CN101522207A - 治疗性肽的水杨酰苯胺增强口服输送 - Google Patents

Abstract

本发明涉及令人惊讶的发现：水杨酰苯胺如氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物在与肽药物(例如本文所述的A类两亲性螺旋肽)组合口服给药时显著提高该肽的生物利用度。提供使用这种“输送剂”的肽输送方法和药物制剂。

Description

治疗性肽的水杨酰苯胺增强口服输送

相关申请的交叉引用

本发明要求2006年8月8日提交的USSN 60/836,501和2006年12月6日提交的USSN 60/868,845的优先权，为此将这两者的全部内容通过参考引入本文。

联邦政府赞助的研究和开发下进行的发明权利的声明

本工作部分由USPHS Grant 2 P01 HL-030568资助。美国政府在本发明中具有某些权利。

技术领域

本发明涉及口服肽药物，其中有效化合物(active compound)包括多种氨基酸和在它们分子结构中的至少一个肽键，和本发明涉及口服给药时增强这种肽化合物的生物利用度的方法。

背景技术

许多人类激素、神经递质、或治疗性抗体是肽或包括肽作为它们分子结构的基本部分。治疗有效量的这种生物学相关肽可以多种方式对患者给药。药理学活性剂的口服输送是通常所选的输送途径，因为其方便，自我给药相对容易并且通常无痛，导致与其它输送模式相比较高的患者顺从性。

然而，生物学、化学和物理障碍例如胃肠道中变化的pH、胃和肠中强大的消化酶、以及活性剂不能透过的胃肠膜经常使肽药物的有效输送成为问题。例如，至少部分由于降钙素在胃肠道中不足的稳定性以及降钙素不能容易地通过肠壁运输到血流中，降钙素的口服输送已被证明是困难的。

因此，现有技术中经常使用的肽药物已经通过注射或鼻腔粘膜给药进行给药。胰岛素是经常通过注射给药的肽药物的一个实例。然而，注射和鼻腔粘膜给药明显比口服给药更不方便并且涉及更多的患者不适。这种不便或不适经常导致实际上患者对治疗方案的不顺从。因此，本领域需要在本文中更详细讨论的肽药物如胰岛素、降钙素等的更有效的和可再现的口服给药。

发明内容

本发明涉及令人惊讶的发现：水杨酰苯胺如氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物与肽药物(例如本文所述的A类两亲性螺旋肽)组合口服给药时显著提高该肽的生物利用度。提供使用这种“输送剂”的肽输送方法和药物制剂。

因此，在一些实施方式中，提供包含与水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物)组合的治疗剂(例如治疗性肽)的组合物(例如药物制剂)。在一些实施方式中，该水杨酰苯胺包含氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物例如2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐、和5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物。在一些实施方式中，该氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7、和/或表1中的化合物。在各种实施方式中，该肽的长度范围是3个氨基酸-300个氨基酸，优选约5-约200个氨基酸，更优选约5、10、15、18、20、25、或30个氨基酸-约200、150、100、90、70、或50个氨基酸。在各种实施方式中，该肽包含两亲性螺旋。在一些实施方式中，该肽为ApoJ肽、ApoA-I、ApoA-I米兰(milano)、或18A。在一些实施方式中，该肽包含A类两亲性螺旋。在各种实施方式中，该肽由全部的“L”氨基酸、或一个或多个“D”氨基酸、或全部的“D”氨基酸组成。在一些实施方式中，该肽为D或L肽，其序列如表2-11和/或SEQ ID Nos：1-1175任一个中所示。在一些实施方式中，该肽包含在氨基或羧基末端的保护基团。在一些实施方式中，该保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基(9-florenecarboxylic)、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基(dimentyl)-2，6-二氧代(diaxo)亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。在一些实施方式中，该氨基保护基团是选自乙酰基、丙酰基(propeonyl)、和3-20个碳的烷基的保护基团和/或羧基所述第二保护基团是酰胺。在一些实施方式中，该水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)和该治疗性肽是混合的。在一些实施方式中，该水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)和该治疗性肽结合(例如在酸性条件下)以形成加合物。在一些实施方式中，该组合物是单位剂量的制剂。在一些实施方式中，该肽和水杨酰苯胺彼此分离。在一些实施方式中，配置该组合物，使得氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物在所述肽之前释放或溶液化。

在一些实施方式中，所述水杨酰苯胺是氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物；且该肽是包括氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。在一些实施方式中，该肽包含羧基末端保护基团(例如酰胺)和/或氨基末端保护基团(例如乙酰基)。在一些实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物是氯硝柳胺。在一些实施方式中，该氯硝柳胺与所述肽形成加合物。

在各种实施方式中，提供用于增强对哺乳动物(例如人类或非人类哺乳动物)口服给药的治疗性肽的体内活性的方法。该方法典型地包括将肽与足以增强肽的体内活性的量的氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合口服给药。在各种实施方式中，该肽的长度范围是3个氨基酸-300个氨基酸，优选约5-约200个氨基酸，更优选约5、10、15、18、20、25、或30个氨基酸-约200、150、100、90、70、或50个氨基酸。在各种实施方式中，该肽包含两亲性螺旋。在一些实施方式中，该肽为ApoJ肽、ApoA-I、ApoA-I米兰(载脂蛋白(Apolipoprotein)M)、或18A。在一些实施方式中，该肽包含A类两亲性螺旋。在各种实施方式中，该肽由全部的“L”氨基酸、或一个或多个“D”氨基酸、或全部的“D”氨基酸组成。在一些实施方式中，该肽为D或L肽，其序列如表2-11和/或SEQ ID Nos：1-1175任一个中所示。在一些实施方式中，该肽是包括氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。在一些实施方式中，该肽包含羧基末端保护基团(例如酰胺)和/或氨基末端保护基团(例如乙酰基)。在各种实施方式中，该方法中使用的肽用本文所述的羧基和/或氨基保护基团(例如选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基(9-florenecarboxylic)、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA))保护。在各种实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物在所述肽给药之前给药。在各种实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽同时给药。在一些实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽结合以形成加合物。在一些实施方式中，该氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7、和/或表1中的化合物。

在另一实施方式中，提供药物制剂。该制剂通常包括口服给药的药物活性剂(例如治疗性肽)和水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物)。在一些实施方式中，该药物活性剂是治疗性肽，且该肽和水杨酰苯胺形成加合物。在一些实施方式中，该药物活性剂不是非肽抗增殖剂和/或非肽抗癌药物。在一些实施方式中，该药物活性剂是肽抗增殖剂。在一些实施方式中，该制剂包含治疗性两亲性螺旋肽、和氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物，其中制剂中的氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物在水溶液中的溶解度实质上大于不存在该两亲性螺旋肽时所述氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物在水溶液中的溶解度。在一些实施方式中，该肽选自ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、或18A。在一些实施方式中，该肽形成A类两亲性螺旋。在一些实施方式中，该肽由全部的“L”氨基酸、或至少一种“D”氨基酸、或全部的“D”氨基酸组成。在一些实施方式中，该肽为D或L肽，其序列如表2-11和/或SEQ ID Nos：1-1175任一个中所示。在一些实施方式中，该肽是包含氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。在一些实施方式中，该肽包含羧基末端保护基团(例如酰胺)和/或氨基末端保护基团(例如乙酰基)。在各种实施方式中，该方法中使用的肽用本文所述的羧基和/或氨基保护基团(例如选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基(9-florenecarboxylic)、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA))保护。在各种实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物在所述肽给药之前给药。在各种实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽同时给药。在一些实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽结合以形成加合物。在一些实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7、和/或表1中的化合物。

还提供减轻以在哺乳动物(例如人类、非人类灵长类、猫科、马科、猪科、牛科、啮齿动物等)中炎症反应为特征的病状的一种或多种症状的方法。该方法典型地包括将两亲性螺旋肽与氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合向哺乳动物口服给药，该两亲性螺旋肽减轻以炎症反应为特征的动脉粥样硬化或其它病状的一种或多种症状，由此所述口服输送提供所述肽的体内活性以减轻所述病状的一种或多种症状。在一些实施方式中，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物在肽之前给药，或与肽同时给药。在一些实施方式中，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和肽作为单一制剂给药。在一些实施方式中，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和肽在给药前结合以形成加合物。在一些实施方式中，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物选自2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐、和5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物。在一些实施方式中，该氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7、和/或表1中的化合物。在一些实施方式中氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和/或肽作为单位剂量的制剂给药。在一些实施方式中，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和肽作为单位剂量的制剂给药，配制该单位剂量的制剂使得所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与该肽同时或在该肽之前释放或溶液化。在一些实施方式中，该病状选自动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、结节性多动脉类、骨质疏松、阿尔茨海默病(Altzheimer’s disease)、多发性硬化、慢性阻塞性肺病、哮喘、糖尿病、和病毒性疾病。在各种实施方式中，该肽的长度范围是3个氨基酸-300个氨基酸，优选约5-约200个氨基酸，更优选约5、10、15、18、20、25、或30个氨基酸-约200、150、100、90、70、或50个氨基酸。在各种实施方式中，该肽包括两亲性螺旋。在一些实施方式中，该肽为ApoJ肽、ApoA-I、ApoA-I米兰(载脂蛋白M)、或18A。在一些实施方式中，该肽包括A类两亲性螺旋。在各种实施方式中，该肽由全部的“L”氨基酸、或一个或多个“D”氨基酸、或全部的“D”氨基酸组成。在一些实施方式中，该肽为D或L肽，其序列如表2-11和/或SEQ ID Nos：1-1175任一个中所示。在一些实施方式中，该肽是包括氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。在一些实施方式中，该肽包含羧基末端保护基团(例如酰胺)和/或氨基末端保护基团(例如乙酰基)。在各种实施方式中，该方法中使用的肽用本文所述的羧基和/或氨基保护基团(例如选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基(9-florenecarboxylic)、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA))保护。

在各种实施方式中，提供试剂盒。在一些实施方式中，该试剂盒包括含有水杨酰苯胺和治疗性肽的容器。水杨酰苯胺和肽可以在分离的容器中或组合在单一的容器中。在一些实施方式中，水杨酰苯胺和肽结合以形成加合物。在各种实施方式中，水杨酰苯胺是本文所述的氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物。在一些实施方式中，肽是本文所述的治疗性肽(例如ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、和18A、D-4F、L-4F、逆(retro)D-4F、逆L-4F等)。

在一些实施方式中，本发明还涉及制剂和方法，其中将该水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)用本文所述的其它“输送剂”(例如N-(5-氯水杨酰)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、N-(10-[2-羟基苯甲酰]氨基癸酸(SNAD)、和N-(8-[2-羟基苯甲酰]氨基)辛酸(SNAC)以及其各种盐(例如二钠盐)、美国专利5,866,536、美国专利5,773,647和WO 00/059863公开的输送剂的任意一种或多种等)的任意一种或多种代替或与其组合使用。

在一些实施方式中，该发明排除了使用美国专利5,866,536、美国专利5,773,647、WO 00/059863公开的输送剂的任意一种或多种的制剂和/或方法。

在一些实施方式中，本文所述的方法和组合物中使用的氯硝柳胺类似物包括，但不限于式I定义的那些，其中取代基R¹、R²、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²如本文中所述。在一些实施方式中，这些取代基不包括如下部分的一种或多种：羧酸、和/或烷基羧化物、和/或氧肟酸和/或烷基氧肟酸酯(盐)、和/或磺酸和/或烷基砜、和/或磷酸和/或烷基磷酸酯(盐)、和/或四唑。

定义

当涉及本文所述的试剂时，短语“增强体内活性”或“增强表观活性”是指该试剂在与口服输送药物组合给药时在生物体内产生的生物反应大于没有该试剂时口服给药相同剂量的生物反应。不受特定理论的约束，体内活性可通过许多机理的任一种增强，这些机理包括但不限于增加的吸附、减少的降解、增加的吸附和减少的降解的组合、增强的主动运输等。

当关于组合使用输送剂(例如氯硝柳胺、氯硝柳胺类似物或其它本文所述的输送剂)与口服给药的药物(例如治疗性肽如L-4F)使用时，术语“共同给药”或“组合给药”是指将输送剂和口服给药的药物进行给药使得输送剂的活性和药物的给药中存在至少一些时间顺序的重叠，从而使输送剂增强该药物的体内活性(例如通过增加的摄取和/或生物利用度)。在顺序给药中，只要该输送剂以增强药物体内活性的方式存在，输送剂和药物的给药之间可甚至存在一些相当大的延迟(例如几分或甚至几小时)。

术语哺乳动物基本上包括任意的哺乳动物，包括但不限于狗、猫、绵羊、牛、马、山羊、小鼠、兔、仓鼠、猪、猴和其它非人类灵长类以及人类。因此，涉及本发明的兽医和医疗用途。

术语“口服生物利用度”是指当口服给药(例如在口服制剂中)时活性剂的生物利用度(例如血浆浓度)。

术语“L型肽”是指包含全部L型氨基酸的肽。

术语“D型肽”是指包含至少一种D氨基酸的肽。在一些实施方式中，至少一半，且优选所有的氨基酸是D氨基酸。

当关于治疗例如病状或疾病使用时的术语“治疗”是指减轻和/或消除该病状或疾病的一种或多种症状，和/或减少该病状或疾病的一种或多种症状的发病率或严重性，和/或预防该病状或疾病。

当涉及分离的多肽时，术语“分离(isolate)”、“纯化”、或“生物学纯”是指基本上或本质上不含在其天然状态下被发现时通常伴随其的成分的材料。对于核酸和/或多肽，该术语可以指其侧翼不再有典型地天然在它们侧翼的序列的核酸或多肽。化学合成的多肽是“分离”的，因为它们不是以天然状态(例如血液、血清中等)发现的。在一些实施方式中，术语“分离的”是指不是天然发现的多肽。

本文中可互换使用的术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”是指氨基酸残基的聚合物。该术语应用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物，以及应用于天然存在的氨基酸聚合物。当提供肽的氨基酸序列时，该肽的描述为包括L肽、D肽、反肽(inversepeptide)、逆肽(retro peptides)、和逆反肽(retroinverse peptides)。

术语“两亲性螺旋肽”是指包含至少一个两亲性螺旋(两亲性螺旋域)的肽。本发明的一些两亲性螺旋肽可包含两个或更多个(例如3、4、5个等)两亲性螺旋。

术语“A类两亲性螺旋”是指形成产生极性和非极性面的分离的α-螺旋的蛋白结构，其中带正电的残基位于极性-非极性界面处且带负电的残基位于极性面的中心处(参见例如Segrest等(1990)Proteins：Structure，Function，and Genetics 8：103-117)。

“载脂蛋白J”(apo J)通过多种名称所知晓，包括簇蛋白、TRPM2、GP80、和SP40(参见例如Fritz(1995)Pp 112 In：Clusterin：Role in VertebrateDevelopment，Function，and Adaptation(Harmony JAK Ed.)，R.G.Landes，Georgetown，TX)。其首先描述为异质二聚体糖蛋白和人工培养大鼠塞尔托利细胞的分泌蛋白的成分(参见Kissinger等(1982)Biol.Reprod.；27：233240)。翻译产物为单链前体蛋白，该蛋白经历细胞内分裂成为二硫化物连接的34kDaα亚基和47kDa β亚基(参见Collard和Griswold(1987)Biochem.，26：3297-3303)。其与细胞损伤、脂质运输、细胞凋亡有关并且其涉及由细胞损伤或死亡引起的细胞碎片的清除。已经显示簇蛋白与许多分子以高亲和性结合，脂质、肽、和蛋白质以及疏水探针1-苯胺基-8-萘磺酸盐(Bailey等(2001)Biochem.，40：11828-11840)。

G类两亲性螺旋在球蛋白中发现，并因此名称G类。这类两亲性螺旋的特征在于其具有带正电和带负电的残基在具有窄的非极性面的极性面上的无规分布。由于窄的非极性面，这类不容易与磷脂缔合(参见例如Segrest等(1990)Proteins：Structure，Function，and Genetics.8：103-117；Erratum(1991)Proteins：Structure，Function and Genetics，9：79)。几种可交换的载脂蛋白具有与G两亲性螺旋相似但不相同的特性。与G类两亲性螺旋相似，该其它类型具有带正电和带负电的残基在极性面上的无规分布。然而，与具有窄的非极性面的G类两亲性螺旋相反，该类具有宽的非极性面，其允许这类容易地与磷脂结合并将该类称为G^*以将其与G类两亲性螺旋区分开(参见例如Segrest等(1992)J.Lipid Res.，33：141-166；Anantharamaiah等(1993)Pp.109-142In：The Amphipathic Helix，Epand，R.M.Ed CRC Press，Boca Raton，Florida)。Jones等((1992)J.Lipid Res.33：287-296)描述了识别和分类两亲性螺旋域的计算机程序，并且该计算机程序包括但不限于螺旋轮程序(WHEEL或WHEEL/SNORKEL)、螺旋网程序(HELNET、HELNET/SNORKEL、HELNET/Angle)、用于螺旋轮添加的程序(COMBO或COMBO/SNORKEL)、用于螺旋网添加的程序(COMNET、COMNET/SNORKEL、COMBO/SELECT、COMBO/NET)、一致轮程序(consensus wheel program)(CONSENSUS、CONSENSUS/SNORKEL)等。

关于“改善动脉粥样硬化的一种或多种症状”使用时的术语“改善”是指动脉粥样硬化和/或相关病状的一种或多种症状特性的减轻、预防、或消除。这种减轻包括，但不限于氧化的磷脂的减少或消除、动脉粥样硬化斑块形成和破裂的减少、临床事件如心脏病发作、心绞痛(angina)、或中风的减少、高血压的降低、炎症蛋白质生物合成的减少、血浆胆固醇的减少等。

术语“对映体氨基酸”是指可以至少两种形式存在的氨基酸，该至少两种形式为彼此不能重叠的镜相。大多数氨基酸(除了甘氨酸)是对映的并以所谓的L型(L氨基酸)或D型(D氨基酸)存在。大多数天然存在的氨基酸是“L”氨基酸。术语“D氨基酸”和“L氨基酸”用于指氨基酸的绝对构型，而不是平面偏振光的旋转的特定方向。本文中的用法与本领域技术人员的标准用法一致。本文使用标准的1-字母或3-字母编码来命名氨基酸，例如在Handbook On Industrial Property Information and Documentation的StandardST.25中命名的。

术语“保护基团”是指当与氨基酸中的官能团(例如侧链、α氨基、α羧基等)连接时阻止或掩盖该官能团的性质的化学基团。在一些实施方式中，氨基末端保护基团包括，但不限于乙酰基或氨基。其它氨基末端保护基团包括，但不限于脂肪酸中的烷基链、丙酰基(propeonyl)、甲酰基等。在一些实施方式中，优选的羧基末端保护基团包括，但不限于形成酰胺或酯的基团。

短语“保护磷脂不被氧化剂氧化”是指当磷脂与氧化剂(例如过氧化氢、13-(S)-HPODE、15-(S)-HPETE、HPODE、HPETE、HODE、HETE等)接触时化合物减少磷脂的氧化率(或产生的氧化的磷脂的量)的能力。

术语“低密度脂蛋白”或“LDL”根据本领域技术人员的通常用法定义。一般地说，LDL是指当通过超离心法分离时被发现在密度范围d＝1.019～d＝1.063内的脂质-蛋白质络合物。

术语“高密度脂蛋白”或“HDL”根据本领域技术人员的通常用法定义。一般地说，HDL是指当通过超离心法分离时被发现在密度范围d＝1.063～d＝1.21内的脂质-蛋白质络合物。

术语“第I族HDL”是指还原氧化的脂质(例如在低密度脂蛋白中)或保护氧化的脂质不被氧化剂氧化的高密度脂蛋白或其成分(例如apo A-I、对氧磷酶、血小板激活因子乙酰基水解酶等)。

术语“第II族HDL”是指在保护脂质不被氧化中或修复(例如还原)氧化的脂质中提供降低的活性或不提供活性的HDL。

术语“HDL成分”是指包含高密度脂蛋白(HDL)的成分(例如分子)。对于保护脂质不被氧化或修复(例如还原氧化的脂质)的HDL测定还包括对显示这种活性的HDL成分(例如apo A-I、对氧磷酶、血小板激活因子乙酰基水解酶等)的测定。

术语“人类apo A-I肽”或“人类apo A-I蛋白质”可指包含A类两亲性螺旋的全长的人类apo A-I肽或其片段或域。

本文使用的“单核细胞反应”是指与动脉粥样硬化斑块形成有关的“炎症反应”的单核细胞活性特性。该单核细胞反应特征在于单核细胞对血管壁细胞(例如血管内皮的细胞)的粘附，和/或向内皮下空间中的趋化性，和/或单核细胞分化为巨噬细胞。

本文中可使用如下缩写：PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；POVPC：1-棕榈酰-2-(5-氧代戊酰)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；PGPC：1-棕榈酰-2-戊二酰-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；PEIPC：1-棕榈酰-2-(5，6-环氧异前列烷E₂)-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；ChC18:2：胆甾醇亚油酸酯；ChC18:2-OOH：胆甾醇亚油酸酯氢过氧化物；DMPC：1，2-双十四酰基-外消旋(rac)-甘油-3-磷酸胆碱；PON：对氧磷酶；HPF：标准化的高倍视野；PAPC：L-α-1-棕榈酰-2-花生四烯酰基-sn-甘油基-3-磷酸胆碱；BL/6:C57BL/6J；C3H:C3H/HeJ。

术语“保守取代”在关于蛋白质或肽方面用于反映基本上不改变分子活性(特异性(例如对于脂蛋白))或结合亲和性(例如对于脂质或脂蛋白)的氨基酸置换。通常，保守的氨基酸取代包括用具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的一种氨基酸替代另一种氨基酸。以下六组各自包含通常为彼此保守取代的氨基酸：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

两种或更多种核酸或多肽序列的上下文中的术语“相同”或百分比“同一性”是指当为了最大的对应比较和比对时，使用下列序列比较算法之一或通过目测检查测量的相同的或具有指定百分比的相同氨基酸残基或核苷酸的两种或更多种序列或子序列。对于本发明的肽，在肽的全长上测定序列同一性。

适合于测量百分比序列同一性和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，其描述于Altschul等(1990)J.Mol.Biol.215：403-410。进行BLAST分析的软件通过National Center for BiotechnologyInformation(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)可公开获得。该算法包括首先通过识别在查询序列中长度W的短字段来识别高分序列对(HSPs)，其当与数据库序列中相同长度的字段比对时匹配或满足一些正值的阈分数T。T是指相邻字段分数的阈值(Altschul等，supra)。这些初始相邻字段命中作为用于引发发现包含它们的更长HSP的查寻的种子。只要可提高累积的比对分数，则沿着各序列在两个方向上延伸字段命中。对于核苷酸序列，使用参数M(对于匹配残基对的奖励分数，总大于0)和N(对于不匹配残基的惩罚分叔，总小于0)计算累积分数。对于氨基酸序列，使用分数矩阵以计算累积分数。当累积的比对分数从其获得的最大值减少X的量时，当由于一种或多种负分数残基比对的累积，累积分数变为零或更低时，或者当到达任一序列的末端时，停止字段命中在各方向上的延伸。BLAST算法参数W、T和X确定比对的灵敏度和速度。BLAST程序(对于核苷酸序列)使用11的字段长度(W)、10的期望值(E)、M＝5、N＝-4、和两个链(strand)的比较作为默认值。对于氨基酸序列，BLAST程序使用3的字段长度(W)、10的期望值(E)、和BLOSUM62分数矩阵作为默认值(参见Henikoff & Henikoff(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10915)。

除了计算百分比序列同一性之外，BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计学分析(参见例如Karlin & Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90：5873-5787)。BLAST算法提供的相似性的一种测量是最小和概率(P(N))，其提供概率的指示，通过该概率的指示将偶然发生两个核苷酸或氨基酸序列之间匹配。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中最小和概率小于约0.1，更优选小于约0.01，且最优选小于约0.001，则认为该核酸与参考序列相似。

当涉及螺旋肽中残基时，短语“在肽的螺旋轮图中彼此相邻”或“在肽的螺旋轮图中邻近”表示即使残基在线性肽中可为不相邻或邻近的，但在螺旋轮表示中该残基显示为相邻或邻近的。

本文所用的术语“烷基”或前缀“烷-”包括直链和支链基团两者和环状基团即环烷基。环状基团可为单环的或多环的，并优选具有3-6个环碳原子，包括端点。说明性的环状基团包括环丙基、环丁基、环戊基、和环己基。C_1-10烷基可为取代或未取代的。说明性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、羟基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羟烷基、羧烷基、和羧基。C_1-10烷基包括，但不限于，甲基、乙基、正丙基、异丙基、环丙基、环丙基甲基、环丙基乙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、环丁基、环丁基甲基、环丁基乙基、正戊基、环戊基、环戊基甲基、环戊基乙基、1-甲基丁基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、2，2-二甲基丙基、1-乙基丙基、1，1-二甲基丙基、1，2-二甲基丙基、1-甲基戊基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、1，1-二甲基丁基、1，2-二甲基丁基、1，3-二甲基丁基、2，2-二甲基丁基、2，3-二甲基丁基、3，3-二甲基丁基、1-乙基丁基、2-乙基丁基、1，1，2-三甲基丙基、1，2，2-三甲基丙基、1-乙基-1-甲基丙基、1-乙基-2-甲基丙基、环己基等。

“C_2-10烯基”是指含有一个或多个双键并具有2-10个碳原子的支链或非支链烃基。C_2-10烯基可任选地包含单环或多环，其中各环具有3-6个成员。该C_2-10烯基可以是取代或未取代的。说明性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、羟基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羟烷基、羧烷基、和羧基。C_2-10烯基包括，但不限于，乙烯基、烯丙基、2-环丁基-1-乙烯基、1-丙烯基、1-丁烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、2-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、4-戊烯基、3-甲基-1-丁烯基、3-甲基-2-丁烯基、3-甲基-3-丁烯基、2-甲基-1-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、2-乙基-2-丙烯基、1-甲基-1-丁烯基、1-甲基-2-丁烯基、1-甲基-3-丁烯基、2-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、4-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、3-甲基-3-戊烯基、4-甲基-3-戊烯基、2-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1，2-二甲基-1-丙烯基、1，2-二甲基-1-丁烯基、1，3-二甲基-1-丁烯基、1，2-二甲基-2-丁烯基、1，1-二甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-2-丁烯基、2，3-二甲基-3-丁烯基、1，3-二甲基-3-丁烯基、1，1-二甲基-3-丁烯基、2，2-二甲基-3-丁烯基等。

“C_2-10炔基”是指含有一个或多个三键并具有2-10个碳原子的支链或非支链烃基。C_2-10炔基可任选地包括单环、双环、或三环，其中各环具有5或6个成员。C_2-10炔基可以是取代或未取代的。说明性的取代基包括烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、羟基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羟烷基、羧烷基、和羧基。C_2-10炔基包括，但不限于，乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、1-戊炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、4-戊炔基、5-己烯-1-炔基、2-己炔基、3-己炔基、4-己炔基、5-己炔基、1-甲基-2-丙炔基、1-甲基-2-丁炔基、1-甲基-3-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1，2-二甲基-3-丁炔基、2，2-二甲基-3-丁炔基、1-甲基-2-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1-甲基-4-戊炔基、2-甲基-4-戊炔基、3-甲基-4-戊炔基等。

“C_2-6杂环基”是指稳定的5至7元单环或7至14元双环杂环，其为饱和、部分不饱和或不饱和(芳族)的，并由2-6个碳原子和1、2、3或4个独立选自N、O和S的杂原子组成，且包括其中任意的上述杂环稠合到苯环的任意双环基团。杂环基团可以是取代或未取代的。说明性的取代基包括，但不限于烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、羟基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羟烷基、羧烷基、和羧基。氮和硫杂原子可任选地被氧化。杂环可经由任意杂原子或碳原子共价地连接，其导致稳定的结构，例如咪唑啉环可在环碳原子位置或氮原子处连接。杂环中的氮原子可任选地被季铵化。在一些实施方式中，当杂环中S和O原子的总数超过1时，则这些杂原子彼此不相邻。杂环包括，但不限于，1H-吲唑、2-吡咯烷酮基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、2H-吡咯基、3H-吲哚基、4-哌啶酮基、4αH-咔唑、4H-喹嗪基、6H-1，2，5-噻二嗪基、吖啶基、吖辛因基(azocinyl)、苯并咪唑基、苯并呋喃基、硫茚基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑酮基(benzimidazalonyl)、咔唑基、4αH-咔唑基、b-咔啉基、色满基、色烯基、cinolinyl、十氢喹啉基、2H，6H-1，5，2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2，3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、indolenyl、二氢吲哚基、中氮茚基、吲哚基、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噁唑基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1，2，3-噁二唑基、1，2，4-噁二唑基、1，2，5-噁二唑基、1，3，4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑烷基萘嵌间二氮杂苯基、菲啶基、菲咯啉基、吩吡嗪基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、蝶啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑、吡啶并咪唑(pyridoimidole)、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、吡咯基、喹啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、咔啉基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1，2，5-噻二嗪基、1，2，3-噻二唑基、1，2，4-噻二唑基、1，2，5-噻二唑基、1，3，4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1，2，3-三唑基、1，2，4-三唑基、1，2，5-三唑基、1，3，4-三唑基、呫吨基。优选的5-10元杂环包括，但不限于，吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、四唑基、苯并呋喃基、硫茚基、吲哚基、苯并咪唑基、1H-吲唑基、噁唑烷基、异噁唑烷基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、羟吲哚基、苯并噁唑啉基、喹啉基、和异喹啉基。在一些实施方式中，5-6元杂环包括，但不限于，吡啶基、嘧啶基、三嗪基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯基、哌嗪基、哌啶基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、四唑基等。

“C_6-12芳基”是指具有由具有共轭电子的碳原子组成的环体系的芳族基团(例如苯基)。芳基通常具有6-12个碳原子。芳基可任选地包括单环、双环、或三环，其中各环具有5或6个成员。该芳基可以是取代或未取代的。说明性的取代基包括，但不限于，烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、氟代烷基、羧基、羟烷基、羧烷基、氨基、氨基烷基、单取代的氨基、二取代的氨基、季氨基等。

“C_7-14烷芳基”是指具有7-14个碳原子的被芳基取代的烷基(例如苄基、苯乙基、或3，4-二氯苯乙基)。

“C_3-10烷杂环基”是指除了一个或多个杂原子之外具有3-10个碳原子的烷基取代的杂环基团(例如，3-呋喃基甲基、2-呋喃基甲基、3-四氢呋喃基甲基，2-四氢呋喃基甲基等)。

“C_1-10杂烷基”是指除了一个或多个杂原子之外具有1-10个碳原子的支链或非支链的烷基、烯基、或炔基，其中一个或多个亚甲基(CH₂)或次甲基(CH)被氮、氧、硫、羰基、硫代羰基、磷酰基、或磺酰基代替。杂烷基包括，但不限于，叔胺、仲胺、醚、硫醚、酰胺、硫代酰胺、氨基甲酸酯(盐)、硫代氨基甲酸酯(盐)、氨基磷酸酯、磺胺、和二硫化物。杂烷基可任选地包括单环、双环、或三环，其中各环具有3-6个成员。该杂烷基可以是取代或未取代的。说明性的取代基包括，但不限于，烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳硫基、卤素、羟基、氟代烷基、全氟烷基、氨基、氨基烷基、二取代的氨基、季氨基、羟烷基、羟烷基、羧烷基、和羧基。

“酰基”是指具有式R-C(O)-的化学部分，其中R选自C_1-10烷基、C_1-10烯基、C_1-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、C_1-10杂烷基等。

“卤素”是指溴、氯、碘、或氟。

附图说明

图1的板A-D显示各种形式的氯硝柳胺。A：2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺；B：5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐；C：5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐；和D：5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)苯胺一水合物。

图2说明各种氯硝柳胺类似物。A：羟氯扎胺(3，3′，5，5′，6-五氯-2′-羟基水杨酰苯胺；2，3，5-三氯-N-(3，5-二氯-2-羟基苯基)-6-羟基苯甲酰胺)；B：氯氰碘柳胺(5′-氯-α4-(对氯苯基)-α4-氰基-3，5-二碘-2′，4′-水杨酰苯胺；N-[5-氯-4-[(4-氯苯基)氰甲基]-2-甲基苯基]-2-羟基-3-5-二碘苯甲酰胺)；C：雷复尼特(也称作Disalan；氯苯碘柳胺；N-(3-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基)-2-羟基-3，5-二碘苯甲酰胺；3′-氯-4′-(对氯苯氧基)-3，5-二碘水杨酰苯胺)；D：氟沙仑(3，5-二溴-2-羟基-N-(3-三氟甲基-苯基)-苯甲酰胺)；E：三溴沙仑(3，5-二溴-N-(4-溴-苯基)-2-羟基-苯甲酰胺)；F：雷琐太尔(N-(4-溴-苯基)-2，6-二羟基-苯甲酰胺)；G：氯碘沙尼(乙酸2-(4-氯-苯基氨基甲酰)-4，6-二碘-苯基酯)。

图3说明各种氯硝柳胺类似物及其盐。

图4说明氯硝柳胺类似物，其中一个卤素基团在相同的环中再定位(参见化合物A-D)或两个卤素基团在相同的环中再定位(参见化合物E-G)。

图5说明其中硝基基团在相同的环中再定位的氯硝柳胺(参见化合物A-C)和其中羟基在相同的环中再定位的氯硝柳胺类似物(参见化合物D-F)。

图6说明其中卤素和羟基两者和/或硝基再定位同时将取代基保持在芳族环中的氯硝柳胺类似物(参见化合物A-F)和具有硝基和羟基再定位的氯硝柳胺类似物(参见化合物G-I)。

图7说明包含单卤素交换的氯硝柳胺类似物(参见化合物A-D)、包含双卤素交换的氯硝柳胺类似物(参见化合物E-F)、包含Cl-交换为Br-的氯硝柳胺类似物(参见化合物G)、和包含Cl-交换为F-的氯硝柳胺类似物(参见化合物H)。

图8显示了用含有或不含添加物的食物喂食的apoE缺失的(null)小鼠的HDL炎症指数。C：单独用食物喂食的小鼠；D：用添加有8.0微克氯硝柳胺的食物喂食的小鼠；E：用添加有2.0微克L-4F的食物喂食的小鼠；F：用每克食物添加有8.0微克氯硝柳胺和2.0微克L-4F(游离碱)的食物喂食的小鼠。还将小鼠HDL(C-J)与以和小鼠HDL相同浓度添加的标准人类HDL(B)比较。将所得单核细胞的趋化活性对单独添加的标准对照LDL(A)进行归一化。将结果以HDL炎症指数作图，其是对于各条件测量的单核细胞趋化活性除以通过单独添加的标准对照LDL(其归一化为1.0)获得的单核细胞趋化活性的结果。G-I：第二次实验。G：单独的食物；H：每克食物添加有100微克氯硝柳胺的食物；I：每克小鼠食物添加有10微克L-4F(游离碱)的食物；I：每克食物添加有10微克L-4F(游离碱)和100微克氯硝柳胺的食物。显示的数据为平均±标准偏差。

图9显示了将氯硝柳胺作为口服大丸剂通过胃管饲法(胃管)给药，随后立即将L-4F作为大丸剂通过胃管给药，使apoE缺失的小鼠HDL抗炎。通过标准对照人类LDL测试含HDL部分抑制诱导单核细胞趋化活性的能力，该标准对照人类LDL加入到人类主动脉内皮细胞的培养物。将添加标准对照HDL或小鼠HDL之后获得的值与通过单独标准对照LDL获得的值对比以给出HDL炎症指数。显示的值为平均±标准偏差。

图10显示了将氯硝柳胺作为口服大丸剂通过胃管给药，随后立即将L-4F作为大丸剂通过胃管给药，显著地降低了apoE缺失的小鼠LDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力。测试来自图9所述小鼠的LDL部分在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力，并与标准对照人类LDL比较，对于LDL-炎症指数将标准对照人类LDL的值归一化为1.0。显示的数据为平均±标准偏差。

图11显示了将氯硝柳胺(5.0mg/kg体重)口服给药，随后立即将L-4F(0.5mg/kg体重)口服给药，使猴HDL抗炎。显示的数据为对于HDL的平均±标准偏差。

图12显示了将氯硝柳胺(5.0mg/kg体重)的口服给药，随后立即将L-4F(0.5mg/kg体重)口服给药，显著地减少了猴HDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力。如图10所述测试来自如图11所述的猴血浆的LDL部分。显示的数据为平均±标准偏差。

图13显示了两亲性螺旋肽(L-4F)提高在含水体系中氯硝柳胺的溶解性。以10mg/mL将氯硝柳胺加入水中或加入含有1.0mg/mL的L-4F(游离碱)的水中并在玻璃-玻璃均化器中均质化。将该溶液在4℃下储存10天并拍照。

图14显示了雌性apoE缺失的小鼠的HDL炎症指标，该小鼠通过胃管饲法(胃管)给予单独的100μL水或以如X轴所示剂量含有氯硝柳胺或含有与L-4F组合的氯硝柳胺的100μL水。将如图13中所示的含有或不含L-4F的氯硝柳胺的溶液连续(serially)稀释并通过胃管饲法(胃管)以每小鼠100微升的体积给予禁食的7个月大的雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝8)。处理后6小时收集血液，同时小鼠仍然禁食，用FPLC分离血浆并如图8所示测试HDL部分。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图15测试来自图14中所述小鼠的LDL诱导人类主动脉内皮细胞产生单核细胞趋化活性的能力。数据以如图10所述的LDL-炎症指标作图。显示的数据为平均数±标准偏差。

图16显示来自小鼠的HDL，该小鼠以在小鼠食物中250μg/天/小鼠给予氯硝柳胺，使用或不使用L-4F(游离碱)。对7个月大的雌性apoE缺失的小鼠(每治疗组n＝8)以在小鼠食物中250微克/天/小鼠给予氯硝柳胺，在饮用水中或在含有氯硝柳胺的小鼠食物(食物)中使用或不使用25微克/天/小鼠的L-4F(游离碱)。三天后从小鼠取血，用FPLC分离它们的血浆，且在人类主动脉内皮细胞的培养物中确定小鼠HDL(m)抑制LDL-诱导单核细胞趋化活性的能力并如图8中所述以HDL-炎症指数计算。将正常抗炎人类(h)HDL包括在测定中作为阳性对照。显示值为平均数±标准偏差。

图17显示来自图16中小鼠(m)的LDL的在人类主动脉内皮细胞的培养物中抑制诱导单核细胞趋化活性的能力的结果。通过将该结果与由单独的标准对照人类(h)LDL诱导的单核细胞趋化活性(其归一化为1.0)比较以LDL-炎症指标表示数据。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图18显示与D-4F对比将L-4F和氯硝柳胺给药的小鼠中前βHDL(pre-βHDL)的形成。

图19显示在D-4F或L-4F口服给药后的HDL-炎症指标。氯硝柳胺与D-4F或L-4F(两者均为游离碱)以10:1的比率(氯硝柳胺：肽；重量：重量)或者不与它们在pH7.0的ABCT缓冲液中均质化，并在37℃下培养1小时。通过胃管将不含或含有2.5、5.0、或10μg肽的缓冲液以100μL向3个月大的禁食的雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝8)给药。6小时后对小鼠进行取血，用FPLC分离它们的血浆，在暴露给正常人类LDL的人类主动脉内皮细胞的培养物中测试来自小鼠的HDL部分以确定HDL-炎症指标，如图8中所述。在不添加HDL(0)的情况下，将添加正常对照LDL之后获得的单核细胞趋化活性归一化为1.0。将添加人类LDL以及正常对照人类HDL(h)或小鼠HDL(m)后的单核细胞趋化活性除以在添加人类LDL而没有添加HDL获得的单核细胞趋化活性以得到HDL-炎症指数。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图20显示从接受口服D-4F或L-4F的小鼠所取的HDL的无细胞测定的结果。在无细胞测定中测试来自图19中所述小鼠的HDL。显示的数据为平均±标准偏差。

图21显示来自图19中所述小鼠的血浆对氧磷酶活性。显示的数据为平均±标准偏差。

图22显示了氯硝柳胺和L-4F的共同给药使apoE缺失的小鼠抗炎达到类似于正常人类HDL的程度。游离碱D-4F或L-4F与或者不与氯硝柳胺以10:1的比率(氯硝柳胺：肽；重量：重量)在使用0.1N NaOH调整到pH8.0的ABCT缓冲液中均质化。将不含肽或含有10μg肽的缓冲液以100μL通过胃管向4个月大的禁食apoE缺失的小鼠(每组n＝8)给药。7小时后对小鼠进行取血，并通过FPLC分离它们的血浆，在暴露给正常人类LDL的人类主动脉内皮细胞的培养物中测试来自小鼠的HDL部分以确定HDL-炎症指标，如图8所述。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图23.确定来自图22所述小鼠的LDL-炎症指数。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图24显示新的水杨酰苯胺(BP-1001和BP-1012)在改善HDL-炎症指数方面比氯硝柳胺更有效。将氯硝柳胺(BP-124)或BP-1001或BP-1012与D-4F或L-4F(两者均为游离碱)以10:1的比率(重量：重量)或者不与它们在ABCT缓冲液中均质化。将不含肽或含有5μg肽的缓冲液以100μL通过胃管向4个月大的禁食apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药。6小时后从小鼠取血并用FPLC分离它们的血浆，在暴露给正常人类LDL的人类主动脉内皮细胞的培养物中测试来自小鼠的HDL部分以确定HDL-炎症指数，如图8中所述。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图25.如图10所述确定取自图24所述小鼠的LDL的LDL-炎症指数。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图26显示氯硝柳胺(BP-124)与其他水杨酰苯胺的对比。将氯硝柳胺(BP-124)或其号码(BP#)显示在X轴上的水杨酰苯胺与L-4F(作为游离碱)以10:1(水杨酰苯胺：L-4F；重量：重量)的比率在用0.1N NaOH调整到pH8.0的ABCT缓冲液中均质化。将不含肽或水杨酰苯胺或者含有100μg水杨酰苯胺和10μg L-4F的缓冲液以100μL通过胃管向5个月大的禁食雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药。8小时后对小鼠进行取血并用FPLC分离它们的血浆，在暴露给正常人类LDL的人类主动脉内皮细胞的培养物中测试来自小鼠的HDL部分以确定HDL-炎症指数，如图8中所述。显示的数据为平均±标准偏差，h＝人类，m＝小鼠。

图27显示氯硝柳胺提高apoE缺失的小鼠中的L-4F吸收。通过胃管对禁食的6个月大的apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药在200微升中的具有或不具有100微克氯硝柳胺的¹⁴C-L-4F(每小鼠含有10微克L-4F的21,000dpm)。继续禁食并在X轴显示的时间点处对小鼠取血并确定dpm/mL血浆。

图28证明图27中使用的¹⁴C-L-4F是生物活性的。在图27中显示的化合物给药之后如图8所述确定HDL炎症指数。

图29显示在接受口服剂量的氯硝柳胺、L-4F、或氯硝柳胺与L-4F的apoE缺失的小鼠中的主动脉窦损伤分数(lesion score)。将喂食的17周大的雌性apoE缺失的小鼠分成三组并对各组的食物进行如下添加：第I组：250微克/小鼠/天的氯硝柳胺；第II组：25微克/小鼠/天的L-4F；第III组：25微克/小鼠/天的L-4F和250微克/小鼠/天的氯硝柳胺。所有组在它们的饮用水中接受50微克/小鼠/天的普伐他汀。14周后处死小鼠并如之前所述(Navab等(2005)Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.，25：1426-1432)确定主动脉窦损伤面积。

图30显示通过前位(enface)分析确定的图29中所述小鼠的主动脉表面积百分比。

图31显示图29中所述小鼠的巨噬细胞损伤面积百分比。

图32显示L-4F与氯硝柳胺组合口服给药引起年老apoE缺失的小鼠中的损伤衰退。鉴别来自UCLA繁殖群的9.5个月大的95只雌性apoE缺失的小鼠。在零时间点牺牲23只(第I组)以建立实验起始时的损伤面积。将剩余的小鼠分成三组，每组24只小鼠，并对各组的食物进行如下添加：第II组：2000微克/小鼠/天的氯硝柳胺；第III组：200微克/小鼠/天的L-4F；第IV组：200微克/小鼠/天的L-4F加上2000微克/小鼠/天的氯硝柳胺。所有组在它们的饮用水中接受50微克/小鼠/天的普伐他汀。根据兽医的要求，由于打斗和/或溃疡性皮炎，在实验结束前如下对小鼠进行安乐死：来自第II组的6只小鼠；来自第III组的5只小鼠；来自第IV组的4只小鼠。6个月后牺牲剩余的小鼠并根据之前(Id.)所述确定主动脉窦损伤面积。

图33显示通过前位分析确定的图32中所述小鼠的主动脉表面损伤面积百分比。

图34显示图32中所述小鼠的巨噬细胞损伤面积百分比。

图35显示对于将L-[113-122]apoJ或L-4F与或不与氯硝柳胺组合给药的apoE缺失的小鼠确定的HDL-炎症指数。通过胃管对10个月大的apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药2mg氯硝柳胺或200微克L-[113-122]apoJ或2mg氯硝柳胺和200微克L-[113-122]apoJ。8小时后对小鼠进行取血，用FPLC分离它们的血浆并根据图8所述确定HDL-炎症指数。显示的数据为平均±标准偏差。

具体实施方式

本发明涉及令人惊讶的发现：包括但不限于氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物的水杨酰苯胺，当与药物(例如肽药物如螺旋肽(例如A类两亲性螺旋肽、G*螺旋肽等)，如本文所述)组合口服给药时，显著提高该肽的生物利用度和/或表观体内活性。而且，生物利用度或表观活性的提高充分，使得之前作为“D”氨基酸异构体配制并在两端被保护以允许口服给药的肽药物可容易地利用所有L型氨基酸配制，L型氨基酸具有任选保护的末端用于口服给药。这显著地减少了制造这种肽的成本并提高在哺乳动物体系中肽行为的预测性，因为L肽的生物学活性通常更好表征和理解。

而且，令人惊讶的发现是当包括但不限于氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物的水杨酰苯胺与肽或蛋白质疗法(例如两亲性螺旋肽、如载脂蛋白A-I[apoA-I]或apoA-I部分或ApoJ等)结合(在酸性条件下)时，水杨酰苯胺和肽形成加合物，该加合物提高生物活性剂的表观溶解性和/或该剂的生物利用度。

因此，在一些实施方式中，本发明涉及通过如下增强向哺乳动物口服给药的肽的吸收和体内活性的方法，将该肽与足以增强该肽的体内活性(例如，通过增强的吸收和/或生物利用度)的量的氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合口服给药。为简化这种方法，在一些实施方式中，涉及药物制剂，其包含肽药物和氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物。在一些实施方式中，水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)与肽或蛋白质之间的反应的产物在包含水杨酰苯胺衍生的加合物的肽/蛋白质给药之前通过化学合成实现。

令人惊讶的发现还是本文所述的两亲性螺旋肽可提高在含水体系中氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物的溶解性，从而增强/促进氯硝柳胺在药物制剂中的引入。因此，在一些实施方式中，本发明涉及包含治疗性两亲性螺旋肽(例如D-4F、L-4F、L-5F等)和氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物的组合的药物制剂，其中在所述制剂中所述氯硝柳胺在水溶液中的溶解性显著大于在两亲性螺旋肽不存在下氯硝柳胺在水溶液中的溶解性。

在一些实施方式中，本发明还涉及令人惊讶的发现：试剂如N-(5-氯水杨酰)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、N-(10-[2-羟基苯甲酰]氨基癸酸(SNAD)、和N-(8-[2-羟基苯甲酰]氨基)辛酸(SNAC)等可将L型肽的口服生物利用度和/或表观活性提高至治疗的相关水平。这允许这种L型肽用作其中之前优选D型肽的口服输送治疗。在一些优选的实施方式中，L型肽是本文所述的两亲性螺旋肽(例如L-4F、L-5F等)。

在一些实施方式中，当与本文所述的氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物(包括但不必限于式I和/或表1中所示的那些)组合给药时，L型肽(例如本文所述的)甚至不需要氨基或羧基末端封端/保护基团。使用重组表达体系而不是化学肽合成方法可容易地合成这种缺少封端基团的肽。因此可容易地使用生物反应器以非常低的成本(与化学合成肽相比)制备这种无保护的肽。

在各种实施方式中，涉及包含与本文所述的氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物组合的一种或多种治疗性肽的制剂。该制剂通常适于口服给药。在一些实施方式中，制剂可提供在肽之前释放氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物和/或渗透性增强子。

尽管氯硝柳胺和氯硝柳胺类似物和/或本文所述的其它“渗透性”增强子对于增强本文所述的L肽的口服生物利用度是特别有用的，但不是如此限制使用这些试剂。因此，在一些实施方式中，还涉及使用这种具有被保护的L肽和或包括一个或多个D氨基酸残基的被保护或不被保护肽的试剂。

I.增强药物体内活性的水杨酰苯胺

如上所述，令人惊讶的发现是包括但不限于氯硝柳胺和氯硝柳胺类似物的各种水杨酰苯胺实质上提高向哺乳动物口服给药的药物(例如治疗性肽)的体内活性(例如生物利用度、生物活性等)是有效的。

A)氯硝柳胺和氯硝柳胺类似物

氯硝柳胺是氯硝基酚衍生物(参见图1中化合物A)，其主要用于对抗水生螺还用作人类和兽医学中的抗寄生虫药。氯硝柳胺已知为IUPAC命名：2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺和CAS命名：CAS：5-氯-N-(2-氯-4-硝基苯基)-2-羟基苯甲酰胺。

氯硝柳胺不是非常易溶于水，20℃下5-8mg/L，微溶于醚、醇和氯仿，且溶于丙酮；20℃下乙醇胺盐溶解在蒸馏水中180-280mg/L。然而，令人惊讶的发现是包括两亲性螺旋肽(例如本文所述)显著地提高了氯硝柳胺的溶解性并促进药物制剂的制备。

在片剂中，氯硝柳胺在潮湿环境中经历生物降解，但是氯硝柳胺自身在水溶液中稳定数月。乙醇胺盐对热是稳定的，被浓酸或碱水解，并在水生环境中是稳定的。

氯硝柳胺容易地以许多制剂得到。这些包括但不限于已知为IUPAC命名5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐或CAS命名5-氯-N-(2-氯-4-硝基苯基)-2-羟基苯甲酰胺与2-氨基乙醇(1:1)的乙醇胺盐(参见图1中的化合物C)；已知为IUPAC命名5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐或CAS命名5-氯-N-(2-氯-4-硝基苯基)-2-羟基苯甲酰胺与哌嗪(2:1)的哌嗪盐(参见图1中的化合物B)；和已知为IUPAC命名5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物或CAS命名5-氯-N-(2-氯-4-硝基苯基)-2-羟基苯甲酰胺与一水合物(1:1)的氯硝柳胺一水合物(参见图1中的化合物D)。

氯硝柳胺可以多种制剂商购，包括但不限于

BAYER 25 CLONITRALID、HL 

等。

本发明还涉及使用各种氯硝柳胺类似物以增强口服给药药物(例如治疗性肽)的体内。这种类似物包括但不限于式I的化合物：

其中X为N或CR¹⁰；Y为N或CR¹¹；Z为N或CR¹²；且R¹、R²、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²各自独立地选自H、卤素(F、Cl、Br或I)、NO₂、OH、OR¹³、SR¹⁴、NR¹⁵R¹⁶、CN、CF₃、C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、C_1-10杂烷基、或式II-XIV中之一所述。

在式I的化合物中，R³和R⁴独立地选自C＝O、C＝S、C＝NR⁴²、NH、NR⁴³、CHOR⁴⁴、CH₂等。基团R²和R⁴；X和R⁴；R⁵和R³；R⁹和R³可使用如下基团之一所述的连接组合以形成六元环：

对于式I的化合物，各E¹独立地为O、S、或NR⁴²；各E²独立地为CR⁴⁹R⁵⁰、O或S；各E³独立地为CR⁵¹R⁵²、O、S、或NR⁵³；各Q独立地为O、S、或NR⁵⁴。R¹³和R¹⁴各自独立地为酰基、C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、C_1-10杂烷基；R¹⁸、R²³、R²⁸、R²⁹、R³⁰、R⁴²、R⁵⁴各自独立地为C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、C_1-10杂烷基；R¹⁵、R¹⁶、R¹⁷、R¹⁹、R²⁰、R²¹、R²²、R²⁴、R²⁵、R²⁶、R²⁷、R⁴³、R⁴⁴、R⁴⁵、R⁴⁶、R⁴⁷、R⁴⁸、R⁵¹、R⁵²、和R⁵³各自独立地为H、C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、C_1-10杂烷基；R³¹、R³²、R³³、R³⁴、R³⁵、R³⁶、R³⁷、R³⁸、R³⁹、R⁴⁰、R⁴¹、R⁴⁹、和R⁵⁰各自独立地为H、卤素、NO₂、CN、CF₃、C_1-10烷基、C_2-10烯基、C_2-10炔基、C_2-6杂环基、C_6-12芳基、C_7-14烷芳基、C_3-10烷杂环基、或C_1-10杂烷基。

在一些实施方式中，式I的化合物通过式XVIII-XXI中任一个进一步描述：

其中X、Y、Z、E¹、R¹、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R⁴⁷和R⁴⁸如上所述。

在一些实施方式中，化合物包括式XXII所述的化合物：

其中R¹、R²、R⁵、R⁶、R⁷、R⁸、R⁹、R¹⁰、R¹¹和R¹²独立地选自H、卤素、NO₂、CF₃、OH、酰基、CN、C₁-C₁₀烷基(优选C₁-C₃烷基)、C₁-C₁₀杂烷基(优选C₁-C₃杂烷基)；且其中R³和R⁴如上所述。在一些实施方式中，R³为C＝O、且R⁴为NH或R³为NH且R⁴为C＝O。在这些和一些其它实施方式中，仅R¹、R²、R¹⁰、R¹¹和R¹²中的两个存在，且一个为H或OH，而另一个为卤素(例如Cl、Br、或F)。

在这些和一些其它实施方式中，仅R⁵、R⁶、R⁷、R⁸和R⁹中的两个存在且这些为NO₂和卤素(例如Cl、Br、或F)。

在一些实施方式中，氯硝柳胺类似物包括但不限于：其中一个卤素基团在相同环中再定位的氯硝柳胺类似物(例如参见图4中的化合物A-D)或两个卤素基团在相同环中再定位的氯硝柳胺类似物(例如参见图4中的化合物E-G)；其中硝基在相同环中再定位的氯硝柳胺(例如参见图5中的化合物A-C)；其中羟基在相同环中再定位的氯硝柳胺类似物(例如参见图5中的化合物D-F)；其中卤素和羟基和/或硝基再定位同时保持取代基在芳香环中的氯硝柳胺类似物(例如参见图6中的化合物A-F)；类似于图6中A-F的化合物，除了用(3-氯-4-硝基苯基)代替(2-氯-4-硝基苯基)以外；具有硝基和羟基再定位的氯硝柳胺类似物(例如参见图6中的化合物G-I)；包含单卤素交换的氯硝柳胺类似物(例如参加图7中的化合物A-D)；包含双卤素交换的氯硝柳胺类似物(例如参见图7中的化合物E-F)；包含Cl-交换为Br-的氯硝柳胺类似物(例如参见图7中的化合物G)；包含Cl-交换为F-的氯硝柳胺类似物(例如参见图7中的化合物H)等。

在一些实施方式中，氯硝柳胺类似物包括，但不限于根据式XXIII的化合物：

其中R¹、R²、R³、R⁴、和R⁵独立地存在或不存在，并且当存在时独立地选自Cl、Br、烷基、甲基、羟烷基等。这些类似物是说明性而不是限制性的。使用本文所提供的教导，本领域技术人员将认识到其它合适的氯硝柳胺类似物。

在一些实施方式中，水杨酰苯胺包括，但不限于表1所示的水杨酰苯胺。

表1.说明性的水杨酰苯胺

B)其它水杨酰苯胺

不受特定理论的约束，认为许多其它水杨酰苯胺可以类似于氯硝柳胺的方式发挥作用以增强口服给药药物(例如治疗性肽)的体内活性。说明性的水杨酰苯胺包括但不限于氯氰碘柳胺(CAS#：57808-65-8，参见例如，图2，化合物A)、羟氯扎胺(CAS#：2277-92-1，参见例如，图2，化合物B)、雷复尼特(CAS#：22662-39-1，参见例如，图2，化合物C)、氟沙仑(CAS#：4776-06-1，参见例如，图2，化合物D)、三溴沙仑(CAS#：87-10-5，参见例如，图2，化合物E)、雷琐太尔(CAS#：20788-07-2，参见例如，图2，化合物F)、氯碘沙尼(CAS#：14437-41-3，参见例如，图2，化合物G)。其它合适的水杨酰苯胺包括溴替尼特(CAS#：23233-88-7)、4′-氯-3-硝基水杨酰苯胺、4′-氯-5-硝基水杨酰苯胺、2′-氯-5′-甲氧基-3-硝基水杨酰苯胺、2′-甲氧基-3，4′-二硝基水杨酰苯胺、2′，4′-二甲基-3-硝基水杨酰苯胺、4′，5-二溴-3-硝基水杨酰苯胺、2′-氯-3，4′-二硝基水杨酰苯胺、2′-乙基-3-硝基水杨酰苯胺、2′-溴-3-硝基水杨酰苯胺等。在一些实施方式中，水杨酰苯胺包括图3所示化合物中的一种或多种。

注意，这些水杨酰苯胺旨在是说明性而不是限制性的。制造水杨酰苯胺的方法是本领域技术人员公知的(参见例如PCT/US2003/022026(WO2004/006906)，为了所有的目的将其作为参考引入本文)。

C)识别有效的水杨酰苯胺

使用本文所提供的教导，仅使用例行实验可容易地识别其它合适的水杨酰苯胺。各种水杨酰苯胺可从商业厂家(例如Sigma Chemical、Aldrich等)购买并然后筛选它们增强口服给药的药物(例如肽如L-4F)的表观体内活性的能力。这种筛选方法可包括例如将所讨论的水杨酰苯胺与L-4F(SEQ IDNO：5)组合向具有合适对照的apoE缺失的小鼠给药，并评价含有HDL血液部分抑制在人类主动脉内皮细胞培养物中由标准对照人类LDL所诱导的单核细胞趋化活性的能力。与L-4F组合给药时产生比单独的L-4F更多保护性HDL的水杨酰苯胺是增强该肽体内活性(表观活性)的化合物。本文在实施例1中说明了这种测定。

II.其它输送剂

不受特定理论的约束，考虑到本文所提出的氯硝柳胺数据，还认为许多其它输送剂也能够增强治疗性口服给药药物的体内活性(表观活性)，使得L型的肽与输送剂组合给药时实现治疗性相关水平的生物利用度，所述药物包括但不限于两亲性螺旋肽(例如ApoA-I、ApoA-I米兰、4F、D18A等)。

这种输送剂包括但不限于试剂如N-(5-氯水杨酰)-8-氨基辛酸(5-CNAC)、N-(10-[2-羟基苯甲酰]氨基癸酸(SNAD)、和N-(8-[2-羟基苯甲酰]氨基)辛酸(SNAC)以及其各种盐(例如二钠盐)。在一些实施方式中，这种输送剂包括前述美国专利5,866,536中公开的修饰氨基酸的任意一种或多种，或者美国专利5,773,647中描述的修饰氨基酸的任一种，其通过参考引入本文。还包括这种试剂的各种盐，包括但不限于WO 00/059863中所述的二钠盐，其通过参考引入本文。

在一些实施方式中，输送剂包含选自如下的化合物：4-{4-{N-(4-溴苯甲酰)氨基苯基]}丁酸、4-{4-N-(2-碘苯甲酰)氨基苯基]}丁酸、3-(4-(2，5-二甲氧基苯甲酰)氨基苯基)丙酸、4-{n-[4-(3-碘苯甲酰)氨基苯基]}丁酸、4-(邻-茴香酰)氨基苯基醋酸、3-[4-(2，4-二甲氧基苯甲酰)氨基苯基]丙酸(prioionic acid)、4-{4-[N-(4-碘苯甲酰)]氨基苯基}丁酸、3-4-(2，3-二甲氧基苯甲酰)氨基苯基]丙酸(pripionic acid)、4-{N-2[N-2-溴苯甲酰)]氨基苯基}丁酸、4-{N-2[N-3-溴苯甲酰]氨基苯基}丁酸、4-{4-[N-(4-溴苯甲酰)氨基苯基]}丁酸、4-{N-[4-(2-甲氧基-4-硝基苯甲酰)氨基苯基]}丁酸、4-(4-(2，3-二甲氧基苯甲酰)氨基苯基)丁酸、4-[4-N-(4-甲氧基-3-硝基苯甲酰)氨基苯基]丁酸等。

III.治疗性肽

本发明涉及使用水杨酰苯胺(例如氯硝柳胺)和其它输送剂以促进/允许治疗性肽的口服输送，甚至当该肽为L型肽和/或未保护时。治疗性肽是用于减轻疾病或病状的一种或多种症状的肽。

许多的治疗性肽是本领域技术人员所公知的并且可用于本发明的制剂和方法。这种肽包括，例如生长激素(例如，分离的和/或人类、猪、或牛的生长激素)；天然、合成、或重组生长激素释放激素(GHRH)；干扰素(例如，α、β、和γ干扰素)；白介素(例如，白介素-1、白介素-2等)；天然、合成、或重组胰岛素(例如猪、牛、人类胰岛素)；胰岛素样生长因子-1(IGF-1)；胰岛素样生长因子-2(IGF2，生长抑素)；肝素；类肝素；皮肤素；软骨素；降钙素(例如，天然、合成、或重组的鲑、猪(procine)、鳗鱼、鸡、和人类降钙素)；抗原(例如，流行性感冒抗原、甲型肝炎抗原、乙型肝炎抗原、丙型肝炎抗原、HPV抗原等)；抗体(多克隆的和单克隆的)(例如，

等)；催产素；黄体化激素释放激素(LHRH)；促卵泡激素(FSH)；葡糖脑苷脂酶；血小板生成素；非格司亭；前列腺素；加压素；色甘酸钠(例如，色甘酸钠或色甘酸二钠)；万古霉素；去铁敏(DFO)；包括其片段的甲状旁腺素(PTH)；抗微生物剂(例如，抗菌剂，包括抗真菌剂等)等。另外，治疗性肽包括这些化合物的类似物、片段、模拟物(mimetics)或修饰衍生物(例如，聚乙二醇(PEG)修饰的衍生物、糖基化的衍生物等)，或其任意组合。

在一些优选实施方式中，治疗性肽是改善与炎症反应有关的病状(例如，动脉粥样硬化)的一种或多种症状的肽。这种肽包括，但不限于ApoA-I(天然、合成、重组)、ApoA-I米兰(天然、合成、重组)、载脂蛋白M、18A、和相关肽(参见例如，美国专利4,643,988、美国专利6,037,323、和PCT公开WO97/36927，其全部通过参考引入本文)。

在一些特别优选实施方式中，本文所述方法和制剂中使用的治疗性肽包括以下描述的肽的一种或多种。

A)A类两亲性螺旋肽

在一些实施方式中，本发明的方法中使用的肽包括A类两亲性螺旋肽，例如如美国专利6,664,230以及PCT公开WO 02/15923和WO 2004/034977中所述的。发现包含A类两亲性螺旋的肽(“A类肽”)除了能够减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状之外，在本文所述的其它适应症的一种或多种的治疗中也是有用的。

A类肽的特征在于形成α-螺旋，该α-螺旋产生极性和非极性残基的分离，从而形成极性和非极性面，带正电的残基位于极性和非极性界面处且带负电的残基位于极性面的中心处(参见，例如Anantharamaiah(1986)Meth.Enzymol.，128：626-668)。注意，apo A-I的第四个外显子在折叠成3.667残基/转(turn)时产生A类两亲性螺旋结构。

根据本文所述对命名为18A的A类肽(参见例如Anantharamaiah(1986)Meth.Enzymol.，128：626-668)进行修饰以产生可口服给药并高效地抑制或防止动脉粥样硬化和/或本文所述其它适应症的一种或多种症状的肽。不受特定理论的约束，认为本发明的肽可通过捡起(pick up)/隐蔽种子分子(seedingmαlecule)而在体内发挥作用，该种子分子减轻LDL氧化。

我们确定，增加在18A的疏水面上Phe残基的数目将理论上提高脂质亲和性，其通过由Palgunachari等(1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，& VascularBiol.16：328-338所述的计算确定。理论上，用Phe系统取代18A非极性面中的残基将产生6种肽。具有附加的2、3和4个Phe的肽将分别具有13、14和15单位的理论脂质亲和性(λ)值。然而，如果附加的Phe从4提高到5，则λ值跳跃4个单位(达到19λ单位)。提高到6或7个Phe将产生较少的显著增加(分别达到20和21λ单位)。

制备许多这种A类肽，其包括命名为4F(L-4F)、D-4F、5F(L-5F)、和D-5F等的肽。各种A类肽抑制脉粥样硬化敏感的小鼠中的损伤发展。另外，肽在减轻本文所述各种病状的一种或多种症状中显示出变化但明显程度的功效。表2中说明许多这样的肽。

表2.用于本发明的说明性A类两亲性螺栓肽

连接物被下划线。

NMA为N-甲基氨茴内酐基(anthranilyl)。

在一些优选的实施方式中，该肽包括4F((表2中SEQ ID NO：5)，也称作L-4F，其中所有残基为L型氨基酸)或D-4F(其中一个或多个残基为D型氨基酸)的变异。在本文所述的任意肽中，C-末端和/或N-末端和/或内部残基可用本文所述的一个或多个封端基团进行封端。而且，对于本文公开的任意肽，本发明涉及L型肽和D型肽，逆序列(retro-sequences)，反序列(inverse-sequences)和逆反序列(retro-inverse sequences)。

另外，虽然表2的各种肽以保护氨基末端的乙酰基或N-甲基氨茴内酐基和保护羧基末端的酰胺基进行说明，但是这些保护基团的任一个可消除和/或用本文所述的另一保护基团来代替。在特别优选的实施方式中，该肽包含本文所述的一个或多个D型氨基酸。在一些实施方式中，表2中肽的每个氨基酸(例如每个对映体氨基酸)为D型氨基酸。

还注意，表2不是完全包括的。使用本文所提供的教导，其它合适的A类两亲性螺旋肽可常规地产生(例如通过保守或半保守取代(例如用E代替D)、延伸、缺失等)。因此，例如一个实施方式利用本文所示肽的任意一种或多种的截短(例如表2中通过SEQ ID NO：2-20和39-识别的肽)。因此，例如，SEQ ID NO：21说明包含来自包含一个或多个D氨基酸的18A的C-末端的14个氨基酸的肽，而SEQ ID NO：22-38说明其它的截短。

较长的肽也是合适的。这种较长的肽可完全形成A类两亲性螺旋，或者A类两亲性螺旋(多个螺旋)可形成该肽的一个或多个域。另外，本发明涉及该肽的多聚体形式(例如多联体)。因此，例如，本文说明的肽可偶联在一起(直接地或通过连接物(例如碳连接物、或者一个或多个氨基酸)与一个或多个中间氨基酸)。说明性的聚合肽包括18A-Pro-18A和SEQ ID NO：78-85的肽，在一些实施方式中包含一个或多个D氨基酸，更优选每个氨基酸为本文所述的D氨基酸和/或具有被保护的一个或两个末端。

还将认识到，除了本文清楚说明的D型和L型肽序列之外，本发明还涉及这些肽各自的逆和逆反型。在逆型中，序列的方向反转。在反型中，组成的氨基酸的手性反转(即L型氨基酸变成D型氨基酸且D型氨基酸变成L型氨基酸)。在逆反型中，氨基酸的顺序和手性反转。因此，例如，其中氨基末端位于天冬氨酸(D)且羧基末端位于苯丙氨酸(F)的4F肽(DWFKAFYDKVAEKFKEAF，SEQ ID NO：5)的逆型具有相同的序列，但氨基末端位于苯丙氨酸且羧基末端位于天冬氨酸，(即FAEKFKEAVKDYFAKFWD，SEQ ID NO：104)。在4F肽包含全部的L氨基酸时，逆反型将具有上述序列(SEQ ID NO：104)并包含全部的D型氨基酸。如在相关申请USSN 11/407,390和PCT/US2006/014389(其通过参考引入本文)中所示的螺旋轮图中所说明的，4F和逆反型(逆-4F)是彼此的镜像，具有极性和非极性面的相同分离，带正电的残基位于极性-非极性界面处且带负电的残基位于极性面的中心处。相同氨基酸聚合物的这些镜像在极性和非极性面的分离方面是相同的，带正电的残基位于极性-非极性界面处且带负电的残基位于极性面的中心处。因此，4F和逆-4F是彼此的对映体。对于逆肽和逆反肽的讨论，参见例如Chorev和Goodman，(1995)TibTech，13：439-445。

在涉及没有清楚说明的序列和取向时，该序列可视为表示氨基到羧基取向的氨基酸序列，逆型(即羧基到氨基取向的氨基酸序列)，其中L氨基酸用D氨基酸代替或D氨基酸用L氨基酸代替的反型(retro from)，和其中顺序反转且氨基酸的手性反转的逆反型。

B)在非极性面中具有芳族残基或脂族残基的apoA-I的A类两亲性螺旋肽模拟物

在一些实施方式中，本发明还提供修饰的A类两亲性螺旋肽。一些优选的肽在非极性面的中心处引入一个或多个芳族残基，例如3F^Cπ(如4F中所示)，或者在非极性面中心处具有一个或多个脂族残基，例如3F^Iπ，参见例如表3。不受特定理论的约束，我们认为，由于非极性面中心处π电子的存在，肽3F^Cπ的非极性面上的中央芳族残基允许水分子穿透到肽-脂质络合物的疏水脂质烷基链的附近，这又使得反应性氧物质(例如脂质氢过氧化物)能够进入将它们与细胞表面屏蔽开。类似地，我们还认为在非极性面中心具有脂肪族残基例如3F^Iπ的肽将类似地但不完全像3F^Cπ一样有效。

优选的肽将促炎HDL转化为抗炎HDL或者使抗炎HDL更抗炎，和/或降低由动脉壁细胞产生的LDL诱导的单核细胞趋化活性等于或大于表2中所示的D-4F或其它肽。

表3.一些优选肽的实例

C)其它A类和一些Y类两亲性螺旋肽

在一些实施方式中，本发明还涉及氨基酸组成与上述A类两亲性螺旋肽的一种或多种相同的A类两亲性螺旋肽。因此，例如在一些实施方式中，本发明涉及氨基酸组成和4F相同的肽。因此，在一些实施方式中，本发明包括包含18个氨基酸的肽，其中该18氨基酸由3个丙氨酸(A)、2个天冬氨酸(D)、2个谷氨酸(E)、4个苯丙氨酸(F)、4个赖氨酸(K)、1个缬氨酸(V)、1个色氨酸(W)、和1个酪氨酸(Y)组成；且其中该肽形成A类两亲性螺旋，并保护磷脂不被氧化剂氧化。在各种实施方式中，肽包含至少一个“D”氨基酸残基；并且在一些实施方式中，肽包含全部“D”型氨基酸残基。表4说明了各种这样的肽。还涉及这些肽的逆(逆)、反、逆反、和环状排列型。

表4.氨基酸组成为3个丙氨酸(A)、2个天冬氨酸(D)、2个谷氨酸(E)、4个苯丙氨酸(F)、4个赖氨酸(K)、1个缬氨酸(V)、1个色氨酸(W)、和1个酪氨酸(Y)的说明性18个氨基酸长度的A类两亲性螺旋肽。

 

名称	序列	SEQ IDNO
			[转换D-E]-4F类似物		106
[转换D-E]-1-4F	Ac-EWFKAFYEKVADKFKDAF-NH2	107
			[转换D-E]-2-4F	Ac-EWFKAFYDKVADKFKEAF-NH2	108
[转换D-E]-3-4F	Ac-DWFKAFYEKVADKFKEAF-NH2	109
			[转换D-E]-4-4F	Ac-DWFKAFYEKVAEKFKDAF-NH2	110
[W-2，F-3位置反转]		111
			4F-2	Ac-DFWKAFYDKVAEKFKEAF-NH2	112
[转换D-E]-1-4F-2	Ac-EFWKAFYEKVADKFKDAF-NH2	113
			[转换D-E]-2-4F-2	Ac-EFWKAFYDKVADKFKEAF-NH2	114
[转换D-E]-3-4F-2	Ac-DFWKAFYEKVADKFKEAF-NH2	115
			[转换D-E]-4-4F-2	Ac-DFWKAFYEKVAEKFKDAF-NH2	116
[F-6和Y-7位置转换]		117
			4F-3	Ac-DWFKAYFDKVAEKFKEAF-NH2	118
[转换D-E]-1-4F-5	Ac-EWFKAYFEKVADKFKDAF-NH2	119
			[转换D-E]-2-4F-5	Ac-EWFKAYFDKVADKFKEAF-NH2	120
[转换D-E]-3-4F-5	Ac-DWFKAYFEKVADKFKEAF-NH2	121
			[转换D-E]-4-4F-5	Ac-DWFKAYFEKVAEKFKDAF-NH2	122
[Y-7和10V位置转换]		123
			4F-4	Ac-DWFKAFVDKYAEKFKEAF-NH2	124
[转换D-E]-1-4F-4	Ac-EWFKAFVEKYADKFKDAF-NH2	125
			[转换D-E]-2-4F-4	Ac-EWFKAFVDKYADKFKEAF-NH2	126
[转换D-E]-3-4F-4	Ac-DWFKAFVEKYADKFKEAF-NH2	127

 

[转换D-E]-4-4F	Ac-DWFKAFVEKYAEKFKDAF-NH2	128
			[V-10和A-11转换]		129
4-F-5	Ac-DWFKAFYDKAVEKFKEAF-NH2	130
			[转换D-E]-1-4F-5	Ac-EWFKAFYEKAVDKFKDAF-NH2	131
[转换D-E]-2-4F-5	Ac-EWFKAFYDKAVDKFKEAF-NH2	132
			[转换D-E]-3-4F-5	Ac-DWFKAFYEKAVDKFKEAF-NH2	133
[转换D-E]-4-4F-5	Ac-DWFKAFYEKAVEKFKDAF-NH2	134
			[A-11和F-14转换]		135
4F-6	Ac-DWFKAFYDKVFEKAKEAF-NH2	136
			[转换D-E]-1-4F-6	Ac-EWFKAFYEKVFDKAKDAF-NH2	137
[转换D-E]-2-4F-6	Ac-EWFKAFYDKVFDKAKEAF-NH2	138
			[转换D-E]-3-4F-6	Ac-DWFKAFYEKVFDKAKEAF-NH2	139
[转换D-E]-4-4F-6	Ac-DWFKAFYEKVFEKAKDAF-NH2	140
			[F-14和A-17转换]		141
4F-7	Ac-DWFKAFYDKVAEKAKEFF-NH2	142
			[转换D-E]-1-4F-7	Ac-EWFKAFYEKVADKAKDFF-NH2	143
[转换D-E]-2-4F-7	Ac-EWFKAFYDKVADKAKEFF-NH2	144
			[转换D-E]-3-4F-7	Ac-DWFKAFYEKVADKAKEFF-NH2	145
[转换D-E]-4-4F-7	Ac-DWFKAFYEKVAEKAKDFF-NH2	146
			[A-17和F-18转换]		147
4F-8	Ac-DWFKAFYDKVAEKFKEFA-NH2	148
			[转换D-E]-1-4F-8	Ac-EWFKAFYEKVADKFKDFA-NH2	149
[转换D-E]-2-4F-8	Ac-EWFKAFYDKVADKFKEFA-NH2	150
			[转换D-E]-3-4F-8	Ac-DWFKAFYEKVADKFKEFA-NH2	151
[转换D-E]-4-4F-8	Ac-DWFKAFYEKVAEKFKDFA-NH2	152
			[W-2和A-17转换]		153
4F-9	Ac-DAFKAFYDKVAEKFKEWF-NH2	154
			[转换D-E]-1-4F-9	Ac-EAFKAFYEKVADKFKDWF-NH2	155
[转换D-E]-2-4F-9	Ac-EAFKAFYDKVADKFKEWF-NH2	156
			[转换D-E]-3-4F-9	Ac-DAFKAFYEKVADKFKEWF-NH2	157
[转换D-E]-4-4F-9	Ac-DAFKAFYEKVAEKFKDWF-NH2	158
			[W-2和A-11转换]		159
4F-10	Ac-DAFKAFYDKVWEKFKEAF-NH2	160
			[转换D-E]-1-4F-10	Ac-EAFKAFYEKVWDKFKDAF-NH2	161
[转换D-E]-2-4F-10	Ac-EAFKAFYDKVWDKFKEAF-NH2	162
			[转换D-E]-3-4F-10	Ac-DAFKAFYEKVWDKFKEAF-NH2	163
[转换D-E]-4-4F-10	Ac-DAFKAFYEKVWEKFKDAF-NH2	164
			[W-2和Y-7转换]		165
4F-11	Ac-DYFKAFWDKVAEKFKEAF-NH2	166

 

[转换D-E]-1-4F-11	Ac-EYFKAFWEKVADKFKDAF-NH2	167
			[转换D-E]-2-4F-11	Ac-EYFKAFWDKVADKFKEAF-NH2	168
[转换D-E]-3-4F-11	Ac-DYFKAFWEKVADKFKEAF-NH2	169
			[转换D-E]-4-4F-11	Ac-DYFKAFWEKVAEKFKDAF-NH2	170
[F-3和A-17转换]		171
			4F-12	Ac-DWAKAFYDKVAEKFKEFF-NH2	172
[转换D-E]-1-4F-12	Ac-EWAKAFYEKVADKFKDFF-NH2	173
			[转换D-E]-2-4F-12	Ac-EWAKAFYDKVADKFKEFF-NH2	174
[转换D-E]-3-4F-12	Ac-DWAKAFYEKVADKFKEFF-NH2	175
			[转换D-E]-4-4F-12	Ac-DWAKAFYEKVAEKFKDFF-NH2	176
[F-6和A-17转换]		177
			4F-13	Ac-DWFKAAYDKVAEKFKEFF-NH2	178
[转换D-E]-1-4F-13	Ac-EWFKAAYEKVADKFKDFF-NH2	179
			[转换D-E]-2-4F-13	Ac-EWFKAAYDKVADKFKEFF-NH2	180
[转换D-E]-3-4F-13	Ac-DWFKAAYEKVADKFKEFF-NH2	181
			[转换D-E]-4-4F-13	Ac-DWFKAAYEKVAEKFKDFF-NH2	182
[Y-7和A-17转换		183
			4F-14	Ac-DWFKAFADKVAEKFKEYF-NH2	184
[转换D-E]-1-4F-14	Ac-EWFKAFAEKVADKFKDYF-NH2	185
			[转换D-E]-2-4F-14	Ac-EWFKAFADKVADKFKEYF-NH2	186
[转换D-E]-3-4F-14	Ac-DWFKAFAEKVADKFKEYF-NH2	187
			[转换D-E]-4-4F	Ac-DWFKAFAEKVAEKFKDYF-NH2	188
[V-10和A-17转换]		189
			4F-15	Ac-DWFKAFYDKAAEKFKEVF-NH2	190
[转换D-E]-1-4F-15	Ac-EWFKAFYEKAADKFKDVF-NH2	191
			[转换D-E]-2-4F-15	Ac-EWFKAFYDKAADKFKEVF-NH2	192
[转换D-E]-3-4F-15	Ac-DWFKAFYEKAADKFKEVF-NH2	193
			[转换D-E]-4-4F-15	Ac-DWFKAFYEKAAEKFKDVF-NH2	194
[F3和Y-7转换]		195
			4F-16	Ac-DWYKAFFDKVAEKFKEAF-NH2	196
[转换D-E]-1-4F-16	Ac-EWYKAFFEKVADKFKDAF-NH2	197
			[转换D-E]-2-4F-16	Ac-EWYKAFFDKVADKFKEAF-NH2	198
[转换D-E]-3-4F-16	Ac-DWYKAFFEKVADKFKEAF-NH2	199
			[转换D-E]-4-4F-16	Ac-DWYKAFFEKVAEKFKDAF-NH2	200
[F-3和V-10转换]		201
			4F-17	Ac-DWVKAFYDKFAEKFKEAF-NH2	202
[转换D-E]-1-4F-17	Ac-EWVKAFYEKFADKFKDAF-NH2	203
			[转换D-E]-2-4F-17	Ac-EWVKAFYDKFADKFKEAF-NH2	204
[转换D-E]-3-4F-17	Ac-DWVKAFYEKFADKFKEAF-NH2	205

 

[转换D-E]-4-4F-17	Ac-DWVKAFYEKFAEKFKDAF-NH2	206
			[Y-7和F-14转换]		207
4F-18	Ac-DWFKAFFDKVAEKYKEAF-NH2	208
			[转换D-E]-1-4F-18	Ac-EWFKAFFEKVADKYKDAF-NH2	209
[转换D-E]-2-4F-18	Ac-EWFKAFFDKVADKYKEAF-NH2	210
			[转换D-E]-3-4F-18	Ac-DWFKAFFEKVADKYKEAF-NH2	211
[转换D-E]-3-4F-18	Ac-DWFKAFFEKVADKYKEAF-NH2	212
			[Y-7和F-18转换]		213
4F-19	Ac-DWFKAFFDKVAEKFKEAY-NH2	214
			[转换D-E]-1-4F-19	Ac-EWFKAFFEKVADKFKDAY-NH2	215
[转换D-E]-2-4F-19	Ac-EWFKAFFDKVADKFKEAY-NH2	216
			[转换D-E]-3-4F-19	Ac-DWFKAFFEKVADKFKEAY-NH2	217
[转换D-E]-4-4F-19	Ac-DWFKAFFEKVAEKFKDAY-NH2	218
			[V-10和F-18转换		219
4F-20	Ac-DWFKAFYDKFAEKFKEAV-NH2	220
			[转换D-E]-1-4F-20	Ac-EWFKAFYEKFADKFKDAV-NH2	221
[转换D-E]-2-4F-20	Ac-EWFKAFYDKFADKFKEAV-NH2	222
			[转换D-E]-3-4F-20	Ac-DWFKAFYEKFADKFKEAV-NH2	223
[转换D-E]-4-4F-20	Ac-DWFKAFYEKFAEKFKDAV-NH2	224
			[W-2和K13转换]		225
4F-21	Ac-DKFKAFYDKVAEKFWEAF-NH2	226
			[转换D-E]-1-4F-21	Ac-EKFKAFYEKVADKFWDAF-NH2	227
[转换D-E]-2-4F-21	Ac-EKFKAFYDKVADKFWEAF-NH2	228
			[转换D-E]-3-4F-21	Ac-DKFKAFYEKVADKFWEAF-NH2	229
[转换D-E]-4-4F-21	Ac-DKFKAFYEKVAEKFWDAF-NH2	230
			[W-3，F-13和K-24F]		231
4F-22	Ac-DKWKAFYDKVAEKFFEAF-NH2	232
			[转换D-E]-1-4F-22	Ac-EKWKAFYEKVADKFFDAF-NH2	233
[转换D-E]-2-4F-22	Ac-EKWKAFYDKVADKFFEAF-NH2	234
			[转换D-E]-3-4F-22	Ac-DKWKAFYEKVADKFFEAF-NH2	235
[转换D-E]-4-4F-22	Ac-DKWKAFYEKVAEKFFDAF-NH2	236
			[K-2，W10，V-13]		237
4F-23	Ac-DKFKAFYDKWAEVFKEAF-NH2	238
			[转换D-E]-4F类似物		239
[转换D-E]-1-4F-23	Ac-EKFKAFYEKWADVFKDAF-NH2	240
			[转换D-E]-2-4F-23	Ac-EKFKAFYDKWADVFKEAF-NH2	241
[转换D-E]-3-4F-23	Ac-DKFKAFYEKWADVFKEAF-NH2	242
			[转换D-E]-4-4F-23	Ac-DKFKAFYEKWAEVFKDAF-NH2	243
[K-2，F-13，W-144F]		244

 

4F-24	Ac-DKFKAFYDKVAEFWKEAF-NH2	245
			[转换D-E]-4F类似物		246
[转换D-E]-1-4F-24	Ac-EKFKAFYEKVADFWKDAF-NH2	247
			[转换D-E]-2-4F-24	Ac-EKFKAFYDKVADFWKEAF-NH2	248
[转换D-E]-3-4F-24	Ac-DKFKAFYEKVADFWKEAF-NH2	249
			[转换D-E]-4-4F-24	Ac-DKFKAFYEKVAEFWKDAF-NH2	250
逆4F类似物		251
			逆-4F	Ac-FAEKFKEAVKDYFAKFWD-NH2	252
[转换D-E]-1-逆-4F	Ac-FADKFKDAVKEYFAKFWE-NH2	253
			[转换D-E]-2-逆-4F	Ac-FADKFKEAVKDYFAKFWE-NH2	254
[转换D-E]-3-逆-4F	Ac-FAEKFKDAVKEYFAKFWD-NH2	255
			[转换D-E]-4-逆-4F	Ac-FAEKFKDAVKDYFAKFWE-NH2	256
[A-2和W-17转换]		257
			逆-4F-1	Ac-FWEKFKEAVKDYFAKFAD-NH2	258
[转换D-E]-1-逆-4F-1	Ac-FWDKFKDAVKEYFAKFAE-NH2	259
			[转换D-E]-2-逆-4F-1	Ac-FADKFKEAVKDYFAKFWE-NH2	260
[转换D-E]-3-逆-4F-1	Ac-FAEKFKDAVKEYFAKFWD-NH2	261
			[转换D-E]-4-逆-4F-1	Ac-FAEKFKDAVKDYFAKFWE-NH2	262
[转换A-2和F-16]		263
			逆-4F-2	Ac-FFEKFKEAVKDYFAKAWD-NH2	264
[转换D-E]-1-逆-4F-2	Ac-FFDKFKDAVKEYFAKAWE-NH2	265
			[转换D-E]-2-逆-4F-2	Ac-FFDKFKEAVKDYFAKAWE-NH2	266
[转换D-E]-3-逆-4F-2	Ac-FFEKFKDAVKEYFAKAWD-NH2	267
			[转换D-E]-4-逆-4F-2	Ac-FFEKFKDAVKDYFAKAWE-NH2	268
[转换F-5和A-8]		269
			逆-4F-3	Ac-FAEKAKEFVKDYFAKFWD-NH2	270
[转换D-E]-1-逆-4F-3	Ac-FADKAKDFVKEYFAKFWE-NH2	271
			[转换D-E]-2-逆-4F-3	Ac-FADKAKEFVKDYFAKFWE-NH2	272
[转换D-E]-3-逆-4F-3	Ac-FAEKAKDFVKEYFAKFWD-NH2	273
			[转换D-E]-4-逆-4F-3	Ac-FAEKAKDFVKDYFAKFWE-NH2	274
[转换A-8和V9]		275
			逆-4F-4	Ac-FAEKFKEVAKDYFAKFWD-NH2	276
[转换D-E]-1-逆-4F-4	Ac-FADKFKDVAKEYFAKFWE-NH2	277
			[转换D-E]-2-逆-4F-4	Ac-FADKFKEVAKDYFAKFWE-NH2	278
[转换D-E]-3-逆-4F-4	Ac-FAEKFKDVAKEYFAKFWD-NH2	279
			[转换D-E]-4-逆-4F-4	Ac-FAEKFKDVAKDYFAKFWE-NH2	280
[转换V-9至Y-12]		281
			逆-4F-5	Ac-FAEKFKEAYKDVFAKFWD-NH2	282

 

[转换D-E]-1-逆-4F-5	Ac-FADKFKDAYKEVFAKFWE-NH2	283
			[转换D-E]-2-逆-4F-5	Ac-FADKFKEAYKDVFAKFWE-NH2	284
[转换D-E]-3-逆-4F-5	Ac-FAEKFKDAYKEVEAKFWD-NH2	285
			[转换D-E]-4-逆-4F-5	Ac-FAEKFKDAYKDVFAKFWE-NH2	286
[转换Y-12和F-13]		287
			逆-4F-6	Ac-FAEKFKEAVKDFYAKFWD-NH2	288
[转换D-E]-1-逆-4F-6	Ac-FADKFKDAVKEFYAKFWE-NH2	289
			[转换D-E]-2-逆-4F-6	Ac-FADKFKEAVKDFYAKFWE-NH2	290
[转换D-E]-3-逆-4F-6	Ac-FAEKFKDAVKEFYAKFWD-NH2	291
			[转换D-E]-4-逆-4F-6	Ac-FAEKFKDAVKDFYAKFWE-NH2	292
[转换K-6和W-17]		293
			逆-4F-7	Ac-FAEKFWEAVKDYFAKFKD-NH2	294
[转换D-E]-1-逆-4F-7	Ac-FADKFWDAVKEYFAKFKE-NH2	295
			[转换D-E]-2-逆-4F-7	Ac-FADKFWEAVKDYFAKFKE-NH2	296
[转换D-E]-3-逆-4F-7	Ac-FAEKFWDAVKEYFAKFKD-NH2	297
			[转换D-E]-4-逆-4F-7	Ac-FAEKFWDAVKDYFAKFKE-NH2	298
[转换F-1和A-2]		299
			逆-4F-8	Ac-AFEKFKEAVKDYFAKFWD-NH2	300
[转换D-E]-1-逆-4F-8	Ac-AFDKFKDAVKEYFAKFWE-NH2	301
			[转换D-E]-2-逆-4F-8	Ac-AFDKFKEAVKDYFAKFWE-NH2	302
[转换D-E]-3-逆-4F-8	Ac-AFEKFKDAVKEYFAKFWD-NH2	303
			[转换D-E]-4-逆-4F-8	Ac-AFEKFKDAVKDYFAKFWE-NH2	304
[F-1和V-9转换]		305
			逆-F-9	Ac-VAEKFKEAFKDYFAKFWD-NH2	306
[转换D-E]-1-逆-4F-9	Ac-VADKFKDAFKEYFAKFWE-NH2	307
			[转换D-E]-2-逆-4F-9	Ac-VADKFKEAFKDYFAKFWE-NH2	308
[转换D-E]-3-逆-4F-9	Ac-VAEKFKDAFKEYFAKFWD-NH2	309
			[转换D-E]-4-逆-4F-9	Ac-VAEKFKDAFKDYFAKFWE-NH2	310
[F-1和Y-12转换]		311
			逆-4F-10	Ac-YAEKFKEAVKDFFAKFWD-NH2	312
[转换D-E]-1-逆-4F-10	Ac-YADKFKDAVKEFFAKFWE-NH2	313
			[转换D-E]-2-逆-4F-10	Ac-YADKFKEAVKDFFAKFWE-NH2	314
[转换D-E]-3-逆-4F-10	Ac-YAEKFKDAVKEFEAKFWD-NH2	315
			[转换D-E]-4-逆-4F-10	Ac-YAEKFKDAVKDFFAKFWE-NH2	316
[F-1和A-8转换]		317
			逆-4F-11	Ac-AAEKFKEFVKDYFAKFWD-NH2	318
[转换D-E]-1-逆-4F-11	Ac-AADKFKDFVKEYFAKFWE-NH2	319
			[转换D-E]-2-逆-4F-11	Ac-AADKFKEFVKDYFAKFWE-NH2	320

 

[转换D-E]-3-逆-4F-11	Ac-AAEKFKDFVKEYFAKFWD-NH2	321
			转换D-E]-4-逆-4F-11	Ac-AAEKFKDFVKDYFAKFWE-NH2	322
[A-2和F-5转换]		323
			逆-4F-12	Ac-FFEKAKEAVKDYFAKFWD-NH2	324
[转换D-E]-1-逆-4F-12	Ac-FFDKAKDAVKEYFAKFWE-NH2	325
			[转换D-E]-2-逆-4F-12	Ac-FFDKAKEAVKDYFAKFWE-NH2	326
[转换D-E]-3-逆-4F-12	Ac-FFEKAKDAVKEYFAKFWD-NH2	327
			[转换D-E]-4-逆-4F-12	Ac-FFEKAKDAVKDYFAKFWE-NH2	328
[A-2和Y12转换		329
			逆-4F-13	Ac-FYEKFKEAVKDAFAKFWD-NH2	330
[转换D-E]-1-逆-4F-13	Ac-FYDKFKDAVKEAFAKFWE-NH2	331
			[转换D-E]-2-逆-4F-13	Ac-FYDKFKEAVKDAFAKFWE-NH2	332
[转换D-E]-3-逆-4F-13	Ac-FYEKFKDAVKEAFAKFWD-NH2	333
			[转换D-E]-4-逆-4F-13	Ac-FYEKFKDAVKDAFAKFWE-NH2	334
[A-2和V-9转换]		335
			逆-4F-14	Ac-FVEKFKEAAKDYFAKFWD-NH2	336
[转换D-E]-1-逆-4F-14	Ac-FVDKFKDAAKEYFAKFWE-NH2	337
			[转换D-E]-2-逆-4F-14	Ac-FVDKFKEAAKDYFAKFWE-NH2	338
[转换D-E]-3-逆-4F-14	Ac-FVEKFKDAAKEYFAKFWD-NH2	339
			[转换D-E]-4-逆-4F-14	Ac-FVEKFKDAAKDYFAKFWE-NH2	340
[F-5和Y-12转换]		341
			逆-4F-15	Ac-FAEKYKEAVKDFFAKFWD-NH2	342
[转换D-E]-1-逆-4F-15	Ac-FADKYKDAVKEFFAKFWE-NH2	343
			[转换D-E]-2-逆-4F-15	Ac-FADKYKEAVKDFFAKFWE-NH2	344
[转换D-E]-3-逆-4F-15	Ac-FAEKYKDAVKEFFAKFWD-NH2	345
			[转换D-E]-4-逆-4F-15	Ac-FAEKYKDAVKDFFAKFWE-NH2	346
[F-5和V-9转换]		347
			逆-4F-16	Ac-FAEKVKEAFKDYFAKFWD-NH2	348
[转换D-E]-1-逆-4F-16	Ac-FADKVKDAFKEYFAKFWE-NH2	349
			[转换D-E]-2-逆-4F-16	Ac-FADKVKEAFKDYFAKFWE-NH2	350
[转换D-E]-3-逆-4F-16	Ac-FAEKVKDAFKEYFAKFWD-NH2	351
			[转换D-E]-4-逆-4F-16	Ac-FAEKVKDAFKDYFAKFWE-NH2	352
[A-8和Y-12转换]		353
			逆-4F-17	Ac-FAEKFKEYVKDAFAKFWD-NH2	354
[转换D-E]-1-逆-4F-17	Ac-FADKFKDYVKEAFAKFWE-NH2	355
			[转换D-E]-2-逆-4F-17	Ac-FADKFKEYVKDAFAKFWE-NH2	356
[转换D-E]-3-逆-4F-17	Ac-FAEKFKDYVKEAFAKFWD-NH2	357
			[转换D-E]-4-逆-4F-17	Ac-FAEKFKDYVKDAFAKFWE-NH2	358

 

[V-9和F-13转换]		359
			逆-4F-18	Ac-FAEKFKEAFKDYVAKFWD-NH2	360
[转换D-E]-1-逆-4F-18	Ac-FADKFKDAFKEYVAKFWE-NH2	361
			[转换D-E]-2-逆-4F-18	Ac-FADKFKEAFKDYVAKFWE-NH2	362
[转换D-E]-3-逆-4F-18	Ac-FAEKFKDAFKEYVAKFWD-NH2	363
			[转换D-E]-4-逆-4F-18	Ac-FAEKFKDAFKDYVAKFWE-NH2	364
[V-9和F-16转换]		365
			逆-4F-19	Ac-FAEKFKEAFKDYFAKVWD-NH2	366
[转换D-E]-1-逆-4F-19	Ac-FADKFKDAFKEYFAKVWE-NH2	367
			[转换D-E]-2-逆-4F-19	Ac-FADKFKEAFKDYFAKVWE-NH2	368
[转换D-E]-3-逆-4F-19	Ac-FAEKFKDAFKEYFAKVWD-NH2	369
			转换D-E]-4-逆-4F-19	Ac-FAEKFKDAFKDYFAKVWE-NH2	370
[Y-12和F-16转换		371
			逆-4F-20	Ac-FAEKFKEAVKDFFAKYWD-NH2	372
[转换D-E]-1-逆-4F-20	Ac-FADKFKDAVKEFFAKYWE-NH2	373
			[转换D-E]-2-逆-4F-20	Ac-FADKFKEAVKDFFAKYWE-NH2	374
[转换D-E]-3-逆-4F-20	Ac-FAEKFKDAVKEFFAKYWD-NH2	375
			[转换D-E]-4-逆-4F-20	Ac-FAEKFKDAVKDFFAKYWE-NH2	376
[W-1，F-6和K-17逆4F]		377
			逆-4F-21	Ac-WAEKFFEAVKDYFAKFKD-NH2	378
[转换D-E]-1-逆-4F-7	Ac-WADKFFDAVKEYFAKFKE-NH2	379
			[转换D-E]-2-逆-4F-7	Ac-WADKFFEAVKDYFAKFKE-NH2	380
[转换D-E]-3-逆-4F-7	Ac-WAEKFFDAVKEYFAKFKD-NH2	381
			转换D-E]-4-逆-4F-7	Ac-WAEKFFDAVKDYFAKFKE-NH2	382
[W-5，F-6和K-17逆-4F]		383
			逆-4F-22	Ac-FAEKWFEAVKDYFAKFKD-NH2	384
[转换D-E]-1-逆-4F-22	Ac-FADKWFDAVKEYFAKFKE-NH2	385
			[转换D-E]-2-逆-4F-22	Ac-FADKWFEAVKDYFAKFKE-NH2	386
[转换D-E]-3-逆-4F-22	Ac-FAEKWFDAVKEYFAKFKD-NH2	387
			[转换D-E]-4-逆-4F-22	Ac-FAEKWFDAVKDYFAKFKE-NH2	388
[V-6，W-9，K-17逆-4F]		389
			逆-4F-23	Ac-FAEKFVEAWKDYFAKFKD-NH2	390
[转换D-E]-1-逆-4F-23	Ac-FADKFVDAWKEYFAKFKE-NH2	391
			[转换D-E]-2-逆-4F-23	Ac-FADKFVEAWKDYFAKFKE-NH2	392
[转换D-E]-3-逆-4F-23	Ac-FAEKFVDAWKEYFAKFKD-NH2	393
			[转换D-E]-4-逆-4F-23	Ac-FAEKFVDAWKDYFAKFKE-NH2	394
[Y-2，A-4，W-12，K-17逆-4F]		395

 

逆-4F-24	Ac-FYEKFAEAVKDWFAKFKD-NH2	396
			[转换D-E]-1-逆-4F-24	Ac-FYDKFADAVKEWFAKFKE-NH2	397
[转换D-E]-2-逆-4F-24	Ac-FYDKFAEAVKDWFAKFKE-NH2	398
			[转换D-E]-3-逆-4F-24	Ac-FYEKFADAVKEWFAKFKD-NH2	399
[转换D-E]-4-逆-4F-24	Ac-FYEKFADAVKDWFAKFKE-NH2	400

基于螺旋轮图，可容易地识别生物活性和有用的肽。因此，例如已经准确地鉴定下列肽是活性的：3F1、3F2、4F、其反型、其逆(retro)型和其逆反型。因此，在一些实施方式中，本发明涉及包含肽的活性剂，该肽的长度为18个氨基酸和形成A类两亲性螺旋，其中该肽具有如下的氨基酸组成：2个天冬氨酸、2个谷氨酸、4个赖氨酸、1个色氨酸、1个酪氨酸、不多于1个亮氨酸、不多于1个缬氨酸、不少于1个且不多于3个丙氨酸、且具有来自下组的3-6个氨基酸：苯基丙氨酸、α-萘丙氨酸(naphthalanine)、β-萘丙氨酸、组氨酸；并且该肽在A类两亲性螺旋的螺旋轮示图中的极性面上含有9或10个氨基酸，该A类两亲性螺旋包括在中性pH值下带正电荷的4个氨基酸，其中两个带正电的残基位于极性和非极性面之间的界面上，且4个带正电残基中的两个在极性面上为邻近的，和在非极性面上来自下组的氨基酸残基的两个也是连接的：苯丙氨酸、α-萘丙氨酸、β-萘丙氨酸、组氨酸，如果在非极性面上存在4个或更多来自该组的氨基酸，则至少2个来自该组的残基不是邻近的。

在一些实施方式中，本发明还涉及一些Y类和A类两亲性螺旋肽。Y类两亲性螺旋肽是本领域技术人员已知的(参见，例如Segrest等(1992)J.Lipid Res.33：141-166；Oram and Heinecke(2005)Physiol Rev.85：1343-1372等)。在各种实施方式中，这些肽包括，但不限于如式XXIV(SEQ ID NO：402)所述的形成A类两亲性螺旋或Y类两亲性螺旋的18个氨基酸的肽：

D X X K Y X X D K X Y D K X K D Y X    XXIV

其中各D独立地为Asp或Glu；各K独立地为Lys或Arg；各X独立地为Leu、norLeu、Val、Ile、Trp、Phe、Tyr、β-Nal、或α-Nal，且所有的X残基位于非极性面上(例如，当在螺旋轮图中观察时)，除了一个可在两个K残基之间在极性面上；各Y独立地为Ala、His、Ser、Gln、Asn、或Thr非极性面(例如，当在螺旋轮图中观察时)，且各Y独立地为极性面上的1个Ala、1个His、1个Ser、1个Gln、1个Asn、或极性面上的1个Thr(例如，当在螺旋轮图中观察时)，其中不多于2个K是邻近的(例如，当在螺旋轮图中观察时)；且其中不多于3个D是邻近的(例如，当在螺旋轮图中观察时)，并且第四个D通过Y与其他的D分离。包括具有组氨酸、和/或α-和/或β-萘丙氨酸的肽的这种说明性的肽示于表5中。还涉及这些肽的逆(retro-)、反、逆反、和环状排列型。

表5.具有引入序列中的His的各种说明性A类和/或Y类肽类似物。

还注意，本文所述的任意肽除了包括本文识别的相应天然氨基酸之外还可包括非天然氨基酸，或者包括非天然氨基酸替代本文识别的相应天然氨基酸。这种修饰包括，但不限于乙酰化、酰胺化、甲酰化、甲基化、硫酸化等。说明性的非-天然氨基酸包括，但不限于鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、N-甲基缬氨酸、6-N-甲基赖氨酸、N-甲基异亮氨酸、N-甲基甘氨酸、肌氨酸、肌苷、别-异亮氨酸、异锁链赖氨酸(isodesmolysine)、4-羟基脯氨酸、3-羟基脯氨酸、别-羟基赖氨酸、羟基赖氨酸(hydroxylisine)、N-乙基天冬酰胺、N-乙基甘氨酸、2，3-二氨基丙酸、2，2′-二氨基丙酸、锁链素、2，4-二氨基丁酸、2-氨基庚二酸、3-氨基异丁酸、2-氨基异丁酸、2-氨基庚酸、6-氨基己酸、4-氨基丁酸、2-氨基丁酸、β-丙氨酸、3-氨基己二酸、2-氨基己二酸等。在一些实施方式中，本文所述肽的“天然”氨基酸的任意一种或多种可用相应的非天然氨基酸(例如，如上所述)代替。

在一些实施方式中，本发明特别涉及使用修饰的赖氨酸。这种修饰包括，但不限于ε赖氨酸的生物素修饰和/或ε赖氨酸的甲基化。包含ε甲基化赖氨酸的说明性肽包括，但不限于：Ac-D-W-F-K(eCH₃)₂-A-F-Y-D-K(eCH₃)₂-V-A-E-K(eCH₃)₂-F-K(eCH₃)₂-E-A-F-NH(CH₃)₂(SEQ ID NO：633)，和Ac-DWFK(eCH₃)₂AFYDK(eCH₃)₂VAEK(eCH₃)₂FK(eCH₃)₂EAF-NH(CH₃)(SEQ ID NO：634)。其它修饰氨基酸包括但不限于鸟氨酸类似物和高氨基丙氨酸(homoaminoalanine)类似物(代替对于Lys的(CH₂)₄-NH₂，其可为对于Haa的-(CH₂)₂-NH₂和对于Orn的-(CH₂)₃-NH₂)等。注意，这些修饰是说明性而非旨在限制。具有修饰氨基酸的说明性4F类似物如表6所示。

表6.包含修饰氨基酸的说明性4F类似物

 

肽	SEQID NO
		4F的εN-二甲基-Lys衍生物(εN-Dime)：
Ac-D-W-F-K(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K(εN-Dime)-E-A-F-NH2	635
		Ac-D-W-F-K-(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K((εN-Dime)-E-A-F-NH-Me	636
Ac-D-W-F-K-(εN-Dime)-A-F-Y-D-K(εN-Dime)-V-A-E-K(εN-Dime)-F-K(εN-Dime)-E-A-F-N-(Me)2	637
		4F的εN-二乙基-Lys衍生物(εN-Diet)
Ac-D-W-F-K(εN-Diet)-A-F-Y-D-K(εN-Diet)-V-A-E-K(εN-Diet)-F-K(εN-Diet)-E-A-F-NH2	638
		Ac-D-W-F-K(εN-Diet)-A-F-Y-D-K(εN-Diet)-V-A-E-K(εN-Diet)-F-K(εN-Diet)-E-A-F-NH-Et	639
Ac-D-W-F-K(εN-Diet)-A-F-Y-D-K(εN-Diet)-V-A-E-K(εN-Diet)-F-K(εN-Diet)-E-A-F-NH-(Et)2	640
		4F的εN-单甲基-Lys衍生物(εN-Me)
Ac-D-W-F-K(εN-Me)-A-F-Y-D-K(εN-Me)-V-A-E-K(εN-Me)-F-K(εN-Me)-E-A-F-NH2	641
		Ac-D-W-F-K(εN-Me)-A-F-Y-D-K(εN-Me)-V-A-E-K(εN-Me)-F-K(εN-Me)-E-A-F-NH-Me	642
Ac-D-W-F-K(εN-Me)-A-F-Y-D-K(εN-Me)-V-A-E-K(εN-Me)-F-	643

 

K(εN-Me)-E-A-F-N-(Me)2
		4F的εN-乙基-Lys衍生物(εN-Et)
Ac-D-W-F-K(εN-Et)-A-F-Y-D-K(εN-Et)-V-A-E-K(εN-Et)-F-K(εN-Et)-E-A-F-NH2	644
		Ac-D-W-F-K(εN-Et)-A-F-Y-D-K(εN-Et)-V-A-E-K(εN-Et)-F-K(εN-Et)-E-A-F-NH-Et	645
Ac-D-W-F-K(εN-Et)-A-F-Y-D-K(εN-Et)-V-A-E-K(εN-Et)-F-K(εN-Et)-E-A-F-NH-(Et)2	646
		4F的HomoLys类似物(hK)(-CH2)5-NH2：
Ac—D-W-F-hK-A-F-Y-D-hK-V-A-E-hK-F-hK-E-A-F-NH2	647
		Ac—D-W-F-hK(εN-Dime)-A-F-Y-D-hK(εN-Dime)-V-A-E-hK(εN-Dime)-F-hK(εN-Dime)-E-A-F-NH2	648
Ac—D-W-F-hK(εN-Dime)-A-F-Y-D-hK(εN-Dime)-V-A-E-hK(εN-Dime)-F-hK(εN-Dime)-E-A-F-N-(Me)2	649
		Ac—D-W-F-hK(εN-Dime)-A-F-Y-D-hK(εN-Dime)-V-A-E-hK(εN-Dime)-F-hK(εN-Dime)-E-A-F-NH-Me	650
Ac—D-W-F-hK(εN-Diet)-A-F-Y-D-hK(εN-Diet)-V-A-E-hK(εN-Diet)-F-hK(εN-Diet)-E-A-F-NH-Et	651
		Ac-D-W-F-hK(εN-Me)-A-F-Y-D-hK(εN-Me)-V-A-E-hK(εN-Me)-F-hK(εN-Me)-E-A-F-NH2	652
Ac-D-W-F-hK(εN-Me)-A-F-Y-D-hK(εN-Me)-V-A-E-hK(εN-Me)-F-hK(εN-Me)-E-A-F-NH-Me	653
		Ac-D-W-F-hK(εN-Me)-A-F-Y-D-hK(εN-Me)-V-A-E-hK(εN-Me)-F-hK(εN-Me)-E-A-F-N-(Me)2	654
Ac—D-W-F-hK(εN-Et)-A-F-Y-D-hK(εN-Et)-V-A-E-hK(εN-Et)-F-hK(εN-Et)-E-A-F-NH2	655
		Ac—D-W-F-hK(εN-Et)-A-F-Y-D-hK(εN-Et)-V-A-E-hK(εN-Et)-F-hK(εN-Et)-E-A-F-NH-Et	656
Ac—D-W-F-hK(εN-Et)-A-F-Y-D-hK(εN-Et)-V-A-E-hK(εN-Et)-F-hK(εN-Et)-E-A-F-NH-(Et)2	657
4F类似物，其中用O代替K(O＝鸟氨酸，-(CH2)3-NH2)：	658
		Ac—D-W-F-O-A-F-Y-D-O-V-A-E-O-F-O-E-A-F-NH2	659
Ac—D-W-F-O(δN-Dime)-A-F-Y-D-O(δN-Dime)-V-A-E-O(δN-Dime)-F-O(δN-Dime)-E-A-F-NH2	660
		Ac—D-W-F-O(δN-Dime)-A-F-Y-D-)(δN-Dime)-V-A-E-O(δN-Dime)-F-O(δN-Dime)-E-A-F-N-(Me)2	661
Ac—D-W-F-O(δN-Dime)-A-F-Y-D-O(δN-Dime)-V-A-E-O(δN-Dime)-F-O(δN-Dime)-E-A-F-NH-Me	662
		Ac—D-W-F-O(δN-Diet)-A-F-Y-D-O(δN-Diet)-V-A-E-O(δN-Diet)-F-O(δN-Diet)-E-A-F-NH-Et	663
Ac-D-W-F-O(δN-Me)-A-F-Y-D-O(δN-Me)-V-A-E-O(δN-Me)-F-O(δN-Me)-E-A-F-NH2	664
		Ac-D-W-F-O(δN-Me)-A-F-Y-D-O(δN-Me)-V-A-E-O(δN-Me)-F-O(δN-Me)-E-A-F-NH-Me	665
Ac-D-W-F-O(δN-Me)-A-F-Y-D-O(δN-Me)-V-A-E-O(δN-Me)-F-O(δN-Me)-E-A-F-N-(Me)2	666
		Ac—D-W-F-O(δN-Et)-A-F-Y-D-O(δN-Et)-V-A-E-O(δN-Et)-F-	667

 

O(δN-Et)-E-A-F-NH2
		Ac—D-W-F-O(δN-Et)-A-F-Y-D-O(δN-Et)-V-A-E-O(δN-Et)-F-O(δN-Et)-E-A-F-NH-Et	668
Ac—D-W-F-O(δN-Et)-A-F-Y-D-O(δN-Et)-V-A-E-OdεN-Et)-F-O(δN-Et)-E-A-F-NH-(Et)2	669

以上所示的肽和修饰旨在说明性而非限制性的。

D)较小的肽

令人惊讶的发现还有由最少3个氨基酸(优选(但非必须)所述氨基酸的一个或多个为氨基酸的D-立体异构体)组成的、并且具有允许脂质蛋白相互作用的疏水域和允许一定水溶性的亲水域的一些小肽也具有显著的抗炎性，并在治疗本文所述的一种或多种病状中是有用的。“小肽”的典型长度为2个氨基酸-约15个氨基酸，更优选约3个氨基酸-约10或11个氨基酸，且最优选约4个氨基酸-约8或10个氨基酸。在各种实施方式中，肽典型地特征在于具有疏水末端氨基酸或通过连接一个或多个疏水“保护”基团使末端氨基酸疏水。在共审未决申请2003年8月26日的USSN 10/649,378和2004年8月6日提交的USSN 10/913,800以及PCT申请PCT/US2004/026288中描述了各种“小肽”。

在一些实施方式中，肽可通过下式XXV表征：

X¹-X²-X³ _n-X⁴   XXV

其中，n为0或1，X¹为疏水氨基酸和/或具有疏水保护基团，X⁴为疏水氨基酸和/或具有疏水保护基团；且当n为0时，X²为酸性或碱性氨基酸；当n为1时，X²和X³独立地为酸性氨基酸、碱性氨基酸、脂族氨基酸或芳族氨基酸，使得当X²为酸性氨基酸时，X³为碱性氨基酸、脂族氨基酸、或芳族氨基酸；当X²为碱性氨基酸时，X³为酸性氨基酸、脂族氨基酸、或芳族氨基酸；和当X²为脂族或芳族氨基酸时，X³为酸性氨基酸或碱性氨基酸。

在本发明的范围内还涉及较长的肽(例如，高达10、11、或15个氨基酸)。一般当较短的肽(例如，根据式XXV的肽)以酸性、碱性、脂族或芳族氨基酸表征时，较长的肽则以包含两种或更多那种类型的氨基酸的酸性、碱性、脂族或芳族域表征。

1)活性的小肽的功能性质

本发明令人惊讶的发现是，许多物理性质预测本发明的小肽(例如，小于10个氨基酸，优选小于8个氨基酸，更优选约3-约5或6个氨基酸)使HDL更抗炎和减轻动脉粥样硬化和/或通过哺乳动物中炎症反应表征的其它病状的能力。该物理性质包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如大于约4mg/mL)，和在pH7.0的含水缓冲液中的溶解性。在水环境中接触磷脂(如1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(DMPC)时，特别有效的小肽诱导或参与直径约7.5nm(±0.1nm)的颗粒的形成，和/或诱导或参与双层尺寸约为3.4-4.1nm以及在堆积双层间具有约2nm间隙的堆积双层的形成，和/或还诱导或参与约38nm的多孔构造的形成。在一些优选的实施方式中，小肽的分子量小于约900Da。

因此，在一些实施方式中，本发明涉及改善本文所述的适应症/病状例如炎性状况的一种或多种症状的小肽，其中该肽的长度为约3-约8个氨基酸，优选约3-约6或7个氨基酸，且更优选约3-约5个氨基酸；该肽以大于约4mg/mL的浓度溶于乙酸乙酯；该肽可溶于pH7.0的含水缓冲液；当该肽在水环境中接触磷脂时，形成直径约7.5nm的颗粒和/或形成双层尺寸约为3.4-4.1nm以及在堆积双层间具有约2nm间隙的堆积双层；该肽的分子量小于约900道尔顿；该肽将促炎HDL转化成抗炎HDL或使抗炎HDL更加抗炎。在一些实施方式中，该肽包括，但不限于具有氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ ID NO：799)的肽，特别地，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。在一些实施方式中，这些小肽保护磷脂不被氧化剂氧化。在一些实施方式中，本文所述的组合物和方法排除了氨基酸序列Lys-Arg-Asp-Ser(SEQ IDNO：799)，特别地，其中Lys-Arg-Asp和Ser都是L氨基酸。

虽然不必如此限制这些小肽，但在一些实施方式中，这些小肽可包括如下所述的小肽。

2)三肽

发现可合成一些三肽(3个氨基酸的肽)，其显示出本文所述的期望性质(例如，将促炎HDL转化成抗炎HDL的能力，减少由动脉壁细胞产生的LDL-诱导单核细胞趋化活性的能力)。在一些实施方式中，该肽通过式XXV表征，其中N为0，如下式XXVI所示：

X¹-X²-X⁴   XXVI

其中，末端氨基酸(X¹和X⁴)是疏水的，这是由于疏水侧链或者因为侧链或C和/或N末端被一个或多个疏水保护基团封端(例如N末端被Boc-、Fmoc-、烟碱基-等封端，且C末端被(tBu)-OtBu等封端)。在一些实施方式中，X²氨基酸为酸性的(例如天冬氨酸、谷氨酸等)或碱性的(例如组氨酸、精氨酸、赖氨酸等)。该肽可为全部的L氨基酸或包括一个或多个或全部的D氨基酸。

本发明的一些三肽包括，但不限于表7所示的肽。

表7.具有疏水封端基团和酸性、碱性、或组氨酸中心氨基酸的一些优选三肽的实例。

虽然表7的肽用特定的保护基团进行说明，但注意，这些基团的任一个可除去和/或被本文所述的其它保护基团所代替。

3)具有中心酸性和碱性氨基酸的小肽

在一些实施方式中，本发明的肽范围为4个氨基酸-约10个氨基酸。末端氨基酸一般是疏水的，由于疏水侧链或者因为末端氨基酸具有一个或多个疏水保护基团，末端氨基酸(X¹和X⁴)是疏水的，由于疏水侧链或者由于侧链或C和/或N末端用一个或多个疏水保护基团封端(例如N末端被Boc-、Fmoc-、烟碱基-等封端，且C末端被(tBu)-OtBu等封端)。一般，肽的中心部分包含碱性氨基酸和酸性氨基酸(例如，在四聚体中)或较长分子中的碱性域和/或酸性域。

这些四聚体可用式XXV表示，其中X¹和X⁴是疏水的和/或具有本文所述的疏水保护基团，且X²是酸性的而X³是碱性的，或者X²是碱性的而X³是酸性的。该肽可为全部L氨基酸或包括一个或多个或全部的D氨基酸。

本发明的一些优选肽包括，但不限于表8中所示的肽。

表8.具有中心酸性和碱性氨基酸的小肽的说明性实例。

虽然表8的肽以特定的保护基团进行说明，但注意，可用这些基团可用本文所述的其它保护基团代替和/或所述保护基团的一个或多个可消除。

4)具有在中心的酸性或碱性氨基酸以及中心脂族氨基酸的小肽

在一些实施方式中，本发明的肽范围为4个氨基酸-约10个氨基酸。末端氨基酸一般是疏水的，由于疏水侧链或者因为末端氨基酸具有一个或多个疏水保护基团。末端氨基酸(X¹和X⁴)是疏水的，由于疏水侧链或者由于侧链或C和/或N末端用一个或多个疏水保护基团封端(例如N末端被Boc-、Fmoc-、烟碱基-等封端，且C末端被(tBu)-OtBu等封端)。一般，肽的中心部分包含碱性或酸性氨基酸和脂族氨基酸(例如，在四聚体中)或较长分子中的碱性域或酸性域和脂族域。

这些四聚体可用式XXV表示，其中X¹和X⁴是疏水的和/或具有本文所述的疏水保护基团，且X²是酸性或碱性的而X³是脂族的，或者X²是脂族的而X³是酸性或碱性的。该肽可为全部L氨基酸或包括一个或多个或全部的D氨基酸。

本发明的一些优选肽包括，但不限于表9中所示的肽。

表9.具有在中心的酸性或碱性氨基酸以及中心脂族氨基酸的一些优选肽的实例。

虽然表9的肽以特定的保护基团进行说明，但注意，这些基团可用本文所述的其它保护基团代替，和/或所示的保护基团的一个或多个可消除。

5)具有在中心的酸性或碱性氨基酸和中心芳族氨基酸的小肽

在一些实施方式中，本发明的“小”肽范围为4个氨基酸-约10个氨基酸。末端氨基酸一般是疏水的，由于疏水侧链或者因为末端氨基酸具有一个或多个疏水保护基团，末端氨基酸(X¹和X⁴)是疏水的，由于疏水侧链或者由于侧链或C和/或N末端用一个或多个疏水保护基团封端(例如N末端被Boc-、Fmoc-、烟碱基-等封端，且C末端被(tBu)-OtBu等封端)。一般，肽的中心部分包含碱性或酸性氨基酸和芳族氨基酸(例如，在四聚体中)或较长分子中的碱性域或酸性域和芳族域。

这些四聚体可用式XXV表示，其中X¹和X⁴是疏水的和/或具有本文所述的疏水保护基团，且X²是酸性或碱性的而X³是芳族的，或者X²是芳族的而X³是酸性或碱性的。该肽可为全部L氨基酸或包括一个或多个或全部的D氨基酸。五聚体可以小修饰的式XXV表示，其中插入X⁵，如表10所示，且其中X⁵通常为芳族氨基酸，例如：

X¹-X²-X³ _n-X⁵ _p-X⁴   XXVII

其中X¹、X²、X³、和X⁴如上所述，p为0或1，且X⁵通常为芳族氨基酸。

本发明的一些优选肽包括，但不限于表10中所示的肽。

表10.具有在中心的酸性或碱性氨基酸和中心芳族氨基酸的一些优选肽的实例。

虽然表10的肽以特定的保护基团进行说明，但注意，这些基团可用本文所述的其它保护基团代替，和/或所示的保护基团的一个或多个可消除。

6)具有在中心的芳族氨基酸或由组氨酸分隔的芳族氨基酸的小肽

在一些实施方式中，本发明的肽以π电子为特征，所述π电子暴露在分子中心处，其允许粒子的水合作用并允许肽粒子捕获促炎的氧化的脂质例如脂肪酸氢过氧化物和含有在sn-2位处的花生四烯酸的氧化产物的磷脂。

在一些实施方式中，这些肽由最少4个氨基酸和最大约10个氨基酸构成，优选(但非必须)所述氨基酸的一个或多个为该氨基酸的D-立体异构体，末端氨基酸是疏水的由于疏水侧链或者由于末端氨基酸具有一个或多个疏水封端基团(例如N末端被Boc-、Fmoc-、烟碱基-等封端，且C末端被(tBu)-OtBu等封端)。这些肽通常具有在中心的芳族氨基酸或具有由肽中心的组氨酸分隔的芳族氨基酸，代替具有在中心的酸性或碱性氨基酸。

本发明的一些优选肽包括，但不限于表11中所示的肽。

表11.具有在中心的芳族氨基酸或由一个或多个组氨酸分隔的芳族氨基酸或芳族域的肽的实例

虽然表11的肽以特定的保护基团进行说明，但注意，这些基团可用本文所述的其它保护基团代替，和/或所示的保护基团的一个或多个可消除。

7)三肽和四肽的总结

为了清楚起见，将本发明的许多三肽和四肽大致总结于下表12中。

表12.本发明一些肽的通用结构

在需要较长的肽时，X²和X³可表示域(例如，规定类型的两个或多个氨基酸的区域)，而不是单独的氨基酸。表12旨在说明性而非限制性的。使用本文中提供的教导，可容易地识别其他合适的肽。

8)配对的氨基酸和二肽

在一些实施方式中，本发明涉及如下发现：彼此组合给药或连接形成二肽的一些氨基酸对具有本文所述的一种或多种性质。因此，不受特定理论的约束，认为当氨基酸对如本文所述彼此组合给药时，它们能够参与或诱导体内胶束的形成。

与本文所述的其它小肽类似，认为氨基酸对在体内缔合，并表明包括在乙酸乙酯中的高溶解性(例如，大于约4mg/mL)、pH7.0的含水缓冲液中的溶解性的物理性质。在水性环境中接触磷脂如1，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(DMPC)时，认为氨基酸对诱导或参与直径约7.5nm(±0.1nm)的颗粒的形成，和/或诱导或参与双层尺寸约为3.4-4.1nm以及在堆积双层间具有约2nm间隙的堆积双层的形成，和/或还诱导或参与约38nm的多孔构造的形成。

而且，进一步认为氨基酸对可显示如下生理学相关的性质的一种或多种：

1.它们将促炎HDL转化为抗炎HDL或者使抗炎HDL更加抗炎；

2.它们减少由动脉壁细胞产生的LDL-诱导单核细胞趋化活性；

3.它们刺激前β-HDL的形成和循环；

4.它们提高HDL胆固醇；和/或

5.它们提高HDL对氧磷酶活性。

氨基酸对可作为分离的氨基酸给药(依次给药或同时给药，例如以组合的制剂)或者它们可直接或通过连接物(例如PEG连接物、碳连接物、支化连接物、直链连接物、杂环连接物、由衍生的脂质形成的连接物等)共价偶联。在一些实施方式中，氨基酸对通过肽键共价连接以形成二肽。在各种实施方式中，虽然二肽通常包含各自具有连接的保护基团的两个氨基酸，但本发明也涉及其中所述氨基酸的仅一个具有一个或多个保护基团的的二肽。

氨基酸对通常包含其中各氨基酸连接有至少一个保护基团(例如，本文所述的疏水保护基团)的氨基酸。该氨基酸可为D或L型。在一些实施方式中，构成对的氨基酸不彼此连接，各氨基酸具有两个保护基团(例如表13中的分子1和2)。

表13.本发明的说明性氨基酸对

^*这通常与第二氨基酸组合给药。

^**在一些实施方式中，这些二肽彼此组合给药。

^***在一些实施方式中，该肽将单独给药或者与本文所述的其它肽之一组合给药。

合适的氨基酸对可容易地通过如下识别：提供被保护的氨基酸对和/或二肽，然后对如上所述的物理和/或生理学性质的一种或多种筛选氨基酸对和/或二肽。在一些实施方式中，本发明排除包含天冬氨酸和苯丙氨酸的氨基酸对和/或二肽。在一些实施方式中，本发明排除其中一个氨基酸为(-)-N-[(顺-4-异丙基环己烷)羰基]-D-苯丙氨酸(那格列奈)的氨基酸对和/或二肽。

在一些实施方式中，构成对的氨基酸独立地选自酸性氨基酸(例如天冬氨酸、谷氨酸等)、碱性氨基酸(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸等)、和非极性氨基酸(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、蛋氨酸等)。在一些实施方式中，在第一氨基酸为酸性或碱性时，第二氨基酸为非极性的；在第二氨基酸为酸性或碱性时，第一氨基酸为非极性的。在一些实施方式中，在第一氨基酸为酸性时，第二氨基酸为碱性，反之亦然(参见，例如表14)。

可通过二肽对的给药获得类似的组合。因此，例如在一些实施方式中，表13中的分子3和4将彼此组合给药。

表14.一些概括的氨基酸对/二肽。

注意，这些氨基酸对/二肽旨在说明性和非限制性的。使用本文提供的教导，可容易地确定其它合适的氨基酸对/二肽。

然而，在一些实施方式中，包含L-Glu-L-Trp的二肽和/或氨基酸对，如在美国专利5,807,830所述的和/或该专利中公开的任意其它肽明显地排除在本文所述的方法和/或制剂之外。

E)Apo-J(G^＊肽)

本发明的发现还为模仿apo J的两亲性螺旋域的肽能够减轻动脉粥样硬化和/或本文所述其它病状的一种或多种症状。载脂蛋白J具有称作类球蛋白或G^*两亲性螺旋域的宽的非极性面。G类两亲性螺旋在球蛋白中被发现，因此命名为G类。这类两亲性螺旋以在具有窄非极性面的极性面上带正电残基和带负电残基的无规分布为特征。由于该窄的非极性面，这类不容易与磷脂缔合。G^*两亲性螺旋具有与G两亲性螺旋类似但不相同的特性。与G类两亲性螺旋类似，G^*类肽具有极性面上带正电残基和带负电残基的无规分布。然而，与具有窄的非极性面的G类两亲性螺旋相反，G^*类具有宽的非极性面，其允许该类与磷脂容易地结合并因此该类命名为G^*以与G类两亲性螺旋区分开。

许多合适的G^*两亲性肽描述在共审未决申请2002年4月5日提交的USSN 10/120,508、2003年4月1日提交的USSN 10/520,207以及2003年4月1日提交的PCT申请PCT/US03/09988中。另外，与apo J的G^*类两亲性螺旋域相关的多种本发明的合适的肽列于表15中。

表15与apo J的G^*类两亲性螺旋域相关的用于本发明的一些肽。

然而，本发明的肽不限于apo J的G^*变体。一般地说，来自基本上任意其它蛋白质优选apo蛋白质的G^*域也是合适的。这种蛋白质的特别适合性可利用对于保护活性(例如，保护LDL不被氧化等)的测定容易地确定，例如本文实施例中所说明的。一些特别优选的蛋白质包括蛋白质的G^*两亲性螺旋域或其变体(例如保守取代等)，所述蛋白质包括但不限于apo AI、apo AIV、apo E、apo CII、apo CIII等。

表16给出与涉及不同于apo J的脱辅蛋白质的G^*两亲性螺旋域相关的一些优选的肽。

表16.与涉及不同于apo J的脱辅蛋白质的G^*两亲性螺旋域相关的用于本发明的一些肽。

另外的说明性G^*肽如表17所示。

表17.另外的说明性G^*肽。

 

肽	SEQ IDNO
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1037
Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1038
		Ac-Lys-Trp-Leu-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1039
Ac-Lys-Trp-Val-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1040
		Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1041
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1042
		Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1043
Ac-Lys-Trp-Leu-Tyr-His-Val-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1044

 

Ac-Lys-Trp-Val-Tyr-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1045
		Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1046
Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1047
		Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Val-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1048
Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1049
		Ac-Lys-Phe-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1050
Ac-Lys-Leu-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1051
		Ac-Lys-Ile-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1052
Ac-Lys-Tyr-Ile-Trp-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1053
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1054
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-Leu-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1055
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1056
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Tyr-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1057
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Ile-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1058
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Ser-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1059
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Tlhr-Glu-Gly-NH2	1060
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Thr-Ser-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1061
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Glu-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1062
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1063
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Tyr-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1064
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1065
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Val-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1066
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2	1067
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Ser-Glu-Gly-NH2	1068
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1069
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-	1070

 

Glu-Gly-NH2
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Ser-Glu-Gly-NH2	1071
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Ser-Glu-Gly-NH2	1072
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Ser-Asp-Gly-NH2	1073
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1074
		Ac-Arg-Tyr-Ile-Trp-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1075
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1076
		Ac-Arg-Trp-Ile-Phe-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1077
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2	1078
		Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1079
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1080
		Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	108l
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-Phe-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1082
		Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1083
Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1084
		Ac-Lys-Trp-Ile-Phe-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1085
Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1086
		Ac-Arg-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1087
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2	1088
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Lys-Thr-Asp-Gly-NH2	1089
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2	1090
		Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Tyr-Lys-Thr-Glu-Gly-NH2	1091
Ac-Lys-Trp-Ile-Tyr-His-Leu-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1092
		Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1093
Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1094
		Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1095

 

Ac-Lys-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Asp-Gly-Ser-Thr-Asp-Ile-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1096
		Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Leu-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1097
Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Glu-Gly-NH2	1098
		Ac-Arg-Trp-Phe-Tyr-His-Phe-Thr-Glu-Gly-Ser-Thr-Asp-Phe-Arg-Thr-Asp-Gly-NH2	1099
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1100
		Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1101
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Asp-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1102
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1103
Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1104
		Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Asp-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1105
Ac-Asp-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1106
		Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Asp-Asp-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1107
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1108
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1109
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1110
		Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1111
Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1112
		Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1113
Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1114
		Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1115
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1116
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Ile-Ser-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1117
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Val-Ser-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1118
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1119
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Thr-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1120
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Ser-Ser-Cys-Leu-	1121

 

Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1122
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1123
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1124
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1125
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1126
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1127
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Ile-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1128
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Leu-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1129
		Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1130
Ac-Asp-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1131
		Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1132
Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1133
		Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1134
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Ser-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1135
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1136
Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1137
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1138
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1139
		Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Gln-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1140
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Gln-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1141
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1142
Ac-Glu-Arg-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1143
		Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1144
Ac-Glu-Arg-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1145
		Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Leu-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1146

 

Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1147
		Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1148
Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Glu-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1149
		Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Leu-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1150
Ac-Glu-Arg-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1151
		Ac-Glu-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1152
Ac-Asp-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1153
		Ac-Glu-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1154
Ac-Asp-Lys-Ala-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1155
		Ac-Asp-Arg-Ala-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1156
Ac-Asp-Arg-Ala-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Ala-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1157
		Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Phe-Glu-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1158
Ac-Glu-Lys-Cys-Tyr-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1159
		Ac-Asp-Lys-Cys-Trp-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Phe-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1160
Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Tyr-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1161
		Ac-Glu-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Phe-Phe-NH2	1162
Ac-Glu-Lys-Cys-Val-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1163
		Ac-Asp-Lys-Cys-Phe-Glu-Glu-Phe-Lys-Ser-Trp-Thr-Ser-Cys-Leu-Asp-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2	1164

其它合适的肽包括，但不限于表18的肽。

表18.具有改进疏水相的说明性肽。

 

名称	序列	SEQ IDNO
			V2W3A5F1017-D-4F	Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Ala-Tyr-Asp-Lys-Phe-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Phe-Phe-NH2	1165
V2W3F10-D-4F	Ac-Asp-Val-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Phe-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2	1166
			W3-D-4F	Ac-Asp-Phe-Trp-Lys-Ala-Phe-Tyr-Asp-Lys-Val-Ala-Glu-Lys-Phe-Lys-Glu-Ala-Phe-NH2	1167

这里描述的肽(V2W3A5F10，17-D-4F；V2W3F10-D-4F；W3-D-4F)可比原始的D-4F更有效。

而且其他合适的肽包括，但不限于：P¹-二甲基酪氨酸-D-Arg-Phe-Lys-P²(SEQ ID NO：1168)和P¹-二甲基酪氨酸-Arg-Glu-Leu-P²，其中P¹和P²是本文所述的保护基团。在一些实施方式中，这些肽包括，但不限于Boc二甲基酪氨酸-D-Arg-Phe-Lys(OtBu)和Boc二甲基酪氨酸-Arg-Glu-Leu(OtBu)。

在一些实施方式中，本发明的肽包括包含氨基酸序列LAEYHAK(SEQID NO：1169)的肽或由氨基酸序列LAEYHAK(SEQ ID NO：1170)构成的肽，该氨基酸序列包含至少一个D氨基酸和/或至少一个或两个末端氨基酸。在一些实施方式中，本发明包括减轻炎症状况的一种或多种症状的肽，其中该肽具有如下性质：长度为约3个-约10个氨基酸；包含其中序列包括与芳族或疏水氨基酸交替的酸性或碱性氨基酸的氨基酸序列；包含疏水末端氨基酸或含有疏水保护基团的末端氨基酸。在一些实施方式中，该肽不是包含全部L氨基酸的序列LAEYHAK(SEQ ID NO：1172)，其中该肽将促炎HDL转化成抗炎HDL和/或使抗炎HDL更加抗炎。

还注意，本文表中列出的肽不是完全包括的。使用本文提供的教导，可常规地生产其他合适的肽(例如，通过保守或半保守取代(例如用E替代D)、延伸、缺失等)。因此，例如，一个实施方式利用SEQ ID NO：1008-1036识别的任意一种或多种肽的截短。

较长的肽也是合适的。这种较长的肽可完全地形成G或G^*两亲性螺旋，或G两亲性螺旋(螺旋)可形成肽的一个或多个域。另外，本发明涉及肽的多聚体形式。因此，例如本文表中说明的肽可以偶联在一起(直接地或者通过连接物(例如碳连接物、或者一个或多个氨基酸)与一个或多个中间氨基酸)。合适的连接物包括，但不限于脯氨酸(-Pro-)、Gly₄Ser₃(SEQ ID NO：1171)等。因此，根据本发明的一个说明性多聚体肽为(D-J336)-P-(D-J336)(即Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-P-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH₂，SEQ ID NO：1172)。

本发明还涉及使用包含一个或多个G或G^*两亲性螺旋域和一个或多个A类两亲性螺旋的“混杂”肽的使用。合适的A类两亲性螺旋肽描述于PCT公开WO 02/15923。因此，作为说明，一种这样的“混杂”肽是(D-J336)-Pro-(4F)(即Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-P -D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-K-F-K-E-A-F-NH₂，SEQ ID NO：1173)等。

使用本文提供的教导，本领域技术人员可常规地改性所述的两亲性螺旋肽以生产其他合适的apo J变体和/或本发明的两亲性G和/或A螺旋肽。例如，可对现有氨基酸进行常规的保守或半保守取代(例如，用E替代D)。可使用Palgunachari等((1996)Arteriosclerosis，Thrombosis，& Vascular Biology16：328-338所述的计算方法预测所得肽的各种取代对脂质亲和性的影响。只要保留该类螺旋类结构，肽可以延长或缩短。另外，可进行取代以使所得肽更类似于由受试者(subject species)内源性产生的肽。

虽然在优选实施方式中本发明的肽利用天然存在的氨基酸或天然存在的氨基酸的D型，但还涉及非天然存在的氨基酸(例如，蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍、正亮氨酸、ε-氨基己酸、4-氨基丁酸、四氢异喹啉-3-羧酸、8-氨基辛酸、4-氨基丁酸、Lys(N(ε)-三氟乙酰)、α-氨基异丁酸等)的取代。

可使用计算方法设计和/或评价新的肽。识别和分类两亲性螺旋域的计算机程序是本领域技术人员所公知的，并且许多已经被Jones等((1992)J.LipidRes.33：287-296)所描述。这种程序包括，但不限于螺旋轮程序(WHEEL或WHEEL/SNORKEL)、螺旋网程序(HELNET、HELNET/SNORKEL、HELNET/Angle)、用于螺旋轮添加的程序(COMBO或COMBO/SNORKEL)、用于螺旋网添加的程序(COMNET、COMNET/SNORKEL、COMBO/SELECT、COMBO/NET)、一致轮程序(CONSENSUS、CONSENSUS/SNORKEL)等。

F)封端基团和D残基

虽然本文所述的各种肽和/或氨基酸对可显示无保护基团，但在一些实施方式中(例如，对于口服给药)，它们可具有一个、两个、三个、四个、或更多保护基团。该保护基团可结合到肽的C和/或N末端和/或构成该肽的一个或多个内部残基(例如，在组成氨基酸上的一个或多个R基可被封端)。因此，例如，在一些实施方式中，本文所述的任意肽可具有例如保护氨基末端的乙酰基和/或保护羧基末端的酰胺基。这种“双保护肽”的一个实例为Ac-L-L-E-Q-L-N-E-Q-F-N-W-V-S-R-L-A-N-L-T-Q-G-E-NH2(具有封端基团的SEQ ID NO：1008)，这些保护基团之一或两者可删除和/或被本文所述的其它保护基团所代替。

不受特定理论的约束，本发明发现特别是本发明的主题蛋白的氨基和/或羧基末端的封端大大改善了口服输送并显著提高血清半衰期。然而，令人惊讶的发现还为，在一些实施方式中，特别是当与水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺)以及本文所述的其它输送剂组合使用时，可省略任意或所有保护基团，且肽仍然是能够口服给药的。然而，在一些实施方式中，即使该肽与水杨酰苯胺以及本文所述的其它输送剂配制成制剂和/或组合给药时，该肽也具有一个或多个保护基团(例如，末端保护基团)。

大量的保护基团适合于该目的。这种基团包括，但不限于乙酰基、酰胺、和具有乙酰基的烷基，并且烷基特别优选用于N末端保护和酰胺基优选用于羧基末端保护。在一些特别优选的实施方式中，保护基团包括，但不限于脂肪酸中的烷基链、丙酰基(propeonyl)、甲酰基等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺、酯、和醚-形成保护基团。在优选的实施方式中，乙酰基用于保护氨基末端且酰胺基用于保护羧基末端。这些封端基团增强肽的螺旋形成趋势。一些特别优选的封端基团包括各种长度的烷基，例如具有式子CH₃-(CH₂)_n-CO-的基团，其中n为约1-约20，优选约1-约16或18，更优选约3-约13，且最优选约3-约10。

在一些特别优选的实施方式中，保护基团包括，但不限于脂肪酸中的烷基链、丙酰基、甲酰基等。特别优选的羧基保护基团包括酰胺、酯、和醚-形成保护基团。在一个优选的实施方式中，乙酰基用于保护氨基末端且酰胺基用于保护羧基末端。这些封端基团增强肽的螺旋形成趋势。一些特别优选的封端基团包括各种长度的烷基，例如具有式子CH₃-(CH₂)_n-CO-的基团，其中n为约3-约20，优选约3-约16，更优选约3-约13，且最优选约3-约10。

其它保护基团包括，但不限于Fmoc、叔丁氧基羰基(t-BOC)、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。

保护/封端基团是本领域技术人员公知的，如同将这种基团结合到构成本发明肽的适合残基的方法一样(参见，例如，Greene等(1991)Protective Groupsin Organic Synthesis，2nd ed.，John Wiley & Sons，Inc.Somerset，N.J.)。在一个优选实施方式中，例如，当肽在树脂上时合成期间使用乙酸酐进行乙酰化。可通过选择用于合成的合适树脂来实现酰胺保护。在本文实例中所述的肽的合成期间，使用rink酰胺树脂。在完成合成之后，在酸性双官能氨基酸例如Asp和Glu以及碱性氨基酸Lys上的半永久性保护基团、Tyr的羟基被全部同时除去。使用酸性处理从这种树脂释放的肽伴随着N末端被保护如乙酰基和羧基被保护如NH₂且伴随着同时除去所有的其它保护基团。

在一些特别优选的实施方式中，肽包含本文所述的一个或多个D型(右旋而不是左旋)氨基酸。在一些实施方式中，至少两个对映体氨基酸、更优选至少四个对映体氨基酸和最优选至少8或10个对映体氨基酸是“D”型氨基酸。在一些实施方式中本文所述肽的每个其它或甚至每个氨基酸(例如每个对映体氨基酸)是D型氨基酸。

在一些实施方式中，至少50％的对映体氨基酸为“D”型，更优选至少80％的对映体氨基酸为“D”型，且最优选至少90％或甚至所有的对映体氨基酸为“D”型氨基酸。

G)肽模拟物

除了本文所述的肽之外，认为水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺)和本文所述的其它输送剂对改善口服输送的肽模拟物的体内活性也有用。肽类似物通常作为具有性质类似于模板肽的非肽药物用于制药工业。这些类型的非肽化合物称作“肽模拟物”或“肽模拟物(peptidomimetics)”(Fauchere(1986)Adv.DrugRes.15：29；Veber and Freidinger(1985)TINSp.392；和Evans等(1987)J.Med.Chem.30：1229)，并通常借助于计算机化分子模型开发。与治疗有用的肽的结构类似的肽模拟物可用于产生等效治疗或预防效果。

通常，肽模拟物与范例多肽(例如表1所示SEQ ID NO：5)结构类似，但具有通过本领域已知且进一步描述于以下文献中的方法由选自-CH₂NH-、-CH₂S-、-CH₂-CH₂-、-CH＝CH-(顺式和反式)、-COCH₂-、-CH(OH)CH₂-、-CH₂SO-等的连接任选代替的一个或多个肽连接：Spatola(1983)p.267在Chemistry and Biochemistry of Amino Acids，Peptides，and Proteins中，B.Weinstein，eds.，Marcel Dekker，New York，；Spatola(1983)Vega Data 1(3)Peptide Backbone Modifications.(综述)；Morley(1980)Trends Pharm Sci pp.463-468(综述)；Hudson等(1979)Int J Pept Prot Res 14：177-185(-CH₂NH-，CH₂CH₂-)；Spatola等(1986)Life Sci 38：1243-1249(-CH₂-S)；Hann，(1982)JChem Soc Perkin Trans I 307-314(-CH-CH-，顺式和反式)；Almquist等(1980)JMed Chem.23：1392-1398(-COCH₂-)；Jennings-White等(1982)Tetrahedron Lett.23：2533(-COCH₂-)；Szelke等，European Appln.EP 45665(1982)CA：97：39405(1982)(-CH(OH)CH2-)；Holladay等(1983)Tetrahedron Lett 24：4401-4404(-C(OH)CH₂-)；和Hruby(1982)Life Sci.，31：189-199(-CH₂-S-))。

一种特别优选的非肽连接是-CH₂NH-。这种肽模拟物与多肽实施方式相比可具有显著的优点，包括例如：更经济的生产、较高的化学稳定性、增强的药理学性质(半衰期、吸收、效力、功效等)、降低的抗原性等。

另外，可通过现有技术中已知的方法(Rizo和Gierasch(1992)Ann.Rev.Biochem.61：387)产生本文所述肽的环状排列或包含一致序列或基本上相同的一致序列变体的限制性肽(包括环化肽)；例如，通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫化物桥的内半胱氨酸残基。

H)小有机分子

除了本文所述的肽之外，认为水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺)和本文所述的其它输送剂对改善口服输送的小有机分子的体内活性(表观活性)也是有利的，例如，如2004年8月11日提交的共审未决申请USSN60/600,925所述。在各种实施方式中，小有机分子在一些情况下类似于共审未决申请2003年8月26日提交的USSN 10/649,378和8月11日提交的USSN 60/494,449所述的四肽和五肽的模拟物。

本发明的小有机分子通常具有小于约900道尔顿的分子量。通常该分子高度可溶于乙酸乙酯(例如，以等于或大于4mg/mL的浓度)，并且也可溶于pH7.0的含水缓冲液。

将磷脂如l，2-二肉豆蔻酰-sn-甘油基-3-胆碱磷酸(DMPC)与本发明的小有机分子在水环境中接触通常导致直径约7.5nm(±0.1nm)的颗粒的形成。另外，经常形成双层尺寸约为3.4-4.1nm且堆积双层间具有约2nm间隙的堆积双层。也经常形成约38nm的多孔结构。而且，当本发明的分子对哺乳动物给药时，它们使HDL更抗炎，并减轻动脉粥样硬化和/或由以炎症反应表征的其它状况的一种或多种症状。

因此，在一些实施方式中，小有机分子是改善哺乳动物中由炎症反应表征的病状(例如动脉粥样硬化)的一种或多种症状的分子，其中该小分子以大于4mg/mL的浓度可溶于乙酸乙酯，可溶于pH7.0的含水缓冲液中，且当在含水环境中与磷脂接触时形成直径约7.5nm的颗粒并形成双层尺寸约为3.4-4.1nm且堆积双层间具有约2nm间隙的堆积双层，并具有小于900道尔顿的分子量。

在一些实施方式中，该分子具有下式：

其中P¹、P²、P³、和P⁴独立地选自疏水保护基团；R¹和R⁴独立地选自氨基酸R基团；n、i、x、y、和z独立地为0或1，使得当n和x均为0时，R¹为疏水基团，且当y和i均为0时，R⁴为疏水基团；R²和R³为在pH7.0下的酸性或碱性基团，使得当R²为酸性时R³为碱性且当R²为碱性时R³为酸性；且R⁵当存在时选自芳族基团、脂族基团、带正电的基团、或带负电的基团。在一些实施方式中，R²或R³为-(CH₂)_j-COOH，其中j＝1、2、3或4，和/或-(CH₂)_j-NH₂，其中j＝1、2、3、4或5，或者-(CH₂)_j-NH-C(＝NH)-NH₂，其中n＝1、2、3或4。在一些实施方式中，R²、R³、和R⁵当存在时为氨基酸R基。因此，例如，在各种实施方式中，R²和R³独立地为天冬氨酸R基、谷氨酸R基、赖氨酸R基、组氨酸R基、或精氨酸R基(例如如表1中所述)。

在一些实施方式中，R¹选自Lys R基、Trp R基、Phe R基、Leu R基、OrnR基、或norLeu R基。在一些实施方式中，R⁴选自Ser R基、Thr R基、Ile R基、Leu R基、norLeu R基、Phe R基、或Tyr R基。

在各种实施方式中x为1且R⁵为芳基(例如，Trp R基)。

在各种实施方式中，n、x、y和i中至少一个为1，且P¹、P²、P³和P⁴当存在时独立地选自聚乙二醇(PEG)、乙酰、酰胺、3-20个碳的烷基、Fmoc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)、-4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、l-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、丙基、丁基、戊基、己基、和三氟乙酰基(TFA)。在一些实施方式中，P¹当存在时和/或P²当存在时独立地选自Boc-、Fmoc-、烟碱基和/或P³当存在时和/或P⁴当存在时独立地选自tBu和OtBu。

虽然以上说明了许多保护基团(P¹、P²、P³、P⁴)，该列表旨在说明性而不是限制性的。考虑到本文提供的教导，许多其它保护/封端基团也是本领域技术人员所公知的。可选择这种封端基团以使消化最小化(例如，对于口服药物输送)、和/或提高吸收/生物利用度(例如，在经鼻输送、吸入疗法、直肠给药中经过粘膜表面)、和/或提高血清/血浆半衰期。在一些实施方式中，保护基团可作为赋形剂或作为赋形剂的成分提供。

在一些实施方式中，z为0且该分子具有下式：

其中P¹、P²、P³、P⁴、R¹、R²、R³、R⁴、n、x、y和i如上所述。在一些实施方式中，z为0且该分子具有下式：

其中R¹、R²、R³和R⁴如上所述。

在一些实施方式中，该分子具有下式：

在一些实施方式中，本发明涉及具有本文所述的物理和/或功能性质的一种或多种并具有下式的小分子：

其中，P¹、P²、P³和P⁴独立地选自如上所述的疏水保护基团，n、x和y独立地为0或1；j、k和l独立地为0、1、2、3、4或5；且R²和R³为在pH7.0下的酸性或碱性基团，使得当R²为酸性时R³为碱性且R²为碱性时R³为酸性。在一些优选的实施方式中，该小分子可溶于水，且该小分子具有小于约90道尔顿的分子量。在一些实施方式中，n、x、y、j和l为1；且k为4。

在一些实施方式中，P¹和/或P²是芳族保护基团。在一些实施方式中，R²和R³为氨基酸R基，例如，如上所述。在各种实施方式中，n、x和y中至少一个为1且P¹、P²、P³和P⁴当存在时独立地为保护基团，例如，如上所述。在一些实施方式中，保护基团当存在时独立地选自聚乙二醇(PEG)、乙酰、酰胺、3-20个碳的烷基、Fmoc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲基苯-2-磺酰(Mts)、-4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、丙基、丁基、戊基、己基、和三氟乙酰基(TFA)。在一些实施方式中，P¹当存在时和/或P²当存在时独立地选自Boc-、Fmoc-和烟碱基和/或P³当存在时和/或P⁴当存在时独立地选自tBu和OtBu。

IV.药物制剂

A)药物制剂

为进行本发明的方法，将本文所述的一种或多种治疗性肽、模拟物、或小有机分子与水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)或本文所述的其它输送剂之一组合向哺乳动物给药，例如向诊断为具有动脉粥样硬化的一种或多种症状的个体给药，或者向诊断为有动脉粥样硬化或本文所述各种其它病状的危险的个体给药。

在各种实施方式中，将本文所述的“活性剂”、治疗性肽、模拟物、或小有机分子与一种或多种水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)或本文所述的其它输送剂之一组合配制。在一些实施方式中，将一种或多种活性剂与一种或多种水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)结合以形成加合物。该活性剂可以“天然”形式给药，或者如果需要可以盐、酯、酰胺、药物前体、衍生物等形式给药，只要该盐、酯、酰胺、药物前体或衍生物在药理学上是合适的，即在本发明的方法中有效。可使用合成有机化学领域的技术人员公知和例如由March(1992)Advanced Organic Chemistry；Reactions，Mechanisns and Structure，4th Ed.N.Y.Wiley-Interscience所述的标准方法制备活性剂的盐、酯、酰胺、药物前体和其它衍生物。

类似地，输送剂也可配制为盐、酯、酰胺等。

配制这种衍生物的方法是本领域技术人员所公知的。例如，许多输送剂的二硫化物盐描述于PCT公开WO 00/059863中，其通过参考引入本文。类似地，可使用通常涉及与适合的酸反应的常规方法从游离碱制备治疗性肽、模拟物和小有机分子的酸性盐。通常，将药物的碱形式溶于极性有机溶剂例如甲醇或乙醇中并将酸加入其中。所得盐沉淀或者可通过添加较少极性的溶剂从溶液中取出。用于制备酸加成盐的合适的酸包括有机酸如醋酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等，以及无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。酸加成盐可通过用合适碱处理再转化为游离碱。本文中活性剂的特别优选的酸加成盐为卤化物盐，例如可使用盐酸或氢溴酸制备。相反地，本发明活性剂的碱性盐制品以类似的方式使用药物可接受的碱例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙、或三甲胺等进行制备。特别优选的碱性盐包括碱金属盐例如钠盐、和铜盐。

酯的制备通常涉及可存在于药物的分子结构中的羟基和/或羧基的官能化。酯通常是游离醇基的酰基取代衍生物，即衍生自式RCOOH的羧酸的部分，其中R为烷基并优选为低级烷基。如果需要，可通过使用常规氢解或水解方法将酯再次转化为游离酸。

酰胺和药物前体也可使用本领域技术人员公知或如相关文献所述的技术进行制备。例如，酰胺可使用合适的胺反应物从酯制备，或者它们可通过与氨或低级烷基胺的反应从酸酐或酰基氯制备。药物前体通常通过共价连接导致在被个体代谢系统改性以前为治疗非活性的化合物的部分而制备。

本文所确定的活性剂可用于非消化道给药、外用、口服给药、鼻内给药(或吸入给药)、直肠给药或局部给药，例如通过气溶胶或经皮肤，用于本文所述一种或多种病状/适应症(例如，动脉粥样硬化和/或其症状)的预防和/或治疗处理。根据给药方法，药物组合物可以多种单位剂型给药。合适的单位剂型包括，但不限于粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、锭剂、栓剂、贴剂(patch)、鼻腔喷雾剂、可注射剂、可植入缓释制剂、脂质复合物等。

除了与一种或多种输送剂组合给药或配制成制剂之外，本发明的活性剂还可与药物可接受载体(赋形剂)组合以形成药理组合物。药物可接受载体可含有一种或多种生理可接受化合物，该化合物例如起到稳定组合物或者提高或降低活性剂的吸收的作用。生理可接受化合物可包括例如碳水化合物如葡萄糖、蔗糖、或右旋糖苷，抗氧化剂如抗坏血酸或谷胱甘肽，螯合剂，低分子量蛋白质，保护和吸收增强剂如脂质，减少活性剂的清除或水解的组合物，或赋形剂或其它稳定剂和/或缓冲剂。

其它生理可接受化合物，特别是用于制备片剂、胶囊剂、凝胶胶囊等的生理可接受化合物，包括但不限于粘合剂、稀释剂/填充剂、崩解剂(disentegrant)、润滑剂、悬浮剂等。

在一些实施方式中，为制造口服剂型(例如片剂)，例如将赋形剂(如乳糖、蔗糖、淀粉、甘露醇等)、任选的崩解剂(如碳酸钙、羧甲基纤维素钙、淀粉乙醇酸钠、交聚维酮等)、粘合剂(如α-淀粉、阿拉伯胶、微晶纤维素、羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、环糊精等)、和任选的润滑剂(如滑石、硬脂酸镁、聚乙二醇6000等)加入活性成分(例如活性肽和水杨酰苯胺)并压缩所得组合物。当需要时，对压缩产物进行包衣，例如公知的方法用于掩蔽气味或用于肠溶或缓释。合适的包衣材料包括，但不限于乙基纤维素、羟甲基纤维素、聚氧化亚乙基二醇、醋酸邻苯二甲酸纤维素、邻苯二甲酸羟丙基甲基纤维素、和Eudragit(Rohm & Haas，德国；甲基丙烯酸类-丙烯酸类共聚物)。

其它生理可接受化合物包括润湿剂、乳化剂、分散剂或特别可用于防止微生物生长或活动的防腐剂。各种防腐剂是公知的，并包括例如苯酚和抗坏血酸。本领域技术人员将认识到，包括生理可接受化合物的药物可接受载体的选择例如取决于活性剂的给药途径和取决于活性剂的特定物理化学特性。

在一些实施方式中，赋形剂是无菌的并通常不含不期望的物质。这些组合物可通过常规公知的灭菌技术进行灭菌。对于各种口服剂型赋形剂如片剂和胶囊剂，不需要无菌性。USP/UF标准一般是足够的。

在治疗应用中，将本发明的组合物以足以防止和/或治疗和/或至少部分防止或抑制疾病和/或其并发症的量向患者给药，例如口服给药，所述患者遭受本文所述一种或多种病状的一种或多种症状，或者具有本文所述的一种或多种病状的危险。足以实现该目的的量定义为“治疗有效剂量”。对于该用途有效的量将取决于疾病的严重性和患者健康的一般情况。组合物的单一或多次给药可取决于患者所需要和忍受的剂量和频率进行给药。在任何情况下，该组合物应提供充分量的本发明制剂的活性剂以有效地治疗(减轻一种或多种症状)患者。

活性剂的浓度可广泛变化，并且将主要基于活性成分的活性、体重等根据选定的给药的特定模式和患者需求进行选择。然而，通常选择浓度以提供约0.1或1mg/kg/天-约50mg/kg/天和有时更高的剂量。典型的剂量为约3mg/kg/天-约3.5mg/kg/天，优选约3.5mg/kg/天-约7.2mg/kg/天，更优选约7.2mg/kg/天-约11.0mg/kg/天，且最优选约11.0mg/kg/天-约15.0mg/kg/天。在一些优选的实施方式中，剂量为约10mg/kg/天-约50mg/kg/天。在一些实施方式中，剂量为每天口服两次的约20mg-约50mg。应认识到，可改变这种剂量以优化特定个体或团体中的治疗方案。

在一些实施方式中，本发明的活性剂口服给药(例如，经由片剂、胶囊剂、囊片、凝胶胶囊等)。令人惊讶的发现是，治疗性肽可口服给药并实现治疗有效的水平，特别当与水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)或本文所述的其它输送剂之一一起给药时。特别令人惊讶的是，当如此给药时，治疗性肽可以是L型肽且无需具有保护基团。治疗性肽和水杨酰苯胺或其它输送剂的组合不限于未保护的L型肽。相反，还涉及使用水杨酰苯胺和/或其它输送剂与具有一个或多个保护基团的L型肽、D型肽和具有一个或多个保护基团的D型肽。

在一些实施方式中，本发明的活性剂作为可注射剂根据本领域技术人员所公知的标准方法给药。在其它优选的实施方式中，所述剂也可使用常规的透皮给药系统通过皮肤输送，即透皮“贴剂”，其中活性剂通常包含于用作待贴到皮肤的药物输送器件的层叠结构中。在这种结构中，药物组合物通常包含于在上衬里层下的层或“储库(reservoir)”中。应认识到，本文中的术语“储库”是指最终可用于输送到皮肤表面的“活性成分”的量。因此，例如，“储库”可包括在贴剂衬里层上粘合剂中的活性成分，或者本领域技术人员已知的任意各种不同基体制剂(matrix formulation)中的活性成分。贴剂可包含单一的储库，或者其可包含多个储库。

在一个实施方式中，该储库包括药物可接受接触粘合剂材料的聚合物基体，其起到在药物输送期间将系统贴到皮肤的作用。适合的皮肤接触粘合剂材料的实例包括，但不限于聚乙烯、聚硅氧烷、聚异丁烯、聚丙烯酸脂、聚氨酯等。或者，含药物储库和皮肤接触粘合剂作为分离和不同的层存在，粘合剂在储库下面，在这种情况下，其可以为如上所述的聚合物基体，或者其可为液体或水凝胶储库，或可具有一些其它形式。用作器件的上表面的这些层叠物中的衬里层优选起到“贴剂”主要结构部件的作用并为器件提供许多其灵活性。选择用于支持层的材料优选对活性剂和存在的任意其它材料是基本上不可渗透的。

用于表面药物输送的其它制剂包括，但不限于软膏和乳膏。软膏是半固体制品，其通常基于凡士林或其它石油衍生物。含有选定活性剂的乳膏通常为粘性液体或半固体乳剂，经常为水包油或油包水。乳膏通常是可水洗的，并含有油相、乳化剂和水相。油相，有时也称作“内”相，通常由凡士林和脂肪醇例如十六烷醇或十八烷醇组成；水相通常但不是必须地在体积上超过油相，并一般含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂一般为非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、阳离子表面活性剂或两性表面活性剂。如本领域技术人员认识到的，待使用的具体软膏或乳膏基质为将提供最佳药物输送的基质。与其它载体或媒介物一样，软膏基质应该是惰性的、稳定的、无刺激性的且非致敏的。

如上所述，还涉及各种口腔和舌下制剂。

本文所述水杨酰苯胺或其它输送剂的使用不限于口服输送。在一些实施方式中，这种输送剂的使用还涉及在用于透皮输送、可注射输送、外科植入、经鼻输送、直肠输送等的制剂中。

在另一实施方式中，制剂的一种或多种组分(例如输送剂和/或活性剂)可作为“浓缩物”提供，例如在准备好稀释的储存容器(例如，以早熟的体积(premature volume))中，或在准备好添加一定量水的可溶胶囊中。在一些实施方式中，单独地提供水杨酰苯胺或其它输送剂和治疗剂。因此，例如水杨酰苯胺或其它输送剂作为在治疗剂(例如，治疗性肽)给药之前立即或一段时间给药的溶液提供，或者水杨酰苯胺或其它输送剂作为在吞服配制为胶囊剂、片剂、凝胶胶囊等的活性剂时使用的溶液提供。

前述制剂和给药方法旨在说明性而非限制性的。将认识到，使用本文提供的教导，可容易地设计其它合适的制剂和给药模式。

B)基于脂质的制剂

在一些实施方式中，本发明的活性剂和/或水杨酰苯胺或其它输送剂与一种或多种脂质组合给药。该脂质可作为赋形剂配制以保护和/或增强活性剂的输送/吸收或者它们可单独地给药。

不受特定理论的约束，本发明发现一些磷脂的给药(例如，口服给药)可显著地提高HDL/LDL比。另外，认为一些中等长度的磷脂通过不同于一般脂类输送中涉及过程的过程输送。因此，一些中等长度的磷脂和本发明活性剂的共同给药提供了许多优势：它们保护活性剂不被消化或水解，它们改善吸收，并且它们改善HDL/LDL比。

可将脂质形成包封本发明活性剂的脂质体，和/或可将它们与活性剂复合/混合，和/或将它们与活性剂共价结合。制造脂质体和包封试剂的方法是本领域技术人员所公知的(参见，例如Martin和Papahadjopoulos(1982)J.Biol.Chem.，257：286-288；Papahadjopoulos等(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88：11460-11464；Huang等(1992)Cancer Res.，52：6774-6781；Lasic等(1992)FEBSLett.，312：255-258等)。

用于这些方法中的优选磷脂具有在sn-1和sn-2位中的约4个碳-约24个碳的脂肪酸。在一些优选的实施方式中，该脂肪酸是饱和的。在另外优选的实施方式中，该脂肪酸可以是不饱和的。表19给出了各种优选的脂肪酸。

表19.用于本文所述活性剂的给药的优选磷脂的在sn-1和/或sn-2位中的优选脂肪酸。

这些位置中的脂肪酸可相同或不同。特别优选的磷脂在sn-3位处具有磷酸胆碱。

V.另外的药理学活性剂

A)组合的活性剂

在各种实施方式中，本文所述的各种病状/适应症的治疗中涉及所述两种或多种活性剂的组合使用。活性剂的组合使用可改变药理学活性、生物利用度等。

作为说明，注意D-4F和L-4F与前-βHDL和HDL快速缔合并然后快速从循环中清除(口服剂量后6小时基本上不能检测到)，而D-[113-122]apoJ与前-βHDL缓慢缔合并且在更小的程度上与HDL缔合，但却保持与这些HDL部分缔合至少36小时。FREL与HDL且仅与HDL缔合，但在HDL中保持能检测比D-4F久得多(即，在小鼠中单次口服剂量后48小时在HDL中能检测)。因此，在一些实施方式中，本发明涉及例如这三种肽的组合以减少量来减少生产费用，和/或优化给药方案、治疗计划等。在一些实施方式中，本文所述活性剂的组合可简单地共同给药和/或添加在一起以形成单一药物制剂。在一些实施方式中，各种活性剂可复合在一起(例如，通过氢键)以形成比母体剂更有效的活性剂复合物。

B)与另外的药理学活性材料的使用

另外的药理学活性材料(即药物)可与本文所述一种或多种活性剂组合输送。在一些实施方式中，这种试剂包括，但不限于减少动脉粥状硬化发作和/或其并发症危险的试剂。这种试剂包括，但不限于β阻滞剂、β阻滞剂和噻嗪类利尿剂组合、他汀类药物、阿司匹林、ace抑制剂、ace受体抑制剂(ARB)等。

发现，向apoE缺失的小鼠的饮用水添加低剂量活性剂(例如D-4F)24小时不显著改善HDL功能(参见，例如2003年4月25日提交的相关申请USSN10/423,830，其内容通过参考引入本文)。另外，向apoE缺失的小鼠的饮用水单独添加0.05mg/ml的阿托伐他汀或普伐他汀不改善HDL功能。然而，当1μg/ml的D-4F和0.05mg/ml的阿托伐他汀或普伐他汀一起加入饮用水时，显著改善HDL功能。实际上，促炎apoE缺失的HDL变成与350μg/ml正常人类HDL(h，HDL参见例如相关申请USSN 10/423,830)一样抗炎。

因此，独立地对HDL功能没有效果的单独的D-4F或单独的他汀类药物的剂量当一起给予时协同作用。当D-4F和他汀类药物一起给予apoE缺失的小鼠时，它们在50μg/ml HDL-胆固醇的促炎HDL在防止由HPODE氧化人类动脉壁细胞的共培养物中PAPC的作用诱发的炎症反应方面变成如在350μg/ml HDL-胆固醇的正常人类HDL一样有效。

因此，在一些实施方式中，本发明提供增强他汀类药物活性的方法。该方法通常涉及将本文所述的一种或多种活性剂如本文所述与一种或多种他汀类药物组合给药。活性剂在他汀类药物和所述剂之间实现协同作用以改善动脉粥样硬化的一种或多种症状。在本文中，他汀类药物可以显著较低的剂量给药从而避免与高剂量他汀类药物使用相关的各种有害副作用(例如肌肉萎缩)和/或在任意给定剂量下的他汀类药物的抗炎性质显著增强。

合适的他汀类药物包括，但不限于普伐他汀(Pravachol/Bristol-MyersSquibb)、辛伐他汀(Zocor/Merck)、洛伐他丁(Mevacor/Merck)等。

在各种实施方式中，本文所述的活性剂与一种或多种β阻滞剂组合给药。合适的β阻滞剂包括，但不限于心选择性的(选择性β1阻滞剂)例如醋丁洛尔(Sectral^TM)、阿替洛尔(Tenormin^TM)、倍他洛尔(Kerlone^TM)、比索洛尔(Zebeta^TM)、美托洛尔(Lopressor^TM)等。合适的非选择性阻滞剂(同等地阻滞β1和β2)包括，但不限于卡替洛尔(Cartrol^TM)、纳多洛尔(Corgard^TM)、喷布洛尔(Levatol^TM)、吲哚洛尔(Visken^TM)、普萘洛尔(Inderal^TM)、噻吗洛尔(Blockadren^TM)、拉贝洛尔(Normodyne^TM，Trandate^TM)等。

合适的β阻滞剂噻嗪类利尿剂组合包括，但不限于Lopressor HCT、ZIAC、Tenoretic、Corzide、Timolide、Inderal LA40/25、Inderide、Normozide等。

合适的ace抑制剂包括，但不限于卡托普利(例如Squibb的Capoten^TM)、贝那普利(例如Novartis的Lotensin^TM)、依那普利(例如Merck的Vasotec^TM)、福辛普利(例如Bristol-Myers的Monopril^TM)、赖诺普利(例如Merck的PrinivilT^M或Astra-Zeneca的Zestril^TM)、喹那普利(例如Parke-Davis的Accupril^TM)、雷米普利(例如Hoechst Marion Roussel，King Pharmaceuticals的Altace^TM)、咪达普利、培哚普利特丁胺(例如Rhone-Polenc Rorer的Aceon^TM)、群多普利(例如Knoll Pharmaceutical的Mavik^TM)等。合适的ARBS(Ace受体阻滞剂)包括但不限于氯沙坦(例如Merck的Cozaar^TM)、厄贝沙坦(例如Sanofi的Avapro^TM)、坎地沙坦(例如Astra Merck的Atacand^TM)、缬沙坦(例如Novartis的Diovan^TM)等。

在各种实施方式中，本文所述的一种或多种剂与以下识别的一种或多种药物一起给药。

因此，在一些实施方式中，一种或多种活性剂与下列物质组合给药：胆甾醇酯转移蛋白(CETP)抑制剂(例如，torcetrapib，JTT-705.CP-529414)和/或酰基-辅酶A：胆固醇O-酰基转移酶(ACAT)抑制剂(例如，阿伐麦布(CI-1011)，CP113818，F-1394等)、和/或免疫调节剂(例如，FTY720(1-磷酸-鞘氨醇受体激动剂)、Thalomid(沙利度胺)、依木兰(硫唑嘌呤)、Copaxone(格拉默醋酸酯)、

(依维莫司)、

(环孢霉素)等)、和/或二肽基-肽酶-4(DPP4)抑制剂(例如，2-吡咯烷腈、1-[[[2-[(5-氰基-2-吡啶基)氨基]乙基]氨基]乙酰]，参见美国专利公开2005-0070530)、和/或钙通道阻滞剂(例如Adalat、AdalatCC、Calan、Calan SR、Cardene、Cardizem、Cardizem CD、Cardizem SR、Dilacor-XR、DynaCirc、Isoptin、Isoptin SR、Nimotop、Norvasc、Plendil、Procardia、Procardia XL、Vascor、Verelan)、和/或用于例如α、γ、δ受体的过氧化物酶增殖子-激活受体(PPAR)激动剂(例如壬二酰PAF、2-溴十六酸、酪里达唑(Ciglitizone)、氯贝丁酯、15-脱氧-δ^12，14-前列腺素J₂、非诺贝特、Fmoc-Leu-OH、GW1929、GW7647、8(S)-羟基-(5Z，9E，11Z，14Z)-二十碳四烯酸(8(S)-HETE)、白细胞三烯B₄、LY-171,883(托鲁司特)、前列腺素A₂、前列腺素J₂、十四烷基硫代醋酸(TTA)、曲格列酮(CS-045)、WY-14643(匹立尼酸))等。

在一些实施方式中，一种或多种活性剂与下列物质组合给药：贝特类药物(fibrates)(例如，氯贝特(冠心平)、吉非贝齐(诺衡)、非诺贝特(tricor)等)、胆汁酸多价螯合剂(例如，消胆胺、降脂宁等)、胆固醇吸收阻滞剂(例如，依泽替米贝(Zetia)等)、Vytorin(依泽替米贝/辛伐他汀组合)、和/或类固醇、华法灵、和/或阿斯匹林、和/或Bcr-Abl抑制剂/拮抗剂(例如，Gleevec(甲磺酸伊马替尼)、AMN107、STI571(CGP57148B)、ON012380、PLX225等)、和/或肾素血管紧张素途径阻滞剂(例如，氯沙坦(

)、缬沙坦(

)、厄贝沙坦(

)、坎地沙坦(

)等)、和/或血管紧缩素II受体拮抗剂(例如氯沙坦(Cozaar)、缬沙坦(Diovan)、厄贝沙坦(Avapro)、坎地沙坦(Atacand)和替米沙坦(Micardis)等)、和/或PKC抑制剂(例如，Calphostin C、白屈菜赤碱氯化物、白屈菜赤碱.氯化物、双-3，5-异丙基水杨酸铜、依布硒、EGF受体(人类)(651-658)(N-十四酰基化)、

 6976、H-7.二盐酸化物、1-O-十六烷基-2-O-甲基-外消旋-甘油、十六烷基-胆碱磷酸(C16:0)；米替福新、金丝桃素、蜂毒肽(天然)、蜂毒肽(合成)、ML-7.盐酸化物、ML-9.盐酸化物、棕榈酰-DL-肉毒碱.盐酸化物、蛋白质激酶C(19-31)、蛋白质激酶C(19-36)、橡黄素.二水合物、橡黄素.二水合物、D-赤-鞘氨醇(分离)、D-赤-鞘氨醇(合成)、鞘氨醇、N，N-二甲基，D-赤-鞘氨醇、二氢-，D-赤-鞘氨醇、N，N-二甲基-，D-赤-鞘氨醇氯化物、N，N，N-三甲基-，十字孢碱、双吲哚基马来酰亚胺I、G-6203等)。

在一些实施方式中，一种或多种活性剂与下列物质组合给药：ApoAI、Apo A-I衍生物和/或激动剂(例如，ApoAI米兰，参见，例如美国专利公开20050004082、20040224011、20040198662、20040181034、20040122091、20040082548、20040029807、20030149094、20030125559、20030109442、20030065195、20030008827和20020071862、和美国专利6,831,105、6,790,953、6,773,719、6,713,507、6,703,422、6,699,910、6,680,203、6,673,780、6,646,170、6,617,134、6,559,284、6,506,879、6,506,799、6,459,003、6,423,830、6,410,802、6,376,464、6,367,479、6,329,341、6,287,590、6,090,921、5,990,081等)、肾素抑制剂(例如，SPP630和SPP635、SPP100、阿利吉仑等)、和/或MR拮抗剂(例如，螺内酯、醛甾酮葡糖苷酸等)、和/或醛甾酮合酶抑制剂、和/或α-肾上腺素能拮抗剂(例如，

(甲基多巴)、

(多沙唑嗪)、

Duraclon^TM(可乐定)、

(酚苄明)、

(胍那决尔)、

(特拉唑嗪)、

(哌唑嗪)、

(胍法辛)、胍那苄、酚妥拉明、蛇根碱等)、和/或肝脏X受体(LXR)激动剂(例如，T0901317、GW3965、ATI-829、乙酰-罗汉松二聚体(APD)等)、和/或法尼酯(farnesoid)X受体(FXR)激动剂(例如，GW4064、6α-乙基-鹅去氧胆酸(6-ECDCA)、T0901317等)、和/或纤溶酶原激活剂-1(PAI-1)抑制剂(参见，例如基于肟的PAI-1抑制剂，还参见美国专利5,639,726等)、和/或低分子量肝素、和/或AGE抑制剂/破碎剂(breaker)(例如，苯磷硫胺、氨基胍、吡哆胺、替尼西坦、匹马吉定等)和/或ADP受体阻滞剂(例如，Clopidigrel、AZD6140等)、和/或ABCA1激动剂、和/或清除剂受体B1激动剂、和/或脂联素(Adiponectic)受体激动剂或脂联素诱导剂、和/或硬脂酰-辅酶A去饱和酶I(SCD1)抑制剂、和/或胆固醇合成抑制剂(非他汀类(non-statins))、和/或二酰基甘油酰基转移酶I(DGAT1)抑制剂、和/或乙酰辅酶A羧化酶2抑制剂、和/或LP-PLA2抑制剂、和/或GLP-1、和/或葡萄糖激酶激活剂、和/或CB-1激动剂、和/或抗-血栓/凝固剂、和/或因子Xa抑制剂、和/或GPIIb/IIIa抑制剂、和/或因子VIIa抑制剂、和/或组织因子抑制剂、和/或抗炎药物、和/或丙丁酚及衍生物(例如，AGI-1067等)、和/或CCR2拮抗剂、和/或CX3CR1拮抗剂、和/或IL-1拮抗剂、和/或硝酸酯和NO给体、和/或磷酸二酯酶抑制剂等。

C)给药

通常将本文所述的活性剂(典型地与水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)或本文所述其它输送剂组合)向其需要的哺乳动物给药。这种哺乳动物通常包括具有本文所述一种或多种病状或有本文所述一种或多种病状的危险的哺乳动物。

如本文所述，可根据包括但不限于注射、栓剂、鼻腔喷雾、定时释放植入、透皮贴剂等的多种标准方法的任一种将活性剂进行给药。在一个特别优选的实施方式中，将肽口服给药(例如，作为糖浆、胶囊、或片剂)。

该方法包括本发明单一活性剂的给药或两种或多种不同活性剂的给药，通常与水杨酰苯胺(例如，氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物)或本文所述其它输送剂组合。该活性剂可以单体(例如，在单独或组合的制剂中)、或以二聚体、低聚物或聚合物形式提供。在一些实施方式中，多聚体形式可包含缔合的单体(例如，离子或疏水连接的)，而一些其它多聚体形式包含共价连接的单体(直接或通过连接物连接)。

虽然对于在人类中的用途描述了本发明，但是其也适合于动物，例如兽医用途。因此，一些优选的生物体包括，但不限于人类、非人类灵长类、犬、马、猫、猪、有蹄动物、兔类动物等。

本发明的方法不限于表现本文所述病状的一种或多种症状的人类或非人类动物，还可用于预防疾病。因此，可将本发明的活性剂向生物体给药以预防本文所述病状(例如，动脉粥样硬化、中风等)的一种或多种症状的发作/发展。本文中特别优选的主体是显示病状的一种或多种危险因素的主体。因此，例如，在动脉粥样硬化的情况下，危险因素包括家族史、高血压、肥胖、高酒精消耗、抽烟、高血液胆固醇、高血液甘油三酯、升高的血液LDL、VLDL、IDL、或低HDL、糖尿病、或糖尿病家族史、高血脂、心脏病发作、心绞痛或中风等。

VI.治疗一种或多种适应症的试剂盒

在另一实施方式中，本发明提供用于改善动脉粥样硬化的一种或多种症状或用于预防治疗具有动脉粥样硬化风险的主体(人类或动物)和/或治疗或预防本文所述一种或多种状况的试剂盒。该试剂盒优选包括含有本文所述一种或多种活性剂的容器。该活性剂可以单位剂量制剂提供(例如，栓剂、片剂、囊片、贴剂等)和/或可任选地和一种或多种药物可接受赋形剂组合。

在各种实施方式中，该试剂盒通常额外地包含水杨酰苯胺或本文所述其它输送剂。水杨酰苯胺或其它输送剂可与本文所述的一种或多种活性剂配制为复合制剂。或者，可独立地提)水杨酰苯胺或其它输送剂，例如在独立的容器中。

该试剂盒可任选地进一步包含用于治疗所关注状况/病状的一种或多种其它试剂。这种试剂包括，但不限于β阻滞剂、血管扩张剂、阿司匹林、他汀类药物、ace抑制剂或ace受体抑制剂(ARB)等，例如如上所述。

另外，该试剂盒任选地包括标签和/或指导材料，提供实践本发明“治疗”或“预防”的方法或用途的指导(即规程)。优选的指导材料描述使用本发明的一种或多种活性剂以减轻动脉粥样硬化(或本文所述其它病状)的一种或多种症状和/或预防处于动脉粥样硬化(或本文所述其它病状)的风险的个体中的一种或多种这类症状的发作或增强。该指导材料还可任选地教导优选的剂量/治疗方案、禁忌症等。

虽然指导材料一般包括书面或印刷材料，但它们并不限于此。本发明还涉及能够储存这种指导并将它们传递给终端用户的任何介质。这种介质包括，但不限于电子存储介质(例如，磁盘、磁带、盒式磁带、芯片)、光学介质(例如，CD ROM)等。这种介质可包括提供这种指导材料的因特网的网址。

VII.适应症

本文所述的活性剂(例如，肽、小有机分子、氨基酸对等)对于减轻一种或多种症状和/或减少本文所述一种或多种适应症的发作率和/或严重性是有效的。特别地，本文所述的活性剂(例如，肽、小有机分子、氨基酸对等)对于减轻动脉粥样硬化的一种或多种症状是有效的。不受特定理论的约束，认为肽与促炎的氧化磷脂如Ox-PAPC、POVPC、PGPC和PEIPC形成所需的“种子分子”结合。

另外，由于许多炎症状况和/或其它病状至少部分由氧化磷脂所调节(mediate)，我们认为本发明的肽在改善由生物活性氧化磷脂的形成为特征的状况是有效的。而且，还存在本文所述的活性剂表现为有效的许多其它状况。

本文所述活性剂表现为减轻剂和/或预防剂的许多病状显示于表20中。

表20.其中活性剂(例如，D-4F)显示为或认为有效的状况的总结。

注意，表20中列出的状况旨在说明性而非限制性的。

实施例

提供下列实施例以说明，但不限制所要求保护的发明。

实施例1

氯硝柳胺提高口服给药的肽的吸收/生物利用度

我们之前报道了具有至少一个保护基团的氨基酸序列D-W-F-K-A-F-Y-D-K-V-A-E-KF-K-E-A-F(SEQ ID NO：5)(参见，例如，美国专利6,933,279)当由全部的L-氨基酸合成(L-4F)并且向小鼠口服给药时快速降解且不显著改变HDL在人类动脉壁细胞的培养物中抑制LDL-诱导的单核细胞趋化活性的保护能力(Navab等(2002)Circulation 105：290-292)。

本发明令人惊讶的发现是，将L-4F与氯硝柳胺一起向小鼠口服给药导致这些小鼠的HDL抑制LDL-诱导的单核细胞趋化活性的能力显著改善。相反，将任一试剂单独口服给药是无效的或者效果显著较低。

如图8所示，口服氯硝柳胺和L-4F的组合在动脉粥样硬化的小鼠模型中是有效的。白天期间使11个月大的雌性apoE缺失的小鼠禁食。晚上向小鼠提供含有或不含添加物的食物。在第一个实验中，对小鼠提供单独的食物(C)或每克食物添加有8.0微克氯硝柳胺(2’，5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺；氯硝柳胺，Sigma目录号N-3510，1711页，2006-2007目录，实验式(Hill Notation)：C₁₃H₈C₁₂N₂O₄，式量：327.12，CAS Number：50-65-7，批次105K0666EC200-056-8)的食物(D)或每克食物添加有2.0微克L-4F(游离碱)的食物(E)、或每克食物添加有8.0微克氯硝柳胺和2.0微克L-4F(游离碱)的食物(F)。每只小鼠仅给1g食物(每组n＝8只小鼠)，使得它们将消耗所有的食物。早晨在消耗食物后，从小鼠取血，将它们的血浆进行蔗糖深低温保藏并用FPLC分离，并测试含HDL部分在人类主动脉内皮细胞的培养物中抑制由标准对照人类LDL(A)诱导的单核细胞趋化活性的能力。还将小鼠HDL(C-J)与标准人类HDL(B)对比，其中标准人类HDL以与小鼠HDL一样的浓度添加。将所得的单核细胞趋化活性对单独添加的标准对照LDL(A)进行归一化。将结果以HDL-炎症指数作图，其是将各条件下测量的单核细胞趋化活性除以单独添加的标准对照LDL获得的单核细胞趋化活性的结果，该单独添加的标准对照LDL获得的单核细胞趋化活性如前所述归一化为1.0(Navab等(2004)JLipid Res，45：993-1007)。

以每组8只小鼠如第一个实验所述进行第二个实验，除了食物中的添加物不同。第二个实验中单独的食物(G)与下列的食物对比：每克食物添加有100微克氯硝柳胺的食物(H)、或每克食物添加有10微克L-4F(游离碱)的食物(I)、或每克食物添加有10微克L-4F(游离碱)和100微克氯硝柳胺的食物(J)。如在第一个实验中一样，每只小鼠仅给1g食物，使得它们将消耗所有的食物。早晨从第二组的小鼠取血，它们的HDL和来自第一个实验的HDL一起在人类动脉壁细胞培养物中测试。

数据表明向食物中添加2微克(E)或10微克(I)L-4F稍微但不显著地改善HDL-炎症指数并且在不存在氯硝柳胺时这两种剂量之间的差别不显著，证实了我们之前的报道(Navab等(2002)Circulation，105：290-292)。如图1(D)和(H)所示，单独给药氯硝柳胺是无效的。令人惊讶地，各种情况下氯硝柳胺和L-4F的口服组合导致HDL-炎症指数有惊人的统计学上显著的改善。10微克L-4F和100微克氯硝柳胺(J)的使用显著好于2微克L-4F和8微克氯硝柳胺(F)。

如图9所示，将氯硝柳胺作为口服大丸药(bolus)通过胃管饲法(胃管)给药，随后立即将L-4F作为大丸药通过胃管给药，使apoE缺失的小鼠的HDL抗炎。将10mg氯硝柳胺置于带有研钵和圆底杵的玻璃-玻璃均化器中(得自Fisher，VWR的Kontes Dounce Tissue研磨器，K885300-0015)并加入200μL乙醇。使用2-3击将氯硝柳胺乙醇混合物均质化并加入蒸馏水，使用5-10击将该混合物进一步均质化并用蒸馏水将体积调节为10mL。使用蒸馏水进行该混合物的连续稀释以提供如x轴所示的微克的氯硝柳胺，其包含于100μL中。用水稀释L-4F(游离碱)以提供每100μL水10μg的L-4F。将100微升氯硝柳胺溶液通过胃管提供给各组12个月大、并未禁食的雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝4)的各小鼠并随后立即提供含10μg L-4F(游离碱)的100μL水。对小鼠禁食并在7小时后对它们抽血并将它们的血浆进行蔗糖深低温保藏。用FPLC对血浆进行分离并测试含HDL的部分抑制由加入人类主动脉内皮细胞培养物中的标准对照人类LDL诱导单核细胞趋化活性的能力。还单独加入标准对照人类LDL或将其和标准对照人类HDL一起加入。将由单独标准对照人类LDL获得的值归一化为1.0。将添加标准对照HDL或小鼠HDL之后获得的值与单独的标准对照LDL获得的值比较以给出HDL炎症指数。

图10显示，将氯硝柳胺作为口服大丸药通过胃管给药，随后立即将L-4F作为大丸药通过胃管给药，显著地降低apoE缺失的小鼠LDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力。测试来自图9中所述小鼠的LDL部分在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力，并与标准对照人类LDL对比，该标准对照人类LDL的值对LDL-炎症指数归一化为1.0。

图11显示，口服给药氯硝柳胺(5.0mg/kg体重)，随后立即口服给药L-4F(0.5mg/kg/体重)，使猴HDL抗炎。将100mg氯硝柳胺置于带有研钵和圆底杵的玻璃-玻璃均化器中(得自Fisher，VWR的Kontes Dounce Tissue研磨器，K885300-0015)并加入200μL乙醇。使用2-3击将氯硝柳胺乙醇混合物均质化并加入蒸馏水，使用5-10击将该混合物进一步均质化并用蒸馏水将体积调节为10mL。由于氯硝柳胺趋于沉淀出来，将氯硝柳胺混合物在即将取出剂量前再次混合。将4只猴(2雄性和2雌性)各自通过胃管给予包含于2.5mL混合物中5.0mg/kg体重的氯硝柳胺。将L-4F(游离碱)加入玻璃-玻璃均化器中的10mL蒸馏水并使用5-10击均质化。在给药氯硝柳胺混合物之后立即向各只猴通过胃管给予包含于2.5mL水中0.5mg/kg体重的L-4F(游离碱)。5小时后得到血液，使用FPLC分离血浆并测试脂蛋白如图8所述的HDL-炎症指数和如图10所述的LDL-炎症指数。显示的数据为治疗前和在治疗后5小时猴HDL的HDL炎症指数的平均数±平均偏差(图中未显示单独标准对照人类LDL以及标准对照人类LDL和标准对照人类HDL的数据)。

口服给药氯硝柳胺(5.0mg/kg体重)，随后立即口服给药L-4F(0.5mg/kg体重)，显著地降低猴LDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力(参见，例如图12)。如10所述测试来自图11所述猴血浆的LDL部分。

即使当氯硝柳胺加入到乙醇中并均质化时，其在水溶液中也是相对不溶的。本发明令人惊讶的发现是，L-4F使氯硝柳胺在水溶液中溶解，如图13所示。以10mg/mL将氯硝柳胺加入水、或加入含有1.0mg/mL的L-4F(游离碱)的水，并在玻璃-玻璃均化器中均质化。将溶液在4℃下保存10天并拍照(参见图13)。

将图13中如上所示的含有L-4F或不含L-4F的氯硝柳胺溶液连续稀释并通过胃管饲法(胃管)以每小鼠100μL的体积给予禁食的7个月大的雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝8)。治疗6小时后收集血液，同时小鼠仍然禁食，并且用FPLC分离血浆和如图8所述测试HDL部分，数据显示于图14中。

L-4F和/或氯硝柳胺的微克数显示在x轴上。给药后6小时对小鼠取血，确定小鼠HDL(m)或人类HDL(h)在人类主动脉内皮细胞的培养物中抑制LDL-诱导单核细胞趋化活性的能力，并如图8所述以HDL-炎症指数作图。

如图15所示，L-4F与溶解的氯硝柳胺一起给药导致小鼠LDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中抑制单核细胞趋化活性的能力显著降低。

图14和15中的数据证实了不平常的、新的和预料不到的发现：肽L-4F溶解氯硝柳胺并且产生治疗性组合，使HDL抗炎，并显著降低在动脉粥样硬化的小鼠模型中LDL的炎症性质。

本发明还令人惊讶的发现是，即使当L-4F在饮用水中给药时，氯硝柳胺在小鼠食物中的给药也大大增强L-4F使HDL抗炎的能力和L-4F降低LDL在人类主动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力的能力(参见，例如图16和17)。

之前认为L-4F如果口服给药，在使HDL抗炎方面是无效的和在降低LDL在人类大动脉内皮细胞的培养物中诱导单核细胞趋化活性的能力方面是无效的(参见，例如Navab等(2002)Circulation，105：290-292)。图8-17中的数据证明了令人惊讶和预料不到的发现：如果L-4F与氯硝柳胺一起口服给药，在使HDL抗炎方面高度有效且在降低LDL的炎症性质方面高度有效。本发明还证明了令人惊讶和预料不到的发现：L-4F溶解氯硝柳胺。

实施例2

与L-4F组合的水杨酰苯胺增强前-βHDL的形成

氯硝柳胺与L-4F导致在口服给药后的apoE缺失的小鼠中前-βHDL的形成(参见，例如图18)。D-4F(游离碱)溶于pH7.0的碳酸氢铵缓冲液(ABCT)中0.1％吐温20中。L-4F(游离碱)和氯硝柳胺以1:10(L-4F:氯硝柳胺；重量:重量)的比溶于ABCT中。将单独的ABCT或含有L-4F或D-4F以及氯硝柳胺(它们的微克数如图18中x轴所示)的ABCT通过胃管以100μL向禁食整夜的8个月大雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝8)给药。30或40分钟后对小鼠取血，通过在平行三份2维凝胶中扫描确定前-β-1 HDL中所含载脂蛋白A-I的百分比。显示的数据为平均值±标准偏差。

还令人惊讶的发现是，氯硝柳胺和L-4F的口服共同给药将apoE缺失的小鼠的HDL的炎症性质(如在基于细胞的测定中测量的)改善至当氯硝柳胺和D-4F给药时所看到的类似的程度(参见，例如图19)。

当用无细胞测定测量HDL的炎症性质时获得类似的结果(参见，例如图20)。

还令人惊讶的发现是，当氯硝柳胺和L-4F向apoE缺失的小鼠口服共同给药时，对氧磷酶活性的增加与当氯硝柳胺和D-4F共同给药时所看到的类似(参见，例如图21)。

氯硝柳胺和D-4F或L-4F的口服共同给药增强两种肽改善在apoE缺失的小鼠中HDL炎症性质的能力。然而，在不存在氯硝柳胺时，D-4F能够使apoE缺失的小鼠抗炎至与正常人类HDL可比的程度，而L-4F仅当与氯硝柳胺共同给药时能够实现这种程度的效力(参见，例如图22)。

如图23所示，通过氯硝柳胺和L-4F的口服共同给药降低来自apoE缺失的小鼠的LDL的炎症性质。

本发明令人惊讶的发现是，图24-26中所述的一些水杨酰苯胺在与D-4F或L-4F一起口服给药时在使apoE缺失的小鼠HDL抗炎方面甚至比氯硝柳胺更有效。如图24所示，当不与所述肽一起给药时，氯硝柳胺和新的水杨酰苯胺都不抗炎。

如图25所示，在与D-4F或L-4F共同给药时，新的水杨酰苯胺(BP-1001和BP-1012)在降低LDL炎症性质方面也比氯硝柳胺更有效。

如图26所示，其它水杨酰苯胺在生物活性方面与氯硝柳胺类似，而另外一些则更有效。

实施例3

氯硝柳胺提高L-4F在ApoE缺失的小鼠中的吸收

使用¹⁴C-L-4F确定使用和不使用氯硝柳胺(BP-124)的L-4F吸收。通过胃管向禁食的6个月大的雌性apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药在200μL的pH7.0的碳酸氢铵中0.1％吐温20中含有或不含100微克氯硝柳胺的L-4F(每小鼠21,000dpm，含有10微克L-4F)。继续禁食并且在图27中x轴上所示的时间点对小鼠取血并确定每mL血浆的dpm。图27中对于接受L-4F+氯硝柳胺的小鼠的曲线下面积(AUC)是对于接受不含氯硝柳胺的L-4F的小鼠的AUC的4.4倍。

数据表明，氯硝柳胺增强L-4F体内生物活性的机理之一是通过提高L-4F的吸收。

上述数据(实施例1、2、和3)显示，氯硝柳胺或其它水杨酰苯胺与L-4F和大概其它治疗性肽的组合表现出具有用于口服治疗的巨大潜力。基于这些数据，认为使用氯硝柳胺或其它水杨酰苯胺与其它肽或蛋白质将使新的口服疗法成为可能。

图27中的数据表明，不使用氯硝柳胺，通过胃管给药¹⁴C-L-4F导致持续不超过5分钟的低血浆水平。相反，当将¹⁴C-L-4F和氯硝柳胺一起给药时，实现约150纳克/mL的C_max，其持续超过1小时且在较低浓度下持续高达4小时。

图28中的数据证明图28中的14C-L-4F与氯硝柳胺一起给予时是有生物活性的。通过胃管向禁食的5个月大的apoE缺失的小鼠给药在200μL中含有或不含100μg氯硝柳胺(Niclos.)的¹⁴C-L-4F(每小鼠21,000dpm，含有10μgL-4F)。继续禁食并在5小时后对小鼠取血，如图8所述确定在人类主动脉内皮细胞培养物中的HDL炎症指数。简单地说，为确定HDL炎症指数，如前所述将脂蛋白加入人类主动脉内皮细胞培养物(Navab等(2005)CirculationResearch 97：524-532)。将正常对照人类LDL以最终浓度100μg/mL LDL-胆固醇一式三份地加入各个孔。将正常人类HDL作为阳性对照以最终浓度50μg/mL HDL-胆固醇加入含有人类LDL的三个孔。将来自小鼠的HDL以最终浓度50μg/mL HDL-胆固醇一式三份地加入含有人类LDL的其它孔。8小时培养后除去上清液并如前所述确定单核细胞趋化活性(Navab等(2001)J.Lipid Res.，42：1308-1317；Danciger等(2004)J.Immunol.Meth.，288：123-124)。将从含有人类LDL但不含HDL的孔获得的值归一化为1.0。用从含有人类LDL与人类或小鼠HDL的孔获得的值除以从含有人类LDL且不添加HDL的孔获得的值以得到HDL-炎症指数，如前所述(Ansell等(2003)Circulation108：2751-2756)。图28中的数据证明，在图27所述实验中使用的¹⁴C-L-4F是有生物活性的。

实施例4

口服给药的氯硝柳胺和L-4F(非单独的L-4F)减少动脉粥样硬化小鼠模型中的损伤。

在另一实验中，将17周大的雌性apoE缺失的小鼠分成三组：第I组在啮齿动物食物中接受250μg/小鼠/天的氯硝柳胺。第II组在啮齿动物食物中接受25μg/小鼠/天的L-4F。第III组在啮齿动物食物中接受250μg/小鼠/天的氯硝柳胺和25μg/小鼠/天的L-4F。所有三组在饮用水中接受50μg/小鼠/天的普伐他汀。14周后处死小鼠并确定主动脉窦损伤面积。如图29-31所示，L-4F与氯硝柳胺一起口服给药显著地抑制apoE缺失的小鼠中的动脉粥样硬化，而不是不含氯硝柳胺的口服给药。

在另一实验中，将九个半月大的雌性apoE缺失的小鼠分成四组：牺牲第一组以建立基线损伤面积(零时间)。第II组在啮齿动物食物中接受2mg/小鼠/天的氯硝柳胺。第III组在啮齿动物食物中接受200μg/小鼠/天的L-4F。第IV组在啮齿动物食物中接受2mg/小鼠/天的氯硝柳胺(Niclos.)和200μg/小鼠/天的L-4F。第II-IV组在饮用水中接受50μg/小鼠/天的普伐他汀。26周后处死小鼠并确定主动脉窦损伤面积。图32-34中的数据证明，L-4F和氯硝柳胺的组合导致年老且apoE缺失的小鼠中损伤的衰退。相反，氯硝柳胺或不含氯硝柳胺的L-4F都不显著减少损伤。

L-4F形成A类两亲性螺旋。在载脂蛋白J(apoJ)中包含残基113-122的序列包括潜在的G^*螺旋。由全部的D-氨基酸合成的这种肽D-[113-122]apoJ的给药显著地改善HDL炎症性质并减少apoE缺失的小鼠中的动脉粥样硬化(Navab等(2005)Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.25：1932-1937)。

为确定氯硝柳胺是否可改善apoJ的L型的活性，通过胃管向10个月大的apoE缺失的小鼠(每组n＝4)给药2mg氯硝柳胺或200μg L-[113-122]apoJ或2mg氯硝柳胺和100或200μgL-[113-122]apoJ，或者给药2mg氯硝柳胺和100或200μgL-4F。8小时后对小鼠取血并如图8所述确定在人类主动脉内皮细胞培养物中的HDL炎症指数。如图35所示，相同但由全部L-氨基酸合成的且与氯硝柳胺一起给药的相同肽的口服给药使apoE缺失的小鼠HDL抗炎至和正常人类HDL相同的程度，但是当在没有氯硝柳胺而将肽口服给药时情况不是这样。

应理解，本文所述的实施例和实施方式仅为说明性目的，根据其的各种改进或变化将提议给本领域的技术人员并包括在本申请的精神和范围内以及所付权利要求的范围内。本文引用的所有出版物、专利、和专利申请在此通过参考全部引入用于所有的目的。

Claims (101)

1.包含与水杨酰苯胺组合的治疗性肽的组合物。

2.权利要求1的组合物，其中所述组合物包含与氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合的治疗性肽。

3.权利要求2的组合物，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物选自2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐、和5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物。

4.权利要求2的组合物，其中所述氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7和/或表1中的化合物。

5.权利要求2的组合物，其中所述肽的长度范围是3个氨基酸-300个氨基酸。

6.权利要求2的组合物，其中所述肽形成两亲性螺旋。

7.权利要求2的组合物，其中所述肽选自ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、和18A。

8.权利要求2的制剂，其中所述肽为Apo-J肽。

9.权利要求2的组合物，其中所述肽形成A类两亲性螺旋。

10.权利要求2、7或9中任一项的组合物，其中所述肽由全部的“L”氨基酸组成。

11.权利要求2、7或9中任一项的组合物，其中所述肽包括至少一个“D”氨基酸。

12.权利要求2、7或9中任一项的组合物，其中所述肽由全部的“D”氨基酸组成。

13.权利要求2的组合物，其中所述肽为D或L肽，所述肽的序列示于表2-11和/或SEQ ID No：1-1175的任一个中。

14.权利要求13的组合物，其中所述肽由全部的L氨基酸组成。

15.权利要求13或14的组合物，其中所述肽包含位于氨基或羧基末端的保护基团。

16.权利要求13或14的组合物，其中所述肽包含与所述氨基末端结合的第一保护基团和与所述羧基末端结合的第二保护基团。

17.权利要求16的组合物，其中所述保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。

18.权利要求16的组合物，其中所述第一保护基团是选自乙酰基、丙酰基、和3-20个碳的烷基的保护基团。

19.权利要求18的组合物，其中所述第二保护基团是酰胺。

20.权利要求2的组合物，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和所述治疗性肽是混合的。

21.权利要求2的组合物，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和所述治疗性肽形成加合物。

22.权利要求2的组合物，其中所述组合物是单位剂量制剂。

23.权利要求2的组合物，其中配制所述组合物，使氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物比所述肽先释放或溶解。

24.权利要求2的组合物，其中：

所述水杨酰苯胺是氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物；和

所述肽是包含氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SFQ ID NO：104)的D或L肽。

25.权利要求24的组合物，其中所述肽包含羧基末端保护基团和氨基末端保护基团。

26.权利要求25的组合物，其中：

所述肽包含与所述羧基末端结合的保护基团且所述羧基末端保护基团是酰胺；和

所述肽包含与所述氨基末端结合的保护基团且所述氨基末端保护基团是乙酰基。

27.权利要求26的组合物，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物是氯硝柳胺。

28.权利要求26的组合物，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽形成加合物。

29.增强向哺乳动物口服给药的治疗性肽的体内活性的方法，所述方法包括将所述肽与足以增强所述肽的体内活性的量的氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合口服给药。

30.权利要求29的方法，其中所述肽的长度范围是3个氨基酸-300个氨基酸。

31.权利要求29的方法，其中所述肽形成两亲性螺旋。

32.权利要求31的方法，其中所述肽形成A类两亲性螺旋。

33.权利要求31的方法，其中所述肽选自ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、和18A。

34.权利要求31的方法，其中所述肽是Apo-J肽。

35.权利要求29-33中任一项的方法，其中所述肽由全部的“L”氨基酸组成。

36.权利要求29-33中任一项的方法，其中所述肽包括至少一个“D”氨基酸。

37.权利要求29-33中任一项的方法，其中所述肽由全部的“D”氨基酸组成。

38.权利要求31的方法，其中所述肽为D或L肽，所述肽的序列示于表2-11和/或SEQ ID No：1-1175的任一个中。

39.权利要求31的方法，其中所述肽是包含氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或逆氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。

40.权利要求39的方法，其中所述肽由全部的L氨基酸组成。

41.权利要求38、39或47的方法，其中所述肽包含在所述氨基或羧基末端的保护基团。

42.权利要求38、39或47的方法，其中所述肽包含与所述氨基末端结合的第一保护基团和与所述羧基末端结合的第二保护基团。

43.权利要求42的方法，其中所述保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。

44.权利要求42的方法，其中所述肽包含与所述氨基末端结合的保护基团且所述氨基末端保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、丙酰基、和3-20个碳的烷基。

45.权利要求44的方法，其中所述肽包含与所述羧基末端结合的保护基团且所述羧基末端保护基团是酰胺。

46.权利要求29的方法，其中所述氯硝柳胺在所述肽给药之前给药。

47.权利要求29的方法，其中所述氯硝柳胺与所述肽同时给药。

48.权利要求29的方法，其中所述氯硝柳胺与所述肽结合形成加合物。

49.权利要求29的方法，其中所述氯硝柳胺选自2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐、和5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物。

50.权利要求29的方法，其中所述氯硝柳胺类似物是图2、4、5、6、或7中的化合物。

51.药物制剂，包含：

口服给药的药理学活性剂；和

水杨酰苯胺。

52.权利要求51的制剂，其中所述水杨酰苯胺包括氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物。

53.权利要求51或52的制剂，其中所述口服给药的药理学活性剂是治疗性肽。

54.权利要求53的制剂，其中所述治疗性肽和所述水杨酰苯胺形成加合物。

55.权利要求51的制剂，其中药理学活性剂不是非肽抗增殖剂。

56.权利要求51的制剂，其中药理学活性剂不是非肽抗癌药物。

57.权利要求51的制剂，其中药理学活性剂是肽抗增殖剂。

58.权利要求51的制剂，包含：

治疗性两亲性螺旋肽；和

氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物，其中所述制剂中的所述氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物在水溶液中的溶解性显著大于不存在所述两亲性螺旋肽时所述氯硝柳胺和/或氯硝柳胺类似物在水溶液中的溶解性。

59.权利要求58的制剂，其中所述肽选自ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、和18A。

60.权利要求58的制剂，其中所述肽形成A类两亲性螺旋。

61.权利要求58的制剂，其中所述肽是Apo-J肽。

62.权利要求58的制剂，其中所述肽由全部的“L”氨基酸组成。

63.权利要求58的制剂，其中所述肽包括至少一个“D”氨基酸。

64.权利要求58的制剂，其中所述肽由全部的“D”氨基酸组成。

65.权利要求58的制剂，所述肽为D或L肽，所述肽的序列示于表2-11和/或SEQ ID No：1-1175的任一个中。

66.权利要求58的制剂，其中所述肽是具有氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或逆氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。

67.权利要求66的制剂，其中所述肽由全部的L氨基酸组成。

68.权利要求58或66的制剂，其中所述肽包含位于所述氨基或羧基末端的保护基团。

69.权利要求58或66的制剂，其中所述肽包含与所述氨基末端结合的第一保护基团和与所述羧基末端结合的第二保护基团。

70.权利要求69的制剂，其中所述保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。

71.权利要求69的制剂，其中所述第一保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、丙酰基、和3-20个碳的烷基。

72.权利要求71的制剂，其中所述第二保护基团是酰胺。

73.减轻以哺乳动物中炎症反应为特征的病状的一种或多种症状的方法，所述方法包括：

将两亲性螺旋肽与氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物组合向哺乳动物口服给药，该两亲性螺旋肽减轻以哺乳动物中炎症反应为特征的动脉粥样硬化或其它病状的一种或多种症状，其中所述口服输送提供所述肽的体内活性以减轻所述病状的一种或多种症状。

74.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物比所述肽先给药。

75.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽同时给药。

76.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽作为单一制剂给药。

77.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物与所述肽在给药前结合以形成加合物。

78.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺选自2’5-二氯-4’-硝基水杨酰苯胺、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺-2-氨基乙醇盐、5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺哌嗪盐、和5-氯-水杨基-(2-氯-4-硝基)酰苯胺一水合物。

79.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺类似物是图2、3、4、5、6、7和表1中的化合物。

80.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和所述肽作为单位剂量制剂给药。

81.权利要求73的方法，其中所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物和所述肽作为单位剂量制剂给药，配制该单位剂量制剂使得所述氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物比该肽先释放或溶解。

82.权利要求73的方法，其中所述病状选自动脉粥样硬化、类风湿性关节炎、红斑狼疮、结节性多动脉类、骨质疏松、阿尔茨海默病、多发性硬化、慢性阻塞性肺疾病、哮喘、糖尿病、慢性肾病、和病毒性疾病。

83.权利要求73的方法，其中所述病状是动脉粥样硬化。

84.权利要求73的方法，其中所述肽是ApoA-I米兰。

85.权利要求73的方法，其中所述肽形成A类两亲性螺旋。

86.权利要求73的方法，其中所述肽是Apo-J肽。

87.权利要求73的方法，其中所述肽是由全部的“L”氨基酸组成。

88.权利要求73的方法，其中所述肽包含至少一个“D”氨基酸。

89.权利要求73的制剂，其中所述肽由全部的“D”氨基酸组成。

90.权利要求73的制剂，所述肽为示于表2-11和/或SEQ ID No：1-1175中任一个的D或L肽。

91.权利要求73的制剂，其中所述肽是具有氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或逆氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。

92.权利要求91的制剂，其中所述肽由全部的L氨基酸组成。

93.权利要求73或91的制剂，其中所述肽包含位于所述氨基或羧基末端的保护基团。

94.权利要求93的制剂，其中所述保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、酰胺、和3-20个碳的烷基、Fmoc、Tboc、9-芴乙酰基、1-芴羧基、9-芴羧基、9-芴酮-1-羧基、苄氧基羰基、呫吨基(Xan)、三苯甲基(Trt)、4-甲基三苯甲基(Mtt)、4-甲氧基三苯甲基(Mmt)、4-甲氧基-2，3，6-三甲基-苯磺酰(Mtr)、1，3，5-三甲苯-2-磺酰(Mts)、4，4-二甲氧基二苯甲基(Mbh)、甲苯磺酰基(Tos)、2，2，5，7，8-五甲基色满-6-磺酰(Pmc)、4-甲苄基(MeBzl)、4-甲氧苄基(MeOBzl)、苄氧基(BzlO)、苄基(Bzl)、苯甲酰(Bz)、3-硝基-2-吡啶亚磺酰基(Npys)、1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环己基)乙基(Dde)、2，6-二氯苄基(2，6-DiCl-Bzl)、2-氯苄氧基羰基(2-Cl-Z)、2-溴苄氧基羰基(2-Br-Z)、苄氧基甲基(Bom)、叔丁氧基羰基(Boc)、环己氧基(cHxO)、叔丁氧基甲基(Bum)、叔丁氧基(tBuO)、叔丁基(tBu)、乙酰基(Ac)、和三氟乙酰基(TFA)。

95.权利要求93的制剂，其中所述第一保护基团是选自如下的保护基团：乙酰基、丙酰基、和3-20个碳的烷基。

96.权利要求95的制剂，其中所述第二保护基团是酰胺。

97.包括含有水杨酰苯胺和治疗性肽的容器的试剂盒。

98.权利要求97的试剂盒，其中水杨酰苯胺是氯硝柳胺或氯硝柳胺类似物。

99.权利要求97的试剂盒，其中所述肽选自ApoJ、ApoA-I、ApoA-I米兰、和18A。

100.权利要求97的试剂盒，其中所述肽形成A类两亲性螺旋。

101.权利要求97的试剂盒，其中所述肽是具有氨基酸序列DWFKAFYDKVAEKFKEAF(SEQ ID NO：5)或逆氨基酸序列FAEKFKEAVKDYFAKFWD(SEQ ID NO：104)的D或L肽。

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