过电起搏诱导的细胞长度缩短所索引的收缩幅度。对激动剂的收缩应答用基础收缩性的百分数表示，并且激动剂针对β₂-肾上腺素能受体的特异性通过ICI 118，551(10^-7mol/L；TocrisCookson Ltd.，Bristol，U.K.)，一种选择性β₂-AR拮抗剂的抑制作用来测定。

除了(S，S)-1之外，所有的供试化合物产生显著的收缩应答，该应答被ICI 118，551所阻断，而(S，S)-1没有观察到药理学效果，见图7。这些结果与先前研究的结果是一致的(Beigi等人，Chirality，18：822-827，2006)并且观察到对于在β₂-AR处的激动剂活性R-构型在包含β-OH部分的立体形成中心处是优选的，参见(Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987；Wieland等人，Proc.Natl.Acad.ScL USA 93：9276-9281，1996；Kikkawa等人，MoI.Pharmacol.53：128-134，1998；和Zuurmond等人，MoI.Pharmacol.56：909-916，1999)。感兴趣的是注意到最大效果由0.1μM的(R，R)-5和(R，S)-5引发，而其它活性化合物需要0.5μM的浓度。另外，尽管由结合数据显示了(R，R)-5和(R，S)-5具有等效活性，但是(R，S)-1的观察活性是意想不到的，因为47(Trofast等人，Chiralty 3：443-450，1991)和48(Eimerl等人Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987)的立体异构体的先前研究指出(R，R)-异构体的激动剂活性显著大于相应的(R，S)-异构体的活性。

实施例8

比较分子场分析

本实施例说明了采用比较分子场分析(CoMFA)来分析公开的化合物。

采用比较分子场分析来分析所公开的化合物，该分析是3D QSAR技术，其适用于分析在选定的靶标处立体异构体和/或对映体的相对活性。

如SYBYL 7.2.(TRIPOS Inc.，St.Louis，MO)中的实施进行CoMFA。所有衍生物的分子模型在HyperChem v.6.03(HyperCube Inc.，Gainesville，FL)中使用ModelBuild程序制备以确保骨架的相同构象。将模型提取到SYBYL中并计算局部原子电荷(Gasteiger-Huckel型)。采用在非诺特罗分子的核心内的两个不对称碳原子的普通结构校准配体模型(-C^*-CH₂-NH-C^*-CH₂-)。两种类型的分子场(空间和静电)在围绕每个结构的网格(2

间隔)点阵中被取样。在静电计算中使用距离依赖性介电常数，并且设定了空间能量和静电能量二者的能量截止值为30千卡/摩尔。

获得了适用于从四个具有统计学显著意义的组分提取到的所得数据库的局部最小二乘方相关方程以及以下的验证参数用于最佳方案：R²＝0.920，F(4，21)＝60.380，标准估计误差＝0.223，交叉验证(离去一法(leave-one-out))R²＝0.847。通常，静电场占已说明的变化的48.1％，且空间场占51.9％。得到的3D QSAR模型显示了与试验数数据的良好数理统计关联，R²＝0.920和F＝60.380，和由交叉验证的R²值(Q²)＝0.847和标准预测误差(SEP)＝0.309所显示的良好预测能力，见表2。

表2.通过CoMFA模型预测的pK_d。

衍生物	pKd测量值	pKd预测值
			(R，R)-1	6.46	5.84
(R，S)-1	5.43	5.48
			(S，R)-1	4.99	5.02
(S，S)-1	4.56	4.66
			(R，R)-2	6.32	6.17
(R，S)-2	5.71	5.80
			(S，R)-2	5.28	5.34
(S，S)-2	4.80	4.99
			(R，R)-3	5.53	5.57
(R，S)-3	5.10	5.21
			(S，R)-3	4.64	4.75
(S，S)-3	4.54	4.39
			(R，R)-4	5.73	5.58
(R，S)-4	5.22	5.25
			(S，R)-4	4.51	4.75
(S，S)-4	4.54	4.43
			(R，R)-5	6.62	6.72
(R，S)-5	6.47	6.36
			(S，R)-5	5.75	5.90
(S，S)-5	5.60	5.54
			(R，R)-6	5.03	5.01
(R，S)-6	4.50	4.66
			(S，R)-6	4.00	4.19
(S，S)-6	4.25	3.84
			(R)-7	4.98	5.33
(S)-7	4.69	4.51

在第一阶段，使用该模型来识别负责在立体异构体之间进行辨别的区域。CoMFA程序产生紧密位于每个手性中心附近的一些不同的不对称区域。第一手性中心(携带β羟基)被分子后方的正电性区域包围。正电性区域可与氢键形成有关并指明假受体的有利供体性质或不利受体性质。在这种情况下，正电性场的位置表明模型(在手性中心处为S构型)的平面后方的β-OH部分的取向会阻止与受体的H键形成。正电性区域与第一手性中心后方的空间不利区域密切有关。这另外表明了该模型显示对R构型中的β-羟基具有优先选择性。在此中心对R构型的优先选择与先前的模型和试验数据是一致的，这表明R构型有利于在β-AR受体处的功能活性(参见，Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987；Wieland等人，Proc.Natl.Acad.ScL USA 93：9276-9281，1996；Kikkawa等人，MoI.Pharmacol.53：128-134，1998；和Zimrmond等人，MoI.Pharmacol.56：909-916，1999)。

CoMFA模型还显示第二手性中心的效果。优选构型可来自结合数据，在该结合数据中，对于化合物1-4和6而言，(R，R)-异构体相对于其各自的(R，S)-异构体具有更高的亲合性，而(R，R)-5和(R，S)-5的Ki值是相等的，见表1。因此，在该模型中，更具活性的异构体是具有在分子的向外指向CoMFA模型图的平面的氨基烷基部分上的立体形成中心上的甲基部分的那些。这通过在分子的第二手性中心后方的空间不利区域来描述，并表明在该位置对R构型是优先选择的。

在该研究中，非诺特罗分子仅有氨基烷基部分发生改变，并因此关键的CoMFA区域与分子的这一方面有关。在得到的分析中，所有四个相互作用区域在芳族部分的附近被识别并且所有这些可用于产生关于被研究的衍生物的结合作用的方式的假说。

在模型中，较大的包含接近-OH或OCH₃取代基的区域的正电性区域代表假受体对这些部分的H键合供体性质。这些相互作用负责了O-衍生物化合物1和2相对于化合物3和4具有相对更高的结合亲合性，在后两种化合物中对位氨基取代基在实验条件下应当带正电荷。

较大的负电性区域和另一个正电性区域，二者都平行位于芳族系统的两侧上，很可能代表在β₂-AR和富电子的芳族部分诸如萘基环之间的π-π或π-氢键合相互作用。这与化合物1、2和5相对于在该研究中被检测的其它化合物而言具有增加的亲合性是一致的。这一相互作用的功能通过以下观察结果被暗示：(R，R)-5和(R，S)-5的Ki值等于(R，R)-1和(R，R)-2，见表1。

两个空间区域位于接近静电区域并且在各自区域内一个有利于体容度且另一个不利于体容度。这表明了分子的氨基烷基部分的结合也在空间上受限制。

激动剂和拮抗剂对β₂-AR的结合已经采用定位诱变和制作分子模型技术来研究(Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987；Wieland等人，Proc.Natl.Acad.ScL USA 93：9276-9281，1996；Kikkawa等人，MoI.Pharmacol.53：128-134，1998；Zuurmond等人，Mol.Pharmacol.56：909-916，1999；Kontoyianni等人，J.Med.Chem.39：4406-4420，1996；Furse等人，J.Med.Chem.46：4450-4462，2003；和Swaminath等人，J.Biol.Chem.279：686-691，2004)。一般认为激动剂的“儿茶酚”部分的结合发生在由被称作TM3、TM5和TM6的跨膜(TM)螺旋产生的结合区域内。该结合过程是产生导致G蛋白活化的构象变化的顺序事件(Furse等人，J.Med.Chem.46：4450-4462，2003)。在该过程中的关键方面是激动剂手性碳上的羟基部分与TM6中Asn-293残基的相互作用，并且对于这一相互作用而言，在手性碳处R-构型是优选的(Eimerl等人，Biochem.Pharmacol.36：3523-3527，1987；Kikkawa等人，MoI.Pharmacol.53：128-134，1998；和Swaminath等人，J.Biol.Chem.279：686-691，2004)。因为非诺特罗分子的“儿茶酚”部分在该研究中不发生改变，因此允许在CoMFA模型中在第一立体形成中心处的R-构型在大部分稳定的复合物中被优选。

β₂-AR激动剂的结合和功能研究中大多数采用小分子N-烷基取代基诸如甲基、异丙基和叔丁基进行，参见(Kontoyianni等人，J.Med.Chem.39：4406-4420，1996)。然而，尽管这些化合物在β₂-AR处具有活性，但是它们不具有亚型选择性。这通过化合物49、50和51的Kiβ₁/Kiβ₂的比来说明，三个比分别是53、1.7和1.3(Kikkawa，等人，Mol.Pharmacol.53：128-134，1998))。对甲氧基苯基部分的除去不仅降低选择性，而且降低亲合性，因为各自的β₂Ki值是12nM、170nM和6300nM。(Kikkawa，等人，Mol.Pharmacol.53：128-134，1998).

氨基烷基取代基在β₂-AR选择性中所起到的作用已经采用定位诱变和制作分子模型技术进行研究(Kikkawa，等人，Mol.Pharmacol.53：128-134，1998)；Furse等人，J.Med.Chem.46：4450-4462，2003；和Swaminath等人，J.Biol.Chem.279：686-691，2004)。使用(R，R)-49作为模型配体，Kikkawa，等人，确定了在化合物49的对甲氧基氧与位于TM7的胞外末端内的酪氨酸308(Y308)的羟基之间的氢键形成是β₂-AR选择性的来源(Mol.Pharmacol.53：128-134，1998)。

Furse和Lybrand开发了β₂-AR的新形成(de novo)模型并使用该亚型研究了一些配体的分子复合物(激动剂和拮抗剂)(J.Med.Chem.46：4450-4462，2003)。在被研究的结构中，(R，R)-49与化合物2具有相同的氨基烷基取代基。(R，R)-49/β₂-AR复合物的研究揭示了(R，R)-49的对甲氧基氧与Y308的羟基形成氢键，这支持了Kikkawa等人提出的模型(Mol.Pharmacol.53：128-134，1998)。在该模型中键合的两个氧原子之间的距离为3.22

。然而，配体的甲氧基部分也位于与三种其它极性残基：TM6中的组氨酸296(H296)，TM3中的色氨酸109(W109)和TM7中的天门冬酰胺312(N312)紧密相邻，因此每个可与(R，R)-49的氨基烷基部分上的芳基相互作用。

在Furse和Lybrand模型中，在配体的氧原子与H296的氢原子之间的距离是5.88

，并且H296被推荐为是用于与(R，R)-49的甲氧基相互作用的可供选择的氢键供体。因为Y308和H296被发现仅存在于β₂-AR，在β₁-AR中发现的相应残基分别是F359和K347，H296和Y308的相互作用已被提议作为β₁/β₂选择性的来源(Furse等人，J.Med.Chem.46：4450-4462，2003)。

因为先前关于β₁/β₂选择性的研究采用(R，R)-49，在本研究中合成的化合物的(R，R)-立体异构体的亚型选择性与(R，R)-49的亚型选择性进行了比较。得自这一研究的数据暗示了在Y308和/或H296之间的氢键形成，并且激动剂的对位取代基上的氧原子牵涉β₂-AR选择性。相互作用可能发生于(R，R)-1和(R，R)-2，并且这些化合物的Kiβ₁/Kiβ₂的比分别为43和46，其可与测定的(R，R)-49的Kiβ₁/Kiβ₂的比为53相比。化合物3、4、6和7的Kiβ₁/Kiβ₂的比＜10并反映出以下事实：它们不能与Y308或H296形成氢键。氢键相互作用还通过识别了围绕-OH或OCH₃取代基的附近区域的较大的正电性区域的CoMFA模型被暗示，表示假受体的氢键供体性质。

得自该研究的数据还暗示了化合物氨基烷基部分上的芳族部分促进了Ki和亚型选择性，即使芳族部分不能与受体形成氢键。这通过比较化合物1-5的(R，R)-异构体的＜3,000nM的Kiβ₂与(R，R)-6的为9,000nM的Kiβ₂，以及化合物1-5的Kiβ₁/Kiβ₂的比＞9，而化合物6不显示亚型选择性来证明，见表1。用于解释该数据的一种可能的机制是π-键形成。芳香环得到π-电子云可以担当氢键合受体，尽管已经估计相互作用将是正常氢键的约一半强度(levitt和Perutz J.MoI.Biol.201：751-754，1998)。(R，R)-5相对于(R，R)-3和(R，R)-4或(R)-7具有更高的亲合性和亚型选择性与在萘基环中相对于其它芳香环具有更大的π电子分布是一致的。

CoMFA模型还识别了较大的负电性区域和另外的正电性区域，二者都与芳族系统平行定位，这很可能与β₂-AR和富芳族部分诸如萘基环之间的π-π或π-氢键相互作用有关。使用由Furse和Lybrand开发的模型，采用(R，R)-49作为相互作用配体，Y308、H296、W109和N312被称作可能的π-π和/或π-氢键相互作用的来源。在β₂-AR模型中，在(R，R)-49上的对甲氧基部分与W109和N312之间的估计距离分别为4.80埃和3.45埃。因为W109和N312全部以总的β-AR亚型被保留，由CoMFA模型暗示的相互作用可代表(R，R)-1、(R，R)-2和(R，R)-5相对于其它的(R，R)-异构体具有增加的亲合性的原因，但是没有观察到β₁/β₂选择性。

得自该研究的数据和所得的CoMFA模型指明供试化合物与β₂-AR的结合过程包括激动剂氨基烷基部分上的手性中心与受体上的空间受限位点相互作用。空间受限位点的存在已经由先前在开发激动剂和拮抗剂与β₂-AR的复合物的3D模型中的数据所暗示(Kobilka，MoI.Phaπn.65：1060-1062，2004)。例如，(R，R)-49和在氨基烷基部分上的立体形成中心上具有比甲基更大的取代基的类似化合物被暗示产生显著的空间相互作用，这不利地影响配体-受体复合物。

激动剂与β₂-AR的结合已被描述为是多步相互关连的方法，其中在激动剂和受体之间的顺序相互作用产生相应的构象变化(Kobilka，MoI.Pharm.65：1060-1062，2004)。CoMFA模型反映出最终的激动剂/β₂-AR复合物，并且为了辨别空间受限位点的效果，有必要考虑与该位点的相互作用对结合过程的结果有影响的效果。本发明的CoMFA模型的详细说明由Jozwiak等人公开，(J.Med.Chem.，50(12)：2903-2915，2007)，其全文并入本文作为参考。

如果假定激动剂的“儿茶酚”与由TM3、TM5和TM6产生的结合面积(第一结合面积)的相互作用，然后这些相互作用将激动剂的氨基烷基部分的定位相对于空间受限位点进行固定，并甚至也许产生该部位。在CoMFA模型中，在该位点处的空间限制迫使氨基烷基部分的手性中心处的甲基部分指出模型的平面。

由于围绕N-原子的自由转动，在带有甲基部分的手性中心出的构型不可能影响分子的使得与空间受限位点的相互作用最小化的能力。然而，在最低能量构象中，例如具有指出CoMFA模型平面的甲基中，氨基烷基部分的其余片段相对于第二结合区域的取向受立体化学的影响。实际上，R和S构型将产生与第二结合区域成镜象关系。该位点在图5中进行说明，在图5中，(R，R)-5和(R，S)-5的儿茶酚(第一手性中心)和甲基部分已经彼此覆盖。

阐明β₂-AR选择性来源的研究主要采用(R，R)-49并且一个先前的关于亚型选择性的手征性的效果的研究报道说(R，R)-47比(R，S)-47具有更高的β₂-AR选择性(Trofast等人，Chiralty 3：443-450，1991)。因此，观察到的(R，R)-5和(R，S)-5在β₂-AR处的相等的亲合性和功能活性以及(R，S)-5的β₂-AR选择性增加3倍是意想不到的结果。这些结果的一个可能的解释是(R，S)-5的萘基部分不与由Y308和H296定义的位点相互作用以及朝向并结合于β₂-AR上的另外的位点。这一相互作用还传递或参与亚型选择性以及增加的结合亲合性和激动剂活性。因为先前的β₂-AR选择性模型仅使用(R，R)-异构体，有可能忽视该位点。

数据的另一个解释由Sokolov和Zefirov推荐的“摇摆四面体(rocking tetrahedron)”手性识别机制来启发(Doklady Akademii NaukSSSR 319：1382-1383，1991)。在这一分子手性识别手段中，对映体配体通过两种结合相互作用固定到手性选择器上。该相互作用必须是非当量以及是有方向性的，以便只有一种取向是可能的。被系留的对映体仍具有构象活动性并且手性中心上的其余部分将清除重叠的然而并非相同的空间体积。手性选择器与这些空间体积的相互作用发生在什么位置和达到什么程度，确定了该方法的对映体选择性。如果手性选择器的手征性使得相互作用垂直于配体平面，未观察到对映体选择性。随着与垂直方向的差异增加，相对于R或S构型的对映体选择性也随之增加。

关于(R，R)-5和(R，S)-5，与CoMFA模型的空间受限位点的第一结合区域的相互作用不是两种非当量的和有方向性的相互作用，这使得第二手性中心上的其余构件位于相对于第二结合区域是相同的虽然是镜象的取向下。正如以上的讨论，化合物5的1-萘基部分与Y308和H296的相互作用被认为是观察到的β₂-AR选择性的来源。如果1-萘基环清除重叠的然而并非相同的空间体积时，则观察到的Kiβ₂值和亚型选择性表明以下含义：1)Kiβ₂-AR值代表1-萘基部分与Y308和H296之间的π-氢键合和π-π相互作用、以及与其它残基诸如W109和N312的另外的非β₂-AR特异性相互作用的总和；2)相对于(R，R)-5，由(R，S)-5清除的空间体积增加了Y308和H296与萘基部分的π电子云的相互作用的概率；和3)相对于(R，S)-5，由(R，R)-5清除的空间体积增加了与非β₂-AR特异性位部位的相互作用的概率。

在第二手性中心处的构型的效果以及构象基手性选择性还通过(R，R)-3、(R，S)-3和(R)-7的亲合性和亚型选择性来说明，见表1。在第二手性碳处的手征性从R向S的反转降低了(R，S)-3/β₂-AR复合物相对于(R，R)-3/β₂-AR复合物的Kiβ₂值降低约3倍，尽管在它们的Kiβ₁值之间没有显著差异。观察到的(R，R)-3相对于(R，S)-3，9相对于4，分别具有增加的亚型选择性本质上反映了Kiβ₂值的差异，这可反映出使氨基烷基链的芳族部分与包括第二结合区域的正电性和负电性区域接触所需的增加的构象能或这种相互作用发生时的可能性降低。

除去第二手性中心上的甲基部分并从而在该部位的手征性((R)-7)具有相似的效果，因为在该位置手征性从R转化成S。(R)-7的Kiβ₂值比(R，S)-3的高32％，因此在β₂-AR选择性方面没有差异，见表1。这些结果暗示了化合物3，在第二手性部位处的R构型的主要效果是将氨基烷基链指向第二结合区域，这增加了与该部位的相互作用的可能性并降低了完成这一相互作用所需的构象能。

化合物3和5之间的差异是由芳族取代基清除的空间区域。关于化合物3，苯基环产生较小的更线性的区域，而对于化合物5，1-萘基环系统产生相对更大的和更宽的区域。这些差异可用于指导其它衍生物的合成。

在一实施例重，(R，R)-2和(R，S)-5被选择作为可能的候选物用于开发新型的选择性β₂-AR激动剂。这些化合物相对于市售的消旋物-1具有增加的和延长的系统暴露，因为其分子疏水性、代谢模式和转运蛋白相互作用的改变所导致。

本发明的实施例提供了药效基团模型，其可被用作结构指导，用来设计具有β₂-AR选择性的新化合物，该化合物可经过测试用于治疗包括充血性心力衰竭在内的所需病况。

实施例9

(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗的药代动力学研究

本实施例说明了(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗被静脉内(IV)浓集给药到雄性Sprague-Dawley大鼠的血浆浓度。

(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗以5mg/ml的单一剂量静脉内被给药至颈静脉插管(JVC)的大鼠内(参见表3)。剂量的计算(mg/kg)基于在治疗当天测量的个体的体重。药代动力学研究的研究持续时间为6小时。在6小时内在以下九个时间点收集血浆样品：在给药所需剂量之前；在剂量给药后5.00-5.30分钟；在剂量给药后15.00-16.30分钟；在剂量给药后30.00-33.00分钟；在剂量给药后60-65分钟；在剂量给药后120-125分钟；在剂量给药后240-245分钟；在剂量给药后300-305分钟；和在剂量给药后360-365分钟。从每个治疗组的3只大鼠重收集0-6小时和6-24小时的尿。

表3.用于测量(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗的血浆浓度研究条件。

化合物：	剂量水平(mg/kg)：	剂量浓度(mg/ml)：	大鼠数	用于血浆分析的大鼠数
					(R，R)-非诺特罗	5	2.5	6	5
(R，R)-甲氧基非诺特罗	5	2.5	6	5
					(R，S)-萘基非诺特罗	5	2.5	6	2

(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗在静脉内给药至大鼠(5mg/kg)之后的药代动力学参数根据双隔室开放模型进行分析(见表4)。遵循双隔室模型药代动力学的药物没有迅速地在整个体内达到平衡，如对单隔室模型所假设的那样。在双隔室模型中，药物分布在两个隔室内，即中央隔室和组织或外周隔室内。中央隔室代表血液、细胞外液和高度灌注组织。药物迅速地和均匀地分布在中央隔室内。第二隔室，称作组织隔室或外周隔室，包含其中药物平衡更缓慢的组织。药物在两个隔室之间的转移被认为通过一级过程发生。

在下表4中使用了以下缩写：与分布阶段有关的α-宏观速率常数；与消除阶段有关的β-宏观速率常数；分别与α相和β相有关的A，B-零时间截距；曲线下的AUC面积；T1/2(K10)-与速率常数K10有关的半衰期；K10-消除速率-药物从中央隔室离开系统的速率；K12-药物从中央隔室进入组织隔室的速率；K21-药物从组织隔室进入中央隔室的速率；V1-中央隔室的分布体积；V2-组织隔室的分布体积；Vss-稳态下的分布体积；和C1-清除。

表4.(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗在静脉内给药至大鼠(5mg/kg)之后的药代动力学参数。

表5-7和图8说明了(R，R)-非诺特罗、(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗在IV给药至大鼠(5mg/kg)之后的个体血浆浓度。在给药至大鼠(5mg/kg)后的五分钟，(R，R)-非诺特罗在血浆中的平均浓度(1.34μg/ml)显著低于(R，R)-甲氧基非诺特罗(2.12μg/ml)或(R，S)-萘基非诺特罗(2.11μg/ml)。

表5.在静脉内给药(5mg/kg)后(R，R)-非诺特罗的个体血浆浓度。

表6.在静脉内给药(5mg/kg)后(R，R)-甲氧基非诺特罗的个体血浆浓度。

表7.在静脉内给药(5mg/kg后(R，S)-萘基非诺特罗的个体血浆浓度。

上述数据表明两种衍生物，即，(R，R)-甲氧基非诺特罗和(R，S)-萘基非诺特罗，与(R，R)-非诺特罗相比，具有显著更高的系统暴露(AUC)和更长的清除，这可产生药效更长的药物。建议更长的清除时间可能是乙酯葡醛酸结合的结果。

实施例10

使用(R，R)-非诺特罗或非诺特罗类似物治疗心脏病症

基于本文所公开的教导，心脏病症例如充血性心力衰竭通过给药治疗有效剂量的(R，R)-非诺特罗或上面公开的非诺特罗类似物中的一个或多个(参见第III和IV节)进行治疗。在一实施例中，鉴定了已被诊断罹患充血性心力衰竭的受试者。在受试者选择之后，将治疗有效剂量的(R，R)-非诺特罗或各自的非诺特罗类似物给药至受试者。例如，将包括甲氧基基或萘基衍生物在内的治疗有效剂量的(R，R)非诺特罗类似物给药至受试者。在另外的实施例中，将包括萘基衍生物在内的治疗有效剂量(R，S)-非诺特罗类似物给药至少受试者。根据第III.B节和实施例5所述制备和纯化非诺特罗类似物。(R，R)-非诺特罗或非诺特罗类似物或其药物组合物用于减少、抑制和/或治疗充血性心力衰竭的给药量根据被治疗的受试者、病症的严重性和治疗组合物的给药方式(参见章节V)的不同而异。理论上，药剂的治疗有效量是这样的量，该量足以预防、减少和/或抑制和/或治疗受试者的心脏病症(例如充血性心力衰竭)而不在受试者中引起相当大的细胞毒作用。

在一实施例中，(R，R)-非诺特罗，所公开的非诺特罗类似物(诸如包括甲氧基基或萘基衍生物的(R，R)-非诺特罗类似物或包括萘基衍生物的(R，S)-非诺特罗类似物)或药物组合物以约0.001到约10毫克/千克体重以单剂量或分剂量经口给药被提供。在具体的实施例中，该剂量范围为约0.005到约5毫克/千克体重，以单剂量或分剂量经口给药(假定平均体重为约70千克；对于体重比平均体重或多或少的人，该值进行相应地调整)。

在某些实施例中，公开的非诺特罗化合物或药物组合物以片剂形式通过口服给药被提供，该片剂包含约1.0到约50毫克的活性成分，特别包含约2.0毫克到约10毫克、更特别包含约2.5毫克、约5毫克、或约10毫克的活性成分，用于对被治疗的受试者根据症状进行剂量调整。在一个示例性的口服给药方案中，包含约1毫克到约50毫克活性成分的片剂在一天内分2-4次给药。例如，包含约1毫克到约10毫克活性成分的片剂每天给药两次。

实施例11

使用非诺特罗类似物治疗肺病症

根据本文所公开的教导，肺病症例如哮喘或慢性阻塞性肺病通过给药治疗有效剂量的上面公开的非诺特罗类似物(参见第III-V节)进行治疗。在一实施例中，鉴定了已被诊断罹患或显示与哮喘或慢性阻塞性肺病有关的症状之一的受试者。在受试者选择后，将治疗有效剂量的所需的非诺特罗类似物给药至受试者。例如，将包括甲氧基或萘基衍生物在内的治疗有效剂量的(R，R)-非诺特罗类似物给药至受试者。在另外的实施例中，将包括萘基衍生物在内的治疗有效剂量(R，S)-非诺特罗类似物给药至少受试者。根据第III.B节和实施例5所述制备和纯化非诺特罗类似物。非诺特罗类似物的用于预防、减少、和/或抑制、和/或治疗肺病症的给药量根据被治疗的受试者、病症的严重性和治疗组合物的给药方法的不同而异。理论上，药剂的治疗有效量是这样的量，该量足以预防、减少和/或抑制和/或治疗受试者的肺病症而不在受试者中引起相当大的细胞毒作用。

在一实施例中，(R，R)-非诺特罗，所公开的非诺特罗类似物(诸如包括甲氧基或萘基衍生物的(R，R)-非诺特罗类似物或包括萘基衍生物的(R，S)-非诺特罗类似物)或药物组合物以约0.001到约10毫克/千克体重以单剂量或分剂量经口给药被提供。在具体的实施例中，该剂量范围为约0.005到约5毫克/千克体重，以单剂量或分剂量经口给药(假定平均体重为约70千克；对于体重比平均体重或多或少的人，该值进行相应地调整)。

在某些实施例中，公开的非诺特罗化合物或药物组合物以片剂形式通过口服给药被提供，该片剂包含约1.0到约50毫克的活性成分，特别包含约2.0毫克到约10毫克、更特别包含约2.5毫克、约5毫克、或约10毫克的活性成分，用于对被治疗的受试者根据症状进行剂量调整。在一个示例性的经口剂量给药方案中，包含约1毫克到约50毫克的活性成分的片剂每天给药2-4次。例如，包含约1毫克到约10毫克活性成分的片剂每天给药两次。

鉴于可应用与本发明所公开的原则相符的许多可能的实施方案，可理解被说明的实施方案仅仅是本发明的优选的实施例，并且不构成对本发明范围的限制。本发明的范围而是由权利要求来定义，因此，本发明的范围由权利要求的范围和精神实质来约束。

Claims (19)

1.下式表示的化合物：

其中R₁-R₃独立地是氢，酰基或其中R是包含1-15个碳原子的烷基的-C(O)OR；

R₄是氢或包含1-10个碳原子的烷基；

R₅是

2.权利要求1的化合物，其中R₄选自甲基，乙基，正丙基和异丙基。

3.权利要求2的化合物，其中R₄是甲基。

4.权利要求1-3任一项的化合物，其中R₅是：

5.权利要求1-3任一项的化合物，其中R₅由下式表示：

6.权利要求4或5的化合物，其中R₁-R₃是氢。

7.权利要求1-6任一项的化合物，其中化合物是(R,R)-化合物。

8.权利要求1-6任一项的化合物，其中化合物是(R,S)-化合物。

9.药物组合物，其包含权利要求1-8任一项的化合物和至少一种可药用载体。

10.治疗有效量的权利要求1-8任一项的化合物在制备用于治疗受试者的肺病症或心血管病症的药物中的应用。

11.权利要求10的应用，其中病症是心血管病症。

12.权利要求11的应用，其中心血管病症是充血性心力衰竭。

13.权利要求10的应用，其中病症是肺病症。

14.权利要求13的应用，其中肺病症是哮喘或慢性阻塞性肺病中至少一种。

15.治疗有效量的权利要求1的化合物在制备用于治疗受试者的肺病症或心血管病症的药物中的应用，其中所述化合物是下式的(R,R)-化合物：

其中R₁-R₃独立地是氢；

R₄是甲基；以及

R₅是

16.权利要求15的应用，其中病症是心血管病症。

17.权利要求16的应用，其中心血管病症是充血性心力衰竭。

18.权利要求15的应用，其中病症是肺病症。

19.权利要求18的应用，其中肺病症是哮喘或慢性阻塞性肺病中至少一种。

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