CN101495503A - 酪氨酸激酶抑制剂组合物及其制造方法和在疾病治疗中的应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种新的基于ErbB的配体结合分子及其制备方法和应用。该结合分子是由重组DNA分子表达的蛋白，该蛋白具有能与活化配体结合的ErbB胞外域。这些结合元件可作为陷阱，与循环中的配体结合，将其隔离开，使之无法与细胞ErbB受体结合。

Description

酪氨酸激酶抑制剂组合物及其制造方法和在疾病治疗中的应用

技术领域

本发明一般涉及受体酪氨酸激酶及其活化配体，运用基因工程产生可溶性ErbB配体连接分子，将修饰后的构建体插入重组DNA载体，得到通过细胞分泌的可溶性修饰型受体，以及应用这些分子治疗疾病。

背景技术

癌症是一类疾病的通称，这类疾病是许多国家人口死亡的主要原因。简单来说，癌症是由受损、失控细胞异常增殖引起的疾病。某些控制正常细胞生长、发育和死亡的关键基因或基因组发生变异，导致变异细胞生长。正是由于这些变异细胞生长，导致肿瘤形成。情况恶化时，肿瘤会越长越大，或者遍布全身，最后造成身体多方面损害，直至死亡。

治疗癌症的主要方法是通过手术切除肿瘤，从而阻止肿瘤向健康组织扩散。但是手术的风险比较高，而且并非适用所有患者。想要用手术攻克每一种肿瘤，这也是不可能的，例如，长在脑区域的肿瘤就不能进行手术，或者例如白血病等疾病，也不能使用手术。

所以，一直以来以及目前都在不断研发其他治疗方法，以治疗那些使用手术不可靠或不可能用手术切除的肿瘤。一种替代手术的方法就是放射治疗。用放射线照射肿瘤，会消灭或损害靶肿瘤细胞，但同时也会影响非肿瘤细胞，出现身体虚弱的副作用，这一点众所周知。

化学治疗是另一类试图通过向患者施用细胞毒性化合物来消灭体内肿瘤组织的方法。这类方法既可以用作抗击癌症的单一疗法，独立使用，也可以在手术或放射治疗前后使用。但在放射治疗中，众所周知，会产生身体虚弱副作用，所以，这种治疗对患者健康的危害程度可能要比仅使用手术或射线更大一些。

为避免这些治疗方法对非癌组织的损害及产生副作用，科研人员一直在研究只消灭癌组织的治疗方法。一种治疗就是使用肿瘤特异性抗体，如结肠肿瘤特异性抗体，试图不伤害健康组织。但是这一治疗的成功率较低。

另外，基于基因的治疗法也正在研究当中，研究显示，有些基因突变产生的蛋白(或称靶)对药物的反应不同于野生型基因(或称正常基因)编码的正常蛋白对药物的反应。例如，使用药物

(

是伊马替尼的商品名)即为这类治疗，该药物对治疗慢性髓样白血病(″CML″)非常有效，它能抑制早期促使CML进展、称之为BCR-ABL激酶的癌基因。另外发现

是某些酪氨酸激酶受体、尤其是许多胃肠道胃肿瘤(″GIST″)中发现的突变型c-kit致癌受体的抑制剂。

另一种类似的治疗剂gefitimb(

阿斯利康公司商标)是一种靶向表皮生长因子受体(″EGFR″)的酪氨酸激酶活性的小分子抑制剂。FDA已经批准

用于治疗非小细胞肺癌患者，这些患者体内肿瘤对铂基和多西紫杉醇化学治疗没有反应。虽然只有约10％的患者对

有反应，但这一部分人群确实对该药物表现出良好的临床反应。

再有一种方法就是攻击控制肿瘤内新血管形成或血管生成的受体，并加以抑制。一般认为，血管为肿瘤生长提供营养，这是肿瘤生长的关键所在。已经发现血管内皮生长因子(″VEGF″)在这一过程中非常关键，当VEGF与内皮细胞上的VEGF受体结合时，会启动VEGF途径。这些受体，VEGFR1和VEGFR2均为跨膜酪氨酸激酶，当与其胞外域上的VEGF结合时，会激活其固有的酪氨酸激酶活性，并启动细胞内信号转导。据文献报道，利用阻断抗VEGF抗体或抗VEGFR抗体、作为“陷阱”(trap)阻止VEGF与其受体结合的可溶性受体和抑制VEGFR酪氨酸激酶活性的小分子抑制剂，可以阻断这一途径。Holash等人报道了一种可溶性受体的应用，这种受体由与人免疫球蛋白G1的Fc部分融合的VEGFR1和VEGFR2的胞外域构成，是一种竞争性抑制剂，可作为陷阱捕获VEGF，从而破坏VEGF级联，抑制肿瘤内新血管形成(Holash，et al.，2002，PNAS，vol.98，no.17，pp 11393-1398.)。

在可溶性受体的另一应用中，炎性疾病特别是类风湿性关节炎中，肿瘤坏死因子-α(″TNF-α″)活化的前提是必须出现炎症。TNF-α介导的活动需要在TNF-α同源三聚体与细胞表面受体的胞外域结合后启动，之后这些细胞表面受体形成多聚体，随后通过受体胞内域进行信号转导。研究显示，虽然存在天然的、可溶性的TNF-α受休，而且它们能作为竞争性抑制剂，用于抑制TNF-α与细胞表面受体结合，但是从大多数炎性疾病中可以看到，光是用它们阻断活性水平还是不够的。抗关节炎药物依那西普，商品名为

(Amgen公司商标，Thousand Oaks，California，USA)，是一个完全人源化三聚体融合蛋白，由人TNF-α受体的细胞外配体结合域和人IgG1的Fc部分连接而成，用作抑制TNF-α与细胞表面TNF受体结合的竞争性抑制剂，从而抑制类风湿性关节炎患者关节部位由TNF-α诱导的炎症反应。依那西普用作细胞因子载体和TNF-α拮抗剂，使TNF-α丧失生物活性(Goffe，et al.2003，J.Am.Acad.Dermatol，vol.49，no.2，pp.S105-S111；Goldenburg，M.，1999，ClinicalTherapeutics，vol.21，no.1，pp.75-87)。

另一种药物英利昔单抗也靶向TNF-α受体，它是一种抗TNF-α的单克隆嵌合抗体，阻止必定发生的结合，但是它同时与膜结合型TNF-α和可溶性TNF-α结合，可能会引起某些不良副作用。

受体酪氨酸激酶是一些乳腺癌生长的关键酶。一般来说，受体酪氨酸激酶是糖蛋白，由(1)能与特定配体结合的胞外域，(2)跨膜区，(3)近膜域，受体在此处受例如蛋白磷酸化的调控，(4)酪氨酸激酶域，它是受体的酶组分，和(5)羧端尾部组成(Davis，etal.，US 6,441,137，Aug.27，2002)。对乳腺癌来说，I型受体酪氨酸激酶中的erbB家族是目前最重要的一类受体酪氨酸激酶，它们包括erbB1(又称HER1)、erbB2(HER2/neu)、erbB3(HER3)和erbB4(HER4)。这些受体酪氨酸激酶在上皮组织、间叶组织和神经组织中广泛表达。一些乳腺癌和其他各种恶性肿瘤中，erbB2或erbB1过度表达与临床结果恶化相关。

erbB受体在非活化状态下以单体形式存在，一旦与可溶性配体结合后，受体内构象发生变化，从而形成受体同源和异源二聚体，即活化受体。配体结合及后续同源或异源化过程刺激受体通过自磷酸化反应产生催化活性，也就是说，各个单体会将彼此的酪氨酸残基磷酸化。另外，有些磷酸化的酪氨酸残基会给下游信号转导分子提供停泊位点(docking site)。

erbB受体活化会产生不同的下游结果，例如，增殖和细胞存活。这些不同结果是通过不同的信号转导途径产生的，具体取决于与特定受体结合的特定配体。配体结合后会向构成同源或异源二聚体的组分发出指示，最后形成二聚体。目前大量研究显示，结合配体的类型和后续形成的同源或异源二聚体的类型使活化erbB受体上酪氨酸残基的磷酸化有所不同，例如，神经调节蛋白(neuregulins)(″NRGs″，又称heregulins)是一个与erbB受体结合并促使增殖、分化、存活和转移等不同反应发生的配体家族。NRG1β和NRG2β能与erbB3结合，并诱导erbB2/erbB3异源二聚体形成，但是，只有NRG1β能刺激培养的乳腺癌细胞分化，其原因是，当NRG2β和NRG1β分别被结合时，募集到活化erbB2/erbB3异源二聚体的下游信号转导分子各不相同。例如，虽然NRG1β和NRG2β分别产生的erbB2酪氨酸磷酸化总水平大致相当，但是只有NRG1β能使PI3K(p85)、SHP2、Grb2和She与受体发生联系。

另一类可溶性肽配体家族可调控erbB受体信号转导，包括表皮生长因子(″EGF″)和转化生长因子(″TGF-α″)，它们均与受体erbB1结合。据文献报道，配体EGF或TGF-α表达量增加，可作为某些癌症患者的不良预后指标，甚至受体末过度表达，肿瘤微环境中EGF或其他配体浓度局部增加也似乎能使异源二聚体保持活化状态。

乳腺癌中，erbB1和erbB2形成二聚体后会激活存活和增殖途径。ErbB1、erbB2和erbB4都含有功能性催化域，它们是激活上述途径的关键特性。已经出现一些旨在抑制erbB1和erbB2的治疗方案，其中一种方案是使用抗体与这些受体胞外域结合，使受体降解，另一方案是使用小分子抑制剂，与这些受体胞内域上的活化激酶域结合。令人遗憾的是，这些方案均不能完全根治乳腺癌生长。

其原因可能在于，不是所有的erbB受体都含有能被小分子抑制的功能性催化域。erbB3在受体激酶中比较特殊，因为它是催化域缺陷型酶。虽然还有其他激酶缺陷型受体，即CCK-4m VIK/RYK、Klg和Rorl，但它们都是孤儿受体(orphan receptors)，没有已知配体。ErbB3与其他这些受体不同，它能与heregulin(称为HRG或神经调节蛋白(NDF))等配体结合。尽管erbB3缺少催化活性，但它仍然非常重要，因为它会与erbB2和erbB4发生异源二聚化，形成erbB2/erbB3和erbB3/erbB4异源二聚体从而刺激乳腺癌中进行信号转导活动(Lee，et al.，2001，Cancer Research 61，pp4467-4473)。

已经鉴定到天然存在的缩短型erbB3受体，它只含有erbB3受体的胞外域。研究显示，这些天然的可溶性受体可以与配体结合，所以能用作细胞ErbB3受体的竞争性抑制剂，但是它们的含量不高，不能对乳腺癌患者产生疗效。尤其是，Lee等人报道，发现了一种p85-可溶性erbB3受体及其作为erbB3配体的竞争性抑制剂的活性。研究发现，这种受体是天然存在的体外erbB3抑制剂，可阻止HRG与细胞表面受体结合，被认为可能是众多胞外负调控因子之一(Lee，et al.，2001，Cancer Research，61：4467-4473)。

本发明的目的是要提供与erbB3配体竞争性结合的erbB3配体拮抗剂，从而减少或消除这些配体与细胞erbB3受体间的结合。

本发明的优选目的是要提供以单一制剂或与其他癌症治疗联合的方式施用erbB3配体拮抗剂来治疗癌症的方法。

发明内容

本文是要公开一种新的基于ErbB的配体结合分子及其制备方法和应用。该结合分子可以是由重组DNA分子表达的蛋白，该蛋白可以含有能与活化配体结合的ErbB胞外域。这些结合元件可作为陷阱，与循环中的配体结合，将其隔离开，使之无法与细胞ErbB受体结合。

比较理想的情况是，上述蛋白可包括部分ErbB受体，并将与ErbB配体结合。

本文还阐述了其他特征和优点，可从以下详细说明和附图中显而易见。

附图说明

图1：ErbB单陷阱作用机理的示意图。

图2：ErbB3单陷阱和ErbB双陷阱多肽的Western杂交。

具体实施方式

本说明书现阐述一种能使配体与ErbB等受体结合的结合分子，本文中将这种结合分子称为“单陷阱”(single trap)。在一个实施例中，该分子对所有ErbB配体有较强的亲和力。该分子可用于单药治疗或联合治疗，例如，在EGFR和ErbB2过度表达或者ErbB和配体中均发生变化的肿瘤中，与EGFR和ErbB2抑制剂联合使用。

在一个实施例中，本发明涉及一种单抗原结合分子，该分子对那些能与特定ErbB受体结合的配体有较强的结合亲和力。一般来说，所述配体将是能与特定受体结合的特定配体。结合分子最好是水溶性分子。另外，结合分子也可以存在于一种能赋予其可溶性或亲水性的制剂中，如脂质体制剂。

在一个实施例中，结合分子可以是一种受体胞外域的可溶性部分。结合分子中可以使用任何适合的受体。适合的受体一般要包含其中含有配体结合所必需和足够的所有决定簇的胞外域。这些决定簇可位于相应的mRNA或基因结构上，而这些mRNA或基因结构可以直接从基因组中分离，或者可以从源于其本身宿主细胞的cDNA中分离。某些实施例中，可使用ErbB受体家族制备结合分子。所以，结合分子可以包括ErbB受体如ErbB1、ErbB3或ErbB4的胞外配体结合域。该结合域在其多肽链上可以存在其他元件，只要其仍然具有适合的受体结合活性即可。

结合分子可以包括由重组DNA分子表达的氨基酸序列。该重组DNA分子可以包括首要的编码部分受体蛋白的核苷酸序列。结合分子中还可以包括其它元件，如IgG1的Fc部分。使用人IgG1的Fc部分是所属技术领域的技术人员都熟知的一种设计，它一般有两种用途。第一，使单体可溶性受体与更高级别的结构如二聚体和三聚体等形成寡聚体。第二，使产生的分子更稳定，与不含IgG1分子Fc部分的分子相比，体内半衰期延长。另一个元件可以是可操作地连接配体结合元件和IgG1-Fc元件的接头。例如，甘氨酸-丝氨酸(Gly4Ser)3接头。还有一个元件可以是蛋白酶识别序列，必要时，通过该序列能从结合分子中切除IgG1-Fc元件。典型的序列包括Xa因子或TEV蛋白酶识别序列。

某些实施例中，所述重组DNA分子包括ErbB1的序列。某些实施例中，重组DNA分子包括来自ErbB3的序列。其他实施例中，重组DNA分子可以包括来自ErbB4的序列。像这样的任何一种情况下，所选用的序列都会有很强的结合其相应的ErbB配体的能力。

某些实施例中，将这些受体序列克隆到一个排列有转录和翻译序列的重组DNA构建体中，从而可以在适合的宿主中表达结合分子。选用可在适合的宿主中使用的转录和翻译序列，这是所属技术领域的技术人员都很熟知的技术。许多情况下，受体会被糖基化，而糖基化能影响配体结合。所以，选用何种宿主可根据该宿主细胞产生的糖基化模式而定。例如，对于含ErbB的结合分子，可以使用哺乳动物宿主细胞。

图1所示为结合分子典型实施例的示意图。利用ErbB受体胞外域特异性抗体的识别，通过western杂交，可检测到ErbB配体结合域(图2)。

本发明还提供了使用包含本发明化合物的药物组合物的方法。该药物组合物可以采用注射或经口、肺、鼻、透皮或其他施用方式。一般来说，本发明包括药物组合物，该组合物包括有效量的本发明结合分子和药用稀释剂、防腐剂、增溶剂、乳化剂、辅料和/或载体。这些组合物包括具有各种缓冲物质(例如Tris-HCl、醋酸盐、磷酸盐)、pH和离子强度的稀释剂；崩解剂和增溶剂等添加剂(例如TWEED^TM80、聚山梨醇酯80)；抗氧化剂(例如维生素C、焦亚硫酸钠)；防腐剂(例如Thimersol、苯甲醇)和增量物质(例如乳糖、甘露醇)；将材料加到特定聚合物制剂中，如聚乳酸、聚乙醇酸等，或者加到脂质体中。另外，也有可能使用透明质酸，这有可能提高在循环中的维持时间。这些组合物有可能影响本发明蛋白和衍生物的物理状态、稳定性、体内释放率和体内清除率。例如参见Remington’s Pharmaceutical Sciences，18th Ed.(1990，MackPublishing Co.，Easton，PA 18042)第1435-1712页，该文献完整引入以作参考。所述组合物可以制成液体剂，或者制成干粉剂，如冻干剂。可植入的缓释制剂、透皮制剂也都涵盖在内。

药用载体包括碳水化合物，如海藻糖、甘露醇、木糖醇、蔗糖、乳糖和山梨醇。制剂用的其他成分可以包括DPPC、DOPE、DSPC和DOPC。可以使用天然或合成的表面活性剂；可以使用PEG(不算蛋白或类似物衍化过程中的使用)。葡聚糖类，如环葡聚糖，也可以使用。可以使用胆盐和其他相关增效剂。可以使用纤维素和纤维素衍生物。可以使用氨基酸，例如在缓冲液制剂中使用。

而且，脂质体、微胶囊或微球体、包结配合物或其他类型载体的使用也都为本发明所涵盖。

治疗方法中包含的用药方案要由主治医师考虑各种改变药物作用的因素后确定，例如患者年龄、健康状况、体重、性别和饮食、疾病严重程度、施用时间等临床因素。一般来说，每天的用药剂量应为0.1-1000μg本发明化合物/千克体重，最好是0.1-150μg/kg。

实施例1

本例是阐述如何构建一个有代表性的具有ErbB受体胞外域的单陷阱分子组分，即，单重组基因构建体中具有ErbB3受体胞外域。

通过引入ErbB1、ErbB3或ErbB4的胞外域，可将ErbB单陷阱设计成与ErbB家族的不同配体结合的分子。

将缩短型ErbB3克隆到以色列Rehovot市Weizmann研究所Yosef Yarden博士的实验室提供的质粒pEF-IRES-P中。本构建体由首要的分别称作LI(域1)、SI(域II)、LII(域III)的三个ErbB3胞外域和部分SII(域IV)构成。与本片段3’端融合的其他蛋白域包括PKA磷酸化位点、Xa因子切割位点和与3’端相连的人IgG1的Fc片段。然后将这整个片段克隆到质粒pEF-IRES-P的NheI-NotI位点中，得到质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P。

质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P经改动后得到pEF-ECD3-IRES-P质粒。将ECD3IgG缩短，这样便只表达ErbB3的LI、SI、LII和部分SII域。因为没有合适的限制性酶，所以设计了PCR引物来扩增部分ErbB3胞外域。正向引物上引入了一个XhoI位点，因为该位点是离SII域3’端最近的惟一一个限制性酶切位点，反向引物上引入了一个NotI位点(该位点是构建体3’端原有的克隆位点)、一个嵌套式NheI位点和一个与NheI位点重叠的终止密码子。为了能构建pEF-IRES-P空质粒对照，向反向引物上的NotI位点内引入NheI位点，因为多克隆位点(″MCS″)5’端有一个NheI位点，这样在ErbB3单陷阱构建完成后，就可以将整个ErbB3胞外域片段切除。

用pEF-ECD3IgG-IRES-P作模板，进行以下PCR反应：质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P，25ng；NEB 10×Vent聚合酶缓冲液，2.5μl；dNTP(该溶液中，dATP、dCTP、dGTP和dTTP各10mM)，0.5μl；正向引物和反向引物，0.5μl；Vent聚合酶(5000U/mL)，0.5μl。引物序列为：s-erbB3-XhoI，5’AGC TCT CGA GCA ACA TTG ATG GAT TTGTGA ACT GC(SEQ ID NO 1)和s-erbB3-NheI-NotI，5’AGC TGC GGCCGC TAG CTC AAC CAG GGC CTG GGC CCC AGC ATC(SEQ ID NO 2)。PCR条件如下：95℃、2分钟；95℃、45秒，55℃、45秒和72℃、2分钟，22个循环；最后72℃、5分钟。

将扩增的PCR片段上样到1％琼脂糖凝胶中进行电泳，用Qiagen凝胶回收试剂盒(Gel Extraction Kit)纯化。PCR产物和质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P用XhoI和NotI酶切过夜，然后用1％琼脂糖凝胶分离，用Qiagen凝胶回收试剂盒纯化。连接XhoI-NotI PCR片段和XhoI-NotI酶切后的质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P，然后转化DH5α感受态细胞。用XhoI和NotI酶切，筛选重组克隆。用NheI酶切这一新构建体pEF-ECD3-IRES-P质粒，用1％琼脂糖凝胶分离片段，并用Qiagen凝胶回收试剂盒纯化，再将pIRES质粒主干自我连接，即得到对照质粒pEF-IRES-P，该质粒不含任何ErbB3或IgG1-Fc序列。

实施例2

本例是阐述来自重组DNA分子的双陷阱分子在哺乳动物宿主细胞中的表达及其活化形式的纯化。将质粒pEF-ECD3IgG-IRES-P、质粒pEF-ECD3-IRES-P和对照质粒pEF-IRES-P分别转染293T细胞，用嘌呤霉素选择，以得到质粒稳定整合的细胞群。这些转导细胞向培养基中分泌ECD3IgG和ECD3单陷阱多肽。

293T感染细胞的western杂交结果表明，ErbB3特异性抗体没有识别ErbB3单陷阱(泳道1)，但是用该抗体检测到表达可溶性ErbB3和可溶性ErbB1(同一多肽表达的)的多肽(泳道3和4)。这些多肽含有2个不同ErbB胞外配体结合域的胞外配体结合部分，故称之为ErbB双陷阱。用于单陷阱和双陷阱的ErbB3胞外配体结合部分之间的惟一区别是双陷阱中ErbB3胞外配体结合部分的羧端多加了3个氨基酸。所以将要修饰ErbB3单陷阱，使它包括这另外3个氨基酸以及TEV蛋白酶识别序列和组氨酸标签，其包括ErbB3单陷阱现有形式中并不存在的双陷阱多肽。可以通过PCR等已知方法将这些元件加到ErbB3单陷阱多肽中。

实施例3

为检测ErbB3单陷阱的功能，收集来自293T细胞的调整培养基，过滤后用于培养BT474乳腺癌细胞。可以观察到，BT474细胞在分别用来自表达pEF-ECD3-IRES-P质粒的293T细胞的调整培养基培养和用来自表达pEF-IRES-P对照质粒的293T细胞的调整培养基培养48小时后，前者细胞数量显著减少。

Claims (22)

1.一种对ErbB配体有结合亲和力的结合分子，其中，该整个结合分子是ErbB受体或其一部分的胞外区。

2.根据权利要求1所述的结合分子，其中，所述结合分子基本上可溶于水溶液中。

3.根据权利要求1所述的结合分子，其中，所述结合分子进一步包括ErbB受体的胞外域。

4.根据权利要求1所述的结合分子，其进一步包括来自ErbB1的胞外域。

5.根据权利要求1所述的结合分子，其进一步包括来自ErbB3的胞外域。

6.根据权利要求1所述的结合分子，其进一步包括来自ErbB4的胞外域。

7.一种含有重组DNA分子的真核细胞，该重组DNA分子中含有编码部分ErbB受体蛋白的核苷酸序列。

8.根据权利要求7所述的真核细胞其中，所述细胞产生对ErbB单个配体或多个配体有结合亲和力的结合分子。

9.根据权利要求7所述的真核细胞其中，所述细胞产生对ErbB配体有结合亲和力的结合分子，该结合分子可溶于水溶液中。

10.根据权利要求7所述的真核细胞，其中，所述结合分子被转运到所述细胞外，进入周围介质中。

11.根据权利要求7所述的真核细胞，其中，所述结合分子进一步包括ErbB受体的胞外域。

12.根据权利要求7所述的真核细胞，其进一步包括来自ErbB1的胞外域。

13.根据权利要求7所述的真核细胞，其进一步包括来自ErbB3的胞外域。

14.根据权利要求7所述的真核细胞，其进一步包括来自ErbB4的胞外域。

15.根据权利要求7所述的真核细胞，其中，所述重组DNA分子含有Xa因子切割位点和人免疫球蛋白G1的Fc部分。

16.根据权利要求15所述的真核细胞，其中，所述细胞产生对ErbB单个配体或多个配体有结合亲和力的结合分子。

17.根据权利要求15所述的真核细胞，其中，所述细胞产生对ErbB配体有结合亲和力的结合分子，该结合分子可溶于水溶液中。

18.根据权利要求15所述的真核细胞，其中，所述结合分子被转运到所述细胞外，进入周围介质中。

19.根据权利要求15所述的真核细胞，其中，所述结合分子进一步包括ErbB受体的胞外域。

20.根据权利要求15所述的真核细胞其进一步包括来自ErbB1的胞外域。

21.根据权利要求15所述的真核细胞其进一步包括来自ErbB3的胞外域。

22.根据权利要求15所述的真核细胞其进一步包括来自ErbB4的胞外域。

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